3. SOP Cell Thawing

Halaman
CANCER CHEMOPREVENTION RESEARCH CENTER FAKULTAS FARMASI UGM
Dokumen nomor : CCRC-02-003-00
Mengganti nomor :
-
-
DIBUAT
OLEH
Staff CCRC
DIPERIKSA
OLEH
Staff CCRC
DIPERIKSA
OLEH
Supervisor CCRC
DISETUJUI
OLEH
Pimpinan CCRC
Adam Hermawan
Aditya Fitriasari
Muthi’ Ikawati
Edy Meiyanto
URAIAN
Jabatan
Paraf
Nama
Tanggal
Tanggal :
Tanggal :
PROSEDUR TETAP
MENUMBUHKAN SEL DARI TANGKI NITROGEN CAIR
(CELL THAWING)
DAFTAR ISI
HALAMAN
DAFTAR ISI
1
A. RIWAYAT REVISI DOKUMEN
2
B. TUJUAN
2
C. PENDAHULUAN
2
D. OPERASIONAL
2
A. RIWAYAT REVISI DOKUMEN
No
Dokumen
-
Isi
No
Dokumen
CCRC-02003-00
Isi
Tanggal
Dibuat oleh
Diperiksa
oleh
Endah P Septi
Staff
CCRC
Menggunakan format lama
Belum ada penomoran dokumen
Tanggal
Dibuat oleh
Adam
Hermawan
Staff
CCRC
Menggunakan format baru
Sudah ada penomoran dokumen
Diperiksa oleh
Riris Istighfari
J
Supervisor
CCRC
Diperiksa
oleh
Aditya
Fitriasari
Staff
CCRC
Diperiksa oleh
Muthi’
Ikawati
Supervisor
CCRC
Disetujui
oleh
Edy Meiyanto
Pimpinan
CCRC
Disetujui
oleh
Edy Meiyanto
Pimpinan
CCRC
B. TUJUAN
Mengatur standar kerja penumbuhan sel dari tangki nitrogen cair (cell thawing).
C. PENDAHULUAN
Sel apabila tidak digunakan dalam penelitian disimpan dalam tangki nitrogen cair untuk
waktu penyimpanan yang lama, atau disimpan dalam suhu -80 oC untuk peynimpanan
selama 2-3 bulan. Sel ditumbuhkan kembali dalam media saat akan digunakan dalam uji
in vitro. Dalam proses penumbuhan sel perlu diperhatikan beberapa faktor agar sel dapat
tumbuh dengan baik pada mediumnya, sehingga hasil analisis yang diperoleh menjadi
valid.
D. OPERASIONAL
1. PERSIAPAN
No
Prosedur Kerja
1. Kenakan baju kerja lab in vitro
2. Siapkan peralatan untuk cell thawing, berupa :
• Mikropipet 1 ml
• Conical tube
• Culture dish
• Stiker label/ pulpen marker
Perhatian
Jas lab, masker dan gloves
-
3.
4.
Siapkan bahan untuk cell thawing berupa media
kultur (MK) (DMEM/RPMI).
Siapkan
peralatan
pendukung
seperti Pastikan peralatan pendukung siap
sentrifugator dan mikroskop.
untuk digunakan
2. PENUMBUHAN SEL
No
Prosedur Kerja
Perhatian
1. Siapkan (alikuot) MK yang sesuai untuk sel, Lakukan pekerjaan dengan seaseptis
yaitu 3 ml MK dalam conical tube steril.
mungkin. Gunakan conical tube
yang baru
2. Ambil ampul (cryo tube) yang berisi sel dari • Pengambilan ampul dilakukan
berdasarkan prinsip First In First
tangki nitrogen cair (atau dari freezer -80°C;
berlabel “Edy” atau CCRC).
Out (FIFO) berdasarkan tanggal
cryopreservation yang tertera pada
kemasan
• Pastikan sel yang diambil sudah
benar
3. Cairkan suspensi sel dalam cryo tube pada suhu • Jangan terlalu lama, karena DMSO
kamar hingga tepat mencair.
pada ampul dapat bersifat
sitotoksik terhadap sel di
dalamnya.
• Siapkan terlebih dahulu semua
bahan, jika sudah siap baru cairkan
suspensi sel, dan tunggu sampai
mencair semua, segera lakukan
tahapan selanjutnya
4. Ambil suspensi sel dengan mikropipet 1 ml Lakukan pekerjaan dengan seaseptis
(blue tip), masukkan tetes demi tetes ke dalam mungkin
MK yang telah disiapkan (langkah 1).
5. Tutup conical tube dengan rapat. Sentrifugasi Putar knop hingga menunjukkan
dengan sentrifus untuk conical tube (tanpa angka 2
pendingin) pada 600 g selama 5 menit
6. Kembali ke dalam LAF. Semprot conical tube Pastikan alkohol sudah merata
dan tangan dengan alkohol 70 %
7. Buka conical tube, tuang supernatan MK ke Lakukan pekerjaan dengan seaseptis
dalam pembuangan.
mungkin
8. Tambahkan 4 ml MK baru, resuspensi kembali Lakukan pekerjaan dengan seaseptis
sel hingga homogen.
mungkin
9. Transfer masing-masing 2 ml suspensi sel ke Lakukan pekerjaan dengan seaseptis
mungkin
dalam 2 cell culture dish.
10. Tambahkan masing-masing 5 ml MK ke dalam Lakukan pekerjaan dengan seaseptis
dish, homogenkan.
mungkin
11. Amati kondisi sel dengan mikroskop.
Pastikan sel homogen pada seluruh
permukaan dish (tidak
menggerombol pada bagian tertentu)
12. Beri penandaan dan simpan sel ke dalam Pastikan penandaan pada dish,
inkubator CO2.
berupa nama sel, tanggal
penumbuhan dan nama CCRC.
3. SANITASI
No
Prosedur Kerja
Perhatian
1. Lakukan sanitasi peralatan sesuai dengan Lihat pada SOP Persiapan kerja Lab
kondisi tiap-tiap peralatan
In Vitro
Jika ada sesuatu dalam SOP ini tidak bisa dilakukan atau tidak sesuai dengan kenyataan
dilapangan, segera laporkan kepada Staff/Supervisor CCRC