TRIPLOIDISASI IKAN KOI Disusun Sebagai Tugas Akhir Mata Kuliah Praktikum Genetika Ikan Tahun akademik 2018/2019 Disusun oleh: Rima Nabilah Haifa 230110160150 Rahmad Afdillah 230110160154 Eflysa Aprilia 230110160160 Ayu Octrina 230110160182 Andre Chandika Farhan 230110160200 Naomi Masnida Yunisia Siregar 230110160217 Kelas : Perikanan B/Kelompok 1 UNIVERSITAS PADJADJARAN FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN PROGRAM STUDI PERIKANAN JATINANGOR 2019 KATA PENGANTAR Puji dan syukur kehadirat Allah SWT karena atas berkat dan rahmat-Nya kami dapat menyelesaikan laporan praktikum mengenai “TRIPLOIDISASI IKAN KOI”. Laporan praktikum ini merupakan sebuah hasil dari dari pembahasan melalui diskusi kelompok kami terhadap praktikum mata kuliah genetika ikan. Tujuan ditulisnya laporan praktikum ini merupakan salah satu tugas untuk memenuhi mata kuliah genetika ikan. Dalam kesempatan kali ini kami mengucapkan Terimakasih kepada Dosen Mata Kuliah Genetika Ikan dan Asisten Laboratorium yang telah memberikan pengarahan serta bimbingan selama praktikum Genetika Ikan sehingga menyelesaikan penulisan laporan ini. Kemudian tak lupa juga kami ucapkan terimakasih kepada teman-teman yang telah berpartisipasi terhadap penulisan laporan ini serta pihak lain yang ikut membantu dalam menyelesaikan laporan ini. Semoga laporan praktikum genetika ini dapat memberikan banyak manfaat bagi pembaca dan dengan dibuatnya makalah laporan praktikum ini kita dapat menambah lebih banyak pengetahuan dan wawasan pembaca. Dalam pembuatan makalah ini mungkin terjadi kesalahan atau kekeliruan dari kami. Dengan demikian, saran dan pendapat yang dapat membangun dapat disampaikan untuk memperbaiki kesalahan dan kekurangan. Terima Kasih. Jatinangor, Mei 2019 Tim Penyusun i DAFTAR ISI KATA PENGANTAR ............................................................................................... i DAFTAR ISI.............................................................................................................. ii DAFTAR TABEL ..................................................................................................... iii DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ iv DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. v BAB I PENDAHULUAN 1.1 1.2 1.3 1.4 Latar Belakang ...................................................................................... 1 Identifikasi Masalah .............................................................................. 2 Tujuan .................................................................................................... 2 Kegunaan ............................................................................................... 2 BAB II KAJIAN PUSTAKA 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 Ikan Koi ................................................................................................. 3 Ikan Komet ............................................................................................ 4 Pemijahan Buatan .................................................................................. 6 Metode Triploidisasi .............................................................................. 7 Tujuan Triploidisasi .............................................................................. 11 BAB III BAHAN DAN METODE 3.1 3.2 3.2.1 3.2.2 3.3 3.3.1 3.3.2 3.4 3.5 3.5.1 3.5.2 3.5.3 3.6 Tempat dan Waktu ................................................................................ 12 Alat dan Bahan ..................................................................................... 12 Alat Praktikum ...................................................................................... 12 Bahan Praktikum .................................................................................... 12 Tahapan Praktikum ................................................................................ 13 Persiapan Praktikum .............................................................................. 13 Pelaksanaan Praktikum .......................................................................... 13 Metode ................................................................................................... 14 Parameter yang Diamati ......................................................................... 14 FR .......................................................................................................... 14 HR .......................................................................................................... 14 SR .......................................................................................................... 15 Analisis Data ......................................................................................... 15 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.3 4.3.1 4.3.3 4.3.4 Hasil Pengamatan Kelas ........................................................................ 15 FR ........................................................................................................... 15 HR ......................................................................................................... 16 SR .......................................................................................................... 16 Hasil Pengamatan Kelompok ................................................................. 16 FR .......................................................................................................... 16 HR .......................................................................................................... 16 SR .......................................................................................................... 17 Pembahasan Kelompok ......................................................................... 17 FR ........................................................................................................... 17 HR ........................................................................................................... 18 SR ........................................................................................................... 19 ii BAB V PENUTUP 5.1 Kesimpulan .............................................................................................. 19 5.2 Saran ........................................................................................................ 20 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 21 LAMPIRAN .............................................................................................................. 22 iii DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Ikan Koi ........................................................................................ 3 Gambar 2. Carrasius auratus (Ikan Komet) .................................................... 5 Gambar 3. Prinsip Triploidisasi ...................................................................... 8 iv DAFTAR TABEL Tabel 1. Data FR Kelompok............................................................................ 15 Tabel 2. Data HR Kelompok ........................................................................... 16 Tabel 3. Data SR Kelompok............................................................................ 16 v DAFTAR LAMPIRAN LAMPIRAN TABEL ..................................................................................... 23 Lampiran 1. Tabel Data FR Kelas .................................................................. 23 Lampiran 2. Tabel Data HR Kelas ................................................................. 23 Lampiran 3. Tabel SR Kelas .......................................................................... 23 LAMPIRAN BAGAN ALIR ......................................................................... 24 Lampiran Bagan Alir Persiapan Praktikum ............................................... 24 Lampiran 1. Bagan Alir Persiapan Wadah .............................................................. 24 Lampiran 2. Bagan Alir Pemijahan Buatan.................................................... 24 Lampiran Bagan Alir Pelaksanaan Praktikum .......................................... 25 Lampiran 3. Bagan Alir Pelaksanaan Triploidisasi ........................................ 25 Lampiran Gambar Dokumentasi Pribadi ................................................... 26 vi BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Naiknya permintaan terhadap benih ikan yang bermutu baik kuantitas maupun kualitas dan harus tersedia setiap saat mengakibatkan meningkatnya kegiatan usaha pembudidayaan ikan hias termasuk ikan koi. Salah satu kegiatan usaha pembudidayaan untuk memenuhi permintaan tersebut adalah dengan cara penerapan teknologi pemijahan buatan yang memanfaatkan prinsip-prinsip bioteknologi. Salah satu prinsip bioteknologi untuk meningkatkan produksi benih baik kualitas maupun kuantitasnya adalah rekayasa genetik. Dalam perkembangannya rekaya genetik dapat dilakukan dengan poliploidisasi. Poliploidisasi merupakan salah satu metode manipulasi kromosom yang bertujuan untuk meningkatkan dan memperbaiki kualitas ikan agar menghasilkan benih- benih ikan yang mempunyai keunggulan, antara lain : pertumbuhan cepat, toleransi terhadap lingkungan dan mencegah resisten terhadap penyakit. Salah satu proses poliploidisasi adalah triploidisasi dengan terbentuknya individu yang memiliki meningkatnya kromosom tiga set yang steril. Triploidisasi telah dilakukan dan digunakan untuk meningkatkan pertumbuhan ikan. Pembentukan ikan triploid dilakukan dengan memberi kejutan panas pada telur yang dibuahi secara normal pada saat tingkat meiosis II. Pemberian kejutan tersebut diharapkan dapat mencegah terlepasnya polar-body II sehinggga terbentuk keadaan triploid (Hariani, 2008). Kromoson 3N yang dimiliki ikan nantinya akan berasal dari gamet jantan + gamet betina + polar bodi kedua yang tidak jadi keluar (1N+1N+1N). Salah satu yang penting dari jenis ikan triploid adalah termasuk ikan yang “steril” karena memiliki sejumlah perangkat kromosom yang berbeda. Hal ini dimanfaatkan untuk meningkatkan produksi karena memperbaiki kualitas ikan agar menghasilkan benih-benih ikan yang mempunyai keunggulan, antara lain: perkembangan gonad dimanfaatkan untuk pertumbuhan (Beaumont, 1994). Triploidisasi merupakan salah satu bagian dari ploidisasi yaitu salah satu teknik untuk menghambat berkembangnya organ reproduksi, sehingga pertumbuhan ikan tidak terhambat karena energi metabolisme yang digunakan 1 untuk perkembangan gonad dapat dimanfaatkan untuk meningkatkan pertumbuhan sel-sel somatik. Thorgaard (1983) menyatakan bahwa waktu awal kejutan, lama waktu kejutan dan suhu yang digunakan untuk setiap spesies ikan berbeda. Ketiga faktor tersebut sangat mempengaruhi keberhasilan pembentukan triploid. 1.2 Identifikasi Masalah 1. Bagaimana teknik triploidisasi pada ikan komet? 2. Bagaimana teknik kejutan panas pada proses triploidisasi? 3. Bagaimana pengaruh kejutan panas terhadap proses triploidisasi? 1.2 Tujuan Tujuan dari praktikum ini yaitu mahasiswa diharapkan padat menerapkan teknik manipulasi kromosom kelamin ikan dari status diploid (2N) menjadi status triploid (3N) yang memiliki keunggulan pertumbuhan yaitu pertumbuhan yang lebih cepat sehingga dalam bidang budidaya ini sangat menguntungkan. 1.4 Kegunaan 1. Praktikan diharapkan mendapatkan informasi mengenai cara melakukan triploidisasi. 2. Praktikan mampu mengaplikasikan teknik triploidisasi. 2 BAB II KAJIAN PUSTAKA 2.1 Ikan Koi Koi merupakan ikan yang berasal dari bahasa Jepang yang berarti ikan karper. Lebih spesifik lagi merujuk pada nishikigoi, yang kurang lebih bermakna ikan karper yang bersulam emas atau perak. Di Jepang, koi menjadi semacam simbol cinta dan persahabatan. Ini karena koi merupakan homofon untuk kata lain yang juga bermakna kasih sayang atau cinta. Ikan Koi adalah sejenis ikan yang termasuk ikan mas (Cyprinus carpio) yang mempunyai ornamen yang sangat indah dan jinak. Koi biasanya dipelihara sebagai hiasan dengan tujuan keindahkan dan keberuntungan di dalam rumah dan luar rumah (kolam koi atau taman air, karena ikan koi dipercaya membawa keberuntungan. Karena ikan koi sangat dekat berkerabat dengan ikan mas, dan oleh karena itu di Indonesia banyak orang menyebutnya ikan mas koi. Menurut Efendi (1993) koi mempunyai nenek moyang berupa ikan karper hitam yang secara sistematik atau taksonomi ikan koi dapat diurutkan sebagai berikut: Kingdom Gambar 1. Ikan Koi Sumber : http://cara.pro/jenis-ikan-koi/ : Animalia Filum : Chordata Kelas : Actinopterygii Ordo : Cypriniformes Famili : Cyprinidae Genus : Cyprinus 3 Spesies : Cyprinus carpio Melalui proses mutasi atau perkawinan silang yang di lakukan secara selektif ikan karper ialah berubah warna sehingga menghasilkan jenis ikan koi yang berwarna-warni. Ikan koi termasuk ke dalam golongan ikan carp (karper). Harga koi sangat ditentukan berdasarkan bentuk badan dan kualitas tampilan warna serta corak. Ikan koi pertama kali dikenal pada dinasti Chin tahun 265 dan 361 Masehi. Koi dengan keindahan warna dan tingkah laku seperti yang kita ketahui saat ini, mulai dikembangkan di Jepang 200 tahun yang lalu di pegunungan Niigata oleh petani Yamakoshi. Tubuh ikan koi berbentuk seperti torpedo dengan alat gerak berupa sirip yang terletak di bagian tubuhnya. Sirip-sirip yang melengkapi bentuk morfologi ikan koi adalah sirip punggung, sepasang sirip dada, sepasang sirip perut, sirip anus, dan sirip ekor. Ikan koi atau biasa di sebut sebagai ikan mas koi memiliki nama ilmiahnya (Cyprinus Carpio). Ikan ini banyak digemari oleh orang di manca Negara. Mengapa demikian, karena memelihara ikan koi sangat menyenangkan dan menguntungkan. Banyak hobi memilih ikan koi ini sebagai hiasan akuarium, hiasan kolam dan sebagai ladang untuk meraup keuntungan. Ikan koi ini berasal dari Negara jepang, pertama kali popular di Indonesia yaitu pada tahun 1960-an di budidayakan di daerah Blitar Jawa Timur. Budidaya ikan koi sangatlah mudah sama halnya seperti budidaya ikan mas biasa. Namun budidaya ikan koi ini harus lebih di perhatikan kualitas induknya hingga nanti akan menghasilkan keturunan yang berkualitas pula. 2.2 Ikan Komet Ikan komet merupakan spesies dari famili cyprinidae yang sama dengan ikan mas (Cyprinus caarpio) hanya saja berbeda genusnya. Berikut taksonomi dari ikan komet : Kingdom : Animalia Phyllum : Chordata Class : Actinopterygii Ordo : Cypriniformes Family : Cyprinidae Genus : Carassius 4 Species : Carassius auratus Dibawah ini merupakan gambar dari ikan komet. Gambar 2. Carassius auratus Sumber : Alamikan.com Dalam alam liar ikan komet dapat ditemukan di air tawar yang beraliran tenang. Ikan komet senang memakan tanaman hidup. Ikan komet dapat hidup pada suhu rendah hingga 30°C. Optimumnya ikan komet hidup pada lingkungan dengan temperatur yang tidak lebih rendah dari temperatur ruangan. Ikan komet mampu hidip baik pada rentang pH 6,5-8,5. Ikan komet biasa ditemukan di kolam, danau, dan sungai dengan aliran tenang. Di alam liar biasanya ikan komet adalah omnivora, ia memakan tanaman hidup dan juga larva serangga dan plankton. Dalam pemeliharaan biasanya ikan komet diberi pakan pellet dan cacing tubifex beku yang dikeringkan. Secara alami, pemijahan terjadi pada tengah malam sampai akhir fajar. Menjelang memijah, induk-induk ikan mas aktif mencari tempat yang rimbun, seperti tanaman air atau rerumputan yang menutupi permukaan air. Substrat inilah yang nantinya akan digunakan sebagai tempat menempel telur sekaligus membantu perangsangan ketika terjadi pemijahan. (Gursina, 2008). Sifat telur ikan Komet adalah menempel pada substrat. Telur ikan Komet berbentuk bulat, berwarna bening, berdiameter 1,5-1,8 mm, dan berbobot 0,17-0,20 mg. Ukuran telur bervariasi, tergantung dari umur dan ukuran atau bobot induk. Embrio akan tumbuh di dalam telur yang telah dibuahi oleh spermatozoa. Antara 2-3 hari kemudian, telur-telur akan menetas dan tumbuh menjadi larva. Larva ikan Komet mempunyai 5 kantong kuning telur yang berukuran relatif besar sebagai cadangan makanan bagi larva. Kantong kuning telur tersebut akan habis dalam waktu 2-4 hari. Larva ikan Komet bersifat menempel dan bergerak vertikal. Ukuran larva antara 0,50,6 mm dan bobotnya antara 18-20 mg. Larva berubah menjadi kebul (larva stadia akhir) dalam waktu 4-5 hari. Pada stadia kebul ini, ikan Komet memerlukan pasokan makanan dari luar untuk menunjang kehidupannya. Pakan alami kebul terutama berasal dari zooplankton, seperti rotifera, moina, dan daphnia. Kebutuhan pakan alami untuk kebul dalam satu hari sekitar 60-70% dari bobotnya. Setelah 2-3 minggu, kebul tumbuh menjadi burayak yang berukuran 1-3 cm dan bobotnya 0,1-0,5 gram. Antara 2-3 minggu kemudian burayak tumbuh menjadi putihan (benih yang siap untuk didederkan) yang berukuran 3-5 cm dan bobotnya 0,5-2,5 gram. Putihan tersebut akan tumbuh terus. Setelah tiga bulan berubah menjadi gelondongan yang bobot per ekornya sekitar 100 gram. 2.3 Pemijahan Buatan Pemijahan buatan adalah jenis pemijahan ikan dengan disengaja. pemijahan ikan yang terjadi dengan memberikan rangsangan hormon untuk mempercepat kematangan gonad serta proses ovulasinya dilakukan secara buatan dengan teknik stripping/ pengurutan. Pemijahan secara buatan adalah pemijahan yang dilakukan dengan bantuan atau penanganan manusia melalui pemberian kelenjar hormon hypophisa pada resivien (penerima) yang berguna untuk melancarkan proses kematangan gonad, sehingga mempercepat jalannya proses pemijahan lele tersebut. (STP, 2014). Pemijahan secara buatan biasanya dilakukan untuk merangsang ikan yang sulit memijah atau tidak bisa memijah bila berada dalam lingkungan budidaya. Namun selain itu, induce breeding juga bisa digunakan untuk mengoptimalkan jumlah telur ikan yang berada dikantong telur dengan cara mempercepat kematangan telur yang hampir matang di ovarium menjadi matang dan terjadi ovulasi. Dalam pemijahan buatan, ikan komet betina yang sudah matang gonad distimulsi dengan ekstrak kelenjar hipofisa agar proses ovulasi atau pelepasan telur dari ovarium menjadi lebih cepat, sehingga telur yang terdapat di kantung telur menjadi bertambah. 6 2.4 Metode Triploidisasi Poliploidisasp merupakan istilah bagi spesies hewan yang mempunyai kromosom tiga set atau lebih. Salah atu bentuk poliploid adalah triploid yang memiliki kromosom tiga set. Ikan triploid bersifat steril, memiliki pertumbuhan yang pesat dan konversi penggunaan pakan yang baik karena sebagian besar energi yang diperoleh dari makanan dipergunakan untuk pertumbuhan sel somatik. Triploidisasi merupakan kromosom kelamin pada ikan yang memiliki keuntungan ditinjau dari segi produksi budidaya (pertumbuhan relatif tinggi), mengurangi interaksi genetik dengan ikan asli di suatu perairan (perlindungan biodiversitas ikan asli) dan mengendalikan reproduksi tidak terkontrol pada budidaya ikan nila (Bramick dkk. 1995). Produksi ikan triploid (memiliki 3N kromosom kelamin) dapat dilakukan dua metoda yaitu (1) metode interploid yaitu ikan tetraploid (4N) disilangkan dengan diploid normal (2N) dan (2) pemberian kejutan suhu (panas atau dingin). Kejutan suhu dilakukan dengan cara mengubah suhu medium penetasan menjadi sublethal yang peka.kejutan panas lebih mudah diterapkan dan memberikan hasil yang lebih baik. Faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan triploidisasi dengan kejutan panas adalah waktu awal kejutan, suhu dan lama kejutan panas (Reddy, dkk 1990 dalam Dunham 2011). Pada sebagian besar spesies ikan, proses pembuahannya terjadi secara eksternal sehingga memungkinkan manipulasi kromosom kelamin khususnya fase meiosis II (triploidisasi) dan mitosis I (tetraploidisasi). Prinsip pemberian kejutan suhu panas dalam triploidisasi bertujuan untuk mencegah berkurangnya jumlah kromosom telur dengan cara menahan keluarnya polar bodi kedua pada fase meiosis II. Periode meiosis II pada perkembangan embrio ikan mas (telur yang sudah dibuahi) adalah 3 – 5 menit setelah pembuahan pada suhu kejutan 38 – 40 0C dengan lama kejutan berkisar 2 – 2,5 menit. Ketika terjadi penetrasi sperma pada telur yang sudah dibuahi, pada inti sel telur akan diperoleh dua pasang kromosom (1N dari telur dan 1N dari sperma) yang menjadikan telur dalam status diploid (2N). Sebelum berakhirnya meiosis II tersebut, polar bodi kedua (1N) akan keluar dari inti sel telur. Oleh karena adanya perlakuan kejutan suhu pada periode ini, maka 7 polar bodi kedua ini ditahan agar tidak keluar sehingga status kromosom telur menjadi 3N (triploid), dimana 1N berasal dari telur, 1N berasal dari sperma dan 1N berasal dari polar bodi kedua (Bromage 1995). Pada Gambar 1 disajikan prinsip dasar teknik triploidisasi. Gambar 3. Prinsip Triploidisasi Metode yang dilakukan yaitu dengan Kejutan suhu dilakukan 2 menit setelah pembuahan telur. Hal ini dilakukan dengan cara memindahkan telur dari akuarium penetasan (suhu air 25 0C) ke dalam kotak styrofoam berisi air panas yang bersuhu 40 0C. Lama kejutan suhu panas ini adalah 2 menit dan kemudian dipindahkan ke dalam akuarium penetasan (suhu air 25 0C) sampai terlihat adanya telur-telur yang menetas. Adapun hal yang diamati yaitu presentase triploidisasi dan parameter yang diamati meliputi HR (Haching Rate), FR (Fertilization Rate) dan SR (Survival Rate). Untuk membedakan genotip ikan diploid (2N) dan triploid (3N), maka dilakukan pengujian ukuran sel darah merah. Perbandingan ukuran sel darah merah (panjang, lebar, dan volume sel) dapat memperlihatkan rasio 3N : 2N, dimana ikan triploid, rata-rata volume sel darah merahnya dapat mencapai 1,5 kali dari ikan diploid (Sugama 1990). Jumlah benih triploid ditentukan berdasarkan volume sel darah merah. Menurut Carman (1990), perhitungan volume sel darah merah dilakukan dengan 8 rumus 4/3 ab2, dimana a adalah panjang sel darah merah dan b adalah lebar sel darah merah. Jumlah benih triploid ditentukan berdasarkan volume sel darah merah. Menurut Carman (1990), perhitungan volume sel darah merah dilakukan dengan rumus 4/3 ab2, dimana a adalah panjang sel darah merah dan b adalah lebar sel darah merah. Jumlah benih triploid : Presentase triploid = x 100 % Jumlah benih contoh Cara Mengamati FR : FR atau fertilization rate adalah derajat pembuahan telur. Pengamatan derajat pembuahan telur (FR) yang dilakukan setelah pembuahan telur pada proses hibridisasi, selesai dilakukan. Telur yang terbuahi adalah telur yang berwarna cerah, sedangkan telur yang mati adalah telur yang berwarna kusam. FR yang dihitung adalah telur yang terdapat dalam akuarium. FR (Fertilizaron Rate) yaitu Effendie (1979) menyebutkan bahwa untuk mengetahui derajat fertilisasi telur ikan dapat menggunakan rumus sebagai berikut : 𝐏𝐨 FR (%) = 𝐏 x 100 % Keterangan : FR : Derajat fertilisasi telur (%) P : Jumlah telur sampel Po : jumlah telur yang dibuahi Cara Mengamati HR : HR atau hatching rate adalah derajat penetasan telur. Pengamatan derajat penetasan telur dilakukan ketika embrio menetas menjadi larva. HR yang di hitung adalah telur yang menetas dalam akuarium. Effendie (1979) menyebutkan bahwa untuk mengetahui derajat penetasan telur ikan dapat menggunakan rumus sebagai berikut : 9 HR (%) = 𝐏𝐭 𝐏𝐨 x 100 % Keterangan : HR : Derajat penetasan telur Pt : Jumlah telur yang menetas Po : Jumlah telur yang dibuahi Cara Mengamati SR: SR atau survival rate adalah derajat kelangsungan hidup ikan. Pengamatan derajat kelangsungan hidup ikan dilakukan hanya untuk proses ginogenesis, hibridisasi, dan triploidisasi setelah larva ikan berumur tujuh hari. Effendie (1979) menyebutkan bahwa untuk mengetahui derajat kelangsungan hidup ikan dapat menggunakan rumus sebagai berikut : SR (%) = 𝐍𝐭 𝐍𝐨 x 100 % Keterangan : SR : Kelangsungan hidup ikan selama praktikum Nt : Jumlah ikan pada akhir praktikum No : Jumlah ikan pada awal praktikum Perlakukan Triploidisasi Untuk mempercepat ovulasi dan spermiasi, maka dilakukan penyuntikan induk ikan koi dengan menggunakan hormon ovaprim (gonadotropin ikan salmon) dengan dosis 0,5 ml/kg berat induk. Setalah dilakukan penyuntikan, kemudian dilakukan pengurutan (stripping) dilakukan 8 jam setelah penyuntikan ikan. Pengurutan dilakukan secara bersamaan antara induk jantan dan betina. Sperma dan telur ditampung dalam baki yang berbeda. Sperma dilarutkan dulu dengan larutan NaCl fisiologis. Kemudian keduanya dicampurkan dan diaduk dengan bulu ayam sambil ditambahkan. Lama pengadukan campuran telur dan sperma 1 menit. Telurtelur tersebut kemudian dibilas dengan air bersih untuk membuang sisa sperma agar tidak terjadi pembusukan sperma pada tempat penetasan telur. Selanjutnya telur- 10 telur dimasukkan dalam saringan perendaman pada suhu 25 0C di akuarium penetasan. Setelah itu, dilakukan kejutan suhu setelah 2 menit pembuahan telur, dengan cara memindahkan telur dari akuarium penetasan (suhu air 25 0C) ke dalam kotak styrofoam berisi air panas yang bersuhu 40 0C. Lama kejutan suhu panas ini adalah 2 menit dan kemudian dipindahkan ke dalam akuarium penetasan (suhu air 25 0C) sampai terlihat adanya telur-telur yang menetas. Pengambilan Sampel Darah Pengujian tingkat ploidi benih triploidisasi dilakukan dengan metode apus darah. Metode apus darah ini dipergunakan untuk menentukan ukuran sel darah merah pada ikan triploid. Contoh darah diambil dari pembuluh darah arteri ekor yaitu dengan memotong bagian ekor ikan. Darah langsung dihisap dengan pipet Thoma hemasitometer sampai skala 0,5 dan langsung diencerkan dengan larutan Hayem’s sampai skala 101 (pengenceran 200 kali) dengan cara menghisap memakai pipet thoma. Penghitungan jumlah sel darah merah dilakukan di bawah mikroskop dengan perbesaran 400 kali. Pembuatan preparat apus darah diawali dengan menghisap sampel darah dengan pipet thoma hemasitometer, darah ikan langsung diteteskan di gelas obyek. Darah yang telah diapus pada gelas obyek, difiksasi dengan methanol selama 3 – 5 menit, kemudian direndam dalam larutan Giemsa 20 % selama 45 menit. Ukuran sel darah merah ditentukan dengan penggunaan mikrometer okuler pada mikroskop monokuler pada pembesaran 1600 kali. 2.5 Tujuan Triploidisasi Pemberian kejutan panas pada triploidisasi yang bertujuan untuk mencegah terlepasnya polar-body II sehinggga terbentuk keadaan triploid (Hariani, 2008). Kromoson 3N yang dimiliki ikan nantinya akan berasal dari gamet jantan + gamet betina + polar bodi kedua yang tidak jadi keluar (1N+1N+1N). Selain itu, tujuan triploidisasi dalam budidaya yaitu untuk mempercepat pertumbuhan ikan karena dengan triploidisasi, ikan akan bersifat steril sehingga energinya hanya digunakan untuk pertumbuhan tanpa digunakan untuk kebutuhan reproduksi. 11 BAB III BAHAN DAN METODE 3.1 Tempat dan Waktu Triploidisasi dilakukan di Laboratorium Manajemen Sumberdaya Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan (FPIK) Universitas Padjadjaran. Praktikum dilakukan pada tanggal 01 April 2019 higga selesai fase larva. 3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat Praktikum Triploidisasi Peralatan yang diperlukan dalam pelaksanaan praktikum troploidisasi sebagai berikut : a) Waterbath untuk memanaskan air sampai suhu yang dikehendaki, b) Thermometer untuk mengukur suhu air, c) Seperangkat alat hipofisasi (sentrifuse, dissecting set, pisau bedah, talenan dan jarum suntik) untuk pemijahan dan pembuahan buatan, d) Kotak styrofoam dan saringan perendaman telur sebagai wadah penetasan telur, e) Petridish, pipet dan sendok untuk wadah sampel telur dan alat pengambil telur, f) Hemasitometer, mikroskop cahaya, gelas obyek dan mikrometer okuler dan obyektif untuk pengambilan sampel darah dan pengukuran sel darah merah, g) Akuarium dan aerator. 3.2.2 Bahan Praktikum Triploidisasi Bahan yang diperlukan untuk triploidisasi adalah sebagai berikut: a) Ikan uji yaitu ikan koi dan menggunakan sperma ikan kometyang telah matang gonad. b) Hormon ovaprim untuk mempercepat pemijahan, spermiasi dan ovulasi induk ikan c) Larutan NaCl fisiologis sebagai larutan pengencer sperma untuk meningkatkan derajat pembuahan telur. d) Air panas yang digunakan sebagai kejutan suhu panas (40C). e) Larutan Hayem’s sebagai pengawet dan pengencer sel darah merah ikan. 12 f) Metanol digunakan untuk fiksasi preparat apus darah. g) Larutan Giemsa digunakan untuk pewarnaan preparat apus darah. h) Minyak imersi diperlukan untuk mengumpulkan cahaya saat pengamatan ukuran sel darah merah di bawah mikroskop monokuler dengan pembesaran 1600 kali. 3.3 Tahapan Praktikum 3.3.1 Persiapan Praktikum 1. Persiapan Alat a. Dicuci akuarium hingga bersih b. Dipasang Instalasi aerasi agar berfungsi dengan baik c. Diisi akuarium dengan setengah air dari volume akuarium 2. Pemijahan Buatan a. Diseleksi indukan yang akan digunakan b. Dipisahkan indukan jantan dan indukan betina c. Disuntikan ovaprim pada indukan jantan dan betina dengan dosis 0,4ml/kg untuk induk betina dan 0,1 ml/kg untuk indukan jantan d. Ditunggu sela waktu kurang lebih 8 jam, setelah ovulasi ikan di stripping. 3.3.2 Pelaksanaan Praktikum 1. Pelaksanaan Triploidisasi a. Diencerkan sperma yang telah dihasilkan oleh indukan jantan menggunakan larutan NaCl b. Diletakan larutan campuran sperma dan NaCl di cawan petri. c. Dilakukan stripping pada ikan komet betina dan disimpan pada cawan petri. d. Dilakukan Fertilisasi dengan mencampurkan telur dan sperma kemudian ditebar di akuarium dengan suhu 25oC. e. Setelah 2 menit fertilisasi, dilakukan kejutan panas selama 2 menit dengan memindahkan telur ke akuarium dengan suhu 40oC. f. Dipindahkan kembali kedalam akuarium dengan suhu 25oC. 2. Pengujian Sampel Darah a. Contoh darah diambil dari pembuluh darah arteri ekor yaitu dengan memotong bagian ekor ikan koi. 13 b. Darah langsung dihisap dengan pipet Thoma hemasitometer sampai skala 0,5. c. Darah diencerkan dengan larutan Hayem’s sampai skala 101 (pengenceran 200 kali) d. Penghitungan jumlah sel darah merah dilakukan di bawah mikroskop dengan perbesaran 400 kali. e. Pembuatan preparat apus darah diawali dengan menghisap sampel darah dengan pipet thoma hemasitometer f. Darah ikan langsung diteteskan di gelas obyek. g. Darah yang telah diapus pada gelas obyek, difiksasi dengan methanol selama 3 – 5 menit. h. Kemudian direndam dalam larutan Giemsa 20 % selama 45 menit. i. Ukuran sel darah merah ditentukan dengan penggunaan mikrometer okuler pada mikroskop monokuler pada pembesaran 1600 kali. 3.4 Metode Praktikum Metode yang digunakan dalam praktikum ini berupa eksperimental dengan menggunakan beberapa perlakuan. Perlakuan yang diberikan diantaranya adalah penyuntikan dengan menggunakan hormon ovaprim, striping, pengenceran sperma dengan larutan NaCl, dan kejutan panas. 3.5 Parameter yang Diamati 3.5.1 FR FR atau fertilization rate adalah derajat pembuahan telur. Pengamatan derajat pembuahan telur (FR) yang dilakukan setelah pembuahan telur pada proses ginogenesis, hibridisasi, dan triploidisasi selesai dilakukan. Effendie (1979) menyebutkan bahwa untuk mengetahui derajat fertilisasi telur ikan dapat menggunakan rumus FR. 3.5.2 HR HR atau hatching rate adalah derajat penetasan telur. Pengamatan derajat penetasan telur dilakukan ketika embrio berumur 17-20 jam dari proses pembuahan telur. Effendie (1979) menyebutkan bahwa untuk mengetahui derajat penetasan telur ikan dapat menggunakan rumus HR. 14 15 3.5.3 SR SR atau Survival Rate adalah derajat kelangsungan hidup larva. Pengamatan derajat kelangsungan hidup dilakukan saat pengamatan larva yaitu seminggu setelah penetasan. Effendie (1879) menyatakan bahwa untuk mengetahui tingkat kelangsungan hidup larva ikan dapat menggunakan rumus. 3.6 Analisis Data Analisis data praktikum triploidisasi, terdapat banyak keragaman hasil pengamatan yang didapatkan oleh 12 kelompok pada kelas Perikanan B 2016. Hasil pengamatan data FR yang menunjukkan rasio penetasan telur dapat memberikan informasi tentang berapa telur yang berhasil dibuahi oleh sel sperma dan berapa yang mati ataupun tidak berhasil dibuahi oleh sel sperma. Selain itu FR juga akan menjadi acuan untuk pengamatan HR kedepannya. HR sendiri adalah rasio penetasan telur yang telah berhasil terbuahi. HR akan memberikan informasi tentang berapa banyak telur yang berhasil menetas dan berapa yang mati. Nilai HR menjadi acuan untuk menentukan nilai SR. SR memberikan informasi mengenai tingkat kelangsungan hidup larva ikan koi dalam praktikum triploidisasi ini. Perbandingan nilai pada FR, HR dan SR dari masing-masing kelompok akan memberikan informasi mengenai bagaimana cara penanganan, perlakuan yang baik pada sel telur dan sel sperma pada proses triploidisasi agar mampu berhasil menetas dan tumbuh menjadi larva dan pertahanan hidup yang sesuai dengan tujuan kita pada triploidisasi. BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil Pengamatan Kelas 4.1.1 FR Tabel 1. Data FR Kelas Ulangan 1 2 3 84% 83,30% 98% 63,09% 72,35% 90,62% 94% 48,30% 58,49% 55,46% 86% 70% 74,14% 72, 47% 79,28% Perlakuan Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Rata-rata 16 4.1.2 HR Tabel 2. Data HR Kelas Perlakuan 1 4,90% 9,45% 5,10% 5,50% 6,24% Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Rata-rata 4.1.3 Ulangan 2 8% 15% 5,50% 12,19% 40,69% 3 0,90% 1,15% 4,30% 100% 26,59% SR Tabel 3. Data SR Kelas Perlakuan 1 100% 60% 60% 100% 80% Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Rata-rata 4.2 Hasil Pengamatan Kelompok 4.2.1 Ulangan 2 3 100% 100% 100% 1,15% 50% 100% 50% 90,47% 75% 72,91% FR Pada teknik hibridisasi kelompok kami mendapatkan telur yang berhasil dibuahi sejumlah 21 telur dari 30 keseluruhan sampel telur, maka nilai derajat fertilisasi telur dapat dihitung sebagai berikut : FR = Po P x 100% = 21 30 x 100 % = 70% 4.2.2 HR Seiring dengan berjalannya proses yang terjadi, telur yang telah dibuahi menetas menjadi larva. Sehingga derajat penetasan telurnya menjadi : HR = Pt Po = x 100% 21 21 x 100 % = 100 % 17 4.2.3 SR Sedangkan untuk derajat kelangsungan hidup larva ikan koi dapat diketahui sebagai berikut : SR = Nt x 100% No = 19 21 x 100 % = 90,47 % 4.3 Pembahasan Kelompok 4.3.1 FR Menurut Satyani (2007) fertilisasi atau pembuahan adalah masuknya spermatozoa kedalam sel telur melalui micropyle dan bergabungnya sel inti telur deangan sperma. FR atau fertilisation rate adalah derajat atau rasio pembuahan sel telur oleh sel sperma. Pada pemijahan ikan penting untuk mengetahui FR agar selanjutnya kita mampu memperoleh HR yang baik dan SR yang baik pula bagi budidaya ikan koi yang kita kembangkan. Persentase pembuahan dihitung dengan cara membandingkan telur yang terbuahi dengan jumlah total telur kemudian dinyatakan dalam persen. (Winarsih, 1996). Keberhasilan pembuahan sangat dipengaruhi oleh banyaknya telur yang mengalami pematangan, tingginya konsentrasi hormon sampai pada konsentrasi tertentu dapat meningkatkan persentase telur yang matang, hanya telur yang mengalami maturasi (GVBD) yang dapat terfertilisasi (Zairin, 2003). Woynarovich dan Horvath (1980) mengatakan bahwa keberhasilan pembuahan sangat ditentukan oleh kualitas telur, sperma, media dan penanganan manusia. Subagyo dkk. (1992) menambahkan bahwa penanganan yang salah dan terlalu kasar dapat mengakibatkan ikan stres dan lemah sehingga dapat menurunkan kualitas telur dan sperma. Nilai FR yang diperoleh dari sampel telur kelompok kami yaitu 70%. Dengan nilai FR 70%, dapat dikatakan bahwa pembuahan berlangsung berhasil dengan kegagalan 30%. Hal tersebut dipengaruhi oleh banyak faktor seperti kualitas induk yang baik sehingga menghasilkan sel sperma dan sel telur yang baik pula. Ataupun cara penanganan oleh manusia bias dikatakan baik saat pemijahan yang juga akan mempengaruhi persentase derajat pembuahan tersebut. Kemudian dari 18 segi kematangan gonad baik jantan maupun betina yang dapat dikatakan telah matang gonad. Namun, dari seluruh sampel telur yang diamati, ternyata ada 30% telur yang tidak terbuahi. Karena hanya telur yang mengalami maturasi (GVBD) yang dapat terfertilisasi (Zairin, 2003). Dibandingkan dengan nilai HR dan SR, maka nila FR pada kelompok kami lebih kecil. Hal itu terjadi karena sperma yang digunakan yaitu ikan komet sehingga ada kemung-kinan bahwa sperma tidak dapat masuk kedalam sel telur. 4.3.2 HR Tingkat penetasan telur berhubungan erat dengan keberhasilan pembuahan. Oyen et al. (1991) mengatakan keberhasilan penetasan selalu ditentukan oleh keberhasilan pembuahan, kecuali jika ada faktor lingkungan yang mempengaruhinya. Masrizal dan Efrizal (1997) mengatakan bahwa keberhasilan penetasan akan menurun dengan semakin menurunnya keberhasilan pembuahan atau sebaliknya keberhasilan penetasan akan meningkat dengan semakin meningkatnya keberhasilan pembuahan. Pada kelompok kami didapati bahwa penetasan telur adalah 100% yang mengindikasikan bahwa telur yang telah terbuahi semuanya mengalami penetasan. Keberhasilan penetasan juga didukung oleh kondisi bak penetasan atau lingkungan media yaitu air. Kualitas air yang mempengaruhi penetasan meliputi oksigen, suhu dan pH. Seringkali terjadi beberapa telur mati setelah periode singkat perkembangan, yaitu fase morula atau sebelum penutupan blastopor. Kekurangan oksigen merupakan penyebab kematian telur pada fase ini. Ketidaksesuaian suhu juga dapat menyebabkan kematian terutama pada fase perkembangan embrio. Pada awalnya telur tampak sehat dan berkembang, namun pada perkembangan selanjutnya telur menjadi berwarna putih dan kusam, sedangkan telur yang sehat akan berkembang menjadi transparan atau jernih (Rustidja, 2004). 19 4.3.3 SR Tingkat kelangsungan hidup ikan setelah menetas berkaitan erat dengan penetasan telur. Telur yang telah menetas akan berubah menjadi larva. Saata awal menetas, larva asih memilii kuning telur (yolk sack) sebagai cadangan makanan larva sebelum diberi pakan. Pakan awal yang diberikan yaitu kuning telur ayam yang direbus. Pakan kuning telur diberikan selama fase larva. Pada kelompok kami daidapatkan nilai SR sebesar 90,47%. Nilai tersebut dapat mengindikasikan bahwa tingkat kelangsungan hidup larva tinggi sehingga kelangsungan hidup larva ikan koi dapat dikatakan berhasil. Adapun faktor keberhasilan yang mempengaruhi terhadap nilai SR yaitu adanya faktor lingkungan, faktor pemberian pakan dan faktor larva tersebut. Dari faktor lingkungan yaitu dari segi kualitas air meliputi nilai oksigen terlarut yang mencukupi kebutuhan karena pada saat pemeliharaan larva, wadah diberikan aerasi dan aerasi yang digunakan yaitu aerasi yang bagus. Kemudian dari nilai suhu yang optimum untuk hidup larva ikan koi sehingga larva tidak banyak yang mengalami mortalitas. Dari faktor pemberian pakan yaitu pakan yang diberikan pada larva dilakukan secara rutin sehingga tidak banyak larva ikan koi yang mati karna kelaparan atau kekurangan pakan. Dari faktor larva tersebut yaitu kualitas larva ikan koi sendiri. Kemungkinan bahwa kualitas larva baik karena induknya diseleksi dengan baik sehingga menghasilkan anakan yang baik pula serta kuat yang mengakibatkan SR larva ikan koi tinggi. BAB V PENUTUP 5.1 Kesimpulan 1. Triploidisasi digunakan untuk menghasilkan populasi yang pertumbuhannya lebih cepat sehingga dapat memenuhi kebutuhan ikan yang semakin meningkat. 2. Perlakuan kejutan suhu panas berpengaruh secara nyata terhadap laju penetasan telur ikan koi hasil poliploidisasi. 3. Ikan koi dengan perlakuan kejutan suhu panas mempengaruhi kecepatan pertumbuhan yaitu pertumbuhan lebih cepat dari ikan koi yang normal. dan laju pertumbuhan spesifik yang lebih baik/tinggi dibandingkan ikan mas normal (diploid). 20 4. Triploidisasi mempengaruhi terhadap gonad ikan yaitu ikan bersifat steril sehingga ikan yang bersifat triploid energinya hanya untuk pertumbuhan saja tidak untuk perkembangan gonad. 5. Dari hasil triploidisasi yang telah dilakukan oleh kelompok kami, dapat dikatakan bahwa triploidisasi kelompok kamu berhasil karena nilai FR, HR dan SR yang tinggi. Hal ini dipengaruhi oleh faktor lingkungan, faktor kualitas larva dan pemberikan pakan setelah habis yolksac. 5.2 Saran Saran dari kelompok kami yaitu mungkin kedepannya jika melakukan triploidisasi harus dilakukan pengukuran kualitas air secara lengkap sehingga besar pengaruh kualitas air terhadap keberhasilan triploidisasi dapat diketahui dengan nyata dan lebih rinci. 21 DAFTAR PUSTAKA Alimuddin. Sumantadinata, K. Hadiroseyani, Y. 2002. Fenotipe Keturunan Diploid dan Triploid Persilangan Ikan Koi Kohaku dan Sanke Betina dengan Jantan Putih Merah. Jurnal Akuakultur, 1 (3) ; 97-100. IPB Beaumont, A. R. 1994. Genetics and Evolutionof Aquatic Organism. Chapman and Bell : London. Diunduh dari : online library.wiley.com>doi. Pada tanggal 6 Mei 2019. Bramick, uwe. Dkk. 1995. Testing of triploid tilapia (Oreochromis niloticus) under tropical pond conditions. Diunduh dari : http://doi.org/10.1016/00448486(95)01104-4 pada tanggal 06 Mei 2019. Bromage, N. 1995 Broodstock management and seed quality. General considirations. Oxford : Blackwell Science. P. 1-24. Dunham, A. Rex. 2011. Aquaculture and Fisheries Biotechnology and Genetics. New York : CABI. Effendie, M.I. 1979 Metode Biologi Perikanan. Bogor : Yayasan Dewi Sri. Cetakan pertama. Erans.D.H 1993. The Physiology of Fishes . CRC. Press London. Goenarso, 2005. Feeding Activity And Growth Efficiency Of Common Carp (Cyprinus Carpio Lin. Vol 1, No 1 (2002): Biotika Juni 2002. Gusrina. 2008. Budidaya Ikan Jilid 1. Jakarta: Pusat Perbukuan Departemen Pendidikan. Huisman EA. 1987. Principles of Fish Production. Department of Fish Culture and Fisheries, Wageningen Agriculture University, Wageningen, Netherland. 170p. http://www.wikipedia.com. Diakses pada tanggal 6 Mei 2019 pukul 20.00 WIB Iskandar, Sitanggang M. 2003. Memilih dan Merawat Maskoi Impor Berkualitas. Agromedia Pustaka. Jakarta. Lesmana, Darti Satyani. 2007. Reproduksi dan Pembenihan Ikan Hias Air Tawar. Jakarta : Penebar swadaya. Diunduh dari : libraty.um.ac.id.buku. pada tanggal 06 MEI 2019. Masrizal dan Efrizal. 1997. Pengaruh rasio pengenceran sperms terhdap daya tetas telur Ikan Mas (Cyprinus carpio). Fisheries Journal/6. 1-9. Maftucha, Lulu. 2005. Pemijahan Secara Buatan Pada Ikan Gurame Osphronemus gouramy Lac. Dengan Penyuntikan Ovaprim. Skripsi. Departemen Budidaya Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. 22 Mukti, Taufiq Akhmad. 2005. Perbedaan Keberhasilan Tingkat Poliploidisasi Ikan Mas (Cyprinus carpio) Melalui Kejutan Panas. Berk.Penel.Hayati : 10 (133-138). Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya Nurasni, Anisa.2012. Pengaruh Suhu dan Lama Kejutan Panas Terhadap Triploidisasi Ikan Lele Sangkuriang (Clarias gariepinus). IJAS.Vol.2 Nomor 1. Unpad Perikananunram.blogspot.com/2011/12/budidaya-ikan-komet.html diakses tanggal 6 Mei 2019, pukul 20.09 Reproduksi Ikan Komet http://www.bibitikan.net/mengenal-ikan-komet-carrasiusauratus/ Rustidja. 2004. Pembenihan Ikan-Ikan Tropis. Malang :.Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya. Street, Robin . Carassius auratus. University of Michigan http://animaldiversity.org/accounts/Carassius_auratus/ Subagyo, Joko. 1992. Hukum Lingkungan. Jakarta : Rineka Cipta. Label: 344.06 SUB.h diunduh dari library.um.ac.id>printbook5.php. pada tanggal 6 Mei 2019. Sumantadinata, K.N. dan K. Sugama. 1990. The necessary conditions and the use of ultraviolet irradiated sperm from different species to induce gynogenesis on Indonesiaan common carp. Dalam : Hirano, R dan I. Hanyu, L., editor, proceedings of second Asian Fisheries Forum p.539542: Manila: Asian Fisheries Society. Thorgaard, 1983. Induction of triploidy in Atlantic salmon by heat sock. Diunduh dari : https://sciencedirect.com Winarsih, W.H. 1996. Pengaruh pembekuan sperma dengan nitrogen cair terhadap mortalitas spermatozoa, Fertilisasi dan daya tetas telur ikan mas. Thesis Pascasarjana Unair : Surabaya. Woynarovich, E. dan Horvart, L. 1980. The artificial propagation warm-water finfishes - a manual for extension. Fish Culture Research Inst., Fishery Resources and Environment Div. FAO : Rome (Italy). Diunduh dari : http://www.fao.org/library pada tanggal 06 Mei 2019. Zairin, J.R. 2003. Pemijahan Ikan Tawes dengan Sistem Imbas menggunakan ikan mas sebagai pemicu. Jurnal Akuakultur Indonesia. IPB : Bogor. 23 LAMPIRAN Lampiran Tabel Lampiran 1. Tabel Data FR Kelas Ulangan 1 2 3 84% 83,30% 98% 63,09% 72,35% 90,62% 94% 48,30% 58,49% 55,46% 86% 70% 74,14% 72, 47% 79,28% Perlakuan Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Rata-rata Lampiran 2. Tabel Data HR Kelas Perlakuan 1 4,90% 9,45% 5,10% 5,50% 6,24% Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Rata-rata Ulangan 2 8% 15% 5,50% 12,19% 40,69% 3 0,90% 1,15% 4,30% 100% 26,59% Lampiran 3. Tabel Data SR Kelas Perlakuan 1 100% 60% 60% 100% 80% Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Triploidisasi Rata-rata 24 Ulangan 2 3 100% 100% 100% 1,15% 50% 100% 50% 90,47% 75% 72,91% Lampiran Bagan Alir Lampiran 1. Bagan Alir Persiapan Wadah Dicuci akuarium hingga bersih Dipasang Instalasi aerasi agar berfungsi dengan baik Diisi akuarium dengan setengah air dari volume akuarium Lampiran 1. Bagan Alir Prosedur Pemijahan Buatan Diseleksi indukan yang akan digunakan Dipisahkan indukan jantan dan indukan betina Disuntikan ovaprim pada indukan jantan dan betina dengan dosis 0,4ml/kg untuk induk betina dan 0,1 ml/kg untuk indukan jantan Disuntikan ovaprim pada indukan jantan dan betina dengan dosis 0,4ml/kg untuk induk betina dan 0,1 ml/kg untuk indukan jantan Ditunggu sela waktu kurang lebih 8 jam, setelah ovulasi ikan di stripping. 25 Lampiran 2. Bagan Alir Pelaksanaan Praktikum Triploidisasi Diencerkan sperma yang telah dihasilkan oleh indukan jantan menggunakan larutan NaCl Diletakan larutan campuran sperma di cawan petri. Diletakan telur hasil stripping pada cawan petri. Dilakukan Fertilisasi dan ditebar di akuarium dengan suhu 25oC. Setelah 2 menit fertilisasi, dilakukan kejutan panas selama 2 menit dengan memindahkan telur ke akuarium dengan suhu 40oC. Dipindahkan kembali kedalam akuarium dengan suhu 25oC. 26 Lampiran Dokumentasi Pribadi Lampiran 1. Proses Stipping Ikan Koi Lampiran 2. Pengambilan Sampel Ikan Koi Lampiran 3. Pemcampuran Sperma dan Sel Telur 27 Lampiran 4. Pemberian Kejutan Panas Lampiran 5. Pengangkatan Telur Setelah Kejutan Panas 28 Lampiran 6. Sampel Telur Triploidisasi Lampiran 7. Larva Ikan Koi Hasil Triploidisasi 29
