plasmid

PLASMID
Pada beberapa jasad, terutama pada
kelompok prokariot, seringkali
dijumpai bahan genetik tambahan
selain bahan genetik utama yang ada
dalam kromosom . Bahan genetik
tambahan/ekstra semacam ini secara
umum disebut plasmid
Dalam keadaan normal, kehadiran
plasmid pada umumnya tak diperlukan
oleh sel. Dalam keadaan tertentu
misalnya dalam media yg mengandung
antibiotik, maka diperlukan plasmid oleh
bakteri untuk mempertahankan
hidupnya dengan menggunakan gen
ketahanan antibiotik yg ada dalam
plasmid.
PLASMID ARTIFISIAL
Pada dasarnya plasmid merupakan entitas
genetik yang diketemukan secara alami di
dalam sel beberapa kelompok prokariot dan
eukariot. Dengan teknik rekayasa genetik,
sekarang telah dapat dikembangkan plasmid
artifisial dengan cara menggabungkan gen-gen
dari beberapa plasmid alami maupun dari
genom jasad tertentu. Salah satu contoh
plasmid artifisial adalah plasmid seri pUC,
misalnya pUC 18 dan pUC 19 , dan juga
plasmid pBR322.
CONTOH PLASMID ARTIFISIAL
HASIL REKAYASA
Gambar Plasmid pBR322
Sifat plasmid pBR 322
• Relatif kecil dengan
berat molekul 2,6x106
• Telah diketahui uruturutan nukleotidanya
4362 secara komplit
• Mempunyai sisi
pemutus tunggal untuk
PstI, SalI,
EcoRI,HindIII,BamHI
• Mempunyai 2 penanda
resistensi ( ampicillin
dan tetrasiklin)
1. Plasmid dipotong dengan enzim
endonuklease restriksi tertentu
2. DNA Kromosom juga dipotong dengan enzim
endonuklease restriksi yang sama
3. Hasil potongan keduanya disambungkan,
maka akan diperoleh plasmid rekombinan
yaitu plasmid yang telah tersisipi potongan
DNA (gen) sel donor
4. Plasmid rekombinan ditransformasikan ke
dalam sel inang, misalnya E. coli.
Bagian mana dari plasmid yg
dipotong?
Urutan DNA plasmid sudah tertentu sehingga dapat
dikenali dan dipotong dengan enzim endonuklease
tertentu . Misalnya plasmid pBR322 akan terpotong
oleh enzim PstI pada daerah gen ketahanan
terhadap ampisilin(ampr). Pemotongan plasmid
pada daerah ini akan menyebabkan kerusakan gen
ketahanan terhadap ampisilin tersebut . Bakteri yg
membawa plasmid yg telah terpotong pada gen
ampr tidak lagi tahan dalam media yg mengandung
ampisilin
Rekombinasi Plasmid dengan Gen Asing
(Gen yang disisipkan)
Identifikasi Bakteri Pembawa Plasmid
Rekombinan
Seleksi dg Antibiotik
Sel 1 dan sel 2
tahan thd
tetrasiklin:
membawa plasmid
dg gen tetr
Masih utuh
Sel 1 gen tetr dan gen
ampr utuh semuanya.
Sehingga tahan
ampisilin
Sel 2 gen tetr utuh
tetapi gen ampr
telah rusak sehingga
tidak tahan ampisilin
Transformasi Gen dengan Plasmid pUC18/19
Enzim Beta Galaktosidase
5-bromo- 4-dikloro-indol-b_DGalaktosidase
SOAL QUIZ 1
1. a) Definisikan “ Bioteknologi “
b) Apa yang membedakan Bioteknologi
konvensional dan Bioteknologi
modern/molekuler
Lanjutan Soal Quiz 1
2. Jika kloning gen ke dalam suatu bakteri
menggunakan plasmid pBR322. Baik plasmid
maupun DNA sumber gen donor dipotong dg
enzim PstI . Jelaskan bagaimana cara
membedakan bakteri yg membawa plasmid
rekombinan dan bakteri yang membawa
plasmid asli/ utuh.
3.
Dari transkripsi DNA berikut, anda diminta
menggambarkan urutan mRNA hasil transkripsi yang
berbentuk struktur batang dan lengkungan (loop)
sebagai pertanda transkripsi segera diakhiri
4.
Jelaskan kenapa enzim endonuklease
restriksi tipe 2 banyak digunakan untuk
memotong gen dalam bioteknologi modern.
Berikan contohnya.