Aktivitas Antimikroba dan Lethality Udang Air Asin Bioassay dari Ekstrak Daun Dillenia indica Linn

J Young Pharm . 2010 Jan-Mar; 2 (1): 50–53.
doi: 10.4103 / 0975-1483.62213
PMCID : PMC3035885
PMID: 21331191
Aktivitas Antimikroba dan Lethality Udang Air Asin
Bioassay dari Ekstrak Daun Dillenia indica Linn
AS Apu , MA Muhit , SM Tareq , AH Pathan , ATM Jamaluddin ,danM. Ahmed
Informasi penulis Hak cipta dan Informasi lisensi Penafian
Abstrak
Ekstrak metanol kasar Dillenia indica Linn. (Dilleniaceae) daun telah diselidiki untuk
evaluasi kegiatan antimikroba dan sitotoksik. Fraksi organik pelarut ( n- heksana, karbon
tetraklorida dan kloroform) dari ekstrak metanol dan fraksi metanol (berair) disaring untuk
aktivitas antimikroba mereka dengan metode difusi cakram. Selain itu, fraksi disaring untuk
aktivitas sitotoksik menggunakan bioassay mematikan udang air asin ( Artemia salina). Di
antara empat fraksi yang diuji, nfraksi -heksana, karbon tetraklorida, dan kloroform
menunjukkan aktivitas antibakteri dan antijamur yang moderat dibandingkan dengan
antibiotik standar, kanamycin. Zona penghambatan rata-rata berkisar antara 6 hingga 8 mm
pada konsentrasi 400 μg / cakram. Tetapi fraksi berair ditemukan tidak peka terhadap
pertumbuhan mikroba. Dibandingkan dengan vincristine sulfate (dengan LC 50 0,52 μg /
ml), fraksi n- heksana dan kloroform menunjukkan aktivitas sitotoksik yang signifikan
(masing-masing memiliki LC 50 masing -masing 1,94 μg / ml dan 2,13 μg / ml). LC 50 nilai dari
karbon tetraklorida dan fraksi air yang 4,46 ug / ml dan 5.13 mg / ml, masing-masing. Studi
ini mengkonfirmasi aktivitas sitotoksik antimikroba dan poten Dillenia indica ekstrak daun
dan karenanya menuntut isolasi prinsip aktif dan bioassay menyeluruh.
Kata kunci: Aktivitas antimikroba, Artemia salina , bioassay kematian udang air
asin, Dillenia indica
PENGANTAR
Genus Dillenia memiliki 60 spesies, di antaranya Dillenia indicaLinnaeus (Keluarga:
Dilleniaceae) adalah spesies yang dapat dimakan yang paling umum. Berasal dari Indonesia,
pohon tropis hijau ini sekarang ditemukan dari India ke Cina. Nama-nama umum termasuk
Chulta (Bengali, Hindi), Bhavya (Sansekerta) dan apel Gajah (Inggris). Ini adalah pohon
yang menyebar dan memiliki bunga harum putih yang indah, daun bergigi, dan buah-buahan
bulat dengan biji coklat kecil. [ 1 ] Daun, kulit kayu, dan buah tanaman ini digunakan sebagai
obat tradisional. Jus daun D. indica , kulit kayu, dan buah-buahan dicampur dan diberikan
secara oral (5-15 ml, dua hingga lima kali sehari) dalam pengobatan kanker dan diare. [ 2] Jus
buah dari tanaman ini memiliki efek kardiotonik, digunakan sebagai minuman pendingin
dalam demam dan juga digunakan dalam campuran batuk. [ 3 ] Ekstrak pelarut buah D.
indica dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan. [ 4 ] Aktivitas depresan SSP di tikus
ditemukan dari ekstrak alkohol dari daun D. indica . [ 5 ] Mengingat penggunaan
tradisional bagian tanaman D. indica , daun dapat menjadi sumber dari banyak obat-obatan
modern.
Sebuah survei literatur yang diterbitkan menunjukkan bahwa ada sejumlah metode berbeda
yang digunakan untuk penilaian aktivitas antimikroba; Namun, tidak ada satu metode yang
digunakan oleh semua peneliti dan tidak ada studi inklusif untuk menentukan mana yang
merupakan metode terbaik untuk pengujian in vitro . [ 6 ] Mayoritas peneliti menggunakan
salah satu dari tiga metode berikut untuk penilaian aktivitas antimikroba. : Difusi cakram,
pengenceran agar, dan metode pengenceran / mikrodilusi. Metode difusi cakram (juga
dikenal sebagai zona metode penghambatan) [ 7 ] mungkin merupakan metode yang paling
banyak digunakan dari semua metode yang digunakan untuk menguji aktivitas antibakteri
dan antijamur. [ 6] Ini hanya membutuhkan sejumlah kecil zat uji (10-30 μl), dapat
diselesaikan oleh staf peneliti dengan pelatihan minimal, dan karenanya dapat berguna dalam
situasi lapangan. [ 6 ] Beberapa peneliti telah menggunakan metode ini untuk
mengidentifikasi antibakteri dan aktivitas antijamur dari ekstrak tanaman, [ 8 ] senyawa yang
diisolasi dari tanaman, [ 9 ] dan juga untuk mengetahui strain mikroorganisme yang resisten
antimikroba. [ 10 , 11 ] Penting untuk dicatat bahwa metode difusi cakram menunjukkan
aktivitas in vitro tidak selalu diterjemahkan menjadi aktivitas in vivo . [ 6 ]
Biasitas kematian udang air asin cepat (24 jam), sederhana (misalnya, tidak ada teknik
aseptik diperlukan), mudah dikuasai, murah, dan membutuhkan sejumlah kecil bahan uji (220 mg atau kurang). [ 12 ] Bioassay memiliki korelasi yang baik dengan aktivitas sitotoksik
pada beberapa tumor padat manusia dan dengan aktivitas pestisida. [ 12 , 13 ] Tes ini
diusulkan oleh Michael et al . [ 14 ] dan dimodifikasi oleh orang lain. [ 15 , 16 ] Sejak
diperkenalkan, ini secara in vivo uji mematikan telah berhasil digunakan untuk menyediakan
layar garis depan yang dapat didukung oleh bioassay lebih spesifik dan lebih canggih setelah
senyawa aktif telah diisolasi.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki aktivitas antimikroba dan sitotoksik dari
fraksi pelarut yang berbeda dari ekstrak metanol mentah daun D. indica .
MATERIAL DAN METODE
Koleksi bahan tanaman
Sampel tanaman D. indica dikumpulkan dari Rangpur, Bangladesh, pada bulan Maret 2007.
Pabrik diidentifikasi dan spesimen voucher (nomor Akses DACB 34359) yang mewakili
koleksi ini telah disimpan di Herbarium Nasional Bangladesh, Dhaka, untuk referensi lebih
lanjut.
Persiapan, ekstraksi dan fraksinasi bahan tanaman
Daun tanaman yang baru dipisahkan dipotong-potong kecil, dijemur, dan kemudian
dikeringkan dalam oven selama 24 jam pada suhu rendah untuk menggilingnya menjadi
bubuk kasar (40-mesh).
Sekitar 500 g daun bubuk diambil dalam labu dasar bundar 5 liter dan direndam dalam 2 liter
metanol. Wadah dengan isinya disegel dengan sumbat kapas dan aluminium foil dan
disimpan pada suhu kamar selama 3 hari disertai dengan pengocokan dan pengadukan
sesekali. Ekstrak disaring melalui steker kapas segar diikuti oleh kertas saring Whatman
No.1. Filtrat kemudian dipekatkan dan dikeringkan dengan rotary evaporator (Heidolph, UK)
pada suhu rendah (39 ° C). Berat ekstrak kasar yang diperoleh dari daun adalah 7 g.
Fraksinasi pelarut-pelarut dari ekstrak metanol mentah dilakukan dengan menggunakan
protokol yang dirancang oleh Kupchan [ 17 ] dan dimodifikasi oleh Wagenen et al . [ 18 ] 5 g
ekstrak metanol mentah yang diperoleh di triturasi dengan 90% metanol. Solusi yang
disiapkan kemudian difraksinasi secara berturut-turut menggunakan pelarut yang
meningkatkan polaritas, seperti, n-heksana (HX), karbon tetraklorida (CT), dan kloroform
(CF). Fraksi metanol berair dipertahankan sebagai fraksi berair (AQ). Keempat fraksi
diuapkan sampai kering dengan menggunakan rotary evaporator dan kemudian disimpan
dalam gelas untuk analisis lebih lanjut (HX 820 mg, CT 550 mg, CF 665 mg dan AQ 400
mg).
Skrining antimikroba
Aktivitas antibakteri dan antijamur ekstrak kasar diuji dengan metode difusi cakram kertas.
[ 7 ] Tiga belas strain bakteri, yang termasuk 5 gram positif dan 8 gram negatif, dan 3 jamur
dikumpulkan dari Institut Ilmu Gizi dan Makanan (INFS) ), Universitas Dhaka, Bangladesh,
sebagaimana budaya murni digunakan. Mikroorganisme dipertahankan pada medium agar
nutrien (Merck, Jerman).
Cakram kertas saring 6,0 mm Matricel steril (BBL, cocksville USA) diresapi dengan 400 μg
masing-masing bahan uji steril dan dikeringkan untuk menguapkan sisa pelarut
(metanol). Cakram kanamycin standar (30 ug / cakram) digunakan sebagai kontrol positif
untuk memastikan aktivitas antibiotik standar terhadap organisme uji. Cakram sampel,
cakram antibiotik standar, dan cakram kosong kering yang diimpregnasi dengan metanol
(kontrol negatif) ditempatkan dengan lembut pada zona yang sebelumnya ditandai dalam
pelat agar yang diinokulasi sebelumnya dengan bakteri uji dan jamur. Pelat kemudian
disimpan dalam lemari es pada suhu 4 ° C selama 24 jam terbalik untuk memungkinkan
difusi yang cukup dari bahan dari cakram ke media agar sekitarnya. Pelat kemudian dibalik
dan disimpan dalam inkubator pada suhu 37 ° C selama 24 jam.
Aktivitas antimikroba dari zat uji diukur dengan aktivitasnya untuk mencegah pertumbuhan
mikroorganisme di sekitar cakram yang memberikan zona penghambatan yang jelas dan
berbeda. Aktivitas antimikroba dari agen uji ditentukan dengan mengukur diameter zona
hambatan yang dinyatakan dalam mm. [ 6 ]
Bioassay kematian udang air asin
The udang air garam mematikan bioassay digunakan untuk memprediksi aktivitas sitotoksik
[ 15 , 19 ] dari n-heksana, karbon tetraklorida, kloroform, dan fraksi berair dari ekstrak kasar
metanol. Untuk percobaan, 4 mg masing-masing ekstrak dilarutkan dalam dimetilsulfoksida
(DMSO) dan larutan dengan konsentrasi bervariasi (400, 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.13,
1.56, 0.78 μg / ml) diperoleh dengan teknik pengenceran serial menggunakan air laut
simulasi. Larutan kemudian ditambahkan ke vial yang sudah ditandai yang berisi 10 nauplii
udang air garam hidup dalam 5 ml air laut yang disimulasikan. Setelah 24 jam, vial diperiksa
menggunakan kaca pembesar dan jumlah nauplii yang bertahan di setiap vial dihitung. Titik
akhir kematian dari bioassay ini didefinisikan sebagai tidak adanya gerak maju terkontrol
selama 30 detik pengamatan. [ 20] Dari data ini, persentase kematian dari nauplii udang air
asin untuk setiap konsentrasi dan kontrol dihitung. Korelasi linear perkiraan diamati ketika
logaritma konsentrasi terhadap persentase mortalitas [ 21 ] diplot pada kertas grafik dan nilainilai LC 50 dihitung dengan menggunakan Microsoft Excel 2003 [ Gambar 1 ]. Vincristine
sulfat digunakan sebagai kontrol positif.
Gambar 1
Petak konsentrasi log n- heksana (- □ -), karbon tetraklorida (- ○ -), kloroform (- ∆ -) dan fraksi
ekstrak metanol berair (- × -) versus persentase kematian udang setelah 24 jam paparan
HASIL DAN DISKUSI
Dengan pengecualian fraksi berair, semua fraksi lain dari daun D. indica aktif terhadap
sebagian besar organisme yang diuji [ Tabel 1]. Zona rata-rata penghambatan yang dihasilkan
oleh fraksi n-heksana, karbon tetraklorida, dan kloroform masing-masing berkisar antara 6-8
mm, 7-8 mm, dan 6-7 mm, pada konsentrasi 400 μg / disc. Terhadap Escherichia coli , hanya
fraksi kloroform yang aktif (zona penghambatan adalah 7 mm) dan fraksi karbon tetraklorida
menunjukkan aktivitas antimikroba tertinggi dibandingkan dengan fraksi pelarut
lainnya. Dalam kedua kasus bakteri dan jamur, zona penghambatan ditemukan 6-8 mm.
Tabel 1
Aktivitas antimikroba dari kloroform, karbon tetraklorida, n- heksana, dan fraksi air ekstrak
metanol daun Dillenia indica dan kanamycin kontrol positif
LC 50 nilai-nilai
yang
diperoleh
dari
udang
air
garam
mematikan
bioassay
[Tabel [Tables22 dan and3]3 ] adalah 1,94, 4,46, 2,13, dan 5,13 mg / ml untuk n -hexane (HX), karbon
tetraklorida (CT), kloroform ( CF), dan fraksi berair (AQ), masing-masing. Dibandingkan dengan
kontrol positif (vincristine sulphate, VS, LC 50 0,52 μg / ml), semua fraksi yang diuji menunjukkan
aktivitas larvasida udang air asin yang baik. Sekali lagi ekstrak minyak mentah menghasilkan
LC 50 nilai kurang dari 250 mg / ml dianggap aktif secara signifikan dan memiliki potensi untuk
penyelidikan lebih lanjut. [ 22] Aktivitas sitotoksik yang ditunjukkan oleh fraksi pelarut cukup
menjanjikan dan ini jelas menunjukkan adanya senyawa bioaktif yang kuat. [ 15 ]
KESIMPULAN
Aktivitas antimikroba dan sitotoksik dari berbagai fraksi daun D. indica , yang ditemukan
dalam penelitian ini, dapat menjelaskan beberapa penggunaan obat tradisional tanaman
ini. Ini dapat menjadi perhatian khusus dalam kaitannya untuk mengetahui kemanjurannya
yang belum dijelajahi dan dapat menjadi sumber potensial dari kandidat obat yang secara
kimia menarik dan penting secara biologis.
Ucapan Terima Kasih
Para penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada kepala Departemen Farmasi Klinis dan
Farmakologi, Fakultas Farmasi, Universitas Dhaka, Dhaka, Bangladesh untuk menyediakan
fasilitas dan dukungan moral untuk melakukan penelitian.
Catatan kaki
Sumber Dukungan: Nihil
Benturan Kepentingan: Tidak ada yang diumumkan.
REFERENSI
1. Janick J, Paull RE, editor. Ensiklopedia buah dan kacang. Edisi pertama London:
CABI; 2008. [ Google Cendekia ]
2. Sharma HK, Chhangte L, Dolui AK. Tanaman obat tradisional di Mizoram,
India. Fitoterapia. 2001; 72 : 146–61. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
3. Shome U, Khanna RK, Sharma HP. Studi Farmakognostik pada Dillenia indica Linn: IIBuah dan Benih. Proc Indian Acad Sci (Plant Sci) 1980; 89 : 91–104. [ Google Cendekia ]
4. Abdille MH, RP Singh, Jayaprakasha GK, Jena BS. Aktivitas antioksidan dari ekstrak
dari buah Dillenia indica . Makanan Chem. 2005; 90 : 891–6. [ Google Cendekia ]
5. Bhakuni DS, Dhar ML, Dhar MN, BN Dhawan, BN Mehrotra. Pemutaran tanaman India
untuk aktivitas biologis, II. India J Exp Biol. 1969; 7 : 250. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
6. Wilkinson JM. Metode untuk menguji aktivitas antimikroba dari ekstrak. Dalam: Ahmad I,
Aqil F, Owais M, editor. Phytomedicine modern: Mengubah tanaman obat menjadi
obat. Jerman: Wiley-VCH; 2007. hlm. 157–69. [ Google Cendekia ]
7. Bauer AW, Kirby WM, Sherris JC, Turck M. Pengujian kerentanan antibiotik dengan
metode cakram tunggal standar. Am J Clin Pathol. 1966; 45 : 493–6. [ PubMed ] [ Google
Cendekia ]
8. Belboukhari N, Cheriti A. Aktivitas antibakteri dan antijamur ekstrak kasar dari Launeae
arborescens . Pak J Biol Sci. 2006; 9 : 1–2. [ Google Cendekia ]
9. Khan A, Rahman M, Islam MS. Aktivitas antibakteri, antijamur dan sitotoksik amblyone
diisolasi dari Amorphophallus campanulatus . Farmakol J India. 2008; 40 : 41–4. [ Artikel
gratis PMC ] [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
10. Hallander HO, Laurell G. Identifikasi Staphylococcus aureus yang resisten terhadap
sefalosporin dengan metode difusi diskus. Agen Antimicrob Chemother. 1972; 1 : 422–
6. [ Artikel gratis PMC ] [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
11. Vedel G. Metode sederhana untuk menentukan fenotipe resistensi β-laktam
di Pseudomonas aeruginosa menggunakan uji difusi agar disk. J Antimicrob
Chemother. 2005; 56 : 657–64. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
12. Ghisalberti EL. Deteksi dan isolasi produk alami bioaktif. Dalam: Colegate SM,
Molyneux RJ, editor. Produk alami bioaktif: Deteksi, isolasi dan penjelasan struktur. New
York: CRC Press; 1993. hlm. 15–8. [ Google Cendekia ]
13. McLaughlin JL, Rogers LL, Anderson JE. Penggunaan tes biologis untuk mengevaluasi
tumbuhan. Obat Informasikan J.1998; 32 : 513-24. [ Google Cendekia ]
14. Michael AS, Thompson CG, Abramovitz M. Artemia salinasebagai organisme uji untuk
bioassay. Ilmu. 1956; 123 : 464. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
15. Meyer BN, Ferrigni NR, Putnam JE, Jacobsen LB, Nichols DE, McLaughlin JL. Udang
air asin: Bioassay umum yang praktis untuk konstituen tanaman aktif. Planta
Medica. 1982; 45 : 31–4. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
16. Solis PN, Wright CW, Anderson MM, Gupta MP, Phillipson JD. Uji sitotoksisitas
mikrowell menggunakan Artemia salina . Planta Medica. 1993; 59 : 250–
2. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
17. Kupchan SM, Tsou G. Bruceantin: Antileukemic simaroubolide baru yang potensial
dari Brucea antidysenterica . J Org Chem. 1973; 38 : 178–9. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
18. Wagenen BC, Larsen R, Cardellina JH ke-2, Ran dazzo D, Lidert ZC, Swithenbank C.
Ulosantoin, insektisida kuat dari spons Ulosa ruetzleri . J Org Chem. 1993; 58 : 335–
7. [ Google Cendekia ]
19. McLaughlin JL, Rogers LL. Penggunaan tes biologis untuk mengevaluasi
tumbuhan. Obat Inf J. 1999; 32 : 513. [ Google Cendekia ]
20. Middleton P, Stewart F, Al-Qahtani S, Egan P, O'Rourke C, Sarker SD, dkk. Antioksidan,
aktivitas antibakteri dan toksisitas umum dari Alnus glutinosa, Fraxinus semakin
tinggi dan rhoeas Papaver . Iran J Pharma Res. 2005; 2 : 81–6. [ Google Cendekia ]
21. Persoone G, Sorgeloos P, Roels O, Jaspers E, editor. Prosiding simposium internasional
tentang udang air garam Artemia salina ; 1979 20-23 Agustus; Texas, AS. Belgia: Universa
Press; 1980. Artemia udang air garam . [ Google Cendekia ]
22. Rieser MJ, Gu ZM, Fang XP, Zeng L, Wood KV, McLaughlin JL. Lima novel
acetogenins cincin mono-tetrahydrofuran dari biji Annona muricata . J Nat Prod. 1996; 59 :
100–8. [ PubMed ] [ Google Cendekia ]
Artikel-artikel dari Journal of Young Apoteker: JYP disediakan di sini atas izin Elsevier