UKP4 ida

RENCANA AKSI
PJ
025. Perakitan padi toleran
kekeringan dengan
overekspresi gen Oshox6
dengan promoter terinduksi
kekeringan OsLEA3
LIP
I
INSTAN
SI
TERKA
IT
-
UKURAN
KEBERHASILAN
B2, B4, B6, B8, B10,
B12
PN5: Litbang benih unggul berbasis biologi molekuler
KRITERIA
KEBERHA
SILAN
UKURAN
KEBERHASIL
AN
Diperoleh benih
padi toleran
kekeringan yang
mendapat
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target (2011)
tersedia ;
1. Benih:
 T2 Ciherang
mengandung 1
salinan gen
OsLEA3::Oshox6 dan
bersegregasi 3:1
 T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6, dan
 T4 Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6,
2. Data
Molekuler
(PCR, Southern
blot, segregasi)
untuk melengkapi
persyaratan untuk
mendapatkan
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
1
Target B2: 15%
 Tersedia populasi
tanaman T0 Ciherang,
T1 IR64 Sub1, dan T2
Batutegi hasil
transformasi dengan
OsLEA3::Oshox6
untuk analisis
molekuler dan
segregasi
 Tersedia 350 sampel
DNA yang diisolasi
dari daun tanaman T0
Ciherang, T1 IR64
Sub1, dan T2 Batutegi
hasil transformasi
dengan
OsLEA3::Oshox6
%
Capaian
15%
Keterangan
 Populasi tanaman T0
Ciherang, T1 IR64 Sub1,
dan T2 Batutegi hasil
transformasi
dengan
OsLEA3::Oshox6 untuk
analisis molekuler dan
segregasi
 DNA
dari
daun
tanaman
padi
T0
Ciherang, T1 IR64 Sub1,
dan T2 Batutegi hasil
transformasi
dengan
OsLEA3::Oshox6
masing-masing sebanyak
400, 209, dan , 120
sampel.
RENCANA AKSI
PJ
INSTAN
SI
TERKA
IT
KRITERIA
KEBERHA
SILAN
UKURAN
KEBERHASIL
AN
UKURAN
KEBERHASILAN
B2, B4, B6, B8, B10,
B12
%
Capaian
Keterangan
025. Perakitan padi toleran
kekeringan dengan
overekspresi gen Oshox6
dengan promoter terinduksi
kekeringan OsLEA3
LI
PI
-
Diperoleh benih
padi toleran
kekeringan yang
mendapat
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target (2011)
tersedia ;
1. Benih:
 T2 Ciherang
mengandung 1
salinan gen
OsLEA3::Oshox6 dan
bersegregasi 3:1
 T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6, dan
 T4 Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6,
2. Data
Molekuler
(PCR, Southern
blot, segregasi)
untuk melengkapi
persyaratan untuk
mendapatkan
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target B4: 30%
 PCR 350 sampel DNA
dan analisis hasil PCR
 Analisis segregasi 7
kandidat Galur IR64
Sub1 bersegregasi 3:1
 Analisis segregasi 3
galur Batutegi
OsLEA3::Oshox6
 Diperoleh 10 Tanaman
Ciherang yang
memiliki 1 salinan gen
OsLEA3::Oshox6
25%
1) 25% target meliputi:
 293 tanaman yang
berasal dari 127 embrio,
positif mengandung hpt.
 7 galur tanaman
IR64-Sub1 hasil
transformasi dengan
OsLEA3:Oshox6 yang
telah diketahui memiliki
salinan gen tunggal
homozigot hpt
 2 galur batutegi
OsLEA3:Oshox6 adalah
homozigot.
 DNA genomik total
dari 41 tanaman positif
PCR untuk gen hpt .
Sudah dipotong dengan
enzim restriksi EcoRI,
namun
belum
di
hibridisasi. .
2). 5% dari target yang
belum dicapai adalah
hibridisasi
Southern
untuk
mengetahui
salinan gen.
2
RENCANA AKSI
PJ
INSTAN
SI
TERKA
IT
KRITERIA
KEBERHA
SILAN
UKURAN
KEBERHASIL
AN
UKURAN
KEBERHASILAN
B2, B4, B6, B8, B10,
B12
%
Capaian
Keterangan
025. Perakitan padi toleran
kekeringan dengan
overekspresi gen Oshox6
dengan promoter terinduksi
kekeringan OsLEA3
LI
PI
-
Diperoleh benih
padi toleran
kekeringan yang
mendapat
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target (2011)
tersedia ;
1. Benih:
 T2 Ciherang
mengandung 1
salinan gen
OsLEA3::Oshox6 dan
bersegregasi 3:1
 T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6, dan
 T4 Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6,
2. Data
Molekuler
(PCR, Southern
blot, segregasi)
untuk melengkapi
persyaratan untuk
mendapatkan
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target B6: 45%
Diperoleh benih :
1. T1 Ciherang
mengandung 1 salinan
gen OsLEA3::Oshox6
2. T2 IR64 Sub1 yang
bersegregasi 3:1
3. T3 Batutegi homozigot
OsLEA3::Oshox6
40%
1. 40% Target
meliputi:
 35 Nomor Benih
T1 Ciherang positif
PCR hpt
 2 galur Batutegi
homozigot
berdasarkan PCR
 7 Galur IR64 Sub 1
homozigot
berdasarkan PCR
3
2). 5% dari target yang
belum dicapai adalah
hibridisasi Southern
untuk mengetahui
salinan gen.
RENCANA AKSI
PJ
INSTAN
SI
TERKA
IT
KRITERIA
KEBERHA
SILAN
UKURAN
KEBERHASIL
AN
UKURAN
KEBERHASILAN
B2, B4, B6, B8, B10,
B12
%
Capaian
Keterangan
025. Perakitan padi toleran
kekeringan dengan
overekspresi gen Oshox6
dengan promoter terinduksi
kekeringan OsLEA3
LI
PI
-
Diperoleh benih
padi toleran
kekeringan yang
mendapat
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target (2011)
tersedia ;
1. Benih:
 T2 Ciherang
mengandung 1
salinan gen
OsLEA3::Oshox6 dan
bersegregasi 3:1
 T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6, dan
 T4 Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6,
2. Data
Molekuler
(PCR, Southern
blot, segregasi)
untuk melengkapi
persyaratan untuk
mendapatkan
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target B8: 60%
 Tersedia populasi
tanaman T1 Ciherang,
T2 IR64 Sub1, dan T3
Batutegi hasil
transformasi dengan
OsLEA3::Oshox6
untuk analisis
molekuler dan
segregasi
 Tersedia 400 sampel
DNA yang diisolasi
dari daun tanaman T1
Ciherang, T2 IR64
Sub1, dan T3 Batutegi
hasil transformasi
dengan
OsLEA3::Oshox6
50%
1). 50% target meliputi:
 Penanaman kembali
benih T1 Ciherang,
T2 IR64 Sub1, dan
T3 batutegi hasil
transformasi dengan
OsLEA3::Oshox6
untuk analisis
molekuler dan
segregasi
 Telah dilakukan
isolasi dari daun
tanaman T1
Ciherang, T2 IR64
Sub1, T3 Batutegi
hasil transformasi
dengan
OsLEA3::Oshox6
4
2). 10% dari target
yang belum dicapai
adalah :
 hibridisasi
Southern telah
dilakukan namun
hasil belum tercapai,
masih harus diulang
 Isolasi DNA masih
tertunda karena
tanaman masih kecil
dan daun dianggap
belum cukup
RENCANA AKSI
PJ
INSTAN
SI
TERKA
IT
KRITERIA
KEBERHA
SILAN
UKURAN
KEBERHASIL
AN
UKURAN
KEBERHASILAN
B2, B4, B6, B8, B10,
B12
%
Capaian
Keterangan
025. Perakitan padi toleran
kekeringan dengan
overekspresi gen Oshox6
dengan promoter terinduksi
kekeringan OsLEA3
LI
PI
-
Diperoleh benih
padi toleran
kekeringan yang
mendapat
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target (2011)
tersedia ;
1. Benih:
 T2 Ciherang
mengandung 1
salinan gen
OsLEA3::Oshox6 dan
bersegregasi 3:1
 T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6, dan
 T4 Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6,
2. Data
Molekuler
(PCR, Southern
blot, segregasi)
untuk melengkapi
persyaratan untuk
mendapatkan
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target B10: 80%
 PCR 400 sampel DNA
dan analisis hasil PCR
 Diperoleh 5 kandidat
Galur Ciherang
bersegregasi 3:1
 Diperoleh 2 kandidat
galur IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6
 Diperoleh 2 kandidat
galur Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6
75%
75 % target meliputi:
1. PCR tanaman :
a. T1 Ciherang OsHox6
b. T2 IR64 Sub1
OsHox6,
c. T3 Batutegi OsHox6
2. Berdasarkan hasil
analisis PCR
menggunakan gen hpt
diperoleh:
a. 4 kandidat galur
Ciherang bersegregasi
3:1 Tabel b. 2 Galur
batutegi homozigot
dan
c 2 Galur IR64 Sub1
homozigot
5
5% target yang belum
tercapai meliputi
Southern blot
Ciherang, karena hasil
yang diperoleh tidak
dapat disimpulkan
RENCANA AKSI
PJ
INSTAN
SI
TERKA
IT
KRITERIA
KEBERHA
SILAN
UKURAN
KEBERHASIL
AN
UKURAN
KEBERHASILAN
B2, B4, B6, B8, B10,
B12
%
Capaian
Keterangan
025. Perakitan padi toleran
kekeringan dengan
overekspresi gen Oshox6
dengan promoter terinduksi
kekeringan OsLEA3
LI
PI
-
Diperoleh benih
padi toleran
kekeringan yang
mendapat
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target (2011)
tersedia ;
1. Benih:
 T2 Ciherang
mengandung 1
salinan gen
OsLEA3::Oshox6 dan
bersegregasi 3:1
 T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6, dan
 T4 Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6,
2. Data
Molekuler
(PCR, Southern
blot, segregasi)
untuk melengkapi
persyaratan untuk
mendapatkan
sertifikat aman
pangan dan
lingkungan tahun
2014
Target B12: 100%
Diperoleh benih :
a. T2 Ciherang
mengandung 1 salinan
gen OsLEA3::Oshox6
dan bersegregasi 3:1
b. T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6
c. T4 Batutegi
homozigot
OsLEA3::Oshox6
90%
90% target meliputi:
1. Diperoleh benih
a. T2 Ciherang
berdasarkan PCR
bersegregasi 3:1
b. T3 IR64 Sub1
homozigot
OsLEA3::Oshox6
6
10 % target belum
tercapai karena
analisis Southern blot
belum diulang dan
panen benih T4
Batutegi OsHox6
tertunda, saat ini
masih fase berbunga
Contoh hasil PCR untuk analisis segregasi disajikan pada Gambardi bawah ini:
M P K N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112........ dst
hpt
492 pb
Analisis segregasi pada populasi tanaman T1 Ciherang hasil transformasi dengan OsHox6 diperoleh 4 kandidat galur yang bersegregasi 3:1,
mengindikasikan penyisipan transgen pada 1 lokus.
Varietas
Galur
Ciherang
CH.5
CH.152
CH.153
CH.197
Jumlah
tanaman
T1 PCR
+ hpt
15
18
17
13
Total
Rasio
tanaman segregasi
yang
diuji
21
3:1
24
3:1
26
3:1
22
3:1
X2
P
0,14
0
1,28
3,16
0,05*
* sangat berbeda nyata pada selang kepercayaan 95%. X tabel (df=1, 0.05) = 3.841
2
7
Analisis segregasi pada tanaman T2 IR64 Sub1 hasil transformasi dengan OsHox6 menunjukkan 2 galur konsisten homozigot berdasarkan PCR
menggunakan primer spesfik untuk gen hpt
No
Galur
1.
2.
3.
4.
5.
6.
T2 S31
T2 S19
T2 S29
T2 S13
T2 S33
T2 S40
Jumlah sampel yang
dianalisis
14
15
15
15
15
15
7.
T2 S23
13
Hasil PCR hpt
POSITIF
NEGATIF
13
1
8
7
0
15
11
4
13
2
15
0
13
0
Analisis segregasi pada Tanaman T3 Batutegi hasil transformasi dengan OsHox6 menunjukkan 2 galur konsisten homozigot berdasarkan PCR
menggunakan primer spesfik untuk gen hpt
Galur
T2-BT III-1A
T2-BT II-2A
T2-BT II-4A
Jumlah tanaman
dianalisis
11
11
11
8
Jumlah tanaman
positif
11
11
10
Hasil analisis Southern pada beberapa sampel tanaman Ciherang. Dari hasil ini belum dapat disimpulkan jumlah salinan gen hpt nya.
Selanjutnya akan dilakukan analisis Southern dimana sampel DNA akan dipotong menggunakan enzim restriksi yang berbeda.
M P
Sampel DNA Ciherang OsHox6
Kb
23
9
6
4
2,2
2
9
Tanaman T3 Batutegi OsHox6 diambil pada fase bunting
Tanaman T2 IR64 Sub1 OsHox6 diambil pada fase generatif
10