isolasi protoplas.ppt

Salah
satu cara untuk mengembangkan tanaman
unggul adalah dengan merakit varietas baru yg
berproduksi tinggi dan tahan terhadap hama penyakit
adl dengan isolasi protoplas
Protoplas
 sel tumb yg telah dihilangkan dinding
selnya atau “sel telanjang”
 Jaringan
organ yg digunakan utk isolasi protoplas
misalnya tunas batang, buah, akar, bintil akar
legum, atau dari kultur suspensi sel, daun muda
atau kalus maupun biji

Isolasi protoplas dapat dilakukan dengan melalui:
1. perkecambahan in vitro kemudian di kalus kan
dan diambil protoplas nya
2. kultur kalus embrionik
3. produksi tunas in vitro
4. protoplas mesofil daun dan kalus
1.


2.

Persiapan eksplan
Eksplan yang digunakan umumnya berasal dari jaringan
yang lebih muda
misal daun (struktur dinding selnya masih sederhana)
Sterilisasi eksplan
Bagian yang ingin dijadikan eksplan dicuci kemudian
disterilkan dgn Sodium hypoklorit 1-2 % slama 10-30menit
kemudian dicuci kembali dengan aquades 3- 4kali
tergantung eksplan yg digunakan
3. Isolasi protoplasma
 Mekanik
 Enzimatik
kemudian di sentrifungi atau dapat pula disaring
 Mengupas
dinding sel menggunakan alat bedah
mikro dengan memotong sel satu persatu
 Sel diletakkan pada media dengan konsentrasi yg
lebih tinggi (hipertonis) dari dalam sel 
plasmolisis
 Setelah berkerut (jangan terlalu lama) kemudian
dipotong dinding sel nya dan diletakkan dilarutan
hipotonis  deplasmolisis  dihasilkan protoplas
 Kelemahannya:
a.
b.
Keberhasilan rendah
Sering terjadi kerusakan protoplas pd saat
pengupasan dinding sel
 Menggunakan
enzim yg dapat mengancurkan
/ meluruhkan komponen dinding sel seperti:
cellulase, Hemicellulase, dan pectinase
 Selama
12-18 jam sel-sel akan keluar dan
dinding sel akan lisis sehingga didapatkan
protoplas.
 Protoplasma
yang telah dimurnikan biasanya
dikulturkan dalam medium Agar semisolid
dan Liquid.
 Umumnya menggunakan media MS atau B5
 Diberi larutan osmotikum (untuk mengurangi
daya tarik menari / adhesi antara sitoplasma
& dinding sel) seperti: manitol 13% atau
sorbitol 500-600mM/L
 Penambahan 1 mM/L CaCl2 untuk
meningkatkan pembelahan sel
 ZPT : auksin & sitokinin
1.
2.
3.
Jeruk siam simadu dan jeruk mandarin
satsuma dari mesofil daun dengan
pemurnian larutan sukrosa 25% + manitol
13%
Isolasi protoplas mesofil daun mandarin
satsuma dan kalus jeruk siam simadu
Tanaman Kacang Panjang secara Enzimatis
dari mesofil daun dengan perkecambahan
in vitro terlebih dahulu kemudian diambil
daun muda nya dan di isolasi protoplas
protoplas mesofil daun mandarin
satsuma
Protoplas kalus embriogenik jeruk
siam simadu