Restriksi Genom DNA
advertisement
Restriksi Genom DNA Ditambah 1µL enzim EcoRI Ditambah 5µL 10x Buffer 10µL DNA Ditambah 34 µL ddH2O Diinkubasi selama 2 jam, suhu 37oC Diletakkan dalam freezer -40oC 13 Pembuatan gel agarose TAE 1x 100 ml Sisir dipasang Bubuk agarose 1.5 gr Setelah gel mengeras, sisir diambil dan ditambah TAE sampai gel terendam Larutan dituang ke cetakan Diapanaskan dan Diaduk sampai larut lalu didiamkan sampai 60oC 14 Elektroforesis DNA Hasil Restriksi 10 µL Sampel DNA + 1 µL loading dye Gel direndam dalam ethidium bromide 10 menit Gel diamati dengan UV iluminator Sampel dituang ke sumuran elektroforesis Perangkat elektroforesis dinyalakan selama 1 jam ,120 V 15 Kriteria persentase pertumbuhan 100% 75% 50% % 25% ≥¼ tabung: 25% ¼-½ tabung: 50% ½-¾ tabung: 75% ≤¾ tabung: 100% 16 Persentase Similaritas s = 100 ( nxy / nx + ny ) nxy : jumlah band yang segaris antara dua isolat (x dan y) nx : jumlah band pada isolat bakteri x ny : jumlah band pada isolat bakteri y (Osborn et al., 1993) 175
