STERILISASI DAN ISOLASI MIKROORGANISME STERILISASI Sterilisasi merupakan proses mematikan semua mikroorganisme yang hidup. Dalam proses pembiakan bakteri, sterilisasi mutlak diperlukan untuk menghindari kontaminasi bakteri non-target atau mikroorganisme lain Secara Umum meliputi : 1. Sterilisasi Media 2. Sterilisasi Alat 1. Sterilisasi Media Meliputi : • Tyndallisasi Mendidihkan medium dengan uap selama 1 jam, kemudian didiamkan selama 1 hari, kemudian didihkan lagi hingga 3 kali ulangan. • Autoclaving Menggunakan Autoclave (Tangki Sterilisasi), selama 15-20 menit pada suhu 121 0C, tekanan 1 atm/ cm2 (15 lb/ inchi2). • Filtrasi Menggunakan saringan porselain atau tanah diatom dengan pore tertentu. 2. Sterilisasi Alat Sterilisasi Kering menggunakan oven pada temperatur 160 0C selama 2-3 jam. Autoclave TEKNIK INOKULASI BAKTERI Secara umum Teknik Penanaman (Inokulasi) Bakteri dapat dilakukan dengan metode : 1. Biakan Agar Lempeng (Plate Agar Culture) 2. Biakan Agar Miring 3. Biakan Tusukan 4. Biakan Adukan (Pour Plate Culture) 1 BIAKAN AGAR LEMPENG (PLATE AGAR CULTURE) Menggunakan lempeng agar untuk membiakan bakteri melalui metode gores, oles atau spray Metode Gores Metode Oles/ Spray Plate Agar Culture 2 BIAKAN AGAR MIRING Menggunakan medium agar yang diletakkan miring pada tabung biakan Biakan Agar Miring 3 BIAKAN TUSUKAN Diperoleh dengan cara menusukkan ujung kawat yang membawa bakteri lurus ke dalam medium melalui tengah-tengah medium. Bakteri aerob akan tumbuh di dekat permukaan medium. Bakteri Aerob Biakan Tusukan 4 BIAKAN ADUKAN (POUR PLATE CULTURE) Meletakkan biakan bakteri di tengah cawan petri kemudian dituangkan gelatin atau agar yang belum memadat. Pour Plate Culture Biakan Campuran (Mixed Culture) Biakan yang masih terdiri lebih dari satu spesies bakteri, biasanya didapatkan pada awal penanaman (inokulasi) Biakan Murni (Pure Culture) Biakan yang sudah terdiri dari satu spesies bakteri saja, yang didapatkan dari pemurnian Biakan Campuran (Mixed Culture) Mixed Culture Primary Culture Sub-culture TEKNIK PEMBIAKAN MURNI Teknik Pemisahan koloni dari koloni campuran, secara umum dapat dilakukan dengan 3 metode : 1. Pengenceran 2. Tuang 3. Gores 4. Sebar 5. Tanam PENGENCERAN Pertama kali diperkenalkan oleh Lister (1865) Dengan cara melakukan pengenceran berseri koloni awal (campuran) MIXED CULTURE 10 -1 10 -2 10 -3 TUANG (POUR) Pertama kali diperkenalkan oleh Robert Koch (1843-1905) Menggunakan metode Biakan Adukan GORES Menggunakan Metode Agar Lempeng dengan Teknik Gores SEBAR
