Aktifitas Penyembuhan Luka Bakar dari Virgin Coconut Oil yang Dihidrolisis Jansen Silalahi *, Chemayanti Surbakti Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan Indonesia, 20155 Abstrak: Minyak kelapa murni (VCO) mengandung asam lemak rantai sedang terutama asam laurat, yang mudah diserap, memiliki potensi untuk mempercepat metabolisme sel, melembabkan luka dan memiliki aktivitas anti-inflamasi. Hidrolisis parsial VCO akan menghasilkan asam lemak bebas, monogliserida, dan digliserida. Kombinasi dari asam lemak bebas dan monogliserida terutama asam laurat dan monolaurin aktif sebagai antibakteri. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki efek dari sifat penyembuhan VCO terhidrolisis parsial pada luka bakar. VCO yang digunakan dalam penelitian ini adalah produk dari UD Sinar Nias. VCO dihidrolisis sebagian dengan larutan NaOH sebesar 35% dan 70% dari total nilai saponifikasi. Hasil hidrolisis diasamkan dengan HCl dan kemudian diekstraksi dengan heksana. Ekstrak heksana diuapkan dan residu yang diuapkan digunakan secara topikal pengobatan luka bakar yang diinduksi pada kelinci. Penelitian ini menggunakan 10 kelinci (1,5-2 kg) dibagi menjadi lima perlakuan kelompok (kontrol negatif, kontrol positif dengan Bioplacenton®, VCO 0%, 35% terhidrolisis VCO dan 70% VCO terhidrolisis). Luka bakar diinduksi dengan menempatkan pelat logam panas dengan diameter 2 cm. VCO dihidrolisis sebagai diuji bahan dioleskan ke luka setiap hari sebanyak 0,1 ml. Diameter luka diukur setiap hari, dan waktu dicatat sampai diameter luka yang disembuhkan adalah nol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa proses penyembuhan adalah yang tercepat ketika diobati dengan VCO terhidrolisis pada 70% (12 hari), diikuti oleh hidrolisis VCO sebesar 35% (15,5 hari), VCO 0% (17,3 hari), Bioplacenton ® (18,1 hari) dan waktu penyembuhan terpanjang adalah dengan kontrol yang tidak diobati / negatif (23,5 hari). Ada perbedaan signifikan pada tingkat penyembuhan luka bakar di antara setiap perawatan. Namun, tidak ada perbedaan yang signifikan antara keduanya kelompok kontrol positif (Bioplacenton®) dan VCO 0% (tanpa hidrolisis). Semakin tinggi levelnya hidrolisis VCO semakin efektif proses penyembuhan luka bakar. Kata kunci: Minyak kelapa murni, luka bakar, hidrolisis, aktivitas penyembuhan. Pengantar Luka bakar muncul sebagai jaringan yang rusak dan terluka yang disebabkan oleh pemanasan dengan bahan panas termasuk api, air panas, bahan kimia, listrik dan radiasi. Luka bakar menyebabkan kulit rusak dan terluka, dan dapat mempengaruhi seluruh tubuh. Prinsip perawatan luka bakar termasuk menutup luka sesegera mungkin, mencegah infeksi, mengurangi rasa sakit, mencegah trauma mekanis pada kulit dan unsur-unsur di dalamnya, serta untuk membatasi pembentukan jaringan parut. Proses penyembuhan luka bakar dibagi menjadi tiga fase, yaitu fase inflamasi, proliferasi, dan terminasi. Pada fase awal peradangan, regenerasi jaringan dan pembentukan jaringan parut dimulai dengan reaksi inflamasi (radang). Salah satu dosis farmasi bentuk yang digunakan untuk perawatan luka bakar adalah Bioplacenton® dalam bentuk gel yang mengandung ekstrak bovine placenta, antibiotik neomisin dan air. Virgin coconut oil, (VCO), bila digunakan secara topikal, dapat berfungsi sebagai pelindung pada kulit dan mencegahnya infeksi, melindungi kulit dari radikal bebas, dan melembabkan kulit. VCO mengandung fitosterol yang bisa bermanfaat sebagai antiinflamasi. Minyak kelapa sebagai trigliserida tidak memiliki aktivitas antimikroba dan antivirus, tetapi ketika VCO dihidrolisis sebagian, itu akan menghasilkan asam lemak bebas dan monogliserida. Kombinasi dari asam lemak bebas dan monogliserida terbukti sebagai agen antibakteri dan antivirus di mana tidak ada pada digliserda. Di antara asam lemak dan monogliserida, asam laurat dan monolaurin (monogliserida asam laurat) adalah yang paling aktif sebagai antibakteri dan antivirus melalui beberapa mekanisme termasuk dengan mencairkan dan merusak struktur lapisan lipid dalam virus dan membran sel bakteri. Penggunaan minyak kelapa murni (tanpa hidrolisis) secara topikal mempersingkat waktu pemulihan sebanding dengan Bioplacenton dalam pengobatan luka bakar kimia. Minyak kelapa yang tidak terhidrolisis aktif sebagai antibakteri, tetapi sebagian terhidrolisis aktif. Semakin tinggi tingkat hidrolisis minyak kelapa, semakin besar penghambatannya aktivitas melawan patogen, tetapi kurang aktif pada bakteri probiotik. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan efektifitas minyak kelapa murni yang terhidrolisis sebagian dalam penyembuhan luka bakar pada kelinci sebagai hewan percobaan. Material dan metode Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini termasuk keseimbangan analitik, pelat panas, pendingin tegak, buret, bak air, oven, termometer, plat logam dengan diameter 2 cm, kaliper, gunting, pisau cukur, kamera dan gelas yang diperlukan. Semua bahan kimia yang digunakan adalah produk kelas analisis pro dari E.Merc (Jerman) termasuk natrium hidroksida, kalium hidroksida, etanol, asam klorida, n-heksana, natrium sulfat, kalium biftalat, metil merah, alkohol. Sampel yang digunakan adalah VCO yang diproduksi oleh UD Sinar Nias. Reagen yang digunakan termasuk 0,5N HCl, etanol NaOH 0,5N, KOH 0,1N, larutan metil merah dan fenolftalein sebagai indikator. Prosedur Hidrolisis Minyak Kelapa Murni Nilai saponifikasi ditentukan menggunakan alkaline NaOH. Lima (5) gram minyak ditransfer ke 250 ml labu bulat, ditambahkan 50 ml NaOH etanol 0,5 N, labu dihubungkan dengan kondensor refluks dan dipanaskan. Saat metanol mendidih, labu sesekali dikocok hingga lemaknya terhidrolisis sepenuhnya (sekitar 3 jam). Solusinya dibiarkan dingin dan ditambahkan 1 ml larutan indikator fenolftalein kemudian dititrasi dengan 0,5 N HCl sampai warna merah muda menghilang. Prosedur ini diulangi pada jumlah yang sama etanol NaOH tanpa sampel minyak pada saat yang sama dan pada kondisi yang sama dengan penentuan / tes kosong. Itu jumlah NaOH untuk disabunkan (saponifikasi total) minyak dihitung yang disebut sebagai nilai saponifikasi menggunakan NaOH. Nilai saponifikasi (mg NaOH / g) = (V1-V2) ml x N x 40 W V1 = Volume HCl yang digunakan dalam tes kosong; V2 = Volume HCl yang digunakan dalam tes; N = normalitas oh HCl; W = Berat VCO (g); Hidrolisis parsial minyak dilakukan seperti yang dijelaskan di atas tetapi jumlah NaOH yang digunakan di bawah ini (35% dan 70%) dari yang digunakan untuk penyabunan total. Lima puluh (50) gram minyak ditimbang kemudian ditambahkan etanol NaOH sebesar 35% dan 70% dari total nilai saponifikasi. Setelah hidrolisis, campuran diasamkan dengan HCl encer untuk mengubah sabun (garam natrium dari asam lemak) menjadi asam lemak bebas. Diasamkan campuran kemudian dikocok dan diekstraksi dengan 50 ml n-heksana menghasilkan dua lapisan saparate, dan lapisan atas, fraksi heksana yang kemudian dipisahkan sebagai fraksi 1. Ekstraksi diulangi pada lapisan bawah untuk mendapatkan Fraksi 2. dua fraksi digabungkan dan dikeringkan dengan penambahan 50 gram anhidrat Na2SO4, diamkan selama 15 menit. Fraksi heksana yang terdehidrasi (minyak terhidrolisis) kemudian dikeringkan pada bak air untuk menguapkan heksana. Nilai asam dari minyak terhidrolisis sebagian kering ditentukan. Penentuan Nilai Asam Minyak Kelapa Murni Hidrolisa Nilai asam ditentukan baik untuk minyak yang tidak terhidrolisis dan terhidrolisis sebagian. Lima (5) g minyak adalah ditimbang dan dipindahkan ke dalam labu erlenmeyer 200 ml, ditambahkan 25 ml etanol dinetralkan 95%, kemudian dipanaskan selama sepuluh menit di bak air dan sesekali terguncang. Larutan ini kemudian dititrasi dengan 0,1 N KOH solusi menggunakan larutan fenolftalein sebagai indikator; titrasi berhenti ketika warna merah muda muncul. Asam nilai dihitung: Nilai Asam = A x N x 56,1 G catatan: A: Total volume ml KOH yang digunakan untuk titrasi N: Normalitas solusi KOH G: berat minyak terhidrolisis (gram) Aktifitas Penyembuhan Luka Bakar dari Minyak Kelapa Murni Hidrolisat Pengelompokan Hewan Hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini adalah sepuluh (10) kelinci (berat 1,5-2 kg), diaklimatisasi untuk 5 hari di kandang dan memberi mereka makan setiap hari. Hewan diizinkan untuk mendapatkan akses gratis ke air dan diet standar hingga akhir periode percobaan dan dibagi menjadi lima kelompok. Kelompok I: kelompok kontrol negatif (tidak ada pengobatan) Kelompok II: kelompok kontrol positif yang diobati dengan Bioplacenton® Kelompok III: kelompok uji kelinci yang diobati dengan VCO yang tidak terhidrolisis (0%) Kelompok IV: kelompok uji kelinci yang diobati dengan VCO terhidrolisis (35%) Kelompok V: kelompok uji kelinci yang diobati dengan VCO yang tidak terhidrolisis (70%) Induksi Luka Bakar Kelinci dibersihkan dan dicukur di bagian belakang di sisi kanan dan kiri. Kemudian dibius di samping yang telah dicukur. Luka bakar pada area yang dicukur diinduksi dengan memasang pelat baja panas (berdiameter 2 cm) yang telah dipanaskan dalam air mendidih pada suhu 100 0 C selama 10 menit. Pelat logam panas dipasang ke area dicukur di belakang kelinci selama 10 detik dan kemudian didiamkan selama 30 menit sebelum pengobatan. Penerapan VCO pada Luka Bakar Segera setelah induksi luka bakar, diameter awal luka diukur dan diberikan sesuai kelompok perawatan satu kali sehari. Kelompok I pergi tanpa pengobatan, kelompok II diolesi Bioplacenton® 0,1 ml dan kelompok III, IV, V diolesi dengan VCO yang tidak terhidrolisa 0,1 ml; kelompok IV dengan hidrolisis 35%, dan kelompok V dengan hidrolisis 75% masing-masing. Aplikasi topikal pada luka dilakukan, dan diameter luka diukur setiap hari sampai luka sembuh. Luka bakar dinyatakan sembuh jika diameternya nol (Bakar sudah hilang). Pengukuran Diameter Luka Bakar Diameter luka bakar yang diinduksi diukur dengan menggunakan caliper. Cara mengukur diameter luka bakar dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Diameter diukur empat kali lipat dari yang seharusnya terlihat pada Gambar 1, maka rata-rata dari empat pengukuran dihitung. Gambar 1. Metode pengukuran diameter luka bakar Diameter diukur empat kali seperti yang dapat dilihat pada Gambar 1, kemudian rata-rata dari empat pengukuran dihitung: dx = d1 + d2 + d3 + d4 4 Catatan: dx adalah diameter luka pada hari x; d1 = diameter 1; d2 = diameter 2 dll. Hasil dan Diskusi Nilai Asam dari Minyak Kelapa Murni yang Dihidrolisis Nilai asam dinyatakan sebagai jumlah miligram KOH yang digunakan untuk menetralkan asam lemak bebas terkandung dalam 1 gram minyak atau lemak. 11 (Ketaren, 2005). Hidrolisis parsial VCO kemudian menghasilkan asam lemak bebas Nilai asam ditentukan untuk mengukur jumlah asam lemak bebas yang terkandung dalam minyak atau lemak. Berat dan asam nilai minyak terhidrolisis ditunjukkan pada Tabel 1. Tabel.1 Berat dan Nilai Asam Minyak Kelapa Murni Hidrolisa Catatan: * ) nilainya adalah rata-rata dari tiga ulangan Tabel.1 di atas menunjukkan peningkatan nilai asam dengan meningkatnya jumlah NaOH yang digunakan dalam hidrolisis melalui proses saponifikasi. Nilai asam dari minyak dihidrolisis dengan tingkat saponifikasi 70% menunjukkan nilai asam yang lebih tinggi daripada saponofikasi pada level 35%. Saponifikasi adalah hidrolisis proses, di mana asam lemak bebas akan dipisahkan dari minyak (molekul trigliserida) dalam bentuk sabun (garam alkali dari asam lemak) dan gliserol. Saponifikasi lengkap (hidrolisis total) dicapai jika bersifat basa hidroksida digunakan dalam jumlah berlebih di atas nilai saponifikasi. Tetapi jika jumlah alkali yang digunakan lebih rendah dari nilai saponifikasi (saponifikasi parsial) maka tidak semua trigliserida sepenuhnya disabunkan (dihidrolisis). Dalam penelitian ini, pemisahan asam lemak dari trigliserida dengan adanya alkali secara parsial hidrolisis; hasilnya tidak mudah untuk diukur karena hidrolisis dapat terjadi secara acak di posisi apa pun (sn-1,2,3) dalam molekul trigliserida. Hasil yang diperoleh dengan reaksi saponifikasi parsial dapat berupa asam lemak bebas, monogliserida, digliserida, atau bahkan beberapa jumlah masih tetap sebagai trigliserida karena jumlah yang tidak mencukupi alkali untuk sepenuhnya menyabuni semua trigliserida, dan disebut hidrolisis parsial. 8 Hidrolisis pada level 70%, jumlah asam lemak sebagai asam lemak bebas sekitar 70%, dan sisanya (30%) masih melekat pada gliserol Molekul sebagian besar sebagai monogliserida. Sebaliknya, dalam VCO dihidrolisis dengan saponifikasi pada level 35% hanya mengandung 35% ada yang gratis asam lemak, dan sisanya (65%) masih melekat sebagai molekul gliserida sebagian besar sebagai digliserida, dan jumlah kecil bisa sebagai monogliserida dan mungkin sebagai triasilgliserol atau trigliserida. Efek Penyembuhan Minyak Kelapa Murni Terhadap Luka Bakar Membakar Waktu Penyembuhan Luka Luka bakar terinduksi yang dibuat pada hewan percobaan dapat diklasifikasikan sebagai luka bakar derajat dua (diameter 2 cm) ditunjukkan oleh kerusakan mencapai kedalaman dermis tetapi masih ada epitel sehat yang tersisa elemen. Perubahan diameter luka bakar diukur sampai luka sembuh dinyatakan (diameter luka = 0) untuk setiap perawatan. Profil fisik proses penyembuhan luka bakar selama periode percobaan dapat dilihat di Gambar 2. Perubahan diameter luka bakar pada semua kelompok yang ditunjukkan pada Gambar.3 dan 4. Perubahan diameter luka bakar diukur sampai pemulihan luka dinyatakan (diameter luka = 0) untuk setiap perawatan. Dari Gambar 3 dan 4 dapat dilihat bahwa proses penyembuhan pada kelompok kontrol negatif adalah ditemukan menghabiskan waktu paling lama untuk penyembuhan (23 hari) ditunjukkan ketika diameter = 0. Waktu penyembuhan dalam kelompok kontrol positif (Bioplacenton®) adalah 18 hari yang sebanding dengan waktu penyembuhan (17 hari) diperlakukan dengan tingkat hidrolisis VCO pada 0% (tidak terhidrolisis).
