Genetika A Rekombinasi
advertisement
Matakuliah Genetika (BIO612206) Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Lampung REKOMBINASI Priyambodo, M.Sc. staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] KLONING GEN MELALUI REKOMBINAN DNA Rekombinan DNA merupakan gabungan materi DNA dari sumber materi genetik yang berbeda. Teknik rekombinan DNA merupakan dasar dari teknologi rekayasa genetik atau manipulasi genetik. Teknik rekombinan DNA juga menjadi dasar untuk analisa genetika molekular, antara lain untuk mengkarakterisasi gen, promoter. Prinsip dari teknik rekombinan DNA yakni adanya DNA yang berperan sebagai pembawa atau vektor (misal:plasmid, fagmid, yeast artificial chromosome/YAC) dan fragmen DNA yang akan disisipkan. Perkembangan teknologi rekombinan DNA sudah sangat pesat, sudah banyak produk yang dihasilkan maupun pemahaman tentang proses biologi molekular yang menggunakan bantuan teknik rekombinan DNA. staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] 5 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] Prinsip dasar dari teknik rekombinan DNA 6 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] Pemotongan dan penyambungan DNA pada teknik rekombinan DNA 7 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] Salah satu teknik membuat konstruksi DNA rekombinan yakni menggunakan plasmid alami dengan menggantikan gen X (kecuali bagian promoternya/arsir kuning) dengan gen Cat (chloramphenicol acetyltransferase). Ekspresi dari gen Cat dapat diuji dari aktivitas Cat yang menghasilkan produk berupa CAM (chloramphenicol). 8 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] 9 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] Enzim Endonuklease Restriksi (Enzim Restriksi) • Endonuklease restriksi mengkatalisis pemotongan DNA pada daerah tertentu yang mempunyai urutan nukleotida yang spesifik. • Urutan nukleotida pada DNA yang dapat dibaca sama dari kiri ke kanan atau sebaliknya disebut urutan palindromik, misalnya urutan 5’ AAGC 3’ akan terbaca sama dengan 3’ CGAA 5’. • Enzim restriksi akan mengenali daerah palindromik dan memutus ikatan fosfodiester dari rantai DNA. • Endonuklease restriksi memiliki banyak jenis dan masingmasingmemilikiurutan palindromik yang khas. 10 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] 11 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected] Konstruksi plasmid vektor pBR322. 12 staff.unila.ac.id/priyambodo [email protected]
