Penggunaan AgNOR sebagai biomarker sensitivitas radiasi*

PENGGUNAAN AgNOR SEBAGAI MARKER PROLIFERASI DALAM PENILAIAN
RESPON AWAL RADIASI PADA KEMORADIOTERAPI KANKER SERVIKS
Iin Kurnia*, Budiningsih S**,Andrijono***, Irwan Ramli****, Cholid Badri****
*Bidang Biomedika PTKMR Batan-Jakarta
**Departemen Patologi Anatomik FKUI/RSCM-Jakarta
***Departemen Obstetrik Ginekologi/FKUI/RSCM-Jakarta
****Departemen Radioterapi FKUI/RSCM-Jakarta
ABSTRAK
PENGGUNAAN AgNOR SEBAGAI MARKER PROLIFERASI DALAM PENILAIAN
RESPON AWAL RADIASI PADA KEMORADIOTERAPI KANKER SERVIKS.
Radiosensitivitas sel terhadap radiasi merupakan salah satu faktor penting dalam menentukan tingkat
responsive sel kanker terhadap radioterapi. Empat puluh enam sedian mikroskopik dari dua puluh tiga
biopsi jaringan karsinoma serviks sel skuamosa sebelum dan setelah 1 minggu radiasi telah diwarnai
dengan pewarnaan AgNOR. Sebelum kemoradioterapi sediaan mikroskopik dikelompokkan atas 3
kelompok derajat diferensiasi G1(baik), G2(menegengah) dan G3 (buruk). Tidak ada perbedaan scara
statistik nilai AgNOR pada 3 derajat diferensiasi and nilai AgNOR derajat diferensiasi menengah5,19
±0,91 cenderung lebih tinggi dari derajat diferensiasi baik (antara nilai ni No statistical different of
AgNOR value between three level grade differentiation, and G2,medium 5,19 ±0,91 cenderung lebih
tinggi dari derajat diferenisiasi baik 4,77 ± 1,04 , dan tidak ada perbedaan secara statistik antara
histologik sub tipe keratin 4,68 ± 0,71, and non keratin 5,17 ± 1,17. Setelah 1 minggu radiasi nilai
AgNOR berkurang dan ditemukan korelasi positif antara agNOR sebelum kemoradioterapi dan
setelah 1 minggu radiasi (p=0,0038 ) dan dengan penuruan nilaiAgNOR setelah 1 minggu radiasi
((p=0,0002). Dapat disimpulkan bahwa makin tinggi nilai AgNOR makin responsive sel kanker
serviks terhadap radiasi dan sebaliknya. Walapun sampel penelitian ini masih sedikit kami menduga
bahwa AgNOR dapat digunakan sebagai salah satu marker proliferasi dalam memperkirakan respon
radiasi pada karsinoma serviks epitel skuamosa yang ditangani dengan kemoradioterapi dan
dibuituhkan penelitian lebih lanjut untuk mengatahui hubungan antara AgNOR dengan faktor lainnya
pada proliferasi sel kanker.
Kata Kunci
: AgNOR, karsinoma serviks sel skuamosa, kemoradioterapi
THE USING OF AgNOR AS A PROLIFERATION MARKER TO ASSES OF EARLY
RADIATION
RESPONSE
ON
CERVICAL
CARCINOMA
TREATED
BY
CHEMORADIOTHERAPY . Cellular radiosensitivity is one of important factor to determine of
level of cancer cell rasponsive to radiotherapy. Forty six microscopic specimen from twenty three
biopsy of cervical squamosa carcinoma before and after one week irradiation have staining with
AgNOR. Before treatment histological figure of were grouped with three level of grade
differentiation G1 ( good), G2 (medium) and G3(bad) and keratinized (K) and non keratinized (NK).
No statistical different of AgNOR value between three level grade differentiation, and G2,medium
5,19 ±0,91tend higher than G14,77 ± 1,04, and also no statistical different between sub histological
grouped keratinized 4,68 ± 0,71, and non keratinized 5,17 ± 1,17. After one week radiation the
AgNOR value decrease and we find positive correlation between the AgNOR before treatmeant and
after one week radiation (p = 0,0038), dan also positive correlation betwen AgNOR before treatment
and level of AgNOR decrement after one week radiation (p=0,0002). From the result we can make
conclusion that higher of AgNOR value is more responsive to radiation after one week radiation and
reversely and even though the small sample of that include in this study we suggest AgNOR can be
used as one of proliferation marker to predict radiation response in cervical　carcinoma treated by
chemoradiotherapy and needed more study to know the relation between AgNOR and another factor
in cell cancer proliferation.
Key Word
: AgNOR, karsinoma sel skuamosa serviks, kemoradioterapi
I. PENDAHULUAN
1
Karsinoma sel skuamosa serviks
(kanker servik) merupakan salah satu tumor ganas yang
sering ditemukan di negara berkembang dengan tingkat sosiokonomi rendah.
datang dalam stadium lanjut sehingga diperlukan pengobatan
Penderita biasanya
radioterapi menggunakan radiasi
eksterna atau intrakaviter [1].
Radiosensitifitas sel
merupakan salah satu faktor penting dalam menentukan tingkat
responsife sel kanker terhadap radioterapi.
Pada dasarnya radiosensitifitas sel merupakan suatu
konsep yang berdasarkan atas derajat respon sel terhadap radiasi.
Radiosensitifitas sel dapat
dibedakan atas 2 jenis yakni, radiosensitifitas essensial dan radiosensitifitas kondisionil.
Radiosensitifitas essensial berdasarkan kepada kondisi inherent yakni kondisi yang dipengaruhi oleh
faktor internal sel itu sendiri, sedangkan radisensitifitas kondisional didasarkan pada faktor eksternal
misalnya dosis radiasi, status oksigen [2].
Dari penelitian secara klinis ditemukan adanya variasi yang luas dalam radiosensitifitas
tumor, baik pada tipe histologik yang sama apalagi pada sub tipe histologik berbeda. Tumor dengan
prosentase sel yang berproliferasi tinggi, merupakan tumor yang paling radiosensitif [3].
AgNOR merupakan salah satu cara penilaian proliferasi dengan
menghitung “nucleolar
organizer region” (NOR) yang merupakan lengkung DNA ribosom yang ditranskripsikan menjadi
RNA ribosomal dengan bantuan RNA polymerase. NOR terletak pada lengan pendek kromosom
akrosentrik (nomor 13,14,15,21 dan 22) pada manusia dan terlihat secara ultrastruktural berasosiasi
dengan komponen fibril pada fase interfase. NOR mengandung gen yang membentuk ribosomal 18s
dan 28s RNA, yang sangat vital untuk sintesis protein [3,4].
Baru-baru ini telah dilaporkan bahwa kuantitas dan distribusi AgNOR dapat mencerminkan
indeks prognosis yang baik untuk karsinoma usus besar, kanker payudara, dan kanker kandung kemih
dan kemungkinan merefleksikan derajat keganasan dan proliferasi pada karsinoma sel squamosa pada
karsinoma lidah, rongga mulut dan kolon [5].
Dari penelitian kami sebelumnya dijumpai adanya
kecendrungan sub histologik berkeratin menunjukkan rerata AgNOR yang lebih tinggi dibanding
yang tak berkeratin.
Aktivitas metabolisme sel berupa sintesis protein diduga berkaitan dengan
munculnya fase-fase pembelahan sel yang lebih sensitif terhadap radioterapi. Dari hasil penelitian ini
kami mengusulkan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui fungsi AgNOR, dan respon radioterapi
tumor baik melalui respon sementara atau setelah radioterapi untuk lebih memahami fungsi AgNOR
sebagai petanda proliferasi ataupun sebagai penanda aktivitas metabolisme sel.[6].
Dari penelitian Kurnia [7] karsinoma sel skuamosa serviks dengan nilai rerata AgNOR yang
lebih tinggi pra radioterapi akan lebih radiosensitif sel kankernya dibandingkan dengan nilai rerata
AgNOR yang lebih rendah paska radiasi komplet dengan mengelompokan derajat respon radiasinya
secara histopatologik menurut metoda Shimosato-Obushi. Penelitian yang dilakukan oleh Heber dkk
[8] menunjukkan selisih rerata AgNOR antara praradioterapi dan setelah fraksi pertama radioterapi
yang menunjukkan korelasi positif dengan kekambuhan kanker dalam satu tahun setelah radioterapi.
2
Sejauh ini belum ada publikasi yang menyatakan hubungan antara nilai rerata AgNOR , sub
tipe histologik dan derajat diferensiasi sel kanker serviks sebelum radioterapi dengan respon awal
radiasi yang diamati dengan nilai AgNOR pada pasien kanker serviks di Indonesia
Tujuan penelitian ini adalah mengetahui hubungan antara nilai AgNOR sebagai biomarker
sensitifitas sel tumor terhadap radiasi sebelum menjalani kemoradioterapi dengan, sub tipe histologik
(keratin dan non keratin) dan derajat diferensiasi sel pada penderita karsinoma sel squamosa serviks
dengan respon radiasi awal (setelah 1 minggu radiasi) yang diamati dengan nilai AgNOR
Diharapkan dari penelitian ini dapat ditemukan hubungan rerata nilai AgNOR dengan sub
tipe histologi keratin dan non keratin serta derajat diferensiasi kanker squamosa serviks di Indonesia
sebelum menerima kemoradioterapi dengan nilai AgNOR setelah menerima radiasi selama 1 minggu
II. TATA KERJA
Sediaan mikroskopik yang digunakan pada penelitian ini berasal dari 23 sampel biopsi
penderita karsinoma sel squamosa serviks (KSS) stadium lanjut lokal yang datang ke RSCM tahun
2005-2006 yang secara klinis terdiri dari stadium klinik IIB (sel tumor menyebar sampai
parametrium) dan IIIB (sel tumor telah mencapai dinding panggul/hidroneprosis atau gangguan fungsi
ginjal) sebelum dan setelah radiasi 1 minggu [9].
Gambaran histologiknya selanjutnya
dikelompokkan menurut sub tipe histologiknya (berkeratin dan non keratin) dan diferensiasi
dikelompokkan berdasarkan derajat diferensiasi baik (G1) bila ditemukan sel anaplastik sekitar
0-25%, sedang (G2) bila ditemukan sel anaplastik 25-50% dan buruk (G3) bila ditemukan sel
anaplastik 50-70% [10].
II.1 Pewarnaan AgNOR
Sampel biopsi diproses menjadi blok paraffin yang dipotong menjadi sediaan mikroskopik
dengan ketebalan 4 µm. Sediaan diletakkan pada objek glass untuk dideparafinisasi dengan xilol
sebanyak 2x. Dilakukan rehidrasi dengan alkohol 100 %, 90 %, 80 % dan terakhir dengan air.
Selanjutnya sediaan dideionisasi, masing-masing selama 5 menit,
kemudian
diwarnai dengan
pewarnaan AgNOR dengan cara membuat larutan perak koloidal, yang dibuat dari 2% bubuk gelatin
dalam air deionisasi pada ”waterbath” suhu 60 – 70oC. Kemudian ditambah asam formiat murni 1%.
Larutan ini dicampur dengan 50% perak nitrat dalam air deionisasi dengan perbandingan 1:2, dan
segera dipakai. Selanjutnya sediaan ditetesi dengan larutan perak nitrat koloidal yang disaring dengan
filter 0,22 µm milipore dan didiamkan selama 15 menit dan diinkubasi dalam larutan tiosulfat 5%
selama 2 menit. Preparat didehidrasi dengan alkohol bertingkat dengan konsentrasi 70 %, 80%, 90%
dan 100 %, kemudian dilakukan penjernihan dengan xilol sebanyak 2x, setelah preparat kering ditutup
dengan gelas penutup dan siap untuk dilakukan penghitungan AgNOR. Sebagai kontrol positif
digunakan sediaan kanker payudara dan kontrol negatif berupa sel darah putih [11]
II.2. Penghitungan Nilai AgNOR.
3
Penghitungan butir AgNOR dilakukan di bawah mikroskop secara acak dari 100 sel
menggunakan pembesaran 100x. Nilai AgNOR yang dihitung adalah mAgNOR yakni rerata AgNOR
dalam satu inti sel. Hasil perhitungan diuji secara statistik dengan t- test dengan tingkat kepercayaan 5
% (uji t p = 0,1) dan korelasi Spearman Test[12].
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
a. Korelasi antara antara nilai AgNOR sebelum dan setelah 1 minggu radiasi
K o r e la s i a n t a r a n ila i A g N O R s e b e lu m d a n s e t e la h 1 m in g g u r a d ia s i
7 .5
7 .0
6 .5
m AgN O R 1
6 .0
5 .5
5 .0
4 .5
4 .0
3 .5
3 .0
2 .0
2 .5
3 .0
3 .5
4 .0
4 .5
5 .0
5 .5
m AgNO R 2
Gambar 1. Korelasi antara nilai AgNOR sel kanker serviks sebelum dan setelah radiasi 1 minggu
K o r e la s i a n ta r a i A g N O R ( m A g N O R 1 ) s e b e lu m k e m o r a d i o te r a p i d a n p e n u r u r u a n n a y a s e te la h 1 m i n g g u r a d i a s i
7 .5
7 .0
6 .5
m AgN O R 1
6 .0
5 .5
5 .0
4 .5
4 .0
3 .5
3 .0
0 .0
0 .5
1 .0
1 .5
2 .0
p e nu ru n a n A gN O R
2 .5
3 .0
3 .5
Gambar 1. Korelasi antara nilai AgNOR sel kanker serviks sebelum dan penurunan AgNOR setelah radiasi 1
minggu
Dari Gambar 1 dan 2 di atas di atas terlihat makin tinggi nilai AgNOR sebelum menerima
kemoradioterapi maka makin besar pengurangan nilai AgNOR setelah menerima 1 minggu
4
kemoradioterapi. Pada Gambar 2a.(sel kanker sebelum menerima radiasi) terlihat nilai AgNOR yang
yang lebih besar dibanding nilai AgNOR selkanker serviks setelah 1 minggu radiasi (gambar 2.b) Hal
ini terkait dengan fungsi AgNOR sebagai marker proliferasi sel. Dengan makin tinggi nilai AgNOR
maka makin tinggi proliferasi sel kanker serviks sehingga akan lebih radiosensitif terhadap radiasi
dibanding dengan sel kanker yang nilai proliferasinya lebih rendah. Makin tinggi proliferasi sel maka
akan makin lebih besar dijumpai fase S (sintesis DNA) yang merupakan fase yang paling sensitif
terhadap radiasi.[2,3].
Kinoshita [13] jumlah AgNOR mereflesikan aktivitas sel kanker dan sejumlah peneliti
lainnya setuju bahwa fase proliferasi sel kanker merupakan bagian yang sensitif terhadap radiasi dan
obat anti kanker lainnya. Sebelumnya juga dikemukakan bahwa penurunan nilai AgNOR merupakan
efek biologis dari radiasi yang diamati secara eksperimental pada sel-sel epitel skuamosa hewan coba
[14].
Sebelumnya Babu [15],
adanya penurunan nilai AgNOR pada kanker oesopagus yang
menerima radioterapi sebelum operasi, sedangkan pada kanker endometrium dilaporkan adanya
penurunan nilai AgNOR pada radioterapi yang dilakukan pada kanker endometrium yang rekuren
[16].
Selanjutnya Scwint [7], derajat penurunan nilai AgNOR satu fraksi radiasi dapat dijadikan
sebagai cara untuk memprediksi efek radioterapi.
Gambar 3.a. AgNOR Sel kanker serviks sebelum radiasi. (5 x 100)
Gambar 3b. AgNOR Sel kanker serviks setelah 1 minggu radiasi (5 x 100)
b. Nilai AgNOR berdasarkan derajat diferensiasi sel kanker serviks sebelum menerima radiasi
Tabel 1. Nilai AgNOR karsinoma sel skuamosa serviks berdasarkan derajat diferensiasi
5
N
o
1
2
3
Derajat Diferensiasi
Nilai AgNOR
Jumlah Pasien
Baik
Menengah
Buruk
4,77±1.14 (3.14-6,79)
5.19±0.91(4.23-7.26)
4,35±1.06 (3.6-5,1)
10
11
2
Dari tabel 1 di atas terlihat nilai rerata AgNOR sel kanker yang diferensiasi menengah cenderung
lebih besar dibanding nilai AgNOR sel kanker yang derajat diferensiasi baik, namun nilai AgNOR
pada sel kanker yang derajat diferensiasi buruk lebih rendah dari nilai diferensiasi menengah dan baik.
Gambar 3a dan 3b, AgNOR karsinoma serviks kuamosa derajat diferensiasi baik cenderung lebih
besar dibanding AgNOR yang karsinoma serviks skuamosa derajat diferensiasi menengah yang
cenderung lebih kecil . Penelitian kami sebelumnya [6] ditemukan nilai AgNOR sel kanker serviks
skuamous derajat diferensiasi menengah (sedang) lebih tinggi dibanding sel kanker serviks skuamous
derajat diferensiasi baik.
Gambar 4a. Nilai AgNOR sel kanker serviks derajat diferensiasi baik. (5 x 100)
Gambar 4b. Nilai AgNOR sel kanker serviks derajat diferensiasi menengah (5 x 100)
Nilai rerata AgNOR pada lapisan basal dari epitel ektoserviks normal adalah 1 dalam 1
nukleus. Sedangkan pada penelitian yang dilakukan Xie-Xie menyatakan bahwa nilai mAgNOR
menunjukkan perbedaan yang bermakna antara epitel normal dan displasia serta antara displasia dan
karsinoma squamosa pada rongga mulut. Nilai mAgNOR tiga kasus displasia yang berkembang
menjadi ganas diatas rerata, nilai mAgNOR dari displasia yang tidak berkembang menjadi ganas.
Pada penderita
kanker yang mempunyai nilai mAgNOR lebih rendah mempunyai masa bebas
6
karsinoma lebih lama dibanding pasien yang mempunyai nilai mAgNORnya lebih tinggi setelah
menerima pengobatan [17,18].
Pengamatan yang dilakukan oleh Manu dkk [19] AgNOR pada sel kumosa pada bagian atas
bahwa pada sel yang derajat diferensiasi menengah dan buruk cenderung iregular dan lebih tersebar
pada nukleus. Sejauh ini belum ditemukan informasi yang memberikan faktor yang menyebabkan
perbedaan bentuk AgNOR pada sel kanker dengan derajat diferensiasi berbeda tersebut.
Derajat diferensiasi secara umum berhubungan dengan tingkat keganasan dan proliferasi sel,
sehingga tumor yang derajat diferensiasinya buruk akan mempunyai tingkat proliferasi yang lebih
tinggi yang tercermin dari nilai AgNOR yang lebih tinggi, sehingga akan bersifat lebih radiosensitif.
c. Nilai AgNOR karsinoma sel skuamosa serviks berdasarkan sub tipe histologi Keratin dan non
Keratin
Tabel 2. Nilai AgNOR berdasarkan sub tipe histologi sebelum menerima kemoradioterapi
No Sub tipe histologi
Nilai rerata AgNOR
n(jumlah pasien)
1
Berkeratin
4.68±0.71(3,26-5.47)
11
2
Non Keratin
5,17±1,22(3.14- 7.26)
12
Ns: tidak berbeda student t nyata, p hitung 0,3 > p value p=0,1
Keratin merupakan jenis protein yang dijumpai pada epitel dari sel tumor dan merupakan
salah satu penanda untuk transformasi ”malignant” pada. Selanjutnya keberadaan keratin dijadikan
sebagai salah satu subtipe histologik pada karsinoma sel skuamosa serviks.
Pada penelitian ini tidak seperti publikasi sebelumnya tidak ditemukan perbedaan antara nilai
rerata AgNOR pada sub tipe histologik KSS berkeratin dan non keratin dan secara statistik. Pada
publikasi sebelumya rerata nilai AgNOR KSS berkeratin lebih tinggi dari KSS non keratin.
Kemungkinan nilai rerata AgNOR yang lebig tinggi menampilkan sintesis protein yang terkait dengan
proliferasi sel, bukan yang terkait dengan sintesis protein yang terkait dengan keratinisasi pada epitel
sel kanker serviks. Nucleolar Organizer Region yang diamati dengan AgNOR merupakan 2 protein
yang berperan biogenesis ribosom (Nucleolin dan B23). Nucleolin dan B23 ini bereparan dalam
reaksi dalam fase interfase siklus sel [ 20,21].
Kecepatan biosintesis ribosom secara lanngsung
berhubungan dengan aktivitas RNA polimerase 1 yang juga merupakan salah satu komponen protein
AgNOR [22,23].
IV. KESIMPULAN DAN SARAN
Dari hasil dan pembahasan di atas dapat disimpulkan bahwa, setelah 1 minggu kemoradiasi terjadi
penurunan nilai rerata AgNOR, ditemukan korelasi positif antara nilai AgNOR sebelum
kemoradioterapi dengan nilai AgNOR setelah 1 minggu kemoradioterapi. Makin tinggi nilai AgNOR
sebelum radiasi makin lebih besar penurunannya setelah 1 mingggu kemoradioterapi.
Sebelum
kemoradioterapi juga ditemukan nilai AgNOR sel kanker derajat diferensiasi menengah lebih tinggi
dibanding sel kanker derajat diferensiasi baik.
Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui
7
hubungan antara fungsi AgNOR dan faktor terkait proliferasi sel lainnya dalam rangka memahami
penurunan AgNOR sebagai respon setelah 1 minggi kemoradioterapi.
DAFTAR PUSTAKA.
1. MARCIAL VA, MARCIAL, LV. Radiation Therapy of Cervical Cancer Supplement
Feb, 1993.
2. CASARET TGW. Radiation Histopathology, Vol 1, CRP. Press, Florida;1980:30 -31.
3. TUBIANA M, JEAN D, ANDRE W. Introduction to Radiobiology, Taylor Francis,
: 385 – 395. 1990
4. SORENTINO V, IN LEWIS. Cell proliferation in cancer regulatory mechanism of
neoplastic cell growth, Oxford University Press, Oxford, 1996.
5. CHEN M, LEE JG, LO S, SHEN J. Argyrophilic nuclear Organizer regions in naso
pharyngeal carcinoma and paraneoplastic epithelial head and neck. 25 (5) 395-399, 2003.
6. YANTI L, , NURHAYATI S, KURNIA I, BUDININGSIH S. Penggunaan AgNOR
sebagai Biomarker Sensitivitas Radiasi pada Kanker Serviks, Prosiding Seminar Nasional
Keselamatan, Kesehatan, dan Lingkungan II, PTKMR Badan Tenaga Nuklir Nasional,
Jakarta, 2006.
7. KURNIA, I. Hubungan Nilai AgNOR Derajat Respon Radiasi Secara Histopatologik
Karsinoma Serviks Uteri Stadium Lanjut Lokal, Tesis Magister Program Studi
Biomedik, Kekhususan Patobiologi, Program Pascasarjana Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia, Jakarta, 2002
8. HEBER E, AMANDA ES, BEATRZ S, SUSANA N, OSVALDO S, MIGUEL
B,MARIA EI. AgNORs as an early marker of sensitivity to radiotherapy in gynecology
Cancer, The International of Academy of Cytology Acta Oncologyca, Vol 46;2 :
311-316.2004
9. BENEDET, JL.DKK Carcinoma cervix uteri, Journal of Epidemiology ang Biostatistic,
6(1)7-9:2001
10. RUBIN, P. Clinical Oncology, A Multidisciplinary Approach for Physicians and
Students,8 th edition (CD Room Version)
11. CROCKER J, BOLDY AR, EGAN MJ; How should we count AgNORs? Proposals for
standardized approach. J Pathol;158:185-188;1989.
12. WAYNE WD. Biostatistics: A Foundation for analysis in the health sciences, Wiley
Series in Probability and Matahematical Statistics-Applied;1991:191-227
13. KINOSHITA, Y, DOHI M, MIZUTANI N, IKEDA A. Effects of preoparative radiation
and chemotherapy on AgNOR counts in oral squamous sell carcinoma, J Oral Maxillofac
Surg 1996;54: 304 – 307.
14. SCHWINT AE, GOMEZ E, ITOIZ ME, CABRINI RL. Nucleoral Organizer Region as
marker of
incipient cellular alteration in squamous epithelium, J Dent Res
1993;72:1233-1236.
15. BABU M, MATHUR M GUPTA SD, CAHTTOPADHYAY T, Prognostic significance
of argyrophililic nucleolar organizer regions (AgNOR) in oesophageal cancer. Trop
Gastroenterol 1996; 17:57 – 60.
16. MILLER B, MORRIS M, SILVA E. Nucleolar Organizer Region: A potential prognostic
factor in adenicarcinoma of endometrium. Gynecol Oncol 1994;54:137-141.
17. XIE-XIE Diagnostic and prognostic Value of Nucleolar Organizer Regions in Normal
Epithelium, Dysplasia, and Squamous Cell Carcinoma of the Oral Cavity. American
Cancer Society Vol 79, Number 11 Vol 79, 1997
18. MARBAIX, E, DEMANDELEER, S HABBA, CL LIEGEOIS, PH. WILLEMS,T.
RAHIER,J. AND DONNEZ,J. Nucleolar Organizer Regions in the Normal and
Carcinomatous Epithelium of the Uterine Cervix. International J Gynecol Pathol:
1989:237- 245
19. MANU SCV, RAJARAM BT, RAI RG. Value of silver binding Nucleolar Organizer
Regions (AgNOR) in squamous cell carcinomas of upper aero-digestive tract, MJAFI:
2006;62:123-128.
8
20. TUTEJA R, TUTEJA. Nucleolin a multifunctional mayor nucleolar phosphoprotein. Crit
Rev Biochem Mol Biol;1998;33:407-436.
21. ROUSSEL P, HERNANDES V. Identification of AgNORs protein, marker of
proliferation related to gene activity. Exp Cell Res;1994;214:465-472.
22. DERENZINI M, TRERE D, PESSION A, MONTANARO L,SIRRI V.CHIECO P.
Nucleolar size indicate the rapidity of cell proliferation in cancer tissue.J Pathol
2000;191: 181-186.
23. ALBERT. B, BRAD D, LEWIS J, RAFF M, WATSON JD, Molecular Biology of the
Cell. Gardland New York, 379-383, 1995
9
1