UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI
advertisement
UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI AKTIVITAS ANTIFUNGI EKSTRAK ETANOL 96% KULIT BATANG KAYU JAWA (Lannea coromandelica) TERHADAP Aspergillus niger, Candida albicans, dan Trichophyton rubrum SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi HARDI MOZER NIM: 1111102000049 FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA JUNI 2015 UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI AKTIVITAS ANTIFUNGI EKSTRAK ETANOL 96% KULIT BATANG KAYU JAWA (Lannea coromandelica) TERHADAP Aspergillus niger, Candida albicans,dan Trichophyton rubrum SKRIPSI HARDI MOZER NIM: 1111102000049 FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA JUNI 2015 iv ABSTRAK Nama Program studi Judul : Hardi Mozer : Farmasi : Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak etanol 96% Kulit Batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) Terhadap Aspergillus niger, Candida albicans, dan Trichophyton rubrum Tumbuhun kayu jawa (Lannea coromandelica) dipercaya memiliki khasiat dapat mengobati berbagai macam penyakit, salah satunya penyakit yang diakibatkan oleh infeksi jamur. Penelitian lebih lanjut dilakukan terhadap ekstrak kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) terhadap jamur penyebab penyakit, yaitu Candida albicans, Trichophyton rubrum dan Aspergillus niger. Pengujian aktivitas antifungi dilakukan dengan metode difusi cakram. Hasil yang diperoleh, ekstrak kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) dapat menghambat pertumbuhan Candida albicans pada konsentrasi 1000, 750 dan 500 ppm, Trichophyton rubrum pada kosentrasi 1000, 750, 500 dan 250 ppm, tetapi tidak dapat menghambat pertumbuhan Aspergillus niger. Nilai KHM yang didapatkan untuk Candida albicans pada konsentrasi 500 ppm dan Trichophyton rubrum pada konsentrasi 250 ppm. Kata Kunci : Ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa, Lannea coromandelica, difusi cakram, Konsentrasi Hambat Minimum (KHM). v ABSTRACT Name Programe study Title : Hardi Mozer : Pharmacy : Antifungal Activity Test of ethanol extract 96% stem bark of kayu jawa (Lannea coromandelica) Against Aspergillus niger, Candida albicans, and Trichophyton rubrum Lannea coromandelica is believed to treat various diseases, such as fungal infections. Further research was carried out on stem bark extract of Kayu Jawa (Lannea coromandelica) against fungi that causes diseases, such as Candida albicans, Trichophyton rubrum and Aspergillus niger. The antifungal activity test was performed by using the disc diffusion method. The result showed that the stem bark extract of Lannea coromandelica can inhibit growth of Candida albicans at various concentrations, which were 1000, 750 and 500 ppm. The growth of Trichophyton rubrum was inhibited at 1000, 750, 500 and 250 ppm. While the growth of Aspergillus niger showed that it could not be inhibited. MIC value for Candida albicans was obtained at concentration 500 ppm and Trichphython rubrun at concentration 250 ppm. Keyword: ethanol extract 96% stem bark of kayu jawa, Lannea coromandelica, disc diffusion, Minimum Inhibitory Concentration (MIC). vi KATA PENGANTAR Alhamdulillah, satu kata untuk rasa syukur yang sedalam-dalamnya saya sampaikan atas rezki Allah SWT yang telah memberikan semangat, kesehatan, nikmat dan karunia-Nya kepada saya hingga saya dapat menyelesaikan skripsi ini. Salawat dan salam juga saya sampaikan kepada junjungan alam Nabi Muhammad SAW, karena berkat perjuangan baginda kita bisa sampai kepada zaman yang penuh ilmu pengetahuan seperti sekarang ini. Penuh perjuangan, jerih payah, smangat tak kenal lelah untuk menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak etanol 96% Kulit Batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) Terhadap Aspergillus niger, Candida albicans, dan Trichophyton rubrum” ini. Skripsi ini disusun untuk memenuhi tugas akhir sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Program Studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Perkenankanlah pada kesempatan ini saya sebagai penulis mengucapkan terimakasi yang sebesar-besarnya kepada: 1. Bapak Prof. Dr. Dede Rosyada, MA, selaku Rektor Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 2. Bapak Dr. Arif Sumantri, S.K.M., M.Kes, selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN syarif hidayatullah Jakarta. 3. Bapak Drs. Umar Mansur, M,Sc.,Apt selaku Ketua Jurusan Farmasi 4. Ibu Eka Putri, M.Si., Apt selaku pembimbing 1 dan ibu Putri Amelia , M.Farm.,Apt selaku pembimbing 2 yang telah bersusah payah, membimbing dan membantu saya selama pelaksanaan skripsi ini. 5. Orang tua saya tercinta, ibu dan ayah yang selalu mendidik dan membesarkan saya. Selalu memeberikan motivasi disetiap langkah yang menasehati ketika salah dan selalu berjuang tanpa kenal lelah. Serta Kakak-kakak ku, Kak Ishe, Ani, Mery dan Eni yang juga selalu memberikan motivasinya kepada saya serta sabar mengajarkan saya. vii 6. Bapak Bahri yang turut serta membantu saya dalam penelitian ini, yang saya anggap sebagai pembimbing ketiga saya.Saran dan bantuan dari beliau sangat berjasa bagi saya. 7. Bapak dan ibu dosen yang membimbing saya selama menempuh pendidikan di program studi Farmasi. Fakultas Kedokteran dan Ilmu kesehatan. UIN syarif Hidayatullah Jakarta. 8. Kepada karyawan dan staf laboran program studi Farmasi serta staf laboran, Ka Tiwi, ka Lisna, ka Eris, ka Liken serta bu Rani yang telah banyak membantu dalam penyelesaian skripsi ini. 9. Seluruh sahabat-sahabat Farmasi 2011. Terima kasih yang besar untuk semua kenangan yang pernah kalian berikan. 10. Anak-anak kontrakan. Wahidin mamet, Ali tua, Andis Cocwiiit, dan Rijal Bintang yang menemani hari-hari dikontrakan. 11. Ahmad Rifqi, yang meminjamkan printer, kertas serta penginapan dikosannya selama pengerjaan skripsi secara geratis. 12. Harry marloon, Ajo Apis, Ajo Derry, Dek kiki, Ajo gigiah, dan kawan-kawan di Panam lainnya. Terimakasih buat kalian semua. 13. Serta semua pihak yang tidak dapat disebutkan satupersatu yang turut membantu menyelesaikan skripsi ini. Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna. Oleh karena itu kritik dan saran yang membangun sangat penulis harapkan guna menyempurnakan skripsi ini kedepan. Dengan segala kerendahan hati, penulis berharap hasil penelitian ini dapat menambah ilmu pengetahuan serta bermanfaat bagi kalangan akademis khususnya dan masyarakat umum pada umumnya Ciputat, 24 Juni 2015 Hardi Mozer viii ix DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL .............................................................................................................. i HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ................................................................. ii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................................. iii HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................................ iv ABSTRAK .............................................................................................................................. v ABSTRACT ............................................................................................................................ vi KATA PENGANTAR ............................................................................................................ vii DAFTAR ISI........................................................................................................................... x DAFTAR GAMBAR .............................................................................................................. xii DAFTAR TABEL .................................................................................................................. xiii DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................................... xiv BAB 1 PENDAHULUAN ...................................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang............................................................................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................................... 3 1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................................... 3 a. Tujuan Umum .......................................................................................................... 3 b. Tujuan Khusus ......................................................................................................... 3 1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................................................... 4 a. Manfaat Secara Teoritis ........................................................................................... 4 b. Manfaat Secara Metodelogis ................................................................................... 4 c. Manfaat Secara Aplikatif ......................................................................................... 4 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA............................................................................................. 5 2.1. Tanaman Kayu Jawa (Lannea coromandelica) ............................................................ 5 2.2. Fungi. ............................................................................................................................ 6 2.3. Infeksi Fungi ................................................................................................................. 9 2.4. Fungi yang Digunakan Dalam Penelitian ..................................................................... 9 2.5. Antifungi....................................................................................................................... 13 2.6. Nistatin ......................................................................................................................... 15 2.7. Uji Antimikroba............................................................................................................ 16 2.8. Ekstrak dan Ekstraksi ................................................................................................... 17 2.9. Metode Ekstraksi .......................................................................................................... 18 2.10. Pelarut ......................................................................................................................... 20 BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ............................................................................... 23 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ..................................................................................... 23 3.2 Alat dan Bahan ............................................................................................................ 23 3.2.1 Alat ................................................................................................................ 23 3.2.2 Bahan ............................................................................................................. 23 3.3 Desain/ Rancangan Penelitian ..................................................................................... 24 3.4 Prosedur Kerja ............................................................................................................ 24 3.4.1 Penyiapan Simplisia ....................................................................................... 24 3.4.2 Ekstraksi Sampel Kulit Batang kayu Jawa .................................................... 24 3.4.3 Skrining fitokimia .......................................................................................... 25 3.4.4 Uji Parameter Ekstrak .................................................................................... 26 x 3.4.5 Sterilisasi alat ................................................................................................. 27 3.4.6 Pembuatan Kontrol Positif, Negatif dan Larutan Ekstrak Uji ...................... 27 3.4.7 Pembuatan Medium PDA (Potato Dextrose Agar)........................................ 28 3.4.7 Peremajaan Fungi ........................................................................................... 28 3.6.4 Identifikasi Fungi ........................................................................................... 29 3.6.5 Pembuatan Suspensi Fungi ............................................................................ 29 3.6.6 Penentuan Diameter Zona Hambat ................................................................ 30 3.6.7 Penetapan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ....................................... 30 BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................................. 32 4.1. Pemilihan Tanaman .................................................................................................... 32 4.2. Determinasi Tanaman ................................................................................................. 32 4.3. Penyiapan Tanaman .................................................................................................... 32 4.4. Ekstraksi ...................................................................................................................... 33 4.5. Parameter Ekstrak ....................................................................................................... 35 4.6. Skrining Fitokimia ...................................................................................................... 36 4.7. Uji Aktivitas ................................................................................................................ 37 4.7.1 Sterilisasi Alat dan Bahan ................................................................................ 37 4.7.2. Peremajaan Fungi ............................................................................................ 38 4.7.3. Penyiapan Ekstrak Uji..................................................................................... 38 4.7.4. Pembuatan Suspensi Fungi ............................................................................. 39 4.7.5. Penentuan Diameter Zona Hambat ................................................................. 40 BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................................. 45 5.1. Kesimpulan ................................................................................................................. 45 5.2. Saran .................................................................................................................... 45 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................................. 46 LAMPIRAN ............................................................................................................................ 50 xi DAFTAR GAMBAR Tanaman Kayu Jawa (Lannea coromandelica) ....................................................................... 4 Struktur Nistatin ....................................................................................................................... 15 xii DAFTAR TABEL Tabel 1: Nama tumbuhan Kayu Jawa ditiap daerah ................................................................ 6 Tabel 2: Hasil Penentuan Parameter ekstrak............................................................................ 32 Tabel 3: Hasil Penentuan Skrining Fitokimia .......................................................................... 33 Tabel 4: Hasil Penentuan Diameter Zona Hambat................................................................... 37 xiii DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1: Skema Kerja ........................................................................................................ 50 Lampiran 2: Alat dan Bahan .................................................................................................... 52 Lampiran 3: Hasil Determinasi ................................................................................................ 53 Lampiran 4:Ekstraksi Dengan Maserasi .................................................................................. 54 Lampiran 5: Hasil Ekstrak ....................................................................................................... 54 Lampiran 6: Rendemen Ekstrak ............................................................................................... 55 Lampiran 7: Parameter Non Spesifik ....................................................................................... 55 Lampiran 8: Skrining Fitokimia............................................................................................... 57 Lampiran 9: Fungi Percobaan .................................................................................................. 58 Lampiran 10: Pembuatan DMSO 5% dan Ekstrak Uji ............................................................ 60 Lampiran 11: Pembuatan Suspensi Fungi ................................................................................ 62 Lampiran 12: Penentuan Diameter Zona Hambat.................................................................... 63 xiv 1 BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar belakang Allah SWT dengan segala kekuasaannya telah menciptakan langit dan bumi beserta isinya untuk kehidupan seluruh umat manusia. Allah SWT telah menciptkan hal yang terkecil juga hal yang terbesar semuanya untuk manusia sebagai khalifah dimuka bumi ini. Salah satu hal yang terbesar dan sangat bermanfaat bagi kehidupan manusia dimuka bumi adalah tumbuhan. Sesungguhnya Allah telah mengisyaratkan dalam al-Qur’an Surah asySyuara ayat 7 sebagai berikut : َأوَلَ ْم يَ َروْا إِلَى الْأَ ْرضِ كَمْ َأ ْن َبتْنَا فِيهَا ِمنْ ُكلِّ َزوْجٍ كَرِيم Artinya: “Dan apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya Kami tumbuhkan di bumi itu berbagai macam tumbuh-tumbuhan yang baik?” QS: As-Syuara Ayat 7 Dikehidupan sehari-hari manusia tidak akan bisa lepas dari peran tumbuhan. Selain menghasilkan oksigen yang bermanfaat bagi kehidupan manusia, tumbuhan juga menghasilkan senyawa-senyawa yang dapat digunakan sebagai obat dalam kehidupan sehari-hari. Seperti obat penurun panas, obat penghilang nyeri pada rematik, obat untuk luka, obat untuk gatal dan banyak lagi senyawa-senyawa tumbuhan yang bisa digunakan sebagai obat. Penggunaan tumbuh–tumbuhan alami sebagai tanaman obat sedang populer, khususnya di Indonesia, khususnya masyarakat di daerah–daerah mempercayai bahwa penggunaan tumbuhan alami sebagai obat lebih aman karena tidak memiliki efek samping yang berlebih (BPOM RI, 2010). Salah satunya penggunaan tumbuhan sebagai pengobatan berbagai jenis penyakit yang diakibatkan oleh fungi. Penyakit yang diakibatkan fungi masih sangat sering dijumpai, karena Indonesia yang mempunyai iklim hujan tropis menyebabkan tingkat kelembaban udara tinggi (RH>80%) dengan suhu rata-rata 28- 33°C (Sundarim., dan Wien, 2001). Trichophyton rubrum, Candida albicans, dan Aspergillus niger merupakan beberapa fungi yang paling banyak menginfeksi UIN SYARIF HIDAYATULLAH 2 manusia. Fungi tersebut dapat menyebabkan penyakit seperti kandidiasis, infeksi pernafasan, kaki atlet, seriawan dan masih banyak lainnya. Salah satu tanaman yang diduga memiliki aktivitas antifungi adalah tanaman kayu jawa (Lanenea coromandelica). Tanaman ini terdapat 40 spesies yang tersebar diberbagai tempat seperti India, Indonesia, Thailand dan daerahdaerah lainnya. Penelitian yang dilakukan di Bangladesh menunjukan tanaman ini digunakan untuk penyakit kulit, ulser peptik, keseleo, dan juga sebagai antimikroba (Wahid, 2008). Berdasarkan skrining fitokimia, kulit batang tanaman kayu jawa (Lannea coromandelica) dilaporkan mengandung senyawa seperti alkaloid, terpenoid, steroid, saponin, flavonoid, dan glikosida jantung (Kumar, 2011). Senyawasenyawa seperti saponin, flavonoid, terpenoid dan steroid merupakan senyawasenyawa yang dapat berkhasiat sebagai antimikroba. Pengujian pada tanaman ini di Indonesia baru dilakukan pada uji toksisitas dan antioksidan. Hasil uji aktivitas antioksidan yang dilakukan menunjukkan nilai AAI (Antioxidant activity index) ekstrak etanol 70%, ekstrak air, dan vitamin C berturut-turut 5,5679 (sangat kuat); 0,0667 (lemah); dan 9,6254 (sangat kuat). Hasil uji toksisitas yang dihitung menggunakan metode probit menunjukkan ekstrak air tidak memiliki aktivitas toksik dengan nilai LC50 3.171 ppm, sedangkan ekstrak etanol 70% menunjukkan aktivitas toksik dengan nilai LC50 23,774 ppm (Prawirodihardjo, 2014) Bagi masyarakat bugis di Sulawesi Selatan, tanaman dipercaya dan digunakan sebagai obat tradisional untuk mengobati luka luar dan luka dalam. Pengobatan dilakukan berbeda-beda tergantung dari jenis penyakit yang di derita masyarakat. Bagi yang menderita sakit perut, muntah darah, masyarakat meminum hasil rebusan dari kulit batang tanaman ini. Penggunaan untuk penyembuhan luka luar atau penyakit kulit lainnya, masyarakat menggunakannya dengan cara menempelkan kulit kayu pada bagian luka atau gatal tersebut. (Prawirodihardjo, 2014) Penggunaan secara luas tanaman ini pada masyarakat bugis di Sulawesi selatan untuk berbagai penyakit, masih sedikitnya penelitian ilmiah yang dilakukan terhadap tanaman ini, serta adanya penelitian sebelumnya yang UIN SYARIF HIDAYATULLAH 3 menunjukan hasil bahwa tanaman ini mengandung senyawa yang bermanfaat sebagai antifungi, menjadikan dasar untuk dilakukan pengujian ilmiah pada tanaman kayu jawa (Lannea coromandelica), khususnya sebgai antifungi. Penelitian dilakukan dengan menggunakan kulit batang kayu jawa. Diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%, menggunakan fungi uji Trichophyton rubrum, Candida albicans, dan Aspergillus niger yang merupakan beberapa fungi yang sering menginfeksi manusia, serta menggunakan kontrol positif Nystatin dan kontrol negatif DMSO 5% sebagai pembanding. 1.2 Rumusan masalah Berdasarkan uraian latar belakang menunjukan bahwa ada beberapa hasil penelitian yang telah dilakukan terhadap kayu jawa Lannea coromandelica oleh beberapa peneliti, serta digunakan sebagai obat untuk mengobati berbagai macam penyakit di masyarakat Sulawesi selatan, khususnya masyarakat bugis. Penelitian tanaman ini di Indonesia baru sebatas pengujian nilai toksisitas dan pengujian terhadap antioksidan. Penelitian sebelumnya didapatkan hasil tanaman ini mengandung senyawa-senyawa yang diduga berkhasiat sebagai antifungi, tetapi belum dilakukan pengujiannya terutama Trichophyton rubrum, Candida albicans dan Aspergillus niger. 1.3 Tujuan Penelitian a. Tujuan Umum Untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) sebagai antifungi. b. Tujuan khusus 1. Untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa terhadap Trichophyton rubrum. 2. Untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa terhadap Candida albicans. 3. Untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa terhadap Aspergillus niger. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 4 1.4 Manfaat penelitian a. Manfaat secara teoritis Dapat menambah wawasan dan ilmu pengetahuan tentang berbagai tumbuhan yang bermanfaat sebagai obat dan juga pengembangan dalam bidang mikrobiologi. b. Manfaat secara metodelogis Metodelogi yang digunakan dalam penelitian ini dapat digunakan sebagai acuan dalam penelitian lainnya, terutama penelitian tentang tumbuhan yang digunakan sebagai obat terutama antimikroba. c. Manfaat secara aplikatif 1. Hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai bahan masukan kepada pembuat kebijakan di bidang pengobatan dengan memanfaatkan tumbuhan Kayu jawa sebagai obat tradisional. 2. Hasil penelitian dapat digunakan untuk menambah perbendaharaan tanaman obat dalam Materia Medika. 3. Hasil penelitian ini perlu diinformasikan kepada masyarakat, bahwa tanaman Kayu jawa juga dapat digunakan untuk pengobatan infeksi fungi secara tradisonal. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 5 BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tanaman Kayu jawa (Lannea coromandelica) (http://commons.hortipedia.com/images/9/92/Lanneacoromandelica) Diakses pada 17 Maret 2015 a. Klasifikasi tanaman Berdasarkan kedudukan dalam taksonomi tumbuhan, tanaman Kayu jawa (Lannea corormandelica) adalah sebagai berikut: Kingdom : Plantae Phylum : Magnoliophyta Class : Spermatophyta Subclass : Rosids Order : sapindales Family : Anacardiaceae Genus : Lannea Species : Lannea coromandelica (Houtt.) Merr. (http://indiabiodiversity.org/species/show/230190) Kayu jawa merupakan deciduous tree atau pohon gugur yang dapat tumbuh hingga mencapai 25 m (umumnya 10-15 m). Permukaan batang berwarna abu-abu sampai coklat tua, kasar, ada pengelupasan serpihan kecil yang tidak teratur, batang dalam berserat berwarna merah atau merah muda gelap, dan memiliki eksudat yang bergetah. Daun imparipinnate, meruncing, dan berjumlah UIN SYARIF HIDAYATULLAH 6 7-11. Bunga berkelamin tunggal berwarna hijau kekuningan. Buah berbiji dengan panjang 12 mm, bulat telur, kemerahan, dan agak keras. Tanaman ini berbunga dan berbuah dari bulan Januari hingga Mei (Wahid, 2009). b. Nama ditiap Negara dari Lannea coromandelica Tabel 1: Nama Lannea coromandelica disetiap Negara Nama Daerah Negara Jiga/jigar/kasmala/ghadi/kocha Bangladesh Mohin/Kiamil/jhingan India Halonre/thulo dabdabe Nepal Baing Myanmar Jailbhadi/jhingan/wodier Pakistan Kayu Jawa Indonesia Tanaman kayu jawa (Lannea coromandelica) merupakan tanaman pekarangan yang dapat dimanfaatkan daun dan kulit batangnya dengan cara ditumbuk ataupun direbus untuk mengobati luka luar, luka dalam, dan perawatan paska persalinan (Rahayu, dkk., 2006). Kulit batang dapat digunakan sebagai astringen, mengobati sakit perut, lepra, ulcer, penyakit jantung, disentri, dan sariawan. Kulit batang digunakan bersama dengan kulit batang Aegle mermelos, Artocarpus heterophyllus dan Sygygium cumini berguna dalam penyembuhan impotensi. Kulit batang dapat dikunyah selama 2-3 hari untuk menyembuhkan glossitis. Perebusan daun juga dianjurkan untuk pembengkakan dan nyeri lokal (Wahid, 2009). Kulit batang tanaman kayu jawa (Lannea coromandelica) dilaporkan mengandung metabolit sekunder: Alkaloid, terpenoid, steroid, saponin, flavonoid, dan glikosida jantung. Dengan adanya senyawa saponin dan flavonoid tersebut maka tanaman kayu jawa ini diduga dapat digunakan sebagai antifungi, karena senyawa flavonoid dan saponin telah dilaporkan dapat digunakan sebagai antifungi dan antimikroba (Wahid, 2009). 2.2 Fungi Fungi adalah organisme berspora, tidak berklorofil, berupa sel atau benang bercabang-cabang dengan dinding dari selulosa atau dari kitin atau dari keduanya. Pada umumnya berkembang biak secara seksual dan aseksual (Pelezar UIN SYARIF HIDAYATULLAH 7 dan Chan, 1986). Beberapa fungi mempunyai inang yang hidup lalu tumbuh dengan subur sebagai parasit dan menimbulkan penyakit pada tumbuhan, hewan termasuk manusia, tidak kurang dari 100 spesies yang patogen terhadap manusia (Pelezar dan Chan, 1986). Fungi merupakan organisme heterotrof yang memerlukan zat-zat organik dari organisme autrotrof. fungi tumbuh pada kondisi aerob dan memperoleh energi dengan mengoksidasi bahan organik. Unsur-unsur yang diperlukan fungi untuk pertumbuhannya antara lain nitrogen, hidrogen, oksigen, kalium, fosfor, sulfur, karbon, dan magnesium. Fungi pada umumnya tumbuh pada suhu 0-60oC dengan suhu optimal 20-30oC dan pH 2-9 dengan pH optimal 6 (Bauman, 2001). Fungi dibedakan menjadi empat kelas, yaitu : 1) Zygomycetes 2) Ascomycetes 3) Basidiomycetes 4) Dueteromycetes (Pertiwi. 2008) Fungi terdiri dari struktur somatik atau vegetatif yaitu thallus yang merupakan filamen atau benang hifa, miselium berupa jalinan hifa dan yang merupakan koloni disebut spora (Pertiwi, 2008). a. Kapang (mold). Kapang merupakan fungi yang berfilamen atau mempunyai miselium, pertumbuhannya dalam bahan makanan mudah sekali dilihat, yakni seperti kapas (Waluyo, 2005). Sedangkan tubuh atau talus suatu kapang pada dasarnya terdiri dari dua bagian miselium dan spora. Miselium merupakan kumpulan beberapa filamen yang dinamakan hifa. Di sepanjang setiap hifa terdapat sitoplasma bersama (Pelezar dan Chan, 1986). Pertumbuhan fungi mula-mula berwarna putih, tetapi bila telah memproduksi spora akan membentuk berbagai warna tergantung dari jenis kapang. Kebanyakan kapang bersifat mesofilik, yaitu mampu tumbuh baik pada suhu kamar. Suhu optimium pertumbuhan untuk kebanyakan kapang adalah 25 sampai 30oC, tetapi beberapa dapat tumbuh pada suhu 35 sampai 37oC atau lebih, misal Aspergillus nigers dan Trichophyton rubrum. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 8 Beberapa kapang bersifat psikotrofik, yakni dapat tumbuh baik pada suhu almari es, dan beberapa bahkan masih dapat tumbuh lambat pada suhu di bawah suhu pembekuan, misal -5 sampai -10oC. Selain itu, beberapa kapang bersifat termofilik, yakni mampu tumbuh pada suhu tinggi. Semua kapang bersifat aerobik, yakni membutuhkan oksigen dalam pertumbuhannya. Kebanyakan kapang dapat tumbuh baik pada pH luas, yakni 2,0 sampai 8,5 tetapi biasanya pertumbuhannya akan baik bila pada kondisi asam atau pH rendah (Waluyo, 2005). b. Khamir (yeast) Khamir merupakan fungi bersel tunggal dan tidak berfilamen. Sebagai sel tunggal khamir tumbuh dan berkembang biak lebih cepat dibanding kapang yang tumbuh dengan pembentukan filamen. Reproduksi vegetatif terjadi dengan cara pertunasan. Khamir juga lebih efektif dalam memecah komponen kimia dibanding kapang, karena mempunyai perbandingan luas permukaan dengan volume yang lebih besar. Sel khamir mempunyai ukuran yang bervariasi, yaitu dengan panjang 12-5 mm sampai 20-50 mm, dan lebar 1-10 mm. Bentuk khamir bermacam-macam, yaitu bulat, oval, silinder, ogival yaitu bulat panjang dengan salah satu ujung runcing, segitiga melengkung (trianguler), berbentuk botol bentuk apulkat atau lemon, membentuk pseudomiselium, dan sebagainya. Dinding selnya sangat tipis untuk sel-sel yang masih muda, dan semakin lama semakin tebal jika sel semakin tua. Komponen dinding selnya berupa glukan (selulosa khamir), mannan, protein, kitin, dan lipid. Contoh dari khamir yang sering merugikan manusia yaitu Candida albicans (Waluyo, 2005). c. Pertumbuhan Fungi Pertumbuhan fungi merupakan peningkatan semua komponen dari suatu organisme secara teratur. Bila suatu medium ditanam sel-sel fungi maka pertumbuhannya dapat digambarkan dalam bentuk kurva pertumbuhan. Pertumbuhan fungi meliputi fase-fase: 1. Fase lag (penyesuaian) Pada fase ini merupakan fase tidak adanya pertumbuhan populasi karena sel mengalami perubahan komposisi kimiawi dan ukuran serta bertambahnya substansi intra seluler sehingga siap untuk membelah diri. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 9 Fase ini disebut juga fase saat penyesuaian sel dengan lingkungan serta pembentukan enzim-enzim untuk mengurai substrat (Gandjar.,dkk, 2006). 2. Fase Akselerasi Pada fase ini yaitu sel-sel fungi mulai membelah dan fase lag aan menjadi aktif (Gandjar.,dkk, 2006). 3. Fase Logaritmik (Eksponensial) Pada fase ini sel Fungi membelah diri dengan laju konstan, sehingga masa menjadi dua kali lipat dan keadaan pertumbuhan seimbang. Pertumbuhan sel-sel ini dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya adalah media yang digunakan, konsentrasi, kepadatan media, suhu, kadar oksigen, volume dan faktor lainnya. Pada awal fase ini kita dapat memanen enzim-enzim dan merupakan fase yang sangat penting dalam kehidupan mikroba. (Gandjar.,dkk, 2006). 4. Fase deselerasi Fase saat sel-sel mulai kurang aktif membelah, kita dapat memanen biomassa sel atau senyawa yang tidak diperlukan lagi oleh selsel fungi (Gandjar.,dkk, 2006). 5. Fase Stasioner Terjadinya penumpukan racun akibat mertabolisme sel dan kandungan nutrien mulai habis, akibatnya terjadi kompetisi nutrisi sehingga beberapa sel fungi mati dan lainnya tetap tumbuh. Sehingga pada fase ini pertumbuhan tetap (Gandjar.,dkk, 2006). 6. Fase kematian Sel menjadi mati akibat penumpukan racun dan habisnya nutrisi, menyebabkan jumlah sel yang mati lebih banyak daripada jumlah sel yang bertahan sehingga mengalami penurunan jumlah sel secara eksponensial (Gandjar.,dkk, 2006). 2.3 Infeksi Fungi Fungi termasuk tumbuh-tumbuhan filum talofita yang tidak memiliki akar, batang dan daun. Fungi tidak bisa menghisap makanan dari tanah dan tidak memiliki klorofil sehingga tidak bisa menyediakan makanan sendiri. Fungi bisa UIN SYARIF HIDAYATULLAH 10 tumbuh jika mendapatkan makanan dari organisme lain, oleh karena itu Fungi dikenal sebagai saprofit dan parasit bagi organisme lain (Siregar, 2005). Sampai saat ini dikenal kurang lebih 200.000 spesies fungi, tetapi hanya 50 spesies yang patogen pada manusia, yaitu: 20 spesies menyerang kulit, 12 spesies menyerang subkutis dan 18 sepesies menyerang organ dalam atau sistemik. Masuknya/berkembangnya fungi dalam tubuh manusia dapat dikarenakan oleh berbagai hal yaitu, melalui luka kecil atau aberasi pada kulit. melalui saluran nafas dengan menghirup elemen-elemen fungi dan melalui kontak tanpa adanya luka (Siregar, 2005) Contoh-contoh penyakit yang disebabkan oleh infeksi fungi antara lain: Mikosis superfisisal. Penyakit ini mengenai lapisan permukaan kulit, yaitu stratum korneum, rambut dan kuku. Contohnya: Tinea versicolor (panu), herpes sirsinata dan kurap (Bouman, 2001). Mikosis Profunda (sistemik). Penyakit fungi ini menyerang organ dalam, seperti pernafasan, alat genitalia, dan lain-lain. Contohnya: misetoma, kromomikosis, keputihan dan lain-lain (Bouman, 2001). 2.4 Fungi yang Digunakan Dalam Penelitian a. Candida albicans Divisio : Eumycophyta Kelas : Deuteromycetes Ordo : Melaneoniales Familia : Moniliaceae Genus : Candida Spesies : Candida albicans Candida albicans adalah fungi lonjong bertunas yang menghasilkan pseudomisellium dalam biakan, jaringan dan eksudat. Ukuran Candida albicans yaitu 2- 3 mm x 4-6 mm. Candida albicans merupakan anggota flora normal selaput lendir, saluran pernafasan, saluran pencernaan, dan genetalia wanita. Candida albicans dapat menimbulkan invasi dalam aliran darah, trombofiebitis, endo karditas atau infeksi pada mata dan organ lain. Candida albicans mampu meragikan glukosa dan maltosa, menghasilkan asam dan gas, tidak bereaksi dengan laktosa. Peragian karbohidrat ini bersama-sama dengan sifat koloni dan UIN SYARIF HIDAYATULLAH 11 morfologi koloni, membedakan Candida albicans dari spesies Candida lainnya (Jawetz., dkk, 1986). Candida albicans dapat menyebabkan penyakit kandidiasis. Kandidaisis dapat ditemukan pada permukaan kulit, genitalia dan saluran pencernaan. Kandidiasis adalah penyakit Faktor predisposisi utama kandidiasis adalah rendahnya daya tahan tubuh hospes, seperti pada penderita AIDS atau pasien yang menjalani kemoterapi, dan sebagainya. Faktor predisposisi lain yang dapat menyebabkan tingginya prevalensi kandidiasis antara lain, pasien yang menjalani pengobatan dengan antibiotik spektrum luas dalam jangka panjang; iritasi kronik akibat pemakaian protesa yang tidak adekuat; dan pola makan yang cenderung tinggi gula (Bouman, 2001). Infeksi yang disebabkan oleh Candida albicans antara lain: 1. Mulut. Infeksi mulut (sariawan) terutama pada bayi, terjadi pada selaput lendir pipi dan tampak sebagai bercak putih yang sebagian besar terdiri atas pseudomiselium dan epitel yang terkelupas. 2. Genitalia wanita. Genitalia wanita Vulvovaginitis menyerupai sariawan, tetapi menimbulkan iritasi dan gatal yang hebat. Timbulnya vulvovaginitis dipermudah oleh pH alkali. Dalam keadaan normal pH dinetralkan oleh kuman vagina. 3. Infeksi kulit. Terutama terjadi ada bagian tubuh yang basah, hangat, seperti ketiak, lipatan paha, atau lipatan dibawah payudara, infeksi paling sering terdapat pada orang gemuk dan diabetes. Infeksi pada kulit antara jari-jari tangan paling sering setelah pencelupan dalam air yang berlangsung lama dan berulang. 4. Infeksi kuku. Rasa sakit, bengkak kemerahan dari lipatan kuku dapat mengakibatkan penebalan dan akhirnya kehilangan kuku. 5. Paru-paru dan organ lain. Infeksi Candida dapat merupakan invasi sekunder paru-paru, ginjal, dan organ-organ lain di mana terdapat penyakit sebelumnya misalnya tuberkulosis dan kanker. (Jawetz., dkk, 1986). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 12 b. Aspergillus niger Divisio : Eumycophyta Kelas : Ascomycetes Ordo : Aspergillales Familia : Aspergillaceae Genus : Aspergillus Spesies : Aspergillus niger Aspergillus niger atau Black Aspergilli merupakan Fungi yang umum disebut sebagai Fungi hitam. Aspergillus niger biasanya ditemukan dalam paruparu burung, tetapi juga dapat ditemukan pada lembu, domba, dan kuda, namun jarang ditemukan pada manusia. Aspergillus niger juga dapat menyebabkan infeksi yang serius pada telinga. Pada umumnya Aspergillus niger ditemukan pada makanan yang dibiarkan terbuka. Aspergillus niger menyebabkan pembusukan dan kontaminan umum pada laboratorium bakteri dan mikrobiologi. Aspergillus niger digunakan untuk memproduksi asam oksalat dan asam nitrat (Salle, 1994). c. Trichophyton rubrum Divisio : Eumycophyta Kelas : Deuteromycetes Ordo : Melaneoniales Familia : Moniliaceae Genus : Trichophyton Spesies : Trichophyton rubrum. Fungi ini memiliki koloni seperti kapas, berwarna putih, penyebab dermatomikosis (Bouman, 2001). Mikronidia merupakan bentuk spora yang paling banyak. Makrokonidia yang berdinding halus, berbentuk pensil dengan ujung-ujung yang tumpul biasanya jarang ditemukan. Trichophyton sp. menyebabkan infeksi pada kulit, kuku, dan rambut. Fungi ini juga menyebabkan penyakit tine pedis (athlete’s foot), Tinea cruris dan Tinea unginium (Jawetz., dkk,; 1995). Merupakan Fungi parasit yang memiliki kemampuan untuk menyerang struktur keratin (rambut, kulit dan kuku), menyebabkan infeksi superfisial yang UIN SYARIF HIDAYATULLAH 13 disebut dermatophytoses, seperti Tinea capitis, Tinea corporis, Tinea inguinalis, manus Tinea, Tinea unguium dan Tinea pedis (Bauman, 2001). Trichophyton rubrum adalah fungi superfisial yang paling umum menyerang manusia, data menunjukan setidaknya 60% dari semua infeksi fungi superfisial dimanusia disebebkan oleh Trichophyton rubrum. Selain itu, Trichophyton rubrum juga dapat menyebabkan lebih infeksi seperti kerions, abses dan granuloma (Raposo., dkk, 2011). 2.5 Antifungi Antifungi merupakan zat berkhasiat yang digunakan untuk penanganan penyakit fungi. Umumnya suatu senyawa dikatakan sebagai zat antifungi apabila senyawa tersebut mampu menghambat pertumbuhan fungi (Siswandono, 1995). Zat antifungi bekerja menurut salah satu dari berbagai cara, antara lain menyebabkan kerusakan dinding sel, perubahan permeabilitas sel, perubahan molekul protein dan asam nukleat, penghambatan kerja enzim, atau penghambatan sintesis asam nukleat dan protein. Kerusakan pada salah satu situs ini dapat mengawali terjadinya perubahan-perubahan yang menuju pada matinya sel tersebut (Pelezar dan Chan, 1988). a. Kerusakan pada dinding sel Dinding sel merupakan penutup lindung bagi sel dan juga berpartisipasi didalam proses-proses fisiologi tertentu. Strukturnya dapat dirusak dengan cara menghambat pembentukannya atau mengubah setelah selesai terbentuk (Pelezar dan Chan, 1988). b. Perubahan permeabilitas sel Membran sitoplasma mempertahankan bahan-bahan tertentu di dalam sel serta secara selektif mengatur aliran keluar-masuknya zat antara sel dengan lingkungan luarnya. Membran memelihara integritas komponen-komponen seluler. Membran ini juga merupakan situs beberapa reaksi enzim. Kerusakan pada membran ini akan mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya sel (Pelezar dan Chan, 1988). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 14 c. Perubahan molekul protein dan asam nukleat Hidupnya suatu sel bergantung pada terpeliharanya molekul-molekul protein dan asam nukleat pada membran alamiahnya. Suatu kondisi atau substansi yang mengubah keadaan ini, yaitu mendenaturasikan protein dan asamasam nukleat dapat merusak sel tanpa dapat diperbaiki kembali. Suhu tinggi dan konsentrasi pekat beberapa zat kimia dapat mengakibatkan koagulasi (denaturasi) ireversibel (tak dapat balik) komponen-komponen seluler yang vital ini (Pelezar dan Chan, 1988). d. Penghambatan kerja enzim Setiap enzim dari beratus-ratus enzim berbeda-beda yang ada di dalam sel merupakan sasaran potensial bagi bekerjanya suatu penghambat. Banyaknya zat kimia telah diketahui dapat mengganggu reaksi biokimiawi. Penghambatan ini dapat mengakibatkan terganggunya metabolisme atau matinya sel (Pelezar dan Chan, 1988). e. Panghambatan sintesis asam nukleat dan protein DNA, RNA, dan protein memegang peranan sangat penting di dalam proses kehidupan normal sel. Hal ini berarti bahwa gangguan apapun yang terjadi pada pembentukan atau pada fungsi zat-zat tersebut dapat mengakibatkan kerusakan total pada sel (Pelezar dan Chan, 1988) Senyawa metabolit sekunder yang mempunyai aktivitas antifungi antara lain: 1. Tanin Tanin merupakan penggambaran secara umum untuk golongan polimer fenolik (Cowan, 1999).Tanin bekerja dengan cara mengendapkan protein dan dapat merusak membran sel sehingga pertumbuhan fungi terhambat (Utami , S.C., 2007). 2. Flavonoid Flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang ditemukan di alam (Kristanti, 2008). Kemungkinan aktivitas antifungi dari senyawa flavonoid dikarenakan kemampuannya membentuk ikatan dengan protein terlarut dan dinding sel bakteri, semakin lipofilik suatu flavonoid semakin merusak membran mikroba (Cowan, 1999). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 15 3. Terpenoid Terpenoid adalah kelompok senyawa metabolit sekunder yang terbesar dilihat dari jumlah senyawa maupun variasi kerangka dasar strukturnya. Terpenoid ditemukan berlimpah dalam tanaman tingkat tinggi. Senyawa ini menunjukkan aktivitas antifungi secara in vitro terhadap Microsporum canis, Microsporum gypseum, Tricophyton mentagrophytes, dan Tricophyton rubrum (Cowan, 1999). 4. Saponin Saponin mempunyai efek antifungi yang bagus. Efek antifungi dan antibakteri terganggu dengan adanya gugus monosakarida dan turunannya Saponin dapat berfungsi sebagai detergen. Detergen memiliki struktur yang dapat berikatan dengan molekul hidrofilik dan molekul-molekul organik non polar (lipofilik) sehingga mampu merusak membran sitoplasma dan membunuh bakteri (Cheeke, 2000). 5. Fenol Semakin tinggi fenol teroksidasi semakin kuat menghambat pertumbuhan organisme. Mekanisme antimikroba dari senyawa fenol adalah penghambatan enzim oleh senyawa teroksidasi kemungkinan lewat reaksi dengan gugus sulfihidril atau dengan interaksi yang tidak spesifik oleh protein (Cowan, 1999). 2.6 Nystatin Antifungi yang digunakan adalah Nystatin Gambar: Struktur kimia Nystatin (http://www.chemicalbook.com/CAS%5CGIF%5C1400-61-9.gif) Diakses pada tanggal 25 april 2015. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 16 Nystatin merupakan suatu antifungi polien yang dihasilkan oleh Streptomyces nourosei. Pemerian berupa bubuk berwarna kuning kemerahan dan bersifat higrokopis, berbau khas, sukar larut dalam kloroform dan eter. Mekanisme keja nistati mirip dengan amfoterisin B, Nystatin lebih toksik sehingga tidak digunakan sebagai obat sistemik. Nystatin tidak diserap melalui saluran cerna, kulit ataupun vagina. (Gunawan., dkk, 2007) Aktivitas antifungi Nystatin menghambat pertumbuhan berbagai fungi dan ragi tetapi tidak aktif terhadap bakteri, protozoa dan virus. (Gunawan., dkk, 2007). Mekanisme kerja antifungi Nystatin ke sterol membran fungi, terutama ergosterol. Nystatin mengganggu permeabilitas mengakibatkan membran dan proses transportasi. Hal ini hilangnya kation dan makromolekul dari sel. Resistensi disebabkan oleh penurunan sterol membran atau perubahan strukturnya dari sifatnya. (Katzung, 1995). Nystatin terutama digunakan untuk infeksi candida sp di kulit, selaput lendir dan daerah genitelia eksterna. Selain pada Candida sp obat ini juga aktif terhadap beberapa jenis fungi baik kapan ataupun khamir. (Sukandar., dkk, 2012) 2.7 Uji antimikroba Uji antibiotik dan antimikroba ditujukan untuk mengukur respon pertumbuhan populasi mikroorganisme terhadap agen mikroba. Tujuan dari uji antimikroba adalah diperolehnya suatu sistem pengobatan yang efektif dan efisien. Terdapat berbagai macam metode uji antimikroba yaitu dengan cara metode delusi dan difusi (Pratiwi, 2008). 1. Uji dilusi a. Metode dilusi cair Metode ini mengukur MIC (minimum inhibitory concentration atau kadar hambat minimum KHM) dan MBC (minumum bactericidal concentration atau kadar bunuh minimum/KBM). Cara dilakukan adalah dengan membuat seri pengenceran agen antimikroba pada medium cair yang ditambahkan dengan mikroba uji. Larutan uji agen antimikroba pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan mikroba uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan sebagai KHM tersebut UIN SYARIF HIDAYATULLAH 17 selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan mikroba uji ataupun agen antimikroba dan diinkubasi sesuai dengan mikroba uji. Media cair yang bening setelah di inkubasi ditetapkan sebagai KBM (Pratiwi, 2008). b. Metode dilusi Padat Metode ini serupa dengan metode dilusi cair, namun menggunakan media padat (solid). Keuntungan metode ini adalah satu konsentrasi agen antimikroba yang di uji dapat digunakan untuk menguji beberapa mikroba uji. 2. Uji difusi Metode difusi agar disebut juga tes Kirby & Bauer. Metode ini dibagi menjadi tiga yaitu metode lubang, metode gores silang dan metode cakram kertas. (Pertiwi, 2008) a. Metode Lubang/Perforasi. Fungi uji yang umurnya 18-24 jam disuspensikan ke dalam media agar pada suhu sekitar 45°C. Suspensi fungi dituangkan ke dalam cawan petri steril. Setelah agar memadat, dibuat lubang-lubang dengan diameter 6 mm kemudian dimasukkan larutan zat yang akan diuji aktivitasnya sebanyak 20 μL dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 18-24 jam. Aktivitas antifungi dapat dilihat dari daerah bening yang mengelilingi lubang perforasi (Pertiwi, 2008). b. Metode Gores Silang Zat yang akan diuji diserapkan ke dalam kertas saring dengan cara meneteskan pada kertas saring kosong larutan antifungi sejumlah volume tertentu dengan kadar tertentu. Kertas saring tersebut diletakkan di atas permukaan agar padat, kemudian digores dengan suspensi fungi 90% pada agar melalui kertas saringnya, diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37°C. Aktivitas antifungi dapat dilihat dari daerah bening yang tidak ditumbuhi fungi dekat kertas saring (Pertiwi, 2008). c. Metode Cakram Kertas Zat yang akan diuji diserapkan ke dalam cakram kertas dengan cara meneteskan pada cakram kertas kosong larutan antifungi sejumlah volume UIN SYARIF HIDAYATULLAH 18 tertentu dengan kadar tertentu pula. Cakram kertas diletakkan di atas permukaan agar padat yang telah dituangkan fungi sebelumnya. Cawan petri diinkubasi pada suhu 30°C selama 2 sampai 4 hari. Aktivitas antifungi dapat dilihat dari daerah hambat di sekeliling cakram kertas. (Pratiwi, 2008) 2.8 Ekstrak dan ekstraksi Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut cara yang sesuai, diluar pengaruh cahaya matahari langsung (Tiwari.,dkk, 2011). Parameter yang mempengaruhi kualitas ekstrak adalah bagian dari tumbuhan yang digunakan, pelarut yang digunakan untuk ekstrak dan prosedur ekstraksi. Ekstraksi menggunakan pelarut didasarkan pada kelarutan komponen terhadap komponen lain dalam campuran. Pelarut polar akan melarutkan solut yang polar dan pelarut non polar akan melarutkan solut yang non polar atau disebut dengan “like dissolvelike”. (Tiwari,dkk.,2011) Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif dari bagian tanaman obat hewan dan beberapa jenis ikan termasuk biota laut. Tujuan ekstraksi bahan alam adalah untuk menarik komponen kimia yang terdapat pada bahan alam. Ekstraksi ini didasarkan pada prinsip perpindahan massa komponen zat ke dalam pelarut, dimana perpindahan mulai terjadi pada lapisan antar muka kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut (Ditjen POM, 2000). 2.9 Metode Ekstraksi Beberapa metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut dibagi menjadi dua cara, yaitu cara panas dan cara dingin (Ditjen POM, 2000). Ekstraksi cara dingin dapat dibedakan sebagai berikut: a. Maserasi Maserasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur kamar (Ditjen POM, 2000). Keuntungan ekstraksi dengan cara maserasi adalah pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana, sedangkan kerugiannya yakni cara pengerjaannya lama, membutuhkan pelarut yang banyak dan penyarian kurang sempurna. Dalam maserasi (untuk ekstrak UIN SYARIF HIDAYATULLAH 19 cairan), serbuk halus atau kasar dari tumbuhan obat yang kontak dengan pelarut disimpan dalam wadah tertutup untuk periode tertentu dengan pengadukan yang sering, sampai zat tertentu dapat terlarut. Metode ini cocok digunakan untuk senyawa yang termolabil (Tiwari,dkk., 2011). b. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahap pengembangan bahan, tahap perendaman, tahap perkolasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penampungan ekstrak) secara terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat). Untuk menentukan akhir dari pada perkolasi dapat dilakukan pemeriksaan zat secara kualitatif pada perkolat akhir. Ini adalah prosedur yang paling sering digunakan untuk mengekstrak bahan aktif dalam penyusunan tincture dan ekstrak cairan (Tiwari.,dkk, 2011). Ekstraksi cara panas dapat dibedakan sebagai berikut: a. Sokletasi Sokletasi adalah ekstraksi mengunakan pelarut yang selalu baru, dengan menggunakan alat soklet sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Ditjen POM, 2000). b. Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan menggunakan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Ditjen POM, 2000). c. Infusa Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90C selama 15 menit. Infusa adalah ekstraksi menggunakan pelarut air pada temperatur penangas air dimana bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur yang digunakan (96-980C) selama waktu tertentu (15-20 menit) (Ditjen POM, 2000). Cara ini menghasilkan larutan encer dari komponen yang mudah larut dari simplisia (Tiwari.,dkk, 2011). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 20 d. Dekok Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥30oC) dan temperatur sampai titik didih air (Ditjen POM, 2000). Dekok adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90oC selama 30 menit. Metode ini digunakan untuk ekstraksi konstituen yang larut dalam air dan konstituen yang stabil terhadap panas (Tiwari,dkk.,2011) e. Digesti Digesti adalah maserasi kinetik pada temperatur lebih tinggi dari temperatur suhu kamar, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 4050oC (Ditjen POM,2000). Digesti adalah maserasi dengan pengadukan kontinyu pada temperatur lebih tinggi dari temperatur ruang (umumnya 25-30oC). Ini adalah jenis ekstraksi maserasi di mana suhu sedang digunakan selama proses ekstraksi (Tiwari.,dkk, 2011). 2.10 Pelarut Pemilihan pelarut tergantung pada senyawa yang ditargetkan. Faktorfaktor yang mempengaruhi pemilihan pelarut adalah jumlah senyawa yang akan diekstraksi, laju ekstraksi, keragaman senyawa yang akan diekstraksi, kemudahan dalam penanganan ekstrak untuk perlakuan berikutnya, toksisitas pelarut dalam proses bioassay, potensial bahaya kesehatan dari pelarut (Tiwari.,dkk, 2011). Berbagai pelarut yang digunakan dalam prosedur ekstraksi antara lain: 1. Air Air adalah pelarut universal, biasanya digunakan untuk mengekstraksi produk tumbuhan dengan aktivitas antimikroba. Meskipun pengobatan secara tradisional menggunakan air sebagai pelarut, tetapi ekstrak tumbuhan dari pelarut organik telah ditemukan untuk memberikan aktivitas antimikroba lebih konsisten dibandingkan dengan ekstrak air. Air juga melarutkan senyawa fenolik yang memiliki aktivitas penting sebagai antioksidan (Tiwari.,dkk, 2011). 2. Aseton Aseton melarutkan beberapa komponen senyawa hidrofilik dan lipofilik dari tumbuhan. keuntungan pelarut aseton yaitu dapat bercampur dengan air, mudah menguap dan memiliki toksisitas rendah. Aseton UIN SYARIF HIDAYATULLAH 21 digunakan terutama untuk studi antimikroba dimana banyak senyawa fenolik yang terekstraksi dengan aseton (Tiwari.,dkk, 2011). 3. Alkohol Aktivitas antibakteri yang lebih tinggi dari ekstrak etanol dibandingkan dengan ekstrak air dapat dikaitkan dengan adanya jumlah polifenol yang lebih tinggi pada ekstrak etanol dibandingkan dengan ekstrak air. Konsentrasi yang lebih tinggi dari senyawa flavonoid terdeteksi dengan etanol 70% karena polaritas yang lebih tinggi daripada etanol murni. Etanol lebih mudah untuk menembus membran sel untuk mengekstrak bahan intraseluler dari bahan tumbuhan. Metanol lebih polar dibanding etanol namun karena sifat yang toksik, sehingga tidak cocok digunakan untuk ekstraksi (Tiwari.,dkk, 2011). 4. Kloroform Terpenoid lakton telah diperoleh dengan ekstraksi berturut-turut menggunakan heksan, kloroform dan metanol dengan konsentrasi aktivitas tertinggi terdapat dalam fraksi kloroform. Kadang-kadang tanin dan terpenoid ditemukan dalam fase air, tetapi lebih sering diperoleh dengan pelarut semipolar (Tiwari.,dkk, 2011). 5. Eter Eter umumnya digunakan secara selektif untuk ekstraksi kumarin dan asam lemak (Tiwari.,dkk, 2011). 6. n-Heksan n-Heksan mempunyai karakteristik sangat tidak polar, volatil, mempunyai bau khas yang dapat menyebabkan pingsan. Berat molekul heksana adalah 86,2 gram/mol dengan titik leleh -94,3 sampai -95,3°C. Titik didih heksana pada tekanan 760 mmHg adalah 66 sampai 71°C (Daintith,1994). n-Heksan biasanya digunakan sebagai pelarut untuk ekstraksi minyak nabati. 7. Etil asetat Etil asetat merupakan pelarut dengan karekateristik semipolar. Etil asetat secara selektif akan menarik senyawa yang bersifat semipolar seperti fenol dan terpenoid (Tiwari.,dkk, 2011). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 22 BAB III METODELOGI PENELITIAN 3.1 Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilaksanakan di laboratorium Penelitian 1, laboratorium Kimia Obat, laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia, laboratorium Sediaan steril, Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Pada tanggal 3 Februari 2015- 9 Mei 2015. 3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat 1. Alat yang digunakan untuk ekstraksi dan skrining: Backer glass (pyrex), labu Erlenmeyer (pyrex), timbangan analitik (Sartonius CP224S), kertas, label, penggaris, blender (miyako), gelas ukur (pyrex), piknometer (pyrex), alkohol meter, pipet tetes, spatula, batang pengaduk, kaca arloji, cawan penguap, corong (iwaki), water bath, vacum rotarry evaporator, tabung reaksi (iwaki), botol kaca dan lemari asam. 2. Alat yang digunakan untuk pengujian antifungi: cawan petri (normax), jarum ose, mikro pipet (Epphendrorf), hot plate, batang L, vortex (labnet), laminar air flow (EACI), incubator (Gallenkamp), oven, autoklaf, kapas steril, stirrer (Daiki Kblee 5001), cakram kosong (oxoid), cakram Nystatin (oxoid), lampu UV, refrigator (Sanyo Medicool), mikroskop, cover glass dan object glass pembakar spritus dan botol semprot. 3.2.2 Bahan 1. Bahan yang digunakan untuk penyiapan simplisia, ekstraksi dan skrining fitokimia : Ektrak kulit batang kayu jawa (Lannea caoromandelica), aquadest, etanol 96%, amonia 30%, kloroform, HCl(p), H2SO4(p), pereaksi Dragendroff, Mayer, serbuk Mg, eter, asam asetat anhidrat, FeCl3, vanillin, kertas saring dan alumunium foil. 2. Bahan yang digunakan untuk pengujian antifungi: Ektrak kayu jawa (Lannea caoromandelica), aquadest, DMSO, fungi yang digunakan (Trichophyton rubrum, Candida albicans dan Aspergillus niger) yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Universitas Indonesia, antifungi UIN SYARIF HIDAYATULLAH 23 pembanding Nystatin, larutan NaCl fisiologis, Medium PDA (Pottato Dextrose Agar) (Lampiran 2) 3.3 Desain/ Rancangan Penelitian Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini adalah eksperimental. Perlakuan yang diberikan dalam penelitian ini terhadap fungi, yaitu dengan menggunakan ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica), kontrol positif Nystatin serta kontrol negatif DMSO (Dimetil sulfoksida) 5%. 3.4 Prosedur kerja 3.4.1 Penyiapan Simplisia Sampel kulit batang tanaman kayu jawa (Lannea coromandelica) diperoleh dari daerah Watampone, Kabupaten Bone, Sulawesi Selatan. Sampel kulit batang dikumpulkan pada bulan September 2014. Sebanyak 1 kg kulit batang segar disortasi basah, selanjutnya dicuci dengan air mengalir. Sampel kemudian dirajang dan dikeringkan dengan cara dikering-anginkan. Selanjutnya sampel yang telah kering disortasi kering dan dihaluskan menggunakan blender hingga diperoleh serbuk simplisia kering sebanyak 600 gram 3.4.2 Ekstraksi Sampel Kulit Batang kayu Jawa Serbuk kering batang kayu jawa sebesar 600 gram dekstraksi dengan menggunakan metode maserasi. 1. Sampel ditimbang dan dimaserasi dengan pelarut etanol 96% sebanyak 3 liter selama 2 hari. Selama maserasi sesekali diaduk. Prosedur ini kemudian diulangi 6 kali (remaserasi) hingga filtrat yang didapatkan terlihat jernih. Total pelarut yang digunakan sebnyak 17,5 liter. 2. Selanjutnya setiap hasil filtrat di saring dengan menggunakan kapas dan kertas saring. Lalu dipekatkan dengan vacum rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 42,11 gram 3. Lalu hitung rendemen ekstrak : Rendemen ekstrak = x 100% Rendemen ekstrak yang diperoleh sebesar 7,01%. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 24 3.4.3 Skrining fitokimia Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui metabolit sekunder dari ekstrak kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica). Metabolit sekunder yang di uji secara kualitatif ini diantaranya: alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, senyawa fenol, steroid, dan glikosida 1. Uji Alkaloid Ekstrak sebanyak 5 mg digerus dengan penambahan kloroform hingga larut. Ditambahkan 0,5 ml asam sulfat 1 M kemudian di kocok perlahan. Didiamkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapisan. Lapisan atas yang jernih dibagi dua, 1 bagian ditambahkan 2-3 tetes pereaksi Dragendorff dan bagian berikutnya ditambahkan 2-3 tetes pereaksi Mayer. Endapan merah bata yang terbentuk oleh pereaksi Dragendorf dan endapan putih oleh pereaksi Meyer menunjukan adanya senyawa alkaloid.(Fransworth, 1996). 2. Uji Flavonoid Sebanyak 5 mg ekstrak dilarutkan dalam 5 ml air panas, didihkan selama 5 menit, lalu disaring. Filtrat yang didapat lalu di tambah bubuk Mg secukupnya, 1 ml asam sulfat pekat dan 2 ml etanol. Dikocok kuat dan biarkan terpisah. Terbentuknya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan etanol menunjukan adanya senyawa flavonoid. (Tiwari., dkk, 2011). 3. Uji Saponin Ekstrak dilarutkan dalam 10 ml air panas, lalu biarkan hingga dingin. Setelah dingin lalu dikocok kuat secara vertikal selama 10 detik. Terbentuknya busa yang stabil setinggi 1 cm dan bila ditambahkan HCL 1% 1 tetes busa tetap stabil menunjukan adanya senyawa saponin (Tiwari.,dkk, 2011). 4. Uji Triterpenoid Sebanyak 0,5 gram ekstrak dilarutkan dalam kloroform dan disaring. Kemudian filtrat ditambahkan beberapa tetes asam sulfat dan dikocok. Terbentuknya warna kuning emas mengindikasikan adanya senyawa triterpen (Tiwari.,dkk, 2011). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 25 5. Uji glikosida Sebanyak 0,5 gram ekstrak ditambahkan 1 ml aquades dan ditambahkan larutan NaOH. Terbentuknya warna kuning mengindikasikan adanya senyawa glikosida. (Tiwari.,dkk, 2011). 6. Uji Fenol Sebanyak 0,5 gram ekstrak dilarutkan dengan 2 ml etanol 96% dan ditambahkan 3 tetes larutan FeCl3. Terbentuknya warna hitam kebiruan mengindikasikan adanya senyawa fenol. (Tiwari.,dkk, 2011) 7. Uji tanin Sebanyak 0,5 gram ekstrak dilarutkan dengan 2 ml etanol 70%, dididihkan dalam 10 ml aquades dalam tabung reaksi kemudian disaring. Ditambahkan 3 tetes larutan ferri klorida 0,1% dan diamati terbentuknya warna hijau kecoklatan atau biru kehitaman menunjukkan adanya tannin. (Tiwari.,dkk, 2011) 3.4.4 Uji Parameter Ekstrak Parameter Spesifik 1. Identitas Ekstrak dideskripsikan dengan tata nama yang meliputi nama ekstrak, nama latin tumbuhan, bagian tumbuhan yang digunakan dan nama Indonesia tumbuhan (Depkes RI, 2000) 2. Organoleptik Ekstrak dideskripsikan menggunakan panca indera untuk mengetahui bentuk, warna, bau, dan rasa (Depkes RI, 2000). Parameter Nonspesifik 1. Residu Pelarut Etanol Sebanyak 800 mg ekstrak etanol 96% dilarutkan dalam aquades hingga 10 ml dan di destilasi pada suhu 78,5°C hingga diperoleh destilat sebanyak 2 ml. Destilat ditambahkan aquades hingga 10 ml. Selanjutnya bobot jenis cairan ditetapkan menggunakan piknometer. Persentase residu pelarut etanol dalam ekstrak dihitung menggunakan tabel bobot jenis dan kadar etanol pada Farmakope Indonesia edisi III (Depkes RI, 2000). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 26 2. Kadar Air Ekstrak ditimbang sebanyak 1 gram, dimasukan ke dalam cawan penguap yang sebelumnya telah dipanaskan dan ditara sampai bobot tetap. Dipanaskan dalam oven pada suhu 105oC selama 5 jam dan ditimbang. Sebelum dan setiap pemanasan dibiarkan dalam deksikator hingga suhu kamar. Lanjutkan pemanasan dan timbang hingga bobot tetap (Depkes RI, 2000). 3. Kadar Abu Total Penetapan kadar abu total dilakukan dengan cara sebanyak 2 gram ekstrak etanol 96% ditimbang ke dalam krus yang telah ditara dan dipijarkan perlahan. Suhu dinaikkan secara bertahap hingga 600±25°C. Didinginkan dalam desikator dan ditimbang berat abu. Kadar abu dihitung dalam persen terhadap berat sampel awal (Depkes RI, 2000). 3.4.5 Sterilisasi alat Semua alat yang akan digunakan untuk uji mikrobiologi diperlukan harus dalam kondisi steril agar tidak terkontaminasi dengan mikroba lain. Sehingga semua alat yang akan digunakan harus disterilkan terlebih dahulu dengan cara sterilisasi yang sesuai dengan masing-masing alat dan bahan yang akan digunakan. Untuk alat gelas yang tahan panas tinggi dilakukan sterilisasi kering dengan oven pada suhu 160oC selama 2 jam sebelumnya dibungkus dengan aluminium foil. Untuk medium dan aquadest disterilisasi dengan cara sterilisasi basah menggunakan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit. Untuk larutan uji disterilkan dengan cara melakukan pengerjaann di dalam laminar air flow yang sebelumnya telah disterilisasi dengan desinfektan (alkohol 70%) dan lampu UV yang dinyalakan 15 menit sebelum digunakan. (Anonim, 1995) 3.4.6 Pembuatan Kontrol Negatif, Kontrol Positif dan Larutan Ekstrak Uji Kontrol Negatif DMSO 1. DMSO 100% yang telah disiapkan sebagai larutan induk diencerkan menjadi DMSO 5% dengan menggunakan aquadest steril. 2. 2,5 ml dari DMSO 100% ditambahkan menggunakan akuades hingga volume 50 ml. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 27 3. Didapatkan DMSO dengan konsentrasi 5%. Keterangan: V1 N1 = V2 N2 DMSO 100 % x . V1(ml) = DMSO 5%. 50 ml V1 = V1 = 2,5 ml Kontrol Positif Nystatin Keterangan: Untuk kontrol postif, telah disediakan dalam bentuk disk cakram yang didalamnya telah berisi nystatin sebanyak 100 IU (Internasional Unit) Larutan Ekstrak Uji 1. Ekstrak ditimbang sebnyak 2,5 gram. 2. Dilarutkan kedalam 50 ml DMSO 5%. Hingga didapatkan larutan ekstrak induk 5000 ppm. 3. Dibuat seri pengenceran ekstrak uji dari larutan induk dengan konsentrasi 1000, 750, 500, 250, 125, dan 62,5 ppm. Keterangan: Pengenceran dilakukan dengan menggunakan cara V1 N1 = V2 N2 (V1= Volume larutan 1, N1= Konsentrasi larutan 1, V2= Volume larutan 2, N2= Konsentrasi larutan 2) 3.4.7 Pembuatan Medium PDA (Potato Dectrose Agar) 1. Sebanyak 20 gram Potato dectrose agar (PDA) dilarutkan dalam erlenmeyer dengan akuades 500 ml. Dipanaskan di atas hot plate sambil diaduk hingga larutan menjadi homogen. 2. Medium yang telah homogen disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC, tekanan 2 atm selama 15 menit. 3. Medium dalam erlenmayer disimpan di dalam refrigerator sebagai stok medium. 3.4.8 Peremajaan fungi 1. Agar miring PDA disiapkan pada masing-masing tabung reaksi. 2. Diambil fungi standar dengan menggunakan ose yang telah dipijarkan dengan api dengan cara dikerik. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 28 3. Lalu fungi yang telah diambil dengan ose tersebut ditanam dengan cara menggores secara zig-zag pada permukaan media. 4. Fungi dinkubasi pada suhu 35OC selama 2-3 hari untuk Candida albicans dan selama 5-7 hari untuk Aspergillus niger dan Trichophyton rubrum. 5. Selama pengerjaan dilakukan pada laminar air flow dengan kondisi aseptis. 3.4.9 Identifikasi Fungi 1. Fungi uji diambil secukupnya dengan ose dengan cara di kerik. 2. Diletakan pada permukaan preparat kaca objek steril, diratakan pada permukaan preparat tersebut. Dialiri dengan NaCl 0,9% steril secukupnya tunggu 1 menit. 3. Difiksasi dengan api bunsen. 4. Ditetesi Metylene blue lalu dialiri dengan aquades dan fiksasi kembali 5. Diamati bentuk struktur morfologis fungi dengan Mikroskop. 3.4.10 Pembuatan Suspensi Fungi Suspensi Candida albicans Fungi uji yang telah diremajakan pada agar miring dibuat suspensi dengan menggunakan NaCl fisiologis 0,9% steril 1. Koloni fungi diambil dari agar miring menggunakan jarum ose kemudian dimasukan kedalam tabung raksi yang telah berisi NaCl fisiologis steril 2. Kemudian divorteks sampai diperoleh kekeruhan sama dengan standar Mc Farland 3 yaitu dinyatakan sama dengan 109 CFU/ml. (Aljufri, 2010) 3. Dari suspensi induk Candida albicans yang kekeruhannya dinyatakan 109 CFU/ml lalu di encerkan hingga konsentrasi konsentrasi 106 CFU/ml untuk pengujian aktivitas antifungi. Suspensi Trichophyton rubrun dan Aspergillus niger 1. Kultur yang telah diremajakan pada agar miring ditambahkan NaCl steril 5 ml lalu di kerik dengan ose hingga keruh, lalu dikocok hingga homogen. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 29 2. Dilakukan pengenceran dengan cara 1 ml suspensi dimasukan kedalam 9 ml NaCl steril pada tabung reaksi yang berbeda, lalu vortex hingga homogen sehingga didapatkan konsentrasi suspensi dengan dengan konsentrasi 10-1. 3. Suspensi induk diencerkan hingga mencapai konsentrasi 10-5. 3.4.11 Penentuan Diameter Zona Hambat Penentuan Diameter Zona Hambat dilakukan dengan cara metode difusi agar. 1. Ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) yang telah disiapkan, dibuat dalam beberapa konsentrasi (1000, 500, 250, 125, dan 62,5ppm) serta kontrol positif dan kontrol negatif. 2. Suspensi fungi yang telah dibuat diambil sebanyak 100 µL dengan menggunakan mikropipet lalu disebar merata pada permukaan cawan petri yang telah dituang media sebelumnya lalu disebar dengan menggunakan spread glass sehingga suspensi fungi tersebar merata. 3. Disiapkan kertas cakram untuk menguji aktivitas antifungi, ekstrak yang telah diencerkan dengan masing-masing konsentrasi di teteskan pada kertas cakram tersebut sebanyak 20 µL, kontrol negatif DMSO 5% sebanyak 20 µL dan control positif Nystatin dengan konsentrasi 100 IU. 4. Dalam cawan petri yang telah disiapkan ditanamkan 6 buah cakram. 5. Setelah ditanam selanjutnya diinkubasikan pada suhu 37oC selama 2-3 hari untuk fungi Candida albicans dan 5-7 hari pada suhu 28 oC untuk Aspergillus niger dan Trichophyton rubrum . 6. Setelah diinkubasi hitung diameter penghambatan/zona bening yang terbentuk dengan menggunakan jangka sorong. (Kumalasari, 2012) UIN SYARIF HIDAYATULLAH 30 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Pemilihan tanaman Pemilihan tanaman kulit batang Kayu Jawa (Lannea coramndelica) berdasarkan khasiat dan kepercayaan masyarakat Sulawesi Selatan khususnya daerah Watampone untuk mengobati berbagai macam penyakit seperti diare, nyeri perut, gatal pada kulit yang diakibatkan oleh infeksi mikroba dan penyakit lainnya. 4.2 Determinasi tanaman Determinasi tanaman dilakukan untuk mengetahui identitas tanaman yang digunakan berdasarkan taksonominya. Determinasi pada tanaman kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) dilakukan oleh tim peneliti, Pusat Penelitian Biologi LIPI (Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia) Bogor. Hasil Menununjukan bahwa tanaman yang digunakan sesuai dan merupakan Lannea coromandelica (Houtt) Merr. (Lampiran 3) 4.3 Penyiapan tanaman Tahap awal sebelum dilakukannya berbagai uji terhadap tanaman kulit batang Kayu Jawa, tanaman tersebut dikumpulkan terlebih dahulu. Proses pengumpulan seperti bagian tanaman yang akan digunakan, umur tanaman, waktu panen dan lingkungan tempat tumbuh tanaman sangat berpengaruh terhadap kadar senyawa aktif yang akan diperoleh. Setelah dikumpulkan selanjutnya dilakukan proses sortasi basah. Tujuannya untuk membersihkan kotoran-kotoran yang masih menempel pada sampel seperti tanah, kerikil, rumput serangga, serta pengotor lainnya yang harus dibuang. Waktu yang digunakan untuk pencucian tidak boleh lama, karena proses pencucian yang lama dapat melarutkan senyawa-senyawa aktif pada tanaman tersebut. Menurut Frazier (1998), pencucian tanaman satu kali dapat menghilangkan 25% dari jumlah mikroba awal, jika dilakukan pencucian sebanyak tiga kali, jumlah mikroba yang tertinggal hanya 42% dari jumlah mikroba awal. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 31 Sampel yang telah dicuci dan dibersihkan selanjutnya dirajang tujuannya untuk mempermudah proses pengeringan, pengepakan dan penggilingan. Setelah dirajang, proses selanjutnya adalah tahap pengeringan, proses pengeringan sampel dilakukan dengan cara dikering-anginkan. Tujuan dari pengeringan adalah untuk mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak, sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama. Pengeringan dapat mengurangi jumlah kadar air yang terdapat pada simplisia sehingga dapat mencegah dari reaksi enzimatik yang dapat menurunkan kualitas simplisia. Proses pengeringan dengan cara kering angin dipilih agar kadungan senyawa simplisia tidak rusak jika terkena sinar matahari langsung terutama dikarenakan sinar UV. Setelah pengeringan dilanjutkan proses sortasi kering yang bertujuan memisahkan benda asing seperti bagian-bagian tanaman yang tidak diinginkan dan pengotor-pengotor lainnya yang masih terdapat pada tanaman. Setelah sortasi kering sampel selanjutnya masuk ketahap penghalusan, penghasulan dilakukan dengan menggunakan blender hingga dihasilkan serbuk simplisia kulit batang kayu jawa. Tujuan dari penghalusan yaitu untuk memperluas permuakaan sampel sehingga pada proses ekstraksi pelarut dapat berpenetrasi secara maksimal dan melarutkan senyawa-senyawa yang terkandung pada sampel. Hasil yang diperoleh selama penyiapan simplisia didapatkan serbuk simplisisa sebesar 600 gram. 4.4 Ekstraksi Setelah proses penyiapan simplisia dilanjutkan dengan proses ekstrakasi simplisia kulit batang kayu jawa. Simplisia yang sudah dalam bentuk serbuk sebanyak 600 gram diekstraksi dengan metode maserasi dengan menggunakan etanol 96%. Pemilihan metode ekstraksi dengan cara maserasi dikarenakan metode ini memiliki keuntungan pada prosedur dan peralatan yang digunakan lebih sedehana (Syamsuni, 2006). Menurut (Tiwari.,dkk, 2011), Etanol lebih banyak menarik senyawa seperti flavonoid, fenol, alkaloid dan tanin sedangkan saponin lebih banyak terlarut dalam air, senyawa-senyawa tersebut merupakan senyawa yang bermanfaat sebagai antifungi. Penggunaan etanol 96% pada penelitian ini UIN SYARIF HIDAYATULLAH 32 dikarenakan etanol 96% memiliki kadar air yang lebih sedikit dan dapat mengurangi pertumbuhan mikroba didalam ekstrak, karena air merupakan salah satu media yang dapat mempercepat pertumbuhan mikroba asing. Proses maserasi dilakukan selama 2 hari dengan cara sesekali diaduk. Hasil maserasi kemudia diasaring hingga didapatkan filtrat proses ini dilakukan kembali hingga 6 kali remaserasi. Tujuan dari remaserasi kembali adalah agar senyawa yang terdapat pada simplisia dapat secara maksimal terlarut dalam pelarut yang digunakan. Filtrat maserasi dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator pada suhu 45-50°C hingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 42,111 gram. serta perolehan hasil rendemen ekstrak etanol 96% adalah 7,01 %. 4.5 Parameter Ekstrak Hasil penetapan parameter ekstrak dapat dilihat pada tabel berikut: Tabel 3: Hasil penetapan ekstrak parameter spesifik dan non spesifik ekstrak etanol 96% Kulit batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) Parameter Karakteristik Hasil A. Identitas Spesifik 1. Nama Latin 1. Lannea coromandelica 2. Bagian 2. Kulit batang Tumbuhan 3. Kayu Jawa 3. Nama Indonesia B. Organoleptik 1. Bentuk 1. Kental 2. Warna 2. Coklat tua 3. Bau 3. Khas 4. Rasa 4. Pahit A. Residu Pelarut Non Spesifik 0% B. Kadar air 5,8 % C. Kadar abu 14 % Keterangan: Hasil penentuan parameter ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 33 Penetapan parameter ekstrak dilakukan dengan tujuan agar mengetahui mutu dari ekstrak yang akan digunakan. Penetapan parameter dilakukan meliputi penepatan parameter spesifik dan parameter nonspesifik. Berdasarkan identitas tanaman yang digunakan merupakan tanaman dengan nama latin Lannea coromandelica dikenal di Indonesia sebagai tanaman kayu jawa. Karakteristik organoleptik melitputi bentuk, warna, rasa dan bau dilakukan dengan menggunakan panca indra. Penentuan parameter non spesifik didapatkan hasil: bobot jenis rata-rata yang diperoleh adalah 1,026. Nilai bobot jenis tersebut dalam tabel bobot jenis dan kadar etanol pada Farmakope Indonesia edisi III menunjukkan bahwa kandungan etanol yang dimiliki sama dengan nol. Penentuan kadar air, didapatkan hasil sebanyak 5,8%. Menurut Badan POM (2002) kadar air yang aman bagi suatu simplisia adalah 10-12. Kadar air yang tinggi dapat mempengaruhi stabilitas ekstrak dan bentuk sediaan selanjutnya serta juga beresiko rentan terhadap pertumbuhan fungi dan bakteri (Saifudin Rahayu., & Teruna, 2011). Penentuan kadar abu dilakukan bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak. Kadar abu ekstrak etanol 96% kulit batang Lannea coromandelica sebesar 14,5087%. Hal ini menunjukkan bahwa kadar abu ekstrak tersebut cukup tinggi. Tingginya kadar abu ini dapat dikarenakan tingginya kandungan mineral internal di dalam kulit batang Lannea coromandelica sendiri ataupun terkena cemaran lain ketika masa penyimpanan dari luar. 4.6 Skrining Fitokimia Skrining fitokimia terhadap kandungan senyawa kimia metabolit sekunder merupakan langkah awal yang penting dalam penelitian mengenai tumbuhan obat atau dalam hal pencarian senyawa aktif baru yang berasal dari bahan alam yang dapat menjadi prekursor bagi sintesis obat-obat baru. Metode uji fitokimia yang banyak digunakan adalah metode reaksi warna dan pengendapan yang dapat dilakukan di lapangan atau di laboratorium (Depkes RI, 2000). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 34 Tabel 4: Hasil Skrining fitokimia ekstrak etanol 96% kulit batang Kayu jawa (Lannea coromandelica) Penguji senyawa Hasil Alkaloid - Flavonoid + Saponin + Glikosida + Triterpenoid - Fenol + Tanin + Keterangan: Hasil penapisan fitokimia yang dilakukan pada ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica), mengandung flavonoid, saponin, glikosida, fenol dan tanin. 4.7 Uji aktivitas Uji aktivitas antifungi dilakukan terhadap tiga fungi uji yaitu, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus niger ATCC 16404., dan Trichophyton rubrum ATCC 52020 (Lampiran 9). Candida albicans, Aspergillus niger, dan Trichophiton rubrum merupakan sebagian fungi yang sering menginfeksi manusia. Seperti Aspergillus niger yang sering mengakibatkan infeksi pada saluran pernafasan, Candida albicans yang mengakibatkan penyakit kandidiasis/keputihan, sariawan serta penyakit lainnya dan Trichophyton rubrum yang sering mengakibatkan gatal pada kulit, kurap, penyakit kaki atlet dan penyakit laiinya. Uji aktivitas antifungi dilakukan dengan metode difusi cakram, metode difusi dipilih dikarenakan metode ini memiliki cara yang sederhana dan biaya yang lebih terjangkau dibandingkan dengan metode lain. 4.7.1 Sterilisasi Tujuan untuk sterilisasi alat dan bahan agar tidak ada kontaminan oleh mikroba asing saat dilakukannya uji aktivitas antifungi. Sterilisasi menggunakan alat oven dan autoklaf, alat-alat gelas yang tidak memiliki presisi disterilisasi dengan menggunakan oven pada suhu 160 oC selama 2 jam. Alat-alat gelas yang UIN SYARIF HIDAYATULLAH 35 memiliki presisi, kapas, serta media disterilisasi dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121oC dan tekanan 2 atm (Anonim, 1995). Teknik pengerjaan dengan fungi harus dilakukan dengan teknik aseptis agar terhindar dari kontaminan mikroba asing. Teknik aseptis meliputi: penggunaan, masker, sarung tangan, dan baju pelindung sebelum bekerja. Tempat pengerjaan saat uji aktivitas dilakukan di Laminar Air Flow (LAF), sebelum bekerja di LAF daerah sekitar LAF harus disterilkan terlebih dahulu, proses sterilisasi dilakukan dengan cara daerah sekitar di semprot dengan Alkohol 70% dan dibersihkan dengan lap bersih, penyemprotan dengan alkohol 70% bertujuan untuk menghilangkan atau membunuh mikroba-mikrba asing yang mungkin masih terdapat disekitar LAF setelah di bersihkan secara merata, sinari daerah sekitar LAF dengan sinar UV selama 30 menit, tujuan dari penyinaran ini agar tidak adalagi mikroba-mikroba asing yang mungkin tertinggal di sekitar LAF, hingga didapatkan kondisi yang steril. 4.7.2 Peremajaan Fungi Masing-masing fungi uji diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Universitas Indonesia. Tahap selanjutnya sebelum pengujian aktivitas antifungi adalah peremajaan fungi, peremajaan dilakukan dengan menggunakan media Petato Dextrose Agar (PDA). Apergillus niger dan Trichophyton rubrum diremajakan dalam waktu 5-7 hari dan fungi Candida albicans diremajakan dalam waktu 2-3 hari. Perbedaan dalam waktu peremajaan ini dikarenakan Aspergillus niger dan Trichophyton rubrum termasuk dalam golongan kapang, sedangkan Candida albicans termasuk dalam golongan khamir. Khamir dan kapang memiliki perbedaan pada struktur selnya, kapang tersusun atas banyak sel sedangkan khamir hanya tersusun atas satu sel saja, oleh karena itu pertumbuhan khamir lebih cepat disbanding kapang. (Pertiwi, 2008) Peremajaan dilakukan pada agar miring dalam tabung reaksi dengan cara metode gores silang. Setelah diremajakan fungi di simpan dalam inkubator pada suhu yang sesuai, yaitu pada suhu 37 oC untuk Candida albican dan 28 oC untuk Aspergillus niger dan Trichophyton. Peremajaan ini bertujuan untuk menyelamatkan isolat mikroba baik fungi ataupun bakteri dari kontaminasi oleh bakteri lain dan memberikan penyegaran UIN SYARIF HIDAYATULLAH 36 pada nutrien yang dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri hingga bakteri atau fungi tetap berada dalam fase eksponensial. (Pratiwi, 2008) Hasil dari peremajaan diuji dengan metode pewarnaan, untuk memastikan bahwa fungi uji yang di remajakan tidak terkena kontaminasi oleh mikrobamikroba lainnya. Hasil didapatkan bahwa fungi yang tumbuh dari hasil peremajaan sesuai dengan referensi yang ada, dilihat dari miselium yang ditunjukan serta bentuk hifa yang terdapat pada fungi uji tersebut. 4.7.3 Penyiapan Ekstrak Uji Ekstrak kental yang telah di peroleh dibuat larutan induk dengan cara melarutkan ekstrak menggunakan Dimetil sulfoksida (DMSO). Penggunaan DMSO, karena DMSO merupakan pelarut yang dapat melarutkan senyawa polar dan nonpolar yang mempunyai range luas seperti halnya air dan tidak mempunyai aktivitas biologi. (Harliana, 2006) 4.7.4 Pembuatan Suspensi Fungi Hasil peremajaan setiap fungi uji dibuatkan suspensi masing-masing untuk dilakukan pengujian aktivitas antifungi dari ekstrak kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica). Suspensi dibuat dengan menggunakan NaCl 0,9%. Pada pembuatan suspensi Candida albicans, beberapa cuplikan fungi hasil dari peremajaan diambil dengan menggunakan ose lalu dimasukan kedalam tabung reaksi yang telah berisi NaCl 0,9% steril. Setelah itu divortex hingga mendapati kekeruhan yang sama dengan Standar Mc. Farland 3 (Standar Mc. Farland dinyatakan dengan konsentrasi fungi 109 CFU/ml). Dari suspensi induk Candida albicans yang kekeruhannya dinyatakan 109 CFU/ml lalu diencerkan hingga konsentrasi konsentrasi 106 CFU/ml untuk pengujian aktivitas antifungi. Konsentrasi 106 dinyatakan sebagai konsentrasi yang dapat menyebabkan kondisi patogen bagi manusia. Suspensi fungi Aspergillus niger dan Trichophyton rubrum dibuat dengan cara menuangkan 5 ml NaCl 0,9% kedalam tabung hasil peremajaan masingmasing fungi. Setelah dituang, lalu fungi dicampurkan dengan menggunakan ose, setelah tercampur lalu Suspensi fungi diambil sebanyak 1 ml dan di tambahkan kedalam tabung reaksi lain yang telah berisi NaCl 0,9% sebanyak 9 ml, hasil UIN SYARIF HIDAYATULLAH 37 suspensi ini dinyatakan konsentrasi 10-1, lalu suspensi diencerkan hingga mencapai konsentrasi 10-5. 4.7.5. Penentuan Diameter Zona Hambat Tabel 4: Hasil penentuan diameter zona hambat dari ekstrak kayu jawa (Lannea coromandelica) dengan berbagai fungi uji Ekstrak Diameter zona hambat (mm) rata-rata Lannea Candida Aspergillus Trichophyton coromandelica albicans niger rubrum 1.000 9.55 - 13,37 750 7,83 - 8,46 500 6,78 - 7,3 250 - - 6.67 125 - - - 62,5 - - - Kontrol (-) - - - 27,02 27,11 21,15 (ppm) DMSO 5% Kontrol (+) Nystatin Keterangan: Ekstrak dapat menghambat Candida albicans hingga konsentrasi 500 ppm, Trichophyton rubrum hingga konsentrasi 250 ppm, tetapi tidak dapat menghambat pertumbuhan Aspergillus niger. Hasil yang didapatkan dari penentuan zona hambat ekstak kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) didapatkan hasil bahwa ekstrak aktif untuk menghambat pertumbuhan Candida albicans pada konsentrasi 1000, 750 dan 500 ppm, untuk Trychophyton rubrum ekstrak dapat menghambat pertumbuhannya pada semua seri konsentrasi yaitu 1000, 750, 500 dan 250 ppm. Sedangkan untuk Aspergillus niger esktrak tidak memiliki daya hambat untuk semua konsentrasi uji. Kontrol positif yang digunakan yaitu Nystatin dengan kosnentrasi 100 IU dalam bentuk cakram disk, hasil ditunjukan dengan adanya zona bening yang UIN SYARIF HIDAYATULLAH 38 ditimbulkan disekeliling cakram Nystatin (Lampiran 13). Pemilihan Nystatin sebagai kontrol positif dikarenakan Nystatin dapat menghambat pertumbuhan berbagai fungi yang dapat menyebabkan penyakit terutama di kulit serta kasus resistensi Nystatin masih jarang ditemukan. Nystatin juga spesifik untuk menghabat pertumbuhan Candida albicans, serta juga dapat menghabat pertumbuhan berbagai jenis kapang seperti Trychophyton rubrum dan Aspergillus niger. (Bauman, 2011). Mekanisme penghambatan pertumbuhan fungi oleh Nystatin dengan cara polien terikat dengan ergosterol pada membran fungi, menyebabkan terbentuknya saluran ion, terbentuknya saluran ion ini akan mengakibatkan kebocoran pada membran fungi sehingga terjadi kematian sel fungi. Selain itu kerusakan membran oleh polien juga melalui proses oksidatif yang berperan dalam mempercepat proses kematian fungi. (Jhonson., dkk, 2011). Kontrol negatif yang digunakan adalah DMSO 5% hasil yang ditunjukan tidak adanya zona bening yang terbentuk pada uji diameter zona hambat (Lampiran). Hal ini menandakan bahwa DMSO 5% tidak berpengaruh terhadap penghambatan pertumbuhan fungi. Hasil ini dapat ditunjang oleh penelitian sebelumnya yang menyatakan DMSO tidak memiliki aktivitas antibakteri pada konsentrasi dibawah 15%. (Kumar., dkk., 2008) Tidak terdapatnya zona hambat pada Aspergillus niger kemungkinan dikarenakan terjadinya mekanisme pertahanan oleh Aspergillus niger terhadap senywa-senyawa yang terkandung pada ekstrak. Berbagai hal yang dapat menyebabkan terjadinya hal tersebut antara lain: Mikroorganisme menghasilkan enzim yang dapat merusak senyawa yang berfungsi sebagai antimikroba, mikroorganisme merubah permeabilitas terhadap zat yang berfungsi sebagai antimikroba, mikroorganisme dapat mengembangkan suatu perubahan struktur sasaran bagi zat yang berfungsi sebagai antimikroba, mikroorganisme bisa mengembangkan perubahan metabolism yang dapat mengganggu zat yang dapat berfungsi sebagai antimikroba, dan mikroorganisme juga bisa mengembangkan suatu enzim yang dapat merubah fungsi dari zat yang berkhasiat sebagai antimikroba. (Katzung, 1995). UIN SYARIF HIDAYATULLAH 39 Daya hambat yang ditimbulkan dari ekstrak etanol 96% kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) dihasilkan dari kandungan-kandungan senyawa yang terdapat didalam ekstrak tersebut. Berdasarkan skrining fitokimia yang telah dilakukan, ekstak kulit batang kayu jawa ini memiliki senyawa-senyawa seperti flavonoid, tanin, fenol, saponin dan glikosida. 1. Tanin bekerja dengan cara mengendapkan protein dan dapat merusak membran sel sehingga pertumbuhan fungi terhambat (Utami , S.C., 2007). 2. Senyawa flavonoid memiliki aktivitas antifungi dengan kemampuannya membentuk ikatan dengan protein dan dinding sel bakteri, semakin lipofilik suatu flavonoid semakin merusak membran sel fungi (Cowan, 1999). 3. Senyawa saponin memiliki aktivitas antifungi dengan adanya gugus monosakarida dan turunannya. Saponin dapat berfungsi sebagai detergen. Detergen memiliki struktur yang dapat berikatan dengan molekul hidrofilik dan molekul - molekul organik non polar (lipofilik) sehingga mampu merusak membran sitoplasma dan membunuh fungi(Cheeke, 2000). 4. Senyawa fenol memiliki aktivitas antifungi dengan cara penghambatan enzim oleh senyawa teroksidasi serta berikatan dengan gugus sulfihidril atau dengan interaksi yang tidak spesifik oleh protein (Cowan, 1999). 5. Senyawa seperti glikosida dapat menghambat pertumbuhan fungi, tetapi mekanisme penghambatan dari senyawa ini belum dapat ditentutakan contoh senyawa glikosida yang dapat menghambat pertumbuhan fungi yaitu glikosida antrkuinon. Hasil skrining fitokimia tersebut belum dapat menjelaskan secara pasti senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan dari fungi tersebut karena belum dilakukannya isolasi senyawa yang bermanfaat sebagai antifungi terhadap ekstrak kulit batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica), tetapi dari hasil skrining fitokimia secara umum telah didapatkan gambaran senyawa-senyawa yang kemungkinan berpotensi sebagai antifungi seperti flavonoid, tannin, saponin, fenol dan glikosida jantung. Berdasarkan diameter yang dihasilkan pada zona hambat, kekuatan antifungi digolongkan menjadi 4. Bila diameter hambat 6 mm atau kurang maka UIN SYARIF HIDAYATULLAH 40 aktivitas penghambatnya dikategorikan lemah, diameter daya hambat 6-10 mm dikategorikan sedang, diameter daya hambat 10-19 mm dikategorikan kuat dan diameter daya hambat 20 mm atau lebih dikategorikan sangat kuat. (Andayani, 2014) Menurut (Apristiani., dan Astuti, 2005) untuk ekstrak aktif pada konsentrasi >1000μg/ml ekstrak dianggap tidak efektif dikembangkan sebagai antimikroba baru dibanding obat-obat antibiotik yang sudah ada sekarang. Ekstrak dikatakan berpotensi jika pada kadar pemberian ≤1000 μg/ml mampu menghambat pertumbuhan antimikroba. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 41 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan Dari hasil penelitian yang telah dilakukan didapatkan kesimpulan sebagai berikut: 1. Ekstrak etanol 96% kulit batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) aktif sebagai antifungi terhadap Candida albicans dan Trichophyton rubrum. 2. Ekstrak etanol 96% kulit batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) pada penelitian ini tidak aktif terhadap Aspergillus niger. 3. Zona hambat yang dihasilkan ekstrak kulit batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) untuk Candida albicans terbesar pada konsentrasi 1000 ppm dan terkecil dikonsentrasi 500 ppm. 4. Zona hambat yang dihasilkan ekstrak kulit batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) untuk Trichophyton rubrum terbesar pada konsentrasi 1000 ppm dan terkecil dikonsentrasi 250 ppm. 5.2 Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mencari senyawa aktif dari ekstrak kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) yang dapat digunakan sebagai antifungi/antimikroba. 2. Perlu dilakuakan penelitian lebih lanjut terhadap kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica) tidak hanya sebagai sebagai antifungi, tetapi juga sebagai antimikroba lainnya. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 42 DAFTAR PUSTAKA Andayani Anik, dkk. 2014. Anti Candida Minyak Atsiri Lengkuas Putih (Alpinia galanga) Terhadap Candida albicans Penyebab Candidiasis Secara Invitro. ISSN: 2339-190. Vol.2, No.2, hal 1 – 9, September 2014 Anonim. 1985. Sedian Galenik. Departemen Kesehatan RI: Jakarta. Apristiani Dwi, Puji Astuti. 2005. Isolation of antibacterial compounds from chloroform extract of neem (Azadirachta indica A. Juss.) leaves guided by bioautography. Universitas Gajah Mada: Yogyakarta Atikah, Nur. 2013. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Herba Kemangi (Ocimum americanum L). Terhadap Staphylococus aureus dan Candida albicans. Skripsi. Jurusan Farmasi.Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah: Jakarta Avinsah, Kumar Reddy. 2011. Lannea corromandelica : The Reseacher’s Tree. Jurnal Of Pharmacy. IP: 2011.4(3).577.579 Badan POM RI. 2010. Acuan Sediaan Herbal. Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. Direktorat Obat Asli Indonesia Deputi Bidang Pengawasan Obat Tradisional, Kosmetik dan Produk Komplemen: Jakarta. Baeza LC, Baila’o AM., Borges CL., Pereira M., Soares CM., Mendes Giannini MJ (2007) cDNA representational difference analysis used in the identification of genes expressed by Trichophyton rubrum during contact with keratin. Microbes Infect 9:1415–1421 Bauman, W Robert. 2001. Microbiology With Diseases By Taxonomy 3th edition. Pearson : San Fransisco Candra, Retno Dewi. 2009. Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak Buah Pare Belut (Trichosanthes anguina L.). Skripsi. Jurusan Kimia. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Sebelas Maret. Surakarta Cheeke. 2000. Natural Toxicants in Feed and Poisonous Plants. Avi Publishing Company.Inc: Westport Connecticut. Cowan, 1999, Plant Product as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology Reviews, October, p. 564-582, Vol. 12, No. 4 Depkes RI. 1995. Materia Medika Indonesia Jilid VI. Jakarta Depkes RI. 1979. Farmakope Indonesia Jilid III. Jakarta UIN SYARIF HIDAYATULLAH 43 Depkes RI. 1995. Farmakope Indonesia Jilid IV. Jakarta. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. Djauhariya, E., dan Hernani. 2004. Gulma Berkhasiat Obat. Penebar Swadaya, Jakarta. hlm. 3. Farnsworth, Norman R. 1996. Biological and Phytochemical Screening of Plants. J.Pharm. Sci., 55:3, 225-157 Frazier, W.B., and Dennis, C.Westhoff. 1998. Food Microbiology. Third Edition.McGraw-Hill, Inc: New York. Hal: 539. Gandahusada, SS, Pribadi., Ilahude HD. 2004. Parasitologi Kedokteran Edisi III. Balai penerbit FKUI: Jakarta. Gandjar Indrawati, dkk. 2006. Mikologi dasar dan terapan. 2006. Yayasan Obor Indonesia: Jakarta. Gunawan, Sulistia Gan., dkk. 2011. Farmakologi dan Terapi. Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia: Jakarta. Hal: 581 Harborne, J.B. 1987.Metode Fitokimia: Penuntun Cara modern Menganalisis Tumbuhan. Penerjemah: Kosasih P, Soediro Iwang. Bandung. Penerbit ITB. Hal: 6-17. Holetz, F.B., G. L. Pessini, N.R. Sanchez, D. Aparicio, G. Cortez, C.V. Nakamura, & B.P.D. Filho, 2002, Screening of Some Plants Used in The Brazillian Folk Medicine for The Treatment of Infectious I, Journal of Bioline International Howarth, W.H, et al. 1982. Martindale The extra Pharmacopoeia 28th edition. The Pharmaceutical Press: London http://indiabiodiversity.org/species/show/230190 http://www.chemicalbook.com/CAS%5CGIF%5C1400-61-9.gif http://commons.hortipedia.com/images/9/92/Lanneacoromandelica Gandjar, Indrawati., Wellyzar, Sjamsuridzal., dan Oetari, Ariyanti. 2006. Mikologi Dasar dan Terapan. Yayasan Obor Indonesia: Jakarta UIN SYARIF HIDAYATULLAH 44 Jawetz., G. Melnick, LL., Adelberg, E.A., 1986, Mikrobiologi untuk Profesi Kesehatan, Edisi XVI, Diterjemahkan oleh dr. Bonang, G., EGC Press: Jakarta, 336-384. Jhon, Arthur G, Dkk. 2011. Mikrobiologi dan Imunologi edisi kelima. Binarupa Aksara: Jakarta Katzung, B.G. 1995. Farmakologi Dasar dan Klinik Edisi 3.EGC: Jakarta. Hal: 666 Kaur Rupinder, Lal Jaiswal Mohan dan Jeik Vivien. 2014. Protective effect of Lannea coromandelica Houtt.Merrill. against three common pathogens. Department of Pharmacy, Faculty of Science and Technology, Banasthali Vidhyapith, Tonk, Rajasthan: India. IP: 112.215.66.79 Kumalasari, Eka dan Sulistyani, Nanik. 2012. Antifungal Activity Of Ethanol Extract Of Binahong Stem (Anredera cordifolia (Tenore) Steen) Against Candida albicans And The Phytochemical Screening. Journal. Fakultas Farmasi. Universitas Ahmad Dahlan. Yogyakarta. IP : 1353.3798-1 Kumar CS,. VL Dronamraju,. Sarada, Rengasamy R. 2008. Seaweed Extract Kontrol thr lraf Spot Diasease of The Medical Plant Gymnema sylvestre. India Journal of Sciense and Technology, vol 1 no 13 Leepel, A Lakhsmi, dkk. Efek Penambahan Glukosa Pada Sabaroud Dektroksa Broth Terhadap Pertumbuhan Candida albicans (Uji In Vitro). Indonesian Journal of Dentisty. Departemen Biologi Oral. Fakultas kedokteran Gigi. Universitas Indonesia. ISSN 1693-9697 Pelezar, M. J., Chan, E. C. S. and Pelczar, M. F.,1986, Dasar-dasar Mikrobiologi, Penerjemah: Hadioetomo, R. S. dkk, Jilid I, Penerbit Universitas Indonesia: Jakarta. Phytochemical Screening and Extraction: A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia vol. 1: issue 1. Wahid Arif. In Vitro Phytochemical and Biological Investigation of Plant Lannea coromandelica(Family: Anacardiaceae). Thesis to Department of Pharmacy, East West University. Bangladesh Prawirodiharjo, Erwin. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol 70% dan Ekstrak Air Kulit Batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica). Skripsi. Jurusan Farmasi. Fakultas Kesehatan dan Ilmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah. Jakarta Raposo, Simone Cotta,. Et al. Antimicrobial activity of Paenibacillus kribbensis POC 115 against the dermatophyte Trichophyton rubrum. Springer Science Business Media B.V. 2011. DOI 10.1007/s11274-011-0893-1 UIN SYARIF HIDAYATULLAH 45 Romadhon, Arif Hakim. 2009. Uji Potensi Antifungi Ekstrak Etanol Rimpang Kecombrang (Nicolaia speciosa Horan). Terhadap Trichophiton rubrum dan Trichophyton mentagrophytes.Skripsi. Jurusan Farmasi. Fakultas Kesehatan dan Ilmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah. Jakarta. Saifudin, A., Rahayu, V., dan Teruna, H.Y. 2011. Standardisasi Bahan Obat Alam.Jakarta: Graha Ilmu. Halaman 25. Salle, A.J., 1994. Fundamentals Principles of Bacteriology, Second Edition, Tata Mc Graw Hill, New Delho, India. Tiwari, Kumar, Kaur Mandeep, Kaur Gurpreet & Kaur Harleem. 2011. Siregar, RS. 2005. Penyakit Kulit Fungi. Egc: Jakarta Hal 10-12 Siswandono dan Soekardjo, B. 1995. Kima Medisinal. Surabaya. Universitas Airlangga Press. Solehidin, Fajar Salim. 2010. Efek Antifungi Ekstrak Etanol Daun Lidah Buaya (Aloe vera L.) Terhadap Pertumbuhan Trichophyton rubrum Secara In Vitro.Skripsi. Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret. Surakarta Sukandar, Yulinah Elin., dkk. 2012. Iso Farmakoterapi. PT. ISFI: Jakarta. Hal: 714 Sundarim Dian, Wien Winarno, M, 2001. Informasi Tumbuhan Obat Sebagai Obat Anti Fungi. Balitbangkes: Depsek RI Tiwari, Kumar, Kaur Mandeep, Kaur Gurpreet & Kaur Harleem. 2011. Phytochemical Screening and Extraction: A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia vol. 1: issue 1. Tofazzal, I. Toshiaki, S. Mitsuyoshi, T. Satoshi. 2002. Zoosporicidal Activity of Polyflavonoid Tannin Identified in Lannea coromandelica Stem Bark against Phytopathogenic Oomycete Aphanomyces cochlioides. Journal of Agricultural and Food Chemistry. Utami, S.C. 2007. Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak Etanoi Herba Jombang (Taraxacum offianale, Webber et Wigger) terhadap Fungi Candida albicans ATCC 10231 dan Tricophyton rubrum ATCC 28191. Skripsi. Fakultas Farmasi. Universitas Setia Budi. Surakarta Waluyo, L. 2004. Mikrobiologi Umum. Universitas Muhammadiyah Malang Press Wagner, H. 1984. Plant Drug Analysis. Springer-Verlag. Berlin. Webster, J., 1980. Introduction to Fungi, Second Edition, Cambridge University Press, USA. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 46 LAMPIRAN 1: Skema Kerja Sampel Determinasi Pengumpulan bagian tanaman kulit batang kayu jawa sebanyak 1Kg Sortasi basah Pengeringan dengan cara kering angin Sortasi kering Penghalusan sampel dengan cara diblender sehingga didapatkan serbuk kulit batang kayu jawa sebanyak 600mg Esktraksi dengan cara maserasi menggunakan etanol 96% hingga didapatkan filtrat jernih Filtrat di destilasi untuk memisahkan pelarut dan mendapat ekstrakkental Didapatkan Ekstak kental sebanyak 42,11 gr Penentuan Parameter spesifik dan non spesifik Skrining fitokimia Uji Aktivitas Antifungi UIN SYARIF HIDAYATULLAH 47 Uji Aktifitas Antifungi Penyiapan alat dan bahan Sterilisasi alat Pembuatan Media Sterilisasi Media Peremajaan Fungi Pembuatan Suspensi Fungi Pengujian Antifungi dari ekstrak/Penentuan diameter zona hambat UIN SYARIF HIDAYATULLAH 48 Lampiran 2: Alat dan Bahan Simplisia kulit batang kayu Ekstrak kulit batang kayu jawa Vortex jawa Mikropipet Hotplate Refrigator LAF Oven Autoklaf Inkubator Jangka sorong Magnetic Stirer UIN SYARIF HIDAYATULLAH 49 Lampiran 3: Hasil Determinasi UIN SYARIF HIDAYATULLAH 50 Lampiran 4: Ekstraksi dengan maserasi Lampiran 5: Hasil ekstrak UIN SYARIF HIDAYATULLAH 51 Lampiran 6 : Hasil Rendemen ekstrak = 7,01 % Lampiran 7 : Hasil parameter non spesifik Perhitungan Residu Pelarut Etanol Bobot jenis = Bobot jenis = Bobot jenis = 1,026 Menurut Farmakope 3, Bobot jenis ≥1, kadar etanol dianggap 0,0% UIN SYARIF HIDAYATULLAH 52 Perhitungan Kadar Air Ekstrak Ket : W0 : berat cawan kosong (gram) W1 : berat cawan + ekstrak sebelum dipanaskan W2 : berat cawan + ekstrak sesudah dipanaskan Perhitungan Kadar Abu Ekstrak UIN SYARIF HIDAYATULLAH 53 Lampiran 8: Skrining fitokimia NO Golongan Gambar Keterangan (hasil uji) senyawa 1 Alkaloid - Tidak terbentuk endapan kuning (Mayer) - Hasil (-) alkaloid - Tidak terbentuk (Dragendorf) (Mayer) endapan merah (Dragendorf) - Hasil (-) alkaloid 2 Flavonoid - Perubahan intensitas warna kuning menjadi tidak berwarna - Hasil (+) flavonoid 3 Saponin - Tebentuk busa setinggi 1 cm yang stabil 4 Glikosida - Hasil (+)saponin - Terbentuk larutan berwarna kuning - Hasil (+) glikosida UIN SYARIF HIDAYATULLAH 54 5 Triterpenoid - Terbentuk warna kuning emas - Hasil (-) triterpenoid 6 Fenol - Terbentuk warna hitam kebiruan 7 Tanin - Hasil (+) fenol - Terbentuk biru kehitaman (sebelum) Hasil (+) tanin (setelah) Penambahan Fecl3 0,1% Lampiran 9: Fungi Percobaan Aspergillus niger : ATCC 16404 Keterangan: Hasil preparat Aspergillus niger pada mikroskop dengan perbesaran 40x. Menggunakan pewarna Metylene Blue. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 55 Trichophytn rubrum: ATCC 52020 Keterangan: Hasil preparat Trichophyton rubrum pada mikroskop dengan perbesaran 40x. Menggunakan pewarna Metylene Blue. Keterangan: Hasil preparat Trichophyton rubrum pada mikroskop dengan perbesaran 100x. Menggunakan pewarna Metylene Blue. Candida albicans: ATCC 10231 Keterangan: Hasil preparat Candida albicans pada mikroskop dengan perbesaran 40x. Menggunakan pewarna Metylene Blue. UIN SYARIF HIDAYATULLAH 56 Lampiran 10 : Pembuatan DMSO 5% dan Pembuatan ekstrak Uji 1. Pembuatan DMSO 5% Dari DMSO 100% di encerkan menjadi DMSO 5% dengan menggunakan aquadest steril. V1 N1 = V2 N2 DMSO 100 % x . V1(ml) = DMSO 5%. 50 ml V1 = V1 = 2,5 ml Jadi untuk membuat DMSO 5% dari DMSO 100%, yaitu dengan cara 2,5 ml DMSO 100% ditambahkan Aquadest steril hingga volume 50 ml. 2. Pembuatan Ekstrak Uji Ekstrak ditimbang seberat 0,25gr Dibuat larutan induk dengan cara 0,25 gram ekstrak dilarutkan dalam 50 ml DMSO 5% = = 5000 μg/ml = 5000 ppm (1000 ppm) = V1 . N1 = V2 . N2 UIN SYARIF HIDAYATULLAH 57 = 5000 ppm . X = 10 ml . 1000 ppm = = 2 ml (2 ml dari larutan 5000 ppm di tambahkan dengan DMSO 5% hingga volume 10 ml) (750 ppm) = V1 . N1 = V2 . N2 = 1000 ppm . X = 10 ml . 750 ppm = = 7,5 ml (7,5 ml dari larutan 1000 ppm ditambahkan dengan DMSO 5% hingga volume 10 ml) (500ppm) = V1 . N1 = V2 . N2 = 750 ppm . X = 10 ml . 500 ppm = = 6,67 ml (6,67 ml dari larutan 750 ppm ditambahkan dengan DMSO 5% hingga volume 10 ml) (250 ppm) = V1 . N1 = V2 . N2 = 500 ppm . X = 10 ml . 250 ppm = = 5 ml (5 ml dari larutan 500 ppm ditambahkan dengan DMSO 5% hingga volume 10 ml) (125 ppm) = V1 . N1 = V2 . N2 = 250 ppm . X = 10 ml . 125 ppm = = 5 ml (5 ml dari larutan 250 ppm ditambahkan dengan DMSO 5% hingga volume 10 ml) (62,5ppm) = V1 . N1 = V2 . N2 = 125 ppm . X = 10 ml . 62,5 ppm UIN SYARIF HIDAYATULLAH 58 = = 5 ml (5 ml dari larutan 125 ppm ditambahkan dengan DMSO 5% hingga volume 10 ml) Lampiran 11: Pembuatan Suspensi Fungi 1. Suspensi Candida albicans 2. Suspensi Aspergillus niger 3. Suspensi Trichophyton rubrum UIN SYARIF HIDAYATULLAH 59 Lampiran 12: Penentuan Zona Hambat (Konsentrasi: 1000, 750, 500 dan 250 ppm) 1. Candida albicans 2. Trichophyton rubrum 3. Aspergillus niger Keterangan: Hasil penentuan zona hambat Canida albicans, Aspergillus niger dan Trichophyton rubrum pada konsentrasi 1000, 750, 500 dan 250 ppm UIN SYARIF HIDAYATULLAH 60 Penentuan zona hambat Candida albicans Konsentrasi 1000 ppm Konsentrasi 750 ppm Konsentrasi 500 ppm Konsentrasi 250 ppm Kontrol (-) DMSO 5% Kontrol (+) Nystatin UIN SYARIF HIDAYATULLAH 61 Penentuan zona hambat Trichophyton rubrum Konsentrasi 1000 ppm Konsentrasi 750 ppm Konsentrasi 500 ppm Konsentrasi 250 ppm Kontrol (-) DMSO 5% Kontrol (+) Nystatin UIN SYARIF HIDAYATULLAH 62 Penentuan zona hambat Aspergillus niger Konsentrasi 750 ppm Konsentrasi 1000 ppm Konsentrasi 500 ppm Konsentrasi 250 ppm Kontrol (-) DMSO 5% Kontrol (+) Nystatin UIN SYARIF HIDAYATULLAH 63 Lampiran 13: Penentuan Diameter Zona Hambat 1. Candida albicans Penentuan diameter Zona hambat Candida albicans pada konsentrasi 500 ppm 2. Trichophyton rubrum Penentuan diameter Zona hamba Trichophyton rubrum pada konsentrasi 500 ppm UIN SYARIF HIDAYATULLAH
