deteksi food ingredient dan cemaran produk
advertisement
DETEKSI FOOD INGREDIENT DAN CEMARAN PRODUK Andriani Dept. Biokimia dan Biologi Molekuler FK UNTAN EKSTRAKSI DNA • Definisi : proses mendapatkan DNA dari makanan atau bahan olahan makanan • Proses : - Menghancurkan dinding sel untuk bisa mendapatkan kandungan DNA dan RNA di dalamnya - Menghilangkan membran lipid dengan menambahkan detergen atau surfaktan - Menghilangkan protein dengan dengan proteinase – K - Presipitasi dengan alkohol EKSTRAKSI DNA dari sampel Tujuan : memperoleh DNA untuk digunakan sebagai template pada proses PCR Bahan dalam kit : - Food lysis buffer - Spin columns - Buffer PB - Buffer AW2 - Buffer EB PERALATAN • • • • • • • • Tissue lyzer Tabung 2 mL Vortex microsentrifuge Shaking thermoblock Microtube 1,5 mL Mikropipet Tips berbagai ukuran Sarung tangan free powder • - Bahan Sampel Alkohol absolute Chloroform Kit isolasi DNAmakanan PROSEDUR KERJA : 1. Proses disrupsi dan homogenisasi 2. Proses ekstraksi dan purifikasi DNA : manual Prosedur kerja bisa dilihat di manual masing-masing POLYMERASE CHAIN REACTION • Merupakan proses perbanyakan (replikasi) DNA secara enzimatis untuk mendapatkan replikasi DNA dalam jumlah besar dan waktu singkat. • Prinsip kerja PCR yaitu memperbanyak segmen spesifik DNA yang diawali dengan perlekatan dNTP-dNTP dalam reaksi termal mengikuti acuan primer Bahan-bahan untuk PCR • Template : DNA , sbg sumber DNA yang akan diperbanyak/diamplifikasi • Primer : oligonukleotida, 18 – 30 basa, sbg acuan dalam proses inisiasi dan amplifikasi sekuen DNA • DNA polimerase : enzim polimerase (Thermus aquaticus) , melakukan perlekatan dNTP menjadi untaian sekuen DNA pada tahap perpanjangan (annealing) dalam polimerisasi DNA • dNTP : kumpula basa-basa penyusun DNA • Kation bivalen (MgCl2) , kofaktor • Buffer PCR, menjaga keseimbangan PH saat proses amplifikasi • Aquabidest (ddH2O), sebagai pelarut TAHAPAN PCR • Denaturasi (peleburan), untai ganda DNA menjadi untai tunggal, suhu tinggi 94-96oC • Annealing (penempelan), penempelan primer pada DNA template yang komplemen pada urutan basanya. Spesifik pada suhu 45-60oC • Extension (pemanjangan), proses DNA polimerase melengkapi utas tunggal DNA menjadi utas ganda, dengan memperpanjang fragment primer. Memerlukan dNTP. Konten kit • • • • Kit assay Positive control DNA RNAse-free water PCR master mix : dNTP, polimerase • STEP PENGERJAAN BISA DILIHAT DALAM MANUAL Contoh Produk
