UJI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL JINTEN HITAM
advertisement
UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL JINTEN HITAM (Nigella sativa L.) TERHADAP JUMLAH TOTAL LEUKOSIT, PERSENTASE LIMFOSIT, PERSENTASE MONOSIT DAN KADAR INTERLEUKIN-1β PADA MENCIT BALB/c SKRIPSI ZIKRIAH NIM.108102000069 FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA MEI 2014 UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL JINTEN HITAM (Nigella sativa L.) TERHADAP JUMLAH TOTAL LEUKOSIT, PERSENTASE LIMFOSIT, PERSENTASE MONOSIT DAN KADAR INTERLEUKIN-1β PADA MENCIT BALB/c SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Far) ZIKRIAH NIM.108102000069 FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA MEI 2014 ii HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS iii iv v ABSTRAK Nama Program Studi Judul : Zikriah : Farmasi : Uji Imunomodulator Ekstrak Etanol Jinten Hitam (Nigella sativa L.) Terhadap Jumlah Total Leukosit, Persentase Limfosit, Persentase Monosit Dan Kadar Interleukin-1β Pada Mencit BALB/c Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek imunomodulator ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan pada mencit BALB/c dengan dosis 125 mg/kgBB, dosis 250 mg/kgBB dan dosis 500 mg/kgBB melalui parameter jumlah total leukosit, persentase limfosit, persentase monosit dan kadar interleukin 1β. Uji total leukosit, limfosit dan monosit dilakukan dengan cara mencit diberikan ekstrak etanol jinten hitam selama 14 hari berturut - turut. Sampel darah diambil pada hari ke – 7, hari ke – 14 dan hari ke – 21. Hasil penelitian menunjukkan pemberian ekstrak etanol jinten hitam pada mencit mampu mempengaruhi jumlah total leukosit dan persentase limfosit dengan hasil berbeda nyata (p<0,05) tetapi tidak mampu mempengaruhi persentase monosit. Uji interleukin 1β dilakukan dengan cara mencit diberikan ekstrak etanol jinten hitam selama 5 hari berturut – turut. Pada hari kelima, dua jam setelah pemberian ekstrak etanol jinten hitam diberikan LPS 20 μg/mencit dan 6 jam kemudian diambil sampel darah. Hasil dari penelitian menunjukkan dosis 250mg/kg mampu menekan kadar interleukin 1β yang diinduksi lipopolisakarida tetapi secara uji statistik Kruskal-Wallis menunjukkan hasil tidak berbeda nyata (P>0,05). Kata kunci: jinten hitam, leukosit, interleukin 1β vi ABSTRACT Name Nim Title : Zikriah : Pharmacy : Immunomodulatory Effect Of Black Cumin Ethanol Extract (Nigella sativa L.) in Levels Of Leukocytes , Lymphocytes, Monocytes And Interleukin - 1β In Mice BALB/c This aims of this study was to determine the immunomodulatory effects from ethanol extract of black cumin in mice. Mice are given ethanol extract of black cumin dose 125 mg/kgBB, 250 mg/kg and 500 mg/kgBB through parameters the total number of leukocytes ,percentage of lymphocytes, percentage of monocytes and levels of interleukin 1β. The test of total leukocytes, percentage of lymphocytes and percentage of monocytes was done by using mice that given ethanol extract of black cumin for 14 days. Blood samples were taken 7th day, 14th day and 21th day. The results showed that ethanol extract of black cumin in mice were able to influence the total number of leukocytes and the percentage of lymphocytes with results significant different (p<0.05) but not able influence the percentage of monocytes. Test interleukin 1β was done by using mice that given ethanol extract of black cumin for 5 consecutive days. On the fifth day, two hours after administration of ethanol extract, mice are given LPS 20 μg/mice and 6 hours later blood sample was taken. The results showed that dose 250 mg/kg suppressed levels of interleukin 1β induced by lipopolysaccharide but the statistical analisis Kruskal-Wallis were not significant different (P>0.05) Keyword: black cumin, leukocytes, interleukin 1β vii KATA PENGANTAR Puji syukur saya ucapkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, Karena atas berkat dan Rahmat-Nya, Saya dapat menyelesaikan skripsi ini. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. Saya menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan sampai penyusunan skripsi ini, sangantlah sulit bagi saya untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh Karena saya mengucapkan terima kasih kepada : 1) Ibu Farida Sulistiawati, M.Si, Apt selaku pembimbing pertama dan Ibu drh. Rr. Bhintarti S. Hastari, M.Biomed selaku pembimbing kedua, yang memiliki andil besar dalam proses penelitian dan penyelesain tugas akhir saya, semoga segala bantuan dan bimbingan ibu mendapat imbalan yang baik dari ALLAH SWT. 2) Kementrian Agama RI selaku pemberi beasiswa, sehingga penulis dapat menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 3) Bapak Prof. DR. (hc) dr. M.K Tadjudin Sp.And, selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Univeritas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 4) Bapak Drs Umar Mansur M.Sc, selaku ketua Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Univeritas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 5) Bapak dan Ibu dosen dan karyawan yang telah memberikan bimbingan dan bantuan selama saya menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas kedokteran dan Ilmu Kesehatan Univeritas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta 6) Kak Eris, drh. Dewi, mbak Rani serta staf laboratorium Farmasi yang telah membantu dan membimbing selama penelitian viii 7) Ayahanda Drs. Arsyadi dan Ummi Dra. Rusmani yang selalu berdoa, memberikan dukungan dan nasihat. Kak Zakiah dan Dik Zia Ulhaq tercinta yang selalu memberikan inpirasi dan kebahagian. 8) Teman – teman farmasi, rekan – rekan CSS MoRA 2008, dan sahabat – sahabatku Fafa, Aam, Mamyu, Vany, Eva, Aye dan Nia yang selalu menjadi sahabat disaat suka duka dimasa perkuliahan. Penulis menyadari bahwa masih ada kekurangan dalam penyusunan skripsi ini sehingga kritik dan saran dari para pembaca sangat diharapkan untuk menjadikan skripsi ini lebih baik lagi. Akhir kata, saya berharap Allah Swt membalas segala kebaikan, semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini membawa manfaat bagi pengembangan ilmu. Ciputat, Februari 2014 Penulis ix xi DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ..................................................................................................... ii HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ........................................................ iii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................................ iv HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................................... v ABSTRAK ..................................................................................................................... vi ABSTRACT .................................................................................................................. vii KATA PENGANTAR ................................................................................................... viii HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ................................. xi DAFTAR ISI ................................................................................................................. xii DAFTAR TABEL ......................................................................................................... xiv DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................. xvi BAB 1. PENDAHULUAN ............................................................................................ 1 1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1 1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 3 1.3 Hipotesis........................................................................................................ 3 1.4 Tujuan Penulisan ........................................................................................... 3 1.5 Manfaat Penulisan ......................................................................................... 4 BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................... 5 2.1 Jinten Hitam (Nigella sativa L.) .................................................................... 5 2.2 Sistem Imun .................................................................................................. 9 2.3 Sitokin .......................................................................................................... 13 2.4 Interleukin – 1β ............................................................................................. 13 2.5 Leukosit ......................................................................................................... 15 2.6 ELISA ........................................................................................................... 18 2.7 Lipopolisakarisa ............................................................................................ 20 BAB 3. METODOLOGI PENELITIAN ..................................................................... 22 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ...................................................................... 22 3.2 Bahan............................................................................................................. 22 3.3 Alat ................................................................................................................ 22 3.4 Hewan Uji ..................................................................................................... 22 3.5 Prosedur Penelitian........................................................................................ 23 3.5.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC .......................................................... 23 3.5.2 Aklitimasi Hewan Uji ....................................................................... 23 3.5.3 Uji Peningkatan Total Leukosit, Limfosit dan Monosit................... 23 3.5.4 Uji Kadar Interleukin 1β ................................................................... 23 3.5.5 Pengambilan Darah .......................................................................... 25 3.5.6 Perhitungan Total Leukosit ............................................................... 25 3.5.7 Analisa Persentase Monosit dan Persentase Limfosit ....................... 26 3.5.8 Pengukuran Kadar IL-1β ................................................................... 26 3.5.9 Analisa Statistik ................................................................................ 27 BAB 4. PEMBAHASAN ............................................................................................. 28 4.1 Leukosit ....................................................................................................... 27 4.2 Monosit ........................................................................................................ 32 4.3 Limfosit ....................................................................................................... 35 xii 4.4 Interleukin 1β ............................................................................................... 36 BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 40 DAFTAR PUSTAKA .................................................................................................... 41 xiii DAFTAR TABEL 2.1 Kandungan kimia biji Nigella sativa L secara umum ......................................... 2.2 Kandungan kimia minyak Nigella sativa L ........................................................ 2.3 Kandungan biji nutrisi biji Nigella sativa L per 100 gram ................................ 3.1 Data perlakuan hewan uji untuk uji total leukosit, limfosit dan monosit........... 3.2 Data Perlakuan untuk uji kadar interleukin IL - 1β ............................................ 5.1 Hasil Jumlah Total Leukosit (per mm3) .............................................................. 5.2 Hasil Persentase Monosit (per mm3) ................................................................... 5.3 Hasil Persentase Limfosit (per mm3) .................................................................. 5.4 Rata – Rata Kadar IL-1β .................................................................................... xiv 8 9 9 22 23 27 30 33 36 DAFTAR GAMBAR 2.1 Nigella sativa L ................................................................................................. 2.2 Struktur kimia kandungan aktif minyak Nigella sativa L ................................... 2.3 Struktur Thymoquinone ...................................................................................... 2.4 Gambaran umum sistem imun ............................................................................ 3.1 Skema pembacaan diferensiasi leukosit .............................................................. 5.1 Perbandingan nilai total leukosit setiap kelompok.............................................. 5.2 Perbandingan nilai differensial monosit setiap kelompok .................................. 5.3 Perbandingan nilai differensial limfosit setiap kelompok................................... 5.4 Perbandingan kadar Interleukin 1β ..................................................................... xv 6 7 11 15 25 29 31 33 35 DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Surat Keterangan Hewan Uji ...................................................................... Lampiran 2. Alat dan Bahan yang digunakan ................................................................. Lampiran 3. Alur Penelitian ............................................................................................ Lampiran 4. Pembuatan Larutan Uji ............................................................................... Lampiran 5.Kegiatan Penelitian ...................................................................................... Lampiran 6. Gambar Pemeriksaan Total Leukosit, Monosit dan Limfosit..................... Lampiran 7. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 7 ............. Lampiran 8. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 14 ........... Lampiran 9. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit dan Limfosit Hari 2 .............. Lampiran 10. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 7 ............................................. Lampiran 11. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 7 .......... Lampiran 12. Hasil Uji Uji Mann-Whitney Data total leukosit hari 7 ............................ Lampiran 13. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 14 ........................................... Lampiran 14. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 14 ................................... Lampiran 15. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 14 ........ Lampiran 16. Hasil Uji Mann-Whitney Data Total Leukosit hari 14 ............................. Lampiran 17. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 21 ........................................... Lampiran 18. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 21 ................................. Lampiran 19. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Hari 21 ...................................... Lampiran 20. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit hari 21 ....................................... Lampiran 21. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 7 ....................................................... Lampiran 22. Hasil Uji Homogenitas Data monosit hari 7 ........................................... Lampiran 23. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 7 ................................................... Lampiran 24. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 14 ..................................................... Lampiran 25. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 14 ........................................ Lampiran 26. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 14 ................................................. Lampiran 27. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 21 ..................................................... Lampiran 28. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 21 ....................................... Lampiran 29. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 21 ................................................. Lampiran 30. Hasil Uji Post Hoc Data Monosit Hari 21 ................................................ Lampiran 31. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 7 ....................................................... Lampiran 32. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 7 ........................................... Lampiran 33. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 7 .................. Lampiran 34. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 7 ......................................... Lampiran 35. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 14 ..................................................... Lampiran 36. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 14 .......................................... Lampiran 37. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 14 ................ Lampiran 38. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 14 ....................................... Lampiran 39. Hasil Uji Normalitas Data Limfosit hari 21 ............................................. Lampiran 40. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 21 ......................................... Lampiran 41. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit hari 21 ................................................. Lampiran 42. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit hari 21................................................. Lampiran 43. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Kontrol ........................................... Lampiran 44. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Total Leukosit Kontrol ............ Lampiran 45. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Rendah ................................. Lampiran 46. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Rendah ..................... Lampiran 47. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Rendah ............................ xvi 48 49 51 52 54 55 56 63 70 71 72 73 74 75 76 71 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 95 96 97 98 102 103 104 105 106 107 108 109 110 Lampiran 48. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Sedang ................................. Lampiran 49. Hasil Uji Homogenitas Data total Leukosit Dosis Sedang ....................... Lampiran 50. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Sedang ............................ Lampiran 51. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit Dosis Sedang ............................ Lampiran 52. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Tinggi................................... Lampiran 53. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Tinggi ..................... Lampiran 54. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Tinggi ............................. Lampiran 55. Hasil Uji Normalitas Monosit Kontrol ..................................................... Lampiran 56. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Kontrol ......................................... Lampiran 57. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Kontrol .............. Lampiran 58. Hasil Uji Mann-Whitney Data Monosit Kontrol ...................................... Lampiran 59. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis rendah ............................................ Lampiran 60. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Rendah ............................... Lampiran 61. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Monosit Dosis Rendah ............. Lampiran 62. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Sedang............................................ Lampiran 63. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Sedang ............................... Lampiran 64. Hasil Uji ANOVA Data Monosit Dosis Sedang ...................................... Lampiran 65. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Tinggi ............................................. Lampiran 66. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Tinggi................................. Lampiran 67. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Monosit Dosis Tinggi .............. Lampiran 68. Hasil Uji Normalitas Limfosit Kontrol..................................................... Lampiran 69. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Kontrol ........................................ Lampiran 70. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Limfosit Kontrol ............. Lampiran 71. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Rendah ........................................... Lampiran 72. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Rendah............................... Lampiran 73. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Rendah...................................... Lampiran 74. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Sedang ........................................... Lampiran 75. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Sedang ............................... Lampiran 76. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Sedang ...................................... Lampiran 77. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit Dosis Sedang ...................................... Lampiran 78. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Tinggi ............................................ Lampiran 79. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Tinggi ................................ Lampiran 80. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Tinggi ....................................... Lampiran 81. Uji Interleukin 1 β .................................................................................... xvii 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 BAB 1 PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Indonesia merupakan negara kepulauan yang tersusun dari 17.508 pulau beriklim tropis heterogen berada di antara dua benua dan dua samudra juga kaya akan fauna dan flora. Iklim tropis juga sangat cocok untuk pertumbuhan berbagai makhluk hidup termasuk bakteri dan agen pembawa penyakit lainnya. Adanya agen pembawa penyakit ini menyebabkan sistem imun melemah sehingga menimbulkan berbagai penyakit (Sukowati, 2010). Sistem imun merupakan sebuah mekanisme yang digunakan tubuh untuk mempertahankan keutuhan tubuh sebagai perlindungan terhadap bahaya yang ditimbulkan berbagai benda asing atau antigen. Sistem imun adalah gabungan sel, molekul dan jaringan yang berperan dalam resistensi terhadap infeksi. Sistem imun diperlukan untuk mempertahankan keutuhan tubuhnya terhadap bahaya yang dapat ditimbulkan berbagai bahan dalam lingkungan hidup (Baratawidjaja, 2009). Pemakaian obat tradisional masih banyak digunakan dalam meningkatkan kesehatan masyarakat di Indonesia meski sekarang sudah banyak orang menggunakan obat–obatan modern sebagai pelengkap tetapi obat tradisional masih mempunyai kedudukan khusus dalam masyarakat. Pengobatan secara tradisional berdasarkan pada upaya untuk mengembalikan dan memperkuat penyembuhan secara alami (Donatus, 1983). Salah satu tanaman yang dipercaya dapat meningkatkan sistem imun adalah jinten hitam (Nigella sativa L.) atau yang lebih dikenal di masyarakat dengan habbatus saudah dan merupakan spesies famili Ranunculaceae yang berasal dari mediterrania. Minyak jinten hitam mengandung thymoquinon (TQ), dithymquinon (DTQ), nigellon, thymohydroquinon (THQ), dan thymol (THY). Kandungan lainnya adalah saponin, alkaloid, lemak, karbohidrat, protein, mineral, vitamin dan sembilan asam amino essensial. (Salem et al., 2005). 1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2 Selama berabad-abad biji dari tanaman jinten hitam telah digunakan sebagai obat herbal untuk meningkatkan kesehatan dan melawan penyakit terutama di Timur tengah dan Asia Tenggara (Gilani et al., 2004). Jinten hitam dikenal sebagai salah satu herbal dalam pengobatan nabi atau thibun nabawi. Dalam kitab Shahih Bukhari Muslim, Abu Hurairah r.a. berkata bahwa dia pernah mendengar Rasullah S.A.W. bersabda sebagai berikut : Hadits riwayat Abu Hurairah Radhiyallahu’anhu: Rasulullah Shallallahu alaihi wassalam bersabda: Sesungguhnya pada jinten hitam itu terdapat obat untuk segala macam penyakit kecuali kematian. Beberapa penelitian telah dilakukan mengenai efek imunomodulator dari ekstrak etanol jinten hitam, salah satunya adalah penelitian Suhatri et al. (2010) dimana pemberian ekstrak etanol biji jinten hitam (Nigella sativa L.) tehadap mencit yang telah diberikan antigen suspensi eritrosit kambing 5% dapat meningkatkan titer antibodi dengan dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, dan 200 mg/kg BB dan dapat meningkatkan jumlah limfosit, dan monosit serta menurunkan jumlah neutrofil segmen dengan sangat signifikan (P<0,01). Pada penelitian Suhatri pemberian ekstrak etanol jinten hitam dilakukan terhadap mencit yang telah diinduksi antigen, sementara itu belum diketahui data pengujian efek imunomodulator ekstrak etanol jinten hitam terhadap mencit tanpa pemberian antigen. Pada penelitian ini dilakukan uji imunomodulator dengan pemberian ekstrak etanol jinten hitam tanpa pemberian antigen dengan melihat parameter jumlah total leukosit, persentase limfosit dan persentase monosit. Penelitian lain mengenai ekstrak etanol jinten hitam adalah penelitian Michel et al. (2010) yang menunjukkan bahwa ekstrak etanol jinten hitam dapat menurunkan kadar IL-1β pada mencit yang diinduksi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 3 kerusakan hati dengan CCl4. Interleukin-1β (IL-1β) sangat poten sebagai sitokin pro inflamasi dan terlibat pada berbagai respons melawan antigen. Pada proses inflamasi sistem imun akan melepaskan sitokin pro inflamasi yaitu : IL-1β, Il-6 dan TNF-α. (Omar, 2001). Pada penelitian ini akan dilihat pengaruh ekstrak etanol jinten hitam terhadap efek penekanan interleukin 1β pada mencit yang diinduksi dengan lipopolisakarida. Lipopolisakarida merupakan komponen dinding sel bakeri yang menstimulasi respons inflamasi dengan mengaktivasi sitokin pro inflamasi (Manu dan Kuttan, 2008). 1.2 Perumusan Masalah 1. Apakah ekstrak etanol jinten hitam dapat mempengaruhi jumlah total leukosit, persentase limfosit, persentase monosit serta kadar IL- 1β? 2. Berapa dosis ekstrak etanol jinten hitam yang dapat mempengaruhi jumlah total leukosit, persentase limfosit, persentase monosit serta kadar IL- 1β? 1.3 Hipotesis Ekstrak etanol jinten hitam dapat mempengaruhi jumlah total leukosit, persentase limfosit, persentase monosit serta kadar IL- 1β. 1.4 Tujuan Penelitian Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol jinten hitam terhadap jumlah IL- 1β pada mencit yang diberi lipopolisakarida dan mengetahui efek imunomodulator ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan pada mencit BALB/c melalui parameter total leukosit. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 4 1.5 Manfaat Penelitian 1. Mengetahui respon sistem imun mencit melalui gambaran total leukosit, persentase limfosit dan persentase monosit yang diberi ekstrak etanol jinten hitam. 2. Menyiarkan pengobatan thibun nabawi dan menjadi acuan untuk pengembangan sediaan imunostimulant dari ekstrak etanol jinten hitam. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Deskripsi Jinten Hitam (Nigella sativa L.) 2.1.1 Klasifikasi Berdasarkan ilmu taksonomi, klasifikasi tanaman jinten hitam adalah sebagai berikut (Depkes RI, 1979): Kingdom : Plantae Subkingdom : Traceabionta Divisi : Spermatophyta Subdivisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida dicotyledon Subkelas : Magnoliidae Ordo : Ranunculales Famili : Ranunculaceae Genus : Nigella Linn. Spesies : Nigella sativa. Nama lain Nigella sativa L. adalah : Kalonji (bahasa Hindi), Kezah (Hebrew), Hamushka (Rusia), Habbatus Sauda’ (Arab), Siyah daneh (Persian), Fennel Flower / Black Carraway / Nutmeg Flower / Roman Coriander / Black Onian Seed (English), atau Jinten Hitam (Indonesia). 2.1.2 Morfologi Jinten hitam merupakan tanaman herba tahunan, tegak, dengan tinggi berkisar antara 30 sampai 60 cm. Daun berbentuk lanset, linearis, ujung lancip. Daun berwarna hijau keabu-abuan, halus dan berbulu. Bunga berwana hijau pucat ketika muda dan biru terang ketika masak, kemudian menjadi biru pucat atau putih. Daun bagian bawah bertangkai dan bagian atas duduk. Daun membalut bunga kecil. Kelopak bunga ada lima, bundar telur, ujungnya agak meruncing sampai agak tumpul, pangkal mengecil membentuk sudut yang pendek dan besar. Mahkota bunga pada umumnya 5 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 6 delapan, agak memanjang, lebih kecil dari kelopak bunga, berbulu jarang dan pendek. Gambar 2.1 Jinten Hitam Bibir bunga dua, bibir bagian atas pendek, lanset, ujung memanjang berbentuk benang, ujung bibir bunga bagian bawah berbentuk tumpul. Benang sari banyak, gundul. Kepala sari jorong dan sedikit tajam, berwarna kuning. Buah berbentuk bulat telur atau agak bulat. Buah memiliki kapsul nektar yang banyak, umumnya 10 dan berbentuk seperti saku. bulat. Biji hitam, trigonal, panjang 1,5-3 mm dengan permukaan kasar dan bagian dalam berwarna putih berminyak. Biji memiliki rasa sedikit pahit dan pedas dengan tekstur renyah (Peter, 2004). 2.1.3 Budidaya, Ekologi dan penyebaran (Depkes, 1979) Tanaman ini diperbanyak dengan biji. Di Indonesia tanaman ini belum dibudidayakan secara umum. Tumbuh dari daerah Levant ke arah timur Samudra Indonesia sebagai gulma semusim. Bagian tanaman yang digunakan biji. 2.1.4 Kandungan Kimia Kandungan kimia dari biji jinten hitam minyak atsiri (0,5 – 1,6 %) meliputi nigellon, thymoquinon (TQ), thymol, carvacrol, α dan β-pipene, d-limoene, d-citronellot, thymohydroquinon, dithymoquinon, 4 - terpineol dan p-cymene. Asam lemak (35.6 – 41,6 %) yaitu asam linoleat, asam UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 7 linolenat, asam miristat, asam arakidonat, asam palmitat, asam oleat, sterol dan asam stearat. Protein (22.7%) Asam amino meliputi albumin, globulin, lisin, leusin, isoleusin, valin, glisin, alanin, fenilalanin, arginin, asparagin, cystine, asam glutamat, asam aspartat, prolin, serin, treonin, triptopan dan tirosin. Mineral seperti Fe, Na, Cu, Zn, P, dan Ca. Gambar 2.2 Struktur kimia kandungan aktif minyak jinten hitam TQ, DTQ, THY, dan THQ (Salem, 2005) Jinten hitam mengandung vitamin seperti asam askorbat, tiamin, niasin, piridoksin, asam folat dan gizi (Gilani et al., 2004). Alkaloid meliputi indazol nigellicine, isoquinolin nigellimin dan N – Oksidannya dan indozol alkaloid nigellidin (Tahir, 2006). Monosakarida dalam bentuk glukosa, ramnosa, xilosa dan arabinosa (Salem et al., 2005) Tabel 2.1 Kandungan kimia biji jinten hitam secara umum Kandungan % (w/w) Oil 3 – 35,5 Protein 16-19,9 Karbohidrat 33-34 Serat 4,5-6,5 Kadar Abu 3,7-7 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 8 Saponin 0,013 Kadar Air 5-7 Sumber : Tahir dan Bakeet, 2006 Tabel 2.2 Kandungan kimia minyak jinten hitam Kandungan % (w/w) Asam Linoleat 44,7-56 Asam Oleat 20,7-24,6 Asam Linolenat 0,6-1,8 Asam Arakidonat 2-3 Palmitoleic Acid 3 Eicosadienoic Acid 2-2.5 Asam Palmitat 12-14,3 Asam Stearat 2,7-3 Asam Miristat 0,16 Sumber: Tahir dan Bakeet, 2006) Tabel 2.3 Kandungan nutrisi biji jinten hitam per 100 gram Kandungan Biji Eropa Biji Etopia Kadar Air (g) 4 6,6 Protein (g) 22 13,8 Lemak (g) 41 32,2 Karbohidrat (g) 17 – Serat (g) 8 16,4 Kadar Abu (g) 4,5 7,5 N (g) – 2,2 Na (g) 0,5 – Kalium (g) 0,5 – Kalsium (g) 0,2 0,5 P (g) 0,5 0,6 Besi (mg) 10 17 Vitamin B1 (mg) 1,5 0,62 Niacin (mg) 6 9,5 Sumber: Peter, 2004 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 9 2.1.5 Farmakologi Berdasarkan penelitian – penelitian yang telah dilakukan jinten hitam memiliki aktivitas farmakologi sebagai berikut : a. Sistem imun Berdasarkan penelitian Suhatri et al., (2008) pemberian ekstrak etanol biji jinten hitam dapat meningkatkan titer antibodi pada mencit dengan dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, dan 200 mg/kg BB dan dapat meningkatkan jumlah limfosit dan monosit serta menurunkan jumlah neutrofil segmen dengan sangat signifikan (P<0,01), namun tidak terhadap sel eosinofil dan neutrofil batang. b. Anti histamin Minyak jinten hitam yang dapat menurunkan kadar IgE, jumlah eosinofil dan kortisol endogen di dalam plasma dan urin pada penderita asma (Salem et al., 2005) c. Anti atherogenik Jinten hitam menghasilkan efek antiatherogenic dengan menurunkan LDL secara signifikan dan meningkatkan kadar HDL kolesterol pada tikus (Buriro et al., 2011). d. Anti mikroba Hasil penelitian menunjukkan 90.3 % dari methichilin-resistant Sthaphylococcus aureus (MRSA) sensitif terhadap ekstrak jinten hitam dengan konsentrasi 5 mg/dics. Hal ini mengindikasikan jinten hitam dapat menghambat efek dari MRSA (Aslam et al., 2011). 2.2 Sistem Imun Sistem imun adalah gabungan sel, molekul, dan jaringan yang berperan dalam resistensi terhadap infeksi. Imunitas adalah resistensi terhadap penyakit terutama infeksi. Reaksi yang dikoordinasi sel – sel, molekul – molekul dan bahan lainnya terhadap mikroba disebut respons imun. Sistem imun tubuh diperlukan untuk mempertahankan keutuhannya terhadap bahaya yang dapat ditimbulkan berbagai bahan dalam lingkungan hidup (Baratawidjaja, 2009). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 10 Imunitas (kekebalan) merupakan terminologi yang digunakan untuk respons spesifik dari sistem imun. Kekebalan terhadap infeksi, baik yang terbentuk mengikuti paparan organisme penyebab maupun yang dapat dirangsang secara buatan dengan imunisasi terutama untuk resiko paparan. (Underwood, 1996). Mekanisme sistem imun diklasifikasikan menjadi sistem imun non spesifik dan sistem imun spesifik 2.2.1 Sistem imun non spesifik a. Pertahanan fisik Pertahanan fisik terdiri dari kulit yang utuh dan epitel lapisan mukus yang dalam kondisi normal tidak dapat ditembus mikrobial. Disamping itu, gerakan dapat membuang mikroorganisme, seperti pada reflek batuk, bersin dan muntah, bersama – sama dengan gerakan yang konstan seperti bergetarnya silia pada traktus respiratorius dan peristaltik usus (Underwood, 1996). b. Pertahanan biokimia Lisozim dalam keringat, ludah, air mata dan air susu ibu melindungi tubuh terhadap berbagai kuman gram positif dapat menghancurkan lapisan peptidoglikan dinding bakteri. Air susu ibu mengandung laktosidase dan asam neuraminik yang bersifat antibakteri terhadap E. coli dan asam dalam saluran pencernaan oleh enzim proteolitik dan cairan empedu dalam usus halus; dan oleh asiditas vagina. Zat kimia ini membentuk lingkungan yang tidak nyaman untuk bakteri yang bukan flora normal (Baratawidjaja, 2009). c. Pertahanan humoral Sistem imun nonspesifik menggunakan berbagai molekul larut. Molekul larut tertentu diproduksi di tempat infeksi atau cedera dan berfungsi lokal. Molekul tersebut antara lain adalah peptide antimikroba seperti defensing, katelisidin dan IFN dengan efek antiviral. Faktor larut lainnya diproduksi di tempat yang lebih jauh dan dikerahkan ke jaringan sasaran melalui sirkulasi seperti komplemen, protein fase akut, mediator UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 11 asal fosfolipid dan sitokin seperti IL-1, IL-6, dan TNF – α (Baratawidjaja, 2009). d. Pertahanan Selular Fagosit, sel NK, sel mast dan eosinofil berperan dalam sistem imun nonspesifik selular. Sel – sel sistem imun tersebut dapat ditemukan dalam sirkulasi atau jaringan. Fagositosis adalah garis pertahanan kedua tubuh terhadap agen infeksius. Pertahanan ini terdiri dari proses penelanan dan pencernaan mikroorganisme serta toksin setelah berhasil menembus tubuh (Baratawidjaja, 2009). 2.2.2 Sistem Imun Spesifik a. Humoral Pemeran utama dalam sistem sel imun spesifik humoral adalah sel B atau limfosit B. Sel B berasal dari sel asal multipoten di sumsum tulang. Sel B yang dirangsang oleh benda asingkan berpoliferasi, berdiferensiasi dan berkembang menjadi sel plasma yang memproduksi antibodi. Antibodi yang dilepaskan dapat ditemukan di dalam serum (Baratawidjaja, 2009). b. Selular Limfosit T atau sel T berperan pada sistem imun spesifik selular. Sel T berasal dari sumsum tulang tetapi proliferasi dan diferensiasinya terjadi dalam timus atas pengaruh berbagai faktor asal timus. Sel T terdiri dari beberapa subset sel dengan fungsi yang berlainan yaitu CD4+ (Th1, Th2), CD8+ ( CTL/Tc ) dan Ts ( sel Tr / Th. ) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 12 Gambar 2.4 Gambaran umum sistem imun (Baratawidjaja, 2009) Fungsi sistem imun spesifik selular adalah pertahanan terhadap bakteri yang hidup intraselular, virus, jamur, parasit dan keganasan. Sel CD4+ mengaktifkan sel Th yang selanjutnya mengaktifkan makrofag untuk menghancurkan mikroba. Sel CD8+ memusnahkan sel terinfeksi. (Baratawidjaja, 2009) 2.2.3 Imunomodulator Imunomodulator adalah obat yang diharapkan dapat mengembalikan, memperbaiki dan mengembalikan ketidakseimbangan sistem imun yang fungsinya terganggu atau menekan fungsinya yang berlebihan. Imunorestorasi dan imunostimulasi disebut imunopotensiasi atau up regulation, sedangkan imunosupresi disebut down regulation. Imunorestorasi ialah suatu cara untuk mengembalikan fungsi sistem imun yang terganggu dengan memberikan berbagai komponen sistem imun, seperti immunoglobulin dalam bentuk ISG, HSG, plasma, plasmapheresis, leukopheresis, transparansi sumsum tulang, hati dan timus (Baratawidjaja, 2009). Imunostimulan atau imunopotensiasi adalah cara memperbaiki fungsi sistem imun dengan menggunakan imunostimulan yaitu bahan yang merangsang sistem imun. Bahan yang disebut imunostimulator yaitu UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 13 hormon timus, limfokin, interferon, antibodi monoklonal, ekstrak leukosit, bahan asal bakteri dan jamur juga bahan sintetik seperti levamisol, isoprinosin, muramil dipeptida dan lain-lain. Imunosupresi merupakan suatu tindakan untuk menekan respons imun. Kegunaannya di klinik terutama pada transplantasi untuk mencegah reaksi penolakan dan pada berbagai penyakit inflamasi yang menimbulkan kerusakan atau gejala sistemik, seperti autoimun atau autoinflamasi. Bahan yang berfungsi sebagai imunosupresi seperti steroid (glukokortikoid dan kortikosteroid), cytosan, metotreksat dan lain-lain. (Baratawidjaja, 2009). 2.3 Sitokin Sitokin merupakan protein pemberi sinyal intraselular yang bekerja secara lokal dengan parakrin atau autokrin dengan terikat pada reseptor yang memiliki afinitas dan memacu reaktivitas sistem imun, baik pada imunitas spesifik atau nonspesifik. Sitokin diproduksi oleh makrofag atau monosit (monokin), limfokin (limfosit), sel – sel endotel, hepatosit, sel – sel epitel keratinosit, dan firoblas. Sitokin jika dijumpai dalam sirkulasi, biasanya terdapat dalam konsentrasi pikogram permililiter (pg/mL) (Baratawidjaja, 2009; Isselbacher et al., 1999). Sitokin berperan dalam imunitas nonspesifik dan spesifik dan mengawali, mempengaruhi dan meningkatkan respon nonspesifik. Makrofag diransang oleh IFN-γ, TNF-α, dan IL – 1 disamping juga memproduksi sitokin – sitokin tersebut. IL – 1, IL – 6, TNF-α, merupakan sitokin proinflamasi dan inflamasi spesifik (Baratawidjaja, 2009). 2.4 Interleukin – 1 (IL – 1 ) Pada tahun 1970 diketahui bahwa makrofag penyaji antigen juga melepaskan sebuah faktor telarut, interleukin-1, yang mengaktifkan limfosit – T dan menginduksi produksi sebuah faktor sekunder, interleukin-2, yang meransang proliferasi dan produksi immunoglobulin oleh limfosit – B. Pembebasan faktor – faktor ini berfungsi untuk melipatgandakan dan menunjang respon imun (Bloom, 1994). Interleukin-1 dahulu dikenal sebagai leukocyte activating factor (LAF), B cell activator factor (BAF), mononuclear cell factor (MCF), UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 14 leucocyte endogenous mediator (LEM), hemeopoetin-1 dan sejumlah nama lain, tetapi dengan ditemukan antibodi terhadap IL-1 dan rekombinan IL-1, saat ini nama IL-1 diberikan pada subtansi ini. Monosit atau makrofag yang disebut sel kupffer, sel Langerhans, sel dendritik maupun makrofag yang terdapat dalam paru – paru, limpa atau tempat lain, merupakan sumber utama IL-1. IL-1 juga dapat disintesis oleh hampir semua sel berinti yang lain, tetapi tidak oleh eritrosit. Saat ini sudah diketahui bahwa fungsi utama IL-1 adalah mediator respons inflamasi pejamu pada imunitas bawaan (Kresno, 1996) Interleukin adalah bagian dari sitokin yang disintesis oleh limfosit, monosit dan sel – sel lain yang merangsang pertumbuhan sel T, sel B dan sel hematopoiesis. Interleukin 1 sampai interleukin 18 mempunyai fungsi biologis yang variasi (Cruse dan Lewis, 2003). IL-1 adalah sitokin yang diproduksi terutama dengan aktivasi mononuklear fagosit yang berfungsi sebagai mediator inflamasi pada respon imun nonspesifik, meningkatkan proliferasi sel Th dan pertumbuhan serta diferensiasi sel B (Abbas dan Licthtman, 2004) Interleukin – 1 terdiri dari dua bentuk yaitu α dan β. Keduanya berikatan pada reseptor yang sama dan memiliki aktivitas biologi yang sama termasuk berinteraksi dengan sel endotel untuk meningkatkan pengaturan ekspresi molekul adhesi pada sel endotel, menstimulasi produksi kemokin oleh sel endotel dan makrofag juga menginduksi sintesis protein fase akut oleh hepar. IL α dan β mempunyai kesamaan berat molekul umum kurang lebih 17,5 kDa dan mempunyai 26 % asam amino yang homolog (Abbas dan Licthtman, 2004; Isselbacher et al., 1999) Fungsi utama IL – 1 adalah sama dengan TNF, yaitu mediator terhadap infeksi dan ransangan lain. IL – 1 bersama TNF berperan pada imunitas nonspesifik. Sumber utama IL – 1 yaitu fagosit mononuklear yang diaktifkan, makrofag, sel – sel endotel, sel dendritik, sel – sel Langerhans. Efek biologis IL – 1 sama seperti TNF yang tergantung dari jumlah yang diproduksi (Baratawidjaja, 2009; Johnson et al., 2011). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 15 Dampak biologis IL-1 bergantung pada jumlah sitokin yang dilepaskan pada kadar rendah fungsi utamanya adalah sebagai mediator inflamasi lokal, misalnya berinteraksi dengan sel endotel untuk meningkatkan koagulasi dan meningkatkan ekspresi molekul permukaan yang membantu adhesi leukosit. Dalam kadar tinggi IL-1 masuk ke dalam sirkulasi dan melancarkan efek endokrin, misalnya menyebabkan demam, menginduksi sintesis protein fase akut oleh hepar dan mengawali kakeksia. IL-1 berfungsi meningkatkan pertumbuhan dan diferensiasi limfosit, disamping itu IL-1 merangsang secara nonspesifik ekspresi berbagai reseptor antigen pada permukaan sel sehingga secara tidak langsung meningkatkan respons imun spesifik. (Kresno, 1996) Daya kerja imunologik utama interleukin – 1 yaitu meransang reseptor IL-2 muncul dalam sel – sel T, meningkatkan pengaktifan sel B, menginduksi timbulnya demam, reaktan fase akut dan IL – 6. Meningkatkan resistensi nonspesifik, (Johnson et al., 2011). Interleukin-1β sangat poten sebagai sitokin pro inflamasi dan terlibat pada berbagai respons melawan antigen. Pada proses inflamasi sistem imun akan melepaskan sitokin pro inflamasi yaitu : IL-1β, Il-6 dan TNF-α. (Omar, 2001). IL-1β dikeluarkan oleh peripheral blood mononuklear jika terkena agen inflamasi. Ketika dikeluarkan ke dalam darah IL-1β memiliki aktivitas yang luas dan berperan dalam penyakit inflamasi (Haq et al., 1999). IL-1β, tetapi tidak IL-1α berpotensi ssebagai aktivator respons imun humoral dan dan IL-Ra mempunyai peran penting dalam mengatur fungsi sistem imun (Nakae et al., 2001). 2.5 Leukosit Leukosit merupakan sel darah yang memiliki nukleus dan tidak bewarna dalam keadaan segar. Bentuknya bulat dalam peredaran darah, tetapi berupa sel ameboid pleimorfik dalam jaringan, atau pada substrat padat invivo. Leukosit terdiri dari leukosit leukosit granular atau leukosit nongranular. Leukosit granular terdiri dari eosinofil, basofil, dan neutrofil. Leukosit bergranular terdiri dari dari limfosit dan monosit. Jumlah leukosit dalam sirkulasi berkisar antara 5000 sampai 9000 permilimeter kubik UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 16 darah, tetapi jumlah ini bervariasi sesuai umur, bahkan pada waktu yang berbeda sepanjang hari. Jumlah leukosit dalam jaringan dan organ sangat besar tetapi tidak dapat dihitung. Variasi kecil jumlah leukosit tidak mempunyai arti klinik, tetapi adanya infeksi dalam tubuh, meningkatkan leukosit sampai 20.000 bahkan 40.000 permilimeter kubik darah. Jumlah relatif berbagai jenis leukosit, disebut hitung jenis leukosit, biasanya cukup konstan: neutrofil 55-60%; eosinofil 1-3%; basofil 0.07%; limfosit 22-33% dan monosit 3-7% . (Bloom, 1994). Leukosit berfungsi untuk melindungi tubuh terhadap invasi benda asing, termasuk bakteri dan virus. Sebagian besar aktivitas leukosit berlangsung dalam jaringan dan bukan dalam aliran darah. Pelepasan zat kimia oleh jaringan yang rusak menyebabkan leukosit bergerak mendekati (kemotaksis positif) atau menjauhi (kemotaksis negatif) sumber zat. Semua lekosit adalah fagositik, tetapi kemampuan ini lebih berkembang pada neutrofil dan monosit. Setelah diproduksi di sumsum tulang, leukosit bertahan kurang lebih satu hari dalam sirkulasi sebelum masuk ke jaringan. Sel ini tetap dalam jaringan selama beberapa hari, beberapa minggu, atau beberapa bulan, bergantung jenis leukositnya. Infeksi atau kerusakan jaringan mengakibatkan peningkatan jumlah leukosit. (Sloane, 1995) 2.6 Limfosit Sebanyak 20% dari semua leukosit dalam sirkulasi darah orang dewasa merupakan limfosit yang terdiri dari sel B dan sel T yang merupakan kunci pengontrol sitem imun. Biasanya sel limfosit hanya memberikan reaksi terhadap zat asing tetapi tidak terhadap selnya sendiri (Baratawidjaja, 2009). Struktur limfosit mengandung nukleus bulat bewarna biru gelap yang berkeliling lapisan tipis sitoplasma. Ukurannya bervariasi; ukuran terkecil 5 μm sampai 8 μm; ukuran terbesar 15 μm. Limfosit berasal dari sel – sel batang sumsum tulang merah, tetapi melanjutkan differensiasi dan proliferasinya dalam organ lain. (Sloane, 1995) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 17 Tabel 2.4 Limfosit yang berperan dalam respon imun spesifik (Baratawidjaja, 2009) Jenis Sel Fungsi Sel Produk Fungsi Produk B Produksi antibodi Antibodi Presentasi antigen Neutralisasi Opsonisasi Lisis sel Th2 Meningkatkan Sitokin IL-3, IL- Membantu sel B prosuksi antibodi oleh 4, IL-5, IL-10, dan Tc sel B IL-13 Meningkatkan Tc Aktif Th1 dan IL-2, IFN γ Mengawali meningkatkan TNF , Mediator inflamasi inflamasi Tr Menurukan produksi Faktor antibodi sel B Menurunkan suppressor sel T Lisis Th akibatnya mensupress aktif Tc Suppress B dan Tc juga sel target IFN γ antigenic Meningkatkan ekspresi MHC Aktivasi sel NK Perforin Merusak Membran sel target NKT Pemusnahan sel IL-4, IFN γ sasaran 2.7 Monosit Monosit mencapai 3 % sampai 8 % dari jumlah total leukosit dan merupakan sel darah terbesar, diameternya rata – rata berukuran 12 μm – 18 μm. Nukleus besar berbentuk telur atau seperti ginjal, yang dikelilingi sitoplasma bewarna biru keabuan pucat. Monosit sangat aktif. Sel ini siap UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 18 bermigrasi melalui pembuluh darah. Jika monosit telah meninggalkan aliran darah, maka sel ini menjadi histiosit jaringan (makrofag tetap) (Sloane, 1995). Monosit berperan sebagai APC, mengenal, menyerang mikroba, dan sel kanker dan juga memproduksi sitokin, mengerahkan pertahanan sebagai respon terhadap infeksi (Baratawidjaja, 2009). 2.8 Enzyme Linked Immunosorbent Assay ( Elisa ) Elisa adalah pemeriksaan yang praktis dan sensitif untuk menemukan antibodi. Antigen mula – mula diikat benda padat kemudian ditambah antibodi yang dicari. Setelah itu ditambahkan lagi antigen yang bertanda enzim, seperti peroksidase dan fosfatase. Akhirnya ditambahkan subtrat kromogen yang bila bereaksi dengan enzim dapat menimbulkan warna. Perubahan warna yang terjadi sesuai dengan jumlah enzim yang diikat dan sesuai pula dengan kadar antibodi yang dicari (Baratawidjaja, 2009; Johnson et al., 2011). Prinsip dasar teknik ELISA adalah interaksi total antara antigen dan antibodi yang teradsorpsi secara pasif pada permukaan fase padat (permukaan microwellplate) yang terbuat dari plastik (polipropilen atau polietilen). Hasil interaksi yang berupa lapisan monomolekuler tersebut kemudian direaksikan dengan enzim peroksidase yang telah dikonyugasikan dengan avidin. Enzim peroksidase yang terikat kemudian akan bereaksi dengan larutan 2,2’-azino-bis-3ethylbenzothiozoline-6sulfonic acid (ABTS) yang ditambahkan dan membentuk warna hijau. Warna hijau ini intensitasnya dapat diukur secara visual atau dengan alat spektrofotometer. Makin banyak antigen yang berinteraksi dengan antibodi makin tinggi intensitas warnanya. (Sumartini et al., 2002) Interaksi antara antigen dan antibodi dapat terjadi karena ikatan hidrogen antara gugus – gugus bermuatan yang terdapat pada keduanya, selanjutnya terjadi ikatan elektrostatik yang timbul karena muatan listrik yang muncul kemudian karena interaksi keduanya. Ikatan Van Der Waals juga timbul karena muatan listrik yang muncul kemudian karena interaksi keduanya. Ikatan Van Der Waals juga timbul karena muatan positif dan negatif antara kelompok gugus pada antigen dan antibodi. Hasil interaksi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 19 antigen dan antibodi ini akhirnya akan menghasilkan molekul air. Jadi agar interaksi terjadi maksimum maka molekul air dalam microwellplate sedapat mungkin dihindarkan keberadaannya. Setiap tahapan reaksi tersebut diatas selesai maka selalu diikuti dengan pencucian larutan garam jadi kelebihan pereaksi antibodi atau antigen akan terbuang bersama larutan garam. Oleh karena itu bila tidak ada antigen dan antibodi yang berinteraksi secara spesifik, reaksi selanjutnya takkan terjadi dan warna yang diharapkan timbul tak ada (Sumartini et al., 2002) 1. Direct ELISA Antigen ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat selama proses inkubasi. Setelah diikunbasi, antigen yang tidak terikat pada fase padat dicuci. Antibodi yang spesifik terhadap antigen yang telah dilabel dengan enzim (konjugasi) ditambahkan dan diinkubasi. Konjugat akan berikatan dengan antigen pada fase padat. Selanjutnya konjugat yang tidak terikat dicuci. Kemudian ditambahkan substrat atau kromogen. Sehingga menghasilkan warna melalui proses katalisis enzim. Perubahan warna yang terjadi diukur menggunakan spektrofotometer (Crowther, 2001). 2. Indirect ELISA Antigen ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat selama proses inkubasi. Antibodi ditambahkan dan diinkubasi kemudian antibodi akan mengikat antigen spesifik pada fase padat. Antibodi yang tidak terikat dengan antigen fase padat dicuci. Kemudian Antibodi yang telah dilabel enzim (konjugat) berupa antibodi antispesies ditambahkan, sehingga semua antibodi yang terikat dengan antigen akan diikat selanjutnya diinkubasi dan konjugat yang berlebih dicuci. Substrat ditambahkan untuk mengikat konjugat dan setelah terjadi perubahan warna, reaksi dihentikan. Kemudian warna yang terjadi dibaca pada spektrofometer (Crowther, 2001) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 20 3. Direct Sandwich ELISA Antibodi ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat selama proses inkubasi Antibodi yang bebas dicuci. Kemudian antigen ditambahkan lalu diinkubasi sehingga antigen berikatan dengan antibodi selama proses inkubasi dan antigen yang tidak terikat dicuci. Kemudian ditambahkan konjugat antibodi yang sama atau berbeda dengan antibodi pada fase padat. Setelah ditambahkan konjugat diinkubasi, konjugat bebas dicuci. Penambahan substrat sampai terjadi perubahan warna kemudian reaksi dihentikan dan diukur kuantitas warnanya menggunakan spektrofotometer (Crowther, 2001). 4. Indirect Sandwich Antibodi ditambahkan sehingga teradsorbsi pada fase padat selama proses inkubasi. Antibodi yang bebas dicuci selanjutnya ditambahkan antigen. Antigen akan berikatan dengan antibodi pada fase padat selama proses inkubasi lalu antigen yang tidak terikat dicuci. Selanjutnya ditambahkan antibodi (Ab2) yang berbeda dengan antibodi pada fase padat. Kemudian diinkubasi, Ab2 bebas dicuci. Konjugat antispesies ditambahkan yang dapat mengikat serum yang berasal dari spesies yang sama dengan Ab2 tetapi tidak dapat bereaksi dengan antibodi fase padat. Lalu ditambahkan substrat sampai terjadi perubahan warna kemudian reaksi dihentikan dan diukur dengan spektrofotometer (Crowther, 2001). 2.9 Lipopolisakarida Lipolisakarida merupakan salah satu lapisan dinding sel bakteri Gram negatif yang tersusun atas dua lapisan lipid, polisakarida, dan protein. Lipid dan polisakarida terikat pada lapisan luar dari membrane terluar membentuk struktur lipopolisakarida. Polisakarida dalam LPS tersusun atas dua bagian, yaitu polisakarida inti dan O-polisakarida. Bagian lipid dalam lipopolisakarida disebut dengan lipid A. Bagian lipid A tersebut merupakan bagian yang toksik dalam lipopolisakarida (Madigan, 2003). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 21 Lipopolisakarida merupakan komponen dinding sel bakeri yang menstimulasi respons inflamasi dengan mengaktivasi sitokin pro inflamasi (Manu dan Kuttan, 2008) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Tempat dan Waktu Peneltian Laboratorium Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Proses penelitian dimulai sejak bulan September hingga Desember 2013. 3.2 Bahan Bahan – bahan yang digunakan dalam penelitian adalah Na CMC 0,5%, kit ELISA untuk IL-1β (Boster Biological Technology), ekstrak etanol jinten hitam (Arifiani AA. 2012), lipopolisakarida (Sigma-Aldrich), larutan Giemsa, larutan Turk, minyak emersi, methanol, dan aquades. 3.3 Alat Alat – alat yang digunakan yaitu timbangan hewan, kandang mencit beserta tempat makan dan minum, sonde, sentrifugator (Hettich Zentrifugen), timbangan, alat gelas, mikropipet, tabung EDTA 1ml, tabung Eppendorf, hemositometer yang terdiri dari pipet pengencer dan kamar hitung Neubauer, gelas objek, cover glass, kotak preparat, dan mikroskop cahaya. 3.4 Hewan Uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit galur BALB/c berumur 6 – 8 minggu dengan berat badan 20 – 23 gram yang diperoleh dari UGM. Diberikan makan berupa berupa butiran (pellet) dan minuman ad libitum. 22 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 23 3.5 Prosedur Penelitian 3.5.1 Pembuatan Supensi Na-CMC 0.5 % Lima ratus miligram Na-CMC ditimbang, kemudian dilarutkan dalam sebagian akuades hangat, diaduk dan ditambah akuades sambil terus diaduk memakai batang pengaduk. Setelah larut semua sisa akuades ditambahkan sampai didapatkan volume larutan Na-CMC 100 ml dengan memakai labu takar 100 ml. 3.5.2 Aklitimasi Hewan Uji Hewan uji terlebih dahulu diadaptasikan (aklitimasi) terhadap lingkungan selama 2 minggu. Hewan uji terdiri dari mencit galur BALB/c setiap kelompok terdiri dari 5 hewan uji. Menurut WHO minimal hewan uji untuk satu kelompok uji adalah 5 ekor. 3.5.3 Uji Peningkatan Total Leukosit, Persentase Limfosit dan Monosit Mencit BALB/c sebanyak 24 ekor dibagi dalam 4 kelompok perlakuan berdasarkan dosis ektrak etanol jinten hitam yang diberikan. Pemberian ekstrak diberikan selama 14 hari berturut secara oral. Setiap hari ke – 7, hari ke 14 dan hari ke 21. Darah diambil melalui pleksus retro orbital mata mencit. Tabel 3.1. Kelompok untuk uji total leukosit, limfosit dan monosit No Kelompok Perlakuan Pengambilan Darah 1. Kontrol diberikan Na-CMC 0.5% 0.5 Hari ke - 7, ke ml/kgBB selama 14 hari berturut 14, dan Ke 21 - turut 2. Dosis diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke - 7, ke Rendah hitam 125 mg/kgBB selama 14 14, dan Ke 21 hari berturut – turut 3. Dosis diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke - 7, ke Sedang hitam 250 mg/kgBB selama 14 14, dan Ke 21 hari berturut – turut 4. Dosis diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke - 7, ke Tinggi hitam 500 mg/kgBB selama 14 14, dan Ke 21 hari berturut – turut UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 24 3.5.4 Uji Kadar Interleukin 1β (IL-1β) Pada uji kadar IL-1β dilakukan pemberian ekstrak etanol jinten hitam secara oral dengan dosis 125 mg/kgBB, 250 mg/kgBB dan 500 mg/kgBB. Selanjutnya pada hari ke – 5, dua jam setelah pemberian ekstrak etanol jinten hitam diberikan LPS 20 μg/mencit. Darah mencit diambil 6 jam kemudian, melalui pleksus retro orbital mata mencit (Manu dan Kuttan, 2008). Tabel 3.2 Data Perlakuan untuk uji kadar IL - 1β No Kelompok Perlakuan Pengambilan darah 1. Kontrol diberikan Na-CMC 0.5% 0.5 Hari ke – 5 ml/kgBB selama 5 hari berturut turut 2. LPS Diberikan LPS 20 μg/mencit pada Hari ke – 5 hari ke 5 3. Ekstrak diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke – 5 Etanol Dosis hitam 125 mg/kgBB selama 5 hari Rendah berturut - turut. Hari ke – 5 dua jam setelah pemberian ekstrak, diberikan LPS 20 μg/mencit 4. Ekstrak diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke – 5 Etanol Dosis hitam 250 mg/kgBB selama 5 hari Sedang berturut - turut. Hari ke – 5 dua jam setelah pemberian ekstrak, diberikan LPS 20 μg/mencit 5. Ekstrak diberikan ekstrak etanol jinten Hari ke – 5 Etanol Dosis hitam 500 mg/kgBB selama 5 hari Tinggi berturut - turut. Hari ke – 5 dua jam setelah pemberian ekstrak, diberikan LPS 20 μg/mencit UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 25 3.5.5 Pengambilan darah Darah diambil dari setiap hewan uji melalui pleksus retro orbital mata mencit. Sampel darah untuk uji total leukosit dimasukkan ke dalam tabung vacutainer EDTA dan sampel darah untuk uji IL-1β dimasukkan ke tabung vacutainer EDTA yang berbeda. Darah untuk uji IL-1β disentrifus pada 3000 rpm selama 20 menit, plasma yang muncul dimasukkan ke dalam tabung Eppendorf disimpan pada suhu – 20oC sampai waktu pemeriksaan IL-1β dengan ELISA. 3.5.6 Perhitungan Total Leukosit Penghitungan jumlah leukosit total dilakukan menggunakan hemositometer dengan pengenceran 1:20. Untuk memperoleh pengenceran 1:20 sampel darah dihomogenkan, kemudian dihisap dengan menggunakan pipet leukosit dan aspirator sampai tera 0,5. Selanjutnya, larutan Turk dihisap hingga tera 11, aspirator dicabut kemudian dihomogenkan secara manual, yaitu dengan cara memutar membentuk angka 8. Selanjutnya sampel dibuang sekitar 2-3 tetes, setelah itu dimasukkan ke dalam kamar hitung Neubauer dan ditutup dengan gelas penutup kemudian diperiksa dengan mikroskop perbesaran 40 x 10. Leukosit dihitung pada empat kotak besar di tiap sudut tiap sisi kamar hitung. Sel yang menempel di garis pemisah sebelah kiri dan di garis atas kotak persegi ikut dihitung, sel yang menempel di kedua sisi kotak lain tidak ikut dihitung (Anandika, 2011). Karena kedalaman kamar kamar hitung Neubauer adalah 0,1 mm dan luas adalah 4 mm2 (terdiri dari 4 kamar masing-masing dengan luas 1 mm2 jadi total 4 mm2). Maka volume kotak adalah 0,4 mm3(Kulisic, 2006) N x faktor pengenceran Volume Kotak Nx20 = 0,4 𝑚𝑚𝑚𝑚3 Jumlah total leukosit per mm3 = = 50 N N : Jumlah total leukosit dari 4 kamar hitung UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 26 3.5.7 Analisa Persentase Monosit dan Limfosit Sampel darah segar diteteskan pada gelas objek dan dibuat preparat apus. Setelah dibiarkan mengering di udara, preparat apus kemudian difiksasi dengan methanol selam 5 menit. Preparat kemudian diwarnai dengan pewarna Giemsa dengan pengenceran 1 : 9 selama 30 menit.. Selanjutnya preparat dicuci menggunaan aquades dan dibiarkan mengering. Setelah kering preparat diperiksa dibawah mikroskop dengan pembesaran 100 x dengan dibubuhi minyak emersi pada permukaan sediaan apus tersebut. Pertama – tama dihitung sampai 100 sel leukosit, kemudian dari 100 sel leukosit dihitung jumlah monosit dan limfosit. Lalu ditentukan persentase monosit dan limfosit dari total 100 leukosit tersebut dengan rumus sebagai berikut (Handajani dan Dharmawan , 2009). % Limfosit = % Monosit = ∑ 𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙 100 ∑ 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 100 𝑥𝑥 100 % 𝑥𝑥 100 % Gambar 4.1 Skema pembacaan diferensiasi leukosit 3.5.8 Pengukuran kadar IL-1β dengan ELISA Sebanyak 0.1 ml sampel, kontrol dan standar dimasukkan ke dalam microplate yang telah dilapisi anti - mouse IL - 1β antibodi kemudian diinkubasi selama 90 menit pada suhu 370C lalu membuang isi plate dan keringkan menunggunakan handuk, Tambahkan 0.1 ml biotinylated anti mouse IL - 1β antibody inkubasi pada suhu 370C selama 60 menit lalu mencuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 3 kali. Tambahkan 0,1ml larutan ABC diinkubasi pada suhu 370C selama 30 menit lalu mencuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 5 kali. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 27 Menambahkan 90 ul dengan TMB Color developing agen dan didiamkan selama 30 menit pada suhu ruangan di tempat yang gelap. Ditambahkan 0.1 ml TMB stop solution. Dibaca optical density absorbasi dengan ELISA reader yang diatur pada 450 nm. 3.5.9 Analisa Statistik Analisa jumlah total leukosit, presentase monosit, presentase limfosit dan kadar IL-1β menggunakan ANOVA (Analysis Of Variance) dengan menggunakan program SPSS 17,0 for windows taraf kepercayaan sebesar 95% dengan (α= 0,05). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Leukosit Hasil dari perhitungan jumlah total leukosit hari 7, hari 14 dan hari 21 pada mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah (125 mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500 mg/kgBB) didapatkan hasil sebagai berikut : Tabel 5.1 Hasil Jumlah Total Leukosit (per mm3) Kelompok Mencit Rata – rata jumlah total leukosit ( x103 per mm3) Hari ke – 7 Hari Ke – 14 Hari ke 21 Kontrol 4,3 ± 0,8 5,0 ± 1,9 4,8 ± 0,9 Dosis Rendah 6,3 ± 2,5 8,3 ± 1,4 9,1 ± 2,2 Dosis Sedang 7,6 ± 0,8 12,7 ± 1,0 11,2 ±2,2 Dosis Tinggi 11,1 ± 2,1 11,0 ± 3,5 11,3 ±3,5 Hasil penelitian menunjukkan jumlah total leukosit kelompok kontrol hari 7, 14 dan 21 berada dalam kisaran normal. Kisaran normal jumlah total leukosit pada mencit BALB/c adalah 4 - 12 x 103 per mm3 (Arrington, 1972). Jumlah total leukosit hari 7 kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan kelompok kontrol. Jumlah total leukosit meningkat seiring meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan. Kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis tinggi memiliki jumlah total leukosit paling tinggi. Jumlah total leukosit hari 7 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa jumlah total leukosit tidak terdistribusi normal (p>0,05) kemudian dilakukan tranformasi agar didapatkan data yang normal tetapi hasil yang diperoleh jumlah total leukosit tetap tidak terdistribusi normal. Syarat 28 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 29 normalitas tidak terpenuhi sehingga jumlah total leukosit harus dianalisis dengan statistik non parametik Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan terdapat perbedaan bermakna dengan nilai signifikan p=0,03 (p<0,05) maka dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Hasil uji Mann Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p=0,009), kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,009) dan kelompok sedang dengan kelompok dosis tinggi (p = 0,009) Jumlah total leukosit hari 14 kelompok pemberian ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan kontrol tetapi masih berada dalam kisaran normal. Jumlah total leukosit meningkat seiring meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan. Kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis sedang memiliki jumlah total leukosit paling tinggi. Jumlah total leukosit hari 14 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa jumlah total leukosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa jumlah total leukosit tidak bervariasi homogen (p<0,05) kemudian dilakukan tranformasi data agar diteroleh data yang homogen tetapi hasil yang diperoleh jumlah total leukosit tidak bervariasi homogen. Syarat homogenitas tidak terpenuhi sehingga jumlah total leukosit harus dianalisis dengan statistik non parametik Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan terdapat perbedaan bermakna dengan nilai signifikan 0,005 (p<0,05) maka dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Hasil uji Mann Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis rendah (p = 0,028), kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p = 0,009), kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,016) dan kelompok rendah dengan kelompok dosis sedang (p = 0,009). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 30 Pengambilan darah hari 21 (pemberian ekstrak dihentikan sejak hari 14 sampai hari 21), jumlah total leukosit kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan kontrol tetapi masih berada dalam kisaran normal. Jumlah total leukosit meningkat seiring meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan. Kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis tinggi memiliki jumlah total leukosit paling tinggi. Jumlah total leukosit hari 21 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa jumlah total leukosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa jumlah total leukosit bervariasi homogen (p>0,05). Data terdistribusi normal dan bervariasi sama, maka syarat uji anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova diperoleh nilai probabilitas sebesar 0,002 (P<0,05) artinya ada perbedaan signifikan rata – rata total leukosit pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi. Untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok dilanjutkan dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post Hoc kelompok yang berbeda adalah kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p = 0,04) dan kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,04). Perbandingan total leukosit antara hari 7, 14 dan 21 menggunakan uji anova menunjukkan hanya kelompok dosis sedang yang memiliki perbedaan yang signifikan antara hari 7, 14 dan 21 p= 0,00. Untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok dilanjutkan dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post Hoc kelompok yang berbeda adalah kelompok hari 7 dan hari 14. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 31 14000 12000 10000 8000 Kontrol 6000 Dosis Rendah 4000 Dosis Sedang Dosis Tinggi 2000 0 Hari ke - 7 Hari Ke - Hari ke 21 14 Gambar 5.1 Perbandingan nilai total leukosit antara Mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten hitam dan Mencit BALB/c yang tidak diberikan ekstrak etanol jinten hitam Jumlah total leukosit tertinggi terdapat pada hari ke 14 kelompok dosis sedang 12700 per rmm3. Peningkatan jumlah total leukosit masih dalam kisaran normal dan tidak mengindikasi adanya infeksi. Indikasi adanya infeksi jumlah total leukosit adalah 20,000 bahkan 40,000 permilimter kubik darah (Bloom dan Fawcett 1994). Pada hari ke 21 atau setelah pemberian ekstrak etanol jinten hitam dihentikan selama 7 hari jumlah total leukosit tetap lebih tinggi dibandingkan kelompok kontrol. Tousson et al, (2011) menyebutkan bahwa konstituen darah kelinci yang diberikan biji jinten hitam menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam persentase hemoglobin, hematokrit, rata-rata korpuskula hemoglobin dan jumlah sel darah putih. Hasil dari penelitian data jumlah total leukosit berada pada batas tinggi normal menurut Vieira (2011) jumlah total leukosit yang berada pada batas tertinggi normal menunjukkan sistem imun memproduksi jumlah total leukosit yang cukup dalam sirkulasi darah untuk melawan infeksi. Peningkatan jumlah total leukosit menunjukkan kemampuan sistem imun untuk melawan infeksi atau benda asing. Leukosit yang merupakan sistem imun alamiah (spesifik) berperan penting dalam melindungi tubuh dari serangan mikroorganisme. Penggunaan ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 32 etanol biji jinten hitam sangat efektif untuk meningkatkan sistem imun atau imunostimulan (Suhatri dan Aldi, 2010). Jumlah total leukosit pada hari 7, hari 14 dan hari 21 menunjukkan perbedaan yang signifikan (p<0,05) terhadap setiap kelompok perlakuan. 4.2 Monosit Hasil perhitungan persentase monosit hari 7, hari 14 dan hari 21 pada mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten dosis rendah (125 mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500 mg/kgBB) didapatkan hasil sebagai berikut : Tabel 5.2 Hasil Persentase Monosit (per mm3) Kelompok Mencit Kontrol Dosis Rendah Dosis Sedang Dosis Tinggi Rata – rata monosit (x 103 per mm3) Hari ke – 7 Hari Ke – 14 Hari ke 21 0,25 ± 0,14 0,30 ± 0,29 0,03 ± 0,03 0,48 ± 0,41 0,15 ± 0,13 0,22 ± 0,06 0,37 ± 0,18 0,21 ± 0,20 0,44 ± 0,33 0,19 ± 0,15 0,13 ± 0,10 0,25 ± 0,27 Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa persentase monosit kelompok kontrol pada hari 7 dan 14 berada dalam kisaran normal sedangkan pada hari 21 persentase monosit menurun. Kisaran normal persentase monosit pada mencit BALB/c adalah 60 – 600 per mm3 (Research Animal Resources, University of Minnesota). Pada hari 7 persentase monosit kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah dan dosis sedang lebih tinggi dibandingkan kontrol sedangkan kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis tinggi memiliki persentase monosit yang lebih rendah dibandingkan kontrol. Persentase monosit hari 7 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa persentase monosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 33 dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa persentase monosit bervariasi homogen (p>0,05). Data terdistribusi normal dan bervariasi sama, maka syarat uji anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova diperoleh nilai probabilitas sebesar 0.281 (P>0,05) artinya tidak ada perbedaan signifikan rata – rata persentase monosit pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi. Pada hari 14 persentase monosit kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih rendah dibandingkan kontrol. Persentase monosit hari 14 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa persentase monosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa persentase monosit bervariasi homogen (p>0,05). Data terdistribusi normal dan bervariasi sama, maka syarat uji anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova diperoleh nilai probabilitas sebesar 0.519 (P>0,05) artinya tidak ada perbedaan signifikan rata – rata persentase monosit pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi Pada hari 21 persentase monosit kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah, dosis sedang, dan dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan kontrol. Kelompok dosis sedang memiliki persentase monosit paling tinggi. Persentase monosit hari 21 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa persentase monosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa persentase monosit tidak bervariasi homogen (p>0,05) maka dilakukan tranformasi data hasil yang diperoleh persentase monosit bervariasi homogen. Data terdistribusi normal dan bervariasi sama, maka syarat uji anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova diperoleh nilai probabilitas sebesar 0,00 (P<0,05) artinya ada perbedaan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 34 signifikan rata – rata persentase monosit pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi. Untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok dilanjutkan dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post Hoc kelompok yang berbeda adalah kelompok kontrol dengan kelompok dosis rendah (p=0,002), kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p=0,00) dan kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,00) Perbandingan data monosit dari hari 7, 14 dan 21 menunjukkan hanya kelompok kontrol yang memiliki perbedaan yang signifikan dari hari 7, 14 dan 21 dengan uji Kruskal Wallis p=0,018. Untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Berdasarkan uji Mann Whitney kelompok yang berbeda adalah kelompok hari 7 dengan hari 21 dan kelompok hari 14 dan 21. 600 500 400 Kontrol Dosis Rendah 300 Dosis Sedang 200 Dosis Tinggi 100 0 Hari ke - 7 Hari Ke - 14 Hari ke 21 Gambar 5.2 Perbandingan persentase monosit antara Mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten hitam dan Mencit BALB/c yang tidak diberikan ekstrak etanol jinten hitam Monosit berperan sebagai sel yang mampu mengenal, menyerang mikroba, serta sel kanker dan juga memproduksi sitokin, mengerahkan pertahanan sebagai respon terhadap infeksi (Baratawidjaja, 2009). Persentase monosit yang tinggi didalam darah berperan penting dalam UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 35 melindungi tubuh dari serangan mikroorganisme. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah (125 mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500 mg/kgBB) tidak mampu mempengaruhi persentase monosit pada mencit BALB/c. Secara statistik persentase monosit pada hari 7, hari 14 dan hari 21 menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan persentase monosit antar kelompok perlakuan. 4.3 Limfosit Hasil dari perhitungan persentase limfosit pada hari 7, hari 14 dan hari 21 pada mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah (125 mg/kgBB), dosis sedang (250 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500 mg/kgBB) didapatkan hasil sebagai berikut : Tabel 5.3 Hasil Persentase Limfosit (per mm3) Kelompok Mencit Rata – rata limfosit ( x103 per mm3) Hari ke – 7 Hari Ke – 14 Hari ke 21 Kontrol 3,79 ± 0,84 4,21 ± 2,30 4,82 ± 0,94 Dosis Rendah 5,74 ± 2,10 8,09 ± 1,50 8,72 ± 2,23 Dosis Sedang 7,12 ± 0,67 12,34 ± 0,96 10,72 ± 2,61 Dosis Tinggi 10,92 ± 2,14 10,85 ± 3,41 10,91 ± 3,21 Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa persentase limfosit kelompok kontrol pada hari 7, 14 dan hari 21 memiliki persentase limfosit yang berada dalam kisaran normal. Kisaran normal persentase limfosit pada mencit BALB/c adalah 3.300 – 14.250 per mm3 (Research Animal Resources, University of Minnesota). Kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi pada hari 7 persentase limfosit lebih tinggi dibandingkan kontrol. Persentase limfosit meningkat seiring dengan meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan. Persentase limfosit hari 7 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 36 bahwa persentase limfosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa persentase limfosit tidak bervariasi homogen (p<0,05) kemudian dilakukan tranformasi data hasil yang diperoleh persentase limfosit tidak bervariasi homogen. Syarat homogenitas tidak terpenuhi maka persentase limfosit dianalisis dengan statistik non parametik Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan terdapat perbedaan yang bermakna dengan nilai signifikan 0,003 (p<0,05 ) maka dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Hasil uji Mann Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p = 0,009), kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,009) dan kelompok rendah dengan kelompok dosis tinggi (p = 0,016). Pada hari 14 persentase limfosit kelompok pemberian ekstrak etanol Jinten hitam dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan kontrol tetapi masih berada dalam kisaran normal. Persentase limfosit meningkat seiring dengan meningkatnya dosis ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan. Persentase limfosit paling tinggi berada pada kelompok dosis sedang. Persentase limfosit hari 14 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa persentase limfosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa persentase limfosit tidak bervariasi homogen (p<0,05) kemudian dilakukan tranformasi data hasil yang diperoleh persentase limfosit tidak bervariasi homogen. Syarat homogenitas tidak terpenuhi sehingga persentase limfosit harus dianalisis dengan statistik non parametik Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan nilai signifikan 0,005 (p<0,05) maka dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Hasil uji Mann Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis rendah (p=0,028), kelompok UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 37 kontrol dengan kelompok dosis sedang (p=0,009), kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p=0,016) dan kelompok rendah dengan kelompok dosis sedang (p=0,009). Persentase limfosit hari 21 (pemberian ekstrak dihentikan sejak hari 14 sampai hari 21), kelompok ekstrak etanol jinten hitam dosis rendah, sedang dan dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan kontrol tetapi masih berada dalam kisaran normal. Persentase limfosit meningkat seiring dengan meningkatnya ekstrak etanol jinten hitam yang diberikan. Persentase limfosit paling tinggi berada pada kelompok dosis tinggi. Persentase limfosit hari 21 dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa persentase limfosit terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji homogenitas menggunakan Levene test. Hasil uji homogenitas menunjukan bahwa persentase limfosit bervariasi homogen (p>0,05). Data terdistribusi normal dan bervariasi sama, maka syarat uji anova terpenuhi. Berdasarkan uji anova diperoleh nilai probabilitas sebesar 0,003 (P<0,05) artinya ada perbedaan signifikan rata – rata persentase limfosit pada kelompok kontrol, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi. Untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok dilanjutkan dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post Hoc kelompok yang berbeda adalah kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang (p=0,008) dan kelompok kontrol dengan kelompok dosis tinggi (p= 0,006). Perbandingan data limfosit dari hari 7, 14 dan 21 menggunakan uji anova menunjukkan hanya kelompok dosis sedang yang memiliki perbedaan yang signifikan dari hari 7, 14 dan 21 dengan p=0,01. Untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna antara masing – masing kelompok dilanjutkan dengan uji Post Hoc. Berdasarkan uji Post Hoc kelompok yang berbeda adalah kelompok hari 7 dengan hari 14. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 38 14000 12000 10000 Kontrol 8000 Dosis Rendah 6000 Dosis Sedang 4000 Dosis Tinggi 2000 0 Hari ke - 7 Hari Ke - 14 Hari ke 21 Gambar 5.3 Perbandingan persentase limfosit antara Mencit BALB/c yang diberikan ekstrak etanol jinten hitam dan Mencit BALB/c yang tidak diberikan ekstrak etanol jinten hitam Mekanisme jinten hitam terhadap sistem imun belum jelas diperkirakan dengan cara meningkatkan aktivasi limfosit dan poliferasi atau meningkatkan makrofaq dan limfosit T – helper (Banaceraf dan Unanue, 1979) Peningkatan limfosit dapat dindikasikan bahwa ekstrak etanol jinten hitam mempunyai aktivitas imunostimulator. Limfosit merupakan sel yang terlibat pada aktivitas respon imun spesifik Limfosit merupakan kunci utama sistem kekebalan yang mampu melawan agen asing. Ada dua jenis kekebalan, yaitu kekebalan humoral dan seluler. Kekebalan humoral melibatkan peranan antibodi yang bersirkulasi sebagai gamma globulin, yang dilakukan oleh limfosit B. Sedangkan kekebalan seluler adalah sistem pertahanan yang dilakukan oleh limfosit T, bertanggung jawab terhadap reaksi alergi tertunda (delayed allergy reaction) dan penolakan transplantasi jaringan asing, membentuk pertahanan utama terhadap infeksi virus, jamur dan beberapa bakteri (Ganong, 2003). Persentase limfosit pada hari 7, hari 14 dan hari 21 menunjukkan terdapat perbedaan yang signifikan (p<0,05) terhadap setiap kelompok perlakuan. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 39 4.4 Interleukin 1 β (IL -1β) Hasil pemeriksaan kadar IL-1β dengan menggunakan ELISA pada mencit yang diinduksi dengan lipolisakarida didapatkan hasil sebagai berikut : Tabel 5.4 Rata – Rata Kadar IL-1β Kelompok Rata – Rata IL-1β (ρg/ml) Kontrol 7,8 ± 0 Lipopolisakarida 78,5 ± 117,0 Dosis Rendah 123,8 ± 211,8 Dosis Sedang 70,0 ± 62,4 Dosis Tinggi 164,4 ± 202,7 Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa rata – rata kadar IL-1β pada kelompok kontrol adalah 7,8 ρg/ml. Kadar IL-1β pada kelompok LPS meningkat dibandingkan dengan kelompok kontrol. Peningkatan kadar IL1β dikarenakan pemberian lipopolisakarida. Lipopolisakarida merupakan komponen dinding sel bakteri yang menstimulasi respons inflamasi dengan mengaktivasi sitokin pro inflamasi (Manu dan Kuttan, 2008). Pada proses inflamasi sistem imun akan melepaskan sitokin pro inflamasi yaitu : IL-1β, Il-6 dan TNF-α. (Omar, 2001). IL-1β sangat poten sebagai sitokin pro inflamasi dan terlibat pada berbagai respons melawan antigen. IL-1β merupakan sitokin pro inflamasi yang akan dikeluarkan oleh peripheral blood mononuklear jika terkena agen inflamasi. Ketika dikeluarkan ke dalam darah IL-1β memiliki aktivitas yang luas dan berperan dalam penyakit inflamasi (Haq et al., 1999). Dampak biologis IL-1 bergantung pada jumlah sitokin yang dilepaskan pada kadar rendah fungsi utamanya adalah sebagai mediator inflamasi lokal, misalnya berinteraksi dengan sel endotel untuk meningkatkan koagulasi dan meningkatkan ekspresi molekul permukaan yang membantu adhesi leukosit. Dalam kadar tinggi IL-1 masuk ke dalam sirkulasi dan melancarkan efek endokrin, misalnya menyebabkan demam, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 40 menginduksi sintesis protein fase akut oleh hepar dan mengawali kaheksia (Kresno, 1996) Kadar IL-1β pada kelompok dosis rendah (125 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500 mg/kgBB) lebih tinggi dibandingkan kelompok LPS menunjukkan bahwa etanol dosis rendah (125 mg/kgBB) dan dosis tinggi (500 mg/kgBB) tidak mampu menurunkan kadar IL-1β. Kadar IL-1β pada kelompok dosis sedang lebih rendah dibandingkan dengan LPS, kelompok dosis rendah, dan kelompok dosis tinggi hal ini menunjukkan bahwa dosis sedang (250 mg/kgBB) mampu menurunkan kadar IL - 1β. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa ekstrak etanol jinten hitam mengandung timoquinon sebesar 0,2575% (Arifiani, 2012). Aziz (2011) menyatakan timoquinon mampu menurunkan IL-1β pada mencit BALB/c yang diinduksi dengan lipopolisakarida sehingga adanya kandungan IL-1β dalam ekstrak etanol jinten hitam sehingga dapat menurunkan kadar IL-1β yang diinduksi oleh lipopolisakarida. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dosis sedang (250 mg/kgBB) adalah dosis yang terbaik dalam menurunkan kadar IL-1β yang distimulasi oleh lipopolisakarida. Data IL-1β dianalisis dengan menggunakan SPSS 17. Hasil uji normalitas dengan menggunakan Saphiro-Wilk menunjukan bahwa IL-1β tidak terdistribusi normal (p>0,05). Syarat anova tidak terpenuhi sehingga jumlah total leukosit harus dianalisis dengan statistik non parametik Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan tidak terdapat perbedaan bermakna dengan nilai signifikan 0.121 (p<0,05 ). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 41 Nilai 180 160 140 120 Kontrol 100 LPS 80 Dosis Rendah + LPS 60 40 Dosis Sedang + LPS 20 Dosis Tinggi + LPS 0 Kontrol LPS Dosis Dosis Dosis Rendah + Sedang + Tinggi + LPS LPS LPS Gambar 5.6 Perbandingan kadar IL-1β antara kelompok kontrol, Kelompok lipopolisakarida dan dan kelompok yang diberikan lipopolisakarida diiringi ekstrak etanol Jinten Hitam. Hasil data IL-1β memiliki standar deviasi yang tidak memenuhi syarat sehingga tidak bisa dijadikan sebagai referensi. Hal ini dikarenakan beberapa sampel plasma darah yang diperoleh tidak terbaca oleh elisa reader akibat hemolisis. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan 1. Ekstrak etanol jinten hitam dosis 125mg/kgBB, 250 mg/kgBB dan 500 mg/ kgBB mampu mempengaruhi jumlah total leukosit dan mempengaruhi persentase limfosit 2. Ekstrak etanol jinten hitam dosis 125mg/kgBB, 250 mg/kgBB dan 500 mg/ kgBB tidak menunjukkan pengaruh terhadap persentase monosit dan kadar IL-1β 3. Ekstrak etanol jinten hitam dosis 125mg/kgBB, 250 mg/kgBB dan 500 mg/ kgBB mampu mempengaruhi jumlah total leukosit dan persentase limfosit 5.2 Saran Dilakukan uji lanjutan untuk melihat lama penurunan jumlah total leukosit setelah pemberian ekstrak etanol jinten hitam. 40 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta DAFTAR PUSTAKA Abbas, Abul K, dan Andrew H. Lichtman, 2006. Basic Immunology 2nd Edition. Elsevier – Health Sciences Div Abdulelah, H.A.A. dan Zainal-Abidin, B. A. H. 2007. In Vivo Anti-malarial Tests of Nigella sativa (Black Seed) Different Extracts. Science Publications. 2 (2): 4650 Adamu, harami, Ekanem, Bulama. 2010. Identification of Essential Oil Components from Nigella sativa Seed by Gas Chromatography-Mass Spectroscopy. Abubakar Tafawa Balewa University. 9 (10): 966-967. Aggarwal, Bharat B., Kunnumakkara, Ajaikumar B. 2009. Molecular Targets and Therapeutic Uses of Spices Modern Uses for Ancient Medicine. World Scientific. Hal. 258-260. Anington LR. 1972. Introductory Laboratory Animal Science. The Breeding, Care and Managenment of Experinmenta1 Animals. New York: The Interstate Printers & Publishers Inc. Arifiani AA. 2012. Karakterisasi Simplisia Dan Standardisasi Ekstrak Etanol Biji Jinten Hitam (Nigella sativa L.). Uin Syarif Hidayatullah Jakarta. Arora, rajesh. 2008. Herbal Radiomodulators Applications in Medicine, Homeland Defence and Space. CAB International. Hal. 76-77. Aslam M, Khan M, Ahmad S. 2011. In Vitro Bactericidal Activity Of Seeds Extract Of Nigella sativa Against Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Isolated From Tertiary Care Hospital Delhi Ncr Region India. IJRPD 90-93 Anandika, D.W. 2011. Ekstrak Bawang Putih (Allium sativum) Menurunkan Jumlah Leukosit pada Mencit Model Sepsis akibat Paparan Staphylococcus aureus. CDK 183.Vol.38:2 41 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 42 Anderson SP, Lorraine MW. 2006. Patofisiologi Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit Edisi 6. Jakarta. EGC. Azis S. 2011. Standardisasi Bahan Obat Alam. Yogyakarta : Graha Ilmu Aziz AEA, El Sayed NS, Mahran LG. 2011. Anti-Asthmatic And Anti-Allergic Effects Of Thymoquinone On Airway-Induced Hypersensitivity In Experimental Animals. Journal of Applied Pharmaceutical Science 01 (08); 2011: 109-117. Banacerrfa B, Unanue . 1979. Textbook of Immunology Bloom, Fawcet. 1994. A Textbook of Histology. Penerjemah: Jan Tambayong. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC) . 409 Boraschi, D., Villa, L., Volpini, G., BossaÁ, P., Censini, S., Ghiara, P., Scapigliat, G., Nencioni, L., Bartalini, M., and Matteucci, G. 1990. Differential activity Of Interleukin 1 Alpha And Interleukin 1 Beta In The Stimulation Of The Immune Response In Vivo. Eur J Immunol 20, 317±321. Buriro, M.A., Tayyab, M., Ditta, A. Effect Of Nigella sativa On Serum Cholesterol Of Albino Rat. Professional Med J Mar 2011;18(1): 142-146 Crowther JR. 2001. The ELISA Guidebook. New Jersey : Humana Press. Cruse JM, Lewis RE. 2003. Atlas Of Immunology. Florida: CRC Press Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta Departemen Kesehatan RI. 2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta. Hal. 174-177. Departemen Kesehatan RI. 1979. Materia Medika Indonesia Jilid III. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta. Hal. 114-117. Departemen Kesehatan RI. 1985. Tanaman Obat Indonesia Jilid I. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta. Hal. 33. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 43 Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta. Departemen Kesehatan RI. 1989. Vadmekum Bahan Obat Alam. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta. Hal. 99-100. Dinarello CA. IL-β. Department of Infectious Diseases, University of Colorado Health Sciences Center. Donatus IA. 1983, Peranan Farmakologi Dalam Pengembangan Obat Tradisional, oleh Husin, M, Risalah Simposium Penelitian Tumbuhan Obat III, Fakultas Farmasi Gajah Mada, Jogjakarta. El Bagir. N. 2010. Immune Response and Pasteurella Resistance in Rabbits Fed Diets Containing Various Amounts of Black Cumin Seeds. Department of Biochemistry, Faculty of Veterinary Medicine. 5 (2): 163-167. Farnsworth, R. Norman. 1966. Biological and Phytochemical Screening of Plants. Wiley Company Ganong WF. 2003. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Ed ke-20. Widjajakusumah HMD et al. penerjemah; Widjajakusumah HMD, editor. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Review of Medical Physiology. Gerige, Saptha., Gerige, Mahesh., 2008. GC-MS Analysis of Nigella sativa Seeds and Antimicrobial Activity of its Volatile oil. Departament of Biotecnology; Sri Krishnadeveraya University; Anantapura - A. P. – India. pp. 1189-1192. Ghonime M, Eldomany R, Abdelaziz A, Soliman H, 2011. Evaluation Of Immunomodulatory Effect Of Three Herbal Plants Growing In Egypt. Department of Microbiology and Immunology, Helwan University: Helwan. 33(1):141 – 145. Gilani Hassan A. 2004. A Review Of Medicinal Uses and Pharmacological Activities of Nigella sativa L. Departement of Biological and Biomedical Science. 7 (4): 441-451. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 44 Gartner LP, Hiatt JL, Strum JM, 2012.Essential Biologi Sel dan Histologi. Penerjemah : Fajar Arifin Gunawijaya. Pamulang: Bina Rupa Aksara Publisher Hailat N., Al-Kahil S., Alkofahi A., Lafi S., Al-Ani F., Al-Darraji A., Bataineh Z. 1998. Effects of Nigella sativa Extracts on Antibody Response of Rats Vaccinated with Brucella Vaccine. Faculty of Pharmacy Jordan University. pp. 217-221. Halawani, Eman. 2009. Antibacterial Activity of Thymoquinone and Thymohydroquinone of Nigella sativa L. and Their Interaction with Some Antibiotics. Department of Biology Faculty of Science Taif University. 3 (5-6): 148-152. Haq A, Lobo PI, Al Tufail M, Rama NR and Al-Sedairy ST. Immunmodulatory effect of Nigella sativa proteins fractionated by ion exchange chromatography. Int J Immunopharmacology 1999; 21: 288-5 Haq A, Abdullah M, Lobo PI, Al Tufail M, Khalid SA, Khabar, Kirtikant V. Sheth, and Al-Sedairy ST. Nigella sativa: effect on human lymphocytes and polymorphonuclear leukocyte phagocytic activity. Int J Immunopharmacology 30(1995): 147-155. Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB : Bandung. Hal 6-9. Helmi, A., Anggraini, N., Handayani, D., Rasyid, R., 2006, Standarisasi Ekstrak Etanol Daun Eugenia cumini Merr.,J. Sains Tek. Far., 11(2) Isselbacher, dkk. Harrison: Prinsip-Prinsip Ilmu Penyakit Dalam. Jakarta: EGC;1999:2 Junquira Carlos, Carneiro Jose, Kelly Robert O. 1998. Basic Histology. Penerjemah: Jan Tambayong. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC). 270. Johnson GA, Zielger RJ, Hawley L. 2011. Essential Mikrobiologi dan Imunologi. Tangerang Selatan: Binarupa Aksara Publisher UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 45 Kanter, Mehmet. dkk. 2005. Gastroprotective Activity Of Nigella sativa L Oil And Its Constituent, Thymoquinone Against Acute Alcohol-Induced Gastric Mucosal Injury In Rats. Elsevier. 11(42):6662-6666. Khanza, Abu. 2010. Fit and Fresh through Habbatussauda. Cicero Publishing: Jakarta. Hal. 45-56. Karmen Gama Baratawidjaja, 2009. Imunologi Dasar Edisi Delapan. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. Kresno, S.B. 1996. Imunologi: Diagnosis dan Prosedur Laboratorium, Ed. III, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Kulisic Z, Tambur Z, Maličević Z, Bakrač NA, Misic Z. 2006. White Blood Cell Differential Count In Rabbits Artificially Infected With Intestinal Coccidia. J. Protozool. Res. 16, 42-50. Luo Y, Su Y, Shen Y, Zhao L, Li K. 2004. The Levels of Plasma IL-1β, IL-6 of C57BL/6J Mice Treated with MPTP and Brain Lateralization. Department of Microbiology and Immunology, Shantou University Medical College, Shantou, China. Manu KA and Kuttan G. 2008. Immunomodulatory activities of Punarnavine, an alkaloid from Boerhaavia diffusa. Immunopharmacology and Immunotoxicology: 377–387 Madigan, M.T., J.M. Martinko, dan J. Parker. 2003. Brock Biology of Microorganisms. Pearson Education, Inc. New Jersey. Halaman 79-80. Mbarek, L. Ait. dkk. 2007. Anti-tumor Properties of Blackseed (Nigella sativa l.) Extracts. Cadi-Ayyad University. 40: 839-847 Musa, Daoud. dkk. 2004. Antitumor Activity Of An Ethanol Extract Of Nigella Sativa Seeds. Harran university. 6: 735—740. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 46 Michel CG, dkk. 2010. Phytochemical And Biological Investigation Of The Extracts Of Nigella sativa L. Seed Waste. Pharmacognosy Department, Faculty of Pharmacy, Cairo University, Egypt Nakae S, Asano M, Horai R, Iwakura Y. Interleukin-1β, bt not interleukin-1α is required for T-Cell- dependent antibody production. Immunology 2001; 104: 402409. Norsharina, ismail. dkk. 2011. Thymoquinone Rich Fraction From Nigella sativa And Thymoquinone Are Cytotoxic Towards Colon And Leukemic Carcinoma Cell Lines. Academic Journals. pp. 3359-3366. Omar EM. 2001. Analysis of Single Nucleotide in the Interleukin-1β Gene Using 5' Nuclease Assays. In: Interleukin Protocols. New Jersey : Humana Press Paarakh, Padmaa M. 2010. A comprehensive review Nigella sativa Linn. Department of Pharmacognosy, The Oxford College of Pharmacy. pp.409-429. Padhye, S., Banerjee, S. 2008. Therapeutic Potential Of Black Cumin Seeds And Beyond. Department of Pathology and Division of Internal Medicine. 6(b): 495– 510. Peter, K. V. 2004. Handbook of Herbs and Spices Volume 2. Cambridge England. Woodhead Publishing Ltd. RAR 2007. Reference values for laboratory animals: normal hematological values. Research Animal Resources, University of Minnesota. Salem Mohamed L. 2005. Immunomodulatory and therapeutic properties of the Nigella sativa L. seed. Int. J. Immunopharmacol: 1749– 1770. Santoso singgih. 2008. Panduan Lengkap Menguasai SPSS 16. PT. Elex Media Komputindo. Jakarta: 239-247, 315-319 Shoieb AM, Elgayyar M, Dudrick PS, Bell JL, Tithof PK. In Vitro Inhibition Of Growth And Induction Of Apoptosis In Cancer Cell Lines By Thymoquinone. Int J Oncol 2003; 22: 107–13. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 47 Singh, gurdip. dkk. 2005. Chemical constituents and antimicrobial and antioxidant potentials of essential oil and acetone extract of Nigella sativa seeds.Chemistry Department, DDU Gorakhpur University. 85:2297–2306. Sloane E. Anatomi dan Fisiologi. Jakarta: EGC Penerbit Buku Kedokteran. Sutrisno, BB. 1986. Analisis Jamu Edisi I. Fakultas Farmasi Universitas Pancasila: Jakarta. Hal. 6-9. Suhatri, Aldi Y. 2010. Aktifitas Ekstrak Etanol Biji Jintan Hitam (Nigella sativa Linn.) Terhadap Titer Antibodi Dan Jumlah Sel Leukosit Pada Mencit Putih Jantan. Fakultas Farmasi Universitas Andalas. Sukowati S, 2010. Masalah Vektor Demam Berdarah Dengue (DBD) dan Pengedaliannya di Indonesia. Buletin Jendela Epidemiologi. Vol 2 Sumartini S, Zuas O, Julismardiany R, Susilawati E. Aplikasi Elisa Kit Untuk Mendeteksi Adanya Daging Babi Dalam Makanan. Pusat Penelitian Kimia: Tangerang Swamy S.M.K. 1998. Cytotoxic and Immunopotentiating Effects of Ethanolic Extract of Nigella sativa L. Seeds. Department of Pharmacology, Faculty of Medicine, National University of Singapore. 70 (2000) 1–7. Tahir K, Bakeet D. 2006. A Plea for Urgent Clinical Evaluation of its Volatile Oil. Department of Pharmacology, College of Pharmacy, King Saud University Riyadh Saudi Arabia: 2 – 3 Tousson E, El-Moghazy E, El-Atrsh E. 2011.The possible effect of diets containing Nigella sativa and Thymus vulgaris on blood parameters and some organs structure in rabbit. Toxicology and Industrial Health Underwood, JCE.1996. General and Systematic Pathology Second Edition. Penerjemah: Sarjadi. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC). 190 Virella G. 1997. Introduction to Medical Immunology Fourth Edition. New York: Marcel Dekker UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 48 Vieira K. 2011. Improving Abnormal Results. University Of Florida College Of Medicine Yeheya M. 2009. A Review Therapeutic Role of Phrophetic Medicine Habbat El Baraka (Nigella sativa L.). Departement of Pharmacy. 7 (9): 1203-1208. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 48 Lampiran 1. Surat Keterangan Hewan Uji UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 49 Lampiran 2 . Alat dan Bahan yang digunakan Hemasitometer Tabung Tamo Mikroskop Setrifus UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 50 Differesial Leukosit Counter Larutan Turk Larutan Giemsa UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 51 Lampiran 3. Alur Penelitian Jinten hitam berpotensi sebagai anti inflamasi, anti oksidan, antitumor dan beberapa penelitian menunjukan bahwa jinten hitam berkhasiat sebagai imunomodulator Dilakukan peneletian untuk membandingkan dan mengetahui efektifitas ekstrak etanol Jinten hitam terhadap jumlah total leukosit mencit dan jumlah IL- 1β pada mencit yang diberikan LPS Serbuk Jinten hitam Ekstrak Etanol Aklitimasi Hewan Uji Pemberian ekstrak etanol selama 5 hari berturut -turut Pemberian ekstrak etanol selama 14 hari berturut -turut Hari ke – 5 dua jam setelah ekstrak etanol, diberikan LPS 20 μg/kgBB mencit. Enam jam kemudian diambil darah melalui retro-orbital plexus Pengambilan darah melalui retro-orbital plexus pada hari ke 7, hari ke 14 dan hari ke 21 Penentuan kadar IL-1β menggunakan ELISA Perhitungan Total Leukosit, Limfosit dan Monosit UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 52 Lampiran 4. Pembuatan Larutan Uji A. Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Untuk Uji Total Leukosit 1. Dosis Rendah 2.5 mg/20 gr BB atau 125 mg/kg BB mg Dosis � BB� × Berat Badan (kg) kg VaO Mencit ∶ Konsentrasi 0.5 ml Konsetrasi ∶ mg ×0.02kg kg Konsentrasi 125 : 5 mg/ml VaO Total : VaO x Jumlah Mencit x Lama Pemberian : 0.5 ml x 8 x 14 : 56 ml x 2 : 112 ml Jumlah ekstrak yang ditimbang : VaO Total x Konsentrasi : 112 ml X 5 mg/ml : 560 mg 2. Dosis Sedang 5 mg/ 20 grBB atau 250 mg/kgBB mg Dosis � BB� × Berat Badan (kg) kg VaO Mencit ∶ Konsentrasi 0.5 ml Konsetrasi VaO Total ∶ mg ×0.02kg kg Konsentrasi 250 : 10 mg/ml : VaO x Jumlah Mencit x Lama Pemberian : 0.5 ml x 8 x 14 : 56 ml x 2 : 112 ml Jumlah ekstrak yang ditimbang : VaO Total x Konsentrasi : 112 ml X 10 mg/ml : 1120 mg UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 53 3. Dosis Tinggi 10 mg/20 grBB atau 500 mg/kgBB mg Dosis � BB� × Berat Badan (kg) kg VaO Mencit ∶ Konsentrasi 0.5 ml Konsetrasi mg ×0.02kg kg ∶ Konsentrasi : 20 mg/ml 500 VaO Total : VaO x Jumlah Mencit x Lama Pemberian : 0.5 ml x 8 x 14 : 56 ml x 2 : 112 ml Jumlah ekstrak yang ditimbang : VaO Total x Konsentrasi : 112 ml X 20 mg/ml : 2240 mg B. Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Untuk Uji Interleukin 1 Beta 1. Dosis Rendah 2.5 mg/20 gr BB atau 125 mg/kg BB mg Dosis � BB� × Berat Badan (kg) kg VaO Mencit ∶ Konsentrasi 0.5 ml Konsetrasi ∶ mg ×0.02kg kg Konsentrasi 125 : 5 mg/ml VaO Total : VaO x Jumlah Mencit x Lama Pemberian : 0.5 ml x 5 x 14 : 12.5 x 2 : 25 ml Jumlah ekstrak yang ditimbang : VaO Total x Konsentrasi :25 ml X 5 mg/ml :125 mg 2. Dosis Sedang 5 mg/ 20 grBB atau 250 mg/kgBB mg Dosis � BB� × Berat Badan (kg) kg VaO Mencit ∶ Konsentrasi 0.5 ml ∶ mg ×0.02kg kg Konsentrasi 250 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 54 Konsetrasi : 10 mg/ml VaO Total : VaO x Jumlah Mencit x Lama Pemberian : 0.5 ml x 5 x 14 : 12.5ml x 2 : 25 ml Jumlah ekstrak yang ditimbang : VaO Total x Konsentrasi : 25 ml X 10 mg/ml : 250 mg 3. Dosis Tinggi 10 mg/20 grBB atau 500 mg/kgBB mg Dosis � BB� × Berat Badan (kg) kg VaO Mencit ∶ Konsentrasi 0.5 ml Konsetrasi ∶ mg ×0.02kg kg Konsentrasi 500 : 20 mg/ml VaO Total : VaO x Jumlah Mencit x Lama Pemberian : 0.5 ml x 5 x 14 : 12.5 :25 ml Jumlah ekstrak yang ditimbang : VaO Total x Konsentrasi : 25 ml X 20 mg/ml : 500 mg Lampiran 5.Kegiatan Penelitian Apusan Darah Fiksasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 55 Lampiran 6. Gambar Pemeriksaan Total Leukosit, Monosit dan Limfosit Monosit Limfosit Total Leukosit UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 56 Lampiran 7. Jumlah Total Leukosit, Presendase Monosit Dan Limfosit Hari 7 1. Jumlah Total Leukosit Pengambilan Hari 7 Total Lekosit Kelompok Kontrol No I II Rata - Rata 1 112 91 101.5 5075 2 59 86 72.5 3625 5 64 83 73.5 3675 7 37 110 73.5 3675 8 93 117 105 5250 85.2 4260.0 Rata - Rata Etanol Dosis Rendah 1 83 85 84 4200 2 167 131 149 7450 3 78 99 88.5 4425 4 185 217 201 10050 7 107 100 103.5 5175 125.2 6260.0 Rata - Rata Etanol Dosis Sedang 1 162 172 167 8350 2 158 182 170 8500 4 134 140 137 6850 7 144 140 142 7100 8 148 130 139 6950 151.0 7550.0 Rata - Rata Etanol Dosis Tinggi Total Leukosit (mm3) 1 211 178 194.5 9725 2 285 278 281.5 14075 3 192 150 171 8550 4 241 203 222 11100 6 250 234 242 12100 222.2 11110.0 Rata - Rata UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 57 2. Persentase Monosit dan Limfosit Hari 7 Jumlah Differensial Leukosit % Differensial Lekosit Kelompok Kontrol No Monosit Limfosit Eusonofil Basofil Monosit Limfosit Eusonofil Basofil 1 8% 86% 1% 5% 406 4364.5 50.75 253.75 2 9% 85% 1% 6% 326.25 3081.25 36.25 217.5 5 8% 89% 2% 2% 294 3270.75 73.5 73.5 7 4% 89% 2% 5% 147 3270.75 73.5 183.75 8 1% 95% 2% 2% 52.5 4987.5 105 105 6% 89% 2% 4% 245.2 3795.0 67.8 166.7 1 1% 99% 0% 0% 42 4158 0 0 2 5% 94% 0% 1% 372.5 7003 0 74.5 3 6% 94% 0% 0% 265.5 4159.5 0 0 4 11% 88% 1% 0% 1105.5 8844 100.5 0 7 12% 88% 0% 0% 621 4554 0 0 7% 93% 0% 0% 481.3 5743.7 20.1 14.9 1 4% 96% 0% 0% 334 8016 0 0 2 8% 90% 0% 2% 680 7650 0 170 4 4% 95% 1% 1% 274 6507.5 68.5 68.5 7 3% 96% 0% 1% 213 6816 0 71 8 5% 95% 0% 0% 347.5 6602.5 0 0 5% 94% 0% 1% 369.7 7118.4 13.7 61.9 1 4% 96% 0% 0% 389 9336 0 0 2 2% 98% 0% 0% 281.5 13793.5 0 0 3 2% 98% 0% 0% 171 8379 0 0 4 0% 100% 0% 0% 0 11100 0 0 6 1% 99% 0% 0% 121 11979 0 0 2% 98% 0% 0% 192.5 10917.5 0 0 Rata - Rata Etanol Dosis Rendah Rata - Rata Etanol Dosis Sedang Rata – Rata Etanol Dosis Tinggi Rata – Rata UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 58 Lampiran 8. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 14 1. Jumlah Total Leukosit Hari 14 No Total Lekosit Total Leukosit Kelompok I II 1 75 96 85.5 4275 2 162 152 157 7850 5 62 55 58.5 2925 7 137 98 117.5 5875 8 89 74 81.5 4075 100.0 5000.0 Kontrol Etanol Dosis Rendah Rata - Rata 1 149 137 143 7150 2 235 186 210.5 10525 3 144 135 139.5 6975 4 175 161 168 8400 7 173 156 164.5 8225 165.1 8255.0 Rata - Rata Etanol Dosis Sedang 1 261 230 245.5 12275 2 317 240 278.5 13925 4 254 258 256 12800 7 226 222 224 11200 8 274 253 263.5 13175 253.5 12675.0 Rata - Rata Etanol Dosis Tinggi (per mm3) Rata - Rata 1 124 148 136 6800 2 289 251 270 13500 3 182 197 189.5 9475 4 217 171 194 9700 6 323 295 309 15450 Rata - Rata 219.7 10985.0 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 59 2. Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 14 Jumlah Differensial Leukosit % Differensial Lekosit Kelompok Kontrol No Monosit Limfosit Eusonofil Basofil Monosit Limfosit 1 18% 79% 0% 3% 769.5 3377.25 0 2 2% 97% 0% 1% 157 7614.5 0 5 2% 71% 25% 2% 58.5 2076.75 731.25 7 7% 93% 0% 0% 411.25 5463.75 0 8 3% 62% 34% 1% 122.25 2526.5 1385.5 6% 80% 12% 1% 303.7 4211.8 423.4 1 3% 97% 0% 0% 214.5 6935.5 0 2 1% 99% 0% 0% 105.25 10419.75 0 3 5% 95% 0% 0% 348.75 6626.25 0 4 0% 100% 0% 0% 0 8400 0 7 1% 98% 1% 0% 82.25 8060.5 82.25 2% 98% 0% 0% 150.2 8088.4 16.5 1 2% 96% 0% 2% 245.5 11784 0 2 1% 98% 1% 0% 139.25 13646.5 139.25 4 1% 99% 0% 0% 128 12672 0 7 0% 99% 1% 0% 0 11088 112 8 4% 95% 1% 0% 527 12516.25 131.75 2% 97% 1% 0% 208.0 12341.4 76.6 1 2% 98% 0% 0% 136 6664 0 2 2% 98% 0% 0% 270 13230 0 3 1% 99% 0% 0% 94.75 9380.25 0 4 0% 100% 0% 0% 0 9700 0 6 1% 99% 0% 0% 154.5 15295.5 0 1% 99% 0% 0% 131.1 10854.0 0.0 Rata - Rata Etanol Dosis Rendah Rata - Rata Etanol Dosis Sedang Rata - Rata Etanol Dosis Tinggi Rata - Rata Eusonofil B UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 1 60 Lampiran 9. Jumlah Total Leukosit, Persentase Monosit dan Limfosit Hari 21 1. Jumlah Total Leukosit Hari 21 Kelompok No Total Leukosit I Kontrol Rata - Rata II 1 76 61 68.5 3425 2 85 126 105.5 5275 5 98 86 92 4600 7 94 103 98.5 4925 8 127 113 120 6000 96.9 4845.0 Rata - Rata Etanol Dosis Rendah 1 151 160 155.5 7775 2 121 129 125 6250 3 253 226 239.5 11975 4 195 176 185.5 9275 7 211 207 209 10450 Rata - Rata Etanol Dosis Sedang 182.9 9145.0 1 323 272 297.5 14875 2 167 217 192 9600 4 226 232 229 11450 7 211 233 222 11100 8 175 192 183.5 9175 Rata - Rata Etanol Dosis Tinggi Total Leukosit (mm3) 224.8 11240.0 1 341 264 302.5 15125 2 271 307 289 14450 3 148 166 157 7850 4 150 166 158 7900 6 186 253 219.5 10975 225.2 11260 Rata - Rata UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 61 2. Persentase Monosit Dan Limfosit Hari 21 Jumlah Differensial Leukosit % Differensial Lekosit Kelompok Kontrol No Monosit Limfosit Eusonofil Basofil Monosit Limfosit 1 1% 99% 0% 0% 34.25 3390.75 0 0 2 0% 100% 0% 0% 0 5275 0 0 5 0% 100% 0% 0% 0 4600 0 0 7 1% 99% 0% 0% 49.25 4875.75 0 0 8 1% 99% 0% 0% 60 5940 0 0 1% 99% 0% 0% 29 4816 0 0 1 2% 95% 3% 0% 155.5 7386.25 233.25 0 2 5% 94% 1% 0% 312.5 5875 62.5 0 3 2% 96% 2% 0% 239.5 11496 239.5 0 4 2% 93% 5% 0% 185.5 8625.75 463.75 0 7 2% 98% 0% 0% 209 10241 0 0 3% 95% 2% 0% 220.4 8725 199.8 0 1 0% 100% 0% 0% 0 14875 0 0 2 9% 91% 0% 0% 864 8736 0 0 4 2% 98% 0% 0% 229 11221 0 0 7 5% 94% 1% 0% 555 10434 111 0 8 6% 91% 0% 3% 550.5 8349.25 0 275.25 4% 95% 0% 1% 439.7 10723.05 22.2 55.1 1 4% 95% 0% 1% 605 14368.75 0 151.25 2 3% 96% 0% 1% 433.5 13872 0 144.5 3 3% 96% 0% 1% 235.5 7536 0 78.5 4 0% 100% 0% 0% 0 7900 0 0 6 1% 99% 0% 0% 0 10865.25 0 0 2% 97% 0% 1% 0 74.9 Rata - Rata Etanol Dosis Rendah Rata - Rata Etanol Dosis Sedang Rata - Rata Etanol Dosis Tinggi Rata - Rata Eusonofil Basofil 254.8 10908.4 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 62 Lampiran 10. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 7 Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 7 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 7 terdistribusi normal. Ha : Data total leukosit hari 7 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 7 Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kadar Ekstrak Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. .360 5 .032 .736 5 .022 Dosis Rendah .269 5 .200* .868 5 .259 Dosis Sedang .312 5 .126 .793 5 .071 Dosis Tinggi .142 5 .200* .988 5 .972 Total Leukosit (/mm3) Kontrol a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data total leukosit hari 7 tidak terdistribusi normal sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 63 Lampiran 11. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 7 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit hari 7. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data total leukosit hari 7 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 7 Test Statisticsa,b Total Leukosit (/mm3) Chi-Square 13.685 df 3 Asymp. Sig. .003 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Keputusan : Data total leukosit hari 7 berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 64 Lampiran 12. Hasil Uji Uji Mann-Whitney Data total leukosit hari 7 Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks 5 4.00 20.00 Dosis Rendah 5 7.00 35.00 Total 10 N Mean Rank Sum of Ranks 5 3.00 15.00 Dosis Sedang 5 8.00 40.00 Total 10 Total Leukosit (/mm3) Kontrol Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U 5.000 Wilcoxon W 20.000 Z -1.571 Asymp. Sig. (2-tailed) .116 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .151a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak Total Leukosit (/mm3) Kontrol UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 65 Test Statisticsb Total Leukosit (uL) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.619 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 .008a Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadarekstrak Ranks Total Leukosit /mm3) Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Kontrol 5 3.00 15.00 Dosis Tinggi 5 8.00 40.00 Total 10 Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.619 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Total Leukosit (/mm3) Dosis Rendah 5 4.60 23.00 Dosis Sedang 5 6.40 32.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 66 Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U 8.000 Wilcoxon W 23.000 Z -.940 Asymp. Sig. (2-tailed) .347 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .421a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Total Leukosit (/mm3) Dosis Rendah 5 3.40 17.00 Dosis Tinggi 5 7.60 38.00 Total 10 Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U 2.000 Wilcoxon W 17.000 Z -2.193 Asymp. Sig. (2-tailed) .028 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .032a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Total Leukosit (/mm3) Dosis Sedang 5 3.00 15.00 Dosis Tinggi 5 8.00 40.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 67 Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.611 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 68 Lampiran 13. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 14 Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 14 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 14 terdistribusi normal. Ha : Data total leukosit hari 14 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 14 Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kadar Ekstrak Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. .248 5 .200* .943 5 .689 Dosis Rendah .259 5 .200* .881 5 .316 Dosis Sedang .149 5 .200* .988 5 .973 Dosis Tinggi .245 5 .200* .947 5 .714 Total Leukosit (/mm3) Kontrol a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data total leukosit hari 14 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 69 Lampiran 14. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 14 Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 14 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 14 bervariasi homogen. Ha : Data total leukosit hari 14 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit hari 14 Test of Homogeneity of Variances Total Leukosit (/mm3) Levene Statistic df1 df2 Sig. 3.966 3 16 .027 Keputusan : Data total leukosit hari 14 tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 70 Lampiran 15. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 14 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit hari 14. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 14 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data total leukosit hari 14 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit hari 14 Test Statisticsa,b Total Leukosit (/mm3) Chi-Square 12.806 df 3 Asymp. Sig. .005 a. Kruskal Wallis Test Keputusan : Data total leukosit hari 14 berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 71 Lampiran 16. Hasil Uji Mann-Whitney Data Total Leukosit hari 14 Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks 5 3.40 17.00 Dosis Rendah 5 7.60 38.00 Total 10 N Mean Rank Sum of Ranks 5 3.00 15.00 Dosis Sedang 5 8.00 40.00 Total 10 Total Leukosit (/mm3) Kontrol Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U 2.000 Wilcoxon W 17.000 Z -2.193 Asymp. Sig. (2-tailed) .028 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .032a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak Total Leukosit (/mm3) Kontrol UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 72 Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.611 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks 5 3.20 16.00 Dosis Tinggi 5 7.80 39.00 Total 10 Total Leukosit (/mm3) Kontrol Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U 1.000 Wilcoxon W 16.000 Z -2.402 Asymp. Sig. (2-tailed) .016 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .016a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Total Leukosit (/mm3) Dosis Rendah 5 3.00 15.00 Dosis Sedang 5 8.00 40.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 73 Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.611 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Total Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Leukosit Dosis Rendah 5 4.40 22.00 Dosis Tinggi 5 6.60 33.00 Total 10 (/mm3) Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U 7.000 Wilcoxon W 22.000 Z -1.149 Asymp. Sig. (2-tailed) .251 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .310a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak Ranks Kadar Ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Total Leukosit (/mm3) Dosis Sedang 5 6.20 31.00 Dosis Tinggi 5 4.80 24.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 74 Test Statisticsb Total Leukosit (/mm3) Mann-Whitney U 9.000 Wilcoxon W 24.000 Z -.731 Asymp. Sig. (2-tailed) .465 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .548a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 75 Lampiran 17. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 21 Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 21 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 21 terdistribusi normal. Ha : Data total leukosit hari 21 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Hari 21 Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kadar Ekstrak Shapiro-Wilk Statistic Df Sig. Statistic df Sig. .198 5 .200* .975 5 .909 Dosis Rendah .130 5 .200* .991 5 .983 Dosis Sedang .263 5 .200* .887 5 .340 Dosis Tinggi .234 5 .200* .856 5 .213 Total Leukosit (/mm3) Kontrol a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data total leukosit hari 21 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 76 Lampiran 18. Hasil Uji Homogenitas Data total leukosit hari 21 Tujuan : Untuk melihat data total leukosit hari 21 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 21 bervariasi homogen. Ha : Data total leukosit hari 21 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit hari 21 Test of Homogeneity of Variances Total Leukosit (/mm3\) Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.668 3 16 .083 Keputusan : Data total leukosit hari 21 bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 77 Lampiran 19. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Hari 21 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit hari 21. Hipotesis : Ho : Data total leukosit hari 21 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data total leukosit hari 21 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Hari 21 ANOVA Total Leukosit (/mm3\) Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 1.368E8 3 4.558E7 7.933 .002 Within Groups 9.193E7 16 5745781.250 Total 2.287E8 19 Keputusan : Data total leukosit hari 21 berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 78 Lampiran 20. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit hari 21 Multiple Comparisons Total Leukosit (/mm3\) Bonferroni 95% Confidence Interval Mean Difference (I) Kadar Ekstrak (J) Kadar Ekstrak (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound Kontrol Dosis Rendah Dosis Sedang Dosis Tinggi Dosis Rendah -4300.00000 1516.01863 .071 -8860.6902 260.6902 Dosis Sedang -6395.00000* 1516.01863 .004 -10955.6902 -1834.3098 Dosis Tinggi -6415.00000* 1516.01863 .004 -10975.6902 -1854.3098 Kontrol 4300.00000 1516.01863 .071 -260.6902 8860.6902 Dosis Sedang -2095.00000 1516.01863 1.000 -6655.6902 2465.6902 Dosis Tinggi -2115.00000 1516.01863 1.000 -6675.6902 2445.6902 Kontrol 6395.00000* 1516.01863 .004 1834.3098 10955.6902 Dosis Rendah 2095.00000 1516.01863 1.000 -2465.6902 6655.6902 Dosis Tinggi -20.00000 1516.01863 1.000 -4580.6902 4540.6902 Kontrol 6415.00000* 1516.01863 .004 1854.3098 10975.6902 Dosis Rendah 2115.00000 1516.01863 1.000 -2445.6902 6675.6902 Dosis Sedang 20.00000 1516.01863 1.000 -4540.6902 4580.6902 *. The mean difference is significant at the 0.05 level. b. Grouping Variable: Kadar Ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 79 Lampiran 21. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 7 Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 7 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data Monosit Hari 7 terdistribusi normal. Ha : Data monosit hari 7 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Monosit hari 7 Tests of Normality Kadar ekstrak (mg/kgBB) Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. .234 5 .200* .949 5 .729 125 .206 5 .200* .951 5 .745 250 .350 5 .045 .816 5 .109 500 .157 5 .200* .991 5 .984 Monosit (/mm3\) 0 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data monosit hari 7 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 80 Lampiran 22. Hasil Uji Homogenitas Data monosit hari 7 Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 7 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 7 bervariasi homogen. Ha : Data monosit hari 7 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit hari 7 Test of Homogeneity of Variances Monosit (mm3\) Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.461 3 16 .100 Keputusan : Data monosit hari 7 bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 81 Lampiran 23. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 7 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit hari 7. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data monosit hari 7 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Monosit hari 7 ANOVA Monosit (mm3\) Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 251359.600 3 83786.533 1.392 .281 Within Groups 962834.400 16 60177.150 Total 1214194.000 19 Keputusan : Data monosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 82 Lampiran 24. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 14 Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 14 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 14 terdistribusi normal. Ha : Data monosit hari 14 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Monosit hari 14 Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kadar ekstrak Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. .291 5 .191 .858 5 .220 Dosis Rendah .230 5 .200* .956 5 .779 Dosis Sedang .236 5 .200* .909 5 .463 Dosis Tinggi .206 5 .200* .979 5 .931 Monosit (mm3\) Kontrol a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data monosit hari 14 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 83 Lampiran 25. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 14 Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 14 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 14 bervariasi homogen. Ha : Data monosit hari 14 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit hari 14 Test of Homogeneity of Variances Monosit (mm3\) Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.278 3 16 .119 Keputusan : Data monosit hari 14 bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 84 Lampiran 26. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 14 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit hari 14. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 14 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data monosit hari 14 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Monosit hari 14 ANOVA Monosit (mm3\) Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups 90221.350 3 30073.783 .787 .519 Within Groups 611329.600 16 38208.100 Total 701550.950 19 Keputusan : Data monosit hari 14 tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 85 Lampiran 27. Hasil Uji Normalitas Monosit Hari 21 Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 21 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 21 terdistribusi normal. Ha : Data monosit hari 21 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Monosit hari 21 Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Trans_Monosit Shapiro-Wilk Kadar ekstrak Statistic df Sig. Statistic df Sig. Kontrol .241 3 . .973 3 .687 Dosis Rendah .137 5 .200* .991 5 .981 Dosis Sedang .324 4 . .900 4 .430 Dosis Tinggi .243 3 . .972 3 .680 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data monosit hari 21 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 86 Lampiran 28. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Hari 21 Tujuan : Untuk melihat data monosit hari 21 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 21 bervariasi homogen. Ha : Data monosit hari 21 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit hari 21 Test of Homogeneity of Variances Trans_Monosit Levene Statistic df1 df2 Sig. .719 3 11 .561 Keputusan : Data monosit hari 14 bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 87 Lampiran 29. Hasil Uji ANOVA Data Monosit hari 21 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit hari 14. Hipotesis : Ho : Data monosit hari 14 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data monosit hari 14 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Monosit hari 21 ANOVA Trans_Monosit Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 2.062 3 .687 21.852 .000 Within Groups .346 11 .031 Total 2.408 14 Keputusan : Data monosit hari 12 tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 88 Lampiran 30. Hasil Uji Post Hoc Data Monosit Hari 21 Multiple Comparisons Trans_Monosit Bonferroni 95% Confidence Interval Mean Difference (I) Kadar ekstrak (J) Kadar ekstrak (I-J) Kontrol Dosis Rendah Dosis Rendah Dosis Sedang Dosis Tinggi Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound -.66343* .12952 .002 -1.0789 -.2479 Dosis Sedang -1.02864* .13545 .000 -1.4632 -.5941 Dosis Tinggi -.92983* .14481 .000 -1.3944 -.4653 Kontrol .66343* .12952 .002 .2479 1.0789 Dosis Sedang -.36521 .11897 .064 -.7469 .0165 Dosis Tinggi -.26640 .12952 .385 -.6819 .1491 Kontrol 1.02864* .13545 .000 .5941 1.4632 Dosis Rendah .36521 .11897 .064 -.0165 .7469 Dosis Tinggi .09881 .13545 1.000 -.3357 .5334 Kontrol .92983* .14481 .000 .4653 1.3944 Dosis Rendah .26640 .12952 .385 -.1491 .6819 Dosis Sedang -.09881 .13545 1.000 -.5334 .3357 *. The mean difference is significant at the 0.05 level. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 89 Lampiran 31. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 7 Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 7 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 7 terdistribusi normal. Ha : Data limfosit hari 7 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Limfosit hari 7 Tests of Normality Kadar Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk ekstrak (mg/kgB Limfosit (mm3) B) Statistic df Sig. Statistic df Sig. 0 .334 5 .070 .835 5 .153 125 .314 5 .119 .819 5 .115 250 .273 5 .200* .866 5 .252 500 .170 5 .200* .977 5 .916 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data limfosit hari 7 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 90 Lampiran 32. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 7 Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 7 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 7 bervariasi homogen. Ha : Data limfosit hari 7 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit hari 7 Test of Homogeneity of Variances Limfosit (mm3) Levene Statistic df1 df2 Sig. 3.903 3 16 .029 Keputusan : Data limfosit hari 7 tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 91 Lampiran 33. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 7 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit hari 7. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 7 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data limfosit hari 7 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 7 Test Statisticsa,b Limfosit (mm3) Chi-Square 14.188 Df 3 Asymp. Sig. .003 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Keputusan : Data limfosit hari 7 berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 92 Lampiran 34. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 7 Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Kontrol 5 4.00 20.00 Dosis Rendah 5 7.00 35.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U 5.000 Wilcoxon W 20.000 Z -1.571 Asymp. Sig. (2-tailed) .116 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .151a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Kontrol 5 3.00 15.00 Dosis Sedang 5 8.00 40.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.619 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 93 Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Kontrol 5 3.00 15.00 Dosis Tinggi 5 8.00 40.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.619 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Dosis Rendah 5 4.60 23.00 Dosis Sedang 5 6.40 32.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U 8.000 Wilcoxon W 23.000 Z -.940 Asymp. Sig. (2-tailed) .347 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .421a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 94 Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Dosis Rendah 5 3.20 16.00 Dosis Tinggi 5 7.80 39.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U 1.000 Wilcoxon W 16.000 Z -2.402 Asymp. Sig. (2-tailed) .016 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .016a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Dosis Sedang 5 3.00 15.00 Dosis Tinggi 5 8.00 40.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.611 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 95 Lampiran 35. Hasil Uji Normalitas Limfosit Hari 14 Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 14 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 14 terdistribusi normal. Ha : Data limfosit hari 14 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Limfosit hari 14 Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Limfosit (mm3) Shapiro-Wilk Kadar ekstrak Statistic Df Sig. Statistic df Sig. Kontrol .241 5 .200* .907 5 .451 Dosis Rendah .218 5 .200* .918 5 .519 Dosis Sedang .172 5 .200* .984 5 .956 Dosis Tinggi .233 5 .200* .957 5 .787 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data limfosit hari 14 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 96 Lampiran 36. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 14 Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 14 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 14 bervariasi homogen. Ha : Data limfosit hari 14 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit hari 14 Test of Homogeneity of Variances Limfosit (mm3) Levene Statistic df1 df2 Sig. 3.623 3 16 .036 Keputusan : Data limfosit hari 14 tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 97 Lampiran 37. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 14 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit hari 14. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 14 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data limfosit hari 14 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit hari 14 Test Statisticsa,b Limfosit (mm3) Chi-Square 13.057 Df 3 Asymp. Sig. .005 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Keputusan : Data limfosit hari 14 berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 98 Lampiran 38. Hasil Uji Mann-Whitney Data Limfosit hari 14 Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Kontrol 5 3.40 17.00 Dosis Rendah 5 7.60 38.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U 2.000 Wilcoxon W 17.000 Z -2.193 Asymp. Sig. (2-tailed) .028 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .032a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Kontrol 5 3.00 15.00 Dosis Sedang 5 8.00 40.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 99 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.611 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Kontrol 5 3.20 16.00 Dosis Tinggi 5 7.80 39.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U 1.000 Wilcoxon W 16.000 Z -2.402 Asymp. Sig. (2-tailed) .016 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .016a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Dosis Rendah 5 3.00 15.00 Dosis Sedang 5 8.00 40.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 100 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U .000 Wilcoxon W 15.000 Z -2.611 Asymp. Sig. (2-tailed) .009 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Dosis Rendah 5 4.20 21.00 Dosis Tinggi 5 6.80 34.00 Total 10 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U 6.000 Wilcoxon W 21.000 Z -1.358 Asymp. Sig. (2-tailed) .175 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .222a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak Ranks Limfosit (mm3) Kadar ekstrak N Mean Rank Sum of Ranks Dosis Sedang 5 6.20 31.00 Dosis Tinggi 5 4.80 24.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 101 Test Statisticsb Limfosit (mm3) Mann-Whitney U 9.000 Wilcoxon W 24.000 Z -.731 Asymp. Sig. (2-tailed) .465 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .548a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kadar ekstrak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 102 Lampiran 39. Hasil Uji Normalitas Data Limfosit hari 21 Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 21 terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 21 terdistribusi normal. Ha : Data limfosit hari 21 tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Limfosit hari 21 Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Limfosit (mm3) Shapiro-Wilk Kadar ekstrak Statistic df Sig. Statistic df Sig. Kontrol .209 5 .200* .970 5 .876 Dosis Rendah .152 5 .200* .984 5 .954 Dosis Sedang .224 5 .200* .898 5 .397 Dosis Tinggi .226 5 .200* .869 5 .263 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data limfosit hari 21 terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 103 Lampiran 40. Hasil Uji Homogenitas Data limfosit hari 21 Tujuan : Untuk melihat data limfosit hari 21 homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 21 bervariasi homogen. Ha : Data limfosit hari 21 tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit hari 21 Test of Homogeneity of Variances Limfosit (mm3) Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.026 3 16 .151 Keputusan : Data limfosit hari 21 bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 104 Lampiran 41. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit hari 21 Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit hari 21. Hipotesis : Ho : Data limfosit hari 21 tidak berbeda secara bermakna Ha : Data limfosit hari 21 berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Limfosit hari 21 ANOVA Limfosit (mm3) Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 1.201E8 3 4.003E7 6.978 .003 Within Groups 9.179E7 16 5736978.375 Total 2.119E8 19 Keputusan : Data limfosit hari 21 berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 105 Lampiran 42. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit hari 21 Multiple Comparisons Limfosit (mm3) Bonferroni 95% Confidence Interval Mean Difference (I) Kadar ekstrak (J) Kadar ekstrak (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound Kontrol Dosis Rendah -3908.60000 1514.85687 .121 -8465.7952 648.5952 Dosis Sedang -5907.00000* 1514.85687 .008 -10464.1952 -1349.8048 Dosis Tinggi -6092.20000* 1514.85687 .006 -10649.3952 -1535.0048 Kontrol 3908.60000 1514.85687 .121 -648.5952 8465.7952 Dosis Sedang -1998.40000 1514.85687 1.000 -6555.5952 2558.7952 Dosis Tinggi -2183.60000 1514.85687 1.000 -6740.7952 2373.5952 Kontrol 5907.00000* 1514.85687 .008 1349.8048 10464.1952 Dosis Rendah 1998.40000 1514.85687 1.000 -2558.7952 6555.5952 Dosis Tinggi -185.20000 1514.85687 1.000 -4742.3952 4371.9952 Kontrol 6092.20000* 1514.85687 .006 1535.0048 10649.3952 Dosis Rendah 2183.60000 1514.85687 1.000 -2373.5952 6740.7952 Dosis Sedang 185.20000 1514.85687 1.000 -4371.9952 4742.3952 Dosis Rendah Dosis Sedang Dosis Tinggi *. The mean difference is significant at the 0.05 level. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 106 Lampiran 43. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Kontrol Tujuan : Untuk melihat data total leukosit Kontrol terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit Kontrol terdistribusi normal. Ha : Data total leukosit Kontrol tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Kontrol Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova TotalLeukosit Shapiro-Wilk HariKe Statistic df Sig. Statistic df Sig. Hari ke 7 .360 5 .032 .736 5 .022 Hari ke 14 .248 5 .200* .943 5 .689 Hari ke 21 .198 5 .200* .975 5 .909 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data total leukosit kontrol tidak terdistribusi normal sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 107 Lampiran 44. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Total Leukosit Kontrol Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit kontrol dari hari 7, hari 14 dan hari 21 Hipotesis : Ho : Data total leukosit kontrol tidak berbeda secara bermakna Ha : Data total leukosit kontrol berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data total leukosit kontrol Test Statisticsa,b TotalLeukosit Chi-Square .781 df Asymp. Sig. 2 .677 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: HariKe Keputusan : Data total leukosit kontrol tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 108 Lampiran 45. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis rendah terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis rendah terdistribusi normal. Ha : Data total leukosit dosis rendah tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis rendah Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova TotalLeukosit Shapiro-Wilk HariKe Statistic df Sig. Statistic df Sig. Hari ke 7 .269 5 .200* .868 5 .259 Hari ke 14 .259 5 .200* .881 5 .316 Hari ke 21 .130 5 .200* .991 5 .983 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data total leukosit dosis rendah terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 109 Lampiran 46. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis rendah homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis rendah bervariasi homogen. Ha : Data total leukosit dosis rendah tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit dosis rendah Test of Homogeneity of Variances TotalLeukosit Levene Statistic df1 1.243 Keputusan df2 2 Sig. 12 .323 : Data total leukosit dosis rendah bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 110 Lampiran 47. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit dosis rendah. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna Ha : Data total leukosit dosis rendah berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Dosis rendah ANOVA TotalLeukosit Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 2.183E7 2 1.091E7 2.490 .125 Within Groups 5.259E7 12 4382437.500 Total 7.441E7 14 Keputusan : Data total leukosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 111 Lampiran 48. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis sedang terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis sedang terdistribusi normal. Ha : Data total leukosit dosis sedang tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis sedang Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova HariKe TotalLeukosit Statistic df Shapiro-Wilk Sig. Statistic df Sig. Hari ke 7 .312 5 .126 .793 5 .071 Hari ke 14 .149 5 .200* .988 5 .973 Hari ke 21 .263 5 .200* .887 5 .340 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data total leukosit dosis sedang terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 112 Lampiran 49. Hasil Uji Homogenitas Data total Leukosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis sedang homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis sedang bervariasi homogen. Ha : Data total leukosit dosis sedang tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Sedang Test of Homogeneity of Variances TotalLeukosit Levene Statistic df1 1.339 Keputusan df2 2 Sig. 12 .299 : Data total leukosit dosis sedang bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 113 Lampiran 50. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit dosis sedang. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna Ha : Data total leukosit dosis sedang berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Dosis Sedang ANOVA TotalLeukosit Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 6.990E7 2 3.495E7 15.540 .000 Within Groups 2.699E7 12 2249125.000 Total 9.689E7 14 Keputusan : Data total leukosit dosis sedang berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 114 Lampiran 51. Hasil Uji Post Hoc Data Total Leukosit Dosis Sedang Multiple Comparisons TotalLeukosit Bonferroni 95% Confidence Interval Mean Difference (I) HariKe (J) HariKe (I-J) Hari ke 7 Hari ke 14 -5125.000* 948.499 .000 -7761.33 -2488.67 Hari ke 21 -3690.000* 948.499 .006 -6326.33 -1053.67 Hari ke 7 5125.000* 948.499 .000 2488.67 7761.33 Hari ke 21 1435.000 948.499 .469 -1201.33 4071.33 Hari ke 7 3690.000* 948.499 .006 1053.67 6326.33 Hari ke 14 -1435.000 948.499 .469 -4071.33 1201.33 Hari ke 14 Hari ke 21 Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound *. The mean difference is significant at the 0.05 level. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 115 Lampiran 52. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis tinggi terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis tinggi terdistribusi normal. Ha : Data total leukosit dosis tinggi tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Total Leukosit Dosis tinggi Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova HariKe TotalLeukosit Statistic df Shapiro-Wilk Sig. Statistic df Sig. Hari ke 7 .142 5 .200* .988 5 .972 Hari ke 14 .245 5 .200* .947 5 .714 Hari ke 21 .234 5 .200* .856 5 .213 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data total leukosit dosis tinggi terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 116 Lampiran 53. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk melihat data total leukosit dosis tinggi homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis tinggi bervariasi homogen. Ha : Data total leukosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Total Leukosit dosis tinggi Test of Homogeneity of Variances TotalLeukosit Levene Statistic df1 1.320 Keputusan df2 2 Sig. 12 .303 : Data total leukosit dosis tinggi bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 117 Lampiran 54. Hasil Uji ANOVA Data Total Leukosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data total leukosit dosis tinggi. Hipotesis : Ho : Data total leukosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna Ha : Data total leukosit dosis tinggi berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Total Leukosit Dosis tinggi ANOVA TotalLeukosit Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 189583.333 2 94791.667 .010 .990 Within Groups 1.141E8 12 9505291.667 Total 1.143E8 14 Keputusan : Data total leukosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 118 Lampiran 55. Hasil Uji Normalitas Monosit Kontrol Tujuan : Untuk melihat data monosit Kontrol terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit Kontrol terdistribusi normal. Ha : Data monosit Kontrol tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Monosit Kontrol Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Hari Ke Total Monosit Kontrol Statistic df Shapiro-Wilk Sig. Statistic df Sig. Hari Ke 7 .234 5 .200* .949 5 .729 Hari Ke 14 .291 5 .191 .858 5 .220 Hari Ke 21 .249 5 .200* .872 5 .273 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data monosit kontrol terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 119 Lampiran 56. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Kontrol Tujuan : Untuk melihat data monosit kontrol homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit kontrol bervariasi homogen. Ha : Data monosit kontrol tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit kontrol Test of Homogeneity of Variances Total Monosit Kontrol Levene Statistic df1 6.781 Keputusan df2 2 Sig. 12 .011 : Data monosit kontrol tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 120 Lampiran 57. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Kontrol Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit kontrol. Hipotesis : Ho : Data monosit kontrol tidak berbeda secara bermakna Ha : Data monosit kontrol berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data monosit kontrol Test Statisticsa,b Total Monosit Kontrol Chi-Square 7.994 df 2 Asymp. Sig. .018 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Hari Ke Keputusan : Data monosit kontrol berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 121 Lampiran 58. Hasil Uji Mann-Whitney Data Monosit Kontrol Ranks Hari Ke Total Monosit Kontrol N Mean Rank Sum of Ranks Hari Ke 7 5 5.20 26.00 Hari Ke 14 5 5.80 29.00 Total 10 Test Statisticsb Total Monosit Kontrol Mann-Whitney U 11.000 Wilcoxon W 26.000 Z -.313 Asymp. Sig. (2-tailed) .754 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .841a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Hari Ke Ranks Hari Ke Total Monosit Kontrol N Mean Rank Sum of Ranks Hari Ke 7 5 7.80 39.00 Hari Ke 21 5 3.20 16.00 Total 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 122 Test Statisticsb Total Monosit Kontrol Mann-Whitney U 1.000 Wilcoxon W 16.000 Z -2.410 Asymp. Sig. (2-tailed) .016 .016a Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Hari Ke Ranks Hari Ke Total Monosit Kontrol N Mean Rank Sum of Ranks Hari Ke 14 5 7.80 39.00 Hari Ke 21 5 3.20 16.00 Total 10 Test Statisticsb Total Monosit Kontrol Mann-Whitney U 1.000 Wilcoxon W 16.000 Z -2.410 Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .016 .016a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Hari Ke UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 123 Lampiran 59. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis rendah Tujuan : Untuk melihat data monosit Dosis rendah terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit Dosis rendah terdistribusi normal. Ha : Data monosit Dosis rendah tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis rendah Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Hari Ke Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. .206 5 .200* .951 5 .745 Hari Ke 14 .230 5 .200* .956 5 .779 Hari Ke 21 .176 5 .200* .957 5 .788 Total Monosit Dosis Rendah Hari Ke 7 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data monosit dosis rendah terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 124 Lampiran 60. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis rendah homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit dosis rendah bervariasi homogen. Ha : Data monosit dosis rendah tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit dosis rendah Test of Homogeneity of Variances Total Monosit Dosis Rendah Levene Statistic df1 df2 Sig. 5.212 2 12 .023 Keputusan : Data monosit dosis rendah tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 125 Lampiran 61. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit dosis rendah. Hipotesis : Ho : Data monosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna Ha : Data monosit dosis rendah berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data monosit dosis rendah Test Statisticsa,b Total Monosit Dosis Rendah Chi-Square 3.440 Df 2 Asymp. Sig. .179 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Hari Ke Keputusan : Data monosit dosis rendah berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 126 Lampiran 62. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis sedang terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit dosis sedang terdistribusi normal. Ha : Data monosit dosis sedang tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Monosit dosis sedang Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Total Monosit Dosis Sedang Shapiro-Wilk Hari Ke Statistic df Sig. Statistic df Sig. Hari Ke 7 .350 5 .045 .816 5 .109 Hari Ke 14 .236 5 .200* .909 5 .463 Hari Ke 21 .230 5 .200* .962 5 .821 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data monosit dosis sedang terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 127 Lampiran 63. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis sedang homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit dosis sedang bervariasi homogen. Ha : Data monosit dosis sedang tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit dosis sedang Test of Homogeneity of Variances Total Monosit Dosis Sedang Levene Statistic df1 df2 Sig. 1.513 2 12 .259 Keputusan : Data monosit dosis sedang bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 128 Lampiran 64. Hasil Uji ANOVA Data Monosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit dosis sedang. Hipotesis : Ho : Data monosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna Ha : Data monosit dosis sedang berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Monosit dosis sedang ANOVA Total Monosit Dosis Sedang Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 141350.800 2 70675.400 1.158 .347 Within Groups 732565.200 12 61047.100 Total 873916.000 14 Keputusan : Data monosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 129 Lampiran 65. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk melihat data monosit Dosis tinggi terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit Dosis tinggi terdistribusi normal. Ha : Data monosit Dosis tinggi tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Monosit Dosis tinggi Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Total Monosit Dosis Tinggi Shapiro-Wilk Hari Ke Statistic df Sig. Statistic df Sig. Hari Ke 7 .157 5 .200* .991 5 .984 Hari Ke 14 .206 5 .200* .979 5 .931 Hari Ke 21 .230 5 .200* .902 5 .419 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data monosit dosis tinggi terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 130 Lampiran 66. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk melihat data monosit dosis tinggi homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data monosit dosis tinggi bervariasi homogen. Ha : Data monosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Monosit dosis tinggi Test of Homogeneity of Variances Total Monosit Dosis Tinggi Levene Statistic df1 df2 Sig. 3.230 2 12 .075 Keputusan : Data monosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 131 Lampiran 67. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Monosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data monosit dosis tinggi. Hipotesis : Ho : Data monosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna Ha : Data monosit dosis tinggi berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data monosit dosis tinggi Test Statisticsa,b Total Monosit Dosis Tinggi Chi-Square .657 Df 2 Asymp. Sig. .720 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Hari Ke Keputusan : Data monosit dosis tinggi berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 132 Lampiran 68. Hasil Uji Normalitas Limfosit Kontrol Tujuan : Untuk melihat data limfosit kontrol terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit kontrol terdistribusi normal. Ha : Data limfosit kontrol tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Limfosit kontrol Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Hari Ke Total Limfosit Kontrol Statistic df Shapiro-Wilk Sig. Statistic df Sig. Hari Ke 7 .334 5 .070 .835 5 .153 Hari Ke 14 .241 5 .200* .907 5 .451 Hari Ke 21 .209 5 .200* .970 5 .876 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data limfosit kontrol terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 133 Lampiran 69. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Kontrol Tujuan : Untuk melihat data limfosit kontrol homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit kontrol bervariasi homogen. Ha : Data limfosit kontrol tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit kontrol Test of Homogeneity of Variances Total Limfosit Kontrol Levene Statistic df1 4.960 Keputusan df2 2 Sig. 12 .027 : Data limfosit kontrol tidak bervariasi homogen, sehingga dilakukan uji non parametik Kruskal-Wallis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 134 Lampiran 70. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data Limfosit Kontrol Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit kontrol. Hipotesis : Ho : Data limfosit kontrol tidak berbeda secara bermakna Ha : Data limfosit kontrol berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data limfosit kontrol Test Statisticsa,b Total Limfosit Kontrol Chi-Square 2.344 df 2 Asymp. Sig. .310 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Hari Ke Keputusan : Data limfosit kontrol berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 135 Lampiran 71. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis rendah terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis rendah terdistribusi normal. Ha : Data limfosit dosis rendah tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis rendah Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Hari Ke Statistic Total Limfosit Dosis Rendah Hari Ke 7 df Shapiro-Wilk Sig. Statistic df .314 5 .119 .819 5 .115 Hari Ke 14 .218 5 .200* .918 5 .519 Hari Ke 21 .152 5 .200* .984 5 .954 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan Sig. : Data limfosit dosis rendah terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 136 Lampiran 72. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis rendah homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis rendah bervariasi homogen. Ha : Data limfosit dosis rendah tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit dosis rendah Test of Homogeneity of Variances Total Limfosit Dosis Rendah Levene Statistic df1 .820 Keputusan df2 2 Sig. 12 .464 : Data limfosit dosis rendah bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 137 Lampiran 73. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Rendah Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit dosis rendah. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna Ha : Data limfosit dosis rendah berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Limfosit Dosis Rendah ANOVA Total Limfosit Dosis Rendah Sum of Squares df Mean Square Between Groups 2.464E7 2 1.232E7 Within Groups 4.654E7 12 3878156.333 Total 7.118E7 14 Keputusan F Sig. 3.177 .078 : Data limfosit dosis rendah tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 138 Lampiran 74. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis sedang terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis sedang terdistribusi normal. Ha : Data limfosit dosis sedang tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis sedang Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Hari Ke Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. .273 5 .200* .866 5 .252 Hari Ke 14 .172 5 .200* .984 5 .956 Hari Ke 21 .224 5 .200* .898 5 .397 Total Limfosit Dosis Sedang Hari Ke 7 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan : Data limfosit dosis sedang terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 139 Lampiran 75. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis sedang homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis sedang bervariasi homogen. Ha : Data limfosit dosis sedang tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit dosis sedang Test of Homogeneity of Variances Total Limfosit Dosis Sedang Levene Statistic df1 2.668 Keputusan df2 2 Sig. 12 .110 : Data limfosit dosis sedang bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 140 Lampiran 76. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit Dosis Sedang Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit dosis sedang. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis sedang tidak berbeda secara bermakna Ha : Data limfosit dosis sedang berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Limfosit Dosis sedang ANOVA Total Limfosit Dosis Sedang Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 7.148E7 2 3.574E7 13.117 .001 Within Groups 3.270E7 12 2724768.708 Total 1.042E8 14 Keputusan : Data limfosit dosis sedang berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 141 Lampiran 77. Hasil Uji Post Hoc Data Limfosit Dosis Sedang Multiple Comparisons Total Limfosit Dosis Sedang Bonferroni 95% Confidence Interval Mean Difference (I) Hari Ke (J) Hari Ke (I-J) Hari Ke 7 Hari Ke 14 -5222.800* 1043.986 .001 -8124.53 -2321.07 Hari Ke 21 -3604.600* 1043.986 .014 -6506.33 -702.87 Hari Ke 7 5222.800* 1043.986 .001 2321.07 8124.53 Hari Ke 21 1618.200 1043.986 .441 -1283.53 4519.93 Hari Ke 7 3604.600* 1043.986 .014 702.87 6506.33 Hari Ke 14 -1618.200 1043.986 .441 -4519.93 1283.53 Hari Ke 14 Hari Ke 21 Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound *. The mean difference is significant at the 0.05 level. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 142 Lampiran 78. Hasil Uji Normalitas Limfosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis tinggi terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis tinggi terdistribusi normal. Ha : Data limfosit dosis tinggi tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Normalitas Limfosit dosis tinggi Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Hari Ke Total Limfosit Dosis Tinggi Statistic df Shapiro-Wilk Sig. Statistic df Hari Ke 7 .170 5 .200* .977 5 .916 Hari Ke 14 .233 5 .200* .957 5 .787 Hari Ke 21 .226 5 .200* .869 5 .263 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Keputusan Sig. : Data limfosit dosis tinggi terdistribusi normal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 143 Lampiran 79. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit Dosis Tinggi Tujuan : Untuk melihat data limfosit dosis tinggi homogen atau tidak. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis tinggi bervariasi homogen. Ha : Data limfosit dosis tinggi tidak bervariasi homogen. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. Hasil Uji Homogenitas Data Limfosit dosis tinggi Test of Homogeneity of Variances Total Limfosit Dosis Tinggi Levene Statistic df1 .918 Keputusan df2 2 Sig. 12 .426 : Data limfosit dosis tinggi bervariasi homogen, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 144 Lampiran 80. Hasil Uji ANOVA Data Limfosit dosis tinggi Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data limfosit dosis tinggi. Hipotesis : Ho : Data limfosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna Ha : Data limfosit dosis tinggi berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Hasil Uji ANOVA Limfosit dosis tinggi ANOVA Total Limfosit Dosis Tinggi Sum of Squares Between Groups df Mean Square 11814.933 2 5907.467 Within Groups 1.060E8 12 8831604.567 Total 1.060E8 14 Keputusan F Sig. .001 .999 : Data limfosit dosis tinggi tidak berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 145 Lampiran 81. Uji Interleukin 1 β 1. Hasil Uji Interleukin 1β UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 146 Kelompok kontrol LPS Dosis Rendah Dosis Sedang Dosis Tinggi No 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 Interleukin 1β per mm3 7.8 7.8 7.8 7.8 7.8 6 4.4 284 55.2 43.1 25 7.8 500 14.1 72.3 47.6 9.7 107 160 25.5 41.8 209 63.4 7.8 500 7.8 Standar deviasi 0 78.54 117.0 123.84 211.8 69.96 62.4 164.4 202.7 Rata – Rata UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 147 2. Hasil Elisa Reader Interleukin 1β Parameters Fit to Fit type Wavelenght Concentration transform Measurement transform Markers Formula Parameter a Parameter b Parameter c Parameter d Coefficient R2 : Assay : Four Parameter Logistic : 450 : Linear : Linear : Mean : y = d + (a - d)/(1 + (x / c)^b : 0.29489 : 0.888088287412139 : 1138.040557333319 : 4.31853842156026 : 0.9512 Graph Plate Well 200913 200913 A01 A02 200913 200913 B01 B02 Sample Conc Cal_0001 Cal_0001 1/2 Cal_0001 2/2 Cal_0002 Cal_0002 1/2 Cal_0002 2/2 Cal_0003 0 0 0 7.8 7.8 7.8 15.6 Original Abs 0.295 0.324 0.266 0.4 0.434 0.366 0.425 Fitted Abs 0.295 0.295 0.295 0.347 0.347 0.347 0.39 Residual 0.000 0.029 - 0.029 0.052 0.086 0.018 0.036 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 148 Plate Well Sample Conc 200913 200913 C01 C02 200913 200913 D01 D02 200913 200913 E01 E02 200913 200913 F01 F02 200913 200913 G01 G02 200913 200913 H01 H02 Cal_00031/2 Cal_0003 2/2 Cal_0004 Cal_0004 1/2 Cal_0004 2/2 Cal_0005 Cal_0005 1/2 Cal_0005 2/2 Cal_0006 Cal_0006 1/2 Cal_0006 2/2 Cal_0007 Cal_0007 1/2 Cal_0007 2/2 Cal_0008 Cal_0008 1/2 Cal_0008 2/2 15.6 15.6 31.2 31.2 31.2 62.4 62.4 62.4 124.8 124.8 124.8 249.6 249.6 249.6 499.2 499.2 499.2 Original Abs 0.412 0.439 0.479 0.465 0.492 0.592 0.586 0.598 0.792 0.803 0.781 1.17 1.16 1.18 1.61 1.58 1.64 Fitted Abs 0.39 0.39 0.465 0.465 0.465 0.594 0.594 0.594 0.81 0.81 0.81 1.15 1.15 1.15 1.62 1.62 1.62 Residual 0.022 0.049 0.014 0.000 0.028 - 0.002 - 0.008 0.003 - 0.018 - 0.007 - 0.029 0.028 0.018 0.038 - 0.010 - 0.041 0.021 3. Uji Anova Interleukin 1β a. Hasil Uji Normalitas Tujuan : Untuk melihat data interleukin 1β terdistribusi normal atau tidak. Hipotesis : Ho : Data interleukin 1β terdistribusi normal. Ha : Data interleukin 1β tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 149 Hasil Uji Normalitas Hasil Uji Normalitas Interleukin 1β Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Statistic TotalILB df .307 Shapiro-Wilk Sig. 25 .000 Statistic .627 df Sig. 25 .000 a. Lilliefors Significance Correction : Data interleukin 1β tidak terdistribusi normal sehingga dilakukan Keputusan uji non parametik Kruskal-Wallis. b. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data interleukin 1β Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data interleukin 1β. Hipotesis : Ho : Data interleukin 1β tidak berbeda secara bermakna Ha : Data interleukin 1β berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan. Jika nilai signifikasi ≥ 0,05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan. Tabel 33. Hasil Uji Nonparametik Kruskal-Wallis Data interleukin 1β Test Statisticsa,b TotalILB Chi-Square 7.307 df 4 Asymp. Sig. .121 a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kelompok Sampel Keputusan : Data interleukin 1β berbeda secara bermakna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 150 4. Metode Uji Elisa Pada ELISA Kit terdapat beberapa komponen, yaitu: • Lyophilized recombinan mouse IL-1β standard: 10 ng /tube • One well 96 well plate precoated with anti-mouse IL-1β antibody. • Sampel diluent buffer 30 ml. • Biotinylated anti-mouse IL-1β antibody: 130 µl, dilution 1 : 100. • Antibody diluent buffer • Avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) : 130 µl, dilution 1 : 100. • ABC diluent buffer : 12 ml. • TMB color developing agent : 10ml. • TMB stop solution: 10 ml. Dalam pelaksanaan uji menggunakan ELISA melalui beberapa tahap sebagai berikut : a. Preparasi 1. Tahap pengenceran : Karena serum yang dihasilkan berkisar antara 500-5000 pg/ml. Pengenceran dilakukan sebanyak 1:10 (tambahkan 10 ul sampel kedalam 90 ul sampel diluent buffer). 2. Persiapan reagen : • Larutan standar 500 pg/ml IL-1β mencit : tambahkan 0.05 ml larutan standar IL-1β 10 ng /ml diatas ke dalam 0.95 ml pelarut buffer sampel dan campur merata. ( Catatan : sebaiknya preparasi dilakukan tidak lebih dari 2 jam sebelum pengerjaan) • Preparasi biotynillated anti-mouse IL-1β anti-body. i. Total semua larutan harus 0,1 dikali banyak sumur yang akan digunakan. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 151 ii. biotynillated anti-mouse IL-1β anti-body harus di larutkan pada 1 : 100 dengan anti-body diluet buffer dan dicampur merata. • Reparasi Avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) : i. Total volume harus sama dengan 0,1 ml dikali jumlah sumuran yang digunakan. ii. Avidin-biotin-peroxidase complex harus dilarutkan pada 1 : 100 dengan larutan buffer ABC. Dan dicampur merata. b. Prosedur Pelaksanaan Uji 1. Memasukkan 0.1 ml standar, kontrol dan sampel dimasukkan ke dalam microplate yang telah dilapisi anti mouse IL - 1β antibodi kemudian diinkubasi selama 90 menit pada suhu 370C. 2. Buang isi plate dan keringkan menunggunakan handuk 3. Tambahkan 0.1 ml biotinylated anti mouse IL - 1β antibody inkubasi pada suhu 370C selama 60 menit 4. Cuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 3 kali 5. Tambahkan 0,1 ml ABC working Solutions diinkubasi pada suhu 370C selama 30 menit. 6. Cuci microplate dengan 0.01M PBS sebanyak 5 kali. 7. Ditambahkan 90 ul dengan TMB Color developing agen dan didiamkan selama 30 menit pada suhu ruangan di tempat yang gelap. 8. Ditambahkan 0.1 ml TMB stop solution. 9. Dibaca O.D absorbasi dengan ELISA reader yang diatur pada 450 nm. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
