plagiat merupakan tindakan tidak terpuji plagiat
advertisement
PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PENGARUH EKSTRAK ETANOLIK BUAH LABU AIR (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) PADA TIKUS JANTAN GALUR SPRAGUE DAWLEY YANG DIPEJANI DOKSORUBISIN HALAMAN JUDUL SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi Oleh : Reza Eka Putra NIM : 098114081 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PENGARUH EKSTRAK ETANOLIK BUAH LABU AIR (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) PADA TIKUS JANTAN GALUR SPRAGUE DAWLEY YANG DIPEJANI DOKSORUBISIN HALAMAN JUDUL SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi Oleh : Reza Eka Putra NIM : 098114081 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013 i PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI ii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI iii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI iv PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI HALAMAN PERSEMBAHAN “Serahkanlah perbuatanmu kepada Tuhan, maka terlaksanalah segala rencanamu.” Amsal 16 : 3 Choose your love, love your choice (EKM Kotabaru) Karya ini penulis persembahkan untuk… Tuhan Yesus Kristus atas limpahan berkat, penyertaan, dan cinta kasih-Nya sepanjang hidup ini. Orang tua saya, Bapak Rusdarmawan dan Ibu B. Istianangsih E., serta adik saya, Clara Dewi, serta seluruh keluarga besar atas segala doa dan dukungannya. Christine Herdyana Febrianti sebagai sahabat terkasih atas segala wujud kasih dan sayangnya. Keluarga besar Farmasi USD angkatan 2009 atas kebersamaannya. Fakultas Farmasi USD, Almamater saya. v PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PRAKATA Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Kasih atas segala berkat dan karyaNya yang melimpah, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi berjudul “Pengaruh Ekstrak Etanolik Buah Labu Air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) pada Tikus Jantan Galur Sprague Dawley yang Dipejani Doksorubisin” dengan lancar dan baik. Skripsi ini dibuat sebagai salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) pada program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam pelaksanaan dan penyusunan skripsi ini, tidak terlepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt selaku Dekan Fakutas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta atas tuntunan dan bimbingannya selama menempuh pendidikan S1 di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 2. Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt selaku Dosen Pembimbing Utama skripsi ini atas segala kesabaran dalam memberikan bimbingan, pengarahan, dukungan, dan motivasi selama penelitian dan penyusunan skripsi. 3. Ibu Agustina Setiawati, S. Farm., Apt, M.Sc selaku Dosen Pembimbing Pendamping skripsi ini atas segala ilmu yang telah diberikan, bimbingan, pengarahan, dan motivasi selama penelitian dan penyusunan skripsi. vi PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 4. Ibu Phebe Hendra M.Si., Apt. Ph.D selaku Dosen Penguji skripsi yang telah banyak memberikan masukan, saran, dan bimbingannya. 5. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt selaku Dosen Penguji skripsi yang telah banyak memberikan masukan, saran, dan bimbingannya. 6. Ibu Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin atas penggunaan fasilitas laboratorium demi kepentingan penelitian skripsi ini. 7. Kepala Instalasi Kanker ―TULIP‖ Rumah Sakit dr. Sarjidto Yogyakarta atas bantuannya dalam mendapatkan bahan penelitian berupa doksorubisin. 8. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP., Ph.D, atas segala bantuan dan diskusinya dalam hal pembacaan preparat histopatologi. 9. Drh. Ari, Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Kayat, dan Mas Ratijo yang telah banyak membantu dalam hal-hal teknis di laboratorium selama penelitian ini. 10. Teman-teman seperjuangan ―Labu Air‖, Joseph Singgih Dwilaksono, Maria Larizza Handoyo, dan Vincentia Adelina Haryanto atas segala kerjasama, waktu, suka, duka, kebersamaan, dan perjuangan dalam menyelesaikan penelitian ini sampai selesai. 11. Sahabat-sahabat terkasih, Christine Herdyana, Joseph Singgih Dwilaksono, Maria Larizza Handoyo, Vincentia Adelina Haryanto, Johanes Putra, David Candra Putra, Yulio Nur Aji, Melisa Silvia, Raras Pramudita, Lucia Shinta, Jati Panantya, Otniel Sanjaya, Evy Fenni, Dina vii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI viii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ............................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................. ii HALAMAN PENGESAHAN……………………… .......................................... iii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................. iv HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv PRAKATA ......................................................................................................... vi DAFTAR ISI ..................................................................................................... iix DAFTAR TABEL ............................................................................................. xii DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xiii DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xiv INTISARI .......................................................................................................... xv ABSTRACT ....................................................................................................... xvi BAB I. PENGANTAR ......................................................................................... 1 A. Latar Belakang ............................................................................................. 1 1. Perumusan masalah ................................................................................... 4 2. Keaslian penelitian .................................................................................... 4 3. Manfaat penelitian..................................................................................... 6 B. Tujuan Penelitian .......................................................................................... 6 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA .................................................................. 8 ix PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI A. Kanker ...................................................................................................... 8 B. Doksorubisin ........................................................................................... 10 C. Labu Air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) ...................................... 14 1. Klasifikasi taksonomi ........................................................................... 15 2. Kandungan kimia .................................................................................. 16 D. Aspartate Aminotransferase (AST) .......................................................... 16 E. Landasan Teori.…………………………………………………………...18 F. Hipotesis ................................................................................................. 19 BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................... 20 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .................................................................. 20 B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .............................................. 20 C. Bahan Penelitian ......................................................................................... 22 D. Alat Penelitian ............................................................................................ 23 E. Tata Cara Penelitian .................................................................................... 24 1. Determinasi buah Lagenaria siceraria .................................................... 24 2. Pembuatan ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria ............................. 24 3. Pembuatan sediaan ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria ................ 25 4. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1% ............................................. 26 5. Uji pendahuluan ...................................................................................... 26 a. Penetapan dosis doksorubisin penyebab kerusakan jantung ............................ 26 x PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI b. Penetapan waktu pencuplikan darah ............................................................... 26 F. 6. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji ................................................ 27 7. Pembuatan serum .................................................................................... 28 8. Pengukuran kadar serum AST ................................................................. 28 9. Pembuatan preparat histopatologi jantung ............................................... 28 Analisis Hasil ............................................................................................. 29 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 31 A. Hasil Determinasi Tanaman ........................................................................ 31 B. Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Lagenaria siceraria ................................. 32 C. Pembuatan Sediaan Ekstrak Buah Lagenaria siceraria ............................... 34 D. Penetapan Dosis Doksorubisin Penyebab Kerusakan Jantung ..................... 34 E. Penetapan Waktu Pencuplikan Darah .......................................................... 35 F. Pengaruh Ekstrak Etanol Buah Lagenaria siceraria pada Tikus Galur Sprague Dawley Yang Dipejani Doksorubisin ............................................ 37 BAB V.KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................ xlv A. Kesimpulan ............................................................................................... xlv B. Saran ......................................................................................................... xlv DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 48 LAMPIRAN ...................................................................................................... 52 BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 59 xi PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR TABEL Tabel I. Kadar serum AST dan perbandingan antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada pemejanan doksorubisin (n=2) ................................................. 36 Tabel II. Tabel II. Pengaruh perlakuan pemberian berbagai dosis ekstrak buah Lagenaria siceraria terhadap tikus yang dipejani doksorubisin yang diamati dari kadar serum AST ............................................................................................. 38 Tabel III. Hasil statistik pengaruh perlakuan pemberian berbagai dosis ekstrak buah Lagenaria siceraria terhadap tikus yang dipejani doksorubisin yang diamati dari kadar serum AST ...................................................................................... 39 xii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Skema klasifikasi kanker ................................................................ 8 Gambar 2. Struktur doksorubisin ..................................................................... 12 Gambar 3. Mekanisme pembentukan radikal bebas .......................................... 13 Gambar 4. Labu air .......................................................................................... 15 Gambar 5. Strukur cucurbitacin B .................................................................... 16 Gambar 6. Kadar serum AST tikus dengan pemejanan doksorubisin pada berbagai waktu pencuplikan darah ................................................................................. 36 Gambar 7. Kadar serum AST tikus dengan pemberian ekstrak buah Lagenaria siceraria pada berbagai variasi dosis ................................................................ 38 Gambar 8. Gambaran histopatologi organ jantung tiap kelompok perlakuan .... 40 xiii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Data buah labu air (Lagenaria siceraria)...................................... 53 Lampiran 2. Foto buah labu air (Lagenaria siceraria) ...................................... 53 Lampiran 3. Perhitungan rendemen ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria 53 Lampiran 4. Kadar air serbuk etanolik buah Lagenaria siceraria dengan metode gravimetri ........................................................................................................ 54 Lampiran 5. Analisis statistik perbandingan nilai serum AST antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada kontrol pelarut ............................................ 54 Lampiran 6. Analisis statistik pengaruh perlakuan pemberian berbagai dosis ekstrak buah Lagenaria siceraria terhadap tikus yang dipejani doksorubisin yang diamati dari nilai serum AST ........................................................................... 55 Lampiran 7. Surat persetujuan Ethics Committee ............................................. 58 Lampiran 8. Surat determinasi tanaman ........................................................... 59 xiv PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI INTISARI Telah dilakukan penelitian mengenai pengaruh ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh informasi mengenai pengaruh ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria akibat pemejanan doksorubisin, dan mengenai besaran dosis efektif ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria yang dapat memberikan pengaruh akibat pemejanan doksorubisin. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode pengukuran aktivitas serum Aspartat Aminotransferase (AST) dan pemeriksaan gambaran histopatologi jantung. Sebanyak 25 ekor tikus jantan galur Sprague Dawley dibagi acak menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif yang diberikan CMC Na 1% selama 10 hari dan dilanjutkan pemberian saline steril selama 6 hari, kelompok kontrol doksorubisin yang diberikan dengan dosis 4,5 mg/kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari, dan 3 kelompok perlakuan dengan pemberian ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria dengan dosis 1000 ; 750 ; dan 500 mg/kg BB selama 10 hari yang dilanjutkan dengan pemberian doksorubisin dosis 4,5 mg/kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari. Pada waktu 48 jam setelah perlakuan terakhir, setiap hewan uji pada setiap kelompok perlakuan diambil cuplikan darahnya melalui sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas AST. Pada akhir penelitian, tikus dibedah untuk diambil organ jantung untuk mengetahui kondisi/gambaran histopatologi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria belum mempengaruhi tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin melalui pengamatan serum AST dalam darah, dan pada gambaran histopatologi sel jantung pada dosis 1000 ; 750 ; dan 500 mg/kg BB. Kata kunci : kanker, doksorubisin, Lagenaria siceraria (Mol.) Standley xv PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI ABSTRACT A study concerning the effect of ethanol extract of Lagenaria siceraria (Mol.) Standley fruit in male Sprague Dawley rats induced doxorubicin. This study aimed to obtain information about effect of ethanol extract of Lagenaria siceraria fruit against doxorubicin, and how much effective dose of ethanol extract of Lagenaria siceraria required for given effect against doxorubicin. This research is a pure experimental design using randomized complete unidirectional pattern. This method used in this research is a method of measuring the activity of Aspartat Aminotransferase (AST) and investigation of cardio histopathological changes. A total of 25 male Sprague Dawley rats were divided randomly into 5 groups : negative control of CMC Na 1% on 10 days and then saline sterile given on 6 days, control of doxorubicin with dose 4,5 mg/kg every other day on 6 days, and 3 treatment groups given ethanol extract of Lagenaria siceraria fruit 1000 ; 750 ; and 500 mg/kg on 10 days and then doxorubicin induced with dose 4,5 mg/kg every other day on 6 days. At 48 hours after the last administration, every rats on every groups, blood samples were taken through the eye orbital sinus for measuring activity of AST. In the end of study, rat’s heart are taken to investigation of histophatological changes. The result showed that the ethanol extract of Lagenaria siceraria fruit hasn’t effect in male Sprague Dawley rats induced doxorubicin in activity of AST and in histopathological of cardiac cell at dose 1000 ; 750 ; and 500 mg/kg. Key words ; cancer, doxorubicin, cardiprotective, Lagenaria siceraria (Mol.) Standley xvi PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB I BAB I.PENGANTAR A. Latar Belakang Kanker adalah suatu penyakit yang ditandai oleh pertumbuhan secara cepat dari sel-sel di dalam jaringan tubuh. World Health Organization (WHO) mengemukakan bahwa kanker merupakan salah satu penyakit penyebab utama kematian di dunia. Menurut data pada tahun 2008, terdapat angka kematian sebesar 7,6 juta jiwa di seluruh dunia akibat kanker, atau 13% dari angka kematian seluruh penduduk di dunia pada tahun tersebut. Bahkan WHO memperkirakan bahwa pada tahun 2030, kematian akibat kanker dapat mencapai angka 13,1 juta jiwa (WHO, 2012). Penyebab utama penyakit ini bermacammacam, mulai dari virus, bakteri, zat kimia yang bersifat karsinogenik, paparan sinar UV, faktor genetik, bahkan akibat stres kronis (Tim Cancer Helps, 2010). Menurut Wattanapitayakul, Chularojmontri, dan Herunsalee (2005) beberapa upaya pengobatan yang sering dilakukan dalam mengobati kanker antara lain dengan operasi, kemoterapi, terapi hormon, maupun terapi dengan radiasi. Dari sekian banyak terapi pengobatan kanker, kemoterapi masih menjadi pilihan andalan bagi para pasien penderita kanker dalam menjalani pengobatan (Tim Cancer Helps, 2010). Kemoterapi sendiri adalah istilah yang digunakan untuk penggunaan obat-obatan sitotoksik dalam terapi kanker (Otto, 1996). Menurut Fimognari, Nusse, dan Lenzi (2006) doksorubisin adalah agen kemoterapi yang umum digunakan dalam pengobatan kanker payudara. Hal ini 1 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 2 juga didukung oleh Shah, Mohan, Kasture, Sanna, dan Maxia (2009) yang mengemukanan bahwa doksorubisin merupakan antibiotik golongan antrasiklin yang poten terhadap kanker dan memiliki spektrum yang luas sebagai senyawa antitumor pada berbagai jaringan tubuh manusia. Potensi besar yang dimiliki doksorubisin sebagai antikanker memiliki hambatan karena penggunaan doksorubisin dapat menyebabkan kerusakan pada jantung. Kerusakan pada jantung akibat doksorubisin disebabkan oleh adanya peningkatan oxidative stress pada jantung yang diperantarai oleh reactive oxygen species (ROS) (Octavia, Tocchetti, Gabrielson, Janssens, Crijns, dan Moens, 2012). Pendapat ini juga didukung oleh Alkreathy, Damanhouri, Ahmed, Slevin, Ali, dan Osman (2010) yang berpendapat bahwa penggunaan klinis doksorubisin juga terbatas karena memiliki risiko kardiotoksisitas. Reactive oxygen species (ROS) yang menjadi perantara perusakan jantung oleh doksorubisin dihasilkan oleh reaksi redoks dari doksorubisin radikal semikuinon yang merupakan hasil penghilangan 1 elektron dari doksorubisin oleh flavoenzim reduktase di dalam tubuh (Kalivendi et al., 2005). Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Shah et al. (2009), pemejanan doksorubisin secara intraperitoneal pada dosis 3 mg/kg BB yang diberikan setiap 2 hari sekali selama 2 minggu menyebabkan peningkatan kadar LDH, CPK, dan AST secara signifikan, dan menurunkan kadar enzim antioksidan SOD dan GSH. Hasil penelitian Fard, Naseh, Bodhankar, dan Dikshit (2010) dengan pemejanan doksorubisin pada dosis 10 mg/kg BB secara intravena selama 1 jam pada hewan uji tikus menyebabkan peningkatan kadar serum CK-MB, LDH, dan AST, dan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 3 juga menyebabkan perubahan secara histopatologi organ jantung berupa sever nuclear pyknosis. Begitu pula dengan pemejanan doksorubisin dengan dosis masing-masing pemejanan 2,5 mg/kg BB selama 6 kali dalam 2 minggu yang mampu menyebabkan perubahan dalam profil EKG jantung tikus pada fase repolarisasi di mana terjadi peningkatan perpanjangan dalam segmen ST dan interval ST, dan juga nekrosis pada sel miokardial (Elbaky, Ali, dan Ahmed, 2010). Berbagai penelitian tersebut menunjukkan bagaimana doksorubsisin mampu menyebabkan kerusakan jantung yang dapat diamati melalui beberapa parameter. Buah Lagenaria siceraria atau sering dikenal dengan buah labu air adalah salah satu tanaman obat yang memiliki banyak khasiat, diantaranya adalah sebagai peluruh air seni (diuretik), antioksidan, imunomodulator, antiinflamasi, mempunyai aktivitas dalam melindungi hati (hepatoprotektif), dan sebagai kardioprotektif (Gorasiya, Paranjape, dan Murti, 2011). Berdasarkan penelitian sebelumnya oleh Fard et al. (2010), ditemukan bahwa Lagenaria siceraria dalam bentuk jus buahnya dengan dosis 10 mL/kg BB mampu mengurangi efek kardiotoksisitas dari doksorubisin dosis 10 mg/kg BB dengan rute pemberian intravena. Pemberian jus buah Lagenaria siceraria tersebut mampu meningkatkan kadar enzim antioksidan dalam darah, yaitu SOD dan GSH. Selain itu, dari penelitian Kubde (2010) secara in vitro, ekstrak etanol dari buah Lagenaria siceraria memiliki daya tangkap yang kuat untuk menangkap radikal bebas H2O2. Dari kajian ini, ekstrak etanol Lagenaria siceraria potensial digunakan untuk mengurangi kardiotoksisitas doksorubisin melalui kemampuannya sebagai PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 4 antioksidan. Oleh karena itu, perlu diteliti lebih lanjut untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanolik dari buah Lagenaria siceraria akibat pemejanan doksorubisin. 1. Perumusan masalah a. Apakah pengaruh pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin? b. Berapakah dosis efektif ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) yang dapat memberikan pengaruh pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin? 2. Keaslian penelitian Berdasarkan penelusuran literatur yang dilakukan, penelitian mengenai pengaruh ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) terhadap kadar AST dalam darah pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin belum pernah dilakukan. Penelitian mengenai buah labu air (Lagenaria siceraria) yang pernah dilakukan adalah dengan judul Efek Kardioprotektif Jus Buah Lagenaria siceraria (Molina) Standley (Cucurbitaceae) pada Tikus yang Dipejani Doksorubisin (Fard et al., 2010). Dari penelitian tersebut didapat bahwa pemberian jus buah Lagenaria siceraria dengan dosis 10 mL/kg BB setiap hari selama 18 hari mampu mengurangi efek kardiotoksisitas yang ditimbulkan akibat PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 5 pemejanan doksorubisin doksorubisin pada dosis 10 mg/kg BB secara intravena selama 1 jam pada hewan uji tikus melalui pengamatan enzim CK-MB, LDH, AST, dan pengamatan EKG berupa interval QT. Penelitian lainnya berjudul Efek Protektif Jus Buah Lagenaria siceraria (Molina) pada Kasus Infrak Miokardiak Akibat Isoproterenol (Upaganlawar dan Balaraman, 2010). Pada penelitian tersebut, ditemukan bahwa jus buah labu air (Lagenaria siceraria), pada dosis 400 mg/kg BB yang diberikan setiap hari selama 30 hari memiliki efek protektif terhadap pemejanan Isoproterenol pada dosis 200 mg/kg BB secara sub cutan melalui pengamatan enzim antioksidan dan electrocardiograpic. Singh, Mohd, Ayaz, Ankur, dan Jyoti (2012) juga meneliti mengenai ―Efek Protektif Lagenaria siceraria terhadap Doksorubisin yang Menginduksi Kardiotoksik pada Tikus Wistar‖ dan didapat hasil berupa pemberian ekstrak air : etanol (1:1) biji Lagenaria siceraria dengan dosis harian 200 mg/kg BB dan 400 mg/kg BB selama 29 hari mampu mengurangi efek kardiotoksik dari doksorubisin dengan dosis 10 mg/kg BB secara intraperitoneal secara signifikan. Dari penelusuran literatur yang dilakukan, penelitian mengenai pengaruh ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin belum pernah dilakukan. Penelitian yang dilakukan memiliki perbedaan dengan penelitian-penelitian sebelumnya yang telah disebutkan diatas, seperti perbedaan pada pelarut yang digunakan dalam ekstraksi, cara ekstraksi, PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 6 bagian dari tanaman Lagenaria siceraria yang digunakan, maupun penginduksi perusakan pada jantung. Penelitian ini menggunakan keseluruhan buah Lagenaria siceraria dengan metode ekstraksi dengan pelarut etanol dan doksorubisin sebagai penginduksi kerusakan jantung. 3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis : Penelitian ini diharapkan dapat memperkaya ilmu pengetahuan pada penggunaan buah air (Lagenaria siceraria) pada ekstrak etanoliknya akibat pemejanan kardiotoksik. b. Manfaat praktis : Penelitian ini diharapkan dapat menjadi alternatif bagi masyarakat dalam pemilihan agen terapi pendukung pada penderita kanker yang diterapi dengan doksorubisin dengan penggunaan ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria). B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum : Penelitian ini bertujuan untuk menemukan alternatif terapi pendamping untuk terapi kanker dengan doksorubisin. 2. Tujuan khusus : a. Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) pada tikus jantan galur Sprague Dawley PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 7 yang dipejani doksorubisin yang diamati melalui pengukuran kadar AST dalam darah dan gambaran histopatologi sel jantung b. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dosis efektif ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) yang mampu menurunkan kadar AST dalam darah dan menyebabkan perubahan gambaran histopatologi sel jantung kembali normal pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB II BAB II.PENELAAHAN PUSTAKA A. Kanker Tumor adalah pembengkakan yang terjadi di dalam tubuh yang disebabkan oleh berkembangbiaknya sel-sel secara abnormal. Tumor dapat bersifat jinak (benigna) ataupun ganas (kanker). Tumor yang bersifat jinak tumbuh membesar, tetapi tidak menyebar atau menggerogoti jaringan tubuh lainnya (Gambar 1). Tumor yang bersifat ganas, disebut kanker, yang menyerang seluruh tubuh dan tidak terkendali. Sel-sel kanker berkembang dengan cepat. Selsel tersebut merusak dan menyerang jaringan tubuh melalui aliran darah dan pembuluh getah bening sehingga dapat tumbuh dan berkembang ditempat baru (Wijayakusuma, 2008). Gambar 1. Skema klasifikasi kanker (de Jong, 2001) 8 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 9 Ada beberapa perbedaan antara tumor jinak dan tumor ganas (kanker) : 1. Kanker menyerang dan merusak jaringan normal yang berada disekitarnya, sedangkan tumor jinak akan tumbuh dari perluasan tanpa adanya penyerangan jaringan normal. 2. Kanker dapat mengalami metastasis melalui jalur limpatik atau pembuluh darah yang menuju kelenjar limpa dan jaringan lain dalam tubuh. Sedangkan tumor jinak hanya akan berada ditempat ia berada saja dan tidak mengalami metastasis. 3. Kanker dapat berdeferensiasi menjadi lebih kuat dari sel normal, sedangkan tumor jinak sifatnya masih menyerupai sel normal 4. Sel kanker berkembang sangat pesat dibandingkan dengan sel tumor jinak (Ruddon, 2007). Ada beberapa hal yang menjadi ciri khas dari kanker, yaitu : 1. Morfologi sel kanker selalu berbeda dan lebih variatif daripada sel normal yang terdapat pada jaringan yang sama. Sel kanker dapat berbeda dalam hal ukuran dan bentuk. 2. Inti sel dari sel kanker selalu lebih besar dan kromatin akan terlihat lebih jelas daripada sel normal. 3. Jumlah sel yang mengalami mitosis lebih besar daripada sel normal yang mengakibatkan populasi sel kanker yang lebih besar daripada populasi sel normal. 4. Banyak ditemukannya abnormal mitosis, ―giant cell‖, pleomorphic (variasi ukuran dan bentuk), atau inti sel yang lebih dari 1. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 10 5. Bila sudah tampak jelas terjadi penyerangan terhadap jaringan normal, hal itu menandakan bahwa sel kanker sudah siap untuk mengalami metastasis (Ruddon, 2007). Setiap sel memiliki suatu siklus dalam tahapan replikasinya yang dinamakan siklus sel. Siklus sel merupakan serangkaian kejadian yang menghasilkan mitosis, suatu replikasi DNA dan pembagian yang merata kepada sel-sel yang baru. Sel kanker memilki siklus yang sama dengan sel normal. Siklus sel sendiri terdiri dari 5 fase, yaitu : 1. Fase G0 merupakan fase istirahat atau dorman, 2. Fase G1 merupakan fase sintesis protein yang akan digunakan untuk fase S, 3. Fase S adalah fase di mana DNA disintesis, 4. Fase G2 adalah fase di manaterjadi sintesis protein lebih lanjut dan tahap mempersiapkan fase M, dan 5. Fase M adalah tahap mitosis dan pembelahan sel (Otto, 2005). B. Doksorubisin Doksorubisin (Gambar 2) merupakan antibiotik golongan antrasiklin yang banyak digunakan untuk terapi berbagai macam jenis kanker seperti leukemia akut, kanker payudara, kanker tulang dan ovarium (Childs, Phaneuf, Dirks, Phillips, dan Leeuwenburgh, 2002). Senyawa ini diisolasi dari Streptomyces peucetius var caesius pada tahun 1960-an dan digunakan secara luas (Minotti, Menna, Salvatorelli, Cairo,dan Gianni, 2004). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 11 Berbagai penelitian mengenai mekanisme kerja doksorubisin telah dilakukan. Antibiotik antrasiklin seperti doksorubisin memiliki mekanisme aksi sitotoksik melalui empat mekanisme, yaitu: 1. penghambatan topoisomerase II, 2. interkalasi DNA sehingga mengakibatkan penghambatan sintesis DNA dan RNA, 3. pengikatan membran sel yang menyebabkan aliran dan transport ion, dan 4. pembentukan radikal bebas semikuinon dan radikal bebas oksigen melalui proses yang tergantung besi dan proses reduktif yang diperantarai enzim. Mekanisme radikal bebas ini telah diketahui bertanggungjawab pada kardiotoksisitas akibat antibiotik antrasiklin (Bruton, Lazo, dan Parker, 2005). Doksorubisin dapat menyebabkan kardiotoksisitas pada penggunaan jangka panjang, hal itu menyebabkan penggunaannya secara klinis menjadi terbatas. Efek samping pada pemakaian kronisnya bersifat ireversibel, termasuk terbentuknya cardiomyopathy dan congestive heart failure (Han, Pan, Ren, Cheng, Fan, dan Lou, 2008). Umumnya doksorubisin digunakan dalam bentuk kombinasi dengan agen antikanker lainnya seperti siklofosfamid, cisplatin dan 5FU. Peningkatan respon klinis dan pengurangan efek samping cenderung lebih baik pada penggunaan kombinasi dengan agen lain dibandingkan penggunaan doksorubisin tunggal (Bruton et al., 2005). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 12 Gambar 2. Struktur Doksorubisin (Anonim, 2012) Hipotesis yang paling umum untuk mekanisme yang obat-obat golongan antrasiklin, seperti doksorubisin, menyebabkan kardiotoksisitas meliputi pembentukan radikal bebas dan superoksida. Hipotesis ini didasarkan pada eksperimen in vitro dan beberapa penelitian telah dilakukan pada manusia. Reaksi radikal bebas dimulai dari reduksi dari satu elektron dari doksorubisin sehingga membentuk doksorubisin radikal semikuinon oleh flavoenzim reduktase seperti NADPH-sitokrom P450 reduktase. Radikal semikuinon kemudian membentuk kompleks dengan besi membentuk kompleks radikal bebas antrasiklin-besi (Fe2+). Kompleks ini mereduksi oksigen untuk membentuk superoksida yang pecah menjadi hidrogen peroksidase dan oksigen (Gambar 3) (Schimmel, Richel, van den Brink, dan Jan Guchelaar, 2004). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 13 Gambar 3. Mekanisme pembentukan radikal bebas (Schimmel et al., 2004) Jantung adalah jaringan utama yang menjadi efek dari kerusakan akibat radikal bebas dari doksorubisin. Hal ini disebabkan oleh rendahnya jumlah enzim/molekul yang dapat menangkap radikal bebas, seperti SOD dan GSH. Disisi lain, doksorubisin memiliki afinitas yang tinggi pada komponen fosfolipid pada membran mitokondria sel jantung yang berakibat akumulasi doksorubisin pada jaringan jantung (Koti, Vishwanathswamy, Wagawade, dan Thippeswamy, 2009). Mitokondria menunjukkan sensitifitas yang tinggi terhadap ROS yang dapat mengakibatkan perubahan fungsinya. DNA pada mitokondria (mtDNA) sangat mudah termodifikasi akibat adanya ROS/NOS (reactive nitrogen species). Hal ini disebabkan mtDNA berada sangat dekat tempat produksi ROS intraseluler, mtDNA juga tidak memiliki protein histon yang dapat berfungsi sebagai pelindung terhadap perusakan akibat oksidatif, dan mtDNA tidak memiliki kemampuan yang baik dalam kerusakan yang terjadi pada dirinya sendiri. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 14 Kerusakan pada mtDNA ini akan menyebabkan perubahan fungsi sel, seperti dalam proses pembuatan kode untuk pembentukan protein bagi respirasi sel (Lakshmi, Padmaja, Kuppusamy, dan Kutala, 2009). Selain mempengaruhi mtDNA mitokondria, doksorubisin juga dapat berikatan dengan membran dalam mitokondria dengan membentuk kompleks yang hampir ireversibel dengan kardiolipin, salah satu komponen penyusun membran dalam mitokondria. Kompleks ini menghalangi proses transport elektron di dalam mitokondria sehingga proses respirasi terganggu (Octavia et al., 2012). C. Labu Air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) Famili Cucurbitaceae adalah sumber utama dari agen pengobatan sejak zaman dahulu kala. Berbagai bagian tanaman, termasuk buah, dari famili ini telah diuji potensi farmakologinya. Lagenaria siceraria (Molina) Standley (famili Cucurbitaceae) atau lauki (Hindi) atau labu botol (Inggris) adalah tanaman obat yang digunakan di India, Cina, negara-negara Eropa, Brazil, Hawaii, dan lain-lain sebagai kardiotonik, tonik umum dan diuretik. Hasil penelitian lebih lanjut, ditemukan efek sebagai antihepatotoksik, analgesik, anti-inflamasi, hypolipidemic, antihyperglycemic, immunomodulator dan kardioprotektif dari ekstrak buahnya (Tyagi, Sharma, dan Hooda, 2012). Buah Lagenaria siceraria (Mol.) Standley (labu botol) (Gambar 4) umum digunakan di India sebagai kardiotonik. Penelitian-penelitian sebelumnya mengatakan bahwa adanya aktifitas penangkapan radikal bebas oleh Lagenaria PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 15 siceraria. Karena adanya keterkatian dengan aktifitas antioksidan, ekstrak etanolik dari buah Lagenaria siceraria perlu diteliti efeknya terhadap patogenesis, karena patogenisis erat hubungannya dengan radikal bebas. Ekstrak tersebut ditemukan efektif sebagai hepatoprotektif, antioksidan, antihiperglikemia, immunomodulator, antihiperlipidemia dan agen kardiotonik (Deshpande, Choudhari, Mishra, Meghre, Wadodkar, dan Dorle et al., 2008) 1. Klasifikasi taksonomi Gambar 4. Labu air (Deshpande et al., 2007) Kingdom : Plantae Divisi : Magnoliphyta Kelas : Magnoliopsida Ordo : Cucurbitales Famili : Cucurbitaceae Genus : Lagenaria Species : Lagenaria siceraria (Mol.) Standley (Gorasiya et al., 2011). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 16 2. Kandungan kimia Buah labu air memiliki komposisi asam amino, yaitu leusin sebanyak 0,8 mg/g; fenilalanin 0,9 mg/g; valin 0,3 mg/g; tirosin 0,4 mg/g; alanin 0,5 mg/g; treonin 0,2 mg/g; asam glutamat 0,3 mg/g; serin 0,6 mg/g; asam aspartat 1,9 mg/g; sistin 0,6 mg/g; sistein 0,3 mg/g; arginin 0,4 mg/g dan prolin 0,3 mg/g. Buah Lagenaria siceraria merupakan sumber yang baik untuk vitamin B dan mengandung asam askorbat dalam jumlah sedang dan juga cucurbitacins B, D, G dan H (terutama cucurbatacin B). Hasil skrining fitokimia juga menyebutkan adanya kandungan fukosterol dan kampesterol (Gorasiya et al., 2011). Gambar 5. Strukur cucurbitacin B (Gorasiya et al., 2011) D. Aspartate Aminotransferase (AST) AST atau juga sering disebut SGOT (Serum Glutamat Oksaloasetat Transaminase) adalah enzim yang sebagian besar terdapat dalam otot jantung dan hati; selain itu juga ditemukan dalam otot rangka, ginjal, dan pankreas. Nilai AST serum yang tinggi ditemukan pada infark miokard akut (IMA) dan kerusakan hepar. Setelah nyeri dada hebat yang disebabkan oleh IMA, AST serum meningkat dalam 6 jam sampai 10 jam dan memuncak dalam 24 sampai 48 jam. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 17 Jika tidak terjadi perluasan infark, nilai AST serum kembali normal dalam 4 sampai 6 hari (Joyce, 2007). Aspartate Aminotransferase merupakan salah satu contoh enzim plasma terdapat dalam sel. Kadar enzim ini di dalam sel lebih tinggi dibandingkan dengan kadar di dalam plasma darah. Bila kadar enzim ini di dalam darah meningkat, menunjukkan adanya peningkatan jumlah sel yang rusak atau mati, atau proliferasi sel (penambahan jumlah sel dalam jumlah banyak) (Djojodibroto, 2003). Peningkatan kadar terjadi bila terjadi infark miokard akut (IMA), ensefalitis, nekrosis hepar, penyakit dan trauma musculoskeletal, pancreatitis akut, eklampsia, dan gagal jantung kongestif (GJK) (Joyce, 2007). Peningkatan kadar AST dalam darah dapat dibagi menjadi 3 kategori berdasarkan jumlah kadarnya dalam darah, yaitu : a) Peningkatan mencolok (5 kali normal atau lebih), penyebabnya dapat berupa kerusakan hepatoseluler akut, infarkmiokard, kolaps sirkulasi (syok), pankreatitis akut, maupun mononukleosis infeksiosa. b) Peningkatan sedang (3-5 kali normal), penyebabnya dapat berupa obstruksi saluran empedu, aritmia jantung, atau gagal jantung kongesif. c) Peningkatan ringan (sampai 3 kali normal), penyebabnya dapat berupa pericarditis atau sirosis (Sacher dan McPherson, 2004). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 18 E. Landasan Teori Sebagai antikanker, salah satu mekanisme kerja dari doksorubisin adalah dengan pembentukan radikal bebas semikuinon dan radikal bebas oksigen melalui proses yang berkaitan dengan besi dan proses reduktif yang diperantarai enzim (Bruton et al., 2005). Doksorubisin mampu menyebabkan kerusakan pada jantung berdasarkan mekanisme kerjanya melalui radikal bebas dan keberadaan reactive oxygen species (ROS) yang dihasilkan oleh reaksi redoks oleh doksorubisin radikal semikuinon (Schimmel et al., 2004) Menurut Koti et al. (2009), jantung merupakan jaringan utama yang menjadi target aksi radikal bebas doksorubisin akibat rendahnya jumlah enzim/molekul yang dapat menangkap radikal bebas, seperti SOD dan GSH, dan akibat tingginya afinitas doksorubisin pada membran mitokondria sel jantung. Keberadaan doksorubisin dalam mitokondria jantung ini akan menyebabkan pengaruh kepada DNA dari mitokondria (mtDNA) yang berakibat pada kerusakannya yang berujung pada perubahan fungsi selnya, seperti respirasi Buah labu air (Lagenaria siceraria) merupakan salah satu tanaman obat yang telah digunakan sebagai imunomodulator, hepatoprotektor, (Tyagi et al., 2012) dan berdasarkan penelitian Deshpande et al. (2008) ditemukan aktifitasnya sebagai kardioprotektif. Kandungan senyawa dalam buah labu air (Lagenaria siceraria) pun beragam, mulai dari asam amino, vitamin, sampai golongangolongan sterol, seperti cucurbitacin, fukosterol, dan kampesterol (Gorasiya et al., 2011). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 19 Penelitian ini bertujuan untuk menguji pengaruh dari ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria terhadap tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin. Evaluasi dari pengaruh pemberian ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria tersebut dapat diamati melalui pengamatan kadar AST yang dihasilkan oleh otot jantung ke dalam darah dan juga dapat dilihat melalui perubahan sel-sel jantung yang diamati melalui preparat histopatologi. F. Hipotesis Ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) mampu memberikan pengaruh berupa penurunan kadar AST dalam darah dan kerusakan sel-sel jantung sebagai akibat pemejanan doksorubisin pada tikus galur Sprague Dawley. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB III BAB III.METODE PENELITIAN A. Jenis Dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan memberikan perlakuan terhadap subyek uji dalam penelitian. Rancangan penelitian ini termasuk rancangan acak lengkap pola searah. B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional 1. Variabel penelitian a. Variabel bebas Dosis ekstrak buah labu air (Lagenaria siceraria). b. Variabel tergantung Efek kardioprotektif pada jantung tikus yang dipejankan ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria), dengan tolak ukur penurunan kadar AST dalam darah dan perubahan penampakan sel jantung yang diamati melalui histopatologi jantung . c. Variabel pengacau terkendali Variabel pengacau yang harus dikendalikan yaitu: hewan uji tikus jantan galur Sprague Dawley, umur 2-3 bulan, berat badan 200-300 g, dosis doksorubisin sebesar 4,5 mg/kg BB dengan pemberian tiap 2 hari sekali selama 6 hari, jenis makanan, dan rute pemberian ekstrak secara per oral dan doksorubisin secara intraperitoneal. 17 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 21 d. Variabel pengacau tidak terkendali Variabel pengacau yang tidak dapat dikendalikan adalah kondisi patologis tikus dan asal buah labu air (Lagenaria siceraria). 2. Definisi operasional a. Ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria (EELS) adalah ekstrak kental yang diperoleh dengan mengekstraksi serbuk kering buah Lagenaria siceraria dengan metode maserasi dengan larutan penyari berupa etanol. Filtrat yang didapat diuapkan pelarutnya dengan menggunakan vacuum rotary evaporator sampai bobot tetap. b. Ekstrak kental etanolik buah Lagenaria siceraria adalah hasil akhir proses ekstraksi serbuk kering buah Lagenaria siceraria yang sudah tidak mengandung pelarut yang digunakan dalam penyarian. c. Sediaan ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria adalah sediaan yang dibuat dari mensuspensikan ekstrak kental etanolik buah Lagenaria siceraria dalam CMC Na 1& dengan konsentrasi ekstrak kental sebesar 15%. d. Dosis ekstrak etanolik buah labu air adalah sejumlah milligram ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria per kilogram berat badan tikus jantan Sprague Dawley. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 22 C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Bahan uji yang digunakan yaitu buah labu air (Lagenaria siceraria) yang diperoleh dari Pasar Beringharjo, Yogyakarta. b. Subyek uji yang digunakan, yaitu tikus jantan putih galur Sprague Dawley usia 2-3 bulan, berat badan 200-300 gram yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi USD Yogyakarta. 2. Bahan kimia a. Doxotil® (Doksorubisin HCl 2mg/ml) Doksorubisin (Gernpharma), yang diperoleh dari Instalasi Kanker ―TULIP‖ Rumah Sakit Umum Pemerintah Dr.Sardjito Yogyakarta. b. Pelarut bahan kemoterapi adalah larutan saline steril (Otsuka). c. Etanol 80% untuk ekstraksi buah labu air (Lagenaria siceraria) yang diperoleh dari Bratachem. d. Pelarut untuk ekstrak etanol kental buah labu air (Lagenaria siceraria) berupa CMC Na 1% yang diperoleh dari Bratachem. e. Aquabides yang digunakan dalam uji aktivitas AST diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi USD Yogyakarta. f. Reagen untuk mengukur aktivitas serum AST berupa reagen kit-ASAT (GOT) FS (Dyasis). Masing-masing bahan terdiri dari dua reagen, yaitu reagen I dan II. Komposisi dari masing-masing reagen adalah sebagai berikut : PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 23 a. Reagen I : TRIS pH 7,65 (110 mmol/L), L-Aspartate (320 mmol/L), MDH (Malate dehydrogenase) (≥ 800 U/L), dan LDH (Lactate dehydrogenase) (≥ 1200 U/L). b. Reagen II : 2-Oxoglutarate (65 mmol/L), NADH (1 mmol/L), dan Pyridoxal-5-phosphate FS yang terdiri dari Good’s buffer pH 9,6 (100 mmol/L) dan Pyridoxal-5-phosphate (13 mmol/L). g. Ketamin untuk euthanasia subyek uji diperoleh dari Lembaga Penelitian dan Pengujian (LPPT) terpadu Unit III UGM Yogyakarta. h. Formalin 10% untuk pengawetan organ jantung diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi USD Yogyakarta i. Reagen Pewarnaan Histopatologi berupa pengecatan HE diperoleh dari Laboratorium Patologi Fakultas Kedokteran Hewan UGM Yogyakarta. D. Alat Penelitian 1. Alat pembuatan ekstrak etanolik Seperangkat alat gelas (Beaker glass (Pyrex), gelas ukur (Pyrex), labu takar (Pyrex), cawan porselen, pipet tetes, batang pengaduk, timbangan analitik (Mettler PM 4600 Delta Range dan Mettler AE 200), shaker, rotary evaporator, oven, mesin penyerbuk, desikator, corong Buchner, pompa vakum. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 24 2. Alat uji hepatoprotektif Seperangkat alat gelas (Beaker glass (Pyrex), gelas ukur (Pyrex), labu takar (Pyrex), pipet tetes, batang pengaduk, timbangan analitik (Mettler PM 4600 Delta Range dan Mettler AE 200), spuit injeksi per oral (diperoleh dari Bengkel MIPA Fakultas MIPA UGM Yogyakarta), spuit injeksi intravena (One Med), vitalab mikro 1,0 user manual (E.merck, Darmsadt, Germany), seperangkat alat bedah, stopwatch, vortex (Genie, Wilten, Holland), sentrifuge, ependrof, pipa kapiler, dan mikropipet (Socorex). E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi buah Lagenaria siceraria Determinasi sampel buah labu air (Lagenaria siceraria) dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri morfologi tanaman Lagenaria siceraria dengan ciri-ciri morfologi yang ada di acuan. Acuan yang digunakan adalah artikel berjudul ―Gourd, Cucuzzi-Lagenaria siceraria (Mol.) Standl.‖ yang diterbitkan oleh University of Florida dan ditulis oleh Professor James M. Stephens. 2. Pembuatan ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria Buah Lagenaria siceraria yang diperoleh di Pasar Beringharjo Yogyakarta, dicuci dengan air mengalir hingga bersih kemudian dikupas kulit buahnya. Daging buah dan kulit buah diiris kecil-kecil dan dibuang bijinya, kemudian dikeringkan didalam oven dengan suhu 550 C sampai potongan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 25 buah dapat dipatahkan. Kemudian, buah yang sudah kering diserbuk dengan mesin penyerbuk. Hasil serbuk yang didapat dimaserasi dengan pelarut etanol sebanyak 3 siklus. Siklus pertama dilakukan selama 2x24 jam.Kemudian disaring dengan corong Buchner sehingga terpisah antara filtrat dan ampas. Ampas yang didapat dimaserasi ulang dengan pelarut yang sama selama 1x24 jam. Kemudian disaring dengan corong Buchner sehingga terpisah antara filtrat dan ampas kembali. Ampas yang didapat dimaserasi ulang dengan pelarut yang baru selama 1x24 jam. Kemudian filtrat yang didapat diuapkan pelarutnya dengan rotary evaporator sampai pelarut tidak menetes lagi. Selanjutnya, ekstrak dimasukkan dalam cawan porselen yang kemudian dimasukkan dalam oven untuk penguapan pelarut lebih optimal sehingga didapat ekstrak kental. Ekstrak kental yang didapat kemudian disimpan dalam wadah berisi silica gel dan ditutup dengan alumunium foil untuk mencegah kontaminasi. 3. Pembuatan sediaan ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria Ekstrak kental etanolik labu air dibuat dengan larutan dengan konsentrasi paling pekat dalam pelarut CMC Na 1%. Penetapan konsentrasi paling pekat dilakukan dengan cara memaksimalkan konsentrasi ekstrak yang dapat melewati spuit oral dengan lancar. Setelah dilakukan orientasi, didapat konsentrasi terpekat yang masih bisa melewati spuit oral dengan lancar adalah 15% b/v. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 26 4. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1% Suspending agent CMC-Na 1% dibuat dengan cara mendispersikan lebih kurang 1,0 g CMC-Na yang telah ditimbang seksama ke dalam air mendidih sampai volume 100,0 ml sampai terlarut sempurna. 5. Uji pendahuluan a. Penetapan dosis doksorubisin penyebab kerusakan jantung Pemilihan dosis doksorubisin yang dapat menyebabkan kerusakan jantung dilakukan dengan menguji beberapa dosis doksorubisin dengan parameter peningkatan kadar AST dalam darah paling tinggi. Pada orientasi, ditemukan bahwa pada dosis pemberian 4,5 mg/kg BB yang diberikan setiap 2 hari sekali 6 hari secara intraperitoneal menunjukkan peningkatan kadar AST paling tinggi. Dosis dan cara pemberian inilah yang digunakan dalam penelitian. b. Penetapan waktu pencuplikan darah Penetapan waktu pencuplikan darah dilakukan untuk mengetahui waktu pencuplikan darah yang tepat sehingga efek samping doksorubisin sebagai kardiotoksik muncul dan dapat dideteksi secara optimal. Parameter yang digunakan adalah kadar AST dalam darah yang paling tinggi dalam selang waktu pencuplikan darah. Dari hasil orientasi, ditemukan kenaikan nilai AST paling tinggi pada dosis dan perlakuan yang dilakukan pada saat 48 jam setelah pemberian terakhir doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 27 6. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 25 ekor tikus jantan dibagi secara acak dalam 5 kelompok sama banyak. Pembagian kelompok dan perlakuan hewan uji adalah sebagai berikut : a. Kelompok I merupakan kontrol pelarut yang diberi perlakuan CMC Na 1% (pelarut ekstrak) secara peroral selama 10 hari yang dilanjutkan pemberian saline steril (pelarut doksorubisin) dengan volume pemberian setengah dari volume maksimal secara intraperitoneal setiap 2 hari sekali selama 6 hari. b. Kelompok II merupakan kontrol doksorubisin. Pada kelompok ini, hewan uji diberi perlakuan yaitu pemberian CMC Na 1% selama 10 hari pertama sebagai pelarut ekstrak, yang dilanjutkan dengan pemberian doksorubisin dengan dosis 4,5 mg/kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari. c. Kelompok III-V adalah kelompok perlakuan dengan pemberian sediaan ekstrak etanolik buah Lagenaria sicerariadengan dosis 1000 ; 750 ; dan 500 mg/kg BB yang diberikan selama 10 hari pertama secara per oral yang kemudian dilanjutkan pemberian doksorubisin dengan dosis 4,5 mg/kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari. Pada setiap kelompok perlakuan, dilakukan pencuplikan darah setelah 48 jam setelah perlakuan terakhir melalui sinus orbitalis mata untuk penetapan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 28 aktivitas AST. Dilakukan pembedahan untuk mengambil organ jantung untuk diamati histopatologinya 4 hari setelah perlakuan terakhir. 7. Pembuatan serum Darah tikus diambil melalui sinus orbitalis mata dengan pipa kapiler dan ditampung dalam ependrof, kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit dan diambil supernatannya (serum). 8. Pengukuran kadar serum AST Alat yang digunakan pada pengukuran kadar AST adalah mikrovitalab. Pada analisis spektrofotometri AST, dilakukan reaksi berdasarkan reaksi antara serum darah dengan reagen I dan reagen II. Reagen I berisi TRIS (pH 7,65), L-Aspartat, LDH (laktat dehidrogenase), dan MDH (malat dehidrogenase). Reagen II berisi 2-oksoglutarat dan NADH. Analisis dilakukan dengan reaksi sebagai berikut: reagen I sebanyak 800 μL dicampur dengan 200 μL reagen II. Setelah itu dicampurkan serum sebanyak 100 μL dan dibaca resapan setelah tiga menit. Aktivitas enzim dilihat pada panjang gelombang 340 nm, suhu 37 0C, dan faktor koreksi 1745. Kadar AST dinyatakan dalam U/L. Pengukuran kadar AST dilakukan di Laboratorium Anatomi-Fisiologi Manusia Fakultas Farmasi USD Yogyakarta. 9. Pembuatan preparat histopatologi jantung Hewan uji dibunuh dengan cara penyuntikan ketamin. Kemudian membuat irisan pada kulit dada sampai perut tikus dengan menggunakan pisau. Saat pembedahan, diambil organ jantung yang kemudian disimpan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 29 pada tabung berisi cairan pengawet formalin 10% dengan perbandingan 1 bagian otot dan 9 bagian formalin 10 %. Sampel jantung tikus Sprague Dawley dalam tabung diletakkan ke rak tabung kemudian diserahkan ke analis guna mengolahnya mengikuti metode baku histologi dengan pewarnaan Hematoxylin-Eosin. Dari setiap sampel otot dibuat preparat dengan potongan longitudinal, kemudian dilanjutkan dengan pewarnaan Hematoxylin-Eosin. Pewarnaan dilakukan dengan cara menginkubasi preparat otot dengan larutan Mayer’s hematoxilyn selama 5 menit, kemudian diinkubasi dalam larutan Eosin 0,5% yang sudah ditambah asam asetat (100 : 1). Pembuatan preparat histopatologi dan pembacaannya dilakukan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada. Pembacaan preparat dalam lima lapangan pandang dengan perbesaran 400x. Sasaran yang dibaca adalah jumlah sel-sel otot jantung tikus yang mengalami nekrosis. Data pemeriksaan oleh pembimbing dan peneliti dicatat dalam formulir untuk kemudian dianalisa. F. Analisis Hasil Data kadar AST dianalisis dengan metode Kolmogoro Smirnov untuk melihat distribusi data tiap kelompok. Jika didapatkan distribusi data yang normal maka dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% dan dilanjutkan dengan uji LSD untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Akan tetapi bila didapatkan distribusi tidak PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 30 normal, maka dilakukan analisis dengan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan kadar AST antar kelompok. Setelah itu, dilanjutkan uji dengan Mann Whitney untuk melihat perbedaan tiap kelompok. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 31 BAB IV BAB IV.HASIL DAN PEMBAHASAN Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol buah Lagenaria siceraria pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin dan mengetahui dosis efektifnya. Tolak ukur yang digunakan adalah pengujian kadar AST dalam darah sebagai tolak ukur kualitatif, dan pengujian dengan melihat hasil preparat histopatologi organ jantung digunakan untuk penegasan hasil. A. Hasil Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dilakukan bertujuan menetapkan kebenaran sampel yang digunakan berkaitan dengan ciri-ciri morfologis buah yang digunakan berdasarkan kepustakaan dan menghindari kesalahan dalam proses pengumpulan bahan. Menurut Stephens (2009), buah labu air memiliki ciri-ciri morfologis sebagai berikut : 1. Buah berwarna hijau, baik hijau tua atau hijau muda. Beberapa buah ada yang berwarna hijau tua secara keseluruhan, tetapi ada juga yang berwarna hijau dengan garis-garis teratur, garis-garis acak, atau bintik-bintik seperti jerawat yang berwarna hijau tua. 2. Diameter dari buah adalah 2-12 inci dengan panjang 4-40 inci. 3. Biji dari buah melekat pada jaringan spons yang ada pada buah. Biji tersebut pipih dan mampat dengan permukaan yang tidak rata. Panjang dari biji PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 32 tersebut biasanya adalah 7-20 mm. Untuk buah yang memiliki leher dengan panjang ±15 inci dan lebar 1-2 inci, biasanya tidak memiliki biji. Buah yang berleher panjang memiliki biji dan bagian lehernya terdapat tonjolan yang berisi biji. 4. Buah labu air yang berbiji biasanya berbentuk datar, bulat, tabung, seperti alat pemukul, atau panjang dan kecil. Dari ciri-ciri morfologi diatas, ditemukan bahwa buah yang digunakan masuk dalam kriteria tersebut. Oleh karena itu, dinyatakan bahwa buah yang digunakan adalah benar buah Lagenaria siceraria. B. Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Lagenaria siceraria Pembuatan ekstrak etanol buah Lagenaria siceraria dilakukan dengan metode maserasi. Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar) (Dirjen POM, 2000). Metode ini dipilih karena metode ini tidak menggunakan panas, bila dibandingkan metode penyarian lain seperti sokletasi. Kondisi ini meminimalkan risiko kerusakan kandungan senyawa dari buah Lagenaria siceraria akibat panas. Larutan penyari yang digunakan adalah etanol 80%. Larutan penyari ini dipilih berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Kubde (2010), ekstrak etanol 80% buah Lagenaria siceraria memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi. Penggunaan penyari berupa etanol 80% juga didasarkan atas perbedaan kepolaran yang sangat kecil dengan metanol 80%, yaitu 0,05, yang pada dasarnya adalah pelarut universal yang mana mampu PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 33 menyari hampir seluruh senyawa. Selain itu, etanol lebih aman digunakan dibandingkan metanol karena etanol kurang toksik dibanding metanol. Sebelum dilakukan maserasi, buah Lagenaria siceraria yang telah dikeringkan, diserbukkan terlebih dahulu dengan alat penyerbuk. Tujuan penyerbukkan ini adalah untuk memperkecil ukuran partikel simplisia sehingga pada proses penyarian didapat hasil yang lebih maksimal. Ukuran partikel simplisia yang lebih kecil, mengakibatkan luas kontak yang lebih besar dan proses penyarian yang semakin optimal. Dalam proses ekstraksi, dilakukan proses remaserasi untuk semakin memaksimalkan proses penyarian. Proses ini dilakukan dengan cara pengulangan penyarian dengan pelarut baru sebanyak 3x dengan menggunakan maserat ekstraksi sebelumnya. Hasil dari penyarian tersebut kemudian dilanjutkan dengan proses penguapan penyari yang digunakan dengan vacuum rotary evaporator. Prinsip utama dalam instrumen ini terletak pada penurunan tekanan pemutaran labu alas bulat sebagai wadah hasil proses penyarian sehingga penyari dapat menguap lebih cepat dibawah titik didihnya. Dari hasil proses ini didapat ekstrak yang lebih kental karena sudah banyak larutan penyari yang menguap. Ekstrak hasil vacuum rotary evaporator dimasukkan ke dalam oven untuk lebih memaksimalkan penguapan larutan penyari. Proses ini dilakukan sampai didapat bobot tetap yang berarti seluruh larutan penyari sudah menguap dan yang tersisa hanya hasil ekstraksi. Hasil yang didapat berupa ekstrak kental buah Lagenaria siceraria. Hasil ekstrak kental buah Lagenaria siceraria yang didapat kemudian disimpan di wadah desikator berisi silika gel dan ditutup dengan alumunium foil untuk PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 34 mencegah cemaran pada ekstrak. Dari proses ekstraksi ini, didapat rendemen sebesar 37,778 %. C. Pembuatan Sediaan Ekstrak Buah Lagenaria siceraria Sediaan ekstrak buah Lagenaria siceraria dibuat dengan cara melarutkan ekstrak kental buah Lagenaria siceraria pada pelarut CMC Na 1%. CMC Na 1% dipilih untuk meningkatkan homogenitas suspensi ekstrak kental buah Lagenaria siceraria. Hal ini dikarenakan ekstrak kental buah buah Lagenaria siceraria adalah hasil penyarian dengan etanol, yang mana kepolarannya berbeda dengan air, sehingga bila pelarut yang digunakan air, kelarutan ekstrak kental buah Lagenaria siceraria tidak maksimal. Sediaan dibuat dengan konsentrasi 15%, di mana 15 g ekstrak kental dilarutkan dalam 100 mL pelarut (CMC Na 1%). Konsentrasi ini merupakan konsentrasi maksimal yang bisa melewati spuit per oral yang nantinya akan digunakan sebagai jalur pemejanan sediaan. D. Penetapan Dosis Doksorubisin Penyebab Kerusakan Jantung Pemilihan dosis doksorubisin penyebab kerusakan jantung ditandai dengan peningkatan kadar AST dalam darah yang paling tinggi. Doksorubisin yang digunakan diperjankan secara intraperitoneal. Pemilihan dosis doksorubisin dalam tahap orientasi ini berdasarkan pada beberapa penelitian mengenai risiko doksorubisin sebagai penyebab kerusakan jantung maupun modifikasi dari peneliti sendiri. Dalam tahapan ini, juga PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 35 dipertimbangkan kenaikan kadar serum ALT karena penelitian ini merupakan penelitian payung bersama Hariyanto. Berdasarkan peningkatan kadar serum AST dan ALT (Hariyanto, 2013) maka digunakan dosis doksorubisin 4,5 mg/kg BB yang dipejankan 2 hari sekali selama 6 hari untuk tahap-tahap penelitian selanjutnya. Pemejanan dilakukan dengan dosis terbagi karena berdasarkan orientasi, ditemukan bahwa ada risiko kematian terhadap hewan uji selama masa penelitian bila langsung digunakan dosis tunggal. Hal ini tidak diinginkan karena menimbulkan kesulitan dalam mendeteksi parameter potensi efek kardioprotektif dari ekstrak etanol Lagenaria siceraria yang di uji, yaitu serum AST. Bila hewan uji mengalami kematian, sulit dilakukan pencuplikan darah untuk mengetahui kadar serum AST. E. Penetapan Waktu Pencuplikan Darah Penetapan waktu pencuplikan darah dilakukan untuk mengetahui waktu pencuplikan darah yang tepat sehingga efek samping doksorubisin sebagai kardiotoksik dapat dideteksi secara optimal. Parameter yang digunakan adalah kadarserum AST yang paling tinggi dalam selang waktu pencuplikan darah. Waktu pencuplikan yang diuji yaitu jam ke-0, 2, 48, dan 72. Pemilihan waktu pencuplikan darah ini didasarkan kepada hasil penelitian Alkreathy et al. (2010) dan Fard et al. (2010) untuk waktu pencuplikan 48 jam. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 36 Berikut merupakan hasil orientasi waktu pencuplikan darah hewan uji yang disajikan dalam tabel dan diagram batang sebagai berikut : Tabel I. Kadar serum AST dan perbandingan antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada pemejanan doksorubisin (n=2) Waktu pencuplikan (jam) 0 2 48 72 Purata kadar serum AST ± SE (U/L) 158 ± 3 170 ± 0 302 ± 8 187 ± 6 Gambar 6. Kadar serum AST tikus dengan pemejanan doksorubisin pada berbagai waktu pencuplikan darah Dari tabel I dan gambar 6 di atas, didapat nilai rata-rata kadar serum AST pada jam ke-0, jam ke-2, jam ke-48, dan jam ke-72 berturut-turut adalah 158 ± 27; 170 ± 0; 302 ± 87 U/L; dan 187 ± 6. Nilai kadar serum AST paling tinggi terjadi pada selang waktu 48 jam. Pada pencuplikan darah setelah 48 jam didapatkan kenaikan nilai serum AST sebesar 1,9 kali dari nilai normal (dari 158 ke 302 U/L). Oleh sebab itu, telah terjadi peningkatan kadar serum AST pada waktu 48 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 37 jam setelah pemejanan doksorubisin dan didapat kenaikan yang cukup tinggi, maka waktu 48 jam setelah pemejanan doksorubisin digunakan sebagai waktu untuk pencuplikan darah untuk tahap selanjutnya. F. Pengaruh Ekstrak Etanol Buah Lagenaria siceraria Pada Tikus Galur Sprague Dawley Yang Dipejani Doksorubisin Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk melihat pengaruh pemberian ekstrak buah Lagenaria siceraria pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin. Pemejanan ekstrak ekstrak buah Lagenaria siceraria dilakukan selama 10 hari yang kemudian dilanjutkan dengan pemejanan doksorubisin dengan dosis 4,5 mg/kg BB setiap 2 hari selama 6 hari. Pada penelitian ini digunakan variasi dosis ekstrak ekstrak buah Lagenaria siceraria sebesar 1000; 750; dan 500 mg/kg BB. Pencuplikan darah dilakukan 48 jam setelah pemejanan doksorubisin pada hari terakhir, sesuai hasil uji pendahuluan, dan organ jantung hewan uji diambil 4 hari setelah pemejanan doksorubisin pada hari terakhir (berdasarkan penelitian Xin et al. 2007). Parameter yang digunakan pada penelitian ini adalah kadar serum AST dalam darah, dan pengamatan histopatologi organ jantung hewan uji pada tiap kelompok. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 38 Hasil penelitian disajikan dalam tabel dan diagram batang sebagai berikut : Tabel II. Pengaruh perlakuan pemberian berbagai dosis ekstrak buah Lagenaria siceraria terhadap tikus yang dipejani doksorubisin yang diamati dari kadar serum AST Kelompok I II III IV V Purata kadar serum AST ± SE (U/L) 149,0 ± 7,6 290,2 ± 37,7 262,0 ± 39,8 309,2 ± 26,9 298,8 ± 59,3 Keterangan : I. : Kelompok kontrol pelarut II. : Kelompok kontrol doksorubisin III. : Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 1000 mg/kg BB + doksorubisin dosis 4,5 mg/Kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari IV. : Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 750 mg/kg BB + doksorubisin dosis 4,5 mg/Kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari V. : Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 500 mg/kg BB + doksorubisin dosis 4,5 mg/Kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari EELS = ekstrak etanol buah Lagenaria siceraria;SE = Standar Error Gambar 7. Kadar serum AST tikus dengan pemberian ekstrak buah Lagenaria siceraria pada berbagai variasi dosis Keterangan : 1 = Kelompok kontrol pelarut ; 2 = Kelompok kontrol doksorubisin; 3 = Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 1000 mg/kg BB; 4 = Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 750 mg/kg; 5 = Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 500 mg/kg PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 39 Tabel III. Hasil statistik pengaruh perlakuan pemberian berbagai dosis ekstrak buah Lagenaria siceraria terhadap tikus yang dipejani doksorubisin yang diamati dari kadar serum AST Kelompok I II III IV V I BB BB BB BB II BB BTB BTB BTB III BB BTB BTB BTB IV BB BTB BTB BTB V BB BTB BTB BTB - Keterangan : I : Kelompok kontrol pelarut II : Kelompok kontrol doksorubisin dengan dosis 4,5 mg/Kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari III : Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 1000 mg/kg BB + doksorubisin dosis 4,5 mg/Kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari IV : Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 750 mg/kg BB + doksorubisin dosis 4,5 mg/Kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari V : Kelompok kontrol perlakuan EELS dosis 500 mg/kg BB + doksorubisin dosis 4,5 mg/Kg BB setiap 2 hari sekali selama 6 hari EELS = ekstrak etanol buah Lagenaria siceraria; BB = berbeda bermakna (p<0,05) ; BTB = berbeda tidak bermakna (p>0,05) 1 1 2 2 (A) (B) 1 1 2 3 3 2 1 (C) (D) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 40 1 2 (E) Gambar 8. Gambaran histopatologi organ jantung tiap kelompok perlakuan (perbesaran 400x) Keterangan : A = kontrol doksorubisin; B = kontrol pelarut; C = EELS 1000 mg/kg BB; D = EELS 750 mg/kg BB; E = EELS 500 mg/kg BB; 1 = inti sel miokard jantung; 2 = sel miokard jantung; 3 = pembuluh darah Pada penelitian, hewan uji dikelompokan menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok kontrol pelarut, kontrol doksorubisin, dan 3 kelompok pemejanan EELS dengan dosis 100; 750; dan 500 mg/kg BB. Kelompok uji kontrol pelarut ditujukan untuk mengetahui apakah pelarut mempunyai pengaruh pada kadar AST dalam darah, memastikan peningkatan kadar serum AST hanya akibat pemejanan doksorubisin, dan memastikan bahwa penurunan kadar AST dalam darah pada hewan uji hanya akibat pemberian ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria. Berdasarkan Handbook of Pharmaceutical Excipients edisi 6 (2009), CMC Na tidak memiliki potensi untuk mempengaruhi kerusakan jantung. Efek samping dari pemberian CMC-Na secara peroral adalah efek pencaharnya yang mucul pada dosis 4-10 g setiap hari dengan nilai LD50 pada tikus sebesar 27 g/kg. Selain itu, berdasarkan Suckow et al. (2006), kadar serum AST normal pada tikus Sprague Dawley berumur 7-10 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 41 minggu adalah sebesar 77-157 U/L. Dari data yang didapat, hewan uji yang digunakan masih masuk dalam kisaran kadar serum AST normal, yang berarti hewan uji yang digunakan normal. Berdasarkan pengamatan histopatologi organ jantung pada kelompok kontrol pelarut (gambar 8), didapat hasil bahwa organ jantung hewan uji pada kelompok ini normal. Tidak ditemukan adanya tanda-tanda kerusakan pada sel jantung. Hasil ini semakin mempertegas hasil dari pengukuran kadar serum AST, bahwa pelarut yang digunakan tidak mempengaruhi kerusakan pada jantung. Dilakukan pula uji untuk kelompok kontrol doksorubisin dengan tujuan untuk melihat efek perusakan pada jantung yang diamati melalui pengamatan kadar AST dalam darah dan penampakan sel jantung akibat pemejanan doksorubisin. Dosis doksorubisin yang digunakan adalah 4,5 mg/kg BB tikus dengan pemberian setiap 2 hari selama 6 hari. Purata kadar serum AST yang didapat setelah pemberian doksorubisin sebesar 290,2 ± 37,673 U/L. Bila dibandingkan dengan kontrol pelarut, pemejanan doksorubisin menaikkan nilai serum AST sebesar 1,9 kali dari nilai serum AST kontrol pelarut (149 ± 7,56 U/L). Dari hasil statistik, didapat bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara kontrol pelarut dan kontrol doksorubisin, di mana terjadi kenaikan nilai serum AST (Tabel III). Kenaikan kadar serum AST ini disebabkan akibat kemampuan dari doksorubisin untuk merusak jantung akibat adanya efek radikal bebas dan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 42 adanya superoksida. Menurut Koti et al. (2009), jantung adalah jaringan utama yang menjadi efek dari kerusakan akibat radikal bebas. Hal ini disebabkan oleh rendahnya jumlah enzim/molekul yang dapat menangkap radikal bebas, seperti SOD dan GSH. Di sisi lain, doksorubisin memiliki afinitas yang tinggi pada komponen fosfolipid pada membran mitokondria sel jantung yang berakibat akumulasi doksorubisin pada jaringan jantung. Kerusakan pada mitokondria ini sangat berpengaruh pada kinerja jantung akibat adanya perubahan energi untuk metabolism (Lakshmi et al., 2009) Selain itu, doksorubisin juga dapat berikatan dengan membran dalam mitokondria dengan membentuk kompleks yang hampir ireversibel dengan kardiolipin, salah satu komponen penyusun membran dalam mitokondria. Kompleks ini akan menghalangi proses transport elektron di dalam mitokondria sehingga proses respirasi terganggu (Octavia et al., 2012). Hasil dari peningkatan kadar serum AST ini menegaskan bahwa kenaikan kadar serum AST dalam darah adalah akibat dari pemejanan doksorubisin. Peningkatan nilai serum AST yang terjadi pada kelompok perlakuan lainnya hanya merupakan akibat pemejanan doksorubisin, dan bukan akibat dari pelarut yang digunakan. Berdasarkan hasil pengamatan histopatologi organ jantung (gambar 8), pada kelompok kontrol doksorubisin tidak ditemukan tanda-tanda kerusakan pada sel jantung. Penampakan sel jantung masih sama dengan penampakan pada sel jantung normal. Dari hasil ini, didapat bahwa tidak PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 43 ditemukan kerusakan pada tingkatan sel jantung akibat pemejanan doksorubisin. Doksorubisin menyebabkan peningkatan kadar AST, tetapi belum sampai merusak sel-sel jantung. Hal ini diduga akibat dosis pemejanan doksorubisin yang tidak sampai merusak sampai tingkatan sel. Dosis yang digunakan sudah mampu meningkatkan kadar AST dalam darah, tetapi belum sampai menyebabkan kerusakan pada sel jantung. Dari penelitian yang dilakukan oleh Alkreathy et al. (2010), didapat bahwa kerusakan pada tingkatan sel jantung terjadi pada dosis sekali pemejanan doksorubisin sebesar 25 mg/kg BB pada hewan uji tikus. Kelainan yang terjadi yaitu inflamasi sel dan peri arterial fibrosis. Hasil penelitian Singh et al. (2012) dengan menggunakan dosis doksorubisin 10 mg/kg BB dalam sekali pemejanan menunjukkan adanya nekrosis pada sel jantung akibat pemejanan doksorubisin. Begitu pula dari hasil penelitian Raskovic, Stilinovic, Kolarovic, Vasovic, Vukmirovic, dan Mikov (2011), di mana ditemukan adanya hyperemia akibat pemejanan doksorubisin pada dosis 1,66 mg/kg BB yang diberikan setiap 2 hari sekali selama 12 hari. Dari beberapa hasil penelitian diatas, ditemukan perubahan berupa kerusakan pada penampakan sel jantung akibat pemejanan doksorubisin. Tetapi, pada penelitian ini tidak ditemukan kerusakan sel jantung pada kelompok pemejanan doksorubisin. Hal ini dapat disebabkan oleh beberapa sebab, seperti akibat dosis pemejanan doksorubisin yang digunakan belum mampu merusak sel, maupun kurangnya lama pemejanan doksorubisin. Dosis doksorubisin yang digunakan sudah PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 44 mampu meningkatkan kadar AST dalam darah, tetapi belum sampai menyebabkan kerusakan pada sel jantung. Kelompok perlakuan pada penelitian ini adalah kelompok hewan uji yang diberi ekstrak buah Lagenaria siceraria. Pemberian ekstrak buah Lagenaria siceraria pada tikus yang dipejani doksorubisin ditujukan untuk melihat potensi efek kardioprotektif dari sediaan ekstrak buah Lagenaria siceraria (EELS) yang diberikan. Efek kardioprotektif didasarkan pada penurunan kadar serum AST yang dibandingkan dengan kontrol doksorubisin. Dosis EELS yang digunakan sebesar 1000 mg/kg BB untuk kelompok III; 750 mg/kg BB untuk kelompok IV; dan 500 mg/kg BB untuk kelompok V. Penentuan dosis EELS yang digunakan merupakan perkiraan dosis yang mampu memberikan efek kardioprotektif, karena penelitian ini masih merupakan tahap skrining awal untuk mencari dosis yang efektif. Oleh karena disini masih merupakan tahap skrining dosis, maka digunakan peringkat dosis yang memiliki perbedaan yang cukup besar untuk melihat bagaimana potensi EELS pada dosis rendah, sedang, dan tinggi. Pemberian EELS selama 10 hari didasarkan pada penelitian dari Tatlidede et al. (2009), di mana ditemukan bahwa penggunaan terapi antioksidan selama kurang lebih dua minggu sebelum pemejanan akut doksorubisin secara signifikan dapat mengurangi pembentukan radikal bebas dari doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 45 Pada kelompok III, dengan pemberian EELS 1000 mg/kg BB dibandingkan dengan purata kadar serum AST dari kelompok doksorubisin dari hasil statistik didapat bahwa ditemukan perbedaan yang tidak bermakna (Tabel III). Begitu pula pada kelompok IV (pemberian EELS 750 mg/kg BB) dan kelompok V (pemberian EELS 500 mg/kg BB), ditemukan perbedaan yang tidak bermakna dengan kelompok doksorubisin (Tabel III). Dari hasil ini, secara statistika dikatakan bahwa pemejanan EELS belum mampu menurunkan kadar serum AST. Berdasarkan pengamatan histopatologi organ jantung (gambar 8), pada ketiga kelompok yang diberi EELS tidak ditemukan tanda-tanda kerusakan pada sel jantung. Hasil ini tidak dapat dijadikan acuan bahwa pemberian EELS dapat memberikan efek kardioprotektif bagi jantung. Hal ini disebabkan karena pada kelompok kontrol doksorubisin, juga tidak ditemukan kerusakan tingkat sel. Selain itu, dari hasil pengukuran kadar serum AST pada ketiga kelompok, juga ditemukan bahwa pemberian EELS belum mampu menurunkan kadar serum AST bila dibandingkan dengan kelompok kontrol doksorubisin. Secara teoritis, perlakuan pemberian EELS mampu menurunkan kadar AST dalam darah berdasarkan efek kandungan antioksidan dari buah Lagenaria siceraria, sesuai hasil penelitian Kubde et al. (2010). Hasil yang didapat ini dapat disebabkan oleh beberapa hal, seperti dosis EELS yang digunakan belum mencapai dosis efektifnya dalam PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 46 menurunkan kadar AST dalam darah, maupun pemberian EELS yang kurang lama. Menurut Laksmi et al. (2009), penggunaan antioksidan sendiri merupakan tahapan pertama dalam strategi untuk menangkal perusakan akibat peristiwa oksidatif. Antioksidan sendiri memiliki tiga tahap dalam sistem pertahanannya terhadap radikal bebas. Tahap pertama, yaitu melalui proses enzimatik, seperti meningkatkan produksi enzim-enzim yang bertanggungjawab terhadap kontrol dalam pembentukan dan poliferasi radikal bebas yang berasal dari molekul oksigen, seperti superoxide dismutases (SODs), glutathione peroxidases (GPx), dan katalase. Bila itu tidak berhasil, dilakukan tahap kedua, yaitu dengan meningkatkan vitamin C dan E yang mencegah poliferasi pembentukan radikal tahap kedua dalam rantai reaksi pembentukan radikal bebas. Tahap terakhir adalah dengan membuang seluruh molekul radikal dari tubuh. Tetapi disisi lain, ada beberapa antioksidan yang tidak memiliki kemampuan untuk mencegah penyakit kardiovaskular akibat radikal bebas. Hal ini disebabkan oleh reaksi redoks yang sangat kompleks pada kasus in vivo, dan ketidakmampuan untuk mendapat target reaksi redoks yang spesifik. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB V BAB V.KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) belum mampu mempengaruhi tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin melalui pengukuran kadar serum AST dalam darah dan melalui gambaran histopatologi sel jantung sampai dosis 1000 mg/kgBB. 2. Belum ditemukan dosis efektif ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) yang mampu menurunkan kadar AST dalam darah dan menyebabkan perubahan gambaran histopatologi sel jantung kembali normal pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin. B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang : 1. Dosis dan lama pemejanan doksorubisin sebagai kardiotoksin yang menyebabkan kerusakan tingkat sel. 2. Peningkatan dosis dan lama pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Lagenaria siceraria) yang mampu memberikan efek kardioprotektif. 47 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR PUSTAKA Alkreathy, H., Damanhouri, Z.A., Ahmed, N., Slevin, M., Ali, S.S., and Osman, A.M., 2010, Aged Garlic Extract Protects Against Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity In Rats, Food Chem. Toxicol., 48, 951-954. Anonim, 2012, Drug Bank, Doxorubicin, http://www.drugbank.ca/drugs/DB00997, diakses tanggal 12 Desember 2013. Bruton, L., Lazo, J. S., and Parker, K. L., 2005, Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition, McGrawHill, New York, pp. 35-40. Childs, A.C., Phaneuf, S.L., Dirks, A.J., Phillips, T., and Leeuwenburgh, 2002, Doksorubisin Treatment in Vivo Causes Cytochrome C Release and Cardiomyocyte Apoptosis, As Well As Increased Mitochondrial Efficiency, Superoxide Dismutase Activity, and Bcl-2:Bax Ratio, Cancer Research, 62, 4592-4598. De Jong, W., 2001, Kanker, Wat Heet?! Medische Informatie Over De Ziekte(n), De Behandeling En De Prognose, diterjemahkan oleh Astoeti Suharto Heerdjan, hal. 3, Arcan, Jakarta. Djojodibroto, R. D., 2003, Seluk Beluk Pemeriksaan Kesehatan (General Medical Check Up), Pustaka Populer Obor, Jakarta, pp. 59-60. Deshpande, J. R., Choudhari, A.A., Mishra,M. R., Meghre, V.S.,Wadodkar, S. G., and Dorle, A.K., 2008, Beneficial Effects Of Lagenaria Siceraria (Mol.) Standley Fruit Epicarp In Animal Models, I.J.E.B., Vol. 46, 234-242. Dirjen POM, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, p. 82. Fard, M.H., Naseh G., Bodhankar, S.L., and Dikshit, M., 2010, Cardioprotective activity of fruit of Lagenaria siceraria (Molina) Sandley on Doxorubicin induced Cardiotoxicity in rats, I.J. P., 8, 232- 238. Fimognari, C., Nusse, M.N., and Lenzi, M., 2006, Sulforaphane Increases The Efficacy of Doksorubisin in Mouse Fibroblasts Characterized Mutations, Mutation Research, 601, 92-101. Gorasiya, H.J., Paranjape, A.,and Murti, K., 2011, Pharmacognostic And Pharmacological Profile Of Lagenaria siceraria (Molina) Standley: A Review, Pharmacologyonline, 3, 317-324. 48 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 49 Han, X., Pan, J., Ren, D., Cheng, Y., Fan, P., and Lou, H., 2008, Naringenin-7-OGlucoside Protects Against Doxorubicin-Induced Toxicity In H9C2 Cardiomyocytes By Induction Of Endogenous Antioxidant Enzymes, Food Chem. Toxicol., 46,3140-3146. Hariyanto, V.A., 2013, Efek Hepatoprotektif Ekstrak Etanolik Buah Labu Air (Lagenaria Siceraria) Pada Tikus Jantan Galur Sprague Dawley Yang Dipejani Doksorubisin, Skripsi (unpublished), Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Joyce L. K., 2007, Pedoman Pemeriksaan Laboratorium & Diagnostik, EGC, Jakarta, pp. 55-56. Kalivendi, S.V., Konorev, E.A., Cunningham, S., Vanamala, S.K., Kaji E.H., Joseph J., et al., 2005, Doxorubicin Activates Nuclear Factor Of Activated T-Lymphocytes And Fas Ligand Transcription: Role Of Mitochondrial Reactive Oxygen Species And Calcium, Biochem J., 389, 39- 27 Kubde, M.S., 2010, Lagenaria siceraria: Phytochemistry, Pharmacognosy and pharmacological studies, Report and Opinion, 2(3), 91-98. Koti, B.C., Vishwanathswamy, A.H.M., Wagawade, J., and Thippeswamy, A.H.M., 2009, Cardioprotective Effect Of Lipistat Against Doxorubicin Induced Myocardial Toxicity In Albino Rats, I.J.E.B., Vol. 47, 44. Lakshmi, S.V.V., Padmaja, G., Kuppusamy, P., and Kutala, V.K., 2009, Oxidative Stress in Cardiovascular Disease, I.J.B.B., Vol 48, 423-425. Minotti, G., Menna, P., Salvatorelli, E., Cairo,G., and Gianni, L., 2004. Anthracyclins: Molecular Advances and Pharmacologic Developments in Antitumor Activity and Cardiotoxicity, Pharmacol Rev., 56, 85-228. Muttaqin, A., 2009, Pengantar Asuhan Keperawatan dengan Gangguan Sistem Kardiovaskular, Penerbit Salemba Medika, Jakarta, p. 20-24. Octavia, Y., Tocchetti, C.G., Gabrielson, L., Janssens, S., Crijns, H.J, and Moens, A.L., 2012, Doxorubicin-induced cardiomyopathy: From molecular mechanisms to therapeutic strategies, J.M.C.C., 52, 1214-1215. Otto, S., E., 1996, Buku Saku Keperawatan Onkologi, diterjemahkan oleh Eny Meiliya S.Kp , hal 339, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Otto, S.E., 2005, Buku Saku Keperawatan Onkologi, diterjemahkan oleh Jane F.B., hal 339-340, EGC, Jakarta. Raskovic, A., Stilinovic, N., Kolarovic, J., Vasovic, V., Vukmirovic, S., and Mikov, M., 2011, The Protective Effects of Silymarin against Doxorubicin- PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 50 Induced Cardiotoxicity and Hepatotoxicity in Rats, Molecules, 16, 86018613. Rowe, R. C., Sheskey, P. J., and Quinn, M. E., 2009, Handbook of Pharmaceutical Excipients, Sixth Edition, Pharmaceutical Press, London, p. 119. Ruddon, R.W., 2009, Cancer Biology, Fourth Edition, Oxford University Press, New York, pp. 10,11,14, 31,32. Sacher, A. R., and McPherson A. R., 2004, Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan Laboratorium, Edisi 11, ditermahkan oleh dr. Brahm U. Pendit dan dr. Dewi Wulandari, hal 352-353, Penerbit Buku Kedokteran ECG, Jakarta. Schimmel, K., Richel, D., van den Brink, R., and Jan Guchelaar, H., 2004, Cardiotoxicity of Cytotoxic Drugs, Cancer Treat. Rev., 30, 79-80. Shah, S., Mohan, M.M., Kasture, S., Sanna, C., and Maxia, A., 2009, Protective Effect of Ephedra nebrodensis on Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity in Rats, I.J.P.T., 8, 61-66. Shi, 2011, Mechanisms and management of doxorubicin cardiotoxicity, Herz, USA, p. 57. Singh, M.K., Mohd, F., Ayaz, A., Ankur, S., and Jyoti, Y., 2012, Protective effect of lagenaria siceraria against doxorubicin induced cardiotoxicity in wistar rats, I.J.D.D.R., Vol. 4, Issue 2, 298-305. Stephens, J.M., 2009, Gourd, Cucuzzi — Lagenaria siceraria(Mol.) Standl., University of Florida, p.1. Suckow, M.A., Weisbroth, S.H., Franklin, C.L., 2006, The Laboratory Rat, second edition, Elsevier Academic Press, California, p. 133. Tatlidede, E., Sehirli, O., Velioglu-Ogunc A., Cetinel, S., Yegen, B.C., and Yarat A., 2009, Resveratrol Treatment Protects Against Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity By Alleviating Oxidative Damage. Free Radic Res., 43, 195–205. Tim Cancer Helps, 2010, Stop Kanker, AgroMedia Pustaka, Jakarta, p. 5-7. Tyagi, N., Sharma, G.N., and Hooda, V., 2012, Phytochemical And Pharmacological Profile Of Lagenaria siceraria: An Overview, I.R.J.P., 14. Upaganlawar, A., and Balaraman, R., 2010, Protective Effect of Lagenaria siceraria (Molina) Fruit Juice in Isoproterenol Induced Myocardial Infraction, I.J.P, 1-7 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 51 Vijayakusumar, M., Selvi, V., and Krishnakumari, S., 2010, Cardioprotective Effect Of Lagenaria siceraria (Mol) Ameliorates Isoproterenol-Induced Cardiac Toxicity In Rats By Stabilizing Cardiac Mitochondrial And Lysosomal Enzymes, T.&E.C, Volume 93, Issue 1. WHO, 2012, GLOBOCAN 2008, http://globocan.iarc.fr/factsheets/populations/factsheet.asp?uno=900, diakses 15 April 2012. Wattanapitayakul, S.K., Chularojmontri, L., and Herunsalee, A., 2005, Screening of Antioxidants from Medicinal Plants for Cardioprotective Effect against Doxorubicin Toxicity, Basic and Clin, Pharmacol & Toxicol, 96, 7-80. Wijayakusuma, H. M. H., 2008, Atasi Kanker Dengan Tanaman Obat, Puspa Swara, Jakarta, p. 2. Xin, Y.F., Zhou, G. L., Deng, Z.Y., Chen, Y. X., Wu, Y.G., Xu, P.S., Xuan, Y.X., 2007, Protective Effect of Lycium barbarum onDoxorubicin-induced Cardiotoxicity, Phytother. Res,21, 1020-1024. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI IRN LAMPIRAN 52 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 1. Data buah labu air (Lagenaria siceraria) Panjang = 14 inci Diameter leher = 4,9 inci Diameter badan = 12,5 cm Panjang biji = 12 mm Warna = hijau muda Lampiran 2. Foto buah labu air (Lagenaria siceraria) Lampiran 3. Perhitungan rendemen ekstrak etanolik buah Lagenaria siceraria Bobot serbuk Lagenaria siceraria yang digunakan : 180 gram Bobot ekstrak kental Lagenaria sicerariayang didapat : 68 gram Rendemen = = = 37,778 % x 100% 53 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 54 Lampiran 4. Kadar air serbuk etanolik buah Lagenaria siceraria dengan metode gravimetri Replikasi 1 : 9,44 % Replikasi 2 : 4,47 % Replikasi 3 : 9,68 % Rata-rata = = 7,86 % Lampiran 5. Analisis statistik perbandingan nilai serum AST antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada kontrol pelarut Group Statistics perlakuan AST N Mean Std. Deviation Std. Error Mean 0 jam 5 141.0000 32.62668 14.59109 48 jam 5 149.0000 16.89675 7.55645 dimensi on1 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means 95% Confidence Interval of the Sig. (2F AST Equal variances Sig. 1.261 .294 t df - Mean Std. Error tailed) Difference Difference 8 .639 -8.00000 16.43168 .487 Difference Lower Upper - 29.89151 45.89151 assumed Equal variances not assumed - 6.002 .487 .644 -8.00000 16.43168 - 32.20422 48.20422 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 55 Lampiran 6. Analisis statistikpengaruh perlakuan pemberian berbagai dosis ekstrak buah Lagenaria siceraria terhadap tikus yang dipejani doksorubisin yang diamati dari nilai serum AST Descriptive Statistics N Minimum Maximum AST 25 Valid N 25 121.00 Mean 463.00 Std. Deviation 261.8400 98.22155 (listwise) NPar Tests Descriptive Statistics N AST Mean 25 Std. Deviation 261.8400 Minimum 98.22155 121.00 One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST N Normal Parameters 25 a,b Mean 261.8400 Std. Deviation 98.22155 Most Extreme Absolute .125 Differences Positive .125 Negative -.095 Kolmogorov-Smirnov Z .626 Asymp. Sig. (2-tailed) .827 a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. Oneway Maximum 463.00 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 56 Descriptives AST N Control Doxo E1 E2 E3 Total 5 5 5 5 5 25 Mean 149.0000 290.2000 262.0000 309.2000 298.8000 261.8400 Std. Deviation 16.89675 84.23895 88.93256 60.09742 132.47528 98.22155 Std. Error 7.55645 37.67280 39.77185 26.87638 59.24475 19.64431 95% Confidence Interval for Mean Upper Lower Bound Bound 128.0199 169.9801 185.6035 394.7965 151.5756 372.4244 234.5792 383.8208 134.3102 463.2898 221.2961 302.3839 Descriptives AST Control Doxo E1 E2 E3 Total Minimum Maximum 121.00 162.00 191.00 424.00 155.00 399.00 220.00 385.00 136.00 463.00 121.00 463.00 Test of Homogeneity of Variances AST Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.443 4 20 .080 ANOVA AST Between Groups Within Groups Total Post Hoc Tests Sum of Squares 85730.960 145808.400 231539.360 df 4 20 24 Mean Square 21432.740 7290.420 F 2.940 Sig. .046 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 57 Multiple Comparisons AST LSD (I) (J) perlakuan perlakuan kontrol doxo E1 E2 E3 95% Confidence Interval Mean Difference Std. (I-J) Error Sig. Lower Upper Bound Bound doxo -141.20000* 54.00156 .017 -253.8453 -28.5547 E1 -113.00000* 54.00156 .049 -225.6453 -.3547 E2 -160.20000* 54.00156 .008 -272.8453 -47.5547 E3 -149.80000* 54.00156 .012 -262.4453 -37.1547 141.20000* 54.00156 .017 28.5547 253.8453 E1 28.20000 54.00156 .607 -84.4453 140.8453 E2 -19.00000 54.00156 .729 -131.6453 93.6453 E3 -8.60000 54.00156 .875 -121.2453 104.0453 113.00000* 54.00156 .049 .3547 225.6453 doxo -28.20000 54.00156 .607 -140.8453 84.4453 E2 -47.20000 54.00156 .392 -159.8453 65.4453 E3 -36.80000 54.00156 .503 -149.4453 75.8453 160.20000* 54.00156 .008 47.5547 272.8453 doxo 19.00000 54.00156 .729 -93.6453 131.6453 E1 47.20000 54.00156 .392 -65.4453 159.8453 E3 10.40000 54.00156 .849 -102.2453 123.0453 149.80000* 54.00156 .012 37.1547 262.4453 8.60000 54.00156 .875 -104.0453 121.2453 E1 36.80000 54.00156 .503 -75.8453 149.4453 E2 -10.40000 54.00156 .849 -123.0453 102.2453 kontrol kontrol kontrol kontrol doxo *. The mean difference is significant at the 0.05 level. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 7. Surat persetujuan Ethics Committee 58 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 8. Surat determinasi tanaman 59 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 60 BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi berjudul ―Pengaruh Ekstrak Etanolik Buah Labu Air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) terhadap Kadar AST dalam Darah Pada Tikus Jantan Galur Sprague Dawley yang Dipejani Doksorubisin” memiliki nama lengkap Reza Eka Putra, merupakan putra pertama dari pasangan Rusdarmawan dan B. Istiananingsih Ekowati. Penulis dilahirkan di Tangerang pada tanggal 24 Juli 1991. Pendidikan formal yang pernah ditempuh, yaitu Taman Kanak-Kanak Sang Timur Ciledug, Tangerang (1995-1997), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD Sang Timur Ciledug, Tangerang (1997 dan 2000) dan SD Kanisius Demangan Baru Sleman, Yogyakarta (1998-1999 dan 2001-2003). Kemudian penulis melanjutkan pendidikan di tingkat Sekolah Menengah Pertama di SMPN 8 Yogyakarta (20032006) dan melanjutkan di tingkat Sekolah Menengah Atas di SMA Kolese De Britto Yogyakarta (2006-2009). Penulis kemudian melanjutkan studi di pendidikan sarjana di Universitas Sanata Dharna Yogyakarta Fakultas Farmasi pada tahun 2009. Selama menempuh masa perkuliahan, penulis tercatat pernah menjabat sebagai Komisaris ISMAFARSI pada periode 2011-2012. Selain itu, penulis juga aktif dalam beberapa kegiatan baik dalam tingkat fakultas maupun diluar fakultas seperti Panitia Pharmacy Performance pada tahun 2009 sebagai seksi konsumsi, Panitia Kampanye Informasi Obat pada tahun 2010 sebagai ketua, dan menjadi peserta pada beberapa kegiatan di luar fakultas, seperti Kampanye Informasi Obat Nasional yang dilaksanakan oleh Fakultas MIPA UII (2010).
