Plasma darah - IPB Repository

III. METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan November 2009 – Juli 2010.
Pengambilan sampel darah sapi dilakukan di peternakan PT Rejo Sari Bumi Unit
Tapos Ciawi Bogor, Jawa Barat. Analisis sampel darah sapi dilakukan di
laboratorium Patologi Klinik Bagian Penyakit Dalam Departemen Klinik
Reproduksi dan Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor,
Bogor.
Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam melakukan penelitian adalah seperangkat kit
protein dan albumin, darah sapi dan aquades. Sedangkan alat yang digunakan
antara lain spuit, syring no 18G, tabung reaksi, pipet, gelas piala, tabung ependorf,
sentrifus, dan spektofotometer.
Hewan yang digunakan
Pengamatan dilakukan pada 15 ekor sapi pedet yang sehat secara klinis.
Lima belas ekor sapi ini terdiri dari lima kelompok umur yaitu; kelompok sapi
berumur 1, 3, 6, 9 dan 12 bulan masing-masing kelompok tiga ekor.
Metode Penelitian
Pengambilan darah sapi dilakukan dengan menggunakan spuit berukuran 10
ml dengan jarum nomor 18G. Darah diambil melalui vena jugularis setelah
dibersihkan dan didisinfeksi dengan alkohol. Darah yang sudah diambil dibiarkan
dalam spuit agar dapat diambil serumnya. Sampel darah dibawa ke laboratorium
Patologi Klinik Bagian Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Hewan Institut
Pertanian Bogor untuk pengambilan serum. Pengambilan serum dilakukan dengan
cara mensentrifuse tabung reaksi dan dengan kecepatan 1500 rpm selama 15
menit, kemudian serum dimasukkan kedalam tabung flakon serum kemudian
diberi label. Serum akan diperiksa menggunakan spektofotometer guna
mengetahui total protein, albumin, dan globulin dari serum tersebut.
12
Pemeriksaan Total Protein, Albumin, dan Globulin
Total Protein diperiksa dengan menggunakan metode Biuret. Prinsip
pemeriksaan adalah protein di dalam sampel akan bereaksi dengan cuprum (Cu ++)
pada medium alkalis membentuk kompleks warna yang akan diukur oleh
spektofotometer. Pemeriksaan total protein diawali dengan memipet reagen
blanko ke dalam tiga tabung reaksi masing – masing sebanyak 3 ml. Tabung I
(tabung blanko) bisa dilakukan penambahan atau tanpa penambahan 0,1 ml
aquades, tabung II (tabung standar) ditambah dengan 0,1 ml protein standar, dan
tabung III (tabung sampel) ditambah dengan 0,1 ml sampel. Ketiga campuran
tersebut dihomogenkan, kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu
20-25oC. Selanjutnya dilakukan pengukuran absorbansi sampel (As) dan
absorbansi standart (Ast) dengan memasukan larutan tersebut ke dalam cuvette
spektofotometer. Hasil akan nampak dalam bentuk angka yang dapat langsung
dibaca. Setelah pengukuran, maka konsentrasi total protein akan dihitung (dengan
panjang gelombang 546 nm), yaitu :
C (g/dl) = 6 x (As : Ast) atau
C (g/L) = 60 x (As : Ast)
Kadar albumin diperiksa dengan metode Bromcresol Green. Prinsip
pemeriksaan adalah albumin di dalam sampel akan bereaksi dengan Bromcresol
Green pada medium asam akan membentuk warna kompleks yang dapat diukur
oleh spektofotometer. Pemeriksaan albumin dilakukan dengan memipet reagen
blanko ke dalam tiga tabung reaksi masing – masing 3 ml. Pada tabung I (tabung
blanko) bisa dilakukan penambahan atau tanpa penambahan 0,1 ml aquades,
tabung II (tabung standar) ditambah dengan 0,1 ml albumin standar, dan tabung
III (tabung sampel) ditambah dengan 0,1 ml sampel. Campuran pada ketiga
tabung tersebut kemudian dihomogenkan dan diinkubasi selama 5 menit pada
suhu 20–25oC. Selanjutnya dilakukan pengukuran absorbansi sampel dan standart
dengan menggunakan spektofotometer. Hasil yang diperoleh dihitung dengan
cara:
C (g/dl) = 4 x (As : Ast) atau
C (g/L) = 40 x (As : Ast)
13
Konsentrasi globulin ditentukan dengan analisis langsung, yaitu dengan
mengurangi secara langsung konsentrasi total protein dengan konsentrasi albumin.
Rasio albumin–globulin (A/G) merupakan konsentrasi albumin dibagi dengan
konsentrasi globulin.
Parameter yang diamati
Parameter yang diamati dalam penelitian ini adalah total protein, albumin
dan globulin dari darah sapi perah umur 1-12 bulan.
Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif dan statistik (SPSS).
14