Potensi Bakteri Asam Laktat Suriasih

F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
k e r- s o ft w a
bu
y
ac
k e r- s o ft w a
.c
tr
om
to
C
lic
k
om
.c
re
.
.
ac
w
w
tr
ww
ww
C
lic
k
to
bu
y
N
O
W
!
PD
N
O
W
!
PD
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
POTENSI DAN KARAKTERISTIK
BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL)
ISOLAT KEFIR DAN ’BIJI’ KEFIR
SEBAGAI IMUNOMODULATOR
PADA HEWAN COBA
ac
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Undang-Undang Republik Indonesia Nomor 19 Tahun 2002 Tentang Hak Cipta
Lingkup Hak Cipta
Pasal 2
1. Hak Cipta merupakan hak eksklusif bagi Pencipta atau Pemegang Hak Cipta untuk mengumumkan
atau memperbanyak Ciptaannya, yang timbul secara otomatis setelah suatu ciptaan dilahirkan tanpa
mengurangi pembatasan menurut peraturan perundang-undangan yang berlaku.
Ketentuan Pidana
Pasal 72
1. Barang siapa dengan sengaja melanggar dan tanpa hak melakukan perbuatan sebagaimana dimaksud
dalam Pasal 2 Ayat (1) atau Pasal 49 Ayat (1) dan Ayat (2) dipidana dengan penjara masing-masing
paling singkat 1 (satu) bulan dan/atau denda paling sedikit Rp 1.000.000,00 (satu juta rupiah), atau
pidana penjara paling lama 7 (tujuh) tahun dan/atau denda paling banyak Rp 5.000.000.000,00 (lima
miliar rupiah).
2. Barang siapa dengan sengaja menyiarkan, memamerkan, mengedarkan atau menjual kepada umum
suatu ciptaan atau barang hasil pelanggaran hak cipta atau hak terbit sebagai dimaksud pada Ayat
(1) dipidana dengan pidana penjara paling lama 5 (lima) tahun dan/atau denda paling banyak Rp.
500.000.000,00 (lima ratus juta rupiah).
ii
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
POTENSI DAN KARAKTERISTIK
BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL)
ISOLAT KEFIR DAN ’BIJI’ KEFIR
SEBAGAI IMUNOMODULATOR
PADA HEWAN COBA
Dr. Ir. Ketut Suriasih, M.App.Sc.
Prof. Dr. Ir. Nyoman Sucipta, MP
Ir. Martini Hartawan, M.Si
Udayana University Press
2015
iii
ac
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
POTENSI DAN KARAKTERISTIK
BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL)
ISOLAT KEFIR DAN ’BIJI’ KEFIR
SEBAGAI IMUNOMODULATOR
PADA HEWAN COBA
Penulis:
Dr. Ir. Ketut Suriasih, M.App.Sc.
Prof. Dr. Ir. Nyoman Sucipta, MP
Ir. Martini Hartawan, M.Si
Penyunting:
Jiwa Atmaja
Cover & Ilustrasi:
Repro
Design & Lay Out:
I Wayan Madita
Diterbitkan oleh:
Udayana University Press
Kampus Universitas Udayana Denpasar,
Jl. P.B. Sudirman, Denpasar - Bali Telp. (0361) 9112762
[email protected] http://penerbit.unud.ac.id
Cetakan Pertama:
2015, x + 59 hlm, 15 x 23 cm
ISBN: 978-602-294-031-9
Hak Cipta pada Penulis.
Hak Cipta Dilindungi Undang-Undang :
Dilarang mengutip atau memperbanyak sebagian atau seluruh isi buku ini
tanpa izin tertulis dari penerbit.
iv
ac
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
PRAKATA
A
tas rahmat dan karunia Ida Sang Hyang Widhi
Wasa, Tuhan Yang Maha Esa, buku yang berjudul
Potensi dan Karakteristik Bakteri Asam Laktat (BAL) Isolat Kefir
dan “Biji” Kefir sebagai Immunomodulator pada Hewan Coba,
diterbitkan dengan maksud memberi informasi kepada
para pembaca bahwa pengaruh pemberian kefir terhadap
aktivitas sistem kekebalan tubuh terhadap perubahan
jumlah total sel darah putih dan diferensialnya, peningkatan
aktivitas sel – sel leukosit dalam menghancurkan patogen
dan pembentukan antibodi oleh sel – sel leukosit di dalam
serum darah dan mengidentifikasi BAL dari kefir dan biji
kefir dan selanjutnya mengevaluasi pengaruh pemberian
BAL tersebut terhadap aktivitas sistem kekebalan tubuh.
Dalam buku ini dibahas karakteristik immunomodulsi
BAL yang diisolasi dari kefir dan ’biji’ kefir secara in vivo
pada hewan coba mencit dengan harapan dapat menyingkap
tentang potensi probiotik untuk kesehatan dan memberikan
beberapa kegunaan, yaitu sebagai tampilan informasi
ilmiah mengenai potensi yang dapat diberikan oleh kefir
dan BAL, memberikan alternatif tindakan preventif dalam
menjaga kesehatan tubuh dan meningkatkan konsumsi dan
penggunaan produk susu terfermentasi sebagai minuman
kesehatan.
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Buku ini adalah hasil penelitian hibah Fundamental
Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi Kementerian
Pendidikan dan Kebudayaan Republik Indonesia tahun
2010-2012. Dengan terbitnya buku ini penulis menghaturkan
ucapan terima kasih kepada semua pihak yang telah
membantunya.
Akhirnya, dimohon saran dan kritik para pembaca
dalam rangka penyempurnaan buku ini.
vi
Penulis
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
DAFTAR ISI
PRAKATA ....................................................................
DAFTAR ISI ..................................................................
DAFTAR TABEL ..........................................................
v
vii
x
Bab I
1. PENDAHULUAN ..............................................
1
BAB II
TINJAUAN KEFIR DAN MIKROFLORA
BIJI KEFIR
2.1 Kefir ……………………………..........................
2.2 Mikroflora ’Biji’ Kefir ………….........................
5
7
BAB III
TINJAUAN POTENSI BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL)
SEBAGAI IMMUNOMODULATOR DAN MENCIT
3.1 Potensi Bakteri Asam Laktat (BAL)
sebagai Immunomodulator …..........................
10
BAB IV
TEMPAT, ALAT DAN BAHAN …………………....
vii
15
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
BAB V
CARA KERJA DAN RANCANGAN
5.1 Pembuatan Kefir dan larutan BAL …..............
5.2 Pemeriksaan Mikrobiologis Kefir …................
5.3 Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Asam Laktat ........................................................
5.4 Persiapan Larutan BAL .....................................
5.5 Persiapan Hewan Coba .....................................
5.6 Pengambilan Sampel Darah .............................
5.7 Penghitungan Leukosit .....................................
5.8 Differensial leukosit ...........................................
5.9 Pemeriksaan Indeks Fagositik ..........................
5.10 Pemeriksaan Titer Antibodi .............................
5.11 Rancangan Penelitian ........................................ 17
17
18
19
19
20
20
21
21
22
23
BAB VI
SEL DARAH PUTIH
6.1 Leukosit ...............................................................
6.2 Limfosit ...............................................................
6.3 Neutrofil ..............................................................
6.4 Monosit ................................................................
6.5 Eosinofil ...............................................................
24
28
30
32
36
BAB VII
INDEKS FAGOSITIK .................................................
38
viii
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
BAB VIII
TITER ANTIBODI .......................................................
42
BAB IX
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI
ASAM LAKTAT KEFIR DAN BIJI KEFIR ................
45
BAB X
PENUTUP
10.1Simpulan .............................................................
10.2 Saran .....................................................................
49
50
DAFTAR PUSTAKA ....................................................
Tentang Penulis ……………........................................
51
56
ix
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Rata-rata Jumlah Leukosit Darah
Mencit yang Diberi Kefir ...........................
Tabel 2. Rerata Jumlah Leukosit Darah Mencit ......
Tabel 3. Rata-rata Jumlah Limfosit ...........................
Tabel 4. Rata-rata Jumlah Neutrofil .........................
Tabel 5. Rerata Jumlah Neutrofil Darah Mencit .....
Tabel 6. Rata-rata Jumlah Monosit Darah
Mencit Yang diber Kefir ..............................
Tabel 7. Rerata Jumlah Monosit Darah Mencit ......
Tabel 8. Rerata Jumlah Eosinofil Darah Mencit ......
Tabel 9. Rata-rata Indeks Fagositik ..........................
Tabel 10. Rerata Indeks Fagositik Darah Mencit ......
Tabel 11. Rata-rata Nilai Kadar Antibodi ..................
Tabel 12. Rerata Jumlah Titer Antibodi Darah
Mencit ............................................................
Tabel 13. Karateristik Fisik dan Kimia Isolat
BAL kefir dan Biji Kefir ...............................
24
26
28
30
31
33
35
36
38
39
42
43
45
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
BAB I
PENDAHULUAN
S
emakin banyaknya produk makanan probiotik
terutama susu asam (yoghurt, yakult, biogurt)
hasil fermentasi bakteri asam laktat (BAL) diproduksi
dan beredar di pasaran sejalan dengan minat masyarakat
yang makin besar untuk mengkonsumsinya. Hal ini terjadi
karena produk-produk tersebut dinyatakan mengandung
mikroba BAL, yang memiliki efek menyehatkan. Dampak
menyehatkan ini karena produk tersebut mengandung
nutrisi lebih tinggi (vitamin) dan lebih mudah dicerna
dibanding dengan bahan baku darimana dia dibuat, karena
BAL dalam susu asam akan menghasilkan beberapa vitamin
dan memecah laktosa menjadi glukosa dan galaktosa
yang sangat berguna bagi orang-orang yang tidak dapat
mentolerir laktosa. BAL juga dikatakan dapat mengaktivasi
immunitas dalam tubuh inang terutama ketahanan tubuh
di daerah saluran pencernaan (karena di sinilah terjadi
interaksi antara probiotik dan inang), sehingga, ketika
terdapat bakteri patogen atau benda asing yang memasuki
saluran pencernaan akan segera dihancurkan. Meningkatnya
immunitas tubuh pada inang yang menderita kanker dapat
mencegah berkembangnya sel-sel kanker tersebut sehingga
terapi dapat dilakukan lebih baik (Kanbe, 1992).a
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Di dalam tubuh terdapat dua macam sistem immunitas,
yaitu innate (pasif) dan adaptif, dan komponen fungsional
dari kedua sistem immunitas ini adalah leukosit yang
memiliki nama berbeda sesuai dengan fungsi dan tempat
di mana leukosit tersebut diproduksi. Di dalam saluran
pencernaan bakteri asam laktat (BAL) yang dikonsumsi
dalam bentuk minuman kefir akan berinteraksi dengan
sistem immunitas innate pada lapisan mukosa dinding
saluran pencernaan. BAL ini akan dikenali dan ditangkap
oleh komponen leukosit yang disebut makrofag, diproses
dan disajikan ke sistem immunitas dalam jaringan limfoid
yang mengandung beberapa jenis leukosit yang disebut
limfosit. Hal ini menyebabkan limfosit mengeluarkan sitokin,
sitotoxin (perforin/defensin) dan antibodi. Sitokin akan
mnginduksi proliferasi sel leukosit (yang menghancurkan
antigen/patogen) baik pada sistem immunitas innate
maupun adaptif (Anonymous, 2009 ; Brooks et al. 2001;
Galdeano etal., 2007).
Beberapa hasil penelitian menunjukkan bahwa BAL
yang dikonsumsi bersama dengan produk susu terfermentasi
dapat meningkatkan immunitas tubuh inang (Adolfson
et al., 2004; Erickson dan Hubbard, 2000; Haller et al., 2000;
Takeda dan Okumura, 2007; ). Meningkatnya immunitas
ini disebabkan oleh meningkatnya jumlah sel leukosit
(Harich dan Levkut ,2002) meningkatnya produksi sitokin
(Gackowska, et al., 2006), meningkatnya aktifitas fagositosis
(Erickson dan Hubbard, 2000), dilain pihak Schiffrin et al.
(1995) menemukan bahwa tidak ada peningkatan jumlah
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
leukosit setelah konsumsi bakteri asam laktat melalui susu
terfermentasi namun ditemukan meningkatnya fagositosis
terhadap Escherichia coli secara in vitro. Haller et al.
(2000) menemukan interaksi antara bakteri non-patogen
Lactobacillus johnsonii , Lb. casei dan Escherichia coli dengan
sel leukosit secara in vitro menunjukkan bahwa ketiga
strain bakteri tersebut dapat meningkatkan proliferasi sel
leukosit. Proliferasi terbanyak disebabkan oleh interaksi
dengan Lb. johnsonii. Schiffrin et al. (1995) menyatakan strain
bakteri asam laktat yang berbeda menunjukkan aktivitas
biologi yang berbeda di dalam tubuh inang. Kemampuan
dari masing-masing strain bakteri asam laktat untuk dapat
hidup dan mengkolonisasi lapisan permukaan tidaklah
sama, sehingga kesempatan untuk berinteraksi dengan sel
leukosit dari sistem immun juga berbeda. Di lain pihak
untuk dapat meningkatkan immunitas tubuh sebaiknya
bakteri asam laktat tersebut masih dalam keadaan hidup
ketika berada di dalam saluran pencernaan.
Kefir merupakan produk susu asam yang relatif baru,
belum banyak dikenal di Indonesia karena belum dibuat
secara komersial. Rarah (1999) menemukan bahwa 93,7 %
populasi mikroba biji kefir adalah Bakteri asam laktat (35,4%
Lactobacillus, 58,3 % Streptococcus), sisanya 6,3% adalah
khamir. Namun, Anonimus (2005) tidak menemukan
adanya Streptococcus pada kefir koleksi yang sama. Strain
bakteri Lactobacillus kefir ini adalah Lb. acidophillus, Lb.
fermentum.
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Gackowska et al. (2006) menemukan bahwa Lb.
acidophillus, Lb. delbrueckii ssp.bulgaricus, Bifidobacterium
bifidum meningkatkan immunitas tubuh inang
yang
dapat dilihat dari peningkatan jumlah leukosit dan
produksi sitokin. Di antara ketiga strain bakteri ini
ternyata Lb.acidophillus
memiliki kemampuan paling
tinggi dalam meningkatkan produksi sitokin interferon Ў
(IFN- Ў). Interferon ini akan mengaktifasi leukosit B untuk
membentuk antibodi untuk melawan patogen (Brooks et al.,
2001; Perdigon et al. 2001). Peneliti lain melaporkan bahwa
Lb. acidophillus dan Lb. casei yang diperoleh dari konsumsi
yoghurt meningkatkan konsentrasi IgA dan IgG dan sel
leukosit yang memproduksinya pada saluran pencernaan
(Adolfson et al., 2004), dan titer antibodi spesifik terhadap
patogen Salmonella typhimurium meningkat empat kali lipat
pada orang yang minum susu fermentasi yang mengandung
Lb. acidophillus. Halpem et al. (1991) menemukan bahwa
Lb. bulgaricus dan S.thermophillus meningkatkan produksi
leukosit yang menghsilkan IFN- Ў pada orang dewasa
setelah mengkonsumsi yoghurt selama 4 bulan. Vinderola
et al. (2005) melaporkan bahwa pemberian kefir pada hewan
coba tikus meningkatkan immunitas dari hewan tersebut
yaitu meningkatnya sel leukosit yang memproduksi IgA,
IgG. Dan efek tersebut lebih kuat bila kefir diberikan dalam
keadaan segar (tidak dipasteurisasi), berarti mikroba kefir
dalam keadaan hidup memberi efek immunostimulan lebih
kuat daripada yang mati.
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
BAB II
TINJAUAN KEFIR DAN
MIKROFLORA BIJI KEFIR
2.1 Kefir
K
efir adalah minuman hasil fermentasi susu oleh
bakteri asam laktat, yeast yang memiliki rasa
asam dan mengandung sedikit alkohol (Farnworth dan
Mainville, 2003). Kefir berasal dari pegunungan caucasius
di Rusia. Di daerah asalnya, di Caucasius pembuatan kefir
secara tradisional dibuat dari susu sapi, kambing atau
kerbau yang dimasukkan ke dalam kantong dari kulit,
kemudian ditambahkan starter biji kefir dan diperam
dalam suhu ruang selama 18 - 24 jam. Setelah itu, biji kefir
disaring dan disimpan untuk dapat dipergunakan lagi
(Kanbe, 1992).b Spreer dan Mixa (1998) menyebutkan bahwa
secara traditional kefir dibuat dari susu yang dipanaskan
pada suhu 90 - 95 0C selama 1 menit, didinginkan sampai
18 - 22 0C, kemudian dituangkan ke dalam wadah yang
sudah di isi 3 - 5% biji kefir. Di Indonesia, kefir dibuat
dengan cara menginokulasi 5% biji kefir kedalam susu yang
sudah dipanaskan sampai suhu 85 0C selama 30 menit dan
didinginkan sampai suhu 22 - 23oC, lalu diperam pada suhu
ruang selama 18 24 jam. Setelah itu kefir dipisahkan dari
biji kefir dengan cara menyaring. Kefir disimpan pada suhu
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
refrigerator (5OC ) untuk pematangan dan siap dikonsumsi
dan biji kefir disimpan untuk inokulasi selanjutnya. (Rahman
et al., 1992., Suriasih,2005).
Thoreux dan Schmucker (2001) menemukan pemberian
kefir pada tikus muda dapat meningkatkan kadar antibodi
IgG dibandingkan dengan kontrol, namun kadar antibodi
IgA tikus yang diberikan kefir tidak berbeda dengan kontrol.
Selanjutnya dikatakan bahwa infeksi tikus dengan toksin
kolera menyebabkan kadar IgA serum darah meningkat
dibandingkan dengan kontrol.
Vinderolla et al., 2005 dan LeBlanc et al., 2007,
menyatakan bahwa kefir yang diberikan secara oral
dapat meningkatkan populasi sel yang menghasilkan
immunoglobulin A (IgA) pada lamina propria ataupun
pada kelenjar mama mencit. Peningkatan populasi sel ini
akan terlihat lebih nyata bila konsumsi kefir ini disertai
dengan paparan patogen atau imunogen. Respon IgA pada
kelenjar mama pada konsumsi kefir menunjukkan bahwa
konsumsi kefir mampu menstimulasi respon imun lokal
pada saluran cerna, dan peningkatan populasi sel penghasil
IgA ini dipengaruhi oleh durasi pemberian kefir.
Peningkatan kadar IgA dan IgG oleh kefir dapat
disebabkan oleh keberadaan BAL dalam kefir. Perdigon
et al., (2001) menyatakan beberapa BAL seperti Lactobacillus
acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii
subsp.bulgaricus, Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilus,
dan Lactobacillus casei yang terkandung dalam susu
fermentasi yang diberikan secara oral mampu meningkatkan
populasi sel plasma yang menghasilkan IgA dan IgM,
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
menurunkan populasi sel B IgG+ dan sel T CD4+ . Respon
yang ditunjukkan dipengaruhi oleh dosis pemberian.
Penelitian lain menunjukkan pemberian Lactobacillus casei
mampu meningkatkan IgA sekretori spesifik terhadap
Salmonella typhimurium.
Kefir yang digunakan dalam penelitian ini dibuat
dari biji kefir yang berasal dari koleksi Lab. Ilmu Ternak
Perah Fakultas Peternakan, IPB, Bogor. Hasil pemeriksaan
mikrobiologis menunjukkan jumlah BAL dalam kefir
yang digunakan selama penelitian berkisar antara 2,49 x
109 – 1.5 x 1010 cfu/ml dengan rata-rata sebesar 8,74 x 109
cfu/ml. Perdigon dan Alvares (1992) menyatakan bahwa
jumlah bakteri asam laktat yang optimum sebagai probiotik
melalui jalur oral sebesar 6 x 109 cfu/ml dan 2,4 x 109 cfu/ml
untuk jalur intraperitoneal. Jadi jumlah BAL dalam kefir
yang digunakan dalam penelitian ini sudah mencukupi
ketentuan jumlah bakteri yang harus dikonsumsi baik oleh
manusia ataupun hewan percobaan yang digunakan.
2.2 Mikroflora ’Biji’ Kefir
Mikroba yang ditemukan pada kefir sebagian besar
berasal dari starter (biji kefir) yang dipergunakan dalam
proses pembuatannya. Hampir 60 - 80 % mikroba biji kefir
adalah bakteri asam laktat Lactobacillus yang bersifat homodan heterofermentatif, mesofilik dan thermofilik; 20% genus
Lactococcus penghasil asam laktat dan aroma dan 5% sisanya
adalah khamir yang memfermentasi laktosa (Oberman dan
Libudzisz 1998). Robinson dan Tamine (1981) menyatakan
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
bahwa biji kefir mengandung bakteri asam laktat Lactobacillus
kefir, Lb brevis, Lb. acidophillus, Lb. helveticus, Lb. bulgaricus,
Lactococcus lactis sbsp. cremoris, Leuconostoc mesentroides sbsp.
dextranicum, bateri asam acetat Acetobacter aceti dan yeast
Saccharomyces cerevisiae. Sedangkan Anonymous (2005)
dan Suriasih, et al. (2005) menemukan bakteri asam laktat
Lb. brevis, Lb. fermenti dan Lb. acidophillus pada kefir yang
diperoleh dari koleksi laboratorium Ilmu Ternak Perah,
Fakultas Peternakan IPB, Bogor. Ketiganya adalah dari
golongan bakteri asam laktat. Perbedaan jenis bakteri dalam
kefir ini dipengaruhi oleh negara asal biji kefir dan teknik
isolasi yang dipakai (Farnworth dan Mainville, 2003).
Lactobacillus sp.: Lactobacillus merupakan genus
terbesar dari bakteri asam laktat (Axelsson, 1993). Genus
Lactobacillus ini bersifat gram-positif, tidak membentuk
spora, bersifat anaerob fakultatif, tumbuh optimum pada
kisaran suhu 30-40OC namun dapat tumbuh pada suhu
5-35OC. Lactobacillus tumbuh pada pH optimum 5,5 - 5,8,
namun secara umum dapat tumbuh pada pH kurang dari
5. Sneath et al., (1986) menyatakan bahwa Lb acidophilus,
Lb. bulgaricus dan Lb. helveticus hanya menghasilkan asam
laktat dari fermentasi glukose sedangkan Lb. fermentum dan
Lb. brevis selain menghasilkan asam laktat juga membentuk
ethanol, dan CO2. Lb. fermentum dan Lb. brevis tumbuh pada
suhu 45 - 50OC sedangkan Lb. acidophilus tidak tumbuh.
Streptococcus sp.: satu-satunya genus yang berhubungan
dengan makanan adalah Streptococcus thermophillus
(Axelsson, 1993). Genus streptococcus ini memiliki sifat
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
homofermentatif, tumbuh optimum pada suhu 37OC,
minimum pada suhu 19 - 21OC dan maksimum pada suhu
52OC. tidak tumbuh pada pH 9,6 , kadar garam 4% tetapi
tumbuh pada kadar garam 2,5%. Cel bulat atau ovoid,
berpasangan atau membentuk rantai panjang. (Sneath,
et al., 1986).
Lactococcus sp.: genus lactococcus yang paling banyak
dipakai pada makanan adalah Lactococcus lactis. Bakteri
genus lactococcus ini tumbuh optimum pada suhu 30OC.
Tidak tumbuh pada suhu 45OC, 6,5% NaCl dan pH 9,6
(Sneath,et al., 1986). Spesies bakteri ini dibagi lagi menjadi
tiga, yaitu Lac. lactis subsp. cremoris, Lac. lactis subsp. lactis
dan Lac. lactis subsp. hordinae.Yang sering dijumpai pada
bahan pangan adalah Lac. lactis subsp. lactis dan Lac. lactis
subsp. cremoris sedangkan Lac. lactis subsp. hordinae tidak/
jarang dipakai pada bahan pangan. Kedua spesies bakteri
ini menghasilkan asam laktat saja dari fermentasi glukose.
Berbeda dengan Lac. lactis subsp. lactis, Lac. lactis subsp.
cremoris tidak tumbuh pada pH 9,2, temperatur 40OC dan 4%
NaCl, serta dapat menghidrolisa arginin dan memfermentasi
ribosa (Sneath,et al.,1985 dikutip oleh Axelsson, 1993).
Leuconostoc sp.: bakteri asam laktat genus ini mempunyai
cel berbentuk bulat, tumbuh optimum pada suhu 20 - 30OC,
atau 5 - 30OC. Catalase negatif. Leu.mesentroides membentuk
dextran dai sukrosa (Axelsson, 1993), tidak tumbuh pada
pH 4,8 atau lebih kecil (Sneath, et al., 1986).
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
BAB III
TINJAUAN POTENSI BAKTERI ASAM LAKTAT
(BAL) SEBAGAI IMMUNOMODULATOR
DAN MENCIT
3.1 Potensi Bakteri Asam Laktat (BAL) sebagai Immunomodulator
S
emua vertebrata yang berdarah panas hidup
bersimbiosa dengan suatu konsorsium kompleks
mikroba yang hidup dalam saluran pencernaan. Usus halus
merupakan organ yang mengandung sistem immun terbesar
dari tubuh. 70-80% dari sel leukosit yang memproduksi IgA
terdapat dalam usus halus (Perdigon et al., 2001). Sistem
immunitas ini terdiri dari limfosit, yaitu leukosit spesifik
dari immunitas adaptif yang terletak pada bagian peyer
path (PP) dari saluran pencernaan. Sistem immunitas
ini terdiri dari sel T dan sel B. Sel T adalah leukosit yang
dihasuilkan pada thymus. Ada dua jenis se T yaitu sel T
killer menghasilkan sitotoksin untuk membunuh patogen/
antigen, sel T helper akan membawa antigen/patogen ke
sel B sehingga sel B memperbanyak diri dan menghasilkan
antibodi (IgA, IgG) (Brooks et al., 2001). Selain limfosit
dalam saluran pencernaan terdapat sistem immunitas
pada lapisan sel epithel dinding saluran pencernaan yang
terdiri dari leukosit yang diberi nama berbeda sesuai
dengan fungsi dan lokasinya,
10
yaitu fagosit (makrofag,
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
neutrofil, dan sel dendritik), sel mast, eosinofil, basofil dan
NK (sel natural killer). Sel-sel leukosit ini mengenali dan
menghilangkan patogen dengan fagositosis dan ada juga
dengan mengirimnya pada sel T helper/sel T killer /sel B
sehingga dihasilkan antibodi untuk membunuh patogen
tersebut.
Bakteri asam laktat ada dalam saluran cerna karena
konsumsi susu fermentasi akan berinteraksi dengan selsel leukosit komponen immunitas di lapisan epithel dan/
atau komponen immunitas pada bagian PP maka BAL
dikenali sebagai antigen oleh M (mikrofold) sel, dibawa ke
sel B dan sel T, sehingga terjadi proliferasi sel B dan sel T
dan bermigrasi melalui sistem sirkulasi limfatika efferent
menuju sistem sikulasi sistemik melalui saluran di daerah
dada sehingga akan berada di semua lapisan mukosa usus,
pernafasan, urogenital, mamae dankelenjar liur. Ini berarti
bahwa BAL atau antigen tersebut berhasil meningkatkan
immunitas (Perdigon et al., 2001).
Wold (2001) manyatakan bahwa beberapa bakteri
asam laktat dapa mengaktifasi komponen sel immunitas.
Lb. Rhamnosus, Lb. johnsonii dapat mengaktifkan aktivitas
fagositosis, kemampuan aktifasi kedua BAL ini masih di
bawah Lactococcus lactis. BAL ini mengaktifasi proliferasi
sel yang membentuk Inter leukin-10 (IL-10). Spanhaak
et al. (1998) menjelaskan konsumsi susu yang difermentasi
Lb casei strain shirota dapat mengaktivasi pembentukan
sel T killer yang merupakan leukosit yang menghasilkan
sitotoksik untuk membunuh patogen.
11
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Marteu et al. (1997) dan Link-Amster et al. (1994)
menemukan bahwa
setelah mengkonsumsi susu
terfermentasi yang mengandung
Lb. johnsonii
LA1
konsentrasi serum IgA meningkat sebanyak 10%.
Perdigon et al. (1995) menemukan bahwa konsumsi susu
terfermentasi yang mengandung Lb. casei dan Lb. acidophillus
meningkatkan sIgA, anti-E coli IgE dan IgM, namun bila
BAL yang diberikan dalam keadaan mati maka tidak
terjadi peningkatan IgE. Peningkatan IgM pada saluran
pencernaan ini lebih tinggi bila diberi Lb. casei dari pada
diberi Lb. acidophillus (Perdigeon et al., 2001). Perdigon
et al. (1999) menyatakan bahwa bakteri asam laktat Lb. casei,
Lb. delbrueckii ssp. Bulgaricus, Lb. acidophillus, Lb. plantarum,
Lb. rhamnosus, Lactococcus lactis dan Streptococcus salicarius
ssp. Thermophillus yang diberikan secara oral pada hewan
coba meningkatkan jumlah sel IgA+ B pada bronchus
yang berarti meningkatnya IgA dalam sirkulasi sebagai
akibat interaksi dengan sel-sel mikrofold jaringan lifosit
pada daerah PP atau lapisan sel epithel di dinding usus.
Selanjutnya, dikatakan bahwa Lb. acidophillus meningkatkan
aktivitas immun pada jaringan mukosa usus tetapi tidak
menyebabkan peningkatan Ig pada saluran bronchus.
Sedangkan Lactococcus lactis dan Streptococcus thermophillus
menginduksi dan meningkatkan Ig dalam sirkulasi.
Bakteri asam laktat Lb. casei strain Shirota, Lb.
acidophillus, Bifidobacterium bifidum
ditemukan dapat
meningkatkan aktivitas fagositosis dari sistem immunitas
non spesifik (Erickson dan Hubbard, 2000). Schiffrin et al.,
12
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
(1995) menjelaskan bahwa konsumsi bifidobakteria dan
laktobasili secara nyata meningkatkan aktifitas fagositosis
oleh monosit, dan granulosit. Perdigon et al. (2003)
menemukan bahwa Bifidobacterium adolescentis yang berasal
dari feses manusia menunjukkan ketidakmampuan untuk
meningkatkan immunitas inang, baik dengan mekanisme
fagositosis ataupun peningkatan sel immunoglobulin,
setelah idkonsumsi selama 2, 5 dan 7 hari. Hal ini karena
bakteri ini tidak mampu mengkolonisasi dinding usus
halus. Berbeda halnya dengan Bifidobacterium animalis
yang dapat meningkatkan immunitas, dengan mekanisme
fagositosis dan produksi sel immunoglobulin, dan dapat
mengkolonisasi dinding sel usus halus.
Gb. 1
monosit Memfagoosit E.Coli
3.2 Mencit (Mus musculus) Balb/c
Mencit (Mus Musculus) Balb/c merupakan hewan coba
yang sering digunakan dalam penelitian. Mencit memiliki
sifat – sifat reproduksi mirip dengan mamalia besar dan
siklus estrus pendek (Malole dan Pramono, 1989).
13
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Penggunaan mencit sebagai hewan percobaan
dilandasi berbagai pertimbangan, antara lain mencit
berukuran kecil, tidak membutuhkan banyak tempat, mudah
penanganannya, susunan anatomi dan fisiologi tubuhnya
mendekati manusia, serta mempunyai kemampuan yang
baik untuk menyesuaikan diri dengan kondisi berbagai jenis
penelitian. mencit biasanya digunakan dalam penelitian
yang mempelajari tentang kandungan gizi, studi tentang
suatu penyakit dan uji coba produk medis (Smith, 1988).
Menurut Malole dan Pramono (1989) kebutuhan pakan
mencit adalah 10% bobot badan, pakan harus mengandung
nutrisi yang lengkap dan memenuhi kebutuhan kelinci.
Pakan kelinci harus mengandung 14-18% protein, 5-10%
lemak, 40-50% karbohidrat, 16-20% serat kasar dan 5% abu.
Pakan mencit juga harus mengandung vitamin dan mineral
yang cukup agar dapat tumbuh dan berkembang dengan
baik.
14
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
BAB IV
TEMPAT, ALAT DAN BAHAN
T
empat
dan Waktu
penelitian adalah di
Laboratorium Ilmu Produksi Ternak Perah
Fakultas Peternakan Universitas Udayana, Laboratorium
Biosains dan Bioteknologi Universitas Udayana,
Laboratorium Virologi Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Udayana,
Laboratorium Analisis Pangan
Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Udayana,
Laboratorium
Mikrobiologi Fakultas Kedokteran
Universitas Udayana. Penelitian dilakukan selama lima
bulan, yaitu dari bulan Mei sampai dengan Oktober 2012.
Alat membuat kefir: panci lapis enamel, waskom
besar, batang pengaduk kayu, kompor, stoples, sendok
pengaduk, saringan plastik, termometer, incubator, lemari
pendingin.
Alat untuk análisis mikroba: Laminar flow, incubator,
sentrifugasi, spektrofotometer, tabung reaksi, botol media,
petridish, batang pengaduk kaca, lampu bunsen, gelas objek,
mikroskop, rak tabung reaksi, ose, ose jarum, agar puncher,
jangka sorong, timbangan analitik, beaker glass, erlenmeyer
segala ukuran, gelas ukur, autoclve, oven, magnetyic stirer,
vorstec, siringe 2,5 ml, siringe 1 ml, tabung darah, Alat
untuk mengambil dan análisis darah : pipet hematokrit,
15
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
tabung microtube dengan EDTA, pipet mikro, mikrotiter,
hemasitometer Neuber, gelas obyek, mikroskop
Bahan utama dalam penelitian ini adalah biji kefir
dan kultur bakteri Escherichia coli (ETEC) ATCC 25922
berturut – turut merupakan koleksi Laboratorium Ilmu
Ternak Perah, IPB, Bogor dan Laboratorium Mikrobiologi
Fakultas Kedokteran Universitas Udayana dan susu segar
yang diperoleh dari pasar swalayan sekitar Denpasar.
Media yang digunakan untuk pemupukan dan
pembiakan adalah medium MRS Agar (OXOID), medium
MRS Broth (OXOID), dan medium Tryptone Soy Broth
(TSB). Medium MRS Agar dan MRS Broth digunakan untuk
pemupukan dan pembiakan bakteri asam laktat, sedangkan
medium TSB digunakan untuk pembiakan E.coli. Larutan
fisiologis NaCl 0,85% digunakan sebagai larutan untuk
pengenceran. Kit API 50 CH dan API 50 CHL medium
untuk identifikasi BAL
Bahan – bahan yang digunakan untuk analisis darah
yaitu suspense bakteri E.coli ATCC 25922, larutan Turk’s
pewarna Giemsa, metanol, Phosfat Buffer Solution (PBS),
alkohol 70%, EDTA, tween 80.
16
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
BAB V
CARA KERJA DAN RANCANGAN
5.1 Pembuatan Kefir dan larutan BAL
P
embuatan Kefir : Susu sapi segar dipanaskan pada
suhu 85º C selama 30 menit. Tujuan pemanasan
susu untuk membunuh mikroba yang tidak diinginkan
dan denaturasi protein sehingga meningkatkan viskositas
produk. Selanjutnya susu didinginkan sampai suhu ± 27º C.
Inokulasi dengan 5 % biji kefir, kemudian diinkubasi pada
suhu ± 22º C selama 20 jam, dan didinginkan pada suhu
5ºC.
Pembuatan larutan BAL: stok kultur BAL dari kefir
dan biji kefir diremajakan dengan menggunakan media
broth MRS. Bakteri asam laktat yang sudah tumbuh
bagus kemudian dilarutkan dalam broth MRS sehingga
populasinya mencapai 108cfu/ml.
5.2 Pemeriksaan Mikrobiologis Kefir
Sampel kefir sebanyak 5 ml dimasukkan ke dalam 45
ml larutan NaCl 0,85 % steril sehingga diperoleh larutan
dengan pengenceran 10-1. Selanjutnya dibuat pengenceran
berseri sampai 10-7. Sebanyak 0,1 ml suspensi kefir dari
pengenceran 10-5 – 10-7 dituangkan ke dalam cawan MRS
17
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Agar steril dan diratakan , kemudian diinkubasikan pada
suhu 37º C selama 24 – 48 jam. Total BAL yang dihitung
dari jumlah koloni yang tumbuh antara 30 – 300 koloni per
cawan petri.
5.3. Isolasi Bakteri Asam Laktat. Koloni yang terpisah pada cawan petri agar MRS (Oxoid
CM361), pada butir 5.2 diambil, kemudian digoreskan pada
cawan agar MRS untuk mendapatkan kultur murni isolat
BAL. Selanjutnya isolat tersebut di identifikasi sampai level
genus dengan uji pewarnaan Gram, katalase, produksi gas
CO2 dari glukosa.
Uji katalase dilakukan dengan meneteskan H2O2 di
atas objek gelas yang berisi koloni isolat. Apabila terjadi
buih, berarti reaksi positif. Pembentukan gas CO2 dari
glukosa, dilakukan dengan menumbuhkan isolat pada
tabung reaksi broth MRS (Oxoid CM359) yang diisi tabung
durham, terbentuknya gas pada bagian atas tabung durham
menunjukkan karakteristik heterofermentatif. (Collins dan
Lyne, 1984).
Identifikasi sampai level spesies dengan uji
pertumbuhan pada suhu 15oC, 45oC, pertumbuhan pada
pH 2, 3 dan 4, pertumbuhan pada mM Nadeoxxy cholate
dan fermentasi karbohidrat menggunakan KIT API 50 CH.
Uji pertumbuhan pada suhu 15oC, 45oC, pertumbuhan
pada pH 2, 3 dan 4, pertumbuhan pada Na-deoxxy cholate
dilakukan dengan menumbuhkan isolat dalam broth
MRS, dalam broth MRS yang pH nya diatur menjadi 2, 3
18
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
dan 4 menggunakan asam klorida (HCl), dan dalam broth
MRS yang ditambahkan 0,2mM, 0,4 mM dan 0,6mM Nadeoxycholat. Kecuali disebutkan, semua broth diinkubasi
pada temperatut 37oC selama 2-3 hari. Isolat BAL yang
sudah teridentifikasi kemudian disimpan dalam broth MRS
mengandung 30% gliserol pada temperatur – 20oC sampai
saat digunakan.
5.4 Persiapan Larutan BAL
Stok kultur BAL isolat kefir dan biji kefir diremajakan
dengan menggunakan media broth MRS pada suhu 37oC
selama 24 jam, kemudian dibiakkan dalam MRS agar untuk
mengetahui populasi BAL nya. Biakan BAL berumur 24
jam yang sudah tumbuh bagus kemudian disentrifus,
supernatannya dibuang. Pelet yang diperoleh dilarutkan
dengan air steril sehingga populasinya mencapai 108cfu/
ml.
5.5 Persiapan Hewan Coba
Mencit betina yang akan digunakan dalam penelitian
berumur 2 – 3 bulan dengan berat 20 – 30 gram, sebanyak
150 ekor. Mencit diadaptasikan dengan lingkungan selama
1 minggu, ditempatkan di kandang percobaan, dan diberi
pakan komersil pellet.
Mencit dikelompokkan secara acak menjadi 6
kelompok, diberikan pakan dan air minum secara ad libitum.
Pemberian perlakuan secara oral dalam 4 konsentrasi, yaitu
0 % (kontrol positif/KNO), 0 % (kontrol negatif/KNE), kefir
19
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
masing – masing 0,1 % , 0,2 %, 0,3 % dari bobot tubuh dan
diberikan selama 4 minggu. Tujuh hari setelah pemberian
kefir, semua mencit kecuali kelompok KNO diinfeksi
dengan patogen Escherichia coli untuk aktivasi pembentukan
antibodi. Penginfeksian patogen dilakukan secara oral
dengan konsentrasi 108cfu/ekor.
5.6 Pengambilan Sampel Darah
Sampel darah diambil setiap minggu setelah mencit
diberi perlakuan pemberian kefir. Darah sebanyak 0,5 ml
diambil dari pembuluh arteri pada mata (sinus orbitalis).
Darah untuk total leukosit, differensial leukosit, dan
aktivitas fagositosis disimpan dalam tabung yang telah
diberi EDTA. Darah yang digunakan dalam pemeriksaan
antibodi, ditampung dalam tabung mikrofuse dan dibiarkan
selama satu jam pada temperatur kamar. Serum diambil
setelah bagian padatan darah mengendap. Serum disimpan
pada suhu -200 C sebelum dilakukan analisa selanjutnya.
5.7 Penghitungan Leukosit
Total leukosit dihitung sesuai dengan metode Saikia
et al. (2003). Sampel darah dihisap dengan pipet yang
dilengkapi aspirator sampai skala 0,5, dilanjutkan dengan
menghisap larutan Turk’s sampai skala 11. Darah dan
larutan Turk’s dihomogenkan. Tetesan pertama sampel dari
pipet dibuang, tetesan berikutnya dimasukkan ke dalam
Hemasitometer Neuber dan ditutup dengan cover glass.
Jumlah leukosit dihitung dengan bantuan mikroskop pada
20
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
empat kotak besar Hemasitometer Neuber. Jumlah total
leukosit = jumlah sel leukosit terhitung x 50 sel/mm3.
5.8 Differensial leukosit
Pemeriksaan diferensial leukosit dilakukan mengikuti
prosedur Saikia et al. (2003). Pertama dibuat ulasan darah
di atas gelas objek, dikeringkan dengan udara dan difiksasi
dengan metanol selama 5 menit. Sediaan dibilas dengan
aquades, dikeringkan dan diwarnai dengan pewarna
Giemsa selama 15 menit. Setelah itu, sediaan ulas darah
dibilas dengan air mengalir dan dikeringkan. Identifikasi
dan penghitungan diferensial leukosit di bawah mikroskop
dengan menggunakan minyak emersi dengan pembesaran
1000 kali. Setiap 100 leukosit yang ditemukan, dihitung, dan
dikelompokkan ke dalam masing – masing jenis leukosit,
yaitu neutrofil, monosit, limfosit, eosinofil, dan basofil.
Penghitungan leukosit menggunakan beberapa lapang
pandang sepanjang ulasan yang digeser ke arah tengah
kemudian bergeser sejajar dengan tepi ulasan dan bergerak
ke tepi kembali dan seterusnya sampai mencapai jumlah
leukosit sebanyak 100. Nilai relatif leukosit yang ditemukan
dinyatakan dalam satuan persen.
5.9 Pemeriksaan Indeks Fagositik
Darah sebanyak 50 µl dimasukkan ke dalam mikrotiter
plate dan ditambahkan suspensi bakteri Escherichia coli
sebanyak 50 µl, dihomogenkan, kemudian diinkubasikan
selama 20 menit. Setelah itu diambil sebanyak 50 µl,
21
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
diteteskan pada objek gelas, dibuat ulasan dan dikeringkan
di udara. Spesimen pada objek gelas difiksasi dengan
menggunakan metanol 95 % selama 5 menit, dibilas dan
dikeringkan. Selanjutnya preparat diwarnai dengan
pewarna Giemsa (7 %) selama 15 menit, dibilas dengan air
mengalir dan dikeringkan, diamati di bawah mikroskop.
Aktivitas fagositik diukur berdasarkan persentase sel
neutrofil dan monosit yang menunjukkan proses fagositosis
(Saikia et al., 2003).
5.10Pemeriksaan Titer Antibodi
Pemeriksaan keberadaan antibodi di dalam plasma
darah dilakukan dengan prosedur Carpenter (1975). Serum
darah diencerkan dengan penambahan PBS (Phosfat Buffer
Solution) secara berseri sebanyak 10 kali : (a) PBS sebanyak
50 µl dimasukkan dalam 10 sumur mikrotiter. Serum dengan
jumlah yang sama ditambahkan ke dalam sumur pertama
dan dihomogenkan. Sebanyak 50 µl campuran pada sumur
monosit Memfagoosit E.Coli
Gb. 2
22
limfosit
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
pertama diambil, dimasukkan dalam sumur kedua dan
dihomogenkan. Prosedur pengenceran ini dilakukan sampai
pada sumur terakhir. Setelah itu ke dalam kesepuluh sumur
tadi ditambahkan antigen berupa suspense Escherichia coli
sebanyak 50 µl, dihomogenkan dan diinkubasi selama 5 –
10 menit. Keberadaan antibodi ditunjukkan dengan adanya
aglutinasi.
5.11 Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan pola faktorial dalam
rancangan acak lengkap dengan ulangan sebanyak dua kali.
Pengaruh perlakuan terhadap parameter dianalisis dengan
analisis ragam. Bila analisis ragam menunjukkan perbedaan
nyata (p<0,05), maka dilanjutkan dengan uji Duncan (Steel
dan Torrie, 1991).
23
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
BAB VI
SEL DARAH PUTIH
S
el darah putih merupakan bagian dari darah yang
berperan dalam pertahanan dan kekebalan tubuh.
Sel darah putih terdiri dari limfosit, neutrofil, monosit,
eosinofil, dan basophil (Rengganis, 2009).
6.1 Leukosit
Data hasil pemeriksaan leukosit darah mencit selama
penelitian (2011) disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1 Rata-rata Jumlah Leukosit Darah Mencit yang Diberi Kefir
Lama Waktu Pemberian
Perlakuan
0 hari
7 hari
14 hari
21 hari
28 hari
------- ---------------( 10 sel/mm )----------------------------------3
3
KNE
2,65 aCD ±0,49
2,5aC ± 0,71
2,85aCD ± 0,35
1,5aCD ± 0,0
3,10aD* ± 0,14
Kefir 0,1%
3,95 abCD ±0,49
1,95abC ± 0,21
4,0abCD ± 0,85
1,70abCD ± 0,21
5,93abD ± 0,79
Kefir 0,2%
4,45abCD ±1,20
2,05abC ± 0,35
5,30abCD ± 0,42
2,25abCD ± 0,92
6,43abD ± 0,70
Kefir 0,3%
3,95 bCD ± 0,49
2,55bC ± 0,35
4,65bCD ± 0,78
4,60bCD ± 0,71
7,15bD ± 0,49
Keterangan:
Superscript dengan huruf kecil berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan
yang nyata (p<0,05) Superscript dengan huruf besar yang berbeda dalam satu kolom
menyatakan perbedaan yang nyata (p< 0,05)
Jumlah leukosit darah mencit yang diperiksa selama
penelitian berkisar antara 1,5 - 7,15 x 103 sel/mm3. Jumlah
leukosit sampai akhir penelitian mengalami peningkatan
24
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
pada semua perlakuan. Peningkatan jumlah leukosit
tersebut masih dalam batas normal jumlah leukosit darah
mencit, yaitu antara 6-15 x 103 sel/mm3.
Rata-rata jumlah leukosit mencit kontrol meningkat
16,98 % dari 2,65 x 103sel/mm3 menjadi 3,10 x 103sel/mm3.
Rata-rata jumlah leukosit mencit yang diberi kefir meningkat
74,39 % dari 4,1 x103sel/mm3 sebelum diberi kefir menjadi 6,5
x 103sel/mm3 setelah diberi kefir selama 28 hari. Peningkatan
jumlah leukosit terbesar terjadi pada mencit yang diberi
perlakuan kefir 0,3% yaitu sebesar 81,01 % yaitu dari 3,95 x
103sel/mm3 menjadi 7,15 x 103sel/mm3. Peningkatan jumlah
leukosit dengan pemberian kefir pada konsentras berbeda
tidak berbeda nyata (p> 0,05) dibandingkan dengan kontrol,
dan antarperlakuan kecuali antara perlakuan konsentrasi
pemberian kefir 0,1% dengan 0,3% dari bobot badan (p<
0,05). Fuller (1992) menyatakan bahwa mikroba probiotik
hendaknya dikonsumsi secara kontinu agar diperoleh efek
yang menyehatkan.
Peningkatan respon kekebalan seluler terjadi selama
penelitian ditandai dengan meningkatnya jumlah leukosit
dalam darah. Bakteri probiotik yang dikonsumsi melapisi
permukaan mukosa usus dan berinteraksi dengan sel-sel
kekebalan yang ada pada lapisan epithel dan lamina propria
pada saluran pencernaan.
Jumlah leukosit darah mencit yang diperiksa selama
penelitian berkisar antara 0,53 – 7,93 x 103sel/mm3. Jumlah
leukosit sampai akhir penelitian mengalami peningkatan
hanya pada perlakuan dengan L.paracasei . Peningkatan
25
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
jumlah leukosit tersebut masih di bawah batas normal
jumlah leukosit darah mencit yaitu antara 6 – 15 x 103sel/
mm3.
Data hasil pemeriksaan leukosit darah mencit selama
penelitian (2012) disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Rerata Jumlah Leukosit Darah Mencit
Perlakuan
7 hari
Lama Waktu Pemberian
14 hari
21 hari
(103 sel/mm3)
28 hari
KNE
1,37a ± 0,22
2,45a ± 1,53
7,93a ± 11,93
1,42a ± 1,21
Kefir
4,02b ± 1,90
2,51a ± 1,11
1,65a ± 1,51
1,17a ± 1,89
L. paracasei
0,53 ± 0,47
0,82 ± 1,01
1,93 ± 1,69
2,51a ± 0,59
L. brevis
3,90b ± 1,73
2,06a ± 1,24
1,86a ± 1,22
2,48a ± 0,87
a
a
a
Keterangan :
Superscript yang berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan yang nyata (p<0,05).
Superscript yang berbeda dalam satu kolom menyatakan perbedaan yang nyata
(p<0,05).
Rerata jumlah leukosit mencit kontrol meningkat
3,65 % dari 1,37 x 103sel/mm3 menjadi 1,42 x 103sel/mm3.
Rerata jumlah leukosit mencit yang diberi kefir mengalami
penurunan sebesar 70,90 % dari 4,02 x 103sel/mm3 sebelum
diberi kefir menjadi 1,17 x 103sel/mm3setelah diberi kefir
selama 28 hari. Peningkatan jumlah leukosit terbesar terjadi
pada mencit yang diberi perlakuan L.paracasei yaitu sebesar
373,58 % yaitu dari 0,53 x 103sel/mm3menjadi 2,51 x 103sel/
mm3. Peningkatan jumlah leukosit dengan pemberian
L.paracasei tidak berbeda nyata (p>0,05) dibandingkan
dengan kontrol.
Fuller (1992) menyatakan bahwa mikroba probiotik
hendaknya dikonsumsi secara kontinyu agar diperoleh
26
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
efek yang menyehatkan. Bakteri probiotik yang dikonsumsi
melapisi permukaan mukosa usus dan berinteraksi dengan
sel – sel kekebalan yang ada pada lapisan epitel dan lamina
propria pada saluran pencernaan.
Weizman et al. (2005) menjelaskan probiotik bakteri
nonpatogen yang berkoloni di usus akan memodifikasi
mikroba dan melakukan aktivitas metabolik dengan efek
yang menguntungkan inang. Bakteri probiotik secara
menguntungkan berefek pada keseimbangan mikroba di
usus. Menurut Jawetz et al. (1996), ciri khas patogen antara
lain mempunyai kemampuan pelekatan pada sel inang, sel
pada jaringan inang, toksigenitas, dan kemampuan untuk
menghindari sistem imun inang yang lebih tinggi dari
bakteri non patogen.
Peningkatan respon kekebalan seluler terjadi
selama penelitian dengan perlakuan L.paracasei ditandai
dengan meningkatnya jumlah leukosit dalam darah.
Anderson (1992) menyatakan leukosit merupakan salah
satu komponen darah yang berfungsi sebagai pertahanan
nonspesifik yang akan melokalisasi dan mengeliminir
patogen melalui fagositosis. Hasil penelitian Mudjiutami et
al. (2000), terjadi peningkatan jumlah leukosit setelah diberi
immunostimulan memberikan respon positif terhadap daya
tahan tubuh. Brown (2000) menambahkan ,peningkatan
kekebalan tubuh dapat diketahui dari peningkatan aktivitas
sel fagosit, meningkatnya produksi sitokin (Gackowska et
al., 2006), dan meningkatnya aktivitas fagositosis (Erickson
dan Hubbard, 2000).
27
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
6.2 Limfosit
Limfosit merupakan sel darah putih yang memiliki
ukuran yang bervariasi antara 6-9 μm sampai 12-15
μm. Sel limfosit berinti besar dikitari oleh sitoplasma yang
berwarna biru pucat. Inti sel limfosit umumnya memiliki
lekukan pada salah satu sisinya. Jumlah limfosit darah
kelinci selama penelitian dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Rata-rata Jumlah Limfosit
Lama Waktu Pemberian
0 hari
Perlakuan
7 hari
14 hari
21 hari
28 hari
------- ---------------( 10 sel/mm )----------------------------------3
3
KNE
1216,5a ± 448
1213,50a ± 147,78
2160,80a±261,34
928,50a± 65,76
1774,50a ± 154,57
Kefir 0,1%
1408 ± 123
1632,15 ± 177,55
2759,30 ± 331,91
1229,10 ± 287,79
4257,75a ± 214,89
Kefir 0,2%
1304 ± 293
1840,50 ± 249,89
3456,00 ± 317,91
1957,15 ± 146,44
5853,05a ± 234,97
Kefir 0,3%
2059a±
1887,45a± 259,15
2523,80a ± 113,41
2599,75a ± 318,14
5990,20a ± 271,81
a
a
324
a
a
a
a
a
a
Keterangan:
Superscript dengan huruf kecil berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan
yang nyata (p<0,05) Superscript dengan huruf besar yang berbeda dalam satu kolom
menyatakan perbedaan yang nyata (p< 0,05)
Jumlah limfosit meningkat seiring dengan peningkatan
leukosit. Hasil pemeriksaan hitung jenis leukosit
menunjukkan terjadinya trend peningkatan jumlah limfosit
sampai pada akhir penelitian . Rata jumlah limfosit kontrol
meningkat 85,7% dari 1216,5 sel/mm3 menjadi 2260,2 sel/
mm3. Mencit yang diberi kefir rata-rata jumlah limfositnya
meningkat150,8% dari 1590,5 sel/mm3 menjadi 4007,33 sel/
mm3. Peningkatan jumlah limfosit tertinggi terjadi pada
mencit yang diberi kefir 0,3% yaitu sebesar 190,9% dari
2059 sel/mm3 menjadi 5990.2 sel/mm3.
28
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Faktor konsentrasi memberikan pengaruh yang tidak
berbeda nyata (P>0,05) terhadap limfosit, tetapi pada akhir
penelitian jumlah limfosit mencit yang diberi kefir berbeda
sangat nyata dibandingkan dengan dengan kontrol. Ratarata jumlah limfosit tertinggi diperoleh dari mencit yang
diberi kefir 0,3% yaitu sebesar 5990,2 sel/mm3, sedangkan
rata-rata limfosit terendah diperoleh dari mencit kontrol
yaitu sebesar 928,5 sel/mm3.
Limfosit merupakan komponen dari leukosit
yang jumlahnya cukup besar. Apabila limfosit berikatan
dengan antigen maka limfosit akan dirangsang untuk
memperbanyak diri
sehingga jumlahnya meningkat
dengan cepat. Limfosit juga akan mengeluarkan faktor
kemotaksis yang akan menarik makrofag kelingkungannya
untuk membantu proses penghancuran antigen (Frandson,
1996).
Neutrofil (ungu di tengah)
Gb. 2
29
Preparat ulas darah
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
6.3 Neutrofil.
Neutrofil merupakan sel darah putih yang berperan
sebagai bagian terdepan dari sistem kekebalan tubuh dalam
menghadapi konfigurasi asing. Sel neutrofil berbentuk
bundar dengan diameter 10-12 μm dengan inti bergelambir.
Hasil pemeriksaan diferensial leukosit neutrofil (penelitian
2011) ditampilkan pada Tabel 4.
Tabel 4 Rata-rata Jumlah Neutrofil
Lama Waktu Pemberian
0 hari
Perlakuan
7 hari
14 hari
21 hari
28 hari
------- ---------------( 103sel/mm3)-----------------------------------
KNE
1216,5 a± 210,6
240,00a ± 113,13
686,20a ±172,81
772,75a ± 233,7
130,25a ±9,83
Kefir 0,1%
1817,0 ± 227,68
286,30 ± 31,61
685,60 ± ±36,20
484,85 ±79,12
43,275 a ±25,70
Kefir 0,2%
2919,6 ± 546,52
a
282,90 ± 48,79
a
1002.10 ±92,63
220,25 ±12,09
128,32 a ±7,96
Kefir 0,3%
1365,1 ± 60,67
586,35 ±108,82
651,20 ± 90,51
480,60 ±61,09
75,9350 a ±29,54
a
a
a
a
a
a
a
a
a
a
Keterangan:
Superscript dengan huruf kecil berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan
yang nyata (p<0,05) Superscript dengan huruf besar yang berbeda dalam satu kolom
menyatakan perbedaan yang nyata (p< 0,05)
Rata-rata jumlah neutrofil pada mencit mengalami
penurunan, Pada mencit kontrol
jumlah neutrofil
mengalami penurunan sebesar 88.8 % , dari 1216,5 sel/mm3
menjadi 130,2 sel/mm3, namun pada hari ke 14, seminggu
setelah disensitisasi dengan bakteri E.coli, jumlah neutrofil
meningkat sebesar 94,1%, dari 240,0 sel/mm3 menjadi 686,2
sel/mm3. Pemberian kefir pada mencit menurunkan ratarata jumlah neutrofil pada akhir penelitian sebesar 95,6%
dari 2033,6 sel/mm3 menjadi 82,66 sel/mm3, namun setelah
disensitiasi dengan E. coli ternyata jumlah neutrofil darah
30
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
meningkat 107,3% dari rata-rata 376,66 sel/mm3 menjadi
rata-rata 779,6 sel/mm3. Peningkatan jumlah neutrofil
tertinggi terjadi pada mencit yang diberi kefir 0,2% yaitu
sebesar 254% dari 282,9 sel/mm3 menjadi 1002,1 sel/mm3.
Neutrofil merupakan barisan terdepan dari sistem
kekebalan tubuh untuk melawan invasi patogen. Neutrofil
biasanya ada dalam peredaran darah dan akan meningkat
dengan cepat apabila terjadi infeksi dan merupakan
komponen sel pertahanan tubuh yang pertama sampai
ketempat terjadinya infeksi oleh patogen. Neotrofil
bergerak dalam pembuluh darah menembus diding kapiler
dan bergerak secara amuboid di dalam jaringan untuk
menghancurka antigen. Peningkatan jumlah neutrofil yang
terjadi selama penelitian menunjukkan bahwa kefir mampu
berperan sebagai imunostimulan dengan meningkatkan
produksi sel-sel kekebalan di dalam tubuh.
Hasil pemeriksaan diferensial leukosit neutrofil
(penelitian 2012) ditampilkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Rerata Jumlah Neutrofil Darah Mencit
Perlakuan
Lama Waktu Pemberian
7 hari
14 hari
21 hari
28 hari
KNE
353,67 ±124,44
495,67 ±89,65
42,33 ± 5,50
547,33a± 343,05
Kefir
641,00bc± 38,51
135,33bd± 78,50
64,67a± 74,57
129,00bc± 2,65
L. paracasei
88,33c ± 85,59
63,67cd ± 64,08
60,67a± 71,39
353,33ac±152,10
L. brevis
495,6 ± 89,65
138,00 ± 116,05
246 ± 301,06
380,30ab±180,31
a
ac
a
d
a
a
Keterangan :
Superscript yang berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan yang nyata (p<0,05).
Superscript yang berbeda dalam satu kolom menyatakan perbedaan yang nyata
(p<0,05).
31
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Hasil pemeriksaan hitung jenis leukosit menunjukkan
terjadinya trend peningkatan jumlah neutrofil sampai
pada akhir penelitian. Jumlah neutrofil kontrol meningkat
54,76% dari 353,67 sel/mm3 menjadi 547,33 sel/mm3 . Mencit
yang diberi L.paracasei rata – rata jumlah neutrofilnya
meningkat 300,01% dari 88,33 sel/mm3 menjadi 353,33 sel/
mm3 . Pemberian kefir pada mencit menurunkan rata – rata
jumlah neutrofil pada akhir penelitian sebesar 79,88% dari
641,00 sel/mm3 menjadi 129,00 sel/mm3 . Demikian pula
dengan pemberian L. brevis menurunkan rata – rata jumlah
neutrofil pada akhir penelitian sebesar 23,27% dari 495,67
sel/mm3 menjadi 380,33 sel/mm3.
Neutrofil merupakan barisan terdepan sistem
kekebalan tubuh untuk melawan invasi patogen. Neutrofil
biasanya ada dalam peredaran darah dan akan meningkat
dengan cepat apabila terjadi infeksi dan merupakan
komponen sel pertahanan tubuh yang pertama sampai ke
tempat terjadinya infeksi oleh patogen. Neutrofil bergerak
dalam pembuluh menembus dinding kapiler dan bergerak
secara amuboid di dalam jaringan dan menghancurkan
antigen. Peningkatan jumlah neutrofil yang terjadi selama
penelitian menunjukkan bahwa L.paracasei mampu berperan
sebagai immunostimulan dengan meningkatkan produksi
sel –sel kekebalan dalam tubuh.
6.4 Monosit.
Monosit merupakan sel-sel leukosit yang menyerupai
neutrofil dan bersifat fagositik. Monosit memiliki ukuran terbesar
32
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
diantara sel-sel leukosit lainnya. Sel monosit memiliki sitoplasma
lebih banyak dari limfosit dan berwarna biru abu-abu pucat. Data
hasil pemeriksaan diferensial monosit selama penelitian (2011)
dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6 Rata-rata Jumlah Monosit Darah Mencit Yang diber Kefir
Lama Waktu Pemberian
Perlakuan
0 hari
7 hari
14 hari
21 hari
28 hari
------- ---------------( 103sel/mm3)----------------------------------KNE
226,25aB ± 49,14
30,00 aB ± 14,14
737,30 aB ±72,55
30,75 aB ± 6,71
227,65 aB ± 17,18
Kefir 0,1%
659,65 a B ± 82,66
15,60 aB ± 1,69
539,00 aB ±72,69
10,05 aB ±6,15
121,63 aB ± 27,53
Kefir 0,2%
331,50 aB ± 38,89
121,80 aB ± 30,83
1011,20 aB ±28,28
106,30 aB ± 23,62
360,40 aB ± 63,92
Kefir 0,3%
394,90 aB ± 49,64
32,25 aB ± 15,06
25,40 aB ±5,37
25,00 aB ± 4,10
13,12 aB ± 5,94
Keterangan:
Superscript dengan huruf kecil berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan
yang nyata (p<0,05). Superscript dengan huruf besar yang berbeda dalam satu kolom
menyatakan perbedaan yang nyata (p< 0,05)
Rata-rata jumlah monosit darah mencit selama
penelitian tidak mengalami modifikasi yang bermakna.
Rata-rata jumlah monosit darah mencit cenderung
mengalami penurunan kecuali pada mencit yang mendapat
perlakuan kefir 0,2% yang mengalami peningkatan yang
tidak bermakna, yairu sebesar sebesar 8,7%. Rata-rata
jumlah monosit tertinggi diperoleh dari darah mencit pada
hari ke 14 setelah perlakuan yaitu sebesar 578,25 sel/mm3
yaitu seminggu setelah mencit disensitisasi denganbakteri
E.coli.
Rata-rata jumlah monosit darah mencit tertinggi
diperoleh dari mencit yang diberi kefir 0,2 % yaitu sebesar
1011,se/mm3 yang terdeteksi pada hari ke 14 dan rata-rata
33
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
jumlah monosit terendah diperoleh dari mencit yang diberi
kefir 0,1% yaitu sebesar 10,05 %.
Konsentrasi probiotik berpengaruh terhadap jumlah
monosit walaupun tidak bermakna (p>0,05). Konsentrasi
kefir 0,2% mampu meningkatrkan jumlah monosit mencit
sebesar 37,1% dan 58,34% pada hari ke 14 dan 28 setelah
perlakuan dibandingkan dengan kontrol. Peningkatan
jumlah monosit ini karena adanya infeksi oleh patogen,
sehingga monosit yang merupakan sel-sel pertahanan tubuh
terdepan bersama neutrofil akan dengan cepat mengalami
peningkatan populasi.
Penurunan jumlah monosit dalam darah selama
penelitian dipengaruhi oleh beberapa faktor. Monosit yang
diproduksi di sumsum tulang belakang akan berada dalam
peredaran darah selama beberapa hari, kemudian akan
mengalami deferensiasi menjadi makrofag dan sel dendrit
yang akan membunuh patogen. Hal ini menyebabkan
populasi monosit yang terdeteksi cukup tinggi pada hari
ke 14, seminggu setelah infeksi dengan E. coli dan kemudian
mrnurun sampai akhir penelitian.
Data hasil pemeriksaan diferensial monosit selama
penelitian (2012) dapat dilihat pada Tabel 7.
34
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Tabel 7. Rerata Jumlah Monosit Darah Mencit
Lama Waktu Pemberian
Perlakuan
7 hari
14 hari
21 hari
KNE
41,67 ±26,65
24,33 ±15,63
12,67 ± 3,51
25,00 ± 7,93
Kefir
ab
22,00 ± 10,00
bd
2786,67 ±445,57
102,10 ± 24,85
17,33ac± 1,15
L. paracasei
7,67b ± 5,13
1446,67c±342,39
537,00c± 22,87
21,00a±3,46
L. brevis
33,00ab ± 18,00
2339,33d± 695,56
14,00ad ± 9,54
9,33bc±2,52
a
a
a
b
28 hari
a
Keterangan :
Superscript yang berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan yang nyata
(p<0,05). Superscript yang berbeda dalam satu kolom menyatakan perbedaan
yang nyata (p<0,05).
Rerata jumlah monosit darah mencit cenderung
mengalami penurunan kecuali pada mencit yang mendapat
perlakuan L.paracasei yang mengalami peningkatan yaitu
sebesar 173,79%. Rerata jumlah monosit darah mencit
kontrol dan pemberian kefir mengalami penurunan masing
– masing sebesar 40% dan 21,23%. Rerata jumlah monosit
yang mengalami penurunan terbesar diperoleh dari mencit
yang diberi L.brevis yaitu sebesar 71,73%.
Pemberian L.paracasei mampu meningkatkan jumlah
monosit mencit. Peningkatan jumlah monosit ini karena
adanya infeksi oleh patogen sehingga monosit yang
merupakan sel – sel pertahanan tubuh terdepan bersama
neutrofil akan dengan cepat mengalami peningkatan
populasi.
Penurunan jumlah monosit dalam darah selama
penelitian dipengaruhi oleh beberapa faktor. Monosit yang
diproduksi di sumsum tulang belakang akan berada dalam
peredaran darah selama beberapa hari, kemudian akan
mengalami diferensiasi menjadi makrofag dan sel dendrit
35
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
yang akan membunuh patogen. Hal ini menyebabkan
populasi monosit yang terdeteksi cukup tinggi pada hari ke
– 14, seminggu setelah infeksi dengan E. coli dan kemudian
menurun sampai akhir penelitian. Serbina et al., (2008)
menyatakan bahwa monosit yang terpapar oleh patogen
akan diransang untuk berdiferensiasi menjadi makrofag
dan sel dendrit yang berfungsi sebagai sel efektor untuk
membunuh antigen yang masuk ke dalam tubuh.
6.5 Eosinofil
Eosinofil adalah granulosit dengan inti yang terbagi
dua lobus dan sitoplasma bergranula kasar, refraktil, dan
berwarna merah tua oleh zat warna yang bereaksi asam yaitu
eosin. Walaupun mampu melakukan fagositosis, eosinofil
tidak mampu membunuh kuman. Data hasil pemeriksaan
eosinofil selama penelitian dapat dilihat pada Tabel 8.
Tabel 8 Rerata Jumlah Eosinofil Darah Mencit
Lama Waktu Pemberian
Perlakuan
7 hari
14 hari
21 hari
28 hari
KNE
63,3 ±38,14
58,33 ±29,40
14,67 ± 9,81
25,00 ± 7,94
Kefir
52,33a± 40,67
24,67a±20,23
14,00a± 11,14
10,33bc± 1,53
L. paracasei
20,67a ± 12,42
95,33ab±62,05
14,67a± 1,53
21,00a±3,46
L. brevis
20,33a ± 9,07
43,00a± 14,80
55,00b ± 36,51
8,67c±1,53
a
a
a
a
Keterangan :
Superscript yang berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan yang nyata (p<0,05).
Superscript yang berbeda dalam satu kolom menyatakan perbedaan yang nyata
(p<0,05).
36
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Rerata jumlah eusinofil darah mencit kontrol
mengalami penurunan selama penelitian sebesar 60,51%.
Rerata jumlah eusinofil darah mencit cenderung mengalami
penurunan kecuali pada mencit yang mendapat perlakuan
L.paracasei yang mengalami peningkatan, yaitu sebesar
1,60%. Pemberian kefir pada mencit menurunkan rerata
jumlah eusinofil pada akhir penelitian sebesar 80,26%.
Demikian pula dengan pemberian L. brevis menurunkan
rata – rata jumlah eusinofil pada akhir penelitian sebesar
57,35%.
Eosinofil merupakan sel utama kedua dari sistem
meiloid, sel ini tidak seefisien neutrofil dalam fagositosis,
tetapi memiliki lisosom dan mengadakan letupan pernafasan
bila terangsang dengan tepat (Tizard,1988). Eosinofil
termasuk dalam fagosit lemah yang berfungsi sebagai
detoksikasi protein sebelum dapat menyebabkan kerusakan
dalam tubuh. Sel ini masuk ke dalam darah dalam jumlah
besar bila ada benda asing masuk (Bijanti,2005).
37
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
BAB VII
INDEKS FAGOSITIK
I
ndek fagositik merupakan persentase kemampuan
sel-sel kekebalan melakukan proses fagositosis
terhadap antigen yang masuk kedalam tubuh. Indek
fagositik ditentukan berdasarkan banyaknya sel yang
menunjukkan aktivitas fagositosis dari seratus neutrofil dan
monosit. Hasil pemeriksaan indek fagositik (2011) disajikan
pada Tabel 9.
Tabel 9. Rata-rata Indeks Fagositik
Lama Waktu Pemberian
0 hari
Perlakuan
7 hari
14 hari
21 hari
28 hari
------- ---------------( %)-----------------------------------
KNE
5,66a B± 0,47
16,33a B ±1,24
16,66aC ±2,05
17,66a C±1,24
18,33 aC ±1,24
Kefir 0,1%
7,0b B ± 0,81
56,33b B ±2,05
78,00 bC ±2,94
82,66 bC ±2,05
85,66 Cb ±1,69
Kefir 0,2%
6,0b B ± 1,0
57,33b B ±8,32
84,00 bC ±1,0
87,33 bC ±1,53
88.00 bC ±1,00
Kefir 0,3%
7,33
69,33
82,33
85,66
88,00 bC ±1,00
bB
± 0,58
bB
±8,32
bC
±2,31
bC
±3,51
Keterangan:
Superscript dengan huruf besar yang berbeda pada kolom yang berbeda menunjukkan
perbedaan yang nyata (p< 0,05) Superscript dengan huruf kecil yang berbeda pada baris
yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Rata-rata indeks fagositik pada mencit kontrol berkisar
antara 16,33% - 18,33%., sedangkan mencit yang diperi
perlakuan kefir menunjukkan indeks fagositik berkisar
antara 60,99% - 85,66%. Indeks fagositik mencit kontrol
meningkat sebesar 12,24% jauh lebih rendah dibanding
dengan peningkatan indeks fagositik mencit yang diberi
perlakuan kefir yaitu sebesar 29,04%.
38
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Pengaruh probiotik kefir terhadap nilai indeks fagositik
berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan dengan kontrol.
Faktor konsentrasi probiotik tidak memberi pengaruh yang
nyata terhadap nilai indeks fagositik. Aktivitas fagositosis
yang ditunjukkan oleh probiotik kefir disebabkan oleh BAL
yang terkandung di dalamnya. Kenyataan ini sesuai dengan
Meydani dan Ha (2000) yang melaporkan bahwa mencit
yang diberi susu terfermentasi oleh BAL laktobasillus
menunjukkan aktivitas fagositik oleh makrofag.
Faktor lama pemberian kefir menunjukkan rata-rata
indeks fagositik mencit yang diberi kefir selama 7 hari
belum menunjukkan aktivitas fagositik yang bermakna
dibandingkan dengan sebelum diberi kefir, tetapi aktivitas
fagositik ini sangat bermakna setelah pemberian kefir selama
4 minggu. Hasil penelitian ini sesuai dengan Schiffrin et al.
(1995) yang menemukan bahwa pemberian kefir selama 3
minggu meningkatkan aktivitas fagositosis leukosit
Hasil pemeriksaan indeks fagositik (2012) disajikan
pada Tabel 10.
Tabel 10 Rerata Indeks Fagositik Darah Mencit
Lama Waktu Pemberian
Perlakuan
21 hari
28 hari
KNE
63,33a±1,52
7 hari
16,67a±2,52
14 hari
17,67a± 1,53
18,33a± 1,53
Kefir
56,33bc± 2,51
78,00b±3,61
85,67bc± 2,52
85,67bc± 2,08
L. paracasei
c
57,33 ± 8,33
88,00 ±2,00
86,67 ± 2,51
87,00c±1,00
L. brevis
69,33d± 8,33
95,00d± 3,61
88,33cd ± 2,08
87,33cd±0,58
c
c
Keterangan :
Superscript yang berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan yang nyata (p<0,05).
Superscript yang berbeda dalam satu kolom menyatakan perbedaan yang nyata
(p<0,05).
39
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Rerata indeks fagositik pada mencit kontrol berkisar
antara 16,33 sel/mm3 - 18,33 sel/mm3, sedangkan mencit
yang diberi perlakuan kefir menunjukkan indeks fagositik
berkisar antara 56,33 sel/mm3 – 85,67 sel/mm3. Rerata indeks
fagositik L. paracasei berkisar antara 57,33 sel/mm3 - 88,00
sel/mm3. Sedangkan rata – rata indeks fagositik L. brevis
pada awal perlakuan sebesar 69,33 sel/mm3 dan terjadi
penurunan pada akhir perlakuan menjadi 87,33 sel/mm3.
Indeks fagositik mencit kontrol meningkat sebesar
12,24 % lebih rendah dibanding dengan peningkatan indeks
fagositik mencit yang diberi perlakuan kefir, L.paracasei, dan
L. brevis yaitu masing – masing sebesar 52,08% , 51,75%,
dan 25,96%. Pengaruh probiotik kefir, L.paracasei, dan L.
brevis terhadap nilai indeks fagositik berbeda nyata (p<0,05)
dibandingkan dengan kontrol.
Amrullah (2005) menyatakan pola peningkatan
persentase indek fagositik ini merupakan fungsi dari
peningkatan total leukosit maupun persentase jenis leukosit
masing – masing pada limfosit, monosit, dan neutrofil.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan, aktivitas fagositosis
yang ditunjukkan oleh probiotik kefir disebabkan oleh
BAL yang terkandung di dalamnya. Demikian juga halnya
dengan perlakuan L.paracasei, dan L. brevis Kenyataan ini
sesuai dengan Meydani dan Ha (2000) yang melaporkan
bahwa mencit yang diberi susu terfermentasi oleh BAL
laktobasilus menunjukkan aktivitas fagositik oleh makrofag.
Dalam penelitian ini, faktor lamanya waktu pemberian kefir
menunjukkan rata – rata indeks fagositik mencit yang diberi
40
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
kefir, L.paracasei, dan L. brevis selama 28 hari menunjukkan
aktivitas fagositik yang bermakna dibandingkan dengan
kontrol. Hasil penelitian ini sesuai dengan Schiffrin et al. (1995)
yang menemukan bahwa pemberian kefir meningkatkan
aktivitas fagositosis leukosit darah mencit. Menurut Spector
(1993) proses fagositosis terjadi apabila terjadi kontak antara
partikel dengan permukaan sel fagositosis. Baratawidjaja
dan Rengganis (2009) menjelaskan proses fagositosis terjadi
dalam beberapa tingkat yaitu diawali dengan kemotaksis
yaitu sel–sel fagositosis mendekati mikroba, kemudian
menangkap, fagositosis, memusnahkan, dan mencerna.
Gb. 4
Basofil (ungu ditengah)
Limfosit (ungu besar) dan monosit
(ungu kecil)
41
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
BAB VIII
TITER ANTIBODI
T
iter antibodi merupakan ukuran jumlah unit
antibodi per unit volume serum. Pemeriksaan titer
antibodi dilakukan untuk mengetahui kemampuan protein
serum yang mengandung antibodi untuk menggumpalkan
dan menghancurkan antigen yang masuk ke dalam tubuh
(Subowo, 2009). Titer antibodi biasanya dinyatakansebagai
hasil perbandingan terbalik dengan pengenceranserum
pada tabung reaksi terakhir pada seri pengenceran yang
meningkat yang menunjukkan proses penggumpalan.
Proses penggumpalan dan penghancuran yang dilakukan
oleh serum merupakan respon kekebalan humoral dan
dinyatakan dalam satuan seru aglutination unit (SAU) Hasil
pemeriksaan titer antibodi selama penelitian (2011) dapat
dilihat pada Tabel 11.
Tabel 11 Rata-rata Nilai Kadar Antibodi
7 hari
Perlakuan
14 hari
Lama Waktu Pemberian
21 hari
28 hari
------- ---------------( 103sel/mm3)-----------------------------------
KNE
21,4570 aB ±4,08
16,2840 aB ±4,44
37,7672 aB ±5,07
22,2770 aB ±4,85
Kefir 0,1%
20,5445 ±2,76
33,9668 ±7,68
24,6599 ±5,91
57,3033 aB ±10,12
Kefir 0,2%
13,4336 aB ±2,38
20,6651 aB ±4,65
22,4890 aB ±7,74
58,0347 aB ±6,92
Kefir 0,3%
9,3164 aB ±0,18
23,6738 aB ±7,43
39,1234 aB ±2,03
59,6197 aB ±5,95
aB
aB
aB
Keterangan:
Superscript dengan huruf besar yang berbeda pada kolom yang berbeda menunjukkan
perbedaan yang nyata (p< 0,05). Superscript dengan huruf kecil yang berbeda pada baris
yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
42
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Kadar antibodi serum darah mencit kontrol cendrung
tidak berubah selama penelitian. Serum darah mencit yang
diberi perlakuan kefir mengalami peningkatan sampai
dengan akhir penelitian. Kadar antibodi serum darah mencit
berkisar antara 21,46 – 59,62 SAU. Rata-rata kadar antibodi
serum darah mencit kontrol dan yang diberi perlakuan kefir
0,1%, 0,2% dan 0,3% adalah 24,44 ; 34,11; 28,65 dan 32,93
SAU, meningkat masing masing 39,56%, 17,22% dan 34,93%
dibandingkan dengan mencit kontrol namun secara statistik
menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05).
Hasil pemeriksaan titer antibodi selama penelitian
(2012) dapat dilihat pada Tabel 12.
Tabel 12. Rerata Jumlah Titer Antibodi Darah Mencit
Lama Waktu Pemberian
Perlakuan
7 hari
21 hari
28 hari
KNE
21,46a±21,40
16,37a±3,83
37,76a± 24,80
22,07a± 15,29
Kefir
57,75a± 34,70
13,43a±2,38
20,33a± 13,29
22,49a± 11,90
L. paracasei
25,50a ± 10,10
34,16a±8,52
21,71a± 3,81
21,66a±13,17
L. brevis
20,50 ± 12,21
22,50 ± 2,49
30,66 ± 9,09
20,05a±2,59
a
14 hari
a
a
Keterangan :
Superscript berbeda dalam satu baris menyatakan perbedaan yang nyata (p<0,05).
Superscript yang berbeda dalam satu kolom menyatakan perbedaan yang nyata
(p<0,05).
Kadar antibodi serum darah mencit kontrol mengalami
peningkatan selama penelitian sebesar 2,84%. Serum darah
mencit yang diberi perlakuan kefir, L. paracasei, dan L. brevis
mengalami penurunan sampai dengan akhir penelitian
masing – masing sebesar 61,00%, 15,06%, dan 2,20% namun
secara statistik tidak bermakna dibandingkan dengan
kontrol. Kadar antibodi serum darah mencit berkisar antara
13,43 – 57,75 SAU. Terjadi trend peningkatan kadar antibodi
43
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
serum darah mencit pada hari ke- 28 dengan pemberian
kefir, yaitu dari 20,33 sel/mm3 menjadi 22,49 sel/mm3 namun
tidak bermakna dibandingkan dengan kontrol.
Peningkatan kadar antibodi serum ini terjadi seiring
dengan meningkatnya jumlah leukosit dan diferensialnya,
terutama limfosit. Hasil ini sesuai dengan temuan Perdigon
et al., (1995) yang menyatakan bahwa peningkatan aktivitas
kekebalan humoral pada mukosa usus mencit yang diberi
yogurt. Bakteri asam laktat yang ada pada susu fermentasi
ini akan meningkatkan jumlah leukosit yang bermuara
pada meningkatnya kekebalan humoral (Herich dan
Levkut, 2002). Sel leukosit, makrofag akan melepaskan
interleukin dan interferon yang bereaksi dengan antigen dan
merangsang proses proliferasi sel – sel kekebalan tubuh dan
meningkatkan aktivits dan proliferasi sel limfosit B untuk
memproduksi antibodi (Gackowska et al., 2006), Haller
et al., (2000) menemukan interaksi antara BAL dan E. Coli
dengan leukosit secara in vitro meningkatkan proliferasi sel
leukosit.
monosit
Gb. 5
44
Pengambilan serum untuk
titer antibodi
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
BAB IX
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI
ASAM LAKTAT KEFIR DAN BIJI KEFIR
B
akteri asam laktat (BAL) merupakan bakteri yang
paling dominan ditemukan pada prosuk susu
asam kefir. Bakteri asam laktat dalam kefir ini berasal dari
biji kefir yang digunakan sebagai starter dalam pembuatan
kefir. Produk utama dari bakteri asam laktat adalah asam
laktat yang menyebabkan turunnya keasaman susu,
sehingga protein yang terdapat dalam susu bahan bakunya
tersebut menggumpal, yang menyebabkan produk susu
tersebut mengental. Hasil identifikasi BAL kefir dan biji
kefir dengan menggunakan media MRS dan M17 disajikan
pada Tabel 13.
Tabel 13 Karateristik Fisik dan Kimia Isolat BAL kefir dan Biji Kefir
No.
MRS
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Kode
Morfologi
Uji Ka
Reaksi
Morfologi
Gas dr
Pertumbuhan
isolat
koloni
talase
Gram
sel
Glukosa
pada
15oC
Kf1
Kf2
Kf4
Kf5
Kf6
Kf7
Kf8
Kf9
Kf10
Kf11
Kf12
Kf13
Kf14
Kf15
Kf16
Bulat, putih
--,,--,,--,,Bulat , kecil,krem
--,,--,,--,,--,,Bulat, putih
--,,--,,--,,--,,Bulat , kecil,krem
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Kokus,
Kokus
Kokus
Kokus
Kokus
Kokus
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokus
45
-*)
-
+**)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
37oC
+**)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
45oC
+**)
+
+
+
+
+
-
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
57
58
M17
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
k
lic
tr
Kf17
Kf18
Kf19
Kf20
Kf21
Kf22
Kf23
Kf24
Kf25
Kf26
Kf27
Kf28
Kf29
Kf30
Kf31
Kf32
Kf33
Kf34
Kf35
Kf36
Kf37
Kf38
Kf39
Kf40
Kf41
Kf42
Kf43
Kf44
Kf45
Kf46
Kf47
Kf48
Kf49
Kf50
Kf51
Kf52
Kf53
Kf54
Kf55
Kf56
Kf57
Kf58
--,,--,,--,,--,,Bulat, putih
--,,--,,--,,--,,Bulat , kecil,krem
--,,--,,--,,--,,Bulat, putih
--,,--,,--,,--,,Bulat , kecil,krem
--,,--,,-,,Bulat, putih
--,,--,,--,,--,,Bulat , kecil,krem
--,,--,,--,,-,,Bulat, putih
--,,--,,--,,--,,Bulat , kecil,krem
--,,--,,--,,-
Kf59
Kf60
Kf61
Kf62
Kf63
Kf64
Kf65
Kf66
Kf67
Kf68
Kf69
Kf70
Kf71
Kf72
Kf73
Bulat, flat
-,,-,,-,,-,,--,,--,,-,,-,,-,,--,,--,,-,,-,,-,,-
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Batang
Batang
Kokoid
Batang
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Batang
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokus
Kokus
Kokus
Kokus
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Kokoid
Batang
Batang
Batang
Batang
Batang
Batang
Batang
Kokus
Kokoid
Kokoid
Batang
Kokus
Kokus
Kokus
Kokus
Kokoid
Batang
Batang
Kokoid
Batang
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Kokoid
Kokoid
Batang
Batang
Batang
Kokus
Batang
Batang
Batang
Kokus
Kokus
Batang
Batang
Batang
Batang
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
Keterangan:
*) ; tanda ”- ” menandakan tidak terbentuk gas, Tanda ”+” menandakan terbentuk
gas
**): Tnada ”+” menandakan terjadi pertumbuhan, tanda ”-” menandakan tidak
terjadi pertumbuhan
46
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Analisis fisik dan kimia yang dilakukan terhadap 73
isolat BAL dalam kefir pada penelitian ini menunjukkan
adanya 10 jenis dengan karakteristik masing-masing : 10
isolat memiliki koloni berwarna putih , dengan bentuk sel
bulat tumbuh pada suhu 15oC, 45oC dan 37oC; 11 isolat
dari koloni berwarna putih dengan bentuk sel kokoid dan
tumbuh pada suhu 15OC, 37oC tetapi tidak pada suhu 45oC
; 5 isolat dari koloni berwarna putih, sel berbentuk batang,
tidak tumbuh pada suhu 45oC, 6 isolat dari koloni berwarna
krem, dengan bentuk sel bulat tumbuh pada suhu 15oC
dan 37oC; 13 isolat dari koloni berwarna krem dengan sel
berbentuk kokoid dan tidak tumbuh pada suhu 45oC, dan
10 isolat dengan sel berbentuk batang, tidak tumbuh pada
suhu 45oC, berasal dari koloni berwarna krem.
Hasil analisis kimia dan mikroskopis terhadap isolat
yang diperoleh pada penelitian ini diperoleh 6 strain
bakteri asam laktat yang dominan dalam kefir dan biji kefir,
dengan 3 macam bentuk sel yaitu berbentuk batang, bulat
dan kokoid. Hasil ini sesuai dengan Rarah (1999) yang
menemukan bahwa kefir dan mikroba kefir mengandung
35,4% laktobasili dan 58,3% streptokoki.
Dari total 20 strain bakteri yang diisolasi dari kefir susu
sapi Bali, dan semua strain tersebut terklasifikasi sebagai
bakteri asam laktat. Uji fisiologis dan reaksi biokimia
yang digunakan dalam klasifikasi bakteri ini ditampilkan
dalam Lampiran 2. Berdasarkan atas uji morfologi, hanya
2 tipe koloni yang diperoleh dari biakan agar MRS, yang
digunakan untuk mengisolasi bakteri asam laktat dari kefir
47
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
susu sapi Bali. Semua isolat tersebut teridentifikasi sebagai
Lactobacillus paracasei sbsp. paracasei dan Lactobacillus brevis.
Lactobacillus paracasei sbsp. paracsei merupakan bakteri
asam laktat dengan potensi probiotik sangat kuat, karena
memiliki beberapa karakteristik probiotik seperti: mampu
melekat dengan kuat pada lapisan epitel mukosa saluran
pencernaan, resisten terhadap lingkungan dengan pH
rendah dan garam empedu, menghasilkan bakteriosin. Hal
ini didukung oleh hasil penelitian Ljungh et al. (2002) yang
melaporkan bahwa Lactobacillus paracasei sbsp. paracasei,
secara in vitro mampu menghambat pertumbuhan bakteri
Helicobacter pylori dengan zona hambat > 4 mm, bertahan
hidup pada pH 2,5 dan 20% garam empedu selama 2 jam,
mampu melekat pada lapisan collagen dan fibrinogen yang
merupakan senyawa yang terdapat pada lapisan mukosa
saluran pencernaan.
Lactobacillus brevis, merupakan bakteri asam laktat
dengan potensi probiotik tinggi. Karna et al. (2007)
menemukan Lactobacillus brevis dan Lactobacillus bulgaricus
pada yogurt dengan konsentrasi 3,1 x 108cfu/gram. Lebih
jauh Jamaly et al. (2011) melaporkan bahwa, Lactobacillus
brevis yang ditemukan pada produk susu terfermentasi
memiliki potensi probiotik diantaranya: ketahanan terhadap
pH 2 dan 3, mampu melekat pada sel enterosit usus halus 15
sampai 20 bakteri/sel enterosit, serta mampu menghambat
pertumbuhan bakteri Escherichia coli ATCC25922, bertahan
hidup berturut-turut hingga 98%, 89%, 72% dan 65% pada
konsentrasi garam empedu 0,2%, 0,3%, 0,5% dan 1%.
48
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
BAB X
PENUTUP
10.1Simpulan
1.
2.
3.
4.
Kefir yang digunakan dalam penelitian ini merupakan
produk probiotik yang dapat digunakan sebagai
imunostimulan, karena ternyata dapat meningkatkan
jumlah sel darah putih (leukosit), limfosit, neutrofil,
indeks fagositik dan nilai titer antibodi.
Potensi imunostimulan dihasilkan oleh kefir dengan
konsentrasi 0,3%.
Identifikasi bakteri asam laktat dari kefir dan biji
kefir dalam penelitian ini menunjukkan terdapat dua
golongan besar BAL pada kefir dan biji kefir yaitu
Lactobacillus paracasei ssp. paracasei dan Lactobacillus
brevis dengan populasi masing-masing 8,74 x 109cfu/
ml dan 1,2 x 109cfu/ml.
Pemberian kefir terhadap aktivitas sistem kekebalan
tubuh terhadap jumlah leukosit mencit mengalami
penurunan sebesar 70,90 % - 373,58 % terhadap
neutrofil meningkat 54,76%-300,01%, terhadap jumlah
monosit kefir mengalami penurunan masing – masing
sebesar 40% dan 21,23%. yang diberi L.brevis yaitu
sebesar 71,73% sedangkan perlakuan L.paracasei
49
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
yang mengalami peningkatan yaitu sebesar 173,79%,
terhadap jumlah eusinofil mengalami penurunan
57,35 %-80,26% sedangkan perlakuan L.paracasei yang
mengalami peningkatan, yaitu sebesar 1,60%.
5.Indeks fagositik mencit kontrol meningkat sebesar
12,24 % lebih rendah dibanding dengan peningkatan
indeks fagositik mencit yang diberi perlakuan kefir,
L.paracasei, dan L. brevis yaitu masing – masing sebesar
52,08% , 51,75%, dan 25,96%.
6. Kadar antibodi serum darah mencit kontrol mengalami
peningkatan selama penelitian sebesar 2,84%. Serum
darah mencit yang diberi perlakuan kefir, L. paracasei,
dan L. brevis mengalami penurunan sampai dengan
akhir penelitian masing – masing sebesar 61,00%,
15,06%, dan 2,20%.
10.2 Saran
Potensi probiotik kefir sebagai imunostimulan perlu
dikaji lebih jauh untuk mengetahui komponen–komponen
yang manakah dari kefir tersebut yang meningkatkan
imunitas.
50
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
DAFTAR PUSTAKA
Adolfson, O., S.N. Meydani dan R.M. Russell. 2004. Yogurt
and gut function. Am. J. Clin. Nutr. 80: 245-256
Anonymous. 2009. Immune System. Wikipedia, free
encyclopedia. http://en.wikipedia.org/wiki/Immune_
system.
Anonymous. (2005). Laporan praktkum mahasiswa Pasca
Sarjana IPB, Bogor. Tidak dipublikasikan.
Arrington, L.R. 1972. Introduction Laboratory animal
science: The breeding, care and management of
experimental animal. Interstate printer and Pub. Inc.
Amerika Serikat.
Axelsson, L.T. 1993. Lactic Acid Bacteria : Classification and
Physiology. Dalam : Lactic Acid Bacteria. Salminen,S.
dan A.Wright (Eds). Marcel Dekker, Inc. New York,
Basel, Hong Kong.
Brooks, G.F., j.s.Butel dan S.A. Morse. Mikrobiologi
Kedokteran. Eds. Bagian mikrobiologi kedokteran
Erlangga. Penerbit Salemba Jakarta.
Collins C.H. dan P.M. Lyne.1984. Microbiological methods.
Butterwoods London, Boston, Durban, Singapore,
Sysney, Toronto, Wellington.
Erickson, K.L. dan N.E. Hubbard. 2000. Probiotic
51
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
immunomodulation in human health and disease. J.
Nutrition. 130: 403S-409S.
Farnworth, E.R. dan Mainville, I. 2003. Kefir : A Fermented
Milk Product. Dalam: Handbook of Fermented
Functional Foods. Farnworth, E.R. (Ed). CRC.Press.
Boca Raton, London, New York,Washington.
Fuller, R. 1992. Probiotics, the Scientific basis. Chapman &
Hall. London
Gackowska, L., J. Michalkiewicz, M. Krotkiewski, A. HelminBassa, I. Kubiszewska dan D. Dzirzanowska. 2006.
Combining effect of different lactic acid bacteria strains
on the mode of cytokines pattern expression in human
peripheral blood mononuclear.cells. Http://www.jpp.
krakow.pl/journal/archieve/1106_s9_articles/02_articl.
Galdeano, C.M., A.M. Leblanc dan G. Vinderola. 2007).
Proposed model: mechanism of immunomodulation
induce by probiotic bacteria. Clinical and Vaccine
Immunology. 14 (5): 485-492.
Herich, R dan M. Levkut. 2002. Lactic acid bacteria,
probiotics and immune system. Vet. Med – Czech. 47
(6): 169-180.
Kanbe, M. 1992.b Traditional Fermented Milks of the World.
dalam : Functions of Fermented Milk. Nakazawa,Y
dan Hosono, A. (Eds). Elsevier Appl. Sci. London,
New York.
Kanbe, M. 1992.a Cancer control and fermented milk. dalam
: Functions of Fermented Milk. Nakazawa,Y dan
Hosono, A. (Eds). Elsevier Appl. Sci. London, New
York.
52
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Link-Amster, H., F. Rochat, K.Y. Saudan, O. Mignot dan
J.M. Aeschlimann. Modulation of a specific humoral
immune response and changes in intestinal flora
mediated through fermented milk intake. FEMS
Immunol. Med. Microbiol. 10: 55-63.
Malole, M.B.M. dan C.S.U. Pramono. 1989. Penggunaan
hewan-hewan
percobaan
di
laboratorium.
Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Direktorat
Jendral Pendidikan Tinggi, Pusat Antar Universitas
Bioteknologi, IPB, Bogor.
Marteau P., J.P. Vaerman, J.P. Dehenin, S.Bord, D.
Brassart,dan P. Pochart. Effects of intrajejunal
perfusion and chronic ingestion of Lb.johnsonii strain
La1 on serum concentration and jejunal secretion
of immunoglobulinsand serumprotein in healthy
humans. Gastroenterol. Clin.Biol. 21:293-298
Perdigon, G., M. Locascio, M. Medici, A.P. de Ruiz Holgado
dan G. Oliver. 2003. Interaction of bifidobacteria with
the gut and their influence in the immune function.
Biocell 27(1) : 1-9
Perdigon, G., R. Fuller dan R. Raya. 2001. Lactic acid bacteria
and their effect on the immune system. Curr. Issues
Intest Microbiol. 2(1) : 27-42
Perdigon, G., E. Vintini, S. Alvarez, M.Medina dan M.Medici.
1999. Study of the possible mechanisms involved in
the mucosal immune system activation by lactic acid
bacteria. J. Dairy Sci. 82: 1108-1114
53
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
Rahman, A., S. Fardiaz, W.P. Rahayu , Suliantari dan
C.C.Nurwitri. 1992. Teknologi Fermentasi Susu.
DEPDIKBUD DITJENDIKTI PAU Pangan dan Gizi
IPB Bogor.
Rarah, R.A.M. 1999. Isolasi , identifikasi dan karakterisasi
mikroflora ‘biji’ kefir serta substrat antimikroba yang
dihasilkan. Laporan hasil Penelitian Dosen Muda.
Perpustakaan Pusat IPB. Bogor.
Schiffrin, E.J., F. Rochat, H. Link-Amster, J.M. Aeschlimann
dan A. Donnet-Hughes. 1995. Immunomodulation
of human blood cells following the ingestion of lactic
acid bacteria. J. Dairy Sci. 78: 491-497.
Smith, J.B. 1988. Pemeliharaan, pembiakan dan penggunaan
hewanpercobaan di daerah tropis. Terjemahan S.
Mangkoewidjojo.Universitas Indonesia Press. Jakarta.
Sneath, P.H.A., M.E. Sharpe dan J.G.Holt. 1986. Bergeys
Manual of Systematic Bacteriology. Vol.2. William &
Wilkins. Baltimore, London, Los Angeles, Sydney.
Suriasih, K. 2005. Karakterisasi dan Potensi Probiotik
Mikroflora Biji Kefir sebagai Penghambat Bakteri
Patogen Salmonella Typhii, Escherichia Coli dan
Staphylococcus aureus. Laporan Kegiatan Magang.
Fk8pt
Surono, I.S. (2003). In Vitro Probiotic Properties of Indigenous
Dadih Lactic Acid Bacteria. Asian-Aust. J. Anim. Sci.
2003. Vol. 16, No. 5 : 726 - 731.
54
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Takeda, K. dan K. Okumura. 2007. Effects of a fermented
milk drink containing Lactobacillus casei strain Shirota
on the human NK-cell activity. J. of Nutrition 137:
791S-793S.
Tizard I 1988. An Introduction to Veterinary Immunology.
Second Ed. WB Saunders Company Philadelphia. 363
ps
Wold, A.E. Immune effects of probiotics. J. of Nutrition 45:
76-85.
55
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
TENTANG PENULIS
Dr. Ir. Ketut Suriasih, M.App.Sc
dilahirkan di Tabanan. Menyelesaikan
Sarjana strata satu di Fakultas Peternakan
Universitas Udayana tahun 1979, sarjana
strata dua pada bidang Mikrobiologi
Pangan di University of New South
Wales, Sydney, Australia tahun 1995
dan sarjana strata tiga atau Doktor Ilmu Pertanian dengan
konsentrasi Sumber Daya Hayati Pertanian, Pasca Sarjana
Universitas Udayana tahun 2013. Dari pernikahan dengan
rekan seprofesi Prof. Dr. Ir I Nyoman Sucipta, MP, dikarunia
tiga orang putra putri, yaitu dr. Wayan Citra Wulan Sucipta
Putri, S. Ked (menikah dengan dr. Putu Setiawan, S.Ked),
Made Dwi Indira Asih Sucipta Putri, ST, M.Si (menikah
dengan Made Adi Darmadi, ST) dan dr. I Nyoman Esha
Pradnyana Sucipta Putra, S.Ked (menikah dengan dr. Made
Putri Hendaria, S.Ked), serta dua orang cucu Putu Kevin
Prapdita Setiawan dan Putu Abirama.
Semenjak menjadi dosen mata kuliah yang diampu:
Ilmu Produksi Ternak Perah, Manajemen Ternak Perah,
Dasar Ternak Perah, Manajemen dan Kesehatan Susu,
Mikrobiologi dan Mikrobiologi Hasil Ternak.
56
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
Aktif sebagai peneliti terkait dengan ternak perah dan
mikrobiologi terutama susu dari ternak besar dan ternak
kecil. Pernah menjabat sebagai sekretaris Laboratorium
Ternak Perah Fakultas Peternakan Universitas Udayana,
Sekretaris Dharma Wanita Persatuan Universitas Udayana
dan Ketua Dharma Wanita Persatuan Kopertis Wilayah VIII
Bali Nusra.
Berbicara tentang pentingnya nilai gizi pangan dan
kualitas hidup memberi dampak yang besar terhadap
permintaan produk pangan masyarakat salah satunya
adalah susu termasuk susu sapi Bali potensial sebagai
produk probiotik seperti kefir. Mengingat kemampuan
pasok susu peternak lokal saat ini baru mencapai 25-30%
saja. Prospek pasar akan kebutuhan susu berpeluang besar
pada usaha peternakan sapi Bali untuk ke depannya.
Sebelum menulis buku ini telah menulis diktat Kuliah
Ilmu Produksi Ternak Perah, diktat Praktikum Pemeriksaan
Air Susu, diktat Pemeriksaan Terhadap Pemalsuan Air
Susu , diktat Praktikum Mikrobiologi, diktat Praktikum
Mikrobiologi Hasil Ternak dan diktat Kuliah Mikrobiologi.
57
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
k
lic
tr
TENTANG PENULIS
Prof. Dr. Ir. I Nyoman Sucipta MP, guru
besar pada Fakultas Teknologi Pertanian
Universitas Udayana, lahir pada tanggal
6 Mei 1955. Putra dari pasangan I Made
Suka almarhum (ayah) dan Ni Ketut Narwi
almarhum (ibu), sosok pejuang kemerdekaan.
Dalam kehidupan belajar masa kecil mulai
duduk dibangku pendidikan pada SD Negeri No, 10 Denpasar.
Setelah lulus SD, masuk di SMP Negeri 1 Denpasar. Setelah Lulus
dari SMP, melanjutkan pendidikan di SMA Negeri 1 Denpasar.
Pada masa kuliah, melanjutkan pendidikannya di Fakultas
Pertanian Universitas Udayana. .Program S2 di Universitas Gajah
Mada Yogyakarta dibidang Ilmu-Ilmu Pertanian dan S3 Prodi
Kedokteran Universitas Udayana dengan konsentrasi Ergonomi
Fisiologi Kerja. Penghargaan yang pernah diraih adalah tanda
Kehormatan Satya Lencana Karya Satya 20 dan 30 tahun.
Pengalaman menulis buku memperoleh hak cipta adalah Agro
Ergonomi Dasar-dasar Ergonomi di Bidang Pertanian dengan
nomor P/ID 064031/C00201203545 tanggal 23 Juli 2012, buku
lainnya adalah Pengemasan bahan makanan. Holistik Soft Skills
dan Pola Pengembangan Kemahasiswaan Universitas Udayana.
58
ac
.c
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
om
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re
F -X C h a n ge
F -X C h a n ge
W
N
O
y
bu
ac
TENTANG PENULIS
2.
3.
4.
5.
Ir. Martini Hartawan, Msi. Lahir Singaradja,
10 Januari 1953: Dosen tetap Fapet-Unud
Universitas Udayana.
Pengalaman Penelitian / Karya Ilmiah
1. Pengaruh
pembatasan
pemberian
jumlah makanan terhadap kualitas telur
ayam kampong pada fase peneluran I.
Pengaruh penambahan natrium nitrit dan lama simpan
terhadap mutu sosis asap.
Perubahan kimia dam mikrobiologi pada plain yoghurt
selama penyimpanan.
Sifat-sifat bakteriostatik serbuk gergaji kayu keras, sabut
kelapa dan sekam padi sebagai bahan pengasap pada daging
sapi asap.
Salmonella pada limbah cair rumah potong ayam
sebagai sumber ancaman kesehatan masyarakat dan cara
penangannya.
59
.c
tr
om
k
lic
C
om
k
lic
C
.c
re
.
.
k e r- s o ft w a
w
w
ac
ww
ww
tr
to
to
bu
y
N
O
W
!
PD
!
PD
k e r- s o ft w a
re