uji efek antihiperglikemik ekstrak etil metode induksi aloksan skripsi
advertisement
UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI EFEK ANTIHIPERGLIKEMIK EKSTRAK ETIL ASETAT LUMUT HATI (Mastigophora diclados) DENGAN METODE INDUKSI ALOKSAN SKRIPSI NURUL FITRIALIZA ROSDIANI NIM. 109102000030 FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 2013 i UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI EFEK ANTIHIPERGLIKEMIK EKSTRAK ETIL ASETAT LUMUT HATI (Mastigophora diclados) DENGAN METODE INDUKSI ALOKSAN SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi NURUL FITRIALIZA ROSDIANI NIM. 109102000030 FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 2013 ii iii iv v ABSTRAK Nama Program Studi Judul : Nurul Fitrializa Rosdiani : Farmasi : Uji Efek Antihiperglikemia Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados Dengan Metode Induksi Aloksan Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui aktivitas antihiperglikemia dari ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados. Penelitian ini menggunakan 36 ekor tikus wistar jantan yang berumur 2-3 bulan dan mempunyai berat badan 140-180 gram. Tikus dibagi menjadi tiga kelompok kontrol dan tiga kelompok uji yaitu kontrol normal, kontrol negatif, kontrol positif, dosis 1 mg/kgBB, dosis 10 mg/kgBB dan dosis 100 mg/kgBB. Tikus mengalami diabetes dengan injeksi intraperitoneal aloksan monohidrat 100 mg/kg BB. Ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados diberikan setiap hari kepada tikus selama 28 hari. Pada uji ANOVA menunjukkan adanya perbedaan bermakna antara setiap dosis dengan konrol negatif (ρ≤0,05) dan semua dosis ekstrak tidak terdapat perbedaan bermakna dengan kontrol positif (ρ≥ 0,05). Dari semua variasi dosis penurunan glukosa darah yang paling besar terjadi pada kelompok dosis 10 mg/kg BB 25,56%, 17.9%, 19.4% dan 22%. Kata kunci : Antihiperglikemia, Mastigophora diclados, metode induksi aloksan vi ABSTRACT Name Program Study Title : Nurul Fitrializa Rosdiani : Pharmacy : Antihyperglycemic Effects of Ethyl Acetate Extract of the Liverwort Mastigophora diclados On Alloxan Induced Methode The research was conducted in order to determine the antihyperglycemic activity of the ethyl acetate extract of the liverwoth Mastigophora diclados. This study used 36 male wistar rats that were 2-3 months old and had a body weight in the range 140-180 gram. That rats were divided into three control groups and three test groups namely normal control, negative control, positive control, extract 1 mg/kgBW, extract 10 mg/kgBW and extract 100 mg/kgBW. Rats were made diabetic by intraperitoneal injection of 100 mg/kg body weight of Alloxan monohydride. The diabetic rat received the ethyl acetate extract of the liverwoth Mastigophora diclados daily for 28 days. The ANOVA showed that there were significant differences between each dose of the extract with the negative control (ρ≤0,05) and all dose of the extract are no significant differences with the positive control (ρ≥0,05). Percentage reduction blood glucose highest at a dose 10 mg/kg BW is 25.56%, 17.9%, 19.4% and 20% Keywords : Antihyperglicemic, Mastigophora diclados, induction alloxan vii KATA PENGANTAR Assalamu’alaikum Wr. Wb Puji syukur saya panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat dan rahmatnya saya dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka untuk memenuhi tugas akhir sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Program Studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Saya menyadari bahwa, tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini sangatlah sulit bagi saya untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, saya mengucapkan terima kasih kepada : 1. Allah SWT, yang dengan izinnya sehingga dapat menyelesaikan skripsi ini. 2. Ibu Dr. Azrifitria, M.Si, Apt selaku pembimbing pertama dan Ibu Ismiarni Komala, M.Sc., Ph. D, Apt selaku pembimbing kedua yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk membimbing dan mengarahkan, memberikan ilmu dan masukan saran, sejak proposal skripsi, pelaksanaan penelitian sampai penyusunan skripsi. 3. Prof. Dr. (hc) dr. M. K. Tadjudin, Sp. And selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 4. Drs. Umar Mansyur, M. Sc selaku Kepala Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 5. Bapak dan Ibu dosen yang telah memberikan ilmu dan pengetahuan hingga penulis dapat menyelesaikan studi di jurusan Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 6. Ayahanda H. Rasna Ibnu Andi dan Ibunda tersayang Ghosriyani, adikadikku tercinta Nursinta Arifiani Rosdiana, Nurazmi Muhadi Rasdityanto dan Nuril Fatina Sodiqo Rosdini yang selalu memberikan doa, kasih sayang, semangat serta dukungannya baik moral maupun material yang tak terhingga terhadap penulis. 7. Untuk teman-temanku tercinta Risda Yulianti, Arestya Otari, Elsa Suci Mutiara, Widya Larasaty, Alfrida Tatsa Haifa, Migi, Dina Permata viii Wijaya, Novayanti, Putri Assifa, Nida yang telah memberikan semangat kepada penulis. 8. Teman-teman seperjuangan farmasi angkatan 2009 khususnya PHENOL, yang sama-sama berjuang bersama selama 4 tahun untuk menyelesaikan skripsi ini dan terima kasih untuk segala kebersamaan dan kekompakannya. 9. Semua pihak yang tidak muat ditulis dihalaman ini, tetapi amal baiknya semoga dicatat di sisi Allah. Semoga Allah SWT memberikan balasan yang lebih baik pada mereka semua. Penulis menyadari proposal skripsi ini jauh dari sempurna, namun demikian penulis berharap skripsi ini dapat bermanfaat bagi pihak lain yang berkepentingan. Wassalamu’alaikum Wr. Wb Jakarta, 16 September 2013 Penulis ix x DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ................................................................................ i HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS .................................... iii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................... iv LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI ..................................................... v ABSTRAK ................................................................................................. vi ABSTRACT ............................................................................................... vii KATA PENGANTAR ............................................................................... viii HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH .......... x DAFTAR ISI .............................................................................................. xi DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xiv DAFTAR TABEL ..................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. xvi BAB 1 PENDAHULUAN ....................................................................... 1.1 Latar Belakang ....................................................................... 1.2 Perumusan Masalah ............................................................... 1.3 Tujuan Penelitian ................................................................... 1.4 Hipotesis ................................................................................. 1.5 Manfaat Penelitian ................................................................. 1 1 2 2 2 2 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA .............................................................. 2.1 Tanaman Lumut Hati(Mastighopora diclados) ...................... 2.1.1 Klasifikasi Tanaman .................................................. 2.1.2 Karakteristik Tanaman ............................................... 2.1.3 Habitat ........................................................................ 2.1.4 Kandungan Kimia ...................................................... 2.1.5 Aktivitas Biologi ......................................................... 2.2 Simplisia ................................................................................ 2.3 Ekstrak dan Ekstraksi ............................................................ 2.3.1 Pengertian Ekstrak dan Ekstraksi ............................... 2.3.2 Metode Ekstraksi ....................................................... 2.4 Diabetes Mellitus ................................................................... 2.4.1 Definisi Diabetes Mellitus ......................................... 2.4.2 Klasifikasi Diabetes Mellitus ...................................... 2.4.3 Gejala Diabetes Mellitus ............................................. 2.5 Terapi Farmakologi ................................................................ 2.5.1 Terapi Insulin ............................................................. 2.5.2 Terapi Obat Hipoglikemik Oral ................................. 2.5.2.1 Golongan Sulfonilurea .................................... 2.5.2.2 Golongan Biguanida ....................................... 2.5.2.3 Golongan Glukosidase Inhibitor ..................... 2.5.2.4 Golongan Thiazolidindon ............................... 2.5.2.5 Golongan Miglitinida ...................................... 2.6 Aloksan .................................................................................. 2.7 Glibenklamid .......................................................................... 3 3 3 3 3 3 4 4 5 5 5 7 7 7 8 9 9 9 9 9 10 11 11 11 12 xi 2.8 Metode Pengujian .................................................................. 2.8.1 Metode Induksi Aloksan ............................................... 2.8.2 Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa Darah ................. 13 13 13 BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ................................................. 3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ................................................ 3.2 Alat dan Bahan ...................................................................... 3.2.1 Alat ............................................................................. 3.2.2 Bahan Uji ................................................................... 3.2.3 Bahan Kimia ................................................................ 3.3 Prosedur Penelitian ................................................................ 3.3.1 Pembuatan Simplisia .................................................. 3.3.2 Ekstraksi Lumut Hati Mastigophora diclados ............ 3.3.3 Uji Penapisan Fitokimia .............................................. 3.3.4 Pengujian Parameter Spesifik dan Non Spesifik ........ 3.4 Rancangan Percobaan ............................................................ 3.4.1 Pembagian Kelompok Perlakuan ................................. 3.4.2 Persiapan Hewan Percobaan ........................................ 3.5 Pembuatan Sediaan Dosis Uji ................................................ 3.6 Induksi Diabetes Pada Tikus ................................................. 3.7 Pemberian Bahan Uji ............................................................. 3.8 Pengambilan Darah Hewan Uji .............................................. 3.9 Analisis Data ........................................................................... 14 14 14 14 14 14 14 14 15 15 16 17 17 18 18 19 19 20 20 BAB 4 HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .......................... 4.1 Hasil Penelitian ...................................................................... 4.1.1 Penapisan Fitokimia Ekstrak Mastigophora diclados ... 4.1.2 Hasil Ekstraksi Lumut Hati Mastigophora diclados ..... 4.1.3 Hasil Parameter Spesifik dan Non Spesifik Ekstrak...... 4.1.4 Hasil Pengukuran Kadar Glukosa Darah ....................... 4.2 Pembahasan ........................................................................... 21 21 21 21 21 22 24 BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .................................................... 5.1 Kesimpulan ............................................................................ 5.2 Saran ...................................................................................... 30 30 30 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 31 xii DAFTAR GAMBAR Gambar 1 Gambar 2 Gambar 3 Gambar 4 Gambar 5 Gambar 6 Gambar 7 Gambar 8 Gambar 9 Gambar 10 Gambar 11 Halaman Struktur Kimia Aloksan. ........................................................ 11 Struktur Kimia Glibenklamid ................................................. 12 Kurva Penurunan Kadar Glukosa Darah (mg/dL) ................. 24 Mastigophora diclados (Brid.) Ness ...................................... 34 Alkaloid (Dragendroff) .......................................................... 38 Alkaloid (Mayer) ................................................................... 38 Antraquinon ............................................................................ 38 Fenolik .................................................................................... 38 Flavonoid ................................................................................ 39 Saponin ................................................................................... 39 Terpenoid ................................................................................ 39 xiii DAFTAR TABEL Tabel 1 Tabel 2 Tabel 3 Tabel 4 Tabel 5 Tabel 6 Tabel 7 Tabel 8 Tabel 9 Tabel 10 Tabel 11 Halaman Kelompok Perlakuan pada Metode Induksi Aloksan ............. 17 Data Hasil Penapisan Fitokimia.............................................. 21 Hasil Data Parameter Ekstrak ................................................ 21 Nilai Rerata dan Standar Deviasi Metode Induksi Aloksan .. 22 Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah ........................ 23 Hasil Pengukuran Glukosa Darah Hewan Uji ....................... 45 Uji Normalitas Ekstrak Mastigophora diclados ..................... 47 Uji Homogenitas Ekstrak Mastigophora diclados ................. 48 Uji ANOVA Ekstrak Mastigophora diclados ........................ 49 Uji Kruskal-Wallis Ekstrak Mastigophora diclados .............. 50 Uji BNT Ekstrak Mastigophora diclados ............................... 50 xiv DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1 Gambar Lumut Hati Mastigophora diclados ......................... 33 Lampiran 2 Perlakuan Hewan Uji Pada Saat Penelitian ........................... 34 Lampiran 3 Hasil Penapisan Fitokimia ..................................................... 35 Lampiran 4 Proses Pembuatan Ekstrak ..................................................... 37 Lampiran 5 Skema Aklimatisasi Hewan Uji dan Induksi Aloksan ........... 38 Lampiran 6 Skema Kerja Antidiabetes ..................................................... 39 Lampiran 7 Perhitungan Ekstrak Etil Asetat Mastigophora diclados ...... 40 Lampiran 8 Sertifikat Glibenklamida ........................................................ 42 Lampiran 9 Determinasi Tanaman ............................................................ 43 Lampiran 10 Pemeriksaan Parameter Ekstrak ............................................ 44 Lampiran 11 Perhitungan Persentase Kadar Glukosa Darah ...................... 46 Lampiran 12 Analisis Data Kadar Glukosa Darah ...................................... 47 xv BAB 1 PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Diabetes mellitus adalah suatu sindroma klinik yang ditandai oleh poliuri, polifagi, dan polidipsi, disertai dengan peningkatan kadar glukosa darah atau hiperglikemia (glukosa puasa ≥ 126 mg/dL atau glukosa sewaktu ≥ 200 mg/dL). Bila DM tidak segera diatasi akan terjadi gangguan metabolisme lemak dan protein, dan resiko timbulnya gangguan mikrovaskular atau makrovaskular meningkat (Katzung, 2007). Hiperglikemia dapat menyebabkan produksi Reactive Oxygen Species (ROS) atau radikal bebas yang berlebihan dan akan memicu terjadinya stress oksidatif, yaitu suatu keadaan dimana jumlah radikal bebas yang diproduksi melebihi kapasitas tubuh untuk menangkalnya (Made, 2008). Senyawa antioksidan berperan penting untuk mengurangi kerusakan oksidatif sel maupun jaringan yang disebabkan Reactive Oxygen Spesies (ROS) termasuk radikal bebas seperti radikal anion superoksida, radikal hidroksil singlet oksigen dan senyawa yang bukan radikal bebas seperti hidrogen peroksida (Kumar et al., 2010). Tumbuhan lumut merupakan tumbuhan tingkat rendah dalam divisi bryophyta, yang termasuk dalam tumbuhan darat sejati. Pada umumnya lumut menyukai tempat-tempat basah dan lembab di dataran rendah sampai dataran tinggi. Tumbuhan ini sering disebut tumbuhan perintis karena lumut dapat tumbuh dengan berbagai kondisi pertumbuhan ditempat tumbuhan tingkat tinggi tidak bisa tumbuh (Damayanti, 2006). Menurut Conard dan Redfearn (1996) klasifikasi bryophyta terdiri atas tiga kelas yaitu Anthocerotae/Anthocerotopsida (Lumut tanduk), Hepaticae/Hepaticopsida (Lumut hati) dan Musci/Bryopsida (lumut sejati). Lumut hati memiliki anggota sekitar 5000 jenis. Struktur tubuhnya terdiri dari 2 macam bentuk, yaitu lumut dengan struktur yang memiliki daun dan yang hanya memiliki talus. Lumut hati memiliki badan minyak (oil bodies) sebagai penanda yang sangat penting untuk klasifikasi lumut tersebut. Badan minyak (oil bodies) tersebut mampu mensintesis senyawa yang larut dalam lemak 1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2 seperti asetogenin, terpenoid dan senyawa aromatik, sementara yang lainnya tidak. Beberapa kandungan kimia dari lumut hati merupakan senyawa yang khas bagi kelas ini dan menunjukkan berbagai aktivitas biologi yang menarik, seperti antimikroba, sitotoksik dan antioksidan. (Komala et al., 2010) Satu jenis tumbuhan yang bisa dijadikan obat adalah tumbuhan lumut hati. Komala et al (2010) telah melaporkan bahwa tumbuhan lumut Mastigophora diclados mengandung senyawa-senyawa fenolik seskuiterpenoid herbertan. Senyawa-senyawa golongan fenolik seskuiterpen herbetan dilaporkan memiliki aktivitas sitotoksik, antioksidan dan anti mikrobial. Antioksidan dapat bekerja menghambat radikal bebas yang diketahui sebagai mediator dari berbagai penyakit antara lain karsinogenesis jantung koroner, inflamasi, artitis, dan diabetes (Ali et al., 2011). Berdasarkan hal tersebut, maka perlu dilakukan penelitian mengenai uji aktivitas antihiperglikemia dari ekstrak lumut hati Mastigophora diclados. 1.2 Perumusan Masalah Lumut hati Mastigophora diclados diduga dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih jantan galur wistar yang telah diinduksi aloksan. 1.3 Tujuan Penelitian Untuk mengetahui aktivitas ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados terhadap penurunan kadar glukosa darah pada tikus putih jantan. 1.4 Hipotesis Kerena memiliki aktifitas antioksidan, diperkirakan bahwa ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados memiliki aktivitas antidiabetes yang dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus jantan. 1.5 Manfaat Penelitian Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi dalam pengembangan ilmu pengetahuan tentang tumbuhan lumut hati Mastigophora diclados. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tanaman Lumut Hati (Mastighopora diclados) 2.1.1 Klasifikasi Tanaman Klasifikasi tanaman lumut hati Mastigophora diclados (Brid.) Nees Kingdom : Plantae Phylum : Marchantiophyta Class : Jungermanniopsida Order : Jungermanniales Suborder : Lepicoleaceae Family : Mastigophoraceae Genus : Mastigophora diclados Nees Species : Mastigophora diclados (Brid.) Nees 2.1.2 Karakteristik Tanaman Batang tegak ketika dalam kondisi padat dengan panjang 1-1,5 cm, bercabang rapat dengan 1-2 pinnate, berwarna hijau kecoklatan, daun berbentuk lateral, lobus segitiga dengan lanset basal di kedua sisi. 2.1.3 Habitat Tumbuhan lumut hati Mastigophora diclados tumbuh pada batang pohon pinus dan agathis, batu-batuan lembab, dinding lereng pegunungan (Ida Haerida et al., 2011) 2.1.4 Kandungan Kimia Berdasarkan kandungan kimianya, Mastigophoraceae dan Herbertaceae memiliki kesamaan yaitu sama-sama menghasilkan senyawa seskuiterpenoid herbetan sebagai komponen utamanya (Asakawa, 1995, 2004; Harinantenaina & Asakawa, 2007). Dari pemeriksaan Gas Chromatography-Mass Spectrometry ekstrak eter Mastigophora diclados (Brid.ExF. Weber) dari borneo menunjukkan adanya senyawa herbertene, herbertenol, herbertene-2,3-diol dan herbertene-1,2diol. Dalam koleksi sebelumnya dari Mastigophora diclados Malaysia Timur, 3 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 4 selain herbertanes, herbertane dimer, juga ditemukan pada mastigophorenes A-D (Asakawa et al., 1991). Namun, spesies di Malaysia Barat tidak menghasilkan herbertanes, melainkan jenis trachylobane diterpenoids dari hasil isolasi (Leong & Harrison, 1997). 2.1.5 Aktivitas Biologi Mastigophora diclados memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker (HL-60 dan sel KB), antioksidan dan aktivitas antimikrobial terhadap Bacillus subtilis (Komala et al., 2010). 2.2 Simplisia Simplisia adalah bahan alam yang digunakan sebagai bahan obat dan belum mengalami pengolahan apapun juga, dan kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang telah dikeringkan. Simplisia dibedakan menjadi simplisia nabati, simplisia hewani, dan simplisia pelikan (mineral). Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa tumbuhan utuh, bagian tumbuhan atau eksudat tumbuhan. Eksudat tumbuhan ialah isi sel yang secara spontan keluar dari tumbuhan atau isi sel yang dengan cara tertentu dipisahkan dari tumbuhannya dan belum berupa senyawa kimia murni (Depkes RI, 2000). 2.3 Ekstrak dan Ekstraksi 2.3.1 Pengertian Ekstrak dan Ekstraksi Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunkaan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 2000). Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair (Depkes RI, 2000) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 5 2.3.2 Metode Ekstraksi Metode ekstraksi dapat dilakukan dengan beberapa cara : 2.3.2.1 Cara Dingin a. Maserasi Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia yang paling sederhana, menggunakan pelarut yang cocok dengan beberapa kali pengadukan pada temperatur ruangan atau (kamar) (Depkes, 2000). Maserasi pada umumnya dilakukan dengan cara merendam 10 bagian serbuk simplisia dalam 75 bagian cairan penyari (pelarut) (Depkes, 1986). b. Perkolasi Percolare berasal dari kata “colare”, artinya menyerkai dan “per”= through, artinya menembus (Syamsuni, 2006). Dengan demikian, perkolasi adalah suatu cara penarikan memakai alat yang disebut percolator dimana simplisia terendam dalam cairan penyari, zat-zat akan terlarut dan larutan tersebut akan menetes secara beraturan (Syamsuni, 2006). Prosesnya terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap perendaman antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan perkolat) sampai diperoleh ekstrak (Depkes, 2000). Keuntungan dari metode perkolasi ini adalah proses penarikan zat berkhasiat dari tumbuhan lebih sempurna (Agoes, 2007). 2.3.2.2 Cara Panas a. Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Depkes, 2000) b. Digesti UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 6 Disgesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur ruangan (kamar) yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-500C. c. Infudasi Infudasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur pemanasan air (bejana infus diatas penangas air mendidih), temperatur terukur (96-980C) selama waktu tertentu (15-20 menit) (Depkes, 2000) d. Dekoktasi Dekoktasi adalah ekstraksi dengan metode infus yang dilakukan selama 30 menit dengan temperatur titik didih air. e. Soxhlet Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus yang sampelnya dibungkus dengan kertas saring sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik. f. Destilasi Uap Destilasi uap adalah ekstrasi senyawa kandungan menguap (minyak atsiri) dari bahan segar atau simplisia dengan uap air berdasarkan peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari ketel secara kontinu sampai sempurna dan diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran (senyawa kandungan menguap ikut terdestilasi) menjadi destilat air bersama senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah sebagian. Destilasi uap, bahan (simplisia) benar-benar tidak tercelupkan ke air yang mendidih, namun dilewati oleh uap air sehingga kandungan senyawa menguap ikut terdestilasi (Ditjen POM, 2000) 2.4 Diabetes Mellitus 2.4.1 Definisi Diabetes mellitus (DM) didefinisikan sebagai suatu penyakit atau gangguan metabolisme kronis dengan multi etiologi yang ditandai dengan tingginya kadar gula darah disertai dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lipid dan protein sebagai akibat infusiensi fungsi insulin (Depkes RI, 2005). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 7 Disertai dengan peningkatan kadar glukosa darah atau hiperglikemia (glukosa puasa ≥ 126 mg/dL atau glukosa sewaktu ≥ 200 mg/dL) (Katzung, 2007). 2.4.2 Klasifikasi Diabetes Mellitus Secara umum diabetes dapat dibagi menjadi 3 kelompok yaitu : 2.4.2.1 Diabetes Tipe 1 (Diabetes melitus tergantung insulin, IDDM) Penyakit ini ditandai dengan defisiensi insulin absolut yang disebabkan oleh lesi atau nekrosis sel β langerhans, hilangnya fungsi sel β mungkin disebabkan oleh invansi virus, kerja toksin kimia atau umumnya melalui kerja antibodi autoimun yang ditunjukan untuk melawan sel β. Akibat dari dekstruksi sel β, pankreas gagal berespon terhadap masukan glukosa (Mycek et a.l, 2001) Diabetes tipe I ini merupakan bentuk diabetes parah yang berhubungan dengan terjadinya ketosis apabila tidak diobati, lazim terjadi pada anak remaja tetapi kadang-kadang juga terjadi pada orang dewasa. Gangguan katabolisme yang disebabkan hampir tidak terdapatnya insulin dalam sirkulasi, glukagon plasma meningkat dan sel-sel β pankreas gagal merespon semua stimulus insulinogenik (Katzung, 2002) 2.4.2.2 Diabetes Tipe II (Diabetes mellitus tak tergantung insulin, NIDDM) Diabetes tipe II merupakan suatu kelompok heterogen yang terdiri dari bentuk diabetes yang lebih ringan yang terutama terjadi pada orang dewasa tetapi kadang-kadang juga terjadi pada remaja. Sirkulasi insulin endogen cukup untuk mencegah terjadinya ketoasidosis tetapi insulin tersebut sering dalam kadar kurang dari normal atau secara relatif tidak mencukupi karena kurang pekanya jaringan. Obesitas pada umumnya menyebabkan gangguan pada kerja insulin, merupakan faktor resiko yang biasa terjadi pada diabetes tipe ini, sebagian besar pasien dengan diabetes tipe II ini bertubuh gemuk (Katzung, 2002). Pada NIDDM pankreas masih mempunyai beberapa fungsi sel β yang menyebabkan kadar insulin bervariasi yang tidak cukup untuk memelihara homeostasis glukosa. Diabetes tipe II sering dihubungkan dengan resistensi organ target yang UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 8 membatasi respon insulin endogen dan eksogen. Pada beberapa kasus disebabkan oleh penurunan jumlah atau mutasi reseptor insulin (Mycek et al., 2001) 2.4.2.3 Diabetes gestational Diabetes gestational adalah diabetes yang terjadi pada saat kehamilan, ada kemungkinan akan normal kembali namun toleransi glukosa yang terganggu juga bisa terjadi setelah kehamilan tersebut. DM tipe II atau DM tipe I mungkin terjadi pada wanita yang tidak menjalani penanganan pada saat diabetes gestational ini terjadi. Perlu dilakukan pemeriksaan sebelum 24 minggu kehamilan. Data statistik menunjukkan bahwa pengontrolan gula darah saat kehamilan bagi penderita diabetes gestational akan menghindarkan ibu dan bayi yang dilahirkan dari kematian atau cacat sama halnya dengan tidak mengalami diabetes. Trisemester kedua merupakan saat terjadinya peningkatan stress kehamilan sehingga kadar glukosa darah meningkat (Guthrie and Guthrie, 2003). 2.4.3 Gejala Diabetes Mellitus Penyakit diabetes mellitus ditandai oleh poliurea (banyak kencing), polidipsia (banyak minum) dan polifagia (banyak makan), walaupun banyak makan tetapi berat tubuh menurun, hiperglikemia, glikosuria, ketosis, dan asidosis (Ganong, 1998). 2.5 Terapi Farmakologi Terapi farmakologi meliputi pengobatan dengan insulin atau dengan obat- obat hipoglikemia oral. Obat hanya perlu diberikan jika pengaturan diet secara maksimal tidak berhasil mengendalikan kadar glukosa darah. Penurunan berat badan merupakan tindakan yang sangat penting dalam pengendalian diabetes dan harus dilakukan secara intensif terlepas dari obat yang diberikan (Handoko dan Suharto, 1995). 2.5.1 Terapi Insulin Penderita DM tipe 1 sering kali memerlukan insulin eksogen untuk mengatasi keadaan hiperglikemia. Kebanyakan penderita tipe 2 tidak memerlukan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 9 insulin eksogen untuk kelangsungan hidupnya tetapi insulin eksogen hanya digunakan untuk mencapai kesehatan optimum. Pada beberapa pasien, insulin digunakan sebagai alternatif dari terapi hipoglikemik oral. Diperkirakan sebanyak 20% dari jumlah penderita diabetes tipe 2 di Amerika Serikat diobati dengan menggunakan insulin (Katzung, 2001) 2.5.2 Terapi dengan obat-obat hipoglikemik oral Obat-obat ini berguna dalam pengobatan pasien diabetes tidak tergantung insulin (NIDDM) yang tidak dapat diperbaiki hanya dengan diet. Pasien yang sudah lama menderita diabetes mungkin memerlukan suatu kombinasi obat hipoglikemik dan insulin untuk mengontrol hipoglikemiknya. 2.5.2.1 Golongan Sulfonilurea Mekanisme kerja sulfonilurea termasuk : a) Merangsang pelepasan insulin dari sel beta pankreas b) Mengurangi kadar glukagon dalam serum c) Meningkatkan peningkatan insulin pada jaringan target dan reseptor Merupakan obat hipoglikemik oral yang paling dahulu ditemukan. Sampai beberapa tahun yang lalu, dapat dikatakan hamper semua obat hipoglikemik oral merupakan golongan sulfonilurea. Obat hipoglikemik oral golongan sulfonilurea merupakan obat pilihan (drug of choice) untuk penderita diabetes dewasa baru dengan berat badan normal dan kurang serta tidak pernah mengalami ketoasidosis sebelumnya. Senyawa-senyawa sulfonilurea sebaiknya tidak diberikan pada penderita gangguan hati, ginjal dan tiroid. Obat-obat kelompok ini merangsang sekresi insulin di kelenjar pankreas, oleh sebab itu hanya efektif apabila sel-sel β Langerhans pankreas masih dapat berproduksi. Penurunan kadar glukosa darah yang terjadi setelah pemberian senyawa-senyawa sulfonilurea disebabkan perangsangan sekresi insulin oleh kelenjar pankreas. Sifat perangsangan ini berbeda dengan perangsangan glukosa, karena ternyata pada saat glukosa (atau kondisi hiperglikemia) gagal merangsang sekresi insulin, senyawa-senyawa obat ini masih mampu meningkatkan sekresi insulin. Oleh sebab itu, obat-obat golongan sulfonilurea sangat bermanfaat untuk UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 10 penderita diabetes yang kelenjar pankreasnya masih mampu memproduksi insulin, tetapi karena sesuatu hal terhambat sekresinya. Pada penderita dengan kerusakan sel-sel β Langerhans kelenjar pankreas, pemberian obat-obat hipoglikemik oral golongan sulfonilurea menghambat degradasi insulin di hati (Depkes RI, 2005) 2.5.2.2 Biguanida Obat hipoglikemik oral golongan biguanida bekerja langsung pada hati (hepar), menurunkan produksi glukosa hati. Senyawa-senyawa golongan biguanida tidak merangsang sekresi insulin dan hampir tidak pernah menyebabkan hipoglikemia. Satu-satunya senyawa biguanida yang masih dipakai sebagai obat hipoglikemik oral saat ini adalah metformin. Metformin masih banyak dipakai dibeberapa negara termasuk Indonesia, karena frekuensi terjadinya asidosis laktat cukup sedikit asal dosis tidak melebihi 1700 mg/hari dan tidak ada gangguan fungsi ginjal dan hati (Depkes RI, 2005). 2.5.2.3 Glukosidase Inhibitor Senyawa-senyawa inhibitor α-glukosidase bekerja menghambat enzim alfa glukosidase yang terdapat pada dinding usus halus. Enzim-enzim α-glukosidase (maltase, isomaltase, glukomaltase dan sukrase) berfungsi menghidrolisis oligosakarida, pada dinding usus halus. Inhibisi kerja enzim ini secara aktif dapat mengurangi pencernaan karbohidrat kompleks dan absorbsinya, sehingga dapat mengurangi peningkatan kadar glukosa post prandialpada penderita diabetes. Senyawa inhibitor α-glukosidase juga menghambat enzim α-amilase pankreas yang bekerja menghidrolisis polisakarida di dalam lumen usus halus. Obat ini merupakan obat oral yang biasanya diberikan dengan dosis 150-600 mg/hari (Depkes RI,2005). 2.5.2.4 Thiazolidindon Rosiglitazon dan pioglitazone merupakan obat golongan ini, dengan kerja farmakologi yang istimewa yang disebut juga dengan insulin sentitizer. Berdaya mengurangi resistensi insulin dan meningkatkan sensitivitas jaringan perifer untuk insulin. Oleh karena itu, penyerapan glukosa ke dalam jaringan lemak dan otot UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 11 meningkat, juga kapasitas penimbunannya di jaringan ini. Efek dari obat ini menyebabkan kadar insulin, glukosa, dan asam lemak dalam darah menurun, begitu pula glukoneogenesis dalam hati (Tjay dan Rhardja, 2007). 2.5.2.5 Miglitinida Obat-obat hipoglikemik oral golongan glinida merupakan obat hipoglikemik generasi baru yang cara kerjanya mirip dengan golongan sulfonilurea. Kedua golongan senyawa hipoglikemik oral ini bekerja meningkatkan sintesis dan sekresi insulin oleh kelenjar pankreas. Umumnya senyawa obat hipoglikemik golongan meglitinida dan turunan fenilalanin ini dipakai dalam bentuk kombinasi dengan obat-obat antidiabetik oral lainnya (Depkes RI, 2005). 2.6 Aloksan Gambar 1. Struktur Kimia Aloksan Aloksan adalah suatu substat yang secara struktural adalah derivat pirimidin sederhana. Aloksan diperkenalkan sebagai hidrasi aloksan pada larutan encer. Aloksan murni diperoleh dari oksidasi asam urat oleh asam nitrat (Nugroho, 2004). Aloksan merupakan senyawa kimia dengan nama IUPAC 2,4,5,6,tetraoksipirimidina; 5,6-dioksiurasil (Szkudelski, 2001). Senyawa ini merupakan senyawa yang sering digunakan untuk menginduksi penyakit diabetes mellitus atau bahan kimia diabetogenik. Aloksan merupakan senyawa yang bersifat hidrofilik dan tidak stabil. Senyawa ini memiliki waktu paruh sekitar 1.5 menit pada pH netral dan temperature 370C. Pada suhu rendah aloksan memiliki waktu paruh yang lebih lama. Sebagai diabetogenik, aloksan dapat digunakan secara intravena, intraperitoneal dan subkutan. Dosis intravena yang digunakan biasanya UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 12 65 mg/kg BB sedangkan intraperitoneal dan subkutan adalah 2-3 kalinya (Szkudelski, 2001). 2.7 Glibenklamid Gambar 2. Struktur Kimia Glibenklamid Glibenklamid merupakan obat diabetes mellitus yang bekerja dengan cara meningkatkan sekresi insulin (Bailey & Krentz, 2010). Glibenklamid merupakan obat hipoglikemia oral dari turunan sulfonilurea. Menurut Jones & Hattersley (2010), pengobatan dengan menggunakan glibenklamid secara oral disarankan bagi penderita diabetes akibat kerusakan sel β pankreas. Secara histopatologis, Mai Cing (2010) telah membuktikan bahwa terapi glibenklamid memiliki efek memperbaiki kelenjar pankreas yang rusak lebih baik dari obat tradisional. Namun demikian, glibenklamid dapat memicu laju laju absorpsi glukosa gastrointestinal dan meningkatkan kadar sekresi insulin plasma, bahkan pada saat kadar glukosa plasma darah berada di bawah ambang sekresi insulin. Hal inilah yang memicu kelaparan dan pada akhirnya menyebabkan kenaikan berat badan bagi para pengkonsumsinya (Bailey & Krentz, 2010). Untuk mencapai kadar optimal di plasma, glibenklamid akan lebih efektif bila diminum 30 menit sebelum makan. Obat ini cepat diserap dalam saluran pencernaan, memiliki waktu paruh sekitar 4 jam (Suherman, 2007). Dalam plasma, sekitar 90-99% terikat pada protein plasma, terutama albumin. Meskipun waktu paruhnya pendek, namun efek hipoglikemiknya berlangsung selama 12-24 jam sehingga cukup diberikan satu kali sehari. Sekitar 50% dari dosis diekskresikan dalam urin dan 50% melalui empedu ke tinja. Dosis awal untuk DM tipe 2 adalah 2,5-5 mg setiap hari, disesuaikan setiap 7 hari dengan penambahan sebesar 2,5 atau 5 mg sehari sampai 15 mg perhari (Suherman, 2007). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 13 2.8 Metode Pengujian 2.8.1 Metode Induksi Aloksan Induksi diabetes dilakukan pada tikus yang diberi suntikan aloksan monohidrat dengan dosis 100 mg/kg BB (Nandhagopal et al, 2013). Penyuntikan dilakukan secara intraperitoneal. Dosis intraperitoneal 2-3 kali dari dosis intravena 65 mg/kg BB (Szkudelski, 2001). Dosis 100 mg/kg dipilih diharapkan sel-sel β Langerhans masih dapat berproduksi. Perkembangan hiperglikemia diperiksa setiap hari. 2.8.2 Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa Darah (Baver DJ, 1982) Metode Enzimatik Kadar glukosa darah diukur dengan metode enzimatik (glukosa oksidase) menggunakan glucometer Roche. Prinsip kerja penggunaan alat ini yaitu : oksigen dengan bantuan enzim glukosa oksidase mengkatalisis proses oksidasi glukosa menjadi glukoronat dan hydrogen peroksida. Dalam reaksi yang kedua enzim peroksidase mengkatalisis reaksi oksidase khromogen (akseptor oksigen yang tidak berwarna), kemudian oleh hidrogen peroksida membentuk suatu produk khromogen teroksidasi berwarna biru, yang diukur dengan glukometer. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Penapisan Fitokimia dan Laboratorium Hewan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Berlangsung mulai dari bulan Januari sampai dengan bulan Juli 2013. 3.2 Alat Dan Bahan 3.2.1 Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut : vacuum rotary evaporator, oven, timbangan hewan, kandang tikus beserta tempat makan dan minum, timbangan analitik, blender, alat-alat gelas, glukometer (easy touch), sonde oral, jarum suntik, alumunium foil, lumpang, kertas saring, kapas, sarung tangan, masker, tissue gulung, dan label. 3.2.2 Bahan Uji Bahan yang digunakan adalah lumut hati Mastigophora diclados yang diperoleh dari Gunung Slamet Purwokerto. glibenklamid (BPOM) sebagai obat pembanding dan aloksan monohidrat sebagai penginduksi. 3.2.3 Bahan Kimia Bahan kimia yang digunakan antara lain kloroform, H2SO4 pekat, ammonia encer, etil asetat, FeCl3 0,1%, reagen Meyer, reagen Dragendroff, asam klorida, aquadest. 3.3 Prosedur Kerja 3.3.1 Pembuatan Simplisia Sampel disortasi basah selanjutnya dicuci dibawah air mengalir hingga bersih, lalu dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Selanjutnya sampel yang telah kering ditimbang kemudian digiling menggunakan blender hingga menjadi serbuk. 14 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 15 3.3.2 Ekstraksi Lumut Hati (Mastigophora diclados) Sebanyak 2230 gram serbuk kering Lumut Hati (Mastigophora diclados) dimasukkan ke dalam botol gelap, diekstraksi bertingkat dengan metode maserasi menggunakan pelarut yang bersifat non-polar terlebih dahulu (n-heksana) untuk mengekstraksi senyawa nonpolar kemudian pelarut yang bersifat semi polar (etil asetat) untuk mengekstraksi senyawa semi polar. Setiap tahap ekstraksi dengan tingkat kepolaran pelarut yang berbeda, dilakukan beberapa kali hingga pelarut tidak berwarna lagi (jernih). Selanjutnya masing-masing hasil ekstraksi disaring dan filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental. Selanjutnya ekstrak kental yang diperoleh, dihitung untuk diketahui hasil randemennya. Rendemen ekstrak = x 100% 3.3.3 Uji Penapisan Fitokimia ( Depkes, 2000 ) a. Identifikasi Steroid dan Triterpenoid Ekstrak di masukkan sedikit ke dalam tabung reaksi kecil, lalu dikocok dengan sedikit eter, lapisan eter diambil lalu diteteskan pada plat tetes dan biarkan sampai kering. Setelah ekstrak kering ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat. Apabila terbentuk warna orange, merah atau kuning berarti positif terpenoid. Tetapi apabila terbentuk warna hijau berarti positif steroid. b. Identifikasi Flavonoid Ekstrak ditambahkan serbuk Mg, lalu ditambahkan HCl pekat. Apabila terbentuk warna orange, merah atau kuning berarti positif flavonoid. c. Identifikasi Fenolik Sejumlah kecil ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi kecil, lalu di kocok dengan sedikit eter. Lapisan eter dikeringkan pada plat tetes, ditambhakan larutan FeCl3. Terbentuk warna ungu biru berarti positif fenolik. d. Identifikasi Saponin Lapisan air pada fraksi diatas diambil, lalu dikocok vertikal. Apabila terbentuk busa yang stabil selama 10 menit berarti positif saponin. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 16 e. Identifikasi Alkaloid Untuk identifikasi alkaloid, ekstrak dilarutkan dengan etanol 96% kemudian ditambahkan asam klorida encer 2 N. Filtrat yang diperoleh disaring kemudian diidentifikasi menggunakan pereaksi Mayer, Bouchardat, dan Dragendroff. Pada penambahan Mayer, hasil positif ditandai dengan terbentuknya endapan berwarna putih atau kuning. Hasil positif Dragendroff ditunjukkan dengan terbentuknya endapan berwarna merah bata. Penambahan Bouchardat memberikan hasil positif jika terbentuk endapan coklat sampai hitam. (Ayoola et al., 2008) f. Identifikasi Kuinon Identifikasi kuinon dilakukan terhadap ekstrak 1. Sejumlah dipanaskan dalam air selama 5 menit lalu disaring. Sebanyak 5 ml filtat ditambahkan beberapa tetes larutan NaOH 1 N sehingga terbentuk warna merah menunjukkan adanya kuinon. 3.3.4 Pengujian Parameter Spesifik dan Non Spesifik Ekstrak 1. Pengujian Parameter Spesifik Uji parameter spesifik hanya dilakukan penetapan organoleptik ekstrak meliputi bentuk, bau, warna, dan rasa. 2. Pengujian Parameter Non Spesifik a. Kadar Air Krus porselin kosong dikonstankan terlebih dahulu dengan pemanasan pada suhu 100-1050C selama 1 jam, didinginkan dalam desikator, dan kemudian ditimbang. Sebanyak 1 gram ekstrak ditimbang dan dimasukkan ke dalam krus yang telah diketahui beratnya. Ekstrak dikeringkan dalam oven pada suhu 105-1100C selama 3 jam, didinginkan dalam desikator dan selanjutnya ditimbang kembali. Perlakuan ini diulang sampai beratnya konstan. Kadar air dihitung dalam persen terhadap berat sampel awal (Depkes RI, 2000). b. Kadar Abu Krus porselin kosong dikonstantakan dengan pemanasan pada suhu 100-1050C selama 2 jam lalu didinginkan dalam desikator. Sebanyak 2 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 17 gram ekstrak dimasukkan ke dalam krus yang telah konstan, dipijarkan dalam tanur pada suhu 600 0C selama 6 jam hingga sampel menjadi abu, kemudian didinginkan dan ditimbang. Penimbangan dilakukan secara berulang sampai didapatkan berat konstan. Kadar abu dihitung dalam persen terhadap berat awal (Depkes RI, 2000) 3.4 Rancangan Percobaan Hewan coba yang digunakan adalah tikus putih jantan galur Wistar, berumur 2-3 bulan dengan berat badan antara 140-180 gram. Yang diaklimatisasi selama 1 bulan agar dapat menyesuaikan diri dengan lingkungannya. Dimana selama proses adaptasi, dilakukan pengamatan kondisi umum dan keseimbangan berat badan. Hewan uji yang akan dipilih sebanyak 30 ekor tikus putih jantan secara acak untuk dibagi menjadi 6 kelompok, masing-masing terdiri dari 5 ekor dalam setiap kelompoknya sesuai dengan syarat WHO. 3.4.1 Pembagian kelompok perlakuan Tabel 1. Kelompok Perlakuan pada Metode Induksi Aloksan Kelompok hewan Jumlah Perlakuan tikus KN Diberi air suling 5 K (-) Diinduksi aloksan, diberi air suling 5 K (+) Diinduksi aloksan, diberi glibenklamid 5 D1 D2 D3 Diinduksi aloksan, diberi dosis 1 mg/kg Mastigophora diclados Diinduksi aloksan, diberi dosis 10 mg/kg Mastigophora diclados Diinduksi aloksan, diberi dosis 100 mg/kg Mastigophora diclados 5 5 5 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 18 Keterangan : KN = Kontrol Normal K(-) = Kontrol Negatif K(+) = Kontrol Positif D1 = Dosis Rendah 1 mg/kgbb D2 = Dosis Sedang 10 mg/kgbb D3 = Dosis Tinggi 100 mg/kgbb 3.4.2 Persiapan hewan percobaan (aklimatisasi) 30 ekor tikus putih jantan galur wistar dengan berat 140-180 gram dibagi menjadi 6 kelompok. Masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus. Sebelum penelitian dimulai, hewan uji diaklimatisasi selama 30 hari, diberi makan pellet, diberi air minum dan dipuasakan sehari sebelum perlakuan. Selama perlakuan, hewan uji diberi pakan dan minum. 3.5 Pembuatan sediaan dosis uji 1) Dosis ekstrak lumut hati Mastighopora diclados Dosis yang digunakan pada ekstrak etil asetat Mastigophora diclados adalah dosis 1 mg/kg bb, 10 mg/kg bb dan 100 mg/kg bb yang kemudian di konversikan ke dalam dosis tikus masing-masing menjadi 0,2 mg/200 g bb, 2 mg/200 g bb dan 20 mg/200 g bb. 2) Dosis glibenklamid sebagai kontrol pembanding Glibenklamid yang diberikan dalam bentuk larutan sesuai dosis oral efektif pada manusia, 5 mg/60 kg bb (Suherman, 2007) yang dikonversikan yaitu dosis untuk setiap 200 g tikus menjadi 0,1 mg. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 19 3) Dosis aloksan Dosis aloksan secara intraperotoneal yang digunakan dalam percobaan ini adalah 100 mg/kg bb (Nandhagopal, 2013) atau untuk tikus dengan berat badan 200 gram adalah 20 mg/200 gr bb. Dosis intraperitoneal 2-3 kali dari dosis intravena yaitu 65 mg/kg BB (Szkudelski, 2001). 3.6 Induksi Diabetes pada Tikus Sebelum diinduksi aloksan, hewan uji dipuasakan terlebih dahulu selama 18 jam namun tetap diberikan air minum. Hal ini dilakukan karena hewan uji yang dipuasakan terlebih dahulu lebih rentan mengalami hiperglikemia dibanding hewan uji yang tidak dipuasakan. Setelah itu, larutan aloksan monohidrat disuntikkan secara intraperitoneal dengan dosis 20mg/200gbb tikus pada kelompok K(-) (Kontrol Negatif), K(+) (Kontrol Positif), D1 (Dosis Rendah), D2 (Dosis Sedang), dan D3 (Dosis Tinggi) yang masing-masing terdiri dari 5 hewan uji. Setelah penyuntikan, tikus diberi makan dan minum seperti biasa. Pengukuran kadar glukosa darah puasa tikus dilakukan kembali pada hari ke 5 , ke 10 dan ke 14 setelah induksi aloksan untuk memastikan bahwa tikus mengalami hiperglikemia permanen (Lanzen, 2008). Dimana kenaikan kadar glukosa darah puasa yang melebihi 140 mg/dl (Manjusha et al, 2011) sedangkan kadar gula darah normal pada tikus adalah 50-135 mg/dl (Carvalho,2003). 3.7 Pemberian Bahan Uji Pada hari ke 15 setelah induksi aloksan, bahan uji mulai diberikan sesuai perlakuan masing-masing kelompok seperti yang tertera pada tabel 3.4.1. Pemberian bahan uji dilakukan setiap hari. Sebelum pemberian bahan uji hewan dipuasakan terlebih dahulu selama 16 jam. Pengamatan berlangsung selama 28 hari setelah induksi aloksan. Kemudian dilakukan pengambilan darah pada hari ke 7, 14, 21 dan 28. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 20 3.8 Pengambilan Darah Hewan Uji Sebelum pengambilan darah, ekor tikus dibersihkan dahulu dengan alkohol 70%. Selanjutnya, diambil darah melalui ujung ekor dimana ujung ekor tikus ditoreh dengan menggunakan pisau bedah kecil hingga membentuk sayatan yang dalam dan di ukur kadar gula darah dengan alat glukometer easy touch GCU. Caranya dengan setetes darah tikus yang berasal dari ujung ekor diteteskan pada strip glukosa yang telah dimasukkan dalam glukometer. Sebelumnya pada glukometer dilakukan penyesuaian kode yang tertera pada kemasan strip glukosa. Setelah darah diteteskan pada strip, ditunggu selama 10 detik untuk menunggu hasil pembacaan konsentrasi glukosa darah pada glukometer. Nilai yang tertera pada glukometer merupakan nilai konsentrasi glukosa darah dengan satuan mg/dL. 3.9 Analisis Data Data yang diperoleh diolah secara statistik menggunakan program SPSS 16.0 (Statistical Program for Social Science) for windows. Analisis yang digunakan adalah uji distribusi normal (Kolmogorov-Smirnov) dan uji homogenitas (uji Levene). Jika data yang dinyatakan terdistribusi normal dan homogen, uji dilanjutkan dengan uji analisis varian satu arah (ANAVA). Jika terdapat perbedaan yang signifikan, maka dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT). Jika data yang diperoleh dinyatakan tidak terdistribusi normal atau tidak homogen, uji dilanjutkan dengan analisis non parametik (uji KruskalWalis). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 4 HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN 4.1 HASIL PENELITIAN 4.1.1 Penapisan fitokimia ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Data Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados Pengujian Ekstrak lumut hati Mastigophora diclados Antraquinon - Terpenoid + Alkaloid - Flavonoid - Saponin - Fenolik - Keterangan : (+) memberikan reaksi positif, (-) memberikan reaksi negatif 4.1.2 Hasil ekstraksi dari lumut hati Mastigophora diclados Dari 2230 gram lumut hati Mastigophora diclados yang diekstraksi diperoleh ekstrak kental 41,78 gram. Jadi, randemen yang didapat 1,874%. 4.1.3 Hasil Data Parameter Ekstrak Spesifik dan Non Spesifik Tabel 3. Hasil Data Parameter Ekstrak No Parameter Hasil 1 Organoleptis Warna : Hitam Berbau : Aromatis Bentuk : Cairan kental 2 Kadar Air 0,93 % 3 Kadar Abu 10% 21 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 22 4.1.4 Hasil Pengukuran Kadar Glukosa Darah Pada Metode Induksi Aloksan a. Nilai rerata dan Standar deviasi Pada tabel 3, memperlihatkan nilai rerata dari seluruh kelompok kontrol dan uji. Tabel 4. Nilai Rerata dan Standar Deviasi Pada Metode Induksi Aloksan Waktu (hari) 0 Kadar glukosa darah rata-rata (mg/dl) dan Standar deviasi KN K (-) K (+) D1 D2 D3 141± 161,8± 166,6± 166,5± 69,2±10,9 178±9,66 11,02 11,49 12,60 5,40 7 88,8±9,03 151±8,94 151,6± 9,91 138±5,29 132,5± 9,12 135±6,44 14 102,5± 10,13 158,6± 6,72 169±8,61 145,2± 7,32 146±8,94 161±4,02 21 97,8±19,1 8 168,4± 8,64 146,2± 17,72 144,6± 8,44 143,4± 10,13 143,2± 7,62 28 95,4± 10,57 177,2± 6,14 135±2,12 143,6± 4,09 138±7,56 136±9,13 Keterangan : KN = Kontrol Normal K(-) = Kontrol Negatif K(+) = Kontrol Positif D1 = Dosis Rendah 1 mg/kgbb D2 = Dosis Sedang 10 mg/kgbb D3 = Dosis Tinggi 100 mg/kgbb UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 23 b. Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Persentase penurunan kadar glukosa darah yang paling besar terjadi pada kelompok dosis sedang 10 mg/kg BB bila dilihat dari tabel 5. Tabel 5. Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Pada Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados Waktu (hari) Kelompok Perlakuan Kontrol Positif Dosis rendah 1 mg/kg BB Dosis sedang 10 mg/kg BB Ke 7 Ke 14 Ke 21 Ke 28 6.3% 4,45% 16,8% 23,2% 17.16% 12,8% 13,2% 13,8% 25.56% 17,9% 19,4% 22% 18,91% 2,9% 13,99% 18,31% Dosis tinggi 100 mg/kg BB UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 24 Gambar 3. Kurva Penurunan Kadar Glukosa Darah (mg/dl) 200 150 100 50 0 Hari 0 sebelum pemberian ekstrak Hari ke 7 setelah pemberian ekstrak Hari ke 14 setelah pemberian ekstrak Hari ke 21 setelah pemberian ekstrak Hari ke 28 setelah pemberian ekstrak Kontrol Normal Kontrol Negatif Kontrol Positif Dosis Rendah Dosis Sedang Dosis Tinggi 4.2 PEMBAHASAN Pada penelitian uji antihiperglikemia ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados menggunakan metode induksi aloksan. Aloksan dipilih sebagai diabetogen dalam penelitian ini dikarenakan aloksan didalam tubuh mengalami metabolism oksidasi reduksi menghasilkan radikal bebas dan radikal aloksan. Radikal ini mengakibatkan kerusakan sel beta pankreas (Szkudelski, 2001) sehingga terjadi insulin dependent diabetes mellitus atau disebut juga allloxan diabetes pada hewan percobaan. Diabetes tipe ini memiliki karakteristik yang serupa dengan diabetes tipe 1 pada manusia, sehingga menghasilkan kondisi diabetes eksperimental (efek diabetogenik) pada hewan percobaan mengakibatkan hiperglikemia (Agung,2006). Dosis aloksan yang diberikan pada penelitian ini adalah 100 mg/kg BB (Nandhagopal et al, 2013). Dosis 100 mg/kg dipilih, karena diharapkan sel-sel β Langerhans masih dapat berproduksi. Kemudian aloksan dilarutkan dengan aquadest. Setelah itu, tikus pada kelompok kontrol positif , kontrol negatif, kontrol perlakuan (dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi) diinduksi dengan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 25 aloksan secara intraperitoneal. Kontrol positif dalam penelitian ini adalah glibenklamid, diperlukan untuk melihat pengaruh obat antidiabetik oral yang telah terbukti khasiatnya untuk menurunkan kadar glukosa darah., kontrol negatif untuk mengetahui kadar glukosa darah tikus putih diabetes yang diinduksi oleh aloksan. dan kontrol perlakuan (dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi) untuk mengethaui efek pemberian ekstrak pada tikus yang diinduksi aloksan (diabetes) selama percobaan. Masa penginduksian dilakukan selama 14 hari dimana kadar glukosa darah meningkat ≥ 140 mg/dl (hiperglikemia) (Manjusha et al, 2011). Pemberian ekstrak Mastigophora diclados dan glibenklamid sebagai terapi hiperglikemik diberikan secara oral pada tikus selama 28 hari. Glibenklamid dipilih sebagai terapi pembanding ekstrak Mastigophora diclados karena dapat merangsang sekresi insulin dikelenjar pankreas (Depkes RI, 2005). Dosis glibenklamid yang digunakan adalah 0,1 mg/200 g BB. Dosis tersebut digunakan berdasarkan dosis efektif oral pada manusia, yaitu 5 mg/ hari yang kemudian di konversi ke dosis tikus. Adapun pemberian ekstrak Mastigophora diclados diberikan dalam sediaan suspensi dengan penambahan NaCMC 0,5% sebagai agen pensuspensi. Dari grafik diatas diketahui bahwa kadar glukosa darah normal masih tetap dalam rentang normal sedangkan kontrol negatif mengalami hiperglikemia. Pada kontrol positif dan kelompok uji dosis 1, 10 dan 100 mg/kgbb pada hari ke 7, ke 21 dan 28 mengalami penurunan kadar glukosa darah. Sedangkan pada hari ke 14 kontrol positif, kelompok uji dosis 1, 10 dan 100 mg/kgbb mengalami kenaikan kadar darah. Pada penelitian lain melaporkan bahwa kenaikan kadar glukosa darah pada kontrol normal dikarenakan pengaruh stress sebagai akibat dari pengobatan (Nandhagopal, 2013). Pada persen penurunan kadar glukosa darah diketahui bahwa dosis 10 mg/kgbb memiliki persen penurunan paling tinggi diantara dosis 1 dan 100 mg/kgbb dan persen penurunan kadar glukosa darah pada dosis 1 dan 100 mg/kgbb tidak berbeda jauh. Pada hari ke 14 dosis 100 mg/kgbb memiliki persen penurunan paling rendah dibandingkan dosis 1 dan 10 mg/kgbb. Hal ini mungkin dikarenakan kondisi tikus atau absorpsi obat yang belum sempurna. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 26 Pada penelitian uji antihiperglikemia ekstrak lumut hati Mastigophora diclados diasumsikan dapat menurunkan kadar glukosa darah berhubungan dengan kandungan terpenoid, fenolik dan saponin serta adanya aktivitas sebagai antioksidan. Menurut Rao et al (2000) triterpenoid, glikosida steroid dan saponin merupakan senyawa bioaktif alami yang banyak terdapat ditanaman dan diketahui memiliki aktivitas hipoglikemik. Belum terdapat penelitian mengenai aktivitas antidiabetes dari Mastigophora diclados maupun famili tumbuhan tersebut. Namun, penelitian lain menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat Hygrophilla spinosa yang mengandung senyawa terpenoid dan steroid dapat menurunkan kadar glukosa darah pada dosis ekstrak 200mg/kgBB (Raju et al, 2011). Dan penelitian antidiabetes lain pada ekstrak methanol dari Memecylon malabaricum cogn mengatakan bahwa senyawa seperti steroid, saponin, flavonoid, tannin dan alkaloid mempunyai aktivitas antidiabetes (Ramaiah, 2013) Telah diketahui dari penelitian sebelumnya bahwa lumut hati Mastigophora diclados memiliki aktivitas sebagai antioksidan (Komala et al, 2010) dimana antioksidan dapat bekerja menghambat radikal bebas yang diketahui sebagai mediator dari berbagai penyakit antara lain karsinogenesis, jantung coroner, inflamasi dan diabetes (Ali et al, 2011). Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak lumut hati Mastigophora diclados yang mengandung antioksidan dapat menurunkan kadar glukosa darah pada hewan uji yang dibuat diabetes oleh aloksan. Hasil pengukuran kadar gula akhir dianalisis secara statistik menggunakan program SPSS 16.0 for windows. Uji statistik awal yakni uji normalitas dengan menggunakan Kolmogorov-Smirnof , dari tabel normalitas diketahui bahwa seluruh hewan uji terdistribusi dengan normal (p≥0,05). Uji normalitas bertujuan untuk menguji apakah data yang diperoleh dari setiap kelompok memiliki slebaran normal. Analisis selanjutnya adalah uji homogenitas dengan menggunakan Levene statistic bertujuan untuk menguji apakah data yang diperoleh dari setiap kelompok memiliki varian homogen. Dari hasil uji homogenitas diperoleh bahwa data hari ke 21 dilanjutkan dengan uji Kruskal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 27 Wallis karena syarat homogenitasnya belum terpenuhi (p≤0,05). Sedangkan data hari ke 0, ke 7, ke 14 dan ke 28 dilanjutkan dengan uji ANOVA karena syarat homogenitasnya sudah terpenuhi (p≥0,05). Kadar glukosa darah pada hari ke 0, ke 7, hari ke 14 dan hari ke 28 kedua syarat terpenuhi yakni uji normalitas data dan uji homogenitas, selanjutnya dilanjutkan uji one way ANOVA dan didapatkan angka signifikansi 0.00 yang artinya semua data dari kelompok bisa dikatakan berbeda secara signifikan (p≤0,05). Maka dapat disimpulkan pemberian ekstrak Mastigophora diclados dengan dosis berbeda memberikan perbedaan yang signifikan dalam mempengaruhi kadar gula darah pada tikus diabetes. Setelah itu, dilanjutkan dengan uji BNT untuk melihat perbedaan antar kelompok hewan uji. Pada uji Kruskal Wallis, kadar glukosa darah pada hari ke 21 berbeda secara bermakna (p≤0,05). Data kadar glukosa darah yang berbeda secara bermakna dilanjutkan dengan uji BNT untuk melihat perbedaan antar kelompok hewan uji. Pada tabel 12, hasil uji BNT pada hari ke 0, 7, 14, 21 dan 28 kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kontrol positif dan kelompok uji dosis 1, 10 dan 100 mg/kg (p≤0,05). Hal ini karena kontrol positif dan kelompok uji dosis 1, 10 dan 100 mg/kg telah mengalami penurunan kadar glukosa darah sedangkan kontrol negatif tidak mengalami penurunan kadar glukosa darah. Pada hari ke 0,7, 21 dan 28 kelompok uji dosis 1, 10 dan 100 mg/kgbb tidak berbeda bermakna (p≥0,05) satu sama lainnya. Hal ini menunjukkan bahwa kelompok uji dosis 1,10 dan 100 mg/kgbb memiliki efek yang sama dalam menurunkan kadar glukosa darah. Seharusnya ada dosis yang lebih tepat selain dosis 1, 10 dan 100 mg/kgbb dalam menurunkan kadar glukosa darah. Namun karena keterbatasan dalam penelitian maka tidak dilakukan. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 KESIMPULAN Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat diambil beberapa kesimpulan sebagai berikut : 1. Ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados dengan dosis 1, 10 dan 100 mg/kg BB dapat menurunkan kadar glukosa darah yang telah diinduksi oleh aloksan. 2. Dosis 1, 10 dan 100 mg/kgbb menunjukkan efek yang sama dalam menurunkan kadar glukosa darah. 3. Dosis 10 mg/kgbb memiliki persentase penurunan kadar glukosa darah paling tinggi yakni 25,56%, 17,9%, 19,4% dan 22%. 5.2 SARAN Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dalam hal mencari dosis yang tepat dalam menurunkan kadar glukosa darah dan isolasi kandungan kimia dari tumbuhan lumut hari Mastigophora diclados yang tumbuh di Indonesia untuk mengetahui komponen kimia mana yang mempunyai aktivitas antidiabetes. 28 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta DAFTAR PUSTAKA Agoes, G. 2007. Teknologi Bahan Alam.Bandung : Penerbit ITB Press. Agung Endro Nugroho. 2006. Hewan Percobaan Diabetes Mellitus : Patologi Dan Mekanisme Aksi Diabetogenik, Biodiversitas. 7 (4). Yogyakarta : Laboratorium Farmakologi Dan Toksikologi, Bagian Farmakologi Dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Gajah Mada. Ali, M., et al., ‘’Phytochemical screening, antioxidant and analgesic activities of Croton argyratus ethanolic extracts”. Journal of Medicinal Plants Research Vol. 6 (21), pp. 3724-3731. Asakawa, Y. 2000. Recent Advance in Phytocemistry of Bryophytes – Acetogenins Terpenoid and Bis (bibenzils) from Selected Japans, Taiwanes, New Zeland, Argentina and European Liverwort. Phytocemistry 56 (2001) 279-312. 31 Agustus 2000 Ayoola, GA., et al. 2008. Chemical analysis and antimicrobial activity of the essential oil syzigium aromatikum (clove). African journal of Microbiology Research 2 (1), pp. 162-166 Calvalho. 2003. Experimental Model of Induction of Diabetes Mellitus in Rats. Barzil, hal :2. Cheta, D. 1998. Animal models of type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus. Journal of Pediatric Endocrinoogyl & metabolism, 11(1):11-19 Conard, H. S., Redfearn. 1996. How to Know the Mosses and Liverworts.Lowa : Wm. C. Brown Company Publisher. Damayanti.2006. Koleksi Bryophyta Taman Lumut Kebun Raya Cibodas. UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Cibodas : Lembaga Ilmu Pengetahian Indonesia Departemen Kesehatan RI. 2000. Inventaris Tanaman Obat Indonesia. Jilid 1.Jakarta : Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. Halaman 227. 29 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 30 Depkes RI. 2005. Pharmaceutical Care Untuk Penyakit Diabetes Mellitus. Jakarta : Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian dan alat Kesehatan. Halaman 3746. Ditjen POM. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Departemen Kesehatan RI. Jakarta. Halaman 1, 10-12. Guthrie, D. W and Guthrie, R. A. 2003.The Diabetes Source Book. New York : Mc Graw Hills Company. Page 13-14. Handoko, T., dan Suharto B. (1995).“Insulin Glukagon dan Antidiabetik” dalam Farmakologi dan Terapi, Edisi Keempat, Editor: Sulistia G.ganiswara, Jakarta: Gaya Baru. Halaman 469, 471-472. Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia : Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, terjemahan Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Penerbit ITB. Bandung. Ida, H., dan Gradstein, S.R. 2011. Liverworts and hornworts of Mt. Slamet. Central Java (Indonesia). Hikobia 16:61-66. Jones A, Hattersley AT. 2010. Monogenic causes of diabetes. Didalam: Holt R et al., editor. Textbook of Diabetes 4th edition. Chichester: Blackwell Publising. Katzung, B. G. 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik.Edisi II. Jakarta: Salemba Medika. Halaman 671, 677-678. Komala, I,.2010. Pythochemical Studies on the selected Indonesian, japanase & Tahitian Liverworth 2. Desertasi. Fakultas Pharmaceutical Science, Tokushima Bunri University. Komala, I., Ito, T., Nagashima, F. 2010.Cytotoxic, rradical Scavenging, and Antimicrobial Activities of Sesquiterpenoids from Tahitian Liverworth Mastigophora diclados (Brid). Ness (Mastigophoracee). J. Nat. Med (2010) 64:417-422. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 31 Kumar A, Kaur R, Arora S. 2010. Free radical scavenging potential of some Indian medicinal plants. J Madicinal Plants Res. 4:2034-2042. Krentz, A. J. & C. J. Bailey. 2005. Oral antidiabetic agents: current role in type 2 diabetes mellitus. Drugs 65:384-411 Lenzen, S. 2008.The Mechanism of Alloxan-and Streptozotocin-Induced Diabetes. Diabetologia. Vol. 51 : 216-226. Mai Cing J. 2010. Potensi Antihiperglikemia Ekstrak Kulit Kayu Mahoni (Swietenia macrophylla King) Pada Tikus yang Diinduksi Aloksan [Skripsi]. Bogor : Fakultas Metematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Tanggal Akses: 13 maret 2013 Manjusha Hazra et al. 2011. Evaluation of hypoglycemic and antihyperglycemic effect of Luffa cylindrical fruit extract in rats. Journal of Advanced Pharmacy Education & Research 2: 138-146. ISSN 2249-3379 Nandhagopal, K et al. 2013. Antidiabetic Activity of Karchure Chooranam on Alloxan Induced Diabetic Rats. International Journal of Pharma and Bio Sciences: 434-439. ISSN 0975-6299 Nugroho, B. A dan Purwaningsih, E. 2006.Perbedaan Diet Ekstrak Rumput Laut (Eucheuma sp) dan insulin dalam menurunkan kadar glukosa darah tikus putih (Rattus norvegicus) hiperglikemik. Media Medika Indonesia.Vol. 41.No.1 : 23-30. Ramaiah, A et al. 2013. Antidiabetic Activity of Methanolic Extract of Memecylon Malabarium Cogn (Melastomataceae) Leaves. Int J Pharm Bio Sci (P) 822-828. ISSN : 0975-6255 Raju Solomon, BG et al. 2011. Antihiperglycemic Activity of Hygrophila spinosa roots in Alloxan induced Diabetic Rats.. ISSN: 2231-3648, 2231-3656 vol.01 Rao A, Gurfinkel D. 2000. The bioactivity of saponins triterpenoid and steroidal glycosides. Drug Metab Drug Interact: 211-35 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 32 Szkudelski, T., 2001, The Mechanism Of Alloxan And Streptozotocin Action In β Cells Of The Rat Pancreas, Physiology Research, 50: 536-54. Suherman, Suharti K. 2007. Insulin dan antidiabetik oral. Farmakologi dan Terapi. Jakarta : Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Syamsuni, H. A. 2006. Ilmu Resep. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Hal 166-171. Tjay.T.H., dan Rahardja, K. (2007). Obat-obat Penting: Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek samping. Edisi IV. Jakarta: Elex Media Komputindo. Halaman 738, 743, 748-749. Wiryana Made. 2008. Peranan Terapi Insulin Intensif Terhadap SOD, TNF-α dan IL-6 Pada Penderita Kritis Dengan Hiperglikemia. Denpasar. Pasca S3 Universitas Udayana, 2008) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 33 Lampiran 1. Gambar Lumut Hati Gambar 4. Mastigophora diclados (Brid.) Nees UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 34 Lampiran 2. Perlakuan hewan uji pada saat penelitian Penginduksian aloksan Pelaksanaan sonde Pengambilan darah pada ujung ekor tikus UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 35 Lampiran 3. Hasil Penapisan Fitokimia Gambar 5. Alkaloid (dragendoff) Gambar 6. Alkaloid (mayer) Gambar 7. Antarquinon Gambar 8. Fenolik UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 36 Gambar 9. Flavonoid Gambar 10. Saponin Gambar 11. Terpenoid UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 37 Lampiran 4. Proses Pembuatan Ekstrak Sampel lumut hati Mastigophora diclados Dicuci, dikeringkan dan diserbuk Serbuk kering lumut hari Mastigophora diclados sebanyak 2230 gram Maserasi dengan n-heksan, disaring, dievaporasi Ekstrak n-heksan sebanyak 46 gram Ampas Maserasi dengan etil asetat, disaring, dievaporasi Ekstrak etil asetat sebanyak 41,78 gram Ampas Uji Antidiabetes ekstrak etil asetat UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 38 Lampiran 5. Skema Aklimatisasi Hewan Uji dan Induksi Aloksan Disiapkan 30 ekor tikus putih jantan dengan bobot 150-180 g Diaklimatisasi selama 30 hari dalam kondisi percobaan Dikelompokkan secara acak menjadi 6 kelompok 5 ekor Kelompok Kontrol Normal 5 ekor Kelompok Kontrol Negatif 5 ekor Kelompok Kontrol Positif 5 ekor Kelompok Rendah (1 mg/kgBB) 5 ekor Kelompok Sedang (10 mg/kgBB) Dosis Dosis 5 ekor Kelompok Dosis Tinggi (100 mg/kgBB) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 39 Lampiran 6. Skema Kerja Antidiabetes Tanpa induksi aloksan Setelah diinduksi selama 14 hari. Kadar glukosa darah tikus di ukur. Tikus yang mengalami hiperglikemia (kadar glukosa darah ≥140 mg/dl) maka akan digunakan untuk percobaan penelitian. Tikus dipuasakan selama 18 jam Kontrol normal (aquadest) Kontrol positif (aloksan + glibenklamid) Kontrol negatif (aloksan) Pemberian ekstrak etil Mastigophora diclados : asetat dosis rendah 1 mg/kgBB dosis sedang 10 mg/kgBB dosis tinggi 100 mg/kgBB Tikus dipuasakan selama 18 jam Lampiran 8. Perhitungan Dosis Aloksan Pengamatan pada hari ke 7, 14, 21, 28 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 40 Lampiran 7. Perhitungan Dosis Ekstrak Etil Asetat Mastigophora diclados a. Dosis Glibenklamid Dosis lazim glibenklamid untuk manusia adalah 5 mg. Maka dosis yang dapat diberikan pada tikus (200 g) menggunakan rumus HED ( Human Equivalent Dose) : b. HED (mg/kg) = dosis hewan (mg/kg) x 5 mg/60 kg = dosis hewan (mg/kg) x 5 mg/ 60 kg = dosis hewan (mg/kg) x 0.162 Dosis hewan = Dosis hewan = 0.1 mg/ 200 g BB Dosis Aloksan Dosis yang akan digunakan dalam percobaan ini adalah 100 mg/kg BB dilakukan secara intraperitoneal. Maka dosis yang akan diberikan pada tikus (200 g) : 100 mg/kg = 100 mg/1000 g x 200 g = 20 mg/ 200 gBB c. Ekstrak Etil Asetat Mastigophora diclados dengan kelompok dosis Dosis rendah = 1 mg/kg bb Dosis sedang = 10 mg/kg bb Dosis tinggi = 100 mg/kg bb 1. Dosis rendah Untuk satu ekor tikus 200 g, maka volume larutan sediaan untuk dosis rendah adalah : 1 mg/kg bb = 0,2 mg/200 g VAO = UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 41 = = 1 ml 2. Dosis sedang Untuk satu ekor tikus 200 g, maka volume larutan sediaan untuk dosis sedang adalah : 10 mg/kg bb = 2 mg/200 g VAO = = = 1 ml 3. Dosis tinggi Untuk satu ekor tikus 200 g, maka volume larutan sediaan untuk dosis tinggi adalah : 100 mg/kg bb = 20 mg/200 g VAO = = =1m UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 42 Lampiran 8. Sertifikat Glibenklamid UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 43 Lampiran 9. Determinasi Tanaman UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 44 Lampiran 10. Pemeriksaan Parameter Ekstrak A. Perhitungan Perolehan Kembali Ekstrak % Perolehan kembali = x 100% x 100% = = 1,874 % B. Pemeriksaan Kadar Air Berat cawan kosong = 54,7166 gram Berat sampel = 1,130 gram Berat cawan + sampel sebelum di oven (A) = 55,846 gram Berat cawan + sampel sesudah di oven (B) = 55,5811 gram % Kadar Air = x 100% x 100% = = 0,93 % C. Pemeriksaan Kadar Abu Bobot cawan = 25,5 gram Bobot sampel = 2 gram Bobot akhir = 25,7 gram % Kadar Abu = = x 100% x 100% = 10% UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 45 Tabel 6. Hasil Pengukuran Glukosa Darah Hewan Uji PARAMETER KONTROL NORMAL Rata-rata KONTROL NEGATIF Rata-rata KONTROL POSITIF Rata-rata KELOMPOK DOSIS RENDAH (1 mg/kg bb) Rata-rata KELOMPOK DOSIS SEDANG (10 mg/kg bb) Rata-rata KELOMPOK DOSIS TINGGI (100 mg/kg bb) Rata-rata 0 72 66 53 72 83 69.2 140 149 132 129 155 141 145 172 172 156 164 161.8 159 188 156 164 166 166.6 188 172 189 169 172 178 160 168 170 168 158 166.5 7 96 91 77 98 82 88.8 145 160 140 150 160 151 133 150 135 150 155 151.6 135 145 140 131 139 138 135 133 127 130 112 132.6 127 130 143 132 128 135 HARI 14 100 100 100 123 110 106.6 152 170 164 160 165 162.2 166 181 184 176 165 169 135 150 140 152 149 145.2 140 150 140 140 160 146 160 168 160 168 165 161 21 92 84 77 118 118 97.8 156 178 170 164 174 168.4 162 131 152 124 162 146.2 137 152 142 137 155 144.6 153 131 153 135 145 143.4 132 141 153 145 145 143.2 28 96 102 102 102 100 100.4 170 173 178 186 179 177.2 135 135 135 132 138 135 145 140 139 149 145 143.6 142 152 145 142 131 138 131 135 150 142 152 136 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 46 Lampiran 11. Perhitungan Persentase Kadar Glukosa Darah A. Glibenklamid Hari ke 7 = x 100% = 6.3% Hari ke 14 = x 100% = 4.45% Hari ke 21 = Hari ke 28 = x 100% = 16.8% x 100% = 23.2% B. Dosis rendah Mastigophora diclados Hari ke 7 = x 100% = 17.16% Hari ke 14 = x 100% = 12.8% hari ke 21 = x 100% = 13.2% hari ke 28 = x 100% = 13.8% C. Dosis sedang Mastigophora diclados Hari ke 7 = Hari ke 14 = hari ke 21 = hari ke 28 = x 100% = 25.56% x 100% = 17.9% x 100% = 19.4% x 100% = 22% D. Dosis tinggi Mastigophora diclados Hari ke 7 = x 100% = 18.91% Hari ke 14 = x 100% = 2.9% Hari ke 21 = x 100% = 13.9% Hari ke 28 = x 100% = 18.31% UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 47 Lampiran 12. Analisis Data Kadar Glukosa Darah 1. Uji Normalitas dan Homogenitas Terhadap Kadar Glukosa Darah a. Uji Normalitas Kolmogorov-Smirnov Tujuan : Untuk melihat distribusi data kadar glukosa darah tikus Hipotesis : Ho : Data kadar glukosa darah tikus terdistribusi normal Ha : Data kadar glukosa darah tikus tidak terdistribusi normal Pengambilan Keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤0,05 maka Ho ditolak Tabel 8. Uji Normalitas Mastigophora diclados Dengan Metode Induksi Aloksan hari0 N Normal Parameters a Mean Std. Deviation Most Extreme Differences hari7 hari14 hari21 hari28 30 30 30 30 30 1.4690E2 1.3030E2 1.4977E2 1.4060E2 1.3927E2 3.82680E1 2.17987E1 2.33632E1 2.44182E1 2.51436E1 Absolute .250 .240 .169 .147 .204 Positive .156 .097 .093 .077 .140 Negative -.250 -.240 -.169 -.147 -.204 1.372 1.314 .927 .806 1.120 .046 .063 .356 .535 .163 Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal. Keputusan : Uji normalitas kadar glukosa darah mencit terdistribusi dengan normal (p≥0,05). a. Uji Homogenitas Levene Tujuan : Untuk melihat data kadar glukosa darah tikus homogen atau tidak Hipotesis : Ho : Data kadar glukosa darah homogen Ha : Data kadar glukosa darah tidak homogen UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 48 Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤0,05 maka Ho ditolak Tabel 9. Uji Homogenitas Mastigophora diclados Pada Metode Induksi Aloksan Levene Statistic df1 df2 Sig. hari0 .463 5 24 .800 hari7 .998 5 24 .440 hari14 1.176 5 24 .350 hari21 4.494 5 24 .005 hari28 1.534 5 24 .217 Keputusan : Uji homogenitas kadar glukosa darah pada hari ke 0, 7, 14 dan hari ke 28 dilanjutkan dengan uji ANOVA karena (p≥0,05) sedangkan kadar glukosa darah pada hari ke 21 dilanjutkan dengan uji kruskal wallis karena (p≤0,05). 2. Uji ANOVA Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan kadar glukosa darah tikus Hipotesis : Ho : Data kadar glukosa darah tikus tidak berbeda secara bermakna Ha : Data kadar glukosa darah tikus berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤0,05 maka Ho ditolak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 49 Tabel 10. Uji ANOVA Ekstrak Mastigophora diclados Sum of Squares hari0 Between Groups 5 7969.820 2619.600 24 109.150 Total 42468.700 29 Between Groups 12129.100 5 2425.820 1651.200 24 68.800 Total 13780.300 29 Between Groups 14340.567 5 2868.113 1488.800 24 62.033 Total 15829.367 29 Between Groups 17087.467 5 3417.493 1246.400 24 51.933 18333.867 29 Within Groups hari14 Within Groups hari28 Mean Square 39849.100 Within Groups hari7 df Within Groups Total F Sig. 73.017 .000 35.259 .000 46.235 .000 65.805 .000 Keputusan : Dari hasil uji ANOVA, penurunan kadar glukosa darah pada hari ke 0, 7, 14 dan 28 terdapat perbedaan secara bermakna karena memiliki nilai signifikan ( p ≤ 0,05 ). Maka dilanjutkan dengan uji LSD (Least Significant Difference) atau uji BNT (Beda Nyata Terkecil). Uji BNT merupakan uji lanjutan yang dilakukan apabila hasil pengujian menunjukan adanya perbedaan yang bermakna. Tujuannya adalah untuk menentukan kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan kelompok lainnya. 3. Uji Kruskal Wallis terhadap kadar glukosa darah kelompok hewan uji Tujuan : Mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data kadar glukosa darah tikus. Hipotesis : Ho : Data kadar glukosa darah tikus tidak berbeda secara bermakna Ha : Data kadar glukosa darah tikus berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤0,05 maka Ho ditolak UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 50 Tabel 11. Uji Kruskal-Wallis ekstrak Mastigophora diclados pada Metode Induksi Aloksan Hari 21 Chi-Square 6.860 Df 1 Asymp. Sig. .009 Keputusan : Data kadar glukosa darah pada hari ke 21 berbeda secara bermakna (p≤0,05). Data kadar glukosa darah yang berbeda secara bermakna dilanjutkan dengan uji BNT untuk melihat perbedaan antar kelompok hewan uji. 4. Uji BNT (LSD) Mastigophora diclados pada metode induksi aloksan Tujuan : Untuk mengetahui perbedaan kadar glukosa darah yang bermakna. Tabel 12. Uji BNT Kelompok Ekstrak Mastigophora diclados Metode Induksi Aloksan LSD Depende (I) nt 95% Confidence Interval kelomp kelomp Mean Difference Variable ok0 hari0 (J) ok0 Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound -71.80000 * 6.60757 .000 -85.4374 -58.1626 -92.60000 * 6.60757 .000 -106.2374 -78.9626 -97.40000 * 6.60757 .000 -111.0374 -83.7626 -108.80000 * 6.60757 .000 -122.4374 -95.1626 -95.60000 * 6.60757 .000 -109.2374 -81.9626 71.80000 * 6.60757 .000 58.1626 85.4374 -20.80000 * 6.60757 .004 -34.4374 -7.1626 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 51 Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi -25.60000 * 6.60757 .001 -39.2374 -11.9626 -37.00000 * 6.60757 .000 -50.6374 -23.3626 -23.80000 * 6.60757 .001 -37.4374 -10.1626 92.60000 * 6.60757 .000 78.9626 106.2374 20.80000 * 6.60757 .004 7.1626 34.4374 -4.80000 6.60757 .475 -18.4374 8.8374 * 6.60757 .022 -29.8374 -2.5626 -3.00000 6.60757 .654 -16.6374 10.6374 97.40000 * 6.60757 .000 83.7626 111.0374 25.60000 * 6.60757 .001 11.9626 39.2374 4.80000 6.60757 .475 -8.8374 18.4374 -11.40000 6.60757 .097 -25.0374 2.2374 1.80000 6.60757 .788 -11.8374 15.4374 108.80000 * 6.60757 .000 95.1626 122.4374 37.00000 * 6.60757 .000 23.3626 50.6374 16.20000 * 6.60757 .022 2.5626 29.8374 11.40000 6.60757 .097 -2.2374 25.0374 13.20000 6.60757 .057 -.4374 26.8374 -16.20000 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 52 Dosis Kontrol tinggi normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang hari7 Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah 95.60000 * 6.60757 .000 81.9626 109.2374 23.80000 * 6.60757 .001 10.1626 37.4374 3.00000 6.60757 .654 -10.6374 16.6374 -1.80000 6.60757 .788 -15.4374 11.8374 -13.20000 6.60757 .057 -26.8374 .4374 -62.20000 * 5.24595 .000 -73.0271 -51.3729 -55.80000 * 5.24595 .000 -66.6271 -44.9729 -49.20000 * 5.24595 .000 -60.0271 -38.3729 -38.60000 * 5.24595 .000 -49.4271 -27.7729 -43.20000 * 5.24595 .000 -54.0271 -32.3729 62.20000 * 5.24595 .000 51.3729 73.0271 6.40000 5.24595 .234 -4.4271 17.2271 13.00000 * 5.24595 .021 2.1729 23.8271 23.60000 * 5.24595 .000 12.7729 34.4271 19.00000 * 5.24595 .001 8.1729 29.8271 55.80000 * 5.24595 .000 44.9729 66.6271 -6.40000 5.24595 .234 -17.2271 4.4271 6.60000 5.24595 .220 -4.2271 17.4271 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 53 Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi Dosis Kontrol tinggi normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang hari14 Kontrol Kontrol normal negatif 17.20000 * 5.24595 .003 6.3729 28.0271 12.60000 * 5.24595 .024 1.7729 23.4271 49.20000 * 5.24595 .000 38.3729 60.0271 -13.00000 * 5.24595 .021 -23.8271 -2.1729 -6.60000 5.24595 .220 -17.4271 4.2271 10.60000 5.24595 .055 -.2271 21.4271 6.00000 5.24595 .264 -4.8271 16.8271 38.60000 * 5.24595 .000 27.7729 49.4271 -23.60000 * 5.24595 .000 -34.4271 -12.7729 -17.20000 * 5.24595 .003 -28.0271 -6.3729 -10.60000 5.24595 .055 -21.4271 .2271 -4.60000 5.24595 .389 -15.4271 6.2271 43.20000 * 5.24595 .000 32.3729 54.0271 -19.00000 * 5.24595 .001 -29.8271 -8.1729 -12.60000 * 5.24595 .024 -23.4271 -1.7729 -6.00000 5.24595 .264 -16.8271 4.8271 4.60000 5.24595 .389 -6.2271 15.4271 * 4.98130 .000 -65.8809 -45.3191 -55.60000 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 54 Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis sedang -67.80000 * 4.98130 .000 -78.0809 -57.5191 -38.60000 * 4.98130 .000 -48.8809 -28.3191 -39.40000 * 4.98130 .000 -49.6809 -29.1191 -57.60000 * 4.98130 .000 -67.8809 -47.3191 55.60000 * 4.98130 .000 45.3191 65.8809 -12.20000 * 4.98130 .022 -22.4809 -1.9191 17.00000 * 4.98130 .002 6.7191 27.2809 16.20000 * 4.98130 .003 5.9191 26.4809 -2.00000 4.98130 .692 -12.2809 8.2809 67.80000 * 4.98130 .000 57.5191 78.0809 12.20000 * 4.98130 .022 1.9191 22.4809 29.20000 * 4.98130 .000 18.9191 39.4809 28.40000 * 4.98130 .000 18.1191 38.6809 10.20000 4.98130 .052 -.0809 20.4809 38.60000 * 4.98130 .000 28.3191 48.8809 -17.00000 * 4.98130 .002 -27.2809 -6.7191 -29.20000 * 4.98130 .000 -39.4809 -18.9191 -.80000 4.98130 .874 -11.0809 9.4809 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 55 Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi Dosis Kontrol tinggi normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang hari21 Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif -19.00000 * 4.98130 .001 -29.2809 -8.7191 39.40000 * 4.98130 .000 29.1191 49.6809 -16.20000 * 4.98130 .003 -26.4809 -5.9191 -28.40000 * 4.98130 .000 -38.6809 -18.1191 .80000 4.98130 .874 -9.4809 11.0809 -18.20000 * 4.98130 .001 -28.4809 -7.9191 57.60000 * 4.98130 .000 47.3191 67.8809 2.00000 4.98130 .692 -8.2809 12.2809 -10.20000 4.98130 .052 -20.4809 .0809 19.00000 * 4.98130 .001 8.7191 29.2809 18.20000 * 4.98130 .001 7.9191 28.4809 -70.60000 * 8.12199 .000 -87.3630 -53.8370 -48.40000 * 8.12199 .000 -65.1630 -31.6370 -46.80000 * 8.12199 .000 -63.5630 -30.0370 -45.60000 * 8.12199 .000 -62.3630 -28.8370 -45.40000 * 8.12199 .000 -62.1630 -28.6370 70.60000 * 8.12199 .000 53.8370 87.3630 22.20000 * 8.12199 .012 5.4370 38.9630 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 56 Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi 23.80000 * 8.12199 .007 7.0370 40.5630 25.00000 * 8.12199 .005 8.2370 41.7630 25.20000 * 8.12199 .005 8.4370 41.9630 48.40000 * 8.12199 .000 31.6370 65.1630 -22.20000 * 8.12199 .012 -38.9630 -5.4370 1.60000 8.12199 .845 -15.1630 18.3630 2.80000 8.12199 .733 -13.9630 19.5630 3.00000 8.12199 .715 -13.7630 19.7630 46.80000 * 8.12199 .000 30.0370 63.5630 -23.80000 * 8.12199 .007 -40.5630 -7.0370 -1.60000 8.12199 .845 -18.3630 15.1630 1.20000 8.12199 .884 -15.5630 17.9630 1.40000 8.12199 .865 -15.3630 18.1630 45.60000 * 8.12199 .000 28.8370 62.3630 -25.00000 * 8.12199 .005 -41.7630 -8.2370 -2.80000 8.12199 .733 -19.5630 13.9630 -1.20000 8.12199 .884 -17.9630 15.5630 .20000 8.12199 .981 -16.5630 16.9630 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 57 Dosis Kontrol tinggi normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang hari28 Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah 45.40000 * 8.12199 .000 28.6370 62.1630 -25.20000 * 8.12199 .005 -41.9630 -8.4370 -3.00000 8.12199 .715 -19.7630 13.7630 -1.40000 8.12199 .865 -18.1630 15.3630 -.20000 8.12199 .981 -16.9630 16.5630 -81.80000 * 4.55778 .000 -91.2068 -72.3932 -39.60000 * 4.55778 .000 -49.0068 -30.1932 -48.20000 * 4.55778 .000 -57.6068 -38.7932 -47.00000 * 4.55778 .000 -56.4068 -37.5932 -46.60000 * 4.55778 .000 -56.0068 -37.1932 81.80000 * 4.55778 .000 72.3932 91.2068 42.20000 * 4.55778 .000 32.7932 51.6068 33.60000 * 4.55778 .000 24.1932 43.0068 34.80000 * 4.55778 .000 25.3932 44.2068 35.20000 * 4.55778 .000 25.7932 44.6068 39.60000 * 4.55778 .000 30.1932 49.0068 -42.20000 * 4.55778 .000 -51.6068 -32.7932 -8.60000 4.55778 .071 -18.0068 .8068 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 58 Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi Dosis Kontrol tinggi normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang -7.40000 4.55778 .118 -16.8068 2.0068 -7.00000 4.55778 .138 -16.4068 2.4068 48.20000 * 4.55778 .000 38.7932 57.6068 -33.60000 * 4.55778 .000 -43.0068 -24.1932 8.60000 4.55778 .071 -.8068 18.0068 1.20000 4.55778 .795 -8.2068 10.6068 1.60000 4.55778 .729 -7.8068 11.0068 47.00000 * 4.55778 .000 37.5932 56.4068 -34.80000 * 4.55778 .000 -44.2068 -25.3932 7.40000 4.55778 .118 -2.0068 16.8068 -1.20000 4.55778 .795 -10.6068 8.2068 .40000 4.55778 .931 -9.0068 9.8068 46.60000 * 4.55778 .000 37.1932 56.0068 -35.20000 * 4.55778 .000 -44.6068 -25.7932 7.00000 4.55778 .138 -2.4068 16.4068 -1.60000 4.55778 .729 -11.0068 7.8068 -.40000 4.55778 .931 -9.8068 9.0068 *. Berbeda secara signifikan pada taraf uji 0.05 . UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 59 a) Hari ke 0 1. Kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 1, 10, 100 mg/kg BB pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). 2. Kelompok kontrol positif tidak berbeda secara bermakna dengan kelompok uji dosis 1 mg/kg dan 100 mg/kg pada taraf uji (ρ≥0,05) tetapi berbeda bermakna dengan kelompok uji dosis 10 mg/kg. 3. Kelompok uji dosis 1 mg/kg tidak berbeda secara bermakna dengan kelompok uji dosis 10 mg/kg dan 100 mg/kg pada taraf uji (ρ≥0,05). b) Hari ke 7 1. Kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan seluruh kelompok uji dosis 1, 10, 100 mg/kg BB pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05) tetapi tidak berbeda bermakna dengan kontrol positif (ρ≥0,05). 2. Kelompok kontrol positif tidak berbeda secara bermakna dengan kelompok uji dosis 1 mg/kg tetapi berbeda bermakna dengan kelompok uji dosis 10 mg/kg dan 100 mg/kg (ρ≤0,05). 3. Kelompok uji dosis 1 mg/kg tidak berbeda bermakna dengan kelompok uji dosis10 mg/kg dan 100 mg/kg. c) Hari ke 14 1. Kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 1, 10 mg/kg BB (ρ≤0,05) kecuali dosis 100 mg/kg tidak berbeda secara bermakna (ρ≥0,05). 2. Kelompok kontrol positif berbeda secara bermakna dengan kelompok uji dosis 1, 10 mg/kg BB pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). 3. Kelompok uji dosis 1 mg/kg berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif, kontrol negatif dan kelompok uji dosis 100 mg/kg BB (ρ≤0,05) kecuali dosis 10 mg/kg tidak berbeda secara bermakna (ρ≥0,05). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 60 d) Hari ke 21 1. Kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 1, 10, 100 mg/kg BB pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). 2. Kelompok kontrol positif tidak berbeda secara bermakna dengan kelompok uji dosis 1 mg/kg, 10 mg/kg dan 100 mg/kg pada taraf uji (ρ≥0,05). 3. Kelompok uji dosis 1 mg/kg tidak berbeda bermakna dengan kelompok uji dosis 10 mg/kg dan 100 mg/kg. e) Hari ke 28 1. Kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 1, 10, 100 mg/kg BB pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). 2. Kelompok kontrol positif tidak berbeda secara bermakna dengan kelompok uji dosis 1 mg/kg, 10 mg/kg dan 100 mg/kg pada taraf uji (ρ≥0,05). 3. Kelompok uji dosis 1 mg/kg tidak berbeda bermakna dengan kelompok uji dosis 10 mg/kg dan 100 mg/kg. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
