sintesis kalkon dan flavanon

PROPOSAL PENELITIAN
SINTESIS 2’,4’-DIHIDROKSI-3,4-DIMETOKSIKHALKON DAN 7HIDROKSI-3’,4’-DIMETOKSIFLAVANON SERTA UJI AKTIVITASNYA
SEBAGAI ANTIBAKTERI DAN ANTIOKSIDAN
SYNTHESIS OF 2’,4’-DIHYDROXY-3,4-DIMETHOXYCHALCONE AND 7HYDROXY-3’4’-DIMETHOXYFLAVANONE WITH ITS ACTIVITY TEST AS
ANTIBACTERIAL AND ANTIOXIDANT
RIZANIA IRMAWATI
15/378111/PA/16586
PROGRAM STUDI KIMIA
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS GADJAH MADA
YOGYAKARTA
2019
PROPOSAL PENELITIAN
SINTESIS 2’,4’-DIHIDROKSI-3,4-DIMETOKSIKHALKON DAN 7HIDROKSI-3’,4’-DIMETOKSIFLAVANON SERTA UJI AKTIVITASNYA
SEBAGAI ANTIBAKTERI DAN ANTIOKSIDAN
SYNTHESIS OF 2’,4’-DIHYDROXY-3,4-DIMETHOXYCHALCONE AND 7HYDROXY-3’4’-DIMETHOXYFLAVANONE WITH ITS ACTIVITY TEST AS
ANTIBACTERIAL AND ANTIOXIDANT
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh derajat
Sarjana Sains Ilmu Kimia
RIZANIA IRMAWATI
15/378111/PA/16586
PROGRAM STUDI KIMIA
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS GADJAH MADA
YOGYAKARTA
2019
ii
HALAMAN PENGESAHAN
PROPOSAL PENELITIAN
SINTESIS 2’,4’-DIHIDROKSI-3,4-DIMETOKSIKHALKON DAN 7HIDROKSI-3’,4’-DIMETOKSIFLAVANON SERTA UJI AKTIVITASNYA
SEBAGAI ANTIBAKTERI DAN ANTIOKSIDAN
Telah dipersiapkan dan disusun oleh
RIZANIA IRMAWATI
15/378111/PA/16586
Telah disetujui
Pada tanggal 15 Oktober 2018
Susunan Dosen Pembimbing
Dr. Winarto Haryadi, M.Si
Dosen Pembimbing I
Prof. Dr. Sabirin Matsjeh, P.hD
Dosen Pembimbing II
iii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ............................................................................................ ii
HALAMAN PENGESAHAN ..............................................................................iii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL ................................................................................................ v
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vi
INTISARI ............................................................................................................ vii
BAB I PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
I.1 Latar Belakang ........................................................................................... 1
I.2 Tujuan Penelitian ....................................................................................... 3
I.3 Manfaat Penelitian ..................................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA DAN PERUMUSAN HIPOTESIS .............. 5
II.1 Tinjauan Pustaka ...................................................................................... 5
II.1.1 Asilasi Friedel-Crafts ........................................................................ 5
II.1.2 Substitusi aromatik elektrofilik senyawa fenolik ............................. 5
II.I.3 Sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon ...................................................... 6
II.I.4 Senyawa khalkon
8
II.1.5 Sintesis senyawa khalkon ................................................................. 9
II.I.6 Senyawa flavanon ............................................................................ 12
II.1.7 Sintesis senyawa flavanon ............................................................... 14
II.I.8 Veratraldehida .................................................................................. 15
II.1.9 Bakteri ............................................................................................. 15
II.1.10 Uji aktivitas antibakteri ................................................................. 17
II.1.11 Antioksidan .................................................................................... 18
II.1.12 Uji aktivitas antioksidan ................................................................ 19
II.2 Perumusan Hipotesis dan Rancangan Penelitian .................................... 20
II.2.1 Perumusan hipotesis 1 ..................................................................... 20
II.2.2 Perumusan hipotesis 2 ..................................................................... 20
II.2.3 Perumusan hipotesis 3 ..................................................................... 21
II.2.4 Perumusan hipotesis 4 ..................................................................... 22
II.2.5 Perumusan hipotesis 5 ..................................................................... 22
II.2.6 Perumusan hipotesis 6 ..................................................................... 22
II.2.7 Perumusan hipotesis 7 ....................................................................223
II.2.8 Rancangan penelitian ....................................................................... 24
BAB III METODE PENELITIAN .................................................................... 26
III.1 Bahan ..................................................................................................... 26
III.2 Alat ......................................................................................................... 26
III.3 Prosedur penelitian ................................................................................. 26
III.3.1 Sintesis 2,4-dihidroksiastofenon (1) ............................................... 26
III.3.2 Sintesis 2’,4’-dihidroksi- 3,4-dimetoksikhalkon (2) ...................... 27
III.3.3 Sintesis 7-hidroksi-3’,4’-dimetoksiflavanon (3) ............................ 27
III.3.4 Uji aktivitas antibakteri .................................................................. 27
III.3.5 Uji aktivitas antioksidan ................................................................. 28
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 29
iv
DAFTAR TABEL
Tabel II.1 Rendemen sintesis Khalkon melalui penggerusan ................................ 7
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar II.1 Senyawa fenolik ................................................................................ 6
Gambar II.2 Struktur 2,4-dihidroksiasetofenon ..................................................... 7
Gambar II.3 Sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon ...................................................... 8
Gambar II.4 Struktur umum senyawa khalkon ...................................................... 8
Gambar II.5 Sintesis 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon ............................... 11
Gambar II.6 Struktur umum senyawa flavanon .................................................... 13
Gambar II.7 Rancangan penelitian sintesis khalkon dan flavanon serta uji
aktivitasnya sebagai antibakteri dan antioksidan .................................................. 24
vi
SINTESIS 2’,4’-DIHIDROKSI-3,4-DIMETOKSIKHALKON DAN 7HIDROKSI-3’,4’-DIMETOKSIFLAVANON SERTA UJI AKTIVITASNYA
SEBAGAI ANTIBAKTERI DAN ANTIOKSIDAN
Rizania Irmawati
15/3781111/PA/16586
INTISARI
Sintesis 2’, 4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dan 7-hidroksi-3’,4’dimetoksiflavanon serta uji aktivitasnya sebagai antibakteri dan antioksidan akan
dilakukan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melakukan pengembangan
sintesis 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dari bahan dasar 2,4dihidroksiasetofenon dan veratraldehid, melakukan pengembangan sintesis 7hidroksi-3’,4’-dimetoksiflavanon dari 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon, dan
mengetahui aktivitas antibakteri senyawa khalkon dan flavanon hasil sintesis
terhadap bakteri Bacillus subtilis dan Escherichia coli serta aktivitas antioksidan
senyawa khalkon dan flavanon hasil sintesis. Penelitian ini diawali dengan
pembuatan senyawa 2,4-dihidroksiasetofenon dari bahan dasar resorsinol, asam
asetat glasial dan katalis ZnCl2. Sintesis khalkon dilakukan melalui reaksi
Claisen-Schmidt berbahan dasar veratraldehid, 2,4-dihidroksiasetofenon dan
katalis basa KOH melalui metode pengadukan selama 48 jam. Sintesis flavanon
dilakukan melalui adisi nukleofilik dengan mereaksikan khalkon hasil sintesis dan
natrium asetat dalam pelarut etanol menggunakan metode refluks selama 12 jam.
Elusidasi struktur senyawa khalkon dan flavanon hasil sintesis dilakukan
menggunakan spektrometer FT-IR, GC-MS dan 1H-NMR. Kedua senyawa hasil
sintesis diuji aktivitas antibakterinya menggunakan metode difusi sumur terhadap
bakteri Gram positif (Bacillus subtilis) dan Gram negatif (Escherichia coli) serta
diuji aktivitas antioksidannya menggunakan metode DPPH.
Kata kunci : Antibakteri, Antioksidan, flavanon, khalkon.
vii
viii
ix
BAB I
PENDAHULUAN
I.1 Latar Belakang
Kesehatan merupakan salah satu aspek yang penting dalam kehidupan.
Salah satu gangguan kesehatan dapat disebabkan oleh munculnya penyakit yang
diakibatkan oleh bakteri. Contoh bakteri penyebab penyakit tersebut antara lain
Salmonella typhimurium dapat menyebabkan demam tipoid, sakit kepala, depresi,
dehidrasi (Tam, 2008), Staphylocccus aureus dapat menyebabkan meningitis,
radang parru-paru, radang sendi (Cossley dan Archer, 1997) dan bakteri Bacillus
cereus dapat menyebabkan mastitis, infeksi sistemik, gangren, meningitis serta
gangguan saluran pernafasan (Gaur dkk., 2001).
Dalam kehidupan sehari-hari, kita tidak dapat terbebas dari senyawa
radikal bebas. Asap rokok, makanan yang digoreng, dibakar, paparan sinar
matahari berlebih, asap kendaraan bermotor, obat-obat tertentu, racun dan polusi
udara merupakan beberapa sumber pembentuk senyawa radikal bebas. Radikal
bebas merupakan molekul yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak
berpasangan. Elektron-elektron yang tidak berpasangan ini menyebabkan radikal
bebas menjadi senyawa yang sangat reaktif terhadap sel-sel tubuh dengan cara
mengikat elektron molekul sel (Neldawati, 2013; Widyastuti, 2010). Antioksidan
ialah suatu inhibitor yang digunakan untuk menghambat autooksidasi. Inhibitor
radikal bebas menghambat suatu reaksi radikal bebas dengan membentuk reaksi
radikal bebas tak reaktif dan relatif stabil (Fessenden dan Fessenden, 1992).
Antioksidan alami mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan
oleh spesies oksigen reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit degeneratif,
serta mampu menghambat peroksidase lipid pada makanan (Sunarni 2005).
Senyawa flavonoid diketahui mampu berperan menangkap radikal bebas atau
sebagai antioksidan alami (Amic et al. 2003). Berdasarkan uraian tersebut, maka
pengembangan senyawa antibakteri dan antioksidan merupakan hal penting untuk
dilakukan.
1
2
Khalkon adalah salah satu bentuk isolat dari bahan alam. Dilihat dari strukturnya
khalkon adalah suatu keton aromatik yang membentuk pusat sistem berbagai senyawa
biologis penting. Khalkon mempunyai banyak efek farmakologis, antara lain sebagai anti
mikroba, anti inflamasi, analgesik, anti platelet, anti ulceratif, anti malaria, antikanker,
antivirus, anti leismania, antioksidan, antiTBC, anti hiperglikemik, imunomodulator,
penghambatan pe lepasan mediator kimia, inhibisi leukotrien B4, inhibisi tirosinase, dan
inhibisi aktivitas aldose reductase. Hasil skrining salah satu penelitian menunjukkan
bahwa derivat khalkon menunjukkan aktivitas antimikrobial yang signifikan, sebagian
senyawa memberikan aksi penghambatan kecil pada P.vulgaris dan beberapa senyawa
menunjukkan aktivitas yang signifikan terhadap B.pumilis, B.subtilis dan E.coli
(Fessenden dan Fessenden, 1986). Adanya gugus keto dan gugus vinil pada kalkon telah
diamati mempunyai fungsi meningkatkan aktivitas sebagai antioksidan (Belsare, et al.,
2010; Shailendra et. al., 2007).
Balsare et. al., (2010) telah meneliti aktivitas antioksidan pada beberapa turunan
kalkon dan flavonoid. Hasil uji menunjukkan bahwa turunan kalkon mempunyai aktivitas
antioksidan lebih rendah dari beberapa senyawa flavonoid. Aktivitas antioksidan pada
kalkon juga dipengaruhi oleh dua struktur aril, yaitu substitusi pada dua cincin aril
molekul kalkon dan pola substitusi pada molekul kalkon. Substituen hidroksil
pada molekul kalkon merupakan substituent yang bertanggung jawab terhadap
peningkatan antioksidan kalkon. Hal ini disebabkan karena konversi yang mudah
menjadi radikal fenoksi melalui mekanisme transfer atom hidrogen.
Khalkon dan flavanon yang temasuk dalam golongan flavonoid (Athikomkulchai
dkk., 2005; Jayshree dkk., 2012; Prasad dkk., 2008; Murthy dkk., 2010)
merupakan senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri. Senyawa golongan
flavonoid memiliki kerangka dasar C6-C3-C6 dimana dua cincin aromatik
dihubungkan oleh tiga atom C (Adersen dan Markham, 2006). Senyawa tersebut
merupakan salah satu metabolit sekunder yag dihasilkan oleh tanaman sehingga
dapat diperoleh melalui jalur isolasi. Namun demikian, dari penelitian terdahulu
dilaporkan bahwa hasil isolasi senyawa tersebut sangat kecil. Chin dkk., (2007)
hanya berhasil mengisolasi 0,046% isoliquiritigenin dari tanaman Glycryrrhiza
glabra. Adesanwo dkk. (2009) berhasil mengisolasi 0,0095% 2’,4’-dihidroksi-3’metil-5’-metoksikhalkon dari tanaman
Heteropyxis natalensis. Jalur isolasi
3
dianggap kurang menguntungkan untuk mendapatkan senyawa tersebut dalam
jumlah besar. Jalur alternatif untuk mengatasi permasalahan tersebut adalah
melalui sintesis. Namun demikian, pada proses jalur sintesis umumnya
menggunakan banyak bahan dasar serta proses yang panjang dan lama sehingga
perlu dilakukan pengembangan metode yang lebih efisien.
Khalkon dapat disintesis melalui reaksi kondensasi Clasein-Schmidt
berkatalis basa dari suatu keton aromatik atau keton aromatik tersubstitusi
(Susanti dan Redjeki, 2011). Senyawa 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon
disintesis dari 2,4-dihidroksiasetofenon sebagai keton aromatik tersubstitusi dan
3,4-dimetoksibenzaldehida atau yang dikenal sebagai veratraldehida sebagai
benzaldehida tersubstitusi. Menurut Ismiyarto (1999), flavanon dapat disintesis
melalui pencampuran senyawa khalkon dengan natrium asetat dalam pelarut
etanol kemudian direfluks.
Indonesia merupakan salah satu negara penghasil minyak cengkeh yang
sangat melimpah. Lebih dari 60% kebutuhan minyak cengkeh dunia dipenuhi oleh
Indonesia (Suryana et. al., 2015). Kandungan utama minyak cengkeh adalah
senyawa eugenol dengan rendemen mencapai 70-96% (Towaha, 2012). Senyawa
eugenol dapat dikonversi menjadi 3,4-dimetoksibenzaldehida (veratraldehida)
dengan pengola han lebih lanjut .
Senyawa yang disintesis pada penelitian ini adalah 2’,4’-dihidroksi-3,4dimetoksikhalkon
dan
7-hidroksi-3’,4’-dimetoksiflavanon.
Kedua
senyawa
tersebut kemudian diuji aktivitasnya sebagai antibakteri terhadap bakteri Gram
positif (Bacillus subtilis) dan Gram negatif (Escherichia coli).
I.2 Tujuan Penelitian
Tujuan yang ingin dicapai dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
1.
Melakukan pengembangan sintesis 2’,4-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dari
bahan dasar 2,4-dihidroksiasetofenon dan veratraldehida.
2.
Melakukan pengembangan sintesis 7-hidroksi-3’,4’-dimetoksiflavanon dari
2’,4-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon.
4
3.
Mengetahui aktivitas antibakteri khalkon dan flavanon hasil sintesis terhadap
Bacillus subtilis dan Escherichia coli dan aktivitas antioksidannya.
I.3 Manfaat Penelitian
Manfaat yang ingin dicapai dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
1.
Memberikan kontribusi terhadap perkembangan penelitan dalam bidang
sintesis untuk senyawa khalkon dan flavanon.
2.
Memberikan
kontribusi
terhadap
perkembangan
informasi
mengenai
aktiivitas khalkon dan flavanon sebagai antibakteri dan antioksidan.
3.
Meningkatkan nilai guna veratraldehia sebagai salah satu sumber daya alam
yang berupa minyak atsiri khas Indonesia.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA DAN PERUMUSAN HIPOTESIS
II.1 Tinjauan Pustaka
II.1.1 Asilasi Friedel-Crafts
Senyawa asetofenon merupakan senyawa keton aromatik sederhana yang
terdiri dari inti benzena dan gugus asil. Benzena merupakan senyawa siklik planar
dari enam karbon dengan setiap atom karbon terhibridisasi sp2.Setiap atom karbon
mengikat satu atom H dan mempunyai orbital p tak terhibridisasi tegak lurus
terhadap bidang ikatan sigma dari cincin. Masing-masing orbital p tersebut dapat
menyumbangkan satu elektron untuk ikatan pi yang kemudian terdelokalisasi
sempurna dalam awan muatan elektron atau yang disebut dengan awan pi
aromatik (Fessenden dan Fessenden, 1997). Keadaan benzena yang kaya elektron
mengakibatkan benzena lebih mudah mengalami reaksi substitusi aromatik
elektrofilik. Katalis berperan menghasilkan elektrofil dari reagen yang digunakan.
Elektrofil menyerang cincin aromatis menggantikan salah satu atoh hidrogen.
Substitusi gugus asil pada cincin benzena tergolong substitusi aromatik
elektrofilik. Reaksinya dikenal sebagai reaksi asilasi aromatik atau asilasi FriedelCrafts. Asilasi Friedel-Crafts memerlukan agen pengasilasi sebagai sumber gugus
asil RC=O atau ArC=O. Agen pengasilasi yang digunakan berasal dari halida
asam, anhidrida asam, maupun asam karboksilat. Katalis yang digunakan dalam
reaksi asilasi aromatis adalah katalis asam Lewis yang bertindak sebagai akseptor
pasangan elektron. Tyman (1996) menjelaskan bahwa ZnCl2 dapat digunakan
sebagai katalis dalam reaksi asilasi. ZnCl2 yang merupakan garam anorganik
dapat dengan mudah terdisosiasi menjadi ion Zn2+ dan dua ion Cl- dalam air. Ion
Zn2+ memiliki orbital kosong sehingga dapat menerima pasangan elektron dari
agen pengasilasi.
II.1.2 Substitusi aromatik elektrofilik senyawa fenolik
Senyawa fenolik merupakan senyawa benzena yang mengandung gugus
OH (hidroksi). Senyawa fenolik yang memiliki gugus hidroksi lebih dari satu
disebut senyawa polifenol. Beberapa contoh senyawa fenolik adalah catechol atau
5
6
1,2-dihidroksibenzena, resorsinol atau 1,3-dihidroksibenzena, hidrokunion atau
1,4-dihidroksibenzen, dan floroglusinol atau 1,3,5-trihidroksibenzena (Gambar
II.1)
OH
OH
OH
OH
OH
OH
cathecol
HO
OH
resorsinol
hidrokunion
OH
floroglusinol
Gambar II.1 Senyawa fenolik
Gugus yang terikat pada benzena dapat tergolong gugus aktivasi atau
gugus
deaktivasi.
Gugus
aktivasi
menyebabkan
cincin
lebih
terbuka
(rentan/susceptible) terhadap substitusi lebih lanjut, sedangkan gugus deaktivasi
menyebabkan cincin lebh tertutup terhadap substitusi (Fessenden dan Fessenden,
1997). Gugus hidroksi tergolong gugus aktivasi sehingga menyebabkan cincin
rentan terhadap substitusi lebih lanjut.
Gugus hidroksi yang terikat pada cincin benzena tidak hanya
menyebabkan aktivasi cincin, ttapi juga menentukan posisi terikatnya gugus asil
pada benzena pada reaksi asilasi. Gugus hidroksi tergolong gugus pengarah orto
dan para (Fessenden dan Fessenden, 1997).
II.1.3 Sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon
Senyawa 2,4-dihidroksiasetofenon (Gambar II.2) dapat disintesis melalui
reaksi substitusi aromatik elektrofilik. Dilihat dari struktur senyawanya, gugud
asil dapat disubstitusikan pada cincin benzena yang telah tersubstitusi dua gugus
hidroksi (senyawa resorsinol). Reaksi yang terjadi tergolong reaksi asilasi FriedelCrafts.
Killelea
dan
Lindwall
(1948)
telah
melakukan
sintesis
2,4-
dihidroksiasetofenon dengan mereaksikan resorsinol, anhidrida asam asetat, dan
suatu eter anhidrat komersial. Campuran dijenuhkan dengan gas BF3 dalam
7
penangas es dan disimpan di dalam pendingin selama 96 jam. Dihasilkan padatan
tak berwarna dengan titik lebur 144-145 °C dan rendemen 91%.
O
CH3
HO
OH
Gambar II.2 Struktur 2,4-dihidroksiasetofenon
Yadav dan Joshi (2002) melaporkan sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon
melalui dua tahap yaitu asilasi OH resorsinol kemudian dilanjutkan dengan
penataan ulang Fries senyawa asilasi. Sintesis dilakukan dengan keberadaan
padatan katalis asam seperti Amberlyst untuk menghindari penggunaan asam
Lewis sehingga mengacu pada konep green synthesis. Metode yang sama
dilakukan oleh Fukumoto et. al. (1997) dengan mereaksikan resorsinol dengan
asam asetat menggunakan katalis Amberlyst. Dihasilkan senyawa 2,4dihidroksiasetofenon dengan rendemen 70% dan kemurnian 99,7%. Sintesis
secara dua tahap tersebut lebih ramah lingkungan tetapi memerlukan bahan yang
relatif lebih banyak dan waktu yang relatif lebih lama.
Cooper (1995) melakukan sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon dengan
mereaksikan resorsinol dan asam asetat glasial dengan katalis ZnCl2 anhidrat.
Sintesis dilakukan menggunakan penangas pasir dengan temperatur 152 °C.
Pemurnian
dilakukan
dengan
metode
distilasi
pengurang tekanan
dan
rekristalisasi. Dihasilkan 2,4-dihidroksiasetofenon berwarna kecoklatan dengan
rendemen 61-65% dan titik lebur 142-144 °C.
Anjarsari (2010) melakukan sintesis dengan metode yang sama seperti
Cooper (1995) tetapi pemurnian yang dilakukan hanya menggunakan metode
8
rekristalisasi. Dihasilkan kristal orange dengan titik lebur 140-143 °C dan
rendemen 67,86%. Metode Cooper (1995) dan Anjarsari (2010) memerlukan
waktu yang relatif jauh lebih cepat dibandingkan metode lain yang telah
dijelaskan sebelumnya. Sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon ditunjukkan pada
Gambar II.3.
O
CH3
HO
HO
OH
CH3COOH
ZnCl2
OH
Gambar II.3 Sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon
II.1.4 Senyawa khalkon
Khalkon merupakan metabolit sekunder dari golongan flavonoid yang
dapat ditemukan pada tanaman. Senyawa ini memiliki kerangka 1,3-difenil-2propen-1-on dimana pada strukturnya terdapat dua cincin aromatik yang
dihubungkan oleh tiga atom karbon dari sistem ⍺,β-keton tak jenuh (Mandge dkk.,
2007). Senyawa khalkon dilaporkan memiliki beragam aktivitas antara lain tabir
surya (Ansory, 2014), antikanker, antimalaria, antioksidan, antiinflamasi dan
antibakteri (Achanta dkk., 2006).
O
Gambar II.4 Sturktur umum senyawa khalkon (Anderse dan Markham, 2006)
Pada berbagai spesies tanaman terkandung bermacam-macam senyawa
khalkon. Contohnya pada Glycryrrhiza glabra terdapat isoliquiritigenin (Chin
dkk., 2007). Pada Glycryrrhiza inflata terdapat likokhalkon A (Cui dkk., 2003).
9
Senyawa khalkon dapat digunakan sebagai prekursor dari senyawa heterosiklis
antara lain pirazolina, flavanon, flavonol, isoksazolin dan flavon (Kshatriya dan
Nazeruddin, 2013).
Salah satu aktivitas senyawa khalkon yang pernah diteliti adalah aktivitas
antibakterinya. Prasad dkk. (2008) telah melaporkan senyawa-senyawa khalkon
yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Gram positif Bacillus pumilis,
Bacillus subtilis dan bakteri Gram negatif Escherichia coli pada 1000 ppm. Dari
penelitian tersebut, Prasad dkk. (2008) menyimpulkan bahwa adanya gugus
metoksi dan hidroksi pada khalkon akan meningkatkan aktivitas antibakteri
senyawa tersebut. Jasril et. al. (2012) melakukan sintesis tiga senyawa khalkon
melalui kondensasi aldol antara bromoasetofenon dengan 2-, 3-, dan 4piridinkarbaldehida. Ketiga senyawa khalkon diuji aktivitas antibakterinya
menggunakan metode difusi kertas cakram terhadap bakteri uji Bacillus subtilis,
Staphylococcus aureus, dan Escherichia coli. Hasil uji antibakteri menunjuukan
bahwa senyawa ketiga memiliki daya hambat yang paling baik. Senyawa kedua
menunjukkan aktivitas antibakteri yang relatif baik pula.
Selain itu, khalkon juga diketahui memiliki aktivitas antioksidan. Oktari et
al. (2011), telah mensintesis senyawa turunan khalkon dari 2-asetil piridin dengan
metoksibenzaldehid serta uji aktivitasnya sebagai antioksidan. Hasil uji aktivitas
antioksidan didapat IC50 lebih dari 250 ppm yang mengindikasikan aktifitas
sebagai antioksidan yang lemah. Faridz (2009), telah mensintesis turunan khalkon
tanpa menggunakan pelarut. Rendemen yang didapat sebesar 76 – 78%. Bandgar
et. al. (2010) telah melakukan sintesis senyawa 3,4,5-trimetoksikhalkon, senyawa
tersebut menunjukkan aktivitas antiinflamasi dan antioksidan yang bermanfaat
untuk terapi kanker.
II.1.5 Sintesis senyawa khalkon
Senyawa khalkon dapat disintesis melalui penataan ulang Fries. Sintesis
khalkon melalui penataan ulang Fries terjadi pada senyawa fenil ester dengan
adanya asam Lewis. Sintesis melalui jalur ini umumnya menghasilkan dua
produk. Proses penataan ulang Fries diawali dengan terbentuknya kompleks fenil
10
ester dengan asam Lewis yang diikuti dengan lepasnya ion asilium. Kompleks
fenil dan asam Lewis akan mengalami resonansi menghasilkan dua kemungkinan
struktur karbanion, yaitu pada posisi orto atau para terhadap gugus karbonil. Ion
asilium yang sebelumnya telah lepas dapat diserang oleh karbanion cincin
aromatik posisi orto atau para. Hal tersebut mengakibatkan terbentuk produk orto
dan para.
Jeon dkk. (2011) telah melakukan sintesis khalkon melalui penataan ulang
Fries. Pada penelitisn tersebut senyawa khalkon disintesis dari beberapa fenil
sinamat yang tersubstitusi. Reaksi dilakukan dalam wadah tertutup tanpa
menggunakan pelarut pada temperatur 130 C selama 20 menit. Asam Lewis yang
digunakan adalah TiCl4.
Menurut Carrey dan Sundberg (1990) khalkon dapat pula disintesis
melalui reaksi Clasein-Schmidt yaitu reaksi kondensasi aldol silang yang
melibatkan penggunaan senyawa aldehida aromatik, asetofenon atau alkil keton
serta katalis basa yang kemudian menghasilkan senyawa keton tak jenuh-⍺,β.
Sintesis khalkon yang melalui reaksi Clasein-Schmidt dilakukan dengan aldehida
aromatik dan asetofenon sebagai reaktannya. Reaksi ini diawali dengan
penyerangan basa terhadap asetofenon mengakibatkan lepasnya H⍺ asetofenon
sehingga menghasilkan karbanion. Proses dilanjutkan dengan adisi nukleofilik
karbanion pada asetofrenon teerhadap aldehida aromatik menghasilkan senyawa
β-hidroksi
keton.
Selanjutnya,
senyawa
tersebut
mengalami
dehidrasi
menghasilkan senyawa ⍺,β-keton tak jenuh yaitu khalkon.
Penelitian yang melakukan sintesis khalkon melalui reaksi ClaseinSchmidt dapat melalui pengadukan atau reaksi pada fasa padat yang dikenal
sebagai metode penggerusan. Arifani (2015) telah melakukan sintesis 2’,4’dihidroksi-4-metoksikhalkon
dari
2,4-dihidroksiasetofenon,
4-metoksi
benzaldehida dan katalis basa KOH dalam pelarut etanol. Reaksi juga dilakukan
melalui pengadukan selama 48 jam pada temperatur kamar dan produk yang
dihasilkan memiliki rendemen 38,00% .
Zangade dkk. (2011) mensintesis khalkon dari 2-asetil-1-naftol dan 3metoksibenzaldehida dengan katalis basa KOH. Reaksi dilakukan melalui metode
11
penggerusan selama 45 menit pada temperatur kamar. Senyawa khalkon yang
dihasilkan memiliki rendemen 88%.
Sunder dkk (2012) telah mensintesis 4 senyawa khalkon dengan katalis
basa NaOH melalui metode penggerusan selama 30 menit pada temperatur kamar.
Pada sintesis tersebut 2,4-dihidroksiasetofenon, turunan benzaldehida dan padatan
NaOH dicampur kemudian digerus selama 30 menit pada temperatur kamar.
Khalkon yang dihasilkan memiliki rendemen 69-76%.
Tabel II.1 Rendemen sintesis Khalkon melalui penggerusan (Sunder dkk., 2012)
Turunan benzaldehida
Produk
Rendemen (%)
Benzaldehida
2’,4’-dihidroksikhalkon
76,00
4-nitrobenzaldehida
2’,4-dihidroksi-4-nitrokhalkon
72,00
3-nitrobenzaldehida
2’,4-dihidroksi-3-nitrokhalkon
69,00
4-klorobenzaldehida
2’,4-dihidroksi-4-klorokhalkon
73,00
Anjarsari
(2010)
mensintesis
senyawa
2’,4’-dihidroksi-3,4-
dimetoksikhalkon dengan mereaksikan 2,4-dihidroksiasetofenon dan 3,4dimetoksibenzaldehida dalam pelarut etanol dengan katalis basa pada temperatur
kamar (Gambar II.5). Pengadukan dilakukan selama 48 jam. Campuran hasil
reaksi diasamkan dengan HCl 6M kemudian padatan yang terbentuk dimurnikan
dengan cara rekristalisasi. Diperoleh padatan berwarna orange kekuningan dengan
titik lebur antara 200-205 C dan rendemen 39,59%. Metode yang dilakukan
Anjarsari (2010) telah teruji menghasilkan produk yang diharapkan, meskipun
rendemen yang dihasilkan tidak begitu tinggi.
O
H
CH3
O
O
OH
H3CO
HO
KOH
+
pengadukan
48 jam
OCH3
OH
H3CO
OH
OCH3
Gambar II.5 Sintesis 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon (Anjarsari, 2010)
12
II.1.6 Senyawa flavanon
Flavanon merupakan salah satu senyawa metabolit sekunder golongan
flavanoid yang memiliki aktifitas biologis seperti antikanker, antioksidan,
antitumor, antiproliferatif, dan antimikroba. Flavanon (2,3-dihidro-2 fenil-4H-1benzo-pyran-4-one) adalah prekursor biosintetis utama untuk jenis flavanoid
lainnya seperti flavon atau isoflavon dan dua intermediet flavonoid penting yaitu
flavan-4-ols (prekursor biosintetik untuk pembentukan 3- deoxyanthocyanins) dan
dihydroflavonols (intermediet biosintetik dalam pembentukan katekin, flavonol,
anthocyanin dan proanthocyanidins) (Heller & Forkmann, 1988; Haslam, 1993
dan Mann, 1994). Flavanon tersebar luas di alam, terus menarik perhatian karena
cakupan aktivitas biologisnya (seperti hipotensi, antijamur, antibakteri, antitumor)
(Middleton & Kandaswami, 1994; Harborne & Williams, 2001; Nijveldt et al,
2001; Wang et al, 2001 and Heim et al, 2002).
Tumbuhan Akway (Drimys) termasuk famili Winteraceae yang tumbuh
didataran tinggi dan tersebar di daerah pegunungan Arfak Manokawari Papua
Barat. Merupakan salah satu tanaman yang dimanfaatkan masyarakat sebagai obat
tradisional. Dari hasil penelitian terdahulu disebutkan bahwa tumbuhan awkay
mengandung senyawa flavanoid (Parubak & Murtihapsari, 2005). Parubak (2013)
telah melakukan penelitian dan membuktikan bahwa daun akway mengandung
senyawa flavonoid golongan flavonon yang mempunyai gugus fungsi OH terikat,
CH alifatik, C=O, C=C Aromatik, C-O dan C-H aromatik. Daun awkay
mengandung senyawa flavonoid golongan flavanon yang memiliki aktivitas
antibakteri. Hasil Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi agar
menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun akway menunjukkan penghambatan
terhadap pertumbuhan bakteri Escherecia Coli untuk bakteri gram negatif dan
Bacillus cereus untuk bakteri gram positif.
Sukadana (2010) telah berhasil mengisolasi senyawa isolat flavanoid dari
kulit akar awar-awar (Ficus septica Burm F. Isolat flavonoid yang berhasil
diisolasi adalah golongan flavanon dengan gugus hidroksi bebas kemungkinan
terikat pada atom C-2’, C-5’ atau C-6’ dan C-8, gugus metil atau glikosilasi pada
atom C-5 dan C-7, serta memiliki gugus OH, C=O, C=C dan C-H aromatik, serta
13
C-H alifatik. Isolat flavanon mempunyai aktivitas sebagai antibakteri terhadap
bakteri Vibrio cholera dan Eschericia coli.
Dewi dkk (2014) telah berhasil mengisolasi senyawa flavanoid dari biji
terong belanda. Berdasarkan penelitian dilaporkan bahwa ekstrak etil asetat biji
terong belanda memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 1162,608 ppm.
Hasil identifikasi menunjukkan bahwa isolat fraksi A mengandung senyawa
flavanoid golongan dihidroflavanol dengan gugus orto dihidroksi pada atom C-6
dan C-7 atau C-7 dan C-8 pada cincin A dan isolat B merupakan golongan
flavanon dengan gugus orto dihidroksi pada cincin A yaitu atom C-7,C-8.
O
O
Gambar II.6 Struktur umum senyawa flavanone
Marliana dkk. (2016) telah berhasil mengisolasi tiga senyawa turunan
flavanon
yaitu
4’-O-metil-8-isoprenileriodiktiol
(1),
4’-O-metil-8-
isoprenilnaringenin (2) dan Lonkokarpol A (3) dari ekstrak metanol daun M.
Pearsonii Merr. Sifat antioksidan senyawa 1-3 diuji terhadap pereaksi 2,2diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) dengan menentukan konsentrasi peredaman
(IC50) menggunakan metode peredaman radikal bebas. Berdasarkan hasil
penelitian, dilaporkan bahwa ketiga senyawa turunan flavanon tersebut memiliki
aktivitas aktioksidan dimana senyawa ketiga aktivitas antioksidannya paling
tinggi. Hubungan struktur dan aktivitas antoksidan dari senyawa flavonoid sangat
dipengaruhi oleh jumlah dan posisi gugus hidroksi yang terikat (Seyoum dkk.,
2004).
14
II.1.7 Sintesis senyawa flavanon
Isolasi flavanon dari tumbuhan memiliki banyak kelemahan diantaranya
lamanya waktu isolasi dan menggunakan banyak pelarut, selain itu jumlahnya
yang terbatas dan persentasenya dalam tumbuhan juga kecil serta variasi
strukturnya relatif sedikit. Dengan sintesis memungkinkan para peneliti untuk
memvariasi struktur flavanon yang diinginkan, memperoleh hasil sintesis yang
banyak dan bisa dengan cepat menguji aktivitasnya (Rizal dkk., 2014).
Flavanon disintesis melalui dua langkah, 2’-hidroksikalkon disintesis
melalui metode yang paling umum digunakan, yaitu reaksi kondensasi ClaisenSchmidt antara 2- hidroksiasetofenon dan benzaldehid. Langkah kedua meliputi
siklisasi 2'- hidroksikalkon untuk membentuk flavanon. Namun demikian,
konversi kalkon ke flavanon tidak pernah sempurna dan selalu menghasilkan
produk campuran (Rizal dkk., 2014).
Senyawa flavanon disintesis dari senyawa awal 2-hidroksiasetofenon dan
4-metoksibenzaldehid menggunakan katalis KOH dan pelarut PEG untuk
memperoleh senyawa 2’-hidroksikalkon. Selanjutnya disiklisasi menggunakan
katalis garam natrium asetat dan pelarut etanol yang ditambahkan dengan sedikit
air (Rizal dkk., 2014).
Siklisasi dengan katalis asam dapat dilakukan dengan merefluks khalkon
dalam asam asetat atau dalam etanol atau pelarut lain yang sesuai dengan adanya
katalis asam seperti H3PO4 (Sagrera dkk., 1998). Flavanone juga bisa diperoleh
dari prekursor selain khalkon, yaitu (i) mereaksikan 3-kloro-2,3-dihidro-3-nitro-2fenil-4H1-benzopiran-4-one
dengan
tributyl
tin
hydride
dan
2,2'-
azobisisobutyronitrile (Dauzonne dan Monneret, 1997) (ii) mereaksikan 3-bromo1-fenil prop-2-ynil aril eter dengan merkuri (II) trifluroroacetate (Subramanian
dan Balasubramanian, 1990) (iii) mengoksidasi flavan-4-ols (Bhatia dkk., 1968)
(iv) mereaksikan 1- (2-hydroxyphenyl) -3- phenyl-propane-1,3-diones dengan
benzaldehydes (Joglekar dan Samant, 1988).
Ismiyarto
dkk.,
(1999)
juga
telah
berhasil
mensintesis
3’,4’-
dimetoksiflavanon dengan cara mereaksikan 2’-hidroksi-3,4-dimetoksikhalkon
dengan natrium asetat dalam pelarut etanol dan kemudian direfluks selama 12
15
jam. Campuran reaksi diencerkan dengan air dingin kemudian didiamkan dalam
suhu kamar selama 1 jam, padatan yang terjadi disaring dengan Buchner.
Rendemen yang diperoleh sebesar 72,00%.
II.1.8 Veratraldehida
Veratraldehida atau 3,4-dimetoksibenzaldehida memiliki rumus molekul
C9H10O3 dengan massa molekul relatif sebesar 166,18 g mol-1. Senyawa ini
memilki titik lebur 42-43 C, titik didih 285 C dan memberikan aroma
menyerupai vanilin. Verataldehida digunakan sebagai bahan dalam pembuatan
parfum karena baunya yang harum dan sedap (Murti, 2002). Senyawa
veratraldehida dapat diperoleh dari konversi eugenol. Sementara itu, vanilin dapat
mengalami metilasi menghasilkan veratraldehida. Metilasi dilakukan dengan
menggunakan NaOH dan (CH3)2SO4 (McMillan, 1950).
II.1.9 Bakteri
Bakteri merupakan salah satu kelompok monera. Kindom monera
semuanya merupakan organisme prokariot, yaitu tidak mempunyai membran inti.
Bakteri ialah organisme yang memiliki rata-rata ukuran diameter 2 µm, luas
permukaan tubuh 12 µm2, serta volume 4 µm3. Bakteri memiliki tiga bentuk
dasar, yaitu bulat (coccus), lonjong (basillus), dan spiral (spirillium). Proses
pembelahan sel bakteri yang tidak diiringi dengan pembelahan sempurna
menghasilkan bentuk-bentuk khas koloni bakteri (Black 1999: 73-75). Bakteri
bersifat ubiquitos, yaitu mampu hidup hampir di semua tempat, sehingga bakteri
bisa berada di berbagai lingkungan, bahkan berada di dalam tubuh manusia
(Johnson & Case ,2007).. Bakteri dapat diklasifikasikan berdasarkan komposisi
dinding selnya menjadi dua kelompok yaitu bakteri Gram positif dan bakteri
Gram negatif (Reece dkk., 2011).
Bakteri Gram positif memiliki dinding sel yang tersusun dari 60-90%
peptidoglikan yang membuat strukturnya kaku dan tebal shingga tahan terhadap
osmosis. Penyusun dinding sel lainnya adalah asam teikoat. Ada dua jenis asam
teikoat, yaitu asam lipoteikoat yang merentang sepanjang lapisan peptidoglikan
yang terikat pada membran plasma dan asam dinding teikoat yang terikat oleh
16
lapisan peptidoglikan. Kedua asam tersebut memiliki muatan negatif yang
memungkinkan mereka mengatur perpindahan kation keluar masuk sel (Thomas,
2004). Contoh bakteri Gram positif antara lain Saphylococcus aureus dan Bacillus
cereus.
Bakteri Gram negatif memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tipis
dibandingkan bakteri Gram positif. Namun demikian, pada dinding sel bakteri ini
terdapat membran luar. Membran luar dan peptidoglikan tersebut menjad lapisan
dinding sel membentuk mantel pelindung sel yang kuat. Membran luar tersebut
terdiri atas lipopolisakarida, lipoprotein dan fosfolipid. Membran luar ini memiliki
beberapa fungsi khusus seperti kekuatan muatan negatifnya menjadi faktor
penting menghindarkan dari fagositosis dan komplemen aksi seperti lisis
(Thomas, 2004). Dinding sel bakteri Gram negatif tidak memiliki asam teikoat
dan tersusun atas sejumlah kecil peptidoglikan sehingga lebih rawan terhadap
kerusakan secara mekanik (Champoux dkk., 2004). Contoh bakteri Gram negatif
antara lain Salmonella typhimurium dan Escherichia coli.
a. Bacillus cereus
Bakteri ini merupakan bakteri Gram positif yang berbentuk batang.
Bacillus cereus memiliki panjang 3-5 μm dan lebar 1,0-1,2 μm. Bakteri ini dapat
tumbuh pada pH 4,3-9,3 dan mengalami pertumbuhan maksimal pada temperatur
30-50C (Pelezar dan Chan, 1988). Bakteri Bacillus cereus dapat menyebabkan
mastitis, infeksi sitemik, gangren, meningitis dan gangguan saluran pernafasan
(Gaur dkk., 2001).
Bacillus cereus telah dikenal sebagai salah satu penyebab keracunan
makanan. Keracunan timbul jika menelan makanan atau minuman yang
mengandung bakteri ini lalu bakteri melakukan reproduksi dan menghasilkan
toksin di dalam usus. Ada dua tipe toksi yang dihasilkan, yaitu toksin penyebab
diare dan toksin penyebab muntah (Logan, 1988)
b. Saphylococcus aureus
Bakteri ini merupakan bakteri Gram positif yang berbentuk kokus dengan
diameter sekitar 0,8-1,0 μm dan biasanya tersusun dalam rangkaian tak beraturan
seperti buah anggur. Habitat alaminya pada daerah kulit, hidung, mulut dan usus
17
besar. Bakteri
Saphylococcus aureus dapat menyebabkan meningitis, radang
paru-paru dan radang sendi (Crossley dan Archer, 1997).
Bakteri ini dapat tumbuh pada rentang temperatur 14-45 C dan tumbu
dengan cepat pada temperatur 37 C (Jawetz, 2001). Tebalnya dinding sel bakteri
ini bila dibandingkan dengan bakteri lainnya menyebabkan obat antibiotik sulit
menembus sel untuk membunuhnya (Freman-Cook, 2006).
c. Escherichia coli
Bakteri ini memiliki panjang 0,4-1,7 μm dan berbentuk batang.
Escherichia coli tumbuh dengan baik pada rentang pH 4,4 - 9, membentuk koloni
yang bundar, cembung, halus dan dengan tepi rata (Jawetz, 2001). Kecepatan
perkembangbiakan bakteri ini berada pada interval 20 menit jika faktor media,
derajat keasaman dan temperatur sesuai. Temperatur yang baik untuk pertmbuhan
bakteri ini adalah 28 - 46 C. Oleh karena itu Escherichia coli dapat hidup dalam
tuguh manusia (Dwijoseputro, 1987). Bakteri ini merupakan mikroba yang ada
dalam saluran pencernaan. Usus besar manusia mengandung sejumlah
Escherichia coli yang berfungsi membusukkan sisa-sisa makanan. Apabila
melebihi dari jumlah normalnya bakteri ini akan bersifa patogen (Pelezar dan
Chan, 1988).
d. Salmonella typhimurium
Bakteri Salmonella typhimurium merupakan bakteri Gram negatif. Bakteri
ini tahan pada bembekuan dalam air jangka waktu lama, namun mati pada
pemanasan temperatur 54,4 C selama 60 menit dan 60 C selama 15 menit.
Bakteri Salmonella typhimurium memiliki bentuk batang dan dan memiliki sifat
motil, aerobik, tidak menghasilkan spora, berflagela, berkapsul (Retnosari dan
Tumbelaka, 2000). Pada manusia bakteri ini menyebabkan diare, sakit kepala,
penurunan berat badan dan dehidrasi (Tam, 2008).
II.1.10 Uji aktivitas antibakteri
Champoux dkk. (2004) menyatakan uji aktivitas antibakteri suatu senyawa
dapat dilakukan dengan metode dilusi dan difusi. Prinsip metode dilusi adalah
dengan membuat pegenceran larutan uji menjadi konsentrasi yang bervariasi.
18
Larutan uji ditambah dengan bakteri lalu diinkubasi. Larutan dengan konsentrasi
paling rendah yang tidak menunjukkan aktivitas kehidupan bakteri merupakan
nilai aktivitas antibakteri sebagai Minimal Inhibitory Concentration. Sementara
itu, pada metode difusi larutan uji dibuat terdifusi pada suatu media yang telah
dinoklulasi oleh bakteri. Proses difusi dapat dilakukan melalui ketas cakram yang
mengandung larutan uji atau pembuatan sumur pada media tersebut yang
kemudian diinjeksi larutan uji. Parameter aktivitas antibakteri diamati sebagai
diameter daerah hambat yang terbentuk dari difusi arutan uji tersebut.
Nurainy dkk. (2008) telah melakukan uji antibakteri dengan metode difusi
sumur. Pengujian aktivitas antibakteri dimulai dengan menyiapkan media
pertumbuhan bakteri. Pembuatan media diawali dengan preparasi media agar yang
ditambah akuades. Kemudian dilakukan pengadukan disertai pemanasan hingga
larutan media menjadi homogen, selanjutnya wadah ditutup dengan kapas dan
disimpan dalam autoklaf pada temperatur 121 C selama 15 menit. Media
didinginkan dalam keadaan tertutup hingga mencapai temperatur 40 C lalu
bakteri uji sebanyak 0,1% dinokulasikan ke dalam masing-masing media
pertumbuhan. Media yang telah dinokulasi kultur bakteri uji tersebut dituang ke
dalam cawan petri dan dibiarkan hingga memadat. Kemudian dibuat lima sumur
dan dimasukka larutan senyawa antibakteri dengan konsentrasi bervariasi.
Inkubasi dilakukan pada temperatur 37 C selama 24 jam. Parameter yang diamati
adalah nilai diamter daerah hambat yang diperoleh dari selisih antara diameter
total (sumur dan zona bening) dengan diameter sumur.
II.1.11 Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa yang mencegah kerusakan oksidatif yang
diinduksi oleh radikal bebas dan ROS (Reactive Oxygen Species). ROS dapat
merupakan bentuk dari anion superoksida (O2-), Hidroksil radikal (OH-), dan
hidrogen peroksida (H2O2) yang menyerang berbagai macam makromolekul
biologis, seperti protein, enzim, DNA, dll. Penelitian mengenai khalkon sebagai
agen antioksidan telah banyak dilaporkan (Belsare et al., 2010). Antioksidan
merupakan senyawa yang dapat menangkal radikal bebas. Aktivitas senyawa
19
sebagai antioksidan dapat ditentukan melalaui DPPH radikal bebas. Aktivitas
antioksidan yang moderat pada senyawa kalkon terkait dengan kemampuan
elektron atau radikal hidrogen yang dimiliki oleh suatu senyawa dalam
melepaskan DPPH, sehingga menjadi molekul diamagnetik yang stabil. Elektron
pada gugus hidroksi dan metoksi dapat dengan mudah melepaskan atom, sehingga
lebih menginduksi aktivitas antioksidan.
Antioksidan alami mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan yang
disebabkan oleh spesies oksigen reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit
degeneratif, serta mampu menghambat peroksidase lipid pada makanan (Sunarni
2005). Senyawa flavonoid diketahui mampu berperan menangkap radikal bebas
atau sebagai antioksidan alami (Amic et. al., 2003).
II.1.12 Uji aktivitas antioksidan
Aktivitas antioksidan dari suatu bahan alam dapat diuji dengan berbagai
metode di antaranya kemampuan mereduksi ion feri (FRAP), 1,1-difenil-2pikrilhidrazil (DPPH), dan kapasitas mereduksi kupri (CUPRAC). Aktivitas
antioksidan ekstrak daun dandang gendis dengan metode DPPH cukup kuat, yang
ditunjukkan dengan nilai IC50 sebesar 110.40 µg mL-1 (Pannangpetch et. al.,
2007). Berdasarkan Akbar (2010), ekstrak teraktif daun dandang gendis
berpotensi sebagai antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 48.42 mg L-1. Nilai
IC50 yang kurang dari 200 ppm menunjukkan aktivitas antioksidan yang kuat
(Hanani et. al., 2005).
Salah satu metode yang dapat menunjukkan aktivitas antioksidan dari
senyawa alam adalah metode DPPH. 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil tergolong radikal
bebas stabil. Delokalisasi elektron pada molekul DPPH akan memberikan warna
ungu yang dicirikan dengan pita serapan pada 520 nm. Ketika DPPH ditambahkan
ke dalam senyawa yang dapat memberikan atom hidrogen, DPPH akan berubah
warna
menjadi
kuning
muda,
yakni
warna
bentuk
tereduksinya,
difenilpikrilhidrazin (Molyneux 2004).
Salah satu senyawa yang dapat memberikan atom hidrogen kepada
molekul DPPH adalah flavonoid. Radikal bebas DPPH akan ditangkap oleh
20
senyawa flavonoid, dan flavonoid akan teroksidasi menghasilkan bentuk radikal
yang lebih stabil, yaitu radikal dengan kereaktifan rendah. Flavonoid
mendonorkan radikal hidrogen dari cincin aromatiknya untuk mengurangi radikal
bebas yang bersifat toksik menghasilkan radikal flavonoid yang terstabilkan
resonans dan membuatnya tidak toksik (Amic et al. 2003).
II.2 Perumusan Hipotesis dan Rancangan Penelitian
II.2.1 Perumusan hipotesis 1
Dasar pemikiran 1
Benzena lebih mudah mengalami reaksi substitusi aromatik elektrofilik
karena cincin benzena kaya akan elektron. Salah satu reaksi substitusi elektrofilik
yaitu reaksi asilasi Friedel-Crafts yang diawali dengan pembentukan elektrofil
oleh katalis asam Lewis melalui pembentukan kompleks asam basa Lewis.
Posisi masuknya elektrofil ke dalam cincin benzena ditentukan oleh
substituen pertama. Resorsinol merupakan benzena yang memiliki substituen OH
(pengarah orto dan para) yang terikat pada atom C nomor 1 dan 3. Keberadaan
atom OH ini mengarahkan substituen kedua untuk terikat pada atom C nomor 4
atau 6, menghasilkan senyawa yang sama persis. Substituen kedua diperkirakan
tidak terikat pada atom C nomor 2 karena posisi tersebut terlalu meruah, terhimpit
oleh dua gugus OH pada atom C nomor 1 dan 3.
Hipotesis 1
Jika resorsinol yang merupakan benzena dengan gugus OH di posisi 1 dan
3 direaksikan dengan asam asetat glasial dengan keberadaan katalis asam Lewis
ZnCl2, maka gugus asil akan masuk pada atom C nomor 4 atau 6 membentuk
senyawa 2,4-dihidroksiasetofenon.
II.2.2 Perumusan hipotesis 2
Dasar pemikiran 2
Khalkon dapat disintesis melalui reaksi kondensasi Clasein-Schmidt antara
senyawa asetofenon dan aldehida aromatik dengan katalis basa. Pada reaksi
tersebut adanya basa yang mengakibatkan H⍺ asetofenon lepas menghasilkan
karbanion. Karbanion dari asetofenon tersebut dapat menyebabkan adisi
21
nukleofilik terhadap aldehida aromatik menghasilkan β-hidroksiketon yang
kemudian mengalami dehidrasi membentuk khalkon. Sunder dkk. (2012) telah
mensintesis empat senyawa khalkon dengan katalis basa NaOH melalui metode
penggerusan.
Pada
sintesis
tersebut
2,4-dihidroksiasetofenon,
turunan
benzaldehida dan padatan NaOH dicampur kemudian digerus selama 30 menit.
Khalkon yang dihasilkan memiliki rendemen 69 - 76%. Sementara itu, Anjarsari
(2010)
mensintesis
senyawa
2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon
dengan
mereaksikan 2,4-dihidroksiasetofenon dan 3,4-dimetoksibenzaldehida dalam
pelarut etanol dengan katalis basa pada temperatur kamar. Pengadukan dilakukan
selama 48 jam. Campuran hasil reaksi diasamkan dengan HCl 6M kemudian
padatan yang terbentuk dimurnikan dengan cara rekristalisasi. Diperoleh padatan
berwarna orange kekuningan dengan titik lebur antara 200 - 205 C dan rendemen
39,59%. Metode yang dilakukan Anjarsari (2010) telah teruji menghasilkan
produk yang diharapkan, meskipun rendemen yang dihasilkan tidak begitu tinggi.
Hipotesis 2
Jika 2,4-dihidroksiasetofenon, veratraldehida dan katalis basa NaOH
direaksikan melalui metode pengadukan dalam pelarut etanol maka akan
menghasilkan 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon sesuai dengan produk yang
diharapkan.
II.2.3 Perumusan hipotesis 3
Dasar pemikiran 3
Senyawa flavanon dapat disintesis dengan cara mereaksikan khalkon
dengan natrium asetat dalam pelarut etanol. Ismiyarto dkk., (1999) telah
melakukan sintesis
3’,4’-dimetoksiflavanon dengan cara mereaksikan 2’-
hidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dengan natrium asetat dalam pelarut etanol dan
kemudian direfluks selama 12 jam. Rendemen yang diperoleh sebesar 72,00%.
Katalis asam seperti H3PO4 atau H2SO4 diharapkan dapat mempercepat jalannya
reaksi.
Hipotesis 3
Senyawa 7-hidroksi-3’4’-dimetoksiflavanon dapat dihasilkan dengan
mereaksikan 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dengan natrium asetat dalam
22
pelarut etanol kemudian di refluks. Penambahan katalis asam seperti H2SO4
diharapkan dapat mempercepat jalannya reaksi sehingga waktu refluks lebih
singkat dan tetap menghasilkan rendemen yang tinggi.
II.2.4 Perumusan hipotesis 4
Dasar pemikiran 4
Choudhary dan Juyal (2011) serta Prased dkk. (2008) telah melaporkan
beberapa senyawa khalkon tersubstitusi yang memiliki aktivitas antibakteri
terhadap bakteri Gram positif dan Gram negatif. Sebagian besar khalkon tersebut
tersubstitusi oleh gugus metoksi dan hidroksi. Prasad dkk. (2008) menyimpulkan
bahwa adanya gugus metoksi dan hidroksi pada khalkon akan meningkatkan
aktivitas antibakteri.
Hipotesis 4
Jika senyawa khalkon tersubstitusi oleh gugus metoksi dan hidroksi yang
telah dilaporkan tersebut memiliki aktivitas antibakteri maka diperkirakan 2’,4’dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dengan struktur yang mirip akan memiliki
aktivitas antibakteri.
II.2.5 Perumusan hipotesis 5
Dasar pemikiran 5
Bandgar et. al. (2010) telah melakukan sintesis senyawa 3,4,5trimetoksikhalkon, senyawa tersebut menunjukkan aktivitas antiinflamasi dan
antioksidan yang bermanfaat untuk terapi kanker.
Hipotesis 5
Jika senyawa khalkon tersubstitusi oleh gugus metoksi dilaporkan
memiliki
aktivitas
antioksidan,
maka
diperkirakan
2’,4’-dihidroksi-3,4-
dimetoksikhalkon dimana senyawa khalkon tersebut tersubstitusi oleh gugus
hidroksi dan metoksi juga memiliki aktivitas antioksidan.
II.2.6 Perumusan hipotesis 6
Dasar pemikiran 6
Parubak (2013) dan Sukadana (2010) telah melaporkan senyawa flavanon
tersubstitusi yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Gram positif dan
23
Gram negatif. Senyawa flavanon yang dilaporkan tersebut tersubstitusi oleh gugus
metoksi dan hidroksi.
Hipotesis 6
Jika senyawa flavanon yang tersubstitusi oleh gugus metoksi dan hidroksi
yang telah dilaporkan tersebut memiliki aktivitas antibakteri maka diperkirakan
2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dengan struktur yang mirip akan memiliki
aktivitas antibakteri.
II.2.7 Perumusan hipotesis 7
Dasar pemikiran 7
Marliana dkk. (2016) telah berhasil mengisolasi tiga senyawa turunan
flavanon dari ekstrak metanol daun M. Pearsonii Merr yaitu 4’-O-metil-8isoprenileriodiktiol(1), 4’-O-metil-8-isoprenilnaringenin(2) dan
Lonkokarpol
A(3). Sifat antioksidan senyawa 1-3 diuji terhadap pereaksi 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl (DPPH) dengan menentukan konsentrasi peredaman (IC50)
menggunakan metode peredaman radikal bebas. Berdasarkan hasil penelitian,
dilaporkan bahwa senyawa turunan flavanon tersebut memiliki aktivitas
aktioksidan dimana senyawa ketiga aktivitas antioksidannya paling tinggi.
Hubungan struktur dan aktivitas antoksidan dari senyawa flavonoid sangat
dipengaruhi oleh jumlah dan posisi gugus hidroksi yang terikat (Seyoum dkk.,
2004).
Hipotesis 7
Jika senyawa flavanon yang tersubstitusi oleh gugus hidroksi telah
dilaporkan memiliki aktivitas sebagai antioksidan, maka senyawa 7-hidroksi3’,4’-dimetoksiflavanon yang didalamnya juga terikat gugus hidroksi diperkirakan
juga mempunyai aktivitas sebagai antioksidan.
24
II.2.8 Rancangan Penelitian
O
HO
OH
CH3
asam asetat/ZnCl2
HCl
HO
OH
2,4-dihidroksiasetofenon
resorsinol
H
H3CO
KOH/etanol
O
H3CO
3,4-dimetoksi benzaldehida
HO
OH
OCH3
OCH3
O
2',4'-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon
natrium asetat, etanol
refluks
OCH3
HO
O
OCH3
O
7-hidroksi-3',4'-dimetoksiflavanon
Uji aktivitas antibakteri
Uji aktivitas antioksidan
Gambar II.7 Rancangan penelitian sintesis khalkon dan flavanon serta uji
aktivitasnya sebagai antibakteri dan antioksidan
Untuk membuktikan hipotesis yang telah dipaparkan, maka disusunlah
suatu rancangan penelitian. Rancangan penelitian ini terdiri dari sintesis 2,4dihidroksiasetofenon, sintesis 2’.4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon, sintesis 7-
25
hidroksi-3’,4’-dimetoksiflavanon dan uji aktivitas antibakteri dan antioksidan dari
khalkon dan flavanon hasil sintesis tersebut.
Untuk membuktikan hipotesis I, maka dilakukan langkah penelitian
pertama. Pada tahap pertama, dilakukan sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon dengan
reaksi asilasi Friedel-Crafts terhadap senyawa resorsinol menggunakan pereaksi
asam asetat glasial dan katalis ZnCl2. Reaksi dilakukan dengan
metode
konvensional pemanasan refluks. Hasil analisis disintesis menggunakan IR, GCMS dan 1H-NMR.
Untuk membuktikan hipotesis II, maka dilakukan sintesis khalkon dengan
mereaksikan 2,4-dihidroksiasetofenon dan 3,4-dimetoksibenzaldehida dalam
pelarut etanol. Pengadukan dalam temperatur ruang selama 48 jam dilakukan
dengan keberadaan katalis KOH 40%. Hasil sintesis dianalisis menggunakan IR,
UV-Vis, GC-MS, dan 1H-NMR.
Untuk membuktikan hipotesis III, maka dilakukan sintesis flvanon dengan
mereaksikan 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon dengan natrium asetat dalam
pelarut etanol menggunakan sistem refluks. Senyawa yang dihasilkan dianalisis
dengan spektrometer FT-IR, GC-MS dan H-1NMR.
Untuk membuktikan hipotesis IV, V, VI dan VII, maka dilakukan langkah
penelitian yang ketiga. Pada tahap ini, dilakukan uji aktivitas senyawa khalkon
dan flavanon hasil sintesis sebagai antibakteri menggunakan metode difusi sumur
dan antioksidan dengan metode DPPH. Bakteri yang digunakan adalah bakteri
Gram positif (Bacillus subtilis) dan bakteri Gram negatif (Escherichia coli).
Tahap uji senyawa khalkon dan flavanon dilakukan dengan variasi konsentrasi
100, 300, 500, 700 dan 1000 ppm. Kontrol positif yang digunakan adalah
tetrasiklin sedangkan kontrol negatif yang digunakan adalah DMSO 99,9%.
Sedangkan pada uji aktivitas antioksidan Sampel dilarutkan dalam metanol dan
dibuat dengan beberapa variasi konsentrasi, yaitu 1,25; 2,5; 5; 10; dan 20 mg/mL
kemudian masing-masing ditambahkan larutan DPPH. Blanko yang digunakan
adalah metanol dan DPPH 1 Mm.
BAB III
METODE PENELITIAN
III.1 Bahan
Bahan-bahan dalam penelitian ini berasal dari Merck Index dengan
kualitas pro analis antara lain resorsinol, seng klorida (ZnCl2), asam asetat glasial,
natrium hidroksida (NaOH), 3,4-dimetoksibenzaldehid (veratraldehida), asam
klorida (HCl), asam sulfat (H2SO4), etanol, natrium asetat (CH3COONa), agar
teknis, media Nutrien Broth, tetrasiklin, dimetilsulfoksida, biakan bakteri Gram
positif Bacillus sirius FNCC 0047 dan bakteri Gram negatif Eschercia coli FNCC
157, metanol, larutan DPPH 1 Mm, BHT, dan asam aspartat.
III.2 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah peralatan gelas
laboratorium, set alat refluks, pengaduk magnetik, timbangan analitik (Libror
EB330 Shimadzu), desikator vakum dan penyaring Buchner. Instrumen anaisis
yang digunakan adalah alat penentu titik leleh (Electrothermal 9100),
spektrofotometer Inframerah (FT-IR, Shimadzu Prestige 21), kromatrografi gasspektrometer massa (GC-MS, Shimadzu Q2010S), spektrometer resonansi
magnetik inti proton (1H-NMR (400 MHz) JEOL ECS, (500 MHz) JEOL JNM
ECA 500), erlenmeyer, perforator, autoklaf, jangka sorong, jarum ose, tip
mikropipet biru, mikropipet 100-1000 μL (Accura 821), inkubator (Memmert),
Laminary Air Flow (Telstar BIO-II-A/P), timbangan analitik (AND GR-200), dan
spektrofotomeeter UV-Vis.
III.3 Prosedur Penelitian
III.3.1 Sintesis 2,4-dihidroksiasetofenon (1)
Sebanyak 6,6 gram (0,11 mol) asam asetat glasial dimasukkan ke dalam
labu leher tiga ukuran 100 m l yang dilengkapi dengan pendingin bola. Sebanyak
6,6 gram (0,048 mol) ZnCl2 ditambahkan ke dalam labu dan dipanaskan lebih
kurang 30 menit sampai ZnCl2 larut. Selanjutnya ke dalam campuran ditambahkan
4,4 gram (0,04 mol) resorsinol sedikit demi sedikit selama  10 menit dengan
pengadukan konstan. Setelah semua resorsinol ditambahkan, dilakukan refluks
26
27
selama 30 menit. Campuran reaksi kemudian didinginkan pada temperatur kamar
dan ditambahkan 20 ml HCl:akuades (1:1) sambil terus diaduk selama satu jam.
Selanjutnya campuran reaksi didinginkan dengan penangas es hingga terbentuk
padatan. Padatan yang terbentuk disaring menggunakan penyaring Buchner dan
dicuci dengan 80 ml HCl:akuades (1:3). Produk yang terbentuk direkristalisasi
menggunakan pelarut HCl:akuades (1:1) kemudian ditentukan titik leburnya dan
dianalisis menggunakan 1H-NMR, GC-MS, dan spektrometer IR.
III.3.2 Sintesis 2’,4’-dihidroksi-3,4-dimetoksikhalkon (2)
Sebanyak 1 gram (6,57 mmol) 2,4-dihidroksiasetofenon dilarutkan dalam
3 ml etanol. Kemudian 25 ml KOH 40% dingin dimasukkan dengan cara
penetesan. Setelah bercampur sempurna, ditambahkan 1,09 gram (6,57 mmol)
3,4-dimetoksibenzaldehida yang sebelumnya telah dilarutkan dalam 3 ml etanol
dengan cara penetesan sambil terus diaduk. Pengadukan dilanjutkan selama 48
jam pada temperatur kamar dengan ditutup rapat. Selanjutnya, campuran
diasamkan dengan HCl 10% sampai terbentuk padatan. Padatan disaring
menggunakan penyaring buchner. Produk yang terbentuk direkristalisasi dengan
pelarut etanol kemudian dikeringkan dan dianalisis menggunakan spektrometer
FT-IR, GC-MS, dan 1H-NMR.
III.3.3 Sintesis 7-hidroksi-3’,4’-metil-dimetoksiflavanon (3)
Sebanyak
1,272
g
(0.0045
mol)
senyawa
2’,4’-dihidroksi-3,4-
dimetoksikhalkon ke dalam labu leher tiga yang berisi larutan 2 g (0.0150 mol)
natrium asetat dalam 10 ml etanol dan 3 ml air. Campuran tersebut direfluks
selama 12 jam. Kemudian campuran reaksi diencerkan dengan air dingin
sebanyak 20 ml dan didiamkan pada suhu kamar selama 1 jam, padatan yang
terbentuk disaring dengan Buchner dan ditentukan sifat fisiknya. Selanjutnya
dianalisis dengan menggunakan spektrometer FT-IR, GC-MS, dan 1H-NMR
(pelarut CCl4).
III.3.4 Uji aktivitas antibakteri
Semua alat yang digunakan disterilisasi dahulu. Sterilisasi diawali dengan
pencucian alat lalu pengeringan. Selanjutnya, peralatan dibungkus menggunakan
kertas dan dimasukkan dalam autoklaf selama15 menit pada temperatur 121 C
27
28
dengan tekanan 1 atm. Alat yang tidak tahan terhadap temperautr tinggi dapat
disterilisasi menggunakan etanol 70%.
Tahap selanjutnya dilakukan
pembuatan media uji. Media uji dibuat
dengan melarutkan 0,40 g Nutrient Broth dan 0,75 g agar dalam 50 mL akuades.
Media yang telah disiapkan kemudian disterilkan pada temperatur 121 C dan
tekanan 1 atm selama 15 menit. Lalu larutan media uji yang telah disterilisasi
ditambahkan kultur patogen yaitu Gram positif (Bacillus subtilis) dan bakteri
Gram negatif (Escherichia coli).. Setelah memadat, sumur dibuat dengan
perforator.
Sumur yang terbentuk kemudian ditambahkan 150 μL senyawa uji.
Senyawa hasil sintesis diuji menggunakan variasi konsentrasi 100, 300, 500, 700
dan 1000 ppm. Kontrol positif yang digunakan adalah tetrasiklin 100 ppm dalam
DMSO 99,9%, sedangkan kontrol negatif dengan pelarut DMSO 99,9%.
Selanjutnya, dilakukan inkubasi pada 37 C selama 24 jam. Setelah itu, diameter
daerah hambat diukur untuk menentukan aktivitas antibakteri senyawa uji. Nilai
diameter daerah hambat diperoleh dari selisih diameter total (diameter sumur +
zona bening) dengan diameter sumur.
III.3.5 Uji aktivitas antioksidan
Uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif dilakukan menggunakan DPPH
menurut metode Chow. Sampel dilarutkan dalam metanol dan dibuat dengan
beberapa variasi konsentrasi, yaitu 1,25; 2,5; 5; 10; dan 20 mg/mL. Ke dalam
masing-masing larutan ditambahkan 0,1 mL DPPH 1 mM dan diinkubasi pada
suhu 37 °C selama 30 menit, selanjutnya diukur pada panjang gelombang 515 nm.
Sebagai blanko digunakan metanol dan DPPH 1mM. Untuk pembanding
digunakan BHT (konsentrasi 1,25; 2,5; 5; 10; dan 20 mg/mL ) dan asam aspartat
3,125; 6,25; 12,5; 25 dan 50 mg/mL. Persentase hambatan (%I) dihitung
berdasarkan {(serapan blanko-serapan sampel)/serapan blanko} x 100%. Nilai
hambatan dan konsentrasi sampel diplot masing-masing pada sumbu x dan y, dan
persamaan garis yang diperoleh digunakan untuk menghitung Inhibition
Concentration 50% (IC50).
DAFTAR PUSTAKA
Achanta, G., Modzelewska, A., Feng, L., Khan, S.R., and Huang, P., 2006,
Boronic-chalcone Derivative Exhibis Potent Anticancer Activity Through
Inhibition of Protesome, Mol Phamacol., 70, 426-433.
Adesanwo, J.K., Shode, F.O., AIyelaagbe, O., Oyede, R.T., and Baijnath, H.,
2009, Isolation and Characterization of a New Chalcone from the Leaves
of Heteropyxis natalensis, Int. J.Med.Sci, 1(2), 28-32.
Ambarwati, R., 2010, Sintesis asam 6-karboksilat-4’-metoksiflavon dari asam-4hidroksibenzoat dan 4-metoksibenzaldehid, Skripsi, Departemen Kimia
FMIPA UGM, Yogyakarta.
Andersen, Q.M., and Markham, K.R., 2006, Flavonoids : Chemistry,
Biochemistry and Application, Taylor & Francis Group, New York.
Anjarsari, P., 2010, Sintesis Flavanon turunan3,4-Dimetoksibenzaldehida, Skripsi,
Departemen Kimia FMIPA UGM, Yogyakarta.
Anshory, H.M., 2014, Sintesis turunan Khalkon dari Miristisin Minyak Pala dan
Uji Potensi sebagai Penghambat UV-A, Tesis, Departemen Kimia FMIPA
UGM, Yogyakarta.
Athikomkulchai, S., Sriubolmas, N., and Ruangrungsi, N., 2005, Antibacterial
Activity of Flavonoids from Bauhina Sindhornie, Thai. J. Health Res.,
19(1), 13-18.
Bandgar, B. P., Gawande, S. S., Bodade, R. G., Totre, J. V., dan Khodragade, C.
N., 2010, Synthesis ang Biological Evaluation of Simple Methoxylated
Chalcones as Anticancer, Anti-Inflammatory, and Antioxidant Agents,
Bioorg. Med. Chem., 18, 1364-1370.
Belsare, D.P., Pal S.C., Kazi A.A., Kankate R.S., and Vanjari S.S., 2010,
Evaluation of Antioxidant Activity of Chalcones and Flavonoids, Journal
of ChemTech Research, 2(2) :1080-1089.
Bhatia, V.K., Krishnamurty, H.G., Madhav, R., and Seshadr, T.R. (1968)
Oxidation of Flavan Derivatives. Tetrahedron Letters, 9, p. 3859.
Black, J. G. 1999. Microbiology: Principles and explorations. 4th ed. John Willey
& Sons, Inc., New York: xxiv + 786 hlm Campbell 2008
Carrey, F. A., and Sundberg , R.J., 1990, Advanced Organic Chemistry Part A :
Structure and Mechanism, 5th Ed, Springer, New York.
Champoux, J.J., Neidhardt, F.C., Drew, W.L., and Plorde, J.J., 2004, Medical
Microbiology, 4th Ed., McGraw-Hill, New York.
Chin, Y., Jung, H., Liu, Y., Su, B., Castoro, J.A., Keller, W.J., Pereira, M.A., and
Kinghorn, A.D., 2007, Anti-oxidant Constituents of The Roots and Stolons
of Licorice (Glychyrrhiza glabra), J. Agric. Food Chem., 55, 4691-4697.
Choudhary,A., and Juyal, V., 2011,Synthesis of Chalcone ad Their Derivatives as
Antimicrobial Agents, Int. J. Pharm. Sci., 3(3), 1235-128.
Crossley, K.B., and Archer, G.L., 1997, The Staphylococcus in Human Disease,
Churchill
Livingstone,
London.
29
30
Cui, Y., Ao, M., Li, W., Hu, J., and Yu, L., 2007 Anti-inflammatory Activity of
Licochalcone A Isolated from Glycyrrhiza inflata, Z. Naturforsch, 63c, 361-365.
Dauzonne, D., and Monneret, C. (1997) A New Synthesis of Flavanones.
Synthesis, pp. 1305-1308.
Do, T., Vo, P., and Tran, T., 2009, Synthesis and Comparison of Antiinflammatory Activity of Chrysin Derivatives, Proceeding 13th
International Electronic Conference on Synthetic Organic Chemistry
(ECSOC-13), 1-30 November 2009, Sciforum Electronic Conference
Series.
Fessenden, R.J., dan Fessenden, J.S., 1986, “Organic Chemistry”, Third Edition,
Alih bahasa Pudjaatmaka, A. H, Kimia Organik Jilid 2 Edisi ke-3,
Erlangga, Jakarta.
Freeman-Cook, L., and Freeman-Cook, K., 2006, Staphylococcus aureus
Infections, Chelsea House Publisher, New York.
Fukumoto, T., Ujita, K., Mori. T., Nakao, K., dan Tamai, Y., 1997, Process for
Producing 2,4-Dihydroxyacetophenone, US Patent, 5621146.
Gaur, G.H., Patrick, C.C., McCullers, J.A., Flynn, P.M., Pearson, T.A., Razzouk,
B.I., Thompson, S.J., and Shenep, J.L., 2001, Bacillus cereus Bacterimia
and Meningitis in Immunocompromised Children, Clin. Infect. Dis., 32,
1456-1462.
Guenther, E., 1950, The Essential Oil, D Van Nostrand Company Inc., New York.
Harborne, J.B., and Williams, C.A. (2001) Anthocyanins and other flavonoids.
Nat. Prod. Rep., 18, pp. 310-333.
Haslam, E. (1993) In Shikimic Acid Metabolism and Metabolites. Chichester,
John Wiley and Sons, p. 331.
Heim, K.E., Tagliaferro, A.R., and Bobilya, D.J. (2002) Flavonoids antioxidants:
Chemistry Metabolism and Structure-activity relationship. J. Nutr.
Biochem., 74, pp. 572-584.
Heller, W., and Forkmann, G. (1988) Biosynthesis of flavonoids. In: Harborne,
J.B. ed. The Flavonoids: Advances in Research Since 1980. London,
Chapman and Hall, p. 399.
Ismiyarto, Matsjeh, S., and Anwar, C., 1999, Synthesis of Chalcone and
Flavanone Compound Using Raw Material of Acetophenone and
Benzaldehyde Derivative, Indonesian Journal of Chemistry, 81-89.
Jawetz, E., Brooks, G.F., Butel, J.S., and Morse, S.A., 2001, Melnick &
Adelberg’s Mdical Microbology, Appleton & Lange, New York.
Jayshree, N., Narayanan, N., andSriram,L., 2012, Antibacterial, Antifungal and
Antimycrobacterial Studies on Some Synthetic Dimethoxy Flavones,
Asian J. Pharm. Clin. Res., 5(1), 101-103.
Jeon, J., Yang, D., AND Jun, J., 2011, Selective Synthesis of 3,4dihydrocoumarins and Chalcones from Substitued Aryl Cinnamic Ester,
Bull. Korean Chem. Soc., 32(1), 65-70.
Joglekar, S.J., and Samant, S.D. (1988) Abnormal Base Catalyzed Reaction of
Formaldehyde and Benzaldehydes With 1-(2-Hydroxyphenyl)-3-Phenyl1,3-Propanedione. Tetrahedron Letters, 29, pp. 241-244.
31
Killelea, J. R. Dan Lindwall, H. G., 1948, Preparation of Resacetophenone, J. Am.
Chem. Soc., 70(1), 428.
Kshatriya, R.B., and Nazeruddin, G.M., 2013, Bioactive Flavonoids of
Therapeutic Importance, Prooceding 7th International Symposiumon
Feedstock Recycling of Polymeric Materials, 23-26 Oktober 2013, New
Delhi.
Kshatriya, R.B., Shaikh, Y.I., and Nazeruddin, G.M., 2013, Synthesis of Flavone
Skeleton by Different Methods, Orient J. Chem., 29(4), 1475-1487.
Logan, N.a., 1988, Bacillus Species of Medical and Veterinary Importance, J.
Med. Microbiol., 25, 157-165.
Mandge, S., Singh, P.H., Gupta, D.S., and Moorthy, N.H., 2007, Synthesis and
Characterization of Some Chalcone Derivatives, Trend in Applied Sci.
Ress., 2(1), 52-56.
Mann, J. (1994) In Chemical Aspects of Biosynthesis. Oxford, Oxford University
Press, p. 58.
Masesane, I.B., 2015, A Comprehensive review of The Oxidative Cyclisation of
2’-hydroxychalcones to aurones and flavones, Int. J. Chem. Stud., 3(3),
53-59.
Matsjeh, S., 2013, Kimia Hasil Alam Senyawa Metabolit Sekunder Tumbuhan
Flavonoid, Terpenoid dan Alkaloid, Gre Publishing, Yogyakarta.
McMillan, D., 1950, Production of Veratraldehide from Vanilin, Unites States of
America, 2.496.803.
Middleton, E., and Kandaswami, C. (1994) Potential health-promoting properties
of citrus flavonoids. Food Technol., 48, pp. 115-119.
Murthy, Y.L., Viswanath, I.V., and Pandit, E.N., 2010, Synthesis,
Characterization & Antibacterial Activity of 7,4’-Dihydroxy,3’-Methoxy
Flavones, Int. J. Chem. Tech. Res., 2(2), 1097-1101.
Murti, R.S., 2002, Sintesis Veratralanilin dari Eugenol, Skripsi, Jurusan Kimia
FMIPA UGM, Yogyakarta.
Murti, Y., Goswami, A., and Mishra, P., 2013, Synthesis and Antioxidant Activity
of Some Chalcones and Flavanoids, Int. J. Pharm. Tech. Res., 5(2), 811818.
Neldawati RG., 2013, Analisis nilai absorbansi dalam penentuan kadar flavonoid
untuk berbagai jenis daun tanaman obat, Pillar of Physics, Jurusan Fisika,
Universitas Negeri Padang, Vol 2, 76-83.
Nijveldt, R.J., Nood, E., Hoom, D., Boelens, P.G., Norren, K., and Leeumen, P.
(2001) Flavonoids: a review of probable mechanisms of action and
potential applications. Am. J. Clin. Nutr., 74, pp. 418-425.
Nurainy F., Rizal, S., dan Yudiantoro, 2008, Pengaruh Konsentrasi Kitosan
terhadap Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Agar (Sumur),
JTHP, 13(2), 117-125.
Ohtsuki, T., Himeji, M., Fukazawa, H., Tanaka, M., Yamamoto, H., and Mimura,
A.,
2009,
High-yield
Production
of
Scutellaria
Radix
Flavonoids(Baicalein, Baicalin and Wogonin) by Liquid-culture of
Scutellaria baicalensis Root-derived Cells, Braz. Arch. Biol. Technol.,
52(2), 29-298.
32
Okwu, D.E., 2008, Citrus Fruits: A Rich Source of Phytochemicals and Their
Roles in HumanHealt, Int. J. Chem. Sci., 6(2), 451-471.
Parubak, A. S. & Murtihapsari, 2005, Isolasi dan Identifikasi Alkaloid dari Kulit
Kayu Akway(Drimys beccariana.Gibbs)Asal Manokwari, Laporan
Penelitian, Proseding Seminar Nasional SPMIPA 2006, Undip Semarang.
Parubak, A. S., 2013, Senyawa Flavonoid yang Bersifat Antibakteri dari Awkay
(Drimys becariana.Gibbs), Chem. Prog., 6(1), 34-37.
Pelezar, M.J., dan Chan, E.C.S., 1988, Dasar-dasar Mikrobiologi 2, Universitas
Indonesia, Jakarta.
Prasad, Y.R., Kumar, P.R., and Rao, A.S., 2008, Synthesis and Antimicrobial
Activity of Some New Chalcones of 2-acetyl Pyridine, J. Chem., 5, 144148.
Putrianingrum, S.T., 2015, Sintesis 2’,4’-Dihidroksi-3,4-Dimetoksikhalkon dan
Uji Aktivitasnya sebagai Tabir Surya secara In Vitro, Skripsi, Departemen
Kimia FMIPA UGM, Yogyakarta.
Reece, J.B., Urry, L.A., Cain, M.L., Wasserman, S.A., Minorsky,P.V., and
Jackson, R.B., 2011, Campbell Biology, 9th ed, Pearson Education Inc.,
California.
Retnosari, S., dan Tumbelaka, A.R., 2000, Pendekatan Diagnostik Serologik dan
Pelacak Antigen Salmonella typhi, Sari Pediatri, 2(2), 90-95.
Sagrera, G., Lo’pez, V., Pandolfi, E., Seoane, G., and Eicher, T. (1998)
Aproximación a la Síntesis de Constituyentes de Briofitas. Informacio’n
Tecnolo’gica, 9, pp. 11-17.
Sarda, S.R., Pathan, M.Y., Paike, V.V., Pachmase, P.R., Jadhav, W.N., and
Pawar, R.P., 2006, A Facile Synthesis of Flavones Using Recyclable Ionic
Liquid Under Microwave Irradiation, ARKIVOC, 16, 43-48.
Sastrohamidjojo, H., 2004, Kimia Minyak Atsiri, UGM Press, Yogyakarta.
Shailendra M., Hemendra P.S., Gupta S.D., and Hari N.M., 2007, Synthesis and
Characterization of Some Chalcone Derivatives, Trends in Applied
Sciences Research, 2 : 52-56.
Subramanian, R.S., and Balasubramanian, K.K. (1990) Mercury(II)
Trifluoroacetate-mediated Transformation of 3-Bromo-1-phenylprop-2ynyl Aryl Ethers, a Novel Synthesis of Flavanones. J.Chem. Soc. Chem.
Commun., pp. 1469-1470
Sukadana, I. M., 2010, Aktivitas Antibakteri Senyawa Flavanoid dari Kulit kar
Awar-Awar (Ficus septica Burm F), Jurnal Kimia, 4(1), 63-70.
Sunder, S., Kumar, R., Prashant, N., and Reddy, S., 2012, Solvent Free Method
Preparation o NovelChalcones Having Anti-inflammatory Activity, Jour.
Suryana, A., Allorerung, D., Wahid, P., Manohara, D., Pribadi. E. R., Indrawanto,
C., dan Suaryoto, 2005, Prospek dan Arah Pengembangan Agribisnis
Cengkeh, Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian Departemen
Pertanian, Jakarta.
Susanti, E. V. H. Dan Redjeki, T., 2011, Optimasi Sintesis Khalkon dari
Veratraldehid dan 2,4-Dihidroksi Asetofenon, Prosiding Seminar Nasional
Kimia dan Pendidikan Kimia III “Teori dan Aplikasi Sains dalam Isu
33
Globalisasi
Lingkungan,
Profesionalisasi
Pembelajaran
dan
Kewirausahaan”, 7 Mei 2011, Surakarta.
Tam, C.R., 2008, Salmonella : Description, Pathogenesis and Symptoms,
Academic Press, San Fransisco.
Thomas, P., 2004, Bacteria and Viruses, Lucent Books, New York.
Towaha, J., 2012, Manfaat Eugenol Cengkeh dalam Berbagai Industri di
Indonesia, Prespektif, 11(2), 79-90.
Tyman, J. H. P., 1996, Synthesis and Natural Phenols, Elsevier Science,
Amsterdam.
Vogel, 1989, Textbook of Practical Organic Chemistry, 4th Ed., Longman,
London.
Wang, Y., Tan, W., Li, W.Z., and Li, Y. (2001) A Facile Synthetic Approach to
Prenylated Flavanones: First Total Syntheses of (±)-Bonannione A and
(±)-Sophoraflavanone A. J. Nat. Prod., 64, pp. 196-199.
Widyastuti N., 2010, Pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode CUPRAC,
DPPH, dan FRAP serta korelasinya dengan fenol dan flavonoid pada enam
tanaman, Tesis, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Wulansari, F.D., 2010, Sintesis 2-hidroksi-3-metoksi-5-propil-asetofenon dari
Eugenol Hasil Isolasi Minyak Daun Cengkeh, Tesis, Departemen Kimi
FMIPA UGM, Yogyakarta.
Yadav, G. D. dan Joshi, A. V., 2002, A Green Route for The Acylation of
Resorcinol with Acetic Acid, Clean Techn. Environ. Policy, 4, 157-164.
Zengade, S., Mokle, S., Vibhute, A., and Vibhute, Y., 2011, An Efficient and
Operationally Simple Synthesis of Some New Chalcones by Using
Grinding Technique, Chem. Sci. J., 13, 1-7.