LAPORAN TETAP PRAKTIKUM TEKNOLOGI BIOPROSES

LAPORAN TETAP
PRAKTIKUM TEKNOLOGI BIOPROSES
IDENTITAS PRAKTIKAN
I.
Nama
: Ummu Fithanah
NIM
: 03031281320011
Shift/Kelompok
: Kamis siang/5 (Lima)
JUDUL PERCOBAAN
: Pembuatan Medium
II. TUJUAN PERCOBAAN
1. Dapat membuat media untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan
mikrobia.
2. Mengetahui syarat-syarat yang diperlukan untuk membuat medium yang baik
bagi pertumbuhan mikrobia.
3. Mengetahui cara mensterilkan medium agar mikrobia dapat berkembang biak.
III. DASAR TEORI
Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari
campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk
pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekulmolekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media
pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan
juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya . Kelangsungan hidup dan
pertumbuhan mikroorganisme tergantung pada nutrisi yang tersedia dan
lingkungan pertumbuhan yang menguntungkan.
Di dalam laboratorium, persiapan gizi yang digunakan untuk menum
buhkan mikroorganisme disebut media (tunggal, sedang). Tiga bentuk fisik yang
digunakan cair atau kaldu, media; media setengah padat dan
media padat.
Perbedaan utama antara media-media ini adalah media padat dan setengah padat
berisi bahan pemadat (biasanya agar-agar), sedangkan media cair tidak. Media
untuk budidaya mikroorganisme mengandung zat-zat yang diperlukan untuk
mendukung pertumbuhan dari mikroorganisme. Karena keragaman mikroorganis
1
me dan jalur metabolik mereka yang beragam, ada berbagai media. Bahkan se
dikit perbedaan komposisi medium bisa menghasilkan perbedaan secara dramatis
pertumbuhan karakteristik mikroorganisme. Ketika metode untuk kultur mikro
organisme pertama kali dikembangkan pada abad ke-19, sebagian besar oleh
Robert Koch dan rekannya, jaringan hewan dan tumbuhan yang terutama di
gunakan sebagai sumber nutrisi yang digunakan untuk mendukung pertumbuhan
mikroba. Salah satu penemuan utama Fanny Hesse di laboratorium Koch adalah
bahwa agar-agar dapat digunakan untuk membentuk kultur media dimana mikro
organisme dapat tumbuh. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat
mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media
pertumbuhannya. Ekstrak tumbuhan dan jaringan hewan disusun sebagai kaldu
atau dicampur dengan agar-agar untuk membentuk berbagai kultur media.
3.1.
Medium
Medium adalah substansi yang terdiri atas campuran zat-zat makanan
(nutrien)
yang
dipergunakan
untuk
pemeliharaan
dan
pertumbuhan
mikroorganisme. Mikroorganisme juga merupakan mahluk hidup, untuk
memeliharanya dibutuhkan medium yang harus mengandung semua zat yang
diperlukan untuk pertumbuhannya, yaitu antara lain senyawa-senyawa organik
(protein, karbohidrat, lemak, mineral, dan vitamin). Medium digunakan untuk
melihat gerakan dari suatu gerakan mikroorganisme apakah bersifat motil atau
non motil, medium ini ditambahkan bahan pemadat 50%. Untuk keperluan
hidupnya, semua makhluk hidup memerlukan bahan makanan. Bahan makanan ini
diperlukan untuk sintesis bahan sel dan untuk mendapatkan energi. Demikian juga
dengan mikroorganisme, untuk kehidupannya membutuhkan bahan-bahan organik
dan anorganik dari lingkungannya . Bahan-bahan tersebut disebut dengan nutrient
(zat gizi), sedang proses penyerapanya disebut proses nutrisi . Peran utama nutrien
adalah sebagai sumber energi, bahan pembangun sel, dan sebagai aseptor elektron
dalam reaksi bioenergetik (reaksi yang menghasilkan energi). Oleh karenanya
bahan makanan yang diperlukan terdiri dari air, sumber energi, sumber karbon,
sumber aseptor elektron, sumber mineral, faktor pertumbuhan, dan nitrogen.
Bahan yang sering digunakan dalam pembuatan media yaitu:
2
1.
Agar, agar-agar dapat diperoleh dalam bentuk batangan, granula atau
bubuk dan terbuat dari beberapa jenis rumput laut. Kegunaannya adalah
sebagai pemadat (gelling) yang pertama kali digunakan oleh Fraw &
Walther Hesse untuk membuat media. Jika dicampur dengan air dingin,
agar tidak akan larut. Untuk melarutkannya harus diasuk dan dipanasi,
pencairan dan pemadatan berkali-kali atau sterilisasi yang terlalu lama
2.
dapat menurunkan kekuatan agar, terutama pada pH yang asam.
Peptone, peptone adalah produk hidrolisis protein hewani atau nabati
seperti otot, liver, darah, susu, casein, lactalbumin, gelatin dan kedelai.
Komposisinya tergantung pada bahan asalnya dan bagaimana cara
3.
memperolehnya.
Ekstrak daging. Ekstrak daging mengandung basa organik terbuat dari
4.
otak, limpa, plasenta dan daging sapi.
Ekstrak ragi. Ekstrak ragi terbuat dari ragi pengembang roti atau pembuat
alcohol. Yeast extract mengandung asam amino yang lengkap & vitamin
5.
(B complex).
Karbohidrat. Karbohidrat ditambahkan untuk memperkaya pembentukan
asam amino dan gas dari karbohidrat. Jenis karbohidrat yang umumnya
3.2.
digunakan dalam amilum, glukosa, fruktosa, sukrosa, dan lain-lain
Jenis-jenis Medium
Medium yang umum digunakan digolongkan ke dalam tiga jenis, yaitu
medium berdasarkan sifat fisiknya adalah sebgai berikut:
1. Medium padat yaitu media yang mengandung agar 15% sehingga setelah
2.
dingin media menjadi yang padat.
Medium setengah padat yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4%
sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semi
solid dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar
ke seluruh media tetapi tidak mengalami percampuran sempurna jika
tergoyang. Misalnya bakteri yang tumbuh pada media NfB (Nitrogen free
Bromthymol Blue) semisolid akan membentuk cincin hijau kebiruan di
bawah permukaan media, jika media ini cair maka cincin ini dapat dengan
mudah hancur. Semisolid juga bertujuan untuk mencegah/menekan difusi
oksigen, misalnya pada media Nitrate Broth, kondisi anaerob atau sedikit
3
oksigen meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini juga
3.
diharuskan tumbuh merata diseluruh.
Medium cair yaitu media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah
NB (Nutrient Broth), LB (Lactose Broth).
Medium berdasarkan komposisinya adalah sebagai berikut:
1.
Medium sintesis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis
2.
dan takarannya secara pasti, misalnya Agar glukosa, Agar Mac Conkey.
Medium semi sintesis yaitu media yang sebagian komposisinya diketahui
secara pasti, misanya PDA (Potato Dextrose Agar) yang mengandung
agar, dekstrosa dan ekstrak kentang. Untuk bahan ekstrak kentang, kita
tidak dapat mengetahui secara detail tentang komposisi senyawa
3.
penyusunnya.
Medium non sintesis yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang
tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung saja diekstrak
dari bahan-bahan dasarnya, misalnya contoh dari agar jus tomat, agar dari
infuse hati & otak, ekstrak dari pankreatik.
Medium berdasarkan tujuannya adalah sebagai berikut:
1.
Media untuk isolasi, media isolasi ini mengandung semua senyawa
esensial yang berguna untuk pertumbuhan mikroba, misalnya Nutrient
2.
Broth, agar darah.
Media selektif/penghambat, media yang selain mengandung nutrisi juga
ditambah suatu zat tertentu sehingga media tersebut dapat menekan
pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan mikroba yang
diinginkan. Contohnya adalah medium Luria Bertani yang ditambah
Amphisilin untuk merangsang resisten antibotik E.coli dan menghambat
kontaminan yang peka, Ampiciline. Salt broth yang ditambah NaCl 4%
3.
untuk membunuh Streptococcus agalactiae yang toleran terhadap garam.
Media diperkaya (enrichment), media diperkaya adalah media yang
mengandung komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah
komponen kompleks seperti darah, serum, kuning telur. Media diperkaya
juga bersifat selektif untuk mikroba tertentu. Bakteri yang ditumbuhkan
dalam media ini tidak hanya membutuhkan nutrisi sederhana untuk
4
berkembang biak, tetapi membutuhkan komponen kompleks, misalnya
4.
agar darah telurit, agar Bile, agar serum, dll.
Media untuk peremajaan kultur, media umum atau spesifik yang
5.
digunakan untuk peremajaan kultur
Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesifik, media ini digunakan
unutk mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu mikroba.
Contohnya adalah Koser’s Citrate medium, yang digunakan untuk menguji
6.
kemampuan menggunakan asam sitrat sebagai sumber karbon.
Media untuk karakterisasi bakteri, media yang digunakan untuk
mengetahui kemempuan spesifik suatu mikroba. Kadang-kadang indikator
ditambahkan untuk menunjukkan adanya perubahan kimia. Contohnya
7.
adalah Nitrate Broth, Lactose Broth, Arginine Agar.
Media diferensial, media ini bertujuan mengidentifikasi mikroba dari
campurannya yang berdasarkan karakter spesifik yang ditunjukkan pada
media diferensial, misalnya sebuah TSIA (Triple Sugar Iron Agar) yang
mampu memilih Enterobakteria dari berdasarkan bentuk, warna, ukuran
3.3.
koloni dan juga perubahan warna media yang terdapat di sekeliling koloni.
Media yang sering digunakan secara umum
Media berfungsi untuk menumbuhkan mikroba, isolasi, memperbanyak
jumlah, menguji sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba, dimana
dalam proses pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis
untuk menghindari kontaminasi pada media. Berikut ini beberapa media yang
sering digunakan secara umum dalam mikrobiologi:
a)
Lactose Broth
Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi kehadiran
koliform dalam air, makanan, dan produk susu, sebagai kaldu pemerkaya (preenrichment broth) untuk Salmonellae dan dalam mempelajari fermentasi
laktosa oleh bakteri pada umumnya. Pepton dan ekstrak daging sapi
menyediakan nutrien esensial untuk memetabolisme bakteri. Laktosa
menyediakan sumber karbohidrat yang dapat difermentasi untuk organisme
koliform. Pertumbuhan dengan pembentukan gas adalah tes awal untuk
5
koliform. Lactose broth dibuat dengan komposisi 0,3% ekstrak beef; 0,5%
pepton; dan 0,5% senyawa dari laktosa.
b)
EMBA (Eosin Methylene Blue Agar)
Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistimewaan mengandung
laktosa dan berfungsi untuk memilah mikroba yang memfermentasikan laktosa
seperti S. aureus, P. aerugenosa, dan Salmonella. Mikroba yang memfer
mentasi laktosa menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap dengan kilap
logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya tidak berwarna .
Adanya eosin dan methilen blue membantu mempertajam perbedaan tersebut.
Namun demikian, jika media ini digunakan pada tahap awal karena kuman lain
juga tumbuh terutama P. Aerugenosa dan Salmonella sp dapat me nimbulkan
keraguan. Bagaimanapun media ini sangat baik untuk mengkonfirmasi bahwa
kontaminan tersebut adalah E.coli.
Agar EMB (levine) merupakan media padat yang dapat digunakan untuk
menentukan jenis bakteri coli dengan memberikan hasil positif dalam tabung.
EMB yang menggunakan eosin dan metilin blue sebagai indikator memberikan
perbedaan yang nyata antara koloni yang meragikan laktosa dan yang tidak.
Medium tersebut mengandung sukrosa karena kemampuan bakteri koli yang
lebih cepat meragikan sukrosa daripada laktosa. Untuk mengetahui jumlah
bakteri coli umumnya digunakan tabel Hopkins yang lebih dikenal dengan
nama MPN (most probable number) atau tabel JPT (jumlah perkiraan terdekat),
tabel tersebut dapat digunakan untuk memperkirakan jumlah banyaknya
bakteri coli dalam 100 ml dan 0,1 ml contoh air.
c)
Nutrient Agar
Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. NA
juga digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak
selektif, dalam artian mikroorganisme heterotrof. Media ini merupakan media
sederhana yang dibuat dari ekstrak beef, pepton, dan agar. Na merupakan salah
satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa
6
dari air, sewage, produk pangan, untuk membawa stok kultur, untuk per
tumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme dalam
kultur murni. Untuk komposisi nutrien adar adalah eksrak beef 10 g, pepton 10
g, NaCl 5 g, air desitilat 1.000 ml dan 15 g agar/L. Agar dilarutkan dengan
komposisi lain dan disterilisasi dengan autoklaf pada 121°C selama 15 menit.
Kemudian siapkan wadah sesuai yang dibutuhkan.
d)
Nutrient Broth
Nutrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk
cair. Intinya sama dengan nutrient agar . Nutrient broth dibuat dengan cara
sebagai berikut:
1.
2.
Larutkan 5 g pepton dalam 850 ml air distilasi/akuades.
Larutkan 3 g ekstrak daging dalam larutan yang dibuat pada langkah
3.
4.
5.
e)
pertama.
Atur pH sampai 7,0.
Beri air distilasi sebanyak 1.000 ml.
Sterilisasi dengan autoklaf.
MRSA (deMann Rogosa Sharpe Agar)
MRSA merupakan media yang diperkenalkan oleh De Mann, Rogosa, dan
Shape(1960) untuk memperkaya, menumbuhkan, dan mengisolasi jenis bakteri
Lactobacillus dari seluruh jenis bahan. MRS agar mengandung polysorbat,
asetat, magnesium, dan mangan yang diketahui untuk beraksi/bertindak sebagai
faktor pertumbuhan bagi Lactobacillus, sebaik nutrien diperkaya MRS agar
tidak sangat selektif, sehingga ada kemungkinan Pediococcus dan jenis
Leuconostoc serta jenis bakteri lain dapat tumbuh. MRSB merupakan media
yang serupa dengan MRSA yang berbentuk cair/broth. MRS agar mengandung:
protein dari kasein 10 g/L, ekstrak daging 8,0 g/L, ekstrak ragi 4,0 g/L,
d(+)glukosa 20 g/L, magnesium sulfat 0,2 g/L, agar-agar 14 g/L, dipotassium
hidrogen phosphate 2 g/L, tween 80 1,0 g/L, diamonium hidrogen sitrat 2 g/L,
natrium asetat 5 g/L, dan mangan sulfat 0,04 g/L.
f)
TSB (Trypticase Soy Broth)
TSB adalah media broth diperkaya untuk tujuan umum, untuk isolasi, dan
penumbuhan bermacam mikroorganisme. Media ini banyak digunakan untuk
7
isolasi bakteri dari spesimen laboratorium dan akan mendukung pertumbuhan
mayoritas bakteri patogen. Media TSB mengandung kasein dan pepton kedelai
yang menyediakan asam amino dan substansi nitrogen lainnya yang
membuatnya menjadi media bernutrisi untuk bermacam mikroorganisme.
Dekstrosa adalah sumber energi dan natrium klorida mempertahankan.
g)
PCA (Plate Count Agar)
PCA digunakan sebagai medium untuk mikroba aerobik dengan inokulasi
di atas permukaan. PCA dibuat dengan melarutkan semua bahan (enzim
hidrolisa kasein, ekstrak ragi, dekstrosa, agar) hingga membentuk suspensi 22,5
g/L kemudian disterilisasi pada autoklaf (15 menit pada suhu 121°C). Media
PCA ini baik untuk pertumbuhan total mikroba (semua jenis mikroba) karena di
dalamnya mengandung komposisi enzim hidrolisa kasein yang menyediakan
asam amino dan substansi nitrogen komplek lainnya serta ekstrak yeast
mensuplai vitamin B kompleks.
h)
APDA
Media APDA berfungsi untuk menumbuhkan dan menghitung jumlah
khamir dan yeast yang terdapat dalam suatu sampel . Khamir dan yeast akan
tumbuh dengan optimal pada media yang sesuai. Adanya asam tartarat dan pH
rendah maka pertumbuhan bakteri terhambat. APDA dibuat dengan merebus
kentang selama 1 jam/45 menit, agar dilelehkan dalam 500 ml air. Campurkan
ekstrak kentang dalam agar lalu ditambahkan glukosa dan diaduk rata. Pada
APDA jadi ini juga ditambah asam tartarat.
i) Potato Dextrose Agar (PDA)
PDA digunakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan
kapang. Dapat juga digunakan untuk enumerasi yeast dan kapang dalam suatu
sampel atau produk makanan. PDA mengandung sumber karbohidrat dalam
jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga
baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk
pertumbuhan bakteri. Cara membuat PDA adalah mensuspensikan 39 g media
dalam 1 liter air yang telah didestilasi. campur dan panaskan serta aduk.
Didihkan selama 1 menit untuk melarutkan media secara sempurna. Sterilisasi
8
pada suhu 121°C selama 15 menit . Dinginkan hingga suhu 40-45°C dan tuang
dalam cawan petri dengan pH akhir.
j)
VRBA (Violet Red Bile Agar)
VRBA dapat digunakan untuk perhitungan kelompok bakteri Entero
bactericeae. Agar VRBA mengandung violet kristal yang bersifat basa,
sedangkan sel mikroba bersifat asam. Bila kondisi terlalu basa maka sel akan
mati. Dengan VRBA dapat dihitung jumlah bakteri E.coli. Bahan-bahan yang
dibutuhkan untuk membuat VRBA adalah yeast ekstrak, pepton, NaCl, empedu
,glukosa, neutral red, kristal violet, agar). Bahan-bahan tersebut kemudian di
campur dengan 1 liter air yang telah didestilasi. Panaskan hingga mendidih
sampai larut sempurna. Dinginkan hingga 50-60°C. Pindahkan dalam tabung
sesuai kebutuhan, pH akhir adalah 7,4. Yeast ekstrak menyediakan vitamin Bkompleks yang mendukung pertumbuhan bakteri.
k)
PGYA
Media ini berfungsi untuk isolasi, enumerasi, dan menumbuhkan sel
khamir. Dengan adanya dekstrosa yang terkandung dalam media ini, PGYA
dapat digunakan untuk mengidentifikasi mikroba terutama sel khamir . Untuk
membuatnya, semua bahan dicampur dengan ditambah CaCO3 terlebih dahulu
sebanyak 0,5 g lalu dilarutkan dengan akuades. Kemudian dimasukkan ke
dalam erlenmeyer setelah itu disumbat dengan kapas secukupnya lalu
disterilisasi pada suhu 121°C selama 15 menit.
3.4.
1.
Cara Mensterilkan Medium
Sterilisasi sederhana
Mensterilkan medium cukup dengan mendidihkan medium tersebut, se
lama beberapa jam lamanya, maka semua benih kehidupan yang ada akan mati,
hal ini telah di lakukan oleh ilmuwan Spallanzani (1729–1788) untuk
membuktikan tidak mungkinnya abiogenesis.
2.
Tyndallisasi
Mendidihkan medium dengan uap dalam beberapa menit. Didiamkan 1
hari, spora akan tumbuh menjadi bakteri vegetatif dan medium dididihkan lagi
9
beberapa menit. Pada hari ketiga medium tersebut di didihkan lagi, dengan
jalan inilah diperoleh medium yang steril.
3.
Dengan Autoklaf
Autoklaf adalah alat serupa tangki minyak yang diisi uap. Medium yang
akan disterilkan ditempatkan dalam autoklaf selama 15 - 20 menit, tergantung
banyaknya medium. Medium yang disterilkan sebaiknya diletakkan dalam
botol agak kecil, setelah pintu autoklaf ditutup rapat, baru kran pipa uap dibuka
dan temperatur akan naik sampai 121 oC. Setelah cukup waktu, kran uap
ditutup, suhu mulai turun sedikit demi sedikit. Autoklaf dibuka secara perlahan bila
termometer telah menunjukkan angka nol, setelah dingin dikeluarkan dari
autoklaf dan setelah stabil disimpan dalam lemari es.
4.
Dengan Penyaringan (Filtrasi)
Medium disaring dengan saringan porselin, maka zat organik tidak
mengalami penguraian sama sekali, sehabis penyaringan medium masih perlu
dipanasi dalam autoklaf meskipun tidak selama 15 menit dan temperatur 121
C. Penyaringan dilakukan dengan saringan yang terbuat dari asbes karena
o
mudah untuk dapat dibersihkan setelahnya.
3.5.
Penyiapan Media
Media alamiah, misalnya susu skim, tidak begitu sulit di dalam
penyiapannya sebagai media pertumbuhan mikroba, karena hanya cukup dengan
dituang ke dalam wadah yang telah disterilkan . Media dalam bentuk kaldu nutrien
atau yang mengandung agar, disiapkan dengan cara melarutkan masing-masing
bahan yang dibutuhkan atau lebih mudah lagi dengan cara menambahkan air pada
suatu produk komersial berbentuk medium bubuk yang sudah mengandung semua
nutrien yang dibutuhkan. Pada praktisnya, semua media tersebut secara komersial
dalam bentuk bubuk, seperti PCA (Plate Count Agar), NA (Nutrient Agar), TSA
(Trypticase Soy Agar) dan lain lain. Penyiapan media komersial ini pada
umumnya mengikuti langkah-langkah sebagai berikut :
1.
Setiap komponen atau medium terhidrasi (bubuk) dilarutkan ke dalam
aquades atau air suling pada volume yang tepat dan sesuai.
10
2.
pH media ditentukan dan disesuaikan dengan nilai optimum pertumbuhan
3.
mikroba sebagaimana tertera pada kemasan media komersial.
Dituang ke dalam media yang sesuai, seperti erlenmeyer atau tabung labu
dan disumbat dengan penutup yang kuat.
4. Disterilisasi dengan suhu dan waktu yang adequate (memadai) sesuai
dengan yang tertera pada kemasan. (Umumnya di suhu 121oC, 15 menit).
Pembuatan medium Potato Dextrose Agar (PDA), kentang sudah
ditimbang dan direbus, dengan ukuran kentang 50,31 g dan agar 4,03 g. Disini
menggunakan agar untuk mengentalkan medium. Ekstrak kentang dan agar disetir
dan diatur suhu dan pHnya. Sebelum dilakukan sterilisasi, medium berawarna
kuning, setelah disterilisasi dalam autoklaf medium berwarna kecoklatan dan
didapat endapan berwarna putih. Setelah didinginkan beberapa saat, medium
dapat ditanami bakteri. Pembuatan medium Nutrien Agar (NA) menggunakan
bahan utama ekstrak daging sapi 5 g, pepton 3 g dan agar 3 g. Pada awal
pengamatan medium nutrien agar, sebelum proses sterilisasi berwarna kuning,
setelah sterilisasi warna medium menjadi agak coklat. Pada pembuatan medium
NA ini ditambahkan pepton agar mikroba cepat tumbuh, karena mengandung
banyak N2. Agar yang digunakan dalam proses ini untuk mengentalkan medium.
IV. ALAT DAN BAHAN
4.1.
Alat
11
1.
2.
3.
4.
5.
IV.2.
Tabung reaksi
Pipet tetes
Kompor Listrik
Autoklaf
Spatula
Bahan
1.
Kentang yang bagus 100 gr
2.
Agar-agar 10 gr
3.
Dekstrose 5 gr
4.
Air suling/akuades 500 ml
V. PROSEDUR PERCOBAAN
5.1. Agar kentang dekstrosa (AKD)/Potato Dekstrose Agar (PDA) untuk menumbuhkan jamur.
1. Cucilah kentang kemudian dipotong-potong kecil dan masak selama 1
jam. Volume air dijaga supaya tetap dengan menambah air suling.
2. Saringlah kentang yang telah dimasak tadi dan masukkan dekstrosa ke
dalam filtrate kentang serta agar-agar sampai larut dengan baik.
3. Tuangkan ke dalam tabung sesuai dengan kebutuhan, sumbatkan kapas.
4. Sterilkan dengan autoklaf (121 oC/15 lbs) selama 15 menit.
5.2. Sterilisasi dengan autoklaf
1. Isi autoklaf dengan air suling sebanyak 3-5 liter, panaskan sampai semua
udara keluar dari autoklaf.
2. Siapkan alat/bahan yang akan disterilkan dan letakkan pada rak dari
autoklaf.
3. Masukkan rak tersebut ke dalam autoklaf, tutup rapat kecuali klep udara
supaya udara yang masih ada dalam autoklaf dapat keluar, karena jika
dalam autoklaf masih ada udara sedangkan klep sudah ditutup rapat, maka
sterilisasi tidak mencapai suhu dan tekanan yang diharuskan (121oC/15)
12
13
14
VIII. KESIMPULAN DAN SARAN
8.1.
Kesimpulan
1. Pembuatan media untuk menumbuhkan atau mengembangbiakan mikroba
pada percobaan ini adalah dengan membuat medium semi padat-cair dengan
15
bahan yang digunakan yaitu kaldu kentang, agar-agar dan dextrose dan
dilakukan pemanasan hingga mengental.
2. Syarat-syarat yang diperlukan dalam pembuatan medium adalah medium
yang dibuat harus mengandung unsur hara yang diperlukan untuk
pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba, memiliki cahaya yang
cukup, suhu harus terjaga, pH harus sesuai dengan kebutuhan mikroba dan
medium harus dalam keadaan steril.
3. Cara mensterilkan medium agar mikroba dapat berkembang biak adalah
sterilisasi dengan autoklaf, medium yang akan disterilkan ditempatkan di
dalam autoklaf dengan temperatur 121 oC selama 15-20 menit, tergantung
banyaknya medium.
4. Pada saat pembuatan medium harus dalam keadaan steril agar medium tidak
ditumbuhi mikroba yang tidak diinginkan.
5. Pada pembuatan medium ini kaldu kentang berfungsi sebagai unsur hara
yang diperlukan mikroba untuk berkembangbiak, dextrose berfungsi
sebagai penutrisi dan memberikan energi untuk mikroba agar dapat
berkembangbiak, dan agar-agar berfungsi sebagai pengental.
8.2.
Saran
1. Pada saat praktikum alat, bahan-bahan maupun praktikan harus dalam
keadaan bersih dan streril agar medium tidak ditumbuhi mikroba yang tidak
diinginkan.
2. Sebaiknya praktikan menggunakan masker dan sarung tangan agar terhindar
dari jamur Aspergillus niger yang berbahaya bagi tubuh.
3. Pengadukan medium ketika dipanaskan harus konstan pada suhu yang
dijaga untuk mencegah mengerasnya medium sebelum dipindahkan
kedalam tabung reaksi.
16
DAFTAR PUSTAKA
Indriati,
N.
2012.
Penyiapan
Media
Mikroorganisme.
(online:staff.uny.ac.id/sites /default/files/annappm-2012-bahan-segar.pdf)
(Diakses pada 12 Maret 2016)
Pelczar, M.1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi I. Erlangga : Jakarta.
Ratna, H. 2011. Teknik Isolasi Bakteri.(online:biologicasman.file.wordpress.com.
2011/10/teknik-isolasi-bakteri.pdf) (Diakses pada tanggal 12 Maret 2016)
Rusli. 2011.Fakultas Farmasi. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Farmasi Dasar
Universitas Muslim Indonesia. Makassar.
Volk dan Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar I. Jakarta: Erlangga.
17