Vaksinasi neonatal anak sapi kekurangan kolostrum terhadap
advertisement
Vaksinasi neonatal anak sapi kekurangan kolostrum terhadap Pasteurella haemolytica Al Abstrak Sapi kekurangan Kolostrum Holstein divaksinasi pada usia minggu ke 2 dan 4 dengan Pasteurella haemolytica Al kultur vaksin supernatan untuk menentukan apakah respon imun yang aktif dan perlindungan dapat diinduksi dalam kelompok usia ini dengan tidak adanya antibodi maternal. Semua anak sapi merespon vaksinasi dengan titer tinggi dari antibodi IgM terhadap polisakarida kapsul dalam 1 minggu vaksinasi primer. Rata-rata titer antibodi IgGl dan IgG2 terhadap antigen ini meningkat secara signifikan dalam 2 minggu setelah vaksinasi sekunder , namun puncak titer antibodi rendah. Semua anak sapi yang terinfeksi divaksinasi dengan produksi antibodi leukotoxinneutralizing , tetapi titer antibodi puncak rendah. Anak sapi yang divaksinasi mengalami kerusakan paru-paru yang cukup setelah tantangan eksperimental, namun tingkat kelangsungan hidup, skor klinis, dan keterlibatan persen paru-paru secara signifikan lebih baik dibandingkan kontrol (Plasebo-disuntikkan) betis. Introduction Pada hewan dan manusia, beberapa bulan pertama kehidupan adalah waktu meningkat kerentanan terhadap penyakit menular. Resistensi terhadap organisme patogen tergantung pada tingkat besar pada antibodi pasif yang ditransfer dari ibu baik ataupuntransplacental (manusia) atau melalui kolostrum (ruminansia, (quines). tingkat Serum antibodi pasif terhadap patogen tertentu dapat sangat bervariasi, Namun, dan juga penurunan dengan usia. Oleh karena itu, diinginkan untuk menginduksi imunitas aktif pada usia dini, dalam rangka untuk melindungi individu yang memiliki tingkat optimal antibodi pasif, dan untuk menyediakan kelangsungan ketahanan terhadap penyakit sebagai perlindungan pasif berkelanjutan Sayangnya, imunisasi aktif pada neonates terkadang rumit karena efek imunosupresif dari antibody pasifi (1-4), dan juga oleh ketidakmatangan sistem kekebalan tubuh (5,6). Antigen karbohidrat khususnya sering tidak imunogenik di hewan muda, atau hanya berfungsi sebagai timus- antigen independen (Tipe 2), menginduksi didominasi respons IgM dengan sedikit bukti memori kekebalan tubuh (7). Imunogenisitas antigen polisakarida kapsular bakteri yang berbeda – beda dapat bervariasi secara luas di bulan pertama kehidupan (8). Karya terbaru di laboratorium telah difokuskan pada tanggapan kekebalan aktif terhadap antigen Pasteurella haemolytica Al dalam susu muda sapi (9). Ketertarikan telah berpusat pada respon imun untuk kapsuler polisakarida dan leukotoxin dari bakteri ini, sebagai tanggapan terhadap antigen tersebut (dalam berbagai persiapan vaksin dengan tepat adjuvant) telah dikaitkan dengan resistensi terhadap tantangan eksperimental (10-14). Dalam penelitian kami, biasanya 50% atau lebih dari anak sapi divaksinasi dengan kultur vaksin supernatan pada 2 dan 4 minggu dari usia serokonversi dengan antibodi IgM terhadap polisakarida kapsuler organisme, namun serokonversi dengan antibodIgGl atau IgG2 i atau dengan antibodi -menetralkan leukotoxin adalah jarang(9). Jadi, neonatal kolostrum-makandengan antibody maternal menunjukkan tingkat rendah tanggap kebal terhadap antigen. bagaimanapun Tidak jelas, untuk apa tingkatan tanggapan kekurangan antibody maternal ini dirugikan karena ketidakmatangan fungsi kekebalan tubuh. Dari sudut pandang praktis, respon imun neonatus dengan tingkat terendah antibodi maternal adalah hal yang paling penting, untuk ini adalah individu yang paling rentan terhadap penyakit dan juga merupakan individu yang paling mungkin untuk merespon vaksinasi. Sebelumnya Townsend et al (15) melaporkan produksi antibodi untuk kapsuler polisakarida di neonatal sapi kekurangan kolostrum yang divaksinasi dengan P. haemolytica Al yang hidup. Respon imun dari sapi muda untuk polisakarida kapsuler larut, tidak dapat diasumsikan menjadi serupa, namun, sebagai antigen polisakarida dapat bertindak sebagai antigen thymus dependent ketika berada pada organisme utuh (16). Hasil kerja terbaru dilakukan untuk memperjelas potensi muda sapi untuk merespon kekebalannya terhadap polisakarida kapsuler dan leukotoxin P. haemolytica Al dalam vaksin supernatan kultur , dengan tidak adanya antibodi maternal, dan untuk menilai vaksin perlindungan induksi Table 1. penilaian tanda klinis Tanda klinis Batuk Depresi Disspnea Demam Nasal discharge Susu lemah skor maksimum harian untuk anak sapi hidup = 7,0 sapi mati atau eutanasia b diberi skor 8,0 pada hari kematian dan keseimbangan 5 d Material dan Metode anak sapi Holstein yang baru lahir dipisahkan dari tempat kumpulan mereka dengan segera setelah lahir, untuk mencegah konsumsi kolostrum, dan segera diangkut dalam satu jam ke fasilitas isolasi di Ontario Veterinary College. kontak langsung dengan bendungan tidak diizinkan,dan sapi diangkut dalam kendaraan yang tertentu yang tidak digunakan untuk ternak lainnya, dalam maksud untuk meminimalkan kontak dengan P. haemolytica dan patogen ternak lainnya. Tidak ada produk susu atau susu dimakan untuk 48 jam pertama untuk mencegah penyerapan antibodi;pengganti susu komersial diberi makan setelah 48 jam pada tingkat yang ditetapkan (Gro-kanan II, Grober, Cambridge, Ontario), dan betis perdana pelet (Serikat Koperasi Ontario) diberikan setelah usia 1 minggu. Antibiotik (ceftiofur natrium, 6 mg / kg uid, Upjohn Hewan Kesehatan, Orangeville, Ontario, dan gentamisin, 8 mg / kg UID, Schering-Plough Animal Health, Pointe-Claire, Quebec) diberikan profilaksis pada hari 10 pertama kehidupan. Sebanyak 14 anak sapi yang digunakan dalam percobaan.sapi itu dijaga di ruang isolasi individu; karena persediaan ruang isolasi terbatas baik dan anak sapi kekurangan kolostrum, hewan diuji coba berpasangan, setiap pasangan merupakan 1 blok eksperimental. Dalam masing-masing pasangan, betis secara acak dialokasikan untuk menerima fase logaritmik baik vaksin supernatan kultur (Presponse, Langford Inc, Guelph, Ontario), pada dosis standar 2 mL, atau persiapan plasebo yang mengandung ajuvan, tetapi tidak ada antigen, pada usia 2 dan 4 minggu. Sampel darah dikumpulkan per minggu sampai tantangan eksperimental. Ab - antibodi; CP - polisakarida kapsuler a Serokonversi didefinisikan sebagai peningkatan 4 kali lipat (2 log2 unit) dalam antibodi titer antara usia 2 dan 4 minggu, atau antara 2 dan 6 minggu b sapi menerima plasebo pada usia 2 dan 4 minggu c sapi divaksinasi pada usia 2 dan 4 minggu d data dinyatakan sebagai jumlah anak sapi seroconverting total /sapi e Perbedaan antara sapi yang menerima vaksin dan plasebo signifikan, uji eksak Fisher Ketika sapi muda dalam setiap blok berusia 6 minggu, sapi ditantang secara intrabronchially dengan fase logaritmik P. haemolytica Al (ATCC 43270). Kultur Kaldu infus otak-jantung diinkubasi pada suhu 37 ° C untuk suatu densitas optik 1,1 di 525 nm (Sekitar 6 jam inkubasi). Kultur kemudian disentrifugasi pada 000 x 10 g selama 15 menit, dan diresuspen ( di hentikan cabut/tutup) dalam hosphate-buffered saline (PBS; 30 mL PBS untuk masing-masing 500 ml kaldu budaya). jumlah bakteri yang layak Retrospektif dilakukan untuk setiap tantangan kultur. Sapi dibius dengan hidroklorida xylazine (AnaSed; Lloyd Laboratorium, Shenandoah, Iowa, USA) 0,25 mg / kg. Dengan binatang yang sudah tidak berdaya, sebuah kateter bore baik dimasukkan melalui jarum 14-gauge yang dimasukkan melalui dinding trakea, dan sekitar 1 X 1011 P. haemolytica, dalam 15 mL PBS, yang diresapi. Tanda-tanda klinis dicatat setiap hari sampai hari ke-6 teraklhir challenge, dan skor klinis dihitung setelah metode Conlon dan Shewen (17), dengan modifikasi (Tabel I). Sapi yang mengalami gangguan pernapasan sedang hingga berat dibunuh segera dengan alasan kemanusiaan. Anak sapi yang masih hidup dibunuh paksa pada hari ke-6 pasca-tantangan. Paru-paru dari semua anak sapi dinilai pada pemeriksaan post mortem untuk keterlibatan persen paruparu setelah metode Yerikho dan Langford (18). Serologi Sampel serum diuji untuk menetralkan antibodi leukotoxin P. haemolytica aru-paru h pada nggu usia ia dan plasebo an menggunakan tes kolorimetri Greer dan Shewen (19). Secara singkat, serial 2 kali lipat pengenceran serum diinkubasi selama 30 menit dengan supernatan kultur dari budaya fase logaritmik P. haemolytica Al, sebelum ditambahkan ke sapi yang dikulturkan limfoid (BL) sel -3 (BL-3 garis diberikan oleh Dr G. Theilan, University of California, Davis, California, Amerika Serikat). pengenceran serum tertinggi yang dilindungi setidaknya 50% dari sel-sel dari efek beracun, yang diukur dengan penyerapan pewarna penting, merah netral, ditetapkan titik akhir yang positif. Titer dinyatakan sebagai log2 dari timbal balik dari dilusi titik akhir. Antibodi dari isotipe IgGl yang mengikat polisakarida kapsuler P. haemolytica Al diuji menggunakan enzim immunoassay seperti telah dijelaskan sebelumnya (9). Secara singkat, dimurnikan oleh kapsuler polisakarida P. haemolytica Al (20) (semacam hadiah dari Dr C. Adlam, Bioteknologi Selamat datang, Inggris), adalah dilapisi untuk sumur dari 96-juga piring mikro (Dimittis-Intermed, Roskilde, Denmark), 10 pg / baik di 100 0.06 penyangga pL M karbonat (PH 9.6), selama 2 jam pada 37 ° C Sampel serum diencerkan dalam blok solusi penyangga yang terdiri dari kulit ikan 0,5% gelatin (Norland Produk Inc, New Brunswick, New Jersey, Amerika Serikat), dan 0,05% Tween-20 (Sigma Chemical Co, St Louis, Missouri, USA) dalam PBS (pH 7,4), dan diuji dalam rangkap tiga. antibodi Terikat terdeteksi menggunakan antibodi monoklonal tikus terhadap sapi IgGl, 1 / 200 (Serotec, Stasiun Pendekatan, Kidlington, Oxfordshire, Inggris). Antibodi monoklonal dideteksi menggunakan fosfatase alkali-terkonjugasi kambing anti-mouse IgG H & L reagen 1 / 1000 (Caltag Laboratorium, San Francisco, California, Amerika Serikat). Aktivitas enzimatik diuji menggunakan p-nitrophenylphosphate (Kirkegaard & Perry Laboratorium, Gaithersburg, Maryland, Amerika Serikat), 1 mg / mL, dilarutkan dalam Diethanolamine buffer (pH 9,8). Kepadatan optik dari sumur dibaca di 405 nm. Titer antibodi ditentukan dengan metode Sack et al (14,21), dan dinyatakan pada skala log2. Kapsuler polisakarida yang mengikat antibodi isotipe IgG2 diuji seperti di atas, tetapi menggunakan antibodi monoklonal tikus untuk sapi IgG2, 1 / 100 (Serotec), di tempat antibodi monoklonal untuk IgGl sapi. Kapsuler Polisakarida mengikat antibodi IgM dari isotipe diuji seperti di atas tetapi menggunakan antibodi monoklonal tikus untuk IgM sapi, 1 / 2000 (Sigma Chemical Co) untuk mendeteksi antibodi terikat. Modifikasi lebih lanjut dilakukan untuk protokol untuk meminimalkan efek pengikatan nonspesifik IgM terhadap piring polystyrene Sebuah pemblokiran (2,0% gelatin kulit ikan dalam PBS, 200 pL / baik selama 1 jam pada 37 ° C) ditambahkan setelah piring dilapisi dengan antigen. Sampel serum diencerkan dalam larutan 1,5% Tween-20 dalam PBS (dengan 0,29 M NaCl). Selain itu, untuk masing-masing serum sampel, 3sumur kontrol yang tidak dilapisi dengan polisakarida digunakan untuk memantau sinyal latar belakang dalam ketiadaan antigen. Berarti densitas optik terhadap ikatan non-spesifik dikurangkan dari berarti densitas optik diamati dengan antigen, sebelum menghitung titer antibodi IgM seperti di atas. Metode statistik Data dianalisis menggunakan parametrik dan non-parametrik tes. Sebuah analisis prosedur varians (SAS Institute Inc, Cary, North Carolina, USA) digunakan untuk menilai efek dari vaksinasi (Mengendalikan untuk efek blok) pada titer serum antibodi pada setiap titik sampel waktu. Proporsi divaksinasi dan nonvaccinated sapi seroconverting (4 kali lipat atau kenaikan lebih besar dalam konsentrasi serum antibodi) dan proporsi tantangan hidup untuk lebih kurang 48 jam dibandingkan dengan menggunakan uji eksak Fisher. nilai Klinis dan persen keterlibatan paru sapi dalam vaksin dan kelompok plasebo dibandingkan dengan menggunakan jumlah peringkat Kruskal Wallis tes (1-tailed). Sebuah level signifikansi 0,05 yang digunakan menyeluruh Serologi Antibodi titer untuk leukotoxin, dan antibodi IgGl dan IgG2 untuk polisakarida kapsuler berada di bawah batas deteksi tes dalam serum yang dikumpulkan pada saat lahir, dan tetap tidak terdeteksi dalam penerima plasebo selama waktu percobaan. Satu sapi memiliki tingkat deteksi antibodi IgM segera setelah lahir. Antibodi titer meningkat di sapi yang divaksinasi dan secara signifikan lebih tinggi dari titer penerima plasebo pada usia 6 minggu dalam semua tes (Gambar 1 dan 2). Semua anak sapi yang divaksinasi menunjukkan serokonversi untuk leukotoxin pada usia 6 minggu, sedangkan 6 dari 7 terinfeksi dengan IgG1, dan 3 dari 7 dengan antibodi IgG2 polisakarida kapsuler (Tabel II). Tanggapan antibodi imunoglobulin M untuk polisakarida kapsuler (Gambar 2) patut dicatat. Semua 7 anak sapi yang divaksinasi menunjukkan serokonversi selama 1 minggu setelah vaksinasi primer, dengan berarti titer 11,76 (positif pada pengenceran - 1 / 3400). Selain itu, titer antibodi IgM anak sapi yang telah menerima plasebo meningkat secara bertahap pada usia 6 minggu; 6 dari 7 anak sapi telah terinfeksi pada umur ini (Tabel II). Tantangan Setelah tantangan eksperimental, semua penerima plasebo dan 3 dari vaksinasi yang menyerah, atau dibunuh karena alasan manusiawi, oleh 36 jam tantangan pasca. 4 anak sapi yang divaksinasi yang tersisa bertahan sampai akhir dari percobaan di 6 hari tantangan pasca . Perbedaan proporsi betis bertahan lebih dari 48 jam adalah signifikan (uji eksak Fisher, 1-tailed). skor Klinis (Tabel I), dan persen keterlibatan paru berbeda secara signifikan antara kelompok (Kruskal Wallis test, 1-tailed) (Tabel III). Gambar 1. Respon untuk vaksinasi, uji netralisasi leukotoxin. Anak sapi divaksinasi pada usia 2 dan 4 minggu dengan supernatan kultur vaksin, atau menerima persiapan plasebo. Titer dinyatakan pada sebuah log2 skala. Pada setiap titik waktu yang titer – titer utama berbeda secara signifikan (P c 0,05). anak sapi sekarat atau yang membutuhkan euthanasia (dimatikan/ dibunuh) sebelum 24 jam pasca tantangan memiliki edema interlobular ekstensif dari lobus paru-paru kiri dengan daerah hemoragik di beberapa individu. Buih yang cukup ada di dalam bronkus dan trakea anak sapi. Anak sapi sekarat atau yang membutuhkan euthanasia selama 2 hari setelah percobaan memiliki beberapa ratus mL cairan berwarna jerami di rongga dada kiri dengan deposit fibrin yang luas. Anak sapi yang bertahan sampai 6 hari pasca-tantangan memiliki adhesi dari area yang lebih besar atau lebih kecil dari permukaan paru kiri ke pleura parietalis . Cairan berwarnaJerami- itu sering diasingkan di tengah-tengah adhesi. paru-paru parenkim yang di kenakan dari lobus kiri di gabungkan untuk keras dalam tekstur pada saat ini, dengan area jaringan nekrotik. data perbandingan untuk persen paruparu disajikan pada Tabel III. Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam serum titer antibodi pra-tantangan atau pada percobaan dosis P. haemolytica antara anak sapi yang divaksinasi yang selamat dengan yang tidak divaksinasi (Tabel IV). pembahasaan Tingginya tingkat serokonversi terlihat pada anak sapi yang divaksinasi dalam studi ini, dengan produksi antibodi untuk kedua leukotoxin dan kapsuler polisakarida. Tinggi titer antibodi IgM terhadap polisakarida kapsuler dicapai 1 minggu setelah vaksinasi primer; berarti titers lebih dari 4 log2 unit, lebih tinggi dari titer rata-rata antibodi IgM dari yang divaksinasi, kolostrum sapi diberi makan dalam studi sebelumnya (9). Sebuah temuan tak terduga adalah produksi (titer rendah) antibodi IgM untuk polisakarida kapsuler, dengan 6 minggu usia, anak sapi ;penerima plasebo. Kultur swab faring dari semua anak sapi di penelitian ini, di berbagai titik waktu, gagal untuk mendeteksi adanya P. haemolytica (data tidak ditunjukkan). Silang dengan antibodi reaktif polisakarida kapsuler, P. haemolytica Al mungkin telah diinduksi berikut padda bakteri spesies lain; antigen enterobacterial umum memiliki kesamaan struktur (22) Gambar 2. Respon untuk vaksinasi, immunoassay enzim untuk IgM (A), IGGI (B) dan (C) IgG2 polisakarida kapsuler antibodi mengikat Pasteurella haemolytica Al. Anak sapi divaksinasi pada usia 2 dan 4 minggu dengan kultur vaksin supernatan, atau menerima plasebo persiapan. Titer yang diekspresikan pada skala log2. Sera negatif pada pengencerani 1 / 10 diberi titer satu setengah pengenceran ini untuk keperluan grafik dan analisis. Pada setiap titik waktu, titer dengan superscripts berbeda tidak sama secara signifikan (P <0,05). Titer dari antibodi IgGl dan IgG2 untuk polisakarida kapsuler dan leukotoxinmenetralkan antibodi yang diinduksi oleh vaksinasi yang jauh lebih rendah. titer serum antibodi Pra-tantangan dari anak sapi yang divaksinasi yang bertahan hidup tidak berbeda signifikan dari anak sapi yang divaksinasi yang tidak mampu bertahan dalam waktu 48 jam dari percobaan. Hal ini dimungkinkan bahwa antigen lain dari P. haemolytica Al, tidak teridentifikasi dalam eksperimant ini. mungkin telah berkontribusi untuk perlindungan (23), atau cellmediated tanggapan mungkin telah mempengaruhi proses patologis (24). Tabel IV. Perbandingan karakteristik preochallenge anak sapi yang masih hidup atau tidak divaksinasi bertahan melampaui 48 tantangan pasca-h... Data dinyatakan sebagai rata-rata (SEM) Koloni membentuk unit ditunjukkan pada skala log1o bAntibody titer dinyatakan pada skala log2 c Antibodi mengikat polisakarida kapsuler dari Pasteurella haemolytica Al d tidak ada perbedaan antara arti untuk sapi yang bertahan hidup dan non-hidup yang signifikan e Semua anak sapi yang masih hidup untuk 48 jam pasca-tantangan bertahan sampai penghentian percobaan di 6 tantangan pasca-d Pertanyaan yang muncul apakah kolostrum-makan konvensional , jika itu menghasilkan banyak antibodi didokumentasikan di sini, akan mengalami kenaikan titer yang cukup untuk diklasifikasikan sebagai seroconverting. mengacu pada titer antibodi pasif untuk leukotoxin dan IgGl antibodi terhadap polisakarida kapsuler ada dalam konvensional 2-minggu-sapi tua (9), itu menunjukkan bahwa, dalam banyak kasus, aktivitas antibodi yang lebih akan muncul dari bendungan dibandingkan dari respon aktif , dan peningkatan 4 kali lipat tidak akan jelas. Apakah ini menyiratkan bahwa sebenarnya sapi memiliki respon imun aktif pada antibodi maternal, tapi tidak terdeteksi karena rumitnya sifat tes serologi? Mungkin, tapi hanya jika tes tidak isotipe-spesifik. Kuantitas antibodi IgM yang diproduksi oleh kolostrum sapi-kekurangan dalam penelitian ini adalah dari cukup besarnya bahwa mereka harus terdeteksi dengan adanya IgM antibodi dari bendungan. Titer antibodi dari isotipe IgG2 yang diproduksi dari sapi yang kekurangan kolostrum juga harus terdeteksi jika hadir dalam sapi konvensional. Tanggapan antibodi yang signifikan untuk leukotoxin dicatat pada sapi yang kekurangan kolostrum, namun puncak titer antibodi relatif rendah dibandingkan dengan tanggapan historik di sapi yang lebih tua (17). van Donkersgoed et al (25) telah melaporkan respons antibodi yang signifikan untuk leukotoxin rekombinan (dengan 3 bulan usia) setelah vaksinasi konvensional daging sapi pada usia 3 dan 5 minggu. Perbandingan Hasilnya rumit dengan penggunaan sapi Holstein daripada sapi lain, dengan paparan terus-menerus binatang pada P. haemolytica, dengan menggunakan sistem tes yang sama sekali berbeda untuk mengukur titer antibodi, dan oleh perbedaan dalam penjadwalan vaksinasi dan sampel koleksi. Suatu hal yang penting adalah apakah vaksinasi anak sapi pada usia 2 dan 4 minggu, yang terbaik (tanpa adanya antibodi maternal?), menginduksi respon imun protektif. Tiga dari sapi divaksinasi mati dalam 36 jam tantangan, dan yang bertahan memiliki ekstensif lesi paru-paru pada pemeriksaan post mortem. Sebuah titik yang tidak boleh dilupakan adalah kerentanan ekstrim anaksapi di bawah usia 2 bulan untuk eksperimental, dan jumlah yang sangat tinggi P. haemolytica yang digunakan dalam prosedur tantangan. Vestweber dkk (26), telah melaporkan tanda-tanda klinis pneumonia pada 1 - untuk 3-minggu- sapi tua yang menerima P. haemolytica Al dalam jumlah yang sebanding dengan yang digunakan dalam percobaan ini. sapi yang kekurangan kolostrum dan kolostrum-makan anak sapi (dengan titer antibodi rendah untuk P. haemolytica) mati atau di eutanasia pada 24 jam pascatantangan dalam studi mereka. Dalam hal ini, tidak ada control sapi yang bertahan lebih dari 36 jam setelah tantangan; tingkat kelangsungan hidup anak sapi yang divaksinasi secara signifikan lebih baik. Hal ini bisa mengharapkan bahwa dalam kondisi alami , vaksinasi berhasil dari sapi yang tidak divaksinasi. Apa Implikasi yang studi ini bagi pengembangan vaksin yang lebih mujarab untuk digunakan pada anak sapi neonatal? Konfirmasi bahwa sapi dapat menghasilkan antibodi untuk kedua leukotoxin dan polisakarida kapsuler pada usia dini memberikan titik penting referensi. Selain itu, IgM tinggi dan IgGl relatif rendah dan tanggapan antibodi IgG2 untuk polisakarida kapsuler menunjukkan bahwa antigen ini bertindak sebagai antigen timus-independen; konjugasi untuk pembawa imunogenik akan modifikasi logis dalam rangka meningkatkan respon antibodi IgG dan meningkatkan memori (8). kesimpulannya, susu sapi Holstein dapat merespon kekebalannya ke polisakarida kapsuler dan ke leukotoxin dari P. haemolytica Al ketika divaksinasi dengan vaksin supernatan kultur pada usia 2 dan 4 minggu, dengan tidak adanya antibodi maternal. Respon antibodi rendah dalam magnitude, dengan pengecualian antibodi IgM terhadap polisakarida kapsuler. Setelah eksperiment antangan kelangsungan hidup, skor klinis dan keterlibatan persen paru-paru secara signifikan lebih baik bagi vaksinasi daripada kontrol (Plasebo-disuntikkan) hewan.
