REPLIKASI DAN REKOMBINAN DNA

REPLIKASI
KULIAH BLOK 1.1
DRA.ETI YERIZEL,MS
DNA
Blok Pembangun DNA
DNA merupakan struktur
yang dibangun oleh KH
(pentosa), fosfat dan suatu
basa dlam bentuk polimer
dan berkombinasi
membentuk helix ganda.
Blok pembangun DNA
adalah “5-carbon sugar
deoxyribose” yang saling
dihubungkan oleh ikatan
fosfodiester sehingga
terbentuk dua untai ganda
dengan tulang punggungnya
dibentuk dari ikatan KH-fosfat
pada bagian luar helix.
DNA
Kedua strand dari helix
saling merupakan
komplemeternya masingmasing. Masing-masing
strand mempunyai
“template” yang dapat
mereplikasikan
komplemennya masingmasing.
Setiap pentosa-nya juga
terikat pada salah satu dari
keempat basa yang terdiri
dari adenine (A), guanine
(G), cytosine (C) atau
thymine (T).
REPLIKASI DNA
Replikasi DNA




Proses perbanyakan DNA
DNA ------ 2 DNA
Replikasi melibatkan suatu mekanisme
yang integrated dari beberapa enzim
dan protein
DNA polimerase I, II dan III dan RNA
polimerase
Aturan Dasar Replikasi




1. Replikasi adalah: suatu proses yang
semiconcervative, satu arah
2. Replikasi mempunyai arah:
Bermula pada suatu titik pada kromosom,
berlangsung ke kedua arah, two growing
point or “fork’. Pergerakan kedua fork
menjauh menghasilkan suatu bentuk
gelembung
3. Replikasi bermula pada suatu titik pada
kromosom. Mungkin ada beberapa titik
pemula, dan beberapa fork, replikasi secara
keseluruhan berlangsung lebih cepat
Replikasi





4. Replikasi dari kedua strand berlangsung
dengan pemasukan NTP dengan arah 5’-3’
5. Pada single strand tidak berlangsung
secara simultan, dengan satu DNA
polimerase. Replikasi secara “short
discontinous pulse
Animal cell = 1000 nucleotida
Prokaryot cell = 1000 – 2000 nucleotida
6. Replikasi pada tingkat “short fragmen”
dimulai dengan terbentuknya “short Segmen”
REPLIKASI INVIVO
MEMBUTUHKAN BANYAK ENZIM
Penemu mesin PCR
POLYMERASE
CHAIN
REACTION (PCR)
PERTAMA KALI
DITEMUKAN
OLEH;
KARY MULLIS
TAHUN 1985
MENDAPAT
HADIAH NOBEL
TAHUN 1994
PCR




Suatu teknik atau metode invitro untuk
perbanyakan (replikasi) DNA secara enzimatik
tanpa menggunakan sel hidup atau
organisme
Dengan teknik PCR,maka:
Dapat menghasilkan DNA dalam jumlah besar
Waktu singkat
Replikasi dengan PCR
tahap. Denaturasi
Tahap 2.Anaeling
64°C
Tahap Perpanjangan rantai
72°
C
Akhir Siklus ke 1
Target replikasi,Siklus yg
diulang
No. of
No. Amplicon Cycles
Copies of target
2
3
4
5
6
20
30
4
8
16
32
64
1,048,576
1,073,741,
824
RT PCR