PEMERIKSAAN DAN INTERPRETASI ANTI HIV DAN LIMFOSIT CD4 dr. Merci M Pasaribu, SpPK dr. Dewi Wulandari, SpPK, MSc OUTLINE PENDAHULUAN PERJALANAN PENYAKIT INFEKSI HIV PEMERIKSAAN PENYARING ANTI HIV DAN INTERPRETASINYA PEMERIKSAAN KONFIRMASI ANTI HIV DAN INTERPRETASINYA PEMERIKSAAN LIMFOSIT CD4 DAN INTERPRETASINYA PENDAHULUAN PENDAHULUAN WHO-SEARO 2007 PERJALANAN INFEKSI HIV PEMERIKSAAN PENYARING ANTI HIV DAN INTERPRETASINYA PEMERIKSAAN PENYARING ANTI HIV WORLD HEALTH ORGANIZATION (WHO) PEMILIHAN PEMERIKSAAN DAN ANTI HIV 1.UNITED Tujuan NATION PROGRAM ON HIV/AIDS (UNAIDS) -Skrining darah donor/transplantasi organ -Survailans MEREKOMENDASIKAN -Diagnosis 3 strategi pemeriksaan HIV 2. Sensitifitas dan spesifisitas SEHINGGA 3. PrevalensiDIDAPAT infeksi HIV TES di DENGAN populasi SENSITIVITAS DAN SPESIFISITAS TINGGI DENGAN BIAYA RENDAH WHO 2001 3 STRATEGI PEMERIKSAAN ANTI HIV Penegakkan Diagnosis di Indonesia PERMENKES RI NO 15 TAHUN 2015 PENEGAKKAN DIAGNOSIS HIV STRATEGI III 3 PEMERIKSAAN, METODA BERBEDA RAPID ATAU EIA Hasil Tes Rapid (Imunokromatografi) Terdapat pita pada C (Control) dan T (Test/sampel) Hasil Reaktif Reaktif Non Reaktif HAL PENTING KETEBALAN PITA WAKTU PEMBACAAN https://www.google.co.id/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwj3q5jJvsPQAhUIP48KHS 6AATUQjRwIBw&url=http%3A%2F%2Fwww.tradeindia.com%2Ffp1499085%2FHIV-1-2-AIDS-RapidTest.html&psig=AFQjCNG9spbnT98QcBcobVsx4j4xPhv4Ow&ust=1480148924518591 Hasil Tes Rapid (Aglutinasi) Terdapat aglutinasi pada sumur Hasil Reaktif HAL PENTING EFEK PROZONE!! https://www.google.co.id/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwj3q5jJvsPQAhUIP48KHS 6AATUQjRwIBw&url=http%3A%2F%2Fwww.tradeindia.com%2Ffp1499085%2FHIV-1-2-AIDS-RapidTest.html&psig=AFQjCNG9spbnT98QcBcobVsx4j4xPhv4Ow&ust=1480148924518591 Hasil Tes ELISA (Enzim Link Immunoassay) https://www.google.com/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwia08yMrMPQAhUMqo8KHfnxB_gQjRwIBw&url=https%3A%2F%2Flife scienceproduct.wordpress.com%2F2013%2F07%2F17%2Fprocess-for-the-elisa-test-elisa-hiv-test-advantages-of-the-elisatest%2F&bvm=bv.139782543,d.c2I&psig=AFQjCNHjWmK6rpQEwgY7o_8wesndBA6DXA&ust=1480143962858074 Pemilihan Reagensia PERMENKES NO 15 TAHUN 2015 BAGAIMANA MELAKUKAN KETIGA PEMERIKSAAN METODA I METODA I METODA II METODA II METODA III HASIL HASIL METODA III Alur Pemeriksaan anti HIV Alur Pemeriksaan anti HIV Alur Pemeriksaan anti HIV Alur Pemeriksaan anti HIV Interpretasi Pemeriksaan Penyaring Anti HIV Interpretasi Pemeriksaan Penyaring Anti HIV TINDAK LANJUT HASIL INDETERMINATE: • ULANG PEMERIKSAAN MINIMAL 2 MINGGU • JIKA MEMUNGKINKAN VIRAL LOAD • PENGULANGAN PEMERIKSAAN ANTI HIV BERKALA (3,6, 12 BULAN) HASIL NON REAKTIF DAN TIDAK MEMILIKI RISIKO NEGATIF PEMERIKSAAN KONFIRMASI ANTI HIV (WESTERN BLOT) DAN INTERPRETASINYA Teknik Western Blot 1. Pembuatan strip berisi antigen – Home made atau siap pakai (komersial) – Prinsip : denaturasi protein virus HIV untuk mendapatkan antigen virus HIV elektroforesis sehingga protein terkumpul di lokasi sesuai BM transfer ke membran selulosa 2. Deteksi Antibodi – Reaksi antibodi (serum) terhadap Antigen di strip 3. Pembacaan Hasil Western- Blot Molekul HIV ENV=ENVELOPE GAG=GROUP OF ANTIGEN POL= (POLIMERASE) REVERSE TRANSKRIPTASE Kriteria Positif Interpretasi Hasil PEMERIKSAAN LIMFOSIT CD4 DAN INTERPRETASINYA Molekul CD4 • Virus HIV adalah virus yang menyerang terutama sel-sel imun. • Molekul CD4 adalah molekul yang ada dipermukaan sel yang menjadi perantara masuknya virus HIV ke dalam sel imun. • Molekul CD4 ditemukan pada sel-sel imun : limfosit T helper, makrofag, monosit Limfosit T CD4 • = Sel T penolong (T helper) • Limfosit T CD4 merupakan sel terpenting dalam regulasi fungsi imun. • Merupakan target utama virus HIV. • Infeksi HIV akan menyebabkan destruksi limfosit T CD4 hilangnya fungsi imun pada tahap AIDS Peran Sentral Limfosit T CD4 Limfosit T CD4 pada Infeksi HIV • HIV viral load progresi penyakit. • Pemeriksaan HIV viral load masih dianggap cukup mahal hitung sel CD4 dapat dianggap sebagai indikator utama inisiasi dan pemantauan terapi ART • Hitung sel T CD4 indikator respons terapi ART Limfosit T CD4 pada Terapi Anti-Retroviral Rekomendasi WHO 2007: Inisiasi terapi ART: • Pasien dengan hitung sel T CD4 200-350 sel/ul • Pasien dengan TB paru atau infeksi berat dengan CD4 < 350 sel/ul • Wanita hamil dengan penyakit stadium 3 Rekomendasi WHO 2013: Inisiasi terapi ART : CD4 < 500 sel/ul Hitung Sel T CD4 pada Pasien Pediatri • Normal : hitung limfosit anak > dewasa • Nilai normal tergantung dari usia Pemilihan Metode Pemeriksaan • • • • • • • • • Keperluan pemeriksaan (monitoring vs riset) Kelompok umur pasien (dewasa vs anak) Jumlah sample per hari Ketersediaan tenaga terlatih Ketersediaan suplai listrik dan tempat Lokasi (kota besar, layanan kesehatan primer) Ketersediaan suport teknis & reagensia Waktu antara sampling dan pemeriksaan Harga Metode Pemeriksaan Limfosit T CD4 • Flow Cytometry – Standard : FACS Calibur (BD), Cytomic FC 500 (Beckman-Coulter), Cyflow (Partec) – Modified : FACS Count (BD), Milipore (Guava), MiniCyflow (Partec) • Alternatif / POCT : – PointCare NOW™ (PointCare Technologies, Inc.) – PIMA CD4 Analyzer (Alere) – CyFlow® CD4 miniPOC (Partec GmbH) Flow Cytometry • Gold standard untuk hitung sel T CD4 • Metode pilihan jika jumlah sample/hari memadai. • Prinsip : berdasarkan biasan cahaya, dan fluorensensi menggunakan antibodi monoklonal. • Hasil yang diperoleh : hitung absolut (sel/ul) & relatif (%) Prinsip Pemeriksaan Flow-Cytometry Hasil Pemeriksaan Flow-Cytometry FACSCount (BD) system • Microbeads system • No-lyse no wash system • Ready-to-use reagent • Hitung absolut CD4 Guava System • Microcapilar system • Hitung absolut Partec System • Hitung absolut • Sumber listrik : baterai PointCare NOW™ (PointCare Technologies, Inc.) • POCT • Hasil : absolut & relatif • Belum ada publikasi mengenai evaluasinya PIMA CD4 Analyzer (Alere) • POCT, bench top • Reagen kering -cartridge • Hasil : absolut • Sample : darah vena atau kapiler • Penghitungan CD4 berdasarkan imaging • POCT yang tervalidasi CyFlow® CD4 miniPOC (Partec GmbH) • Menggunakan prinsip flow cytometry • Reagen kering • Hasil : absolut & relatif • Hingga 250 sample/hari • Belum ada publikasi validasinya
