Sabun Cuci Tangan Cair - sipus | fmipa unpak
advertisement
OPTIMASI PENAMBAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN KEMANGI SEBAGAI PENGGANTI TRICLOSAN DALAM MENGHAMBAT Staphylococcus aureus dan Eschericia coli PADA PRODUK SABUN CUCI TANGAN CAIR SKRIPSI Reza Kristiyana 062109001 PROGRAM STUDI KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS PAKUAN BOGOR 2013 KATA PENGANTAR Segala puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah S.W.T atas segala nikmat dan karunia yang diberikan sehingga penelitian ini diselesaikan. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kimia Universitas Pakuan dan bekerjasama dengan jasa analisa pada bulan Desember 2012 – Febuari 2013. Tidak lupa dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya pada segala pihak yang secara langsung maupun tidak langsung telah membantu dalam penyusunan skripsi ini, kepada : 1. Ibu Dr. Prasetyorini, M.S selaku Dekan FMIPA Universitas Pakuan Bogor 2. Bapak Drs. Husain Nashrianto, M.Si selaku Ketua Jurusan Program studi kimia FMIPA Universitas Pakuan Bogor dan selaku Pembimbing 1 yang telah memberikan arahan serta bimbingan selama melakukan penelitian dan penyusunan skripsi ini 3. Ibu Ade Heri, M.Si selaku Sekretaris Jurusan Program studi kimia FMIPA Universitas Pakuan Bogor 4. Ibu Dra. Tri Aminingsih, M.Si selaku pembimbing 2 yang telah memberikan arahan serta bimbingan selama melakukan penelitian dan penyusunan skripsi ini 5. Ibu Dra. Alwiyah Bagir selaku Direktur SMA Lazuardi Global Islamic School tempat penulis bekerja, Drs. Agus Purwanto, M.Pd selaku kepala sekolah SMA Lazuardi yang telah memberikan banyak dukungan dan saran dalam penyusunan skripsi ini 6. Kedua orang tua, adik, keluarga dan kerabat yang memberikan dukungan, motivasi dan doa kepada penulis 7. Seluruh rekan-rekan mahasiswa/i FMIPA Universitas Pakuan khususnya ekstensi 2009 atas segala dukungannya 8. Seluruh pihak yang namanya tidak dapat disebutkan Tidak ada gading yang tidak retak, sehingga penulis menyadari kemungkinan bahwa adanya kekurangan bahkan kesalahan dalam peelitian dan penulisan skripsi ini. Oleh karena itu penulis dengan bangga akan menerima masukan dan koreksi dari seluruh pembaca sehingga skripsi ini dapat dijadikan referensi untuk penelitian selanjutnya. Bogor, Maret 2013 Penulis i RINGKASAN Reza Kristiyana-062109001-OPTIMASI PENAMBAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN KEMANGI SEBAGAI PENGGANTI TRICLOSAN DALAM MENGHAMBAT Staphylococus aureus dan Eschericia coli PADA PRODUK SABUN CUCI TANGAN CAIR Pembimbing 1 : Drs. Husain Nashrianto, M.Si Pembimbing 2 : Dra. Tri Aminingsih, M.Si Triclosan merupakan zat aktif antibakteri yang sudah umum digunakan pada produk obat luka luar, sabun mandi cair hingga sabun cuci tangan cair. Komposisi triclosan yang kurang dari 1% pada produk tersebut membuat triclosan masih digunakan dalam dunia industri. Pada tahun 2010, Food and Drug Administration (FDA) menyatakan bahwa triclosan diduga dapat merusak organ reproduksi, menurunkan kualitas sperma, serta produksi hormon seks. Daun kemangi merupakan tanaman yang memiliki kandungan metabolit sekunder yang bersifat antibakteri, sehingga dalam penelitian ini dilakukan optimasi penambahan ekstrak etanol daun kemangi sebagai pengganti triclosan dalam menghambat Staphylococus aureus dan Eschericia coli pada produk sabun cuci tangan cair. Daun kemangi dikeringkan, dihaluskan lalu diekstraksi secara maserasi dengan pelarut etanol 70%. Pelarut etanol dipisahkan dari ekstrak daun kemangi dengan rotary evaporator lalu dijadikan serbuk kering dengan metode freeze drying. Serbuk kering ekstrak etanol daun kemangi diuji fitokimia untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder. Serbuk kering ekstrak etanol daun kemangi dijadikan bahan aktif pada produk sabun cuci tangan cair dengan triclosan sebagai standar pembanding. Variasi konsentrasi bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi yaitu 0%; 0,3%; 1%; 3%; 5%; 10%; 30%; 50%. Uji daya hambat antibakteri terhadap Staphylococus aureus dan Eschericia coli dilakukan dengan metode difusi menggunakan kertas cakram dan diukur panjang daya hambat (zona bening) yang terbentuk. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun kemangi mengandung flavonoid, alkaloid, saponin, tanin dan triterpenoid. Sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi 0%; 0,3%; 1%; 3%; 5%; 10%; 30%; 50% memberikan panjang daya hambat terhadap Staphylococus aureus berturut-turut 0 mm; 7 mm; 8 mm; 10,07 mm; 10,33 mm; 11 mm; 14,33 mm; 15,33 mm sedangkan sabun cuci tangan dengan bahan aktif triclosan 0,3% memberikan panjang daya hambat sebesar 10 mm. Sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi 0%; 0,3%; 1%; 3%; 5%; 10%; 30%; 50% memberikan panjang daya hambat terhadap Eschericia coli berturut-turut 0 mm; 1 mm; 1,7 mm; 3 mm; 4 mm; 3,7 mm; 3,3 mm; 3,3 mm sedangkan sabun cuci tangan dengan bahan aktif triclosan 0,3% memberikan panjang daya hambat sebesar 3 mm. Hasil analisis sidik ragam menunjukkan bahwa perlakuan variasi konsentrasi memberikan pengaruh terhadap panjang daya hambat yang dihasilkan. Konsentrasi optimum ekstrak etanol daun kemangi sebagai pengganti triclosan dalam menghambat Staphylococus aureus dan Eschericia coli pada produk sabun cuci tangan cair yaitu pada konsentrasi 3%. Kata Kunci : antibakteri, ekstrak etanol daun kemangi, Eschericia coli, Staphylococus aureus, triclosan ii DAFTAR ISI HALAMAN KATA PENGANTAR ............................................................................................ i RINGKASAN ......................................................................................................... ii DAFTAR ISI ........................................................................................................... iii DAFTAR TABEL ................................................................................................... vi DAFTAR GAMBAR............................................................................................... vii DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................... viii BAB I. PENDAHULUAN ...................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang.......................................................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah..................................................................................... 2 1.3 Hipotesis................................................................................................... 3 1.4 Tujuan Penelitian...................................................................................... 3 1.5 Manfaat Penelitian .................................................................................. 3 BAB II.TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................. 4 2.1 Ekstraksi .................................................................................................. 4 2.1.1 Pembuatan Ekstrak .......................................................................... 4 2.1.2 Metode Ekstraksi .............................................................................. 5 2.1.3 Wujud Ekstrak ................................................................................. 6 2.2 Fitokimia .................................................................................................. 7 2.2.1 Alkaloid .......................................................................................... 7 2.2.2 Flavonoid ........................................................................................ 8 2.2.3 Tanin ............................................................................................... 9 2.2.4 Saponin ......................................................................................... 9 2.2.5 Triterpenoid ................................................................................. 10 2.3 Kemangi ....................................................... .......................................... iii 11 2.4 Sabun ..................................................................................................... 13 2.5 Surfaktan ............................................................................................... 15 2.6 Sabun Cuci Tangan .............................................................................. 16 2.7 Triclosan .............................................................................................. 22 2.6 Antibakteri ............................................................................................ 23 2.6.1 Cara Kerja Antibakteri ................................................................ 24 2.6.2 Mekanisme Kerja Antibakteri ..................................................... 25 2.6.3 Aktifitas Kerja Antibakteri .......................................................... 25 2.7 Bakteri ................................................................................................... 26 2.7.1 Bentuk Bakteri ............................................................................ 26 2.7.2 Bakteri Uji ................................................................................... 27 2.7.2.1 Staphylococcus aureus ......................................................... 27 2.7.2.2 Eschericia coli ...................................................................... 28 2.8 Pengujian Antibakteri ............................................................................ 29 BAB III Metode Penelitian .................................................................................... 32 3.1 Waktu dan tempat penelitian.................................................................. 32 3.2 Bahan dan Alat ....................................................................................... 32 3.3 Metode Penelitian ................................................................................... 32 3.3.1 Persiapan Simplisia ...................................................................... 32 3.3.2 Ekstraksi Contoh........................................................................... 32 3.3.3 Uji Fitokimia ............................................................................... 33 3.3.4 Pembuatan Sabun Cuci Tangan ................................................... 34 3.3.5 Preparasi Uji Daya Hambat Antibakteri ....................................... 34 3.3.5.1 Pembuatan Larutan Fisiologis 0,9% ..................................... 34 3.3.5.2 Pembuatan Larutan Std Mc Farland 3 .................................. 34 3.3.5.3 Pembuatan Media MRSA ..................................................... 34 3.3.5.4 Pembuatan Media VRBA .. .................................................. 35 iv 3.3.5.5 Pembuatan Media PCA ....................................................... 35 3.3.5.6 Isolasi dan Inokulasi Bakteri S. aureus ................................ 35 3.3.5.7 Isolasi dan Inokulasi Bakteri E. coli .................................... 35 3.3.5.8 Pembuatan Media Agar Miring............................................ 36 3.3.5.9 Sterilisasi Alat dan Bahan .................................................... 36 3.3.6 Uji Daya Hambat Antibakteri Pada Produk Sabun Cuci Tangan.. 36 3.3.7 Analisis Konsentrasi Optimum Ekstrak Daun Kemangi ............. 37 BAB IV Hasil dan Pembahasan ............................................................................ 39 4.1 Hasil Kadar Air dan Rendemen Ekstrak Daun Kemangi....................... 39 4.2 Hasil Uji Fitokimia Daun Kemangi ...................................................... 40 4.3 Hasil Uji Daya Hambat Antibakteri Daun Kemangi .............................. 41 4.4 Optimasi Ekstrak Daun Kemangi Sebagai Antibakteri .......................... 43 BAB V Kesimpulan dan Saran ............................................................................. 46 5.1 Kesimpulan ............................................................................................. 46 5.2 Saran ....................................................................................................... 46 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 47 LAMPIRAN .......................................................................................................... 50 v DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1.Kandungan zat gizi dalam 100 gr kemangi................................................ 13 Tabel 2.Tabel perbedaan bakteri Gram Positif dan Gram negatif .......................... 29 Tabel 3. Tabel Kadar Air dan Rendemen Ekstrak Daun Kemangi ........................ 39 Tabel 4. Tabel Hasil Uji Fitokimia ........................................................................ 40 Tabel 5. Tabel Hasil Uji Daya Hambat Antibakteri ............................................... 42 Tabel 6. Tabel Perbandingan Sabun Sesuai SNI 06-4085-1996 ............................ 43 vi DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Rumus Struktur Indol............................................................................ 8 Gambar 2. Rumus Struktur Flavonoid..................................................................... 8 Gambar 3. Rumus Struktur Tanin ........................................................................... 9 Gambar 4. Unit Isoprena ......................................................................................... 10 Gambar 5. Daun Kemangi ...................................................................................... 11 Gambar 6. Reaksi Saponifikasi ............................................................................... 13 Gambar 7. Reaksi Netralisasi .................................................................................. 14 Gambar 8. Struktur Asam Miristat .......................................................................... 17 Gambar 9. Struktur Asam Laurat ............................................................................ 18 Gambar 10. Struktur Gliserol ................................................................................. 18 Gambar 11. Struktur Kimia Cocoamide DEA ....................................................... 19 Gambar 12. Struktur Tetrasodium-EDTA ............................................................... 20 Gambar 13. Struktur Triclosan ............................................................................... 22 Gambar 14. Struktur Bakteri .................................................................................. 26 Gambar 15. Bakteri Staphylococus aureus ............................................................ 27 Gambar 16. Bakteri Eschericia coli ...................................................................... 28 Gambar 17. Grafik Zona Hambat Triclosan dan Ekstrak Daun Kemangi ............ 43 vii DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Pembuatan Pereaksi ...................................................................... 50 Lampiran 2. Bagan Alir Penelitian .................................................................... 51 Lampiran 3. Ketentuan Penggunaan Triclosan Menurut BPOM ....................... 52 Lampiran 4. Pembuatan Larutan Mc Farland .................................................... 54 Lampiran 5. Pembuatan Sabun Cuci Tangan Cair ............................................ 55 Lampiran 6. Perhitungan Kadar Air dan Rendemen Daun Kemangi ................ 56 Lampiran 7. Hasil Analisa pH Sabun ................................................................. 57 Lampiran 8. Foto Uji Daya Hambat Terhadap Staphylococus aureus ............... 58 Lampiran 9. Foto Uji Daya Hambat Terhadap Eschericia coli ...........,............... 59 Lampiran 10. Foto Uji Fitokimia ......................................................................... 61 viii 1 BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar belakang Indonesia merupakan negara yang sangat kaya akan flora dan fauna, kekayaan alam Indonesia menjadi salah satu yang terbesar di dunia. Diantara kekayaan flora (tumbuh-tumbuhan) tersebut, banyak diantaranya yang termasuk kategori tanaman obat dan sudah dimanfaatkan oleh nenek moyang kita sejak dulu. Pemanfaatan tanaman untuk mengobati suatu penyakit sudah bukan menjadi rahasia. Ramuan tradisional termasuk jamu merupakan salah satu bukti pemanfaatan tanaman, selain itu banyak ramuan tradisional yang sudah dihasilkan dan dimanfaatkan. Menurut Pitojo 1996 dalam Fauzia 2007, tanaman obat tradisional yang terdapat di Indonesia sangat beragam, salah satunya yaitu kemangi (Ocimum sanctum L.). Tanaman kemangi di Indonesia dimanfaatkan untuk sayur atau lalap sebagai pemacu selera makan. Tanaman kemangi juga berkhasiat sebagai obat antara lain sebagai antikarsinogenik, antiseptik, antirematik, antistres dan antibakteri (Adolf, 2009). Daun kemangi memiliki banyak kandungan kimia antara lain saponin, flavonoid, tanin dan minyak atsiri (Mangoting et al., 2008 dalam Adolf, 2009). Kandungan paling utama pada kemangi yaitu minyak atsiri. Minyak atsiri dalam daun kemangi memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacilus cereus, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Streptococcus alfa dan Bacillus subtilis (Sudarsono et al., 2002 dalam Alysa, 2010). Antibakteri banyak digunakan pada beberapa produk obat luka luar, obat kumur mulut antibakteri, sabun mandi, sabun cuci tangan dan obat oral. Antibakteri yang terkandung pada produk-produk tersebut berfungsi sebagai zat aktif untuk menghambat hingga membunuh bakteri. Antibakteri yang umum terkandung pada obat luka, sabun mandi dan sabun cuci tangan adalah triclosan atau irgasan yang berperan dalam Staphylococcus aureus dan Eschericia coli. menghambat pertumbuhan bakteri 2 Staphylococcus aureus pada manusia terdapat di daerah kulit, hidung, mulut, dan usus besar. Pada keadaan normal, Staphylococcus aureus tidak bersifat patogen. Staphylococcus aureus merupakan salah satu bakteri penyebab infeksi. Dalam keadaan normal Staphylococcus aureus terdapat di saluran pernafasan atas, kulit, saluran pencernaan, dan vagina. Infeksi kulit Staphylococcus aureus termasuk penyakit infeksi yang paling sering, lebih dari 1,5 juta kasus furunkulosis terjadi di Amerika Serikat setiap tahun (Arin, 2009). Menurut Pelczar and Chan, 1998 dalam Fauzia 2007 menyatakan bahwa Staphylococcus aureus dan Escherichia coli merupakan bakteri patogen yang paling banyak menyerang manusia. Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif yang hidup sebagai saprofit di dalam saluran membran tubuh manusia, permukaan kulit, kelenjar keringat, dan saluran usus, sedangkan Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif yang banyak ditemukan dalam usus besar manusia sebagai flora normal. 1.2 Rumusan masalah Triclosan merupakan zat aktif antibakteri yang sudah umum digunakan pada produk obat luka luar, sabun mandi cair hingga sabun cuci tangan cair. Dengan komposisi triclosan yang kurang dari 1% pada produk tersebut membuat triclosan masih digunakan dalam dunia industri. Hanya dengan kandungan triclosan yang sedikit namun memberikan efek besar terhadap daya hambat bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli. Triclosan tidak hanya berkualitas dari segi daya hambat bakteri tapi juga ekonomis dari segi harga. Pada tahun 2010, Food and Drug Administration (FDA) menyatakan bahwa triclosan diduga dapat merusak organ reproduksi, menurunkan kualitas sperma, serta produksi hormon seks. Sehingga FDA menyimpulkan bahwa penggunaan triclosan tidak memberikan manfaat kesehatan pada sabun mandi atau cairan antibakteri pembersih tangan. Berdasarkan efek samping dari triclosan tersebut maka akan diteliti optimasi penambahan ekstrak etanol daun kemangi sebagai zat antibakteri pada sabun cuci tangan cair. 3 1.3 Hipotesis a. Daun kemangi memiliki potensi untuk menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli. b. Daun kemangi memiliki potensi yang sama dengan triclosan sebagai zat antibakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli pada sabun cuci tangan cair. 1.4 Tujuan penelitian Mengetahui konsentrasi optimum ekstrak etanol daun kemangi sebagai zat antibakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli pada sabun cuci tangan cair pengganti triclosan. 1.5 Manfaat penelitian Dari hasi penelitian ini diharapkan dapat memberi informasi ilmiah mengenai konsentrasi optimum ekstrak etanol daun kemangi pada produk sabun cuci tangan cair yang bermanfaat untuk aplikasi kehidupan masyarakat. 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Ekstraksi Ekstraksi adalah proses penarikan zat aktif yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut yang sesuai. Pemilihan pelarut dan metode ekstraksi yang tepat dapat ditentukan sesuai dengan komposisi kandungan contoh. Ekstraksi dipengaruhi oleh tingkat kehalusan contoh, ekstraksi tidak akan sempurna jika contoh dicelupkan dalam pelarut dalam bentuk contoh yang masih utuh (Anggra, 2011). Menurut Departemen Kesehatan, pada ekstraksi, tahap pemisahan dan pemurnian dimaksudkan untuk memisahkan senyawa yang tidak dikehendaki semaksimal mungkin, tanpa berpengaruh pada senyawa kandungan yang dikehendaki, sehingga diperoleh ekstrak yang lebih murni. Sedangkan tahap pemekatan dan penguapan (vaporasi dan evaporasi) merupakan peningkatan jumlah partikel atau senyawa terlarut dengan cara menguapkan pelarut tanpa sampai menjadi kondisi kering, ekstrak hanya menjadi pekat atau kental. Hasil dari proses ekstraksi disebut ekstrak. Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani dengan menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi syarat yang telah ditetapkan. 2.1.1 Pembuatan Ekstrak Tahapan dalam proses pembuatan ekstrak menurut Depkes RI yaitu sebagai berikut : a. Pembuatan serbuk simplisia Semakin halus serbuk simplisia proses ekstraksi maka akan semakin efektif dan efisien. 5 b. Pemilihan cairan pelarut Faktor utama untuk pertimbangan pada pemilihan cairan pelarut adalah selektivitas, kemudahan proses dan bekerja dengan cairan tersebut, ekonomis, ramah lingkungan dan keamanan. c. Pemisahan dan pemurnian Tujuan dari pemisahan dan pemurnian adalah menghilangkan atau memisahkan senyawa yang tidak dikehendaki semaksimal mungkin tanpa berpengaruh pada senyawa kandungan yang dikehendaki, sehingga diperoleh ekstrak yang lebih murni. 2.1.2 Metode Ekstraksi Berdasarkan temperatur yang digunakan, metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut dibagi menjadi dua kelompok besar, yaitu: 2.1.2.1 Cara Dingin a. Maserasi Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada suhu ruangan (kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan terus-menerus. Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama, dan seterusnya. b. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang selalu baru sampai sempurna yang umumnya dilakukan pada suhu ruangan. 6 2.1.2.2 Cara Panas a. Reflux Reflux adalah ekstraksi dengan pelarut pada titik didihnya, selama waktu tertentu, dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. b. Soxhlet Soxhlet adalah ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang selalu baru, umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi terus menerus dengan jumlah pelarut yang relatif konstan dengan adanya pendingin terbalik. c. Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan terus menerus) pada suhu yang lebih tinggi dari suhu kamar. Umumnya kelarutan zat aktif meningkat jika suhu dinaikan. d. Infus Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air dengan suhu penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, suhu terukur 96-98oC) selama waktu tertentu (15-20 menit) e. Dekok Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (lebih dari 20 menit) dan suhu sampai pada titik didih air. 2.1.3 Wujud Ekstrak Pembagian ekstrak menurut wujud ekstrak yaitu : a. Ekstrak Kental Sediaan berupa massa setengah padat atau kental yang diperoleh cara evaporasi terhadap hampir semua pelarut yang digunakan. b. Ekstrak Kering Sediaan ini berbentuk padat yang diperoleh dengan cara evaporasi terhadap semua pelarut yang digunakan. 7 c. Ekstrak cair Sediaan berupa cair yang diperoleh dengan cara penarikan kandungan kimia dalam suatu simplisia. 2.2 Fitokimia Fitokimia adalah cabang ilmu kimia organik yang berada diantara kimia organik bahan alam dan biokimia tumbuhan. Ilmu ini mempelajari keanekaragaman senyawa organik yang dihasilkan oleh tumbuhan yaitu struktur kimia dan biosintesis (Harborne, 1987). Pengetahuan tentang fitokimia suatu tumbuhan sangat diperlukan sebelum melakukan suatu proses pemisahan, pemurnian dan identifikasi suatu senyawa yang terdapat dalam tumbuhan tersebut. Beberapa contoh senyawa yang diuji fitokimia yaitu flavonoid, triterpenoid, alkaloid, saponin dan tanin. Tumbuhan mengandung bermacam-macam senyawa organik yang melimpah dan sebagian besar dari senyawa itu tidak tampak secara langsung dalam pertumbuhan dan perkembangan tumbuhan tersebut. Zat-zat kimia ini secara sederhana disebut sebagai metabolit sekunder. Metabolit sekunder merupakan senyawa dengan bobot molekul yang rendah dan tidak berperan utama dalam metabolisme tanaman namun merupakan bahan aktif dari tanaman obat (Erik and Michael, 2004). Menurut Croteau et al, (2004) dalam Pacific Journal (2009), metabolit sekunder dikenal sebagai metabolisme alamiah, hasil dari metabolit sekunder biasanya tidak untuk semua sel secara keseluruhan tapi hanya untuk beberapa sel tertentu. Hasil dari metabolit sekunder lebih kompleks dibanding metabolit primer. Berdasarkan asal biosintesisnya, metabolit sekunder dibagi menjadi 3 kelompok besar, yakni terpenoid (triterpenoid, saponin dan steroid), alkaloid, dan senyawa fenol (flavonoid dan tanin). 8 2.2.1 Alkaloid Alkaloid pada umumnya mencangkup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan sebagai bagian dari sistem siklik. Alkaloid merupakan turunan yang paling umum dari asam amino. Secara kimia alkaloid merupakan suatu golongan heterogen. Secara fisik, alkaloid dipisahkan dari kandungan tumbuhan lainnya sebagai garam dan sering diisolasi sebagai kristal hidroklorida (Harborne, 1987). Gambar 1. Salah Satu Rumus Struktur Alkaloid yaitu Indol 2.2.2 Flavonoid Flavonoid merupakan senyawa yang mengandung C15 terdiri atas dua inti fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon. Senyawa ini dapat diekstraksi dengan etanol 70% dan tetap ada dalam lapisan air setelah ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa senyawa fenol, oleh karena itu warnanya berubah apabila ditambah basa atau amoniak (Harborne, 1987). Flavonoid pada tumbuhan berfungsi dalam pengaturan fotosintesis, antimikroba dan antivirus, dan kerja terhadap serangga (Robinson, 1995). Gambar 2. Rumus Struktur Flavonoid 9 2.2.3 Tanin Tanin merupakan senyawa metabolit sekunder yang diketahui memiliki beberapa khasiat, yaitu sebagai antibakteri, antidiare dan antioksidan. Tanin tersebar luas dalam tumbuhan berpembuluh, pada angiospermae terdapat khusus dalam jaringan kayu dan merupakan komponen zat organik yang sangat kompleks, terdiri dari senyawa fenol yang sukar dipisahkan dan bersifat mudah teroksidasi. Tanin merupakan senyawa fenolik yang larut dalam air dengan bobot molekul 500- 3000 sehingga dapat mengendapkan protein dari larutan. Tanin disebut juga asam tanat dan asam galotanat yang tidak berwarna, berwarna kuning, hingga berwarna coklat. Terbentuk dari 9 molekul asam galat dan molekul glukosa sehingga merupakan campuran polifenol. Tanin diklasifikasikan menjadi dua jenis, yaitu: a. Tanin hidrolisis ( hydrolizable tanin), yaitu tanin yang mudah dihidrolisis secara kimia atau enzimatis, umumnya terdapat di legume. Contohnya: asam galat dengan senyawa berikatan polihidrik akan teresterifikasi, contoh tanamannya yaitu Acasia spp. b. Tanin terkondensasi, terdapat pada biji tanaman terutama pada testa. Umumnya testa yang mengandung tanin berwarna gelap. Gambar 3. Rumus Struktur Tanin Terkondensasi 2.2.4 Saponin Saponin tersebar luas di kerajaan tanaman dan sekitar 70% dari semua tanaman menghasilkan saponin. Gymnospermae diduga tidak mengandung saponin. Saponin yang bersifat larut dalam air disimpan dalam vakuola. Saat tanaman diserang oleh mikroba, saponin diubah menjadi glikosida spirostanol atau monodesmosides triterpen yang menunjukkan aktivitas membran untuk 10 melindungi tanaman, sehingga saponin memiliki fungsi sebagai antibakteri (Erik and Michael, 2004). Saponin merupakan senyawa aktif yang menimbulkan busa jika dikocok dalam air (Robinson, 1995). Pembentukan busa yang mantap sewaktu mengekstraksi tumbuhan atau memekatkan ekstrak tumbuhan merupakan bukti adanaya saponin. Saponin dapat meningkatkan permeabilitas sel bakteri sehingga dapat mengubah struktur dan fungsi membran, menyebabkan denaturasi protein sehingga membran sel akan rusak. 2.2.5 Triterpenoid Triterpenoid merupakan senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari 6 satuan iso prena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C-30 asiklik. Senyawa ini tidak berwarna, berbentuk kristal, titik leleh tinggi dan bersifat optis aktif (Harborne, 1987). Gambar 4. Unit Isoprena Terpenoid mewakili kelas produk tanaman. Kelompok utama meliputi monoterpen (dengan 10 atom karbon), seskuiterpen (15 atom karbon), diterpen (20 atom karbon). Terpen menunjukkan aktivitas antimikroba dan sitotoksik terhadap berbagai organisme mulai dari bakteri, jamur, serangga dan vertebrata. Sifat antibakteri menjelaskan distribusi yang luas dan pemanfaatan tanaman dengan minyak esensial sebagai obat antibakteri ringan untuk mengobati infeksi bakteri dan parasit dan gangguan pada saluran pernapasan (Erik and Michael, 2004) 11 2.3 Kemangi Tanaman kemangi cocok hidup ditanah subur, gembur dan cukup tersedia air. Namun demikian tanaman kemangi dapat tumbuh di tanah yang kurang subur. Sistem perakaran tanaman yang tumbuh menahun, jauh masuk kedalam tanah. Pada saat tanaman masih muda, tingkat kesuburan di lapisan tanah bagian atas sangat berpengaruh terhadap pertumbuhan kemangi (Ida, 2012). Kemangi juga ditemukan tumbuh liar di kebun, bahkan di bekas pembuangan sampah yang telah mengalami pelapukan sempurna. Tanaman kemangi cocok untuk dibudidayakan di daerah panas beriklim agak lembab. Kemangi dapat tumbuh baik didataran rendah, menyukai tempat terbuka dan mendapat sinar matahari (Pitojo, 1996 dalam Fauzia 2007) Gambar 5. Daun Kemangi Klasifikasi Kemangi Divisi : Spermatophyta Subdivisi : Angiospermae Kelas : Dikotil Ordo : Amaranthaceae Famili : Labiatae Genus : Ocimum Spesies : Ocimum basilicum L. 12 Tanaman kemangi memiliki harum khas menyegarkan serta bisa menghilangkan bau badan dan bau mulut. Lalap daun kemangi akan memberi dampak positif untuk tubuh, selain menghilangkan bau badan dan bau mulut, kemangi juga dapat menambah nafsu makan serta memperbaiki pencernaan (Sofyan, 2006). Daun kemangi banyak dijual dipasar dengan harga yang relatif murah, kemangi juga dapat tumbuh di halaman rumah kita. Manfaat daun kemangi antara lain untuk obat panu, obat diare, obat sariawan, menghilangkan bau mulut, mengurangi bau keringat dan sebagai antibakteri (Yohana and Yovita, 2012). Minyak atsiri pada daun kemangi tersusun atas senyawa-senyawa hidrokarbon, alkohol, ester, phenol (eugenol 1-19 %, iso-eugenol), eter phenolat (metil clavicol 3-31%, metil eugenol 1-9 %), oksida dan keton .Tumbuhan kemangi mengandung minyak atsiri seperti eugenol, sineol, dan methyl chavicol. Minyak atsiri mengandung campuran dari bahan hayati termasuk didalamnya aldehid, alkohol, ester, keton, dan terpen. Daun kemangi juga mengandung saponin, flavonoida dan polifenol (Pitojo1996 dalam Fauzia 2007). Aroma minyak kemangi hutan sangat bermanfaat untuk mengatasi kulit terbakar sinar matahari, sakit kepala, influenza, radang tenggorokan, telinga dan mata serta sakit perut. Minyak ini juga digunakan sebagai antibiotik (Agusta, 2000). Menurut catatan Departemen Kesehatan Republik Indonesia, kemangi mengandung gizi yang bermanfaat bagi kesehatan tubuh. Kandungan zat gizi yang terdapat dalam 100 gram bahan dari kemangi sebagai berikut: 13 Tabel 1. Kandungan zat gizi dalam 100 gram tanaman kemangi Kandungan Jumlah dalam 100 gram Kalori 46 kal Protein 4g Lemak 0,5 g Hidrat arang 8,9 mg Kalsium 45 mg Fosfor 75 mg Besi 2 mg Vitamin A 5000 mg Vitamin B1 0,08 mg Vitamin C 50 g Air 85 g Sumber : Pitojo, 1996 dalam Fauzia 2007 2.4 Sabun Sabun adalah bahan yang digunakan untuk mencuci dan mengemulsi, terdiri dari dua komponen utama yaitu asam lemak dengan rantai karbon C 16 dan sodium atau potasium (Ophardt, 2003 dalam Alvera 2012). Sabun merupakan sediaan pembersih kulit berbentuk cair yang dibuat dari bahan dasar sabun atau deterjen dengan penambahan bahan lain yang diijinkan tanpa menimbulkan iritasi pada kulit (SNI, 1996). Sabun yang dibuat dengan NaOH dikenal dengan sabun keras (hard soap), sedangkan sabun yang dibuat dengan KOH dikenal dengan sabun lunak (soft soap). Sabun dibuat dengan dua cara yaitu pertama proses saponifikasi dan proses netralisasi. Reaksi proses saponifikasi yaitu : Gambar 6. Reaksi Saponifikasi 14 Proses saponifikasi minyak akan memperoleh produk sampingan yaitu gliserol. Proses saponifikasi terjadi karena reaksi antara trigliserida dengan alkali (Ophardt, 2003 dalam Alvera 2012). Proses yang kedua yaitu proses netralisasi terjadi antara reaksi asam lemak bebas dengan alkali. Pada proses ini tidak menghasilkan gliserol, melainkan menghasilkan air. Reaksinya sebagai berikut : R-COOH + KOH (Asam Karboksilat) (Alkali) R-COO- K (Garam) + H2O (Air) Gambar 7. Reaksi netralisasi Sifat utama dari bahan dasar sabun harus dapat menurunkan tegangan permukaan. Bahan yang dapat menurunkan tegangan permukaan pada air secara efektif disebut surface active agents atau surfaktan. Surfaktan mempunyai fungsi penting dalam proses membersihkan, seperti menghilangkan bau dan membentuk emulsi, serta mengikat kotoran dalam bentuk suspensi sehingga kotoran tersebut dapat dibuang (Kamikaze, 2002). Minyak atau lemak atau asam lemak sangat cocok untuk produk surfaktan karena stuktur molekulnya yang sangat spesifik. Bagian ekor hidrokarbon akan memiliki afinitas terhadap alifatik hidrokarbon dan senyawa rantai panjang lainnya, sedangkan pada bagian lainnya yaitu gugus karboksil akan memiliki daya tarik terhadap air (Bailey, 1979). Pada sabun, gugus COO merupakan bagian yang polar yang bersifat larut dalam air (hidrofilik atau suka air), sedangkan gugus R yang merupakan rantai karbon yang panjang C 12 – C18 merupakan bagian yang non polar dan tidak larut dalam air (hidrofob atau lipofilik atau takut air), tapi gugus ini larut dalam pelarut non polar seperti minyak (Fessenden, 1982). Asam lemak akan memberikan sifat yang berbeda pada sabun yang terbentuk. Asam laurat pada sabun dapat menyebabkan sabun menjadi keras dan menghasilkan busa yang lembut, sama seperti asam miristat. Asam palmitat, selain dapat mengeraskan juga dapat menyebabkan busa menjadi 15 stabil. Berbeda dengan asam oleat dan linoleat, mereka berperan dalam melembabkan sabun pada saat sabun digunakan (Paul, 2007). 2.5 Surfaktan Surfaktan merupakan salah satu komponen penting dalam sediaan kosmetika terutama pada sabun. Surfaktan dapat meningkatkan stabilitas busa. Surfaktan dibagi menjadi 4 golongan, yaitu : 1. Surfaktan Anionik Surfaktan anionik banyak digunakan dalam produk kosmetika dan perawatan diri. Surfaktan ini berfungsi untuk meningkatkan penampilan busa. Surfaktan anionik memiliki sifat hidrofilik karena adanya gugus sulfat atau sulfonat. Sebagian besar surfaktan anionik dihasilkan dalam bentuk garam sodium maupun garam logam yang lain seperti ammonium dan garam amina yang lain. Contoh surfaktan anionik antara lain adalah Linier Alkil Benzen Sulfonat (LAS), Alkohol Sulfat (AS), Alkohol Eter Sulfat (AES), dan lain – lain. 2. Surfaktan Non Ionik Surfaktan non ionik mempunyai sifat pembentukan busa yang rendah. Surfaktan non ionik tidak mempunyai muatan pada molekulnya. Sifat hidrofilik disebabkan karena adanya sejumlah eter oksigen atau kelompok hidroksil. Kelompok terbesar surfaktan non ionik biasanya diproduksi melalui proses etoksilasi, seperti alcohol etoksilat, etoksilat alkifenol dan EO/PO block kopolimer. Surfaktan ini dapat berbentuk padat maupun cair tergantung dari struktur dan panjang rantai. 3. Surfaktan Kationik Tidak seperti surfaktan – surfaktan anionik atau amfoterik, surfaktan kationik jarang digunakan untuk aplikasi pembersih. Surfaktan kationik berperan sebagai pelembut kulit, atau conditioning agents pada rambut. Salah satu contoh surfaktan kationik adalah jenis monoalkil 16 kuartenar, yaitu setil trimetil ammonium klorida (CTMAC). Selain itu, surfaktan kationik juga terdiri dari jenis dialkil kuartener trialkil, kuartener benzyl, kuartener ester dan kuartener teretoksilasi. 4. Surfaktan Amfoterik Surfaktan amfoterik adalah surfaktan yang perannya berubah sebagai fungsi nilai pH dari formulasi dimana surfaktan digunakan. Surfaktan amfoterik biasanya dianggap sebagai surfaktan ringan. Surfaktan amfoterik membentuk senyawa kompleks dalam kombinasi dengan surfaktan anionik dan senyawa – senyawa kompleks ini bersifat lebih ringan dibanding surfaktan – surfaktan tersebut secara individu. Contoh dari surfaktan amfoterik adalah alkil betain, alkilamido betain, asilamfoglisinat, asilamfopropionat dan amin oksida. Amin oksida tidak bersifat anionik namun tergantung pH. Senyawa – senyawa amin oksida memang menunjukkan sifat kationik atau non ionik dan karenanya senyawa – senyawa ini mempunyai sifat yang sama. Amin oksida merupakan pembentuk busa yang sangat baik. Dalam kombinasi dengan senyawa anionik, sedikit amin oksida dapat berperan sebagai boster busa dan dapat meningkatkan struktur busa. Seperti betain, oksida amin merupakan pengental yang baik bagi surfaktan. 2.6 Sabun Cuci Tangan Sabun merupakan bahan yang dapat mengemulsi air/minyak. Membersihkan badan atau kulit merupakan cara paling mudah untuk menjaga kebersihan kulit. Penggunaan sabun cukup efektif untuk mengangkat kotoran yang menempel pada permukaan kulit, mulai dari kotoran yang larut dalam air atau larut dalam lemak (Fadilah, 2008). Sabun memiliki bahan aktif antibakteri sebagai bahan untuk menghambat sampai menghentikan pertumbuhan bakteri. Bahan aktif yang umum digunakan dalam sabun yaitu triclosan dan irgasan (Yoan, 2004). Sifat – sifat sabun yang dihasikan ditentukan oleh jumlah dan komposisi dari komponen asam - asam lemak yang digunakan yang sesuai dalam pembuatan sabun dibatasi panjang rantai dan tingkat kejenuhan. Pada 17 umumnya, panjang rantai yang kurang dari 12 atom karbon dihindari penggunaannya karena dapat membuat iritasi pada kulit, sebaliknya panjang rantai yang lebih dari 18 atom karbon membentuk sabun yang sangat sukar larut dan sulit menimbulkan busa. Pada sabun cair modern umumnya mengandung beberapa komponen, antara lain : 1. Bahan dasar Bahan dasar yang digunakan untuk sabun cair yaitu : a. Minyak kelapa Minyak kelapa merupakan salah satu jenis minyak nabati dengan kemampuan yang cukup penting dalam proses pembuatan sabun. Minyak kelapa diperoleh dari copra yang terdiri dari kelapa murni. Komponen dari minyak kelapa yaitu trigliserida C 12 (lauric) dan C 14 (myristic), komponen lainnya C6 (caproic), C 8 (caprilyc), dan C 10 (capric) (Syahrir, 2006). Asam laurat merupakan asam lemak dominan yang terdapat dalam minyak kelapa yaitu sebesar 48,2% dan berperan dalam pembentukan sabun dan pembusaan. b. Asam miristat (myristic acid) Asam miristat atau asam tetradekanoat adalah asam organik padat yang diperoleh dari minyak kelapa dan lemak lain. Asam miristat berbentuk hablur padat, keras, berwarna putih atau agak kekuningan dan dan agak mengkilap serta memiliki bobot molekul 228,38. Asam miristat dapat larut dalam etanol (95%) P, kloroform P, dan eter P serta praktis tidak larut dalam air (Kodeks Kosmetika Indonesia, 1993). Struktur kimia asam miristat tertera pada Gambar 8. Gambar 8. Struktur Asam Miristat (Myristic Acid) 18 c. Asam laurat (lauric acid) Asam laurat atau asam dodekanoat merupakan asam lemak jenuh berantai sedang yang memiliki rumus kimia C12H24O2. Asam laurat adalah asam organic padat yang diperoleh dari minyak kelapa atau lemak nabati lain. Asam laurat berbentuk hablur padat atau serbuk, berwarna putih agak kekuningan dan agak mengkilap serta memilki bobot molekul 200,32 (Kodeks Kosmetika Indonesia, 1993). Struktur kimia asam laurat tertera pada Gambar 9. Gambar 9. Struktur Asam Laurat (Lauric Acid) d. Kalium Hidroksida (KOH) Kalium hidroksida merupakan padatan berwarna putih yang bersifat korosif. Kalium hidroksida memiliki titik leleh sebesar 380°C serta memiliki pH (1% dalam air) sekitar 13. 2. Bahan tambahan a. Emolien Gambar 10. Struktur Gliserol atau Propanatriol 19 Salah satu bahan tambahan yang biasa digunakan pada sabun mandi cair sebagai emolien adalah gliserol. Gliserol biasa ditambahkan pada sabun mandi cair untuk mengatasi efek kering pada kulit yang ditimbulkan oleh surfaktan. Selain itu gliserol juga berfungsi untuk melembutkan dan menjaga kesehatan kulit. Gliserol memiliki nama lain gliserin atau 1,2,3-propanatriol dan memiliki rumus kimia C3H5(OH)3. Gliserol merupakan cairan kental tidak berwarna yang memiliki rasa manis dan sangat mudah larut dalam air dan alkohol. Struktur kimia gliserin atau gliserol atau propanotriol tertera pada Gambar 10. b. Pengental Penambahan pengental diperlukan untuk mendapatkan kekentalan yang diinginkan. Dalam formulasi suatu produk banyak faktor yang pemilihan surfaktan menentukan dan pengental kekentalan seperti (thickener). Jenis surfaktan yang dipakai pada sampel ini ada 2 jenis yaitu Sodium Lauryl Sulphate (SLS) dan Cocamide Diethanolamide (DEA). Sodium Lauryl Sulphate (SLS) merupakan surfaktan anionik yang paling banyak digunakan untuk produk kosmetika atau produk – produk perawatan diri. SLS memilki pH 7 – 9, mudah mengental dengan garam seperti NaCl dan menunjukkan kelarutan yang baik dalam garam. Pembentukkan busa (foaming) diperoleh dari kombinasi dua surfaktan yang saling mendukung (Jellinek, 1970). Gambar 11. Struktur Cocamide Diethanolamid 20 Cocamide DEA atau cocamide diethanolamid adalah salah satu jenis surfaktan yang berbentuk cairan dan berwarna bias kuning hingga kuning. Cocamide DEA memliki pH 1% dalam air antara 8 – 10. Cocamide DEA biasa digunakan untuk meningkatkan kekentalan pada produk. Struktur Cocamide DEA tertera pada Gambar 11. Selain diaplikasikan pada produk pangan, gelatin juga dapat diaplikasikan pada produk kosmetika sebagai bahan pengental terutama pada sabun yang berbentuk cair. Dalam formulasi sabun gelatin pun berfungsi sebagai pembentuk busa yang dapat menggantikan agen pembentuk busa lain atau digunakan secara bersamaan dengan agen pembentuk busa lain sehingga didapatkan busa yang melimpah (Boeck et all, 1991) c. Pengawet Pengawet ditambahkan ke dalam suatu produk untuk mencegah pencemaran oleh bakteri, jamur dan mikroba sehingga memperpanjang waktu aruh produk dan melindungi pemakai dari kemungkina terjadinya infeksi. Beberapa bahan pengawet yang biasa digunakan ialah : 1) Tetrasodium – EDTA (Na4EDTA) Tetrasodium – EDTA merupakan serbuk halus berwarna putih serta memiliki bau yang khas dan larut dengan mudah di dalam air. Struktur kimia Tetrasodium – EDTA tertera pada Gambar 12. Gambar 12. Struktur Tetrasodium – EDTA 21 2) Sodium Metabisulfit Sodium metabislufit atau nama lainnya Disodium disulfit (Na2S2O5) merupakan serbuk Kristal atau serbuk halus berwarna putih hingga kekuningan, mudah larut dalam air dan sedikit larut dalam alkohol. Sodium metabisulfit memiliki pH (1% dalam air) sekitar 4,3. 3) NaCl Natrium klorida merupakan serbuk kristal berwarna putih, serta sangat mudah larut dalam air dingin dan panas, larut dalam gliserol, dan sedikit larut dalam alkohol. d. Pelarut Pelarut merupakan larutan yang digunakan untuk melarutkan bahan-bahan yang digunakan untuk membuat sabun. Pelarut yang umum digunakan yaitu air, selain air juga terdapat beberapa pelarut seperti Poly etilen Glikol (PEG) dan Propilen Glikol (PG). Poly Etilen Glikol (PEG) merupakan pelarut yang digunakan untuk melarutkan bahan yang tidak dapat larut oleh air. Penggunaan PEG banyak digunakan di industri farmasi dan kosmetika. Propilen Glikol (PG) merupakan cairan jernih tidak berwarna, lengket, tidak berbau, rasa manis agak tajam menyerupai gliserin. Propilen Glikol dapat melarutkan air dan beberapa lemak, selain berfungsi sebagai pelarut juga berfungsi sebagai pengawet dan bahan penstabil. 22 2.7 Triclosan Triclosan merupakan salah satu antibakteri yang banyak digunakan karena efektif terhadap berbagai bakteri gram positif dan gram negatif, dapat ditoleransi dengan baik dan jarang menimbulkan reaksi alergi (Paul, 2007). Triclosan merupakan salah satu zat antibakteri yang banyak digunakan karena efektif menghambat hingga membunuh berbagai bakteri gram positif dan gram negatif. Triclosan banyak digunakan sebagai zat aktif antibakteri pada berbagai macam obat luka luar, sabun mandi hingga sabun cuci tangan. Dengan konsentrasi triclosan yang rendah mampu menghambat pertumbuhan bakteri dengan sangat baik (Alvera, 2012). Menurut Badan Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM), maksimal penggunaan triclosan dalam sediaan kosmetik yaitu 0,3 % yang terdapat pada lampiran 3. Gambar 13. Rumus Struktur Triclosan Setelah penelitian yang berkesinambungan, para ahli menyimpulkan bahwa triclosan tidak cukup baik bagi kesehatan manusia dalam jangka panjang. Bahayabahaya yang dapat ditimbulkan triclosan antara lain: a. Salah satu dari efek antibiotik yang dikenal lama di dunia kedokteran adalah bakteri menjadi kebal terhadap dosis antibiotik yang sama. Fenomena ini membuat bakteri menjadi bakteri super. Menurut penelitian FDA (Food & Drugs Administration, BPOM Amerika), triclosan merupakan salah satu dari penyebab terciptanya bakteri super tersebut. Zat anti-bakteri yang banyak ditemukan pada sabun ini juga dipakai pada pasta gigi, deterjen dan beberapa produk kesehatan lainnya. b. Penelitian yang dimuat dalam jurnal Edmonton menyebutkan bahwa triclosan akan merugikan kesehatan dalam jangka panjang. Selain membuat bakteri menjadi kebal seperti disebutkan pada uraian 23 sebelumnya, triclosan ternyata dapat mengganggu proses normal kerja hormon dengan menjadi racun tiroid. c. Sebuah penelitian yang lain menyebutkan bahwa triclosan memiliki sifat klorofenol. Hal ini membuat triclosan menjadi penyebab hadirnya kanker di tubuh manusia. Klorofenol maksudnya adalah bisa tersimpan di dalam lemak jika masuk ke dalam tubuh. d. Beberapa negara, salah satunya Canada telah melarang penggunaan triclosan pada produk yang beredar disana. Hal ini setelah ditemukannya suatu fakta bahwa triclosan juga menyebabkan pencemaran lingkungan dan memicu alergi. e. FDA juga mengeluarkan sebuah penelitian yang menyatakan bahwa triclosan yang terakumulasi dalam tubuh dapat mengakibatkan kelumpuhan, kemandulan dan lemahnya fungsi tubuh. Selain itu triclosan yang menumpuk dapat menyebabkan pendarahan otak, penurunan fungsi kelamin, masalah jantung bahkan hingga koma (Iwan, 2012) 2.6 Antibakteri Menurut Schunack., et al 1990, dalam Sunarti 2007, bahwa organisme dapat menyebabkan banyak bahaya dan penyakit. Ini terlihat dari kemampuan bakteri dalam menginfeksi manusia, hewan, serta tanaman, menimbulkan penyakit yang berkisar dari infeksi ringan sampai pada kematian. Mikroorganisme dapat disingkirkan, dihambat atau dibunuh secara fisik maupun kimia. Bahan antimikroba merupakan salah satu penghambatan mikroorganisme secara kimia yang mengganggu pertumbuhan dan metabolisme mikroba. Antimikroba meliputi antibakteri, antiprotozoa, antifungal, dan antivirus. Antibakteri termasuk ke dalam antimikroba yang digunakan untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Menurut Pelczar dan Chan 1988, dalam Sunarti, 2007 bahwa antibakteri adalah zat yang menghambat pertumbuhan bakteri dan digunakan secara khusus untuk mengobati infeksi. 24 2.6.1 Cara kerja antibakteri Cara Kerja antibakteri dibedakan menjadi 2, yaitu : a. Bakteriostatik Bakteriostatik yaitu antibakteri yang bekerja dengan cara menghambat pertumbuhan bakteri. b. Bakteriosidik Bakteriosidik yaitu antibakteri yang bekerja dengan cara mematikan pertumbuhan bakteri. Bakteriostatik dapat bertindak sebagai bakteriosidik dalam konsentrasi tinggi. Kerja antibakteri dipengaruhi oleh beberapa faktor, yaitu konsentrasi atau intensitas zat antibakteri, suhu, spesies mikroorganisme, adanya bahan organik dan tingkat keasaman atau kebasaan. Selain antibakteri sebagai obat luar, antibakteri masih menjadi salah satu obat yang paling sering digunakan secara oral. Menurut Center for Disease Control and Prevention, sekitar 150 juta resep antibakteri ditulis di Amerika Serikat setiap tahun. Di Indonesia kurang lebih sepertiga pasien rawat inap mendapat terapi antibakteri yang bianyanya mencapai 50% dari anggaran untuk obat di rumah sakit sedangkan di Amerika Serikat seluruh antibakteri oral yang diresepkan hanya 30% yang digunakan untuk pengobatan infeksi bakteri. Penggunaan antibakteri berlebihan dapat mengakibatkan beberapa hal, yaitu : c. Meningkatkan resiko terjadi superinfeksi d. Memperpanjang lama penggunaan antibakteri sebagai akibat dari pengobatan yang kurang optimal e. Meningkatkan lama perawatan penderita di rumah sakit sebagai akibat reaksi obat yang tidak dikehendaki atau adanya komplikasi lain f. Menimbulkan resistensi bakteri, seperti Methicilin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) atau Vancomycin-resistant enterococci (VRE). 25 2.6.2 Mekanisme kerja antibakteri Menurut Pelczar & Chan 1988, dalam Sunarti, 2007 bahwa mekanisme kerja antibakteri dibagi menjadi empat, yaitu : a. Penghambatan terhadap sintesis dinding sel Mekanisme kerja : Penghambatan terhadap sintesis dinding sel bakteri yaitu dengan cara mencegah digabungkannya asam N-asetilmuramat ke dalam struktur mukopeptide yang biasanya membentuk sifat kaku pada dinding sel. Contoh : Basitrasin, sefalosporin, sikloserin, penisillin, vankomisin. b. Penghambatan terhadap fungsi membran sel Mekanisme kerja : Antibiotik ini bergabung dengan membran sel, menyebabkan disorientasi komponen-komponen lipoprotein serta mencegah berfungsinya membran sebagai perintang osmotik. Contoh; amfoterisin B, kolistin, imidazol, triasol, polien, polimiksin. c. Penghambatan terhadap sintesis protein Mekanisme kerja : Antibiotik bekerja dengan cara menghalangi terikatnya RNA pada situs spesifik di ribosom selama perpanjangan rantai peptida, yang berakibat pada hambatan sintesis protein. contoh: kloramfenikol, eritromisin, linkomisin, tetrasiklin, aminoglikosida. d. Penghambatan terhadap sintesis asam nukleat Mekanisme kerja : Bakteri membutuhkan asam p-aminobenzoat (APAB) untuk mensintesis asam folat, suatu koenzim essensial. Dikarenakan molekul APAB dengan molekul antibiotik hampir sama, maka antibiotik akan bersaing dengan APAB sehingga sintesis asam folat akan terhambat. Mekanisme kerja antibiotik ini merupakan contoh penghambatan kompetitif antara metabolit esensial (APAB) dengan analog metabolit (antibiotik). Contoh: quinolon, pyrimethamin, rifampin, sulfonamid, trimetrexat. 26 2.6.3 Aktivitas Antibakteri Aktivitas antibakteri berdasarkan spektrum aktivitasnya, antibakteri dibedakan menjadi 2, yaitu: a. Spektrum luas (Broad spectrum ) Antibakteri efektif mematikan atau menghambat bakteri gram positif dan gram negatif. Antibakteri golongan ini diharapkan dapat mematikan sebagian besar bakteri. Contoh: Kloramfenikol, Tetrasiklin, Sefalosporin, Sulfonamid. b. Spektrum sempit (Narrow spectrum ) Antibakteri golongan ini hanya aktif terhadap beberapa jenis bakteri saja (gram negatif atau gram positif saja). Contoh: Basitrasin, Neomisin, Penisilin, Polimiksin B, dan Streptomisin (Dwijoseputro, 1990) 2.7 Bakteri Bakteri merupakan kelompok organisme berukuran kecil dan banyak dijumpai. Umumnya berdiameter hanya sekitar 1 mikrometer walaupun ada yang berukuran hanya sepersepuluh atau ada pula yang mencapai panjang 10 mikrometer. Menurut catatan fosil, bakteri sudah ada sekitar 3,2 milyar tahun (Irianto, Koes, 2008). Gambar 14. Struktur Bakteri 27 2.7.1 Bentuk Bakteri Bakteri berdasarkan bentuknya dibedakan menjadi : a. Baccilus : berbentuk lurus seperti batang. Umumnya mencakup jasad renik yang menimbulkan kejang mulut (Clostridium tetani), difteria (Corynebacterium diphtheriae), dan tuberkulosis (Mycobacterium tuberculosis), seperti juga Escherichia coli yang dikenal banyak orang. b. Coccus : berbentuk bulat, jika terdapat dua bagian coccus disebut diplococcus, bergerombol disebut Staphylococcus, berbentuk rantai disebut Streptococcus. Contohnya yaitu Diplococcus pneumoniae penyebab penyakit pneumonia, Streptococcus lactis penyebab rasa basi pada susu, Nitrosococcus nitrosus yaitu bakteri tanah yang mengoksidasi amonia menjadi nitrit c. Spirilum : berbentuk panjang dan lengkung seperti spiral (Sutarmi Siti, et al, 2010). 2.7.2 Bakteri Uji 2.7.2.1 Staphylococcus aureus Gambar 15. Bakteri Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus merupakan bakteri patogen mayor pada manusia. Setiap manusia memiliki potensi terinfeksi bakteri ini dengan tingkat keganasan yang berbeda mulai dari infeksi kulit yang ringan hingga infeksi yang berat. Setiap jaringan atau bagian tubuh dapat terinfeksi oleh bakteri ini dan menyebabkan penyakit dengan tanda – tanda khas berupa peradangan. Muncul 28 nanah merupakan sifat khas infeksi dari Staphylococcus aureus (Parhusip, dkk, 2009) Staphylococcus aureus bertanggung jawab atas 80% penyakit pada permukaan kulit sebagai habitat alaminya pada manusia. Pada kasus osteomyletis sebanyak 95% disebabkan oleh Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus juga merupakan penyebab utama infeksi pada luka operasi. Staphylococcus aureus adalah bakteri gram positif, berbentuk bulat, dan biasanya bergerombol seperti anggur dalam bentuk tidak teratur, berpasangan maupun tunggal. Bakteri ini berdiameter 0.5 sampai 1.0 µm pada perbesaran mikroskop 1000x (Breemer et al., 2004). Karekteristik penting dari Staphylococcus aureus adalah pembentukan pigmen koloni yang umumnya berwarna kuning keemasan, dan betahemolisis positif pada blood agar. Pada media BHI agar Staphylococcus aureus berkilauan dengan warna bervariasi dari krem hingga orange sebagai hasil dari pigmentasi karotenoid pada membran sel. Koloni akan menjadi gelap setelah inkubasi selama beberapa hari pada suhu 30°C atau pada suhu ruang. Koloni Staphylococcus aureus pada media Baird Parker Agar (BPA) berbentuk bulat, licin, halus, cembung, lembab, berdiameter 2-3 mm, berwarna abu-abu hingga hitam pekat, dikelilingi batas berwarna terang, serta dikelilingi zona keruh dengan batas luar berupa zona bening (Ash, 2000). 2.7.2.2 Eshericia coli Gambar 16. Bakteri Eschericia coli 29 Eshericia coli yg dalam keadaan normal dalam saluran pencernaan termasuk bakteri yang tidak patogen, namun bersifat patogen apabila berada di luar saluran pencernaan (Jawet, 1984 dalam Agus, 2004). Eschericia coli juga merupakan indikator kontaminasi dan kondisi yang tidak diharapkan. Adanya Eschericia coli pada luar saluran pencernaan akan menimbulkan gejala-gejala seperti peradangan pada bagian kaki dan paha. Eschericia coli merupakan bakteri yang tidak diharapkan pada produk makanan atau minuman (Agus, 2004). Media Endo Agar merupakan salah satu media spesifik untuk pertumbuhan Eschericia coli. Koloni Eschericia coli pada media Endo Agar berbentuk bulat, berwarna merah mudah hingga merah tua, dikelilingi batas terang disekitarnya. Perbedaan bakteri Gram positif dan Gram negatif terdapat pada Tabel 2. Tabel 2. Tabel perbedaan bakteri Gram positif dan Gram negatif Ciri Struktur dinding sel Gram Positif (S aureus) Gram Negatif (E coli) 1) Tebal (20-80 nm) 1) Tipis (10-15 nm) 2) Berlapis 2) Berlapis tunggal (mono) Komposisi dinding sel 1) Kandungan tiga (multi) lipid rendah (1-4%) 1) Kandungan lipid tinggi (11-22%) 2) Peptidoglikan 2) Kandungan merupakan komponen peptidoglikan utama, yaitu 60-100% sedikit yaitu 10- 3) Mempunyai asam teikoat 20% 3) Tidak mempunyai asam teikoat Sumber : Agus, 2004 2.8 Pengujian Antibakteri Aktivitas antibakteri dari suatu zat dapat ditetapkan antara lain dengan cara mengukur panjang daya hambat bakteri di sekitar area yang mengandung zat antibakteri. Semakin besar aktivitas antibakteri maka panjang daya hambat 30 semakin besar. Dari pengujian tersebut akan dicari konsentrasi optimum dalam menghambat bakteri. Ada dua metode yang digunakan untuk menguji aktivitas antibakteri, yaitu: a. Metode dilusi, cara pengenceran tabung Pengujian cara ini digunakan untuk mengetahui Konsentrasi Hambat Minimal (KHM). Metode ini dilakukan dengan mencampur zat antibakteri dalam berbagai deret konsentrasi ke dalam medium yang sudah diinokulasikan dengan bakteri uji, kemudian setelah diinkubasi pada suhu 30-35oC selama 18-24 jam, dilihat konsentrasi terendah yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri, konsentrasi ini disebut KHM dari suatu zat antibakteri. Adanya daya hambat ditandai dengan tidak adanya pertumbuhan bakteri (Jawetz, 1996 dalam Retno, 2009) b. Metode difusi Metode ini digunakan untuk mengukur kepekaan bakteri terhadap suatu antibakteri. Pengukuran berdasarkan panjang daya hambat yang terbentuk di sekeliling reservoir antibakteri. Semakin panjang daya hambat, semakin besar pertumbuhan bakteri yang dihambat oleh zat antibakteri. Umumnya dilakukan dengan menginokulasi terlebih dahulu medium agar dengan bakteri uji, lalu antibakteri diletakkan di atas media agar, kemudian diinkubasi pada suhu 30-35 oC selama 18-24 jam. Metode difusi dibagi menjadi tiga, yaitu: 1. Cara silinder Tiap silinder diletakkan berdiri tegak lurus pada permukaan agar yang telah diinokulasi dengan bakteri uji . Kemudian masing-masing silinder diisi dengan larutan uji dan diinkubasi pada suhu 30-35 o C selama 18-24 jam. Pengamatan berdasarkan daerah hambat di sekeliling tabung silinder, daerah yang terbentuk diukur dalam mm. 31 2. Cara cakram Kertas cakram (paper disc) yang mengandung larutan uji diletakkan pada permukaan agar padat yang sebelumnya telah diinokulasi oleh bakteri uji, kemudian diinkubasi pada suhu 30-35 oC selama 18-24 jam. Pengamatan berdasarkan daerah hambat di sekeliling tabung silinder, daerah yang terbentuk diukur dalam mm. 3. Cara sumur Cara ini dilakukan dengan membuat lubang pada medium agar yang sudah diinokulasikan bakteri uji, lubang yang terbentuk diisi dengan larutan uji, kemudian diinkubasi pada suhu 30-35 o C selama 18-24 jam. Pengamatan berdasarkan daerah hambat di sekeliling tabung silinder, daerah yang terbentuk diukur dalam mm. 32 BAB III METODE PENELITIAN 3.1 Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilakukan pada bulan Desember 2012 – Februari 2013 di Laboratorium Kimia Universitas Pakuan Bogor. 3.2 Bahan dan alat Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain daun kemangi, triclosan, air, serbuk Mg, HCl, amil alkohol, kloroform, amonia, H2SO4, pereaksi Mayer, Dragendorf dan Wagner, eter, pereaksi Lieberman-Buchard, metanol, FeCl3, Sodium Lauryl Sulphate, Cocoamide diethanolamyde, gelatin, gliserol, Na4EDTA, Poli Etilen Glikol (PEG), Propilen Glikol (PG), Barium klorida, Asam sitrat, NaCl, media agar, kapas, kertas cakram, Media VRBA, Media PCA, Media MRSA, biakan bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli. Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain gelas piala, kaca arloji, tabung reaksi, corong, penyangga corong, erlenmeyer, pipet tetes,pipet serologi, bulp, rotary evaporator, corong pemisah, cawan petri, ose, autoklaf, inkubator, jangka sorong. 3.3 Metode penelitian 3.3.1 Persiapan Simplisia Sebanyak 300 gram daun kemangi dicuci bersih lalu dikeringkan dioven pada suhu 40oC selama 3 jam. Setelah itu daun kemangi kering lalu dihaluskan menggunakan blender untuk memperluas permukaan. Sampel yang sudah halus selanjutnya siap untuk diekstraksi dengan pelarut etanol sebanyak 600 ml. 3.3.2 Ekstraksi Contoh Ekstraksi daun kemangi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70%. Maserasi dilakukan pada suhu kamar,diekstrak sebanyak 3 33 kali maserasi agar metabolit sekunder dapat terekstrak dengan maksimal. Pemekatan larutan setelah ekstraksi dilakukan dengan rotary evaporator pada suhu 35-40oC untuk menjaga agar senyawa metabolit sekunder tidak rusak oleh suhu yang terlalu tinggi. Hasil ekstraksi dari daun kemangi ini yang selanjutnya akan digunakan sebagai zat antibakteri pada produk sabun cuci tangan cair. 3.3.3 Uji Fitokimia Uji flavonoid dilakukan dengan ditimbang ± 0,1 gram contoh, dilarutkan dengan 100 ml air panas, kemudian dididihkan selama 5 menit lalu disaring. Sebanyak 5 ml filtrat ditambahkan 0,10 mg serbuk Mg, 1 ml HCl pekat dan 1 ml amil alkohol lalu dikocok kuat. Adanya flavonoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol. Uji alkaloid dilakukan dengan ditimbang ± 0,3 gram ekstrak contoh, dilarutkan dalam 10 ml kloroform-amonia lalu disaring. Filtrat hasil penyaringan ditambahkan beberapa tetes H2SO4 2M kemudian dikocok hingga terbentuk 2 lapisan. Lapisan asam (tidak berwarna) dipipet kedalam 3 tabung reaksi lalu ditambahkan pereaksi Mayer, Dragendorf dan Wagner. Jika terdapat endapan putih setelah ditambahkan pereaksi Mayer, endapan merah jingga setelah ditambahkan pereaksi Dragendorf dan endapan coklat setelah ditambahkan pereaksi Wagner, maka contoh positif mengandung alkaloid. Uji triterpenoid-steroid dilakukan dengan ditimbang ± 0,3 gram ekstrak contoh, ditambahkan 25 ml dietil eter lalu dikocok. Lapisan dietil eter dipisahkan dan ditambahkan pereaksi Lieberman-Buchard. Adanya triterpenoid-steroid ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau biru. Uji saponin dilakukan dengan mengambil residu yang tidak larut dalam dietil eter pada uji triterpenoid-steroid dilarutkan dengan 5 ml air lalu dipanaskan selama 5 menit, didinginkan dan dikocok kuat. Terbentuknya busa yang stabil selama 15 menit menunjukkan adanya saponin. Uji tanin dilakukan dengan ditimbang ± 0,1 gram ekstrak, dilarutkan dengan 1 ml etanol lalu disaring. Filtrat ditambahkan beberapa tetes FeCl3 1%. Adanya tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau, biru atau ungu. 34 3.3.4 Pembuatan Sabun Cuci Tangan Cair Sabun cuci tangan cair dibuat dengan formula 18.5 g Sodium Lauryl Sulphate, 15 g Cocoamide diethanolamide, 2.5 g gelatin, 2.5 g Poly ethylene glicol, 1 g Propilene glicol, 0.1 g Na4EDTA dan 60.40 g air (Pawaka, 2002). Formula sabun ini merupakan formula untuk membuat 100 gram sabun sabun cuci tangan cair. Bahan aktif antibakteri yang ditambahkan pada produk masing-masing yaitu triclosan dan ekstrak etanol daun kemangi. Konsentrasi bahan aktif digunakan 0,3% sesuai standar penggunaan triclosan pada sediaan kosmetik menurut BPOM. Konsentrasi selanjutnya untuk bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi akan disesuaikan dengan hasil pengamatan pada uji daya hambat antibakteri. 3.3.5 Preparasi Uji Daya Hambat Antibakteri 3.3.5.1 Pembuatan Larutan Fisiologis 0,9% Larutan fisiologis 0,9% dibuat dengan ditimbang 0,9 g NaCl kemudian dilarutkan dengan 100 ml air, dibuat secara terukur dalam labu takar atau labu ukur. Larutan ini disimpan diwadah tertutup untuk selanjutnya disterilisasi. 3.3.5.2 Pembuatan Larutan Standard Mc Farland 3 Larutan standard Mc Farland merupakan larutan standard kekeruhan untuk mengidentifikasi jumlah koloni bakteri dalam suatu larutan. Mc Farland 3 memiliki arti larutan pada tingkat kekeruhan 3 yaitu larutan dengan jumlah bakteri sebanyak 900 x 106 cfu/ml. Larutan Standar Mc Farland 3 dibuat dengan melarutkan 0,30 ml Barium Klorida 1% dengan 9,70 ml Asam Sulfat 1%. Pembuatan larutan standar Mc Farland tertera pada Lampiran 4. 3.3.5.3 Pembuatan Media MRSA Larutan Media Manitol Red Salt phenol Agar (MRSA) dibuat dengan ditimbang 108 gram serbuk media kemudian dilarutkan dengan 1000 ml air. Larutan media agar disimpan diwadah tertutup untuk selanjutnya disterilisasi. 35 3.3.5.4 Pembuatan Media VRBA Larutan Media Violet Red Bille Agar (VRBA) dibuat dengan ditimbang 41,5 gram serbuk media kemudian dilarutkan dengan 1000 ml air.Larutan media agar disimpan diwadah tertutup untuk selanjutnya disterilisasi. 3.3.5.5 Pembuatan Media PCA Larutan Media Plate Count Agar (PCA) dibuat dengan ditimbang 23,5 gram serbuk media kemudian dilarutkan dengan 1000 ml air. Larutan media agar disimpan di wadah tertutup untuk selanjutnya disterilisasi. 3.3.5.6 Isolasi dan Inokulasi Bakteri Staphylococcus aureus Isolasi bakteri Staphylococcus aureus dilakukan pada media spesifik MRSA. MRSA yang sudah siap pakai dilakukan SWAB dari contoh yang diduga mengandung bakteri Staphylococus aureus seperti luka pada kulit dan jerawat. Area kerja dibersihkan dengan alkohol 70%, bunsen dinyalakan, ose dibakar hingga pijar, didinginkan lalu dicelupkan pada LF. Ose dioles pada objek atau area yang diduga mengandung Staphylococus aureus lalu dioleskan ke media MRSA pada cawan petri, diinkubasi selama 12-24 jam, adanya bakteri berwarna kuning pada media MRSA menunjukkan positif terdapat Staphylococcus aureus. Isolasi bakteri dilakukan secara aseptik. Inokulasi bakteri Staphylococcus aureus dilakukan pada media agar miring dalam tabung reaksi. Area kerja dibersihkan dengan alkohol 70%, bunsen dinyalakan, ose dibakar hingga pijar, didinginkan lalu dicelupkan pada LF. Ose dioles pada bakteri berwarna kuning hasil isolasi bakteri lalu dioleskan pada media agar miring dalam tabung reaksi, diinkubasi selama 12-24 jam. Inokulasi bakteri dilakukan secara aseptik. 3.3.5.7 Isolasi dan Inokulasi Bakteri Eschericia coli Isolasi bakteri Eschericia coli dilakukan pada media spesifik VRBA. VRBA yang sudah siap pakai dilakukan SWAB dari contoh yang diduga mengandung bakteri Eschericia coli seperti pada tangan yang kotor dan air 36 mentah. Area kerja dibersihkan dengan alkohol 70%, bunsen dinyalakan, ose dibakar hingga pijar, didinginkan lalu dicelupkan pada LF. Ose dioles pada objek atau area yang diduga mengandung Eschericia coli lalu dioleskan ke media VRBA pada cawan petri, diinkubasi selama 12-24 jam, adanya bakteri berwarna merah metalik pada media VRBA menunjukkan positif terdapat Eschericia coli. Isolasi bakteri dilakukan secara aseptik. Inokulasi bakteri Eschericia coli dilakukan pada media agar miring dalam tabung reaksi. Area kerja dibersihkan dengan alkohol 70%, bunsen dinyalakan, ose dibakar hingga pijar, didinginkan lalu dicelupkan pada LF. Ose dioles pada bakteri berwarna merah metalikhasil isolasi bakteri lalu dioleskan pada media agar miring dalam tabung reaksi, diinkubasi selama 12-24 jam. Inokulasi bakteri dilakukan secara aseptik. 3.3.5.8 Pembuatan Media Agar Miring Agar miring dibuat untuk melakukan inokulasi. Agar miring dibuat dengan menuang media agar PCA yang sudah steril ke dalam tabung reaksi yang sudah steril kemudian tabung reaksi disimpan pada kemiringan 50o, didiamkan hingga beku. Media agar miring dibuat secara aseptik. 3.3.5.9 Sterilisasi Alat dan Bahan Kertas cakram berbentuk lingkaran dengan diameter ± 1 cm disterilkan bersama cawan petri, pipet serologi, pinset dan media agar yang sudah dibuat sesuai dengan petunjuk komposisi yang terdapat pada label wadah kemasan. Alat dan bahan dapat disterilisasi dengan teknik sterilisasi basah menggunakan autoklaf dengan tekanan 1 atm selama 15 menit dan suhu 121o atau dengan sterilisasi kering menggunakan oven dengan suhu 180oC selama 1 jam. 3.3.6 Uji Daya Hambat Antibakteri Pada Produk Sabun Cuci Tangan Cair Kertas cakram direndam pada 2 produk sabun cuci tangan cair yang berbeda kandungan bahan aktifnya yaitu triclosan dan ekstrak etanol daun kemangi dengan konsentrasi awal bahan aktif diuji pada konsentrasi 0,3%. 37 Setiap bakteri pada media agar miring yang akan diuji daya hambatnya dilarutkan dengan larutan fisiologis 0,9%. Pengenceran dengan larutan fisiologis ini dilakukan hingga didapat larutan bakteri yang kekeruhannya sama dengan larutan standar Mc Farland 3. Dipipet 1 ml biakan murni Staphylococcus aureus dan Eschericia coli kedalam cawan petri berbeda, dituangkan media agar lalu didiamkan hingga beku. Kertas cakram yg sudah direndam ditempelkan diatas media agar bagian tengah, 1 kertas saring untuk 1 cawan petri, dilakukan duplo dan dibuat blanko. Cawan petri diinkubasi pada suhu 36-37o Celcius selama 24 - 48 jam. Pertumbuhan bakteri pada media agar diamati lalu diukur panjang daya hambat di area kertas cakram menggunakan jangka sorong. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi pada produk sabun cuci tangan cair dapat dinaikkan atau diturunkan agar didapat konsentrasi optimum dari ekstrak etanol daun kemangi tersebut. 3.3.7 Analisis Konsentrasi Optimum Ekstrak Etanol Daun Kemangi Apabila pada konsentrasi awal 0,3% ekstrak etanol daun kemangi pada produk sabun cuci tangan cair sudah memberikan efek daya hambat yang sama dengan efek daya hambat pada triclosan, maka ekstrak etanol daun kemangi dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Eschericia coli dengan optimum. Apabila pada konsentrasi awal 0,3 % ekstrak etanol daun kemangi pada produk sabun cuci tangan cair memberikan efek daya hambat yang lebih baik dengan efek daya hambat pada triclosan, maka konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi akan diturunkan dibawah 0,3% yaitu 0,05%, 0,15% dan 0,25% untuk mengetahui konsentrasi optimum ekstrak etanol daun kemangi yang setara dengan triclosan. Apabila pada konsentrasi awal 0,3 % ekstrak etanol daun kemangi tidak memberikan efek daya hambat yang lebih baik dari efek daya hambat pada triclosan, maka konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi akan dinaikkan diatas 0,3% yaitu 1%, 3%, 5%, 10%, 30% dan 50% untuk mengetahui konsentrasi 38 optimum ekstrak etanol daun kemangi dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Eschericia coli. Setiap analisis mikrobiologi dilakukan secara aseptik dengan area steril dan menggunakan pembakar spirtus selama analisis mikrobiologi berlangsung. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali (triplo) dan dikerjakan terhadap blanko sebagai faktor koreksi. Analisis konsentrasi optimum ekstrak etanol daun kemangi ditentukan dengan mencari sabun dengan konsentrasi bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi yang rendah namun memberikan daya hambat yang sama atau lebih besar (≥) dari sabun dengan konsentrasi bahan aktif triclosan 0,3 %. 39 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Kadar Air dan Rendemen Ekstrak Etanol Daun Kemangi Hasil pengujian kadar air terhadap simplisia daun kemangi adalah sebesar 7,3%. Dari ekstraksi daun kemangi dengan pelarut etanol 70% diperoleh ekstrak daun kemangi pelarut etanol berbentuk serbuk atau ekstrak kering. Hasil penimbangan setelah ekstraksi yaitu 54,6712 g dan didapatkan rendemen ekstrak etanol sebesar 26,09 %. Hasil Penimbangan setelah Freeze Drying yaitu 52,1420 g dan didapatkan rendemen serbuk kering sebesar 24,88 %. Perhitungan lengkapnya tertera pada Lampiran 8. Kadar air menunjukkan ketahanan dalam penyimpanan, semakin kecil kadar air semakin kecil kemungkinan tumbuhnya jamur atau mikroba pada hasil ekstraksi. Jumlah air yang terkandung dipengaruhi dari perlakuan yang telah dialami bahan, seperti kelembapan udara, tempat penyimpanan, dan lain-lain. Tabel 3.Tabel Kadar Air dan Rendemen Ekstrak Etanol Daun Kemangi Parameter Hasil Kadar air (%) 7,63 % Rendemen ekstrak etanol 70% 26,09 % Rendemen setelah Freeze Drying 24,88 % Pelarut yang digunakan pada ekstraksi yaitu alkohol 70%, pelarut ini merupakan pelarut organik yang bersifat mematikan bakteri, sehingga bila tidak dihilangkan dapat menyebabkan kesalahan dalam pengujian. Oleh karena itu, untuk memastikan bahwa pelarut yang digunakan sudah benar-benar hilang maka setelah dievaporasi ekstrak kental yang dihasilkan dijadikan serbuk atau ekstrak kering dengan metode freeze drying. 40 4.2 Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Kemangi Uji fitokimia bertujuan untuk mengetahui jenis senyawa yang ada dalam ekstrak etanol daun kemangi yang diharapkan berperan sebagai zat antibakteri. Uji ini dilakukan terhadap ekstrak etanol daun kemangi yang meliputi uji 5 jenis senyawa, yaitu alkaloid, flavonoid, triterpenoid- steroid, tanin, dan saponin. Dari hasil uji diketahui bahwa ekstrak etanol daun kemangi mengandung flavonoid, alkaloid, saponin, tanin dan triterpenoid. Senyawa tanin dapat berfungsi untuk melapisi lapisan mukosa pada organ agar terlindungi dari infeksi bakteri. Senyawa saponin dapat meningkatkan permeabilitas dinding usus, memperbaiki penyerapan nutrien, dan menghambat aktivitas enzim urease (Erika, 2000). Tabel 4. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Kemangi Parameter Fitokimia Alkaloid No 1 2 Flavonoid 3 Saponin 4 Tanin 5 Triterpenoid Pengamatan Hasil Pereaksi Mayer : terbentuk endapan putih + Pereaksi Dragendorf : terbentuk endapan merah jingga + Pereaksi Wagner : terbentuk endapan coklat + Terbentuk warna kuning Terbentuk busa yang stabil Terbentuk warna biru Terbentuk warna hijau kebiruan Keterangan : (+) : Terdapat kandungan senyawa (-) : Tidak terdapat kandungan senyawa + + + + 41 4.3 Hasil Uji Daya Hambat Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Kemangi Daya antibakteri ekstrak etanol daun kemangi terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dapat diketahui dengan mengukur panjang daya hambat pertumbuhan bakteri di sekitar kertas cakram yang terlihat jernih. Dari hasil uji daya hambat antibakteri didapatkan bahwa terdapat area daya hambat atau area bening pada sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi maupun sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif triclosan. Hasil uji daya hambat bakteri Staphylococcus aureus pada produk sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi pada konsentrasi 0%; 0,3%; 1%; 3%; 5%; 10%; 30% dan 50% menunjukkan bahwa panjang daya hambat berturut-turut sebesar 0 mm; 7 mm; 8 mm, 10,07 mm; 10,33 mm; 11 mm; 14,33 mm dan 15,33 mm. Produk sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif triclosan 0,3% sebagai standar menunjukkan panjang daya hambat bakteri sebesar 10 mm. Hal ini menunjukkan bahwa daya hambat bakteri Staphylococcus aureus pada sabun cuci tangan cair triclosan 0,3% setara dengan sabun cuci tangan cair dengan konsentrasi bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi 3%. Hasil uji daya hambat bakteri Eschericia coli pada produk sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi pada konsentrasi 0%; 0,3%; 1%; 3%; 5%; 10%; 30% dan 50% menunjukkan panjang daya hambat berturut-turut sebesar 0 mm; 1 mm; 1,7 mm; 3mm; 4mm; 3,7mm; 3,3mm dan 3,3 mm. Produk sabun cuci tangan cair dengan bahan aktif triclosan 0,3% sebagai standar diperoleh panjang daya hambat bakteri sebesar 3mm. Hal ini menunjukkan bahwa daya hambat bakteri Eschericia coli pada sabun cuci tangan cair triclosan 0,3% setara dengan sabun cuci tangan cair dengan konsentrasi bahan aktif ekstrak etanol daun kemangi 3%. Hasil uji daya hambat antibakteri triclosan dan ekstrak etanol daun kemangi tertera pada Tabel 5. 42 Tabel 5. Hasil Uji Daya Hambat Antibakteri Triclosan dan Ekstrak Etanol Daun Kemangi Konsentrasi Bahan Aktif Triclosan 0,3% (Standar) Ekstrak Etanol Daun Kemangi 0% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 0,3% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 1% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 3% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 5% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 10% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 30% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 50% ULANGAN Panjang Hambat pada Staphylococcus aureus (mm) Panjang Daya Hambat pada Escherichia coli (mm) 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 10 10 10 10 0 0 0 0 7 7 7 7 8 8 8 8 10,2 10 10 10,07 10 11 10 10,33 10 10 13 11 13 15 15 14,33 15 15 16 15,33 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 1,7 3 3 3 3 4 4 4 4 3 4 4 3,7 3 4 3 3,3 3 3 4 3,3 43 4.4 Optimasi Ekstrak Etanol Daun Kemangi Sebagai Antibakteri Grafik hubungan antara konsentrasi penambahan bahan aktif berupa triclosan dan ekstrak etanol daun kemangi dengan panjang daya hambat tertera pada Gambar 17. Pada Gambar 17 dapat dilihat bahwa terdapat hubungan antara konsentrasi penambahan bahan aktif eksrak daun kemangi dan bahan aktif standar triclosan 0,3% terhadap panjang daya hambat yang dihasilkan. 18 15.33 14.33 16 14 12 Panjang Daya Hambat (mm) 10.0710.33 10 10 11 Ekstrak daun kemangi terhadap Eschericia coli Standar Triclosan 0.3 % terhadap Eschericia coli 8 7 8 6 4 4 3 2 1 3 3.7 3.3 3.3 Ekstrak Daun Kemangi terhadap Staphylococus aureus Standar Triclosan 0,3 % terhadap Staphylococus aureus 1.7 0 0 0 0.3 1 3 5 10 30 50 Konsentrasi Penambahan Bahan Aktif (%) Gambar 17. Grafik Panjang Daya Hambat Triclosan dan Ekstrak Etanol Daun Kemangi Terhadap Bakteri Staphylococus aureus dan Eschericia coli Daya hambat ekstrak etanol daun kemangi terhadap bakteri Staphylococus aureus belum terlihat pada penambahan ekstrak etanol 0% dan mulai terlihat daya hambat pada penambahan ekstrak etanol daun kemangi 0,3%. Daya hambat terhadap bakteri Staphylococus aureus berbanding lurus dengan konsentrasi penambahan ekstrak etanol daun kemangi. Konsentrasi optimum ekstrak etanol daun kemangi untuk menggantikan triclosan dalam menghambat bakteri Staphylococus aureus yaitu pada konsentrasi 3%. 44 Daya hambat ekstrak etanol daun kemangi terhadap bakteri Eschericia coli belum terlihat pada penambahan ekstrak etanol 0% dan mulai terlihat daya hambat pada penambahan ekstrak etanol daun kemangi 0,3%. Konsentrasi penambahan ekstrak etanol 5% merupakan konsentrasi dengan hasil daya hambat maksimal yaitu 4 mm, sedangkan pada konsentrasi 10% terjadi penurunan daya hambat terhadap bakteri Eschericia coli. Konsentrasi optimum ekstrak etanol daun kemangi untuk menggantikan triclosan dalam menghambat bakteri Eschericia coli yaitu pada konsentrasi 3%. Penurunan panjang daya hambat bakteri Eschericia coli menunjukkan adanya penurunan aktifitas antibakteri pada sabun cuci tangan cair ekstrak etanol daun kemangi. Penurunan panjang daya hambat ini mungkin disebabkan karena bakteri mengalami resistensi terhadap antibakteri yang terkandung dalam ekstrak etanol daun kemangi. Resistensi sel bakteri adalah suatu sifat tidak terganggunya kehidupan sel bakteri oleh zat antibakteri. Mekanisme resistensi suatu bakteri terhadap antibakteri yaitu perubahan tempat kerja suatu zat antibakteri pada bakteri, bakteri menurunkan permeabilitas dinding selnya sehingga zat antibakteri sulit masuk ke dalam sel, bakteri membentuk jalan pintas untuk menghindari tahap yan dihambat oleh zat antibakteri (Ganiswarna, et al., 1995). Terjadinya mekanisme resistensi bakteri terhadap antibakteri, menyebabkan terbentuknya beberapa populasi bakteri yang resisten, sehingga panjang daya hambat di sekitar cakram menurun. Faktor – faktor yang mempengaruhi metode difusi agar, yaitu : 1. Ketebalan medium agar adalah hal penting untuk memperoleh sensitifitas yang optimal. Perbedaan ketebalan media agar mempengaruhi difusi dari zat uji ke dalam agar, sehingga akan mempengaruhi diameter hambat. Makin tebal media media yang digunakan akan makin kecil diameter hambat yang terbentuk. 2. Kerapatan inokulum Ukuran inokulum merupakan faktor yang terpenting yang mempengaruhi lebar daerah hambat. Jumlah inokulum yang yang lebih sedikit menyebabkan zat antibakteri dapat berdifusi lebih jauh, 45 sehingga daerah yang dihasilkan lebih besar, sedangkan jika jumlah inokulum lebih besar maka akan dihasilkan daerah hambatan yang kecil. 3. Komposisi media agar Perubahan komposisi media dapat mengubah sifat media sehingga jarak difusi berubah. Media agar berpengaruh terhadap ukuran daerah hambat dalam hal mempengaruhi aktifitas beberapa bakteri, mempengaruhi kecepatan difusi antibakteri dan mempengaruhi kecepatan pertumbuhan bakteri. 4. Suhu inkubasi Kebanyakan bakteri tumbuh baik pada suhu 37˚C. Sabun cuci tangan cair belum memiliki SNI spesifik sebagai SNI sabun cuci tangan cair, namun yang diterbitkan dalam SNI adalah SNI 06-4085-1996 sebagai SNI Sabun Mandi Cair, namun SNI ini layak digunakan sebagai pembanding sabun ekstrak etanol daun kemangi dengan pertimbangan memiliki fungsi yang sama untuk kulit manusia. Perbandingan sabun sesuai SNI sabun 06-4085-1996 dengan sabun ekstrak etanol daun kemangi tertera pada Tabel 6. Tabel 6. Tabel Perbandingan Sabun Sesuai SNI Sabun 06-4085-1996 Dengan Sabun Ekstrak Etanol Daun Kemangi SNI 06-4085Sabun Ekstrak Etanol Daun No Kriteria Uji Satuan 1996 Kemangi 1 Keadaan Bentuk Khas Khas Bau Khas Khas Warna Khas Khas 2 pH 8 – 11 9.41 3 Bahan Aktif % max 15 3 % (konsentrasi optimum) 46 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan Konsentrasi optimum penambahan ekstrak etanol daun kemangi sebagai pengganti triclosan dalam menghambat Staphylococcus aureus dan Eschericia coli pada produk sabun cuci tangan cair yaitu pada konsentrasi 3%. 5.2 Saran a. Perlu dilakukan uji stabilitas untuk mengetahui umur produk atau ketahanan dari sabun cuci tangan cair ekstrak etanol daun kemangi. b. Perlu dilakukan analisis lebih spesifik pada senyawa fitokimia agar didapat hasil parameter fitokimia yang lebih beragam sebagai dasar sifat antibakteri pada ekstrak etanol daun kemangi. c. Perlu dilakukan analisis kandungan minyak atsiri yang dapat dijadikan sebagai tambahan dasar analisis senyawa aktif antibakteri pada daun kemangi. 47 DAFTAR PUSTAKA Adolf, 2009. Mengenal Kandungan dan Morfologi Kemangi. Jakarta : Pustaka Buku. Adolf, 2010. Fitokimia Daun Kemangi. Institute Pertanian Bogor. Agus, 2004. Peranan Eshericia coli Pada Kesehatan.Universitas Padjajaran. Agusta, 2000. Kadar Bunuh Minimum Daun Kemangi Terhadap Staphylococcus aureus dan Eschericia Coli. Alysa Dyan, 2010. Formulasi Cheawable Lozenges Yang Mengandung Ekstrak Daun Kemangi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Ash, 2000. Efektifitas Daya Hambat Staphylococcus. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Badan Standardisasi Nasional Indonesia, 1996. Standar Mutu Sabun Mandi Cair. SNI 06-4085-1996. Dewan Standar Nasional Jakarta. Bailey A.E, 1979. Industrial Oil and Fat Product Interscholastic Publishing, Inc. New York. Breemer et al.,2004. Kumpulan Jurnal Institut Pertanian Bogor. Center For Disease Control And Prevention, 2009. Fourth National Report On Human Exposure To Environmental Chemicals. Department of Health and Human Services. Croteau et al., 2004 dalam Pacific Journal, 2009. The Analysis Of Alkaloid Compounds Of Some Medicinal Vegetations As The Active Materials Of Phyto-Pharmaca, Universitas Sam Ratulangi. Vol 1 (4), hal 489-494. Deiner, Fadilah, 2008. Formulasi Bath Gel Bengkuang dan Madu. Institut Pertanian Bogor. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1993. Kodeks Kosmetika. Indonesia : Jakarta. Dwijo Seputro, 1990 dalam Lestari, 2008. Pemurnian DNA dan mediumnya. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Eny, Anggra, 2011. Metode Ekstraksi. Universitas Indonesia. Erik and Michael, 2004. Medicinal Plants Of The World. Singapore : Briza Publications. 48 Erika dalam Ida, 2012. Khasiat Daun Kemangi. Jakarta : Pustaka Buku Fahmitasari, Yoan, 2004. Pengaruh Penambahan Tepung Karagenan Terhadap Karakteristik Sabun Mandi Cair. Institut Pertanian Bogor. Fauzia, 2007. Uji Aktifitas Antibakteri Daun Kemangi, Institut Pertanian Bogor. Fessenden, R.J and J.S Fessenden, 1982. Kimia Organik, Jilid 2, edisi ketiga. Erlangga : Jakarta. Food and Drugs Administration.www.tempo.co/read/news. Ganiswarna, 1995. Farmakologi dan Terapi. Edisi IV. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Harborne, 1987 dalam Fauzia, 2007. Uji Aktifitas Antibakteri Daun Kemangi, Institut Pertanian Bogor. Ida, 2012. Khasiat Daun Kemangi. Jakarta : Pustaka Buku Irianto, Koes, 2008. Mengenal Dunia Bakteri. Bandung : Pinggandani. Iwan, 2012. Bahaya Pemakaian Triclosan yang Berlebihan. Jawet, 1984, dalam Agus, 2004. Kesehatan.Universitas Padjajaran. Peranan Eshericia coli Pada Jawetz, 1996 dalam Retno, 2009. Metode Ekstraksi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Jellinek, DRJ.1970. Formulation and Function Of Cosmetics.Wiley-Intersience : New York. Journal Of GXP Compliance Microbiology Topics, Summer 2011. Volume 15. Number : 3. Page 49-53. Kamikaze, D, 2002. Studi Awal Pembuatan Sabun Menggunakan Campuran Lemak Abdemen Sapi dan Curd Susu Afkir. Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor. Lestari, 2008. Pemurnian DNA dan mediumnya. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Loho, Paul, 2007. Pengaruh Alergi Dari Triclosan. Institut Pertanian Bogor. Mangoting et al., 2008 dalam Adolf, 2010. Fitokimia Daun Kemangi. Institute Pertanian Bogor. 49 Ophardt, 2003 dalam Raisa, Alvera, 2012. Optimasi Penggunaan Madu Pada Sabun. Universitas Nusa Bangsa. Parhusip, Ratna Julia dan J. Stenlie. Aktifitas Antimikroba Ekstral Daun Kemangi Terhadap Mikroba Patogen Pangan. Journal Ilmu dan Teknologi Pangan. Vol 7, No 2, Oktober 2009. Pawaka, Vona, 2002. Aplikasi Gelatin Sebagai Bahan Pengental Pada Shower Gel. Institut Pertanian Bogor. Pelczar dan Chan, 1988 dalam Fauzia, 2007. Uji Aktifitas Antibakteri Daun Kemangi, Institut Pertanian Bogor. Pelczar dan Chan, 1988 dalam Sunarti, 2007. Ekstraksi Propolis. Institut Pertanian Bogor. Pitojo, 1996 dalam Fauzia, 2007. Uji Aktifitas Antibakteri Daun Kemangi, Institut Pertanian Bogor. Raisa, Alvera, 2012. Optimasi Penggunaan Madu Pada Sabun. Universitas Nusa Bangsa. Retno, 2009. Metode Ekstraksi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Robinson, 1995 dalam Fauzia, 2007. Uji Aktifitas Antibakteri Daun Kemangi, Institut Pertanian Bogor. Schunack, et al., 1990 dalam Sunarti, 2007. Ekstraksi Propolis. Institut Pertanian Bogor. Sudarsono et al., 2002 dalam Alysa Dyan, 2010. Formulasi Cheawable Lozenges Yang Mengandung Ekstrak Daun Kemangi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Sunarti, 2007. Ekstraksi Propolis. Institut Pertanian Bogor. Sutarmi, Siti, et al, 2010. Pengantar Mikrobiologi. Jakarta : Pustaka Utama. Tsauri, Sofyan, 2006. Pertolongan Pertama Penyakit dan Kecelakaan dengan Herbal. Jakarta : Penebar Swadaya. Yohana dan Yovita, 2012. Buah Sayuran Tanaman Obat. Jakarta : Setiakawan Prima. Yuari, Arin, 2009. Isolasi dan Penentuan Aktifitas Antimikroba Isolat Streptomyces Terhadap Staphylococcus aureus Serta Uji Bioantografi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. 50 Lampiran 1. Pembuatan pereaksi 1.1 Pembuatan Larutan Pereaksi Mayer Sebanyak 1,4 gram Raksa (II) Klorida ditimbang dan dilarutkan dalam air suling hingga 60 ml. Pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 gram Kalium Iodida lalu dilarutkan dalam 10 ml air suling. Kemudian dicampur dan ditambahkan air suling hingga 100 ml. 1.2 Pembuatan Larutan Pereaksi Dragendorff Sebanyak 0,8 gram Bismut (III) Nitrat ditimbang dan dilarutkan dala 20 ml asam nitrat pekat. Pada wadah lain ditimbang sebanyak 27,2 gram Kalium Iodida lalu dilarutkan dalam 50 ml air suling, kemudian kedua larutan dicampurkan dan didiamkan sampai memisah sempurna, larutan yang jernih diambil dan diencerkan dengan air suling sampai 100 ml. 1.3 Pembuatan Larutan Pereaksi Liebermann-Burchard Sebanyak 20 bagian asam asetat anhidrat dicampurkan dengan 1 bagian asam sulfat pekat. 51 Lampiran 2. Bagan Alir Penelitian 300 gram Sampel Daun Kemangi Ekstraksi dengan 600 ml Etanol Pemekatan dengan Rotary Evaporator Pembuatan Sabun Cuci Tangan Cair Ekstrak Daun Kemangi Uji Fitokimia meliputi Flavonoid, Alkaloid, Saponin, Tanin, Triterpenoid Penambahan Ekstrak Etanol Daun Kemangi 0,3 % Uji Daya Hambat Antibakteri terhadap S. aureus dan E.coli Penambahan Triclosan 0,3 % Uji Daya Hambat Antibakteri terhadap S. Aureus dan E.coli Uji Daya Hambat dengan Variasi Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Kemangi 0%; 0,3%;1%;3%;5%;10%;30%;50% Analisis Optimasi Antibakteri terhadap S. aureus dan E.coli pada Produk Sabun Cuci Tangan dengan variasi konsentrasi ekstrak 52 53 54 Lampiran 4. Perbandingan Larutan Untuk Pembuatan Larutan Standard Mc Farland . Skala Mc Farland Jumlah larutan Barium Klorida 1% (mL) Jumlah larutan H2SO41% (ml) Jumlah bakteri (x106 / ml) 1 0,10 9,90 300 2 0,20 9,80 600 3 0,30 9,70 900 4 0,40 9,60 1200 5 0,50 9,50 1500 6 0,60 9,40 1800 7 0,70 9,30 2100 8 0,80 9,20 2400 9 0,90 9,10 2700 10 1,00 9,00 Sumber : Microbiology Topics, Summer 2011 Volume 15, Number 3 Page : 51 3000 Larutan Standard Mc Farland dibuat dengan mencampurkan Barium Klorida dan Asam Sulfat dengan perbandingan yang sudah ditentukan. Larutan Mc Farland ini digunakan sebagai larutan standard kekeruhan jumlah bakteri. 55 Lampiran 5. Pembuatan Sabun Cuci Tangan Cair Formula 100 gram 60,40 g Air 2,5 g Gelatin Pemanasan 50-70OC Sambil diaduk Campuran 1 Didinginkan Pencampuran bahanbahan sambil diaduk Sabun Cuci Tangan Cair Natrium Lauril Sulfat 15 g Cocoamid Diethanolamide 2,5 g Poli Etilen Glikol 1 g Propilen Glikol 0,1 g Na4EDTA 56 Lampiran 6. Perhitungan Kadar Air dan Rendemen Ekstrak Etanol Daun Kemangi Kadar Air Bobot Cawan Porselen Kosong = 25,2010 g Bobot Cawan Porselen + sample = 27,2236 g Bobot Sample = 27,2236 – 25,2010 = 2,0226 g Bobot setelah pemanasan 1 = 27,2130 g Bobot setelah pemanasan 2 = 27,0694 g Bobot setelah pemanasan 3 = 27,0692 g (bobot tetap) Kadar Air =( Bobot cawan porselen + sample) – Bobot tetap . 100% Bobot Sample = 27,2236 – 27,0692 . 100% 2,0226 = 7,63 % Rendemen Bobot simplisia = 209,5600 g Bobot Setelah Ekstraksi = 54,6712 g Bobot setelah Freeze Drying = 52,1420 g % Rendemen Ekstrak = Bobot setelah ekstraksi .100% Bobot simplisia = 54,6712 . 100% 209,5600 = 26,09 % % Rendemen Serbuk (Setelah Freeze drying)= Bobot setelah FD .100% Bobot simplisia = 52,1420% 209,5600 = 24,88 % 57 Lampiran 7. Hasil analisis pH sabun No Variasi Konsentrasi Bahan Aktif Pada Sabun Ratarata pH simplo pH duplo triplo 1 Triclosan 0.3 % 9,57 9,56 9,56 9,56 2 Ektstrak Kemangi 0% 9,40 9,40 9,40 9,40 3 Ektstrak Kemangi 0,3% 9,40 9,41 9,40 9,40 4 Ektstrak Kemangi 1% 9,41 9,40 9,40 9,40 5 Ektstrak Kemangi 3% 9,41 9,42 9,41 9,41 6 Ektstrak Kemangi 5% 9,41 9,41 9,41 9,41 7 Ektstrak Kemangi 10% 9,44 9,43 9,43 9,43 8 Ektstrak Kemangi 30% 9,44 9,44 9,43 9,44 9 Ektstrak Kemangi 50% 9,44 9,45 9,45 9,45 58 Lampiran 8. Foto Uji Daya Hambat Terhadap Staphylococus aureus Triclosan 0,3 % Ekstrak Etanol Daun Kemangi 1% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 0,3% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 3% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 5% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 10% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 30% Ekstrak Etanol Daun Kemangi 50% 59 Lampiran 9. Foto Uji Daya Hambat Terhadap Eschericia coli Zona Bening Daya Hambat Triclosan 0.3% terhadap Eschericia coli Zona Bening Daya Hambat Kemangi 0.3% terhadap Eschericia coli Zona Bening Daya Hambat Sabun Kemangi 1% terhadap Eschericia coli Zona Bening Daya Hambat Sabun Kemangi 3% terhadap Eschericia coli Zona Bening Daya Hambat Sabun Kemangi 5% terhadap Eschericia coli Zona Bening Daya Hambat Sabun Kemangi 10% terhadap Eschericia coli 60 Zona Bening Daya Hambat Sabun Kemangi 30% terhadap Eschericia coli Zona Bening Daya Hambat Sabun Kemangi 50% terhadap Eschericia coli 61 Lampiran 10. Foto Uji Fitokimia Pereaksi Dragendorf : terbentuk endapan merah jingga Pereaksi Mayer : terbentuk endapan putih Pereaksi Wagner : terbentuk endapan coklat Uji Alkaloid Uji Flavonoid Uji Tanin dan Saponin Uji Triterpenoid
