perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id commit to user

perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DETEKSI HIV PADA KOMUNITAS GIGOLO SURAKARTA
MENGGUNAKAN DETERMINE HIV-1/2 DAN NESTED PCR HIV GAG
SKRIPSI
Untuk Memenuhi Persyaratan
Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
DENNY ADRIANSYAH
G0008008
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
Surakarta
2011
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PENGESAHAN SKRIPSI
Skripsi dengan judul : Deteksi HIV pada Komunitas Gigolo Surakarta
Menggunakan Determine HIV-1/2 dan Nested PCR HIV gag
Denny Adriansyah, NIM : G0008008, Tahun : 2011
Telah diuji dan sudah disahkan di hadapan Dewan Penguji Skripsi
Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
Pada Hari Kamis, 8 Desember 2011
Pembimbing Utama
Nama : Afiono Agung Prasetyo, dr., Ph.D
NIP : 19770907 200212 1 002
…………………..
Pembimbing Pendamping
Nama : Yulia Sari, S.Si., M.Si.
NIP : 19800715 200812 2 001
…………………..
Penguji Utama
Nama : Marwoto, dr., M.Sc, Sp.MK
NIP : 19590203 198601 1 004
…………………..
Anggota Penguji
Nama : Mujosemedi, Drs., M.Sc.
NIP : 19600530 198903 1 001
…………………..
Surakarta, ………………………
Ketua Tim Skripsi
Dekan FK UNS
Muthmainah, dr., M.Kes.
NIP 19660702 199802 2 001
Prof.
Dr. Zainal
commit
to userArifin Adnan, dr., Sp.PD-KR-FINASIM
ii
NIP 19510601 197903 1 002
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERNYATAAN
Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah
diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan
sepanjang pengetahuan peneliti juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah
ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam
naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 8 Desember 2011
Denny Adriansyah
NIM. G.0008008
commit to user
iii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
ABSTRAK
Denny Adriansyah, G0008008, Afiono Agung Prasetyo, Yulia Sari, Marwoto,
Mujosemedi, 2011. Deteksi HIV pada Komunitas Gigolo Surakarta Menggunakan
Determine HIV-1/2 dan Nested PCR HIV gag. Skripsi. Fakultas Kedokteran
Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Tujuan penelitian: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memperoleh status dan
data epidemiologi Human Immunodeficiency Virus (HIV) pada komunitas gigolo
Surakarta.
Metode: Sampel darah diambil pada Bulan Mei-Juni 2011 dari 30 responden
menggunakan metode respondent driven sampling. Responden diwawancarai tentang
karakteristik epidemiologi terkait infeksi HIV. Deteksi serologi 30 sampel darah
dilakukan dengan menggunakan Determine HIV-1/2 kemudian dikonfirmasi dengan
deteksi molekuler menggunakan Nested RT PCR.
Hasil: HIV seropositif didapatkan pada tiga responden. Aktivitas seksual berisiko
yang dilakukan oleh gigolo diantaranya coitus 83,33 % (25/30), anal intercourse
86,67% (26/30), dan oral sex 96,67 % (29/30). Sebanyak 80 % (24/30) responden
melakukan seks tanpa perlindungan. Riwayat tato didapatkan pada 23,33 % (7/30)
sedangkan riwayat tindik didapatkan pada 36,67 % (11/30).
Simpulan Penelitian: Infeksi HIV ditemukan pada komunitas gigolo Surakarta.
Terlebih, seluruh responden berisiko tinggi menularkan HIV karena perilaku seksual
yang tidak aman.
Kata kunci: Surakarta, gigolo, HIV
commit to user
iv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
ABSTRACT
Denny Adriansyah, G0008008, Afiono Agung Prasetyo, Yulia Sari, Marwoto,
Mujosemedi, 2011. Human Immunodeficiency Virus Detected in the Gigolo
Community in Surakarta Used Determine HIV-1/2 and Nested PCR HIV gag.
Surakarta. Medical Faculty of Sebelas Maret University.
Objective: The aim of this study was to obtain Human Immunodeficiency Virus
(HIV) status and epidemiological data in gigolo community in Surakarta.
Methods: Blood specimens were collected in May-June 2011 from 30 gigolos by
respondents driven sampling method. Respondents were interviewed about
epidemiological charcteristics associated with HIV infection. Serological detection
from 30 blood specimens were carried out by Determine HIV-1/2 and then confirmed
with molecular detection using nested RT PCR.
Results: HIV seropositive was detected in three respondents. Coitus, anal
intercourse, and oral sex histories were found in 83,33 % (25/30), 86,67 % (26/30),
and 96,67 % (29/30) gigolos, respectively. Unprotected sex and history of tattoos and
piercings were found in 80 % (24/30), 23,33% (7/30), and 36,67% (11/30)
respondents respectively.
Conclusion: HIV infection was detected in gigolo community in Surakarta.
However, all respondents were at high risk of transmitting HIV due to their sexual
behavior.
Keywords: Surakarta, gigolo, HIV
commit to user
v
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa ta’ala karena
dengan rahmat, karunia, dan seizinnya peneliti dapat menyelesaikan skripsi dengan
judul “Deteksi HIV pada Komunitas Gigolo Surakarta Menggunakan Determine
HIV-1/2 dan Nested PCR HIV gag“ ini tepat pada waktunya.
Laporan penelitian ini disusun sebagai salah satu syarat kelulusan tingkat
sarjana di Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. Tulisan ini
tidaklah dapat diselesaikan tanpa bantuan dari berbagai pihak. Untuk itu penulis
mengucapkan rasa terima kasih yang sebesar – besarnya kepada :
1. Prof. Dr. Zainal Arifin Adnan, dr., Sp.PD-KR-FINASIM, selaku Dekan
Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.
2. Afiono Agung Prasetyo, dr., P.hD, selaku Pembimbing Utama.
3. Yulia Sari, S.Si, M.Si, selaku Pembimbing Pendamping.
4. Marwoto, dr., M.Sc, Sp.MK, selaku Penguji Utama.
5. Mujosemedi, Drs., M.Sc, selaku Anggota Penguji.
6. Muthmainah, dr., M.Kes, selaku Ketua Tim Skripsi.
7. Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
Surakarta.
8. Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
Surakarta.
9. Pusat Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Biodiversitas
(PPPBBB) Lembaga Penelitian dan Pengabdian Masyarakat Universitas
Sebelas Maret (LPPM UNS) Surakarta.
10. Kedua Orang Tua saya, Bapak Darfiansyah, Drs. dan Ibu Fauziah, BA serta
adik saya Deleda Freizia.
11. Serta semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu, yang telah turut
andil dalam penyelesaian skripsi ini.
Peneliti menyadari bahwa penyusunan laporan penelitian ini masih jauh dari
kesempurnaan, maka kritik dan saran yang membangun dari pembaca sangat
diharapkan penulis. Akhirnya penulis berharap semoga penyusunan skripsi ini
bermanfaat bagi semua pihak.
Surakarta, 8 Desember 2011
Denny Adriansyah
commit to user
vi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR ISI
PRAKATA
vi
DAFTAR ISI
vii
DAFTAR TABEL
ix
DAFTAR GAMBAR
x
DAFTAR LAMPIRAN
xi
BAB I PENDAHULUAN
1
A. Latar Belakang
1
B. Rumusan masalah
3
C. Tujuan Penelitian
3
D. Manfaat Penelitian
4
BAB II LANDASAN TEORI
5
A. Tinjauan Pustaka
5
1. HIV (Human Immunodeficiency Virus)
5
a. Klasifikasi
5
b. Struktur dan Genom HIV
6
c. Penularan HIV
7
2. Gen gag (group specific antigen)
9
3. Determine HIV-1/2
9
4. Nested PCR
10
B. Kerangka Pemikiran
11
commit to user
vii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
BAB III METODE PENELITIAN
12
A. Jenis Penelitian
12
B. Lokasi Penelitian
12
C. Subjek Penelitian
12
D. Teknik Sampling
13
E. Rancangan Penelitian
14
F. Alat dan Bahan
15
G. Cara Kerja
16
H. Analisis Data
21
BAB IV HASIL PENELITIAN
22
BAB V PEMBAHASAN
27
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN
34
A. Simpulan
34
B. Saran
34
DAFTAR PUSTAKA
35
LAMPIRAN
commit to user
viii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Tahapan Siklus Nested PCR Putaran Pertama
19
Tabel 2. Tahapan Siklus Nested PCR Putaran Kedua
20
commit to user
ix
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Hasil Deteksi Molekuler HIV gag
commit to user
x
26
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Daftar Pertanyaan Wawancara
Lampiran 2. Tabel Data Hasil Wawancara
Lampiran 3. Daftar Gen dengan Polimorfisme Terkait Infeksi HIV
commit to user
xi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah
Upaya
penanggulangan
masalah
Human
Immunodeficiency
Virus
(HIV)/Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) di Surakarta masih belum
dapat mengatasi angka penderita HIV/AIDS yang semakin meningkat setiap
tahunnya. Sekretaris Daerah Pemerintah Kota Surakarta menilai hal tersebut
disebabkan sosialisasi dan upaya penanggulangan belum sepenuhnya mencapai
sasaran seluruh komunitas masyarakat (Diskominfo, 2010). Perlu dilakukan
pendataan tentang kasus HIV/AIDS yang terjadi di setiap komunitas masyarakat
di Surakarta demi tercapainya sosialisasi dan upaya penanggulangan yang tepat
sasaran.
Penyebaran HIV melalui hubungan seksual seharusnya menjadi sasaran
pemerintah dalam upaya penanggulangan HIV/AIDS. Sebanyak 78 % kasus HIV
yang dilaporkan di Jawa Tengah diakibatkan penularan melalui hubungan
seksual. Kebanyakan dari orang yang terinfeksi adalah penjaja seks yang
melakukan perilaku seksual tidak aman (Depkes dan KPA, 2010). Pendekatan
terhadap komunitas penjaja seks dapat menjadi upaya yang baik untuk
mengurangi insidensi HIV/AIDS di Jawa Tengah khususnya di Surakarta. Untuk
itu diperlukan studi epidemiologi untuk mengetahui kondisi komunitas tersebut
agar penanggulangan lebih tepat sasaran.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
2
Sub Direktorat AIDS dan Penyakit Menular Seksual Direktorat Jenderal
Pengendalian Penyakit dan Penyehatan Lingkungan (PP & PL) Kementrian
Kesehatan Indonesia (2010) melaporkan kasus AIDS berjumlah 21.770 dengan
penambahan kasus baru tahun 2010 sebanyak 1.206 kasus di Indonesia.
Sedangkan kasus HIV positif berjumlah 44.292 kasus dengan jumlah kasus baru
sebanyak 3.916 kasus. Di Surakarta, berdasarkan data yang diperoleh dari
Sekretaris Daerah Pemerintah Kota Surakarta, hingga Oktober 2010 tercatat 447
kasus yang terdiri dari 187 kasus HIV positif dan 260 kasus AIDS (Diskominfo,
2010). Kelompok masyarakat yang dilaporkan terinfeksi HIV di Provinsi Jawa
Tengah terdiri dari pengguna narkoba suntik/penasun (35 %), pelanggan Wanita
Pekerja Seks/WPS (21 %), Lelaki yang Suka Lelaki/LSL (22 %), WPS (6 %),
pasangan penasun (5 %), pasangan pelanggan WPS (5 %), waria (4 %), dan
narapidana (2 %) (Depkes dan KPA, 2010). Surveilans Terpadu – Biologis
Perilaku (STBP) pada kelompok pria berisiko tinggi di Indonesia menunjukkan 3
% pekerja pelabuhan, 1 % tukang ojek, 0,5 % anak buah kapal, dan 0,2 % supir
truk telah terinfeksi HIV (KPA, 2007).
Publikasi data tentang HIV pada komunitas gigolo (pria pekerja seks) di
Indonesia sangat minim, padahal komunitas ini termasuk kelompok pria berisiko
tinggi. Hal tersebut terbukti dari hasil pencarian di pubmed search engine pada
tanggal 26 September 2011 dengan kata kunci “HIV Indonesia”, hanya
menampilkan satu publikasi tentang HIV pada komunitas gigolo di Indonesia.
Publikasi tersebut melaporkan bahwa 3,6 % gigolo di Jakarta anti HIV positif
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
3
(Pisani et al., 2004). Sampai saat ini, sejauh yang peneliti tahu, belum ada data
tentang HIV pada komunitas gigolo di Surakarta. Oleh karena itu untuk
mengetahui status HIV pada komunitas gigolo di Surakarta perlu dilakukan
kegiatan penelitian untuk mendeteksi HIV pada komunitas ini. Determine HIV1/2 dan Nested PCR (Polymerase Chain Reaction) dipilih karena spesifisitas dan
sensitivitasnya yang tinggi dalam mendeteksi HIV.
B. Rumusan Masalah
Bagaimana status HIV pada komunitas gigolo di Surakarta menggunakan
Determine HIV-1/2 dan Nested PCR HIV gag?
C. Tujuan Penelitian
1. Tujuan Jangka Pendek
Tujuan jangka pendek penelitian dengan judul “Deteksi HIV pada
Komunitas Gigolo Surakarta Menggunakan Determine HIV-1/2 dan Nested
PCR HIV gag” adalah untuk mengetahui status HIV pada komunitas gigolo di
Surakarta.
2. Tujuan Jangka Panjang
Tujuan jangka panjang dari penelitian ini adalah sebagai bagian dari usaha
membuat data epidemiologi molekuler HIV di Surakarta pada khususnya, dan
di Indonesia pada umumnya.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
4
D. Manfaat Penelitian
1. Manfaat Teoritis
Secara teoritis manfaat yang dapat diperoleh dari penelitian dengan judul
“Deteksi HIV pada Komunitas Gigolo Surakarta Menggunakan Determine
HIV-1/2 dan Nested PCR HIV gag” adalah untuk mengetahui data awal tentang
status HIV pada komunitas gigolo di Surakarta.
2. Manfaat Aplikatif
Manfaat aplikatif yang diperoleh berupa data yang dapat digunakan untuk
membantu para klinisi, dinas kesehatan, dan pemerintah kota setempat dalam
upaya penanggulangan infeksi HIV. Hasil tes serologi anti-HIV akan
disampaikan kepada gigolo yang ingin mengetahui. Jika hasilnya positif maka
diberikan saran untuk memeriksakan diri ke rumah sakit yang memiliki
pelayanan Voluntary Counseling and Testing (VCT). Isolat HIV yang telah
didapatkan juga bisa digunakan untuk melakukan penelitian lebih lanjut seperti
pembuatan vaksin dan keperluan diagnosis.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
5
BAB II
LANDASAN TEORI
A. Tinjauan Pustaka
1. HIV (Human Immunodeficiency Virus)
a. Klasifikasi
HIV (Human Immunodeficiency Virus) adalah virus yang tergolong ke
dalam genus Lentivirus famili Retroviridae (Büchen-Osmond, 2004). Virus
ini memiliki RNA untai tunggal berorientasi positif. Terdapat dua jenis HIV
yaitu HIV-1 dan HIV-2. HIV-1 adalah jenis HIV yang pertama kali
ditemukan dan sebelumnya dinamakan LAV atau HTLV-III. Virus jenis ini
sangat virulen dan infektif karena penularan HIV-1 lebih dominan
dibandingkan dengan HIV-2. Berdasarkan HIV-1 Nomenclature Proposal
(1999) HIV tipe 1 diklasifikasikan menjadi tiga grup yaitu: grup “major”
(M), grup “outlier” (O), dan grup N (non M/non O). Lebih dari 95 % infeksi
HIV-1 berasal dari grup M. HIV-1 grup M sendiri memiliki subtipe
berdasarkan analisis filogenik regio env dan regio gag yaitu subtipe A, B, C,
D, F, G, H, J dan K (Louwagie et al., 1993; Janssens et al., 1994; Kostrikis
et al., 1995; Leitner et al., 1995; Louwagie et al., 1995; Triques et al., 2000).
Terkadang kedua virus dari subtipe yang berbeda dapat menginfeksi satu sel
yang sama dan material genetik kedua virus tersebut bercampur sehingga
muncul virus baru yang memiliki material genetik campuran antara dua
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
6
subtipe virus. Banyak strain virus baru yang muncul dari proses hibridisasi
virus ini tidak mampu bertahan lama tetapi ada juga strain virus yang
mampu bertahan lama dikenal dengan “Circulating Recombinant Form”
atau disingkat CRF (Burke, 1997). Berdasarkan laporan hasil penelitian pada
penderita HIV-1 seropositif yang dilakukan di Jakarta, strain HIV-1 yang
banyak ditemukan yaitu CRF01_AE, subtipe B, CRF01_AE/B, dan
CRF33_01B (Sahbandar et al., 2009).
b. Struktur dan Genom HIV
Human Immunodeficiency Virus berbentuk bulat dengan diameter 120
nm atau sekitar enam puluh kali lebih kecil dari eritrosit (McGovern et al.,
2002). Virus ini memiliki kapsid tersusun dari dua ribu protein p24 dan
matriks tersusun dari protein p17 yang mengelilingi kapsid sehingga
memperkuat integritas partikel virion (Robertson et al., 1999). Envelope
virus ini terdiri dari dua lapis fosfolipid yang didapat dari membran sel
manusia. Pada envelope virus terdapat protein “Env” yang terdiri dari tiga
molekul glikoprotein (gp) 120 dan tiga molekul gp41.
Genom RNA untai tunggal HIV terdiri dari tujuh landmark (LTR,
TAR, RRE, PE, SLIP, CRS, dan INS) dan sembilan gen (gag, pol, env, tat,
rev, nef, vif, vpr, vpu). Sembilan gen tersebut ditemukan di HIV-1 dan HIV2. Terdapat tambahan gen kesepuluh yaitu tev yang merupakan gabungan
dari tat, env, dan rev dan hanya ada pada isolat HIV-1 meskipun tidak semua
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
7
isolat HIV-1 memiliki gen ini. HIV-2 memiliki gen tambahan yaitu vpx yang
tidak ditemukan pada HIV-1 (Ueno et al., 2003). Tiga dari sembilan gen
tersebut, yaitu gag, pol, dan env, akan menyandi protein yang berfungsi
dalam pembentukan struktur virus baru. Keenam gen yang lain (tat, rev, nef,
vif, vpr, dan vpu) adalah gen yang menyandi protein yang mengatur
kemampuan HIV untuk menginfeksi, replikasi, dan menimbulkan penyakit
(Robertson et al., 1999).
c. Penularan HIV
Hubungan seksual yang tidak aman menjadi salah satu penyebab utama
penyebaran HIV selain penggunaan jarum suntik secara bergantian, dan
transmisi virus dari ibu ke anak (Depkes dan KPA., 2010). Hal ini
disebabkan mudahnya transmisi virus melalui sekret alat genital dari
penderita yang mengenai membran mukosa oral, genital, atau rektal
pasangan heteroseksual atau homoseksual (Jin et al., 2010; Boily et al.,
2009). Karena jumlah virus yang terdapat pada sekret alat genital lebih
banyak dibandingkan jumlah di darah tepi, maka terpapar sekret alat genital
ketika berhubungan seksual melalui anal, oral, atau vaginal akan
menimbulkan risiko terinfeksi HIV yang tinggi (Stephens dan Heimer,
1998).
Di negara maju risiko penularan HIV melalui hubungan heteroseksual
dari wanita ke pria adalah 0,04 % sedangkan dari pria ke wanita 0,08 %
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
8
setiap melakukan aktivitas seksual. Persentase ini meningkat empat sampai
sepuluh kali lebih tinggi di negara berkembang dan negara miskin.
Persentase risiko setiap melakukan hubungan seksual secara anal insertif
0,62 % sedangkan pada anal reseptif 1,7 % (Boily et al., 2009). Di Jawa
Tengah faktor risiko penularan kasus AIDS yang terjadi melalui hubungan
heteroseksual paling tinggi yaitu 74 % sedangkan homoseksual hanya 4 %
(Depkes dan KPA, 2010).
Pendataan HIV di Indonesia melalui STBP di delapan propinsi (Sumatra
Barat, Kepulauan Riau, Jawa Barat, Jawa Tengah, Jawa Timur, Jakarta, Bali,
dan Papua) pada kelompok WPS menunjukkan 25 % telah terinfeksi HIV.
Pada kelompok waria dan LSL yang dilakukan di tiga kota (Jakarta,
Bandung, dan Surabaya) menunjukkan sekitar 73,2 % waria dan 15,7 % LSL
terinfeksi HIV (KPA, 2007). Hasil deteksi HIV pada kelompok pria berisiko
tinggi yang dilakukan di Deli, Batang, Batam, Medan, Semarang, Surabaya,
Jakarta, Merauke, dan Sorong menunjukkan 0,2 % supir truk, 0,5 % anak
buah kapal, 3 % pekerja pelabuhan, dan 1 % tukang ojek telah terinfeksi
HIV (KPA, 2007). Terakhir, data kasus HIV pada kelompok gigolo di
Indonesia yang dilakukan di Jakarta menunjukkan 3,6 % HIV positif (Pisani,
et al., 2004). Semua data ini telah menunjukkan kasus penularan HIV
melalui hubungan seksual yang terjadi di Indonesia.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
9
2. Gen gag (group specific antigen)
Gen gag (group specific antigen) merupakan salah satu dari tiga gen
penyandi protein pembentuk struktur HIV yang mengatur pembentukan partikel
virus baru (Adamson dan Freed, 2007; Adamson dan Jones, 2004). Gen gag
terdiri dari 1.503 pasang basa dan menyandi poliprotein prekursor Gag oleh
ribosom di sitosol. Poliprotein prekursor Gag terdiri atas empat regio struktur
utama yaitu matriks (MA), kapsid (CA), nukleokapsid (NC), p6 dan dua regio
peptida spacer (SP) yaitu SP1 dan SP2. Protease virus selanjutnya akan
memotong poliprotein ini menjadi protein p17, p24, p7, p1, p2, dan p6
(Henderson et al., 1992).
Regio gag merupakan daerah terkonservasi pada genom HIV yang banyak
digunakan dalam bidang klinis untuk melakukan deteksi virus maupun provirus
HIV dari berbagai subtipe (Locker et al., 2011; Saito et al., 1995). Analisis
filogenetik sekuens gag pada daerah ini dapat digunakan untuk membedakan
isolat virus dari berbagai subtipe (Louwagie et al., 1993; Bhanja et al., 2005;
Sawadogo et al., 2003; Naroeni et al., 2009). Pada penelitian ini semua produk
PCR positif nantinya akan disekuens untuk selanjutnya dilakukan analisis
filogenetik.
3. Determine HIV-1/2
Determine HIV-1/2 adalah kit serologi untuk mendeteksi secara kualitatif
antibodi terhadap HIV-1 dan atau HIV-2 pada plasma/serum darah manusia.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
10
Prosedur yang digunakan sangat mudah, cepat, tidak membutuhkan ketrampilan
khusus atau alat tertentu, dan hanya dalam 15 menit hasil sudah dapat dilihat.
Kit ini dapat mendeteksi semua subtipe HIV yang telah diketahui sehingga akan
memudahkan untuk mendiagnosis, memonitor prevalensi, dan skrining HIV.
Spesifisitas alat ini adalah 99,75 % dengan sensitivitas 100 % saat diuji coba di
Indonesia (Donegan et al., 2004). Kemasan Determine HIV-1/2 dapat disimpan
dalam suhu 4 oC.
4. Nested PCR
Nested PCR adalah suatu teknik amplifikasi DNA dengan metode PCR
yang menggunakan dua pasang primer dan menggunakan dua kali reaksi PCR.
Reaksi PCR pertama akan mengamplifikasi daerah yang diinginkan dengan
sepasang primer sedangkan reaksi PCR kedua akan mengamplifikasi produk
PCR yang pertama dengan pasangan primer yang berbeda. Dengan
menggunakan Nested PCR, jika terdapat daerah yang salah diamplifikasi pada
reaksi pertama maka dapat dihilangkan dengan reaksi PCR yang kedua. Hasil
yang didapatkan lebih spesifik dan lebih minim kesalahan amplifikasi
dibandingkan dengan menggunakan PCR biasa (Drago et al., 2004; O’Neill et
al., 2003).
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
11
B. Kerangka Pemikiran
1. Perilaku berisiko
tertular HIV
Gigolo
2. Riwayat pribadi
3. Riwayat kesehatan
Tidak terinfeksi
HIV
Terinfeksi
HIV
HIV Negatif
HIV Positif
4. Pemahaman
terhadap HIV/AIDS
Isolat HIV
Deteksi molekuler HIV gag
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
12
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksploratif dengan pendekatan cross
sectional, yang merupakan bagian dari penelitian payung yang dilakukan oleh
Laboratorium Mikrobiologi FK UNS, Laboratorium Biomedik FK UNS, dan
Division of Virology Faculty of Medicine Tottori University, Japan, dengan judul
“Studi Epidemiologi Molekuler Human Blood Borne Viruses di Indonesia”. Untuk
keperluan skripsi, data yang akan dilaporkan adalah status HIV pada komunitas
gigolo di Surakarta dilanjutkan dengan data epidemiologi dan perilaku seksual
yang disajikan secara deskriptif.
B. Lokasi Penelitian
Deteksi serologi dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi FK UNS dan deteksi
molekuler di Laboratorium Biomedik FK UNS.
C. Subjek Penelitian
Subjek penelitian adalah komunitas gigolo di Surakarta yang bersedia
menandatangani surat persetujuan dan informed consent untuk semua tindakan
yang akan dilakukan setelah dijelaskan tentang garis besar tujuan dari kegiatan
penelitian. Penelitian ini telah mendapatkan ethical clearance dari Komisi Etik
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
13
Penelitian Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta/RSUD Dr.
Moewardi Surakarta.
D. Teknik Sampling
Teknik sampling yang digunakan dalam penelitian ini adalah respondent
driven sampling dengan batasan 30 sampel. Gigolo yang bersedia menandatangani
surat persetujuan dan informed consent dianamnesis secara terstruktur. Setelah
anamnesis dilanjutkan pengambilan sampel darah dengan teknik pungsi intravena
oleh perawat. Sampel darah dimasukkan ke dalam tabung EDTA kemudian dibawa
ke laboratorium untuk dipindahkan ke polypropylene tube 15 ml dan disentrifugasi
untuk memisahkan plasma dengan sel-sel dalam darah. Plasma diambil dan dibagi
menjadi beberapa aliquot untuk disimpan dalam suhu -80 oC. Sebagian aliquot
digunakan untuk deteksi keberadaan antibodi terhadap HIV-1 dan atau HIV-2
dengan Determine HIV-1/2. Sampel anti-HIV positif (+) kemudian dilakukan
deteksi molekuler HIV dengan Nested PCR yang mengamplifikasi sebagian daerah
HIV gag.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
14
E. Rancangan Penelitian
Gigolo di Surakarta
tidak
bersedia
Surat persetujuan dan informed consent
Tidak dijadikan
sampel
Bersedia
Ambil darah dan wawancara
Hasil wawancara
direkam dan
disimpan
Sampel darah dimasukkan ke dalam tabung EDTA
Dilaporkan
secara deskriptif
Dibawa ke Laboratorium
Dimasukkan ke polypropylene tube 15 ml,
disentrifugasi dengan kecepatan 2000 rpm
selama 15 menit
Deteksi serologi dengan Determine HIV-1/2
HIV positif (+)
HIV negatif (-)
Isolasi asam nukleat
Nested PCR
Elektroforesis
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
15
F. Alat dan Bahan
1. Kapas alkohol
2. Tabung EDTA (BD, Franklin Lakes, New Jersey)
3. Spuit 5 ml
4. Handscoon dan Masker
5. PCR Microtube + cap (Bio-Rad, Hercules, California)
6. Polypropylene tube 15 ml (BD, Franklin Lakes, New Jersey)
7. Standard Micro Test Tube 1,5 ml (Eppendorf, Hamburg, Deutschland)
8. Centrifuge (Eppendorf, Hamburg, Deutschland)
9. Nichipet (Nichiryo, Weldon Parkway, Maryland Heights)
10. Filter tips 100-1000 µl, 10-100 µl, dan 1-20 µl (ART, San Diego, California)
11. Determine HIV-1/2 strip test (Inverness, Princeton, New Jersey)
12. GoTaq® Green Master Mix (Promega, Madison, Wisconsin)
13. PureLink™ Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen, Carlsbad, California)
14. Gel DocTM XR (Bio-Rad, Hercules, California)
15. Mastercycler Personal® PCR (Eppendorf, Hamburg, Deutschland)
16. Loading quickλ/Hind III digest, DNA-110 (Toyobo, Osaka, Japan)
17.SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix (Invitrogen, Carlsbad,
California)
18. Gel agarosa
18. Sampel plasma darah
20. Bufer TAE (Tris-acetate EDTA) 1 x (Promega, Madison, Wisconsin)
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
16
21. Bufer TE (Tris-EDTA) pH 8,0
22. Etanol 70 % dan 100 %
23. Mesin Elektroforesis
24. Submarine gel apparatus
25. EtBr (etidium bromida) 10 mg/ml
26. Autoclave
27. Loading quick ϕX174/Hae III digest, DNA-112 (Toyobo, Osaka, Japan)
G. Cara Kerja
1. Mendapatkan Plasma Darah
Darah di dalam tabung Ethylenediamine-tetraacetic acid (EDTA)
dimasukkan ke dalam polypropylene tube 15 ml kemudian disentrifus dengan
kecepatan 2.000 rpm selama 15 menit. Setelah terbentuk tiga lapisan, ambil
lapisan atas (plasma) dengan hati-hati. Plasma yang telah diambil dibuat aliquot
dan dilabel. Sebagian aliquot disimpan dalam suhu -80 oC dan sebagian lain
digunakan untuk deteksi (Haryanto et al., 2008).
2. Tes serologi dengan Determine HIV-1/2 (Inverness)
Satu strip kemasan Determine HIV-1/2 diambil. Sampel plasma dipipet
sebanyak 50 µl dan diteteskan pada tempat tes yang disediakan. Tunggu selama
lima belas menit dan hasilnya dibaca. Untuk interpretasi hasil yaitu: satu garis
kontrol berarti HIV negatif, satu garis kontrol dan satu garis tes menunjukkan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
17
HIV positif, jika tidak muncul garis atau tidak ada garis pada kontrol maka
hasil tidak valid.
3. Isolasi asam nukleat
Isolasi asam nukleat menggunakan kit PureLink™ Viral RNA/DNA Mini Kit
(Invitrogen) sesuai dengan protokol pada kit, sebagai berikut:
a. Mempersiapkan larutan Lysate
Sebanyak 25 µl Proteinase K dimasukkan ke dalam tabung
mikrosentrifus kemudian ditambahkan 200 µl plasma dan 200 µl lysis buffer.
Tabung mikrosentrifus ditutup dan larutan di dalamnya dicampur
menggunakan vortex selama 15 detik. Tabung diinkubasi pada suhu 56 oC
selama 15 menit setelah itu ditambah 250 µl etanol 100 %. Larutan di dalam
tabung dicampur menggunakan vortex selama 15 detik kemudian diinkubasi
selama 5 menit pada suhu ruang.
b. Prosedur Purifikasi
Larutan Lysate dimasukkan ke dalam viral spin column yang berada di
dalam tabung penampung kemudian disentrifus dengan kecepatan 6.000 rpm
selama satu menit. Tabung penampung dilepas dan viral spin column
dimasukkan ke dalam tabung penampung baru. Viral spin column dicuci
dengan memasukkan 500 µl wash buffer dan disentrifus dengan kecepatan
6.000 rpm selama satu menit. Cairan di dalam tabung penampung dibuang
dan dipasangkan ke viral spin column lagi untuk dicuci kembali. Setelah
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
18
dicuci tabung penampung dilepaskan dan viral spin column dimasukkan ke
dalam tabung penampung baru. Tabung disentrifus dengan kecepatan 14.000
rpm selama satu menit kemudian viral spin column dimasukkan ke dalam
1,7 ml Recovery Tube. Terakhir, 50 µl bufer TE pH 8 dimasukkan dan
diinkubasi pada suhu ruang selama satu menit kemudian disentrifus dengan
kecepatan 14.000 rpm selama satu menit. Hasil purifikasi di dalam recovery
tube bisa langsung digunakan atau disimpan pada suhu -80 oC.
4. Sintesis cDNA dengan reaksi transkripsi balik
Sintesis cDNA menggunakan kit SuperScript III First-Strand Synthesis
SuperMix (Invitrogen). Langkah kerja sesuai dengan protokol pada kit tersebut.
Pertama, 6 µl asam nukleat (RNA) dimasukkan ke dalam tabung PCR dan
ditambahkan 1 µl primer random hexamer dan 1 µl buffer annealing. Kedua,
tabung PCR diinkubasi pada suhu 65 oC selama 5 menit kemudian diinkubasi 4
o
C selama 1 menit. Ketiga, tambahkan 10 µl reaction mix dan 2 µl enzim untuk
transkripsi balik. Terakhir, tabung PCR diinkubasi pada suhu 25 oC selama 10
menit, 50 oC selama 50 menit, 85 oC selama 5 menit, dan disimpan dalam suhu
4 oC.
5. Amplifikasi dengan Nested PCR
Pembuatan reaksi PCR menggunakan kit GoTaq® Green Master Mix
(Promega). Total volume reaksi PCR adalah 25 µl yang terdiri dari: 12,5 µl
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
19
bufer reaksi, 1 µl primer forward, 1 µl primer backward, 2,5 µl cetakan cDNA,
dan 8 µl nuclease-free water. Primer yang digunakan pada putaran pertama
yaitu primer forward H1G777 (5′-TCACCTAGAACTTTGAATGCATGGG3′) dan primer backward H1P202 (5′-CTAATACTGTATCATCTGCTCCTGT3′). Ukuran produk PCR putaran pertama adalah 830 bp. Primer yang
digunakan pada putaran kedua yaitu primer forward H1Gag1584 (5′AAAGATGGATAATCCTGGG-3′)
dan
primer
backward
g17
(5′-
TCCACATTTCCAACAGCCCTTTTT-3′). Ukuran produk PCR putaran kedua
adalah 460 bp (Miura et al., 1990). Tahapan siklus Nested PCR dicantumkan
dalam Tabel 1 dan Tabel 2.
Tabel 1. Tahapan Siklus Nested PCR Putaran Pertama
Tahapan
Suhu
Waktu
Siklus
Denaturasi awal
95 ºC
2 menit
1 siklus
Denaturasi
95 ºC
1 menit
35 siklus
Annealing
45 ºC
1 menit
35 siklus
Elongasi
72 ºC
1 menit
35 siklus
Elongasi akhir
72 ºC
5 menit
1 siklus
Final hold
4 ºC
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
20
Tabel 2. Tahapan Siklus Nested PCR Putaran Kedua
Tahapan
Suhu
Waktu
Siklus
Denaturasi awal
95 ºC
2 menit
1 siklus
Denaturasi
95 ºC
1 menit
35 siklus
Annealing
55 ºC
1 menit
35 siklus
Elongasi
72 ºC
1 menit
35 siklus
Elongasi akhir
72 ºC
5 menit
1 siklus
Final hold
4 ºC
6. Elektroforesis menggunakan media gel agarosa 1,5 %.
Mula-mula tiga gram agarosa dimasukkan ke dalam glass beaker dan
ditambah bufer TAE 1 x sampai 200 ml. Agarosa dicairkan dengan
menggunakan autoclave kemudian dicampur dengan magnetic stirrer dalam
keadaan panas. Sambil didinginkan sampai 55 oC, EtBr ditambahkan sampai
konsentrasi 0,5 µg/ml dan diaduk dengan magnetic stirrer. Selanjutnya cairan
dituangkan ke dalam cetakan gel yang sudah dipasangi sisir dan dibiarkan
dalam suhu kamar selama 15-20 menit sampai menjadi padat. Setelah padat,
sisir diambil secara hati-hati dan diletakkan ke dalam bak elektroforesis. Gel
digenangi (sampai cukup tergenang) dengan bufer TAE 1 x. Terakhir, 5 µl
Loading quickλ/Hind III digest, DNA-110 (Toyobo) dimasukkan ke dalam
sumur pertama dan 5 µl Loading quick ϕX174/Hae III digest, DNA-112
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
21
(Toyobo) dimasukkan ke dalam sumur kedua, dilanjutkan 2,5 ml produk Nested
PCR ke dalam sumur berikutnya secara urut sesuai nomor sampel. Setelah
semua sampel dimasukkan, mesin elektroforesis disetel 100 Volt selama 30
menit kemudian dinyalakan (Prasetyo, 2011).
H. Analisis Data
Data hasil penelitian akan dilaporkan secara deskriptif.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
22
BAB IV
HASIL PENELITIAN
Didapatkan 30 gigolo dan bersedia untuk dilakukan pemeriksaan darah sekaligus
wawancara yang dilaksanakan pada tanggal 25, 26, 27, 30, 31 Mei 2011 dan 8 Juni
2011. Responden yang ikut serta dalam penelitian ini memiliki rentang usia antara 19
tahun sampai 49 tahun (rata-rata 30,5 tahun) dan merupakan WNI yang berasal dari
suku Jawa. Daftar pertanyaan wawancara dapat dilihat pada Lampiran 1 dan data
tabel hasil wawancara dapat dilihat pada Lampiran 2.
Dari
hasil
wawancara
didapatkan
seluruh
responden
mengaku
sudah
disirkumsisi, tidak memiliki pekerjaan yang berkontak dengan darah, tidak pernah
menerima transfusi darah, cuci darah, dan transplantasi organ. Responden dapat
melayani dan menjajakan seks kepada pria, wanita, dan waria. Sebanyak 90 %
(27/30) responden berorientasi biseksual, 10 % (3/30) mengaku berorientasi seksual
sejenis. Memenuhi kebutuhan ekonomi karena belum memiliki pekerjaan atau
penghasilan yang kurang mencukupi menjadi alasan 86,67 % (26/30) dari mereka
untuk menjalani pekerjaan sebagai gigolo, sedangkan 13,33 % (4/30) lainnya
mengaku hanya ‘iseng’ untuk memenuhi kebutuhan biologis.
Aktivitas seksual berisiko berupa anal intercourse, oral seks, coitus, dan petting
dilakukan oleh 36,67 % (11/30) responden. Sebanyak 30 % (9/30) responden
melakukan anal intercourse, oral seks, dan coitus; sedangkan 16,67 % (5/30)
responden lainnya pernah melakukan anal intercourse, oral seks, dan petting. Selain
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
23
itu, terdapat 3,33 % (1/30) responden yang tidak pernah melakukan oral seks dan
13,33 % (4/30) responden sisanya tidak pernah melakukan anal intercourse.
Hasil wawancara tentang pemakaian kondom saat berhubungan seksual
menunjukkan sebanyak 86,67 % (26/30) mengaku kadang-kadang saja menggunakan
kondom dan sisanya mengaku tidak pernah menggunakan kondom saat berhubungan
seks anal maupun vaginal. Hanya terdapat 23,08 % (6/26) responden yang selalu
menggunakan kondom saat berhubungan seks melalui anal, 53,85 % (14/26) lainnya
mengaku jarang, dan 23,08 % (6/26) sisanya tidak pernah menggunakan kondom.
Dari riwayat tato dan tindik yang dilakukan responden, didapatkan sebanyak
53,33 % (16/30) memiliki tato dan atau tindik, 46,67 % (14/30) sisanya tidak pernah
ditato atau ditindik. Dari 53,33 % gigolo yang memiliki tato atau tindik, 31,25 %
(5/16) menggunakan jarum yang dipakai secara bergantian dan sisanya 68,75 %
(11/16) tidak menggunakan jarum yang dipakai secara bergantian.
Dari tiga puluh responden, hanya satu responden yang pernah tinggal di dalam
lembaga koreksional. Responden tersebut tinggal di lembaga koreksional di Surakarta
selama 2 bulan 1 minggu di dalam sebuah kamar yang berisi tujuh orang. Di dalam
penjara, responden pernah menggunakan jarum suntik bersama dan berhubungan
seksual dengan sesama narapidana tanpa menggunakan kondom.
Hasil pemeriksaan serologi anti-HIV dari tiga puluh responden didapatkan tiga
responden (10 %) yang HIV seropositif. Berdasarkan hasil wawancara, ketiga
responden tersebut tidak pernah tertusuk benda yang terkontaminasi darah, tidak
pernah menerima transfusi darah, tidak memiliki riwayat penggunaan jarum suntik
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
24
bersama, dan tidak pernah tinggal di lembaga koreksional. Dari ketiga responden
tersebut, responden pertama pernah melakukan hubungan seksual dengan Warga
Negara Asing (WNA) sebanyak lebih dari seratus orang yang berasal dari Perancis,
Kanada, Australia, dan Malaysia tanpa pernah menggunakan kondom. Hubungan
seksual tersebut dilakukan 4-5 kali dalam satu minggu. Aktivitas seksual yang biasa
dilakukan dengan WNA tersebut di antaranya french kiss, oral seks, anal intercourse,
dan petting. Responden ini juga pernah melakukan operasi plastik di sebuah salon
kecantikan di Bali karena indikasi kosmetik. Bagian wajah yang dioperasi yaitu
hidung, bibir, dan dagu. Saat di Bali pula, tepatnya di sebuah mall, responden
mendapatkan tindik di telinga dengan alat yang digunakan secara bergantian. Selain
dengan WNA, responden tersebut juga telah melakukan aktivitas seksual komersial
dengan ratusan WNI laki-laki karena alasan memenuhi kebutuhan ekonomi sebagai
tulang punggung keluarga. Responden ini tidak pernah melakukan pemeriksaan HIV
sebelumnya dan tidak pernah menggunakan obat antiretrovirus (ARV). Bulan
Oktober 2010 (7 bulan sebelum wawancara tanggal 31 Mei 2011) responden pria
berusia 45 tahun ini dirawat di rumah sakit selama 6 bulan karena TB paru.
Responden HIV seropositif yang kedua mengaku berkali-kali melakukan pesta
seks dan telah melakukan hubungan seksual dengan lebih dari 500 pria. Hubungan
seksual dilakukan secara rutin hampir setiap hari. Responden jarang menggunakan
kondom karena menuruti permintaan pelanggannya. Aktivitas seksual yang biasa
dilakukan di antaranya french kiss, anal intercourse, dan oral seks. Responden pria
berusia 32 tahun ini pernah menggunakan narkotika ganja dan sabu-sabu selama 10
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
25
tahun sejak usia 10 tahun. Saat usia tersebut responden juga memiliki tato dan tindik
dengan jarum yang menurut pengakuan responden tidak steril dan digunakan secara
bergantian. Responden juga memiliki riwayat berhubungan seksual dengan pemakai
sabu-sabu namun responden tidak tahu apakah pasangannya juga menggunakan jenis
narkoba suntik. Sebelumnya responden juga pernah dirawat di rumah sakit karena
flek pada paru-paru. Responden tersebut memiliki riwayat pemeriksaan HIV
sebanyak dua kali dengan pemeriksaan terakhir tahun 2004 namun hasil pemeriksaan
tidak pernah diambil. Responden ini tidak mengetahui hasil pemeriksaannya dan
tidak pernah menggunakan obat ARV.
Responden ketiga baru berusia 19 tahun namun telah berhubungan seksual
komersial dengan lebih dari 10 pria dan lebih dari 5 wanita. Aktivitas seksual yang
biasa dilakukannya yaitu coitus, oral seks, petting, dan anal intercourse. Aktivitas
seksual tersebut selalu dilakukan dengan menggunakan kondom. Responden ini
memiliki tindik di telinga yang diperolehnya pada tahun 2007 dan dilakukan di
rumahnya sendiri dengan alat yang menurutnya steril dan hanya sekali pakai.
Responden juga tidak pernah menggunakan narkoba suntik, tidak bertato, dan
mengaku tidak pernah menggunakan alat cukur maupun sikat gigi secara bergantian.
Tidak ada riwayat pemeriksaan HIV sebelumnya dan tidak pernah mengonsumsi obat
ARV.
Plasma darah ketiga responden tersebut kemudian dilakukan ekstraksi asam
nukleat untuk mengisolasi RNA di dalam plasma. RNA tersebut selanjutnya
ditranskripsi balik untuk memperoleh cDNA yang selanjutnya digunakan untuk
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
26
deteksi molekuler dengan nested PCR. Deteksi molekuler gen HIV gag dengan
Nested PCR memberikan hasil negatif pada ketiga responden HIV seropositif,
ditunjukkan dengan tidak terbentuknya pita sebesar 460 bp pada hasil elektroforesis
produk PCR. Hasil negatif juga ditunjukkan pada deteksi molekuler gen HIV pol
(Gambar 1).
23.130 bp
M1
M2
gag
S1
kon+
S2
S3
pol
kon+
9.416 bp
6.557 bp
2.322 bp
2.027 bp
1.353 bp
460 bp
1.078 bp
872 bp
288bp
603 bp
271 bp
Gambar 1. Hasil Deteksi Molekuler HIV gag.
Ketiga sampel (S1, S2, S3) merupakan responden HIV seropositif. Pemeriksaan
menggunakan kontrol positif untuk HIV gag (gag kon+) dan kontrol positif untuk
HIV pol (pol kon+). Marker 1 (M1) menggunkan Loading quickλ/Hind III digest
DNA-110 dan marker 2 (M2) menggunakan Loading quick ϕX174/Hae III digest
DNA-112.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
27
BAB V
PEMBAHASAN
Pelaku utama penularan HIV melalui hubungan seksual adalah para pekerja seks
komersial (Depkes dan KPA, 2010; UNAIDS, 2010). Salah satunya adalah komunitas
pria pekerja seks yang lebih dikenal dengan nama gigolo yang diduga menjadi pelaku
penularan HIV di Indonesia. Hal tersebut sesuai dengan hasil penelitian ini yang
menunjukkan 10 % dari komunitas tersebut terjangkit HIV.
Dari hasil wawancara didapatkan semua responden HIV seropositif tidak
memiliki riwayat kontak dengan darah. Selain itu, dari tiga responden HIV seropositif
hanya satu yang memiliki riwayat tato dan pernah menggunakan narkoba. Ketiga
responden memiliki tindik namun hanya dua yang mengaku menggunakan jarum
yang digunakan bergantian. Kemungkinan terbesar penularan HIV dalam komunitas
gigolo berasal dari hubungan seksual yang berisiko karena ketiga responden tersebut
memiliki riwayat berhubungan seksual dengan banyak pasangan pria dan wanita.
Hasil ini sesuai dengan data risiko penularan kasus AIDS di Jawa Tengah yang
dilakukan oleh Depkes dan KPA (2010).
Risiko terbesar transmisi virus melalui hubungan seksual adalah lewat anal,
kemudian vaginal, dan yang terkecil adalah lewat oral (Jin et al., 2010; UNAIDS,
2010; Boily et al., 2009; Gray et al., 2001). Tingginya konsentrasi virus dan adanya
ulserasi merupakan penyebab utama kemungkinan terinfeksi HIV lewat hubungan
seksual (Gray et al., 2001). Mukosa anus lebih tipis dan lebih rentan terjadi ulserasi
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
28
dibandingkan dengan mukosa vagina. Selain itu, mukosa anus juga memiliki banyak
pembuluh darah sehingga mudah terjadi perdarahan sehingga penularan HIV menjadi
lebih mudah lewat hubungan seksual melalui anal (Jin et al., 2010; Boily et al.,
2009). Sekret genital memiliki konsentrasi virus tertinggi pada orang yang baru
terinfeksi HIV namun masih lebih rendah dibandingkan dengan konsentrasi di plasma
darah (Fideli et al., 2001; Quinn et al., 2000). Hasil penelitian yang dilakukan di
Uganda membuktikan bahwa peningkatan konsentrasi virus akan meningkatkan
faktor risiko penularannya (Quinn et al., 2000). Konsentrasi virus dalam sekret
genital juga dipengaruhi oleh jumlah virus dalam plasma darah. Sehingga, semakin
banyak jumlah virus dalam plasma darah akan semakin meningkatkan konsentrasi
virus dalam sekret genital (Pilcher et al., 2007; Hart et al., 1999).
Aktivitas seksual yang sering dilakukan oleh para gigolo tersebut adalah anal
seks dan oral seks. Hal ini dikarenakan pelanggan terbanyak berasal dari kaum pria.
Sebanyak 83,33 % (25/30) responden gigolo juga mengaku sering melakukan coitus
dikarenakan gigolo sudah memiliki istri atau mengaku sebagai pengguna jasa WPS.
Ada pula seorang dari gigolo yang tidak pernah berhubungan seksual dengan pria
tetapi memiliki sekitar 500 pelanggan wanita yang dilayani secara rutin tanpa
menggunakan kondom. Pelanggan wanitanya biasa protes dan merasa tersinggung
apabila responden menggunakan kondom. Sebagian besar alasannya tidak
menggunakan kondom karena faktor kenikmatan atau kepuasan seksual yang akan
berkurang dan atau permintaan pelanggannya yang tidak ingin menggunakan
kondom.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
29
Termasuk ke dalam hubungan seksual berisiko adalah hubungan seksual dengan
WNA karena sampai saat ini banyak WNA di Indonesia yang telah mengidap
HIV/AIDS. Kepala Dinas Kesehatan Provinsi Bali menyampaikan bahwa bulan Mei
2011 lalu terdata 29 WNA penderita HIV/AIDS berada di Pulau Bali (Antaranews,
2011). Dalam penelitian ini, responden HIV seropositif juga memiliki riwayat
berhubungan seksual dengan WNA. Hal tersebut juga menjadi kemungkinan
penyebab infeksi HIV pada responden terutama bila WNA tersebut berasal dari
daerah yang terus mengalami peningkatan kasus HIV seperti Negara Eropa Timur
dan Asia Tengah (UNAIDS, 2010). Terlebih, responden mengaku tidak mengetahui
tentang risiko tertular HIV jika berhubungan dengan WNA tersebut sehingga edukasi
kepada para pekerja seksual tentang bahaya berhubungan seks dengan WNA yang
berisiko perlu dilakukan dan direkomendasikan kepada aktivis dan pemerintah untuk
menanggulangi penyebaran HIV/AIDS di Indonesia.
Risiko penularan HIV melalui hubungan seksual dipengaruhi pula oleh
sirkumsisi (Siegfried et al., 2009). Dari hasil penelitian ini seluruh responden sudah
disirkumsisi (dan saat diperiksa seronegatif untuk HIV). Pria yang sudah disirkumsisi
memiliki risiko luka akibat coitus yang rendah dibandingkan pria yang tidak
disirkumsisi (Mehta et al., 2010). Keuntungan lain dari sirkumsisi juga ditunjukkan
oleh penelitian di Afrika Selatan yang menunjukkan penurunan infeksi HIV melalui
hubungan heteroseksual sebanyak 38 % sampai 66 % pada pria yang telah
disirkumsisi. Lebih dari tiga puluh penelitian lainnya juga membuktikan keuntungan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
30
sirkumsisi dalam mencegah penularan HIV (Siegfried et al., 2009; Szabo dan Short,
2000).
Sebanyak 86,67% (26/30) responden telah terbiasa menggunakan kondom ketika
berhubungan seksual. Responden menggunakan kondom karena ingin terhindar dari
penyakit menular seksual walaupun ada juga yang beralasan supaya tidak hamil.
Kondom telah terbukti dan diterima secara luas sebagai pilihan pencegahan transmisi
virus melalui hubungan seksual (Weller dan Davis, 2002; de vincenzi, 1994). Sesuai
dengan hasil penelitian bahwa penggunaan kondom yang konsisten mampu
mengurangi penularan HIV melalui hubungan seksual sampai 85 % (NIAID, 2001).
Responden yang mengaku selalu menggunakan kondom saat berhubungan seksual
memberikan hasil negatif dalam tes serologi HIV. Banyaknya pekerja seks komersial
yang menggunakan kondom menunjukkan keberhasilan pemerintah dan pihak terkait
lainnya dalam mempromosikan kondom di kalangan pekerja seks.
Riwayat tato dan tindik yang dilakukan secara tidak steril dengan jarum yang
bergantian oleh responden seropositif HIV awalnya memberikan kecurigaan bahwa
hal tersebut juga menjadi penyebab responden terinfeksi HIV. Walaupun belum ada
kasus HIV/AIDS dilaporkan akibat tindakan tato dan tindik yang tidak steril atau
bergantian, Centers for Disease Control and Prevention (2010) merekomendasikan
untuk melakukan sterilisasi dan menggunakan jarum sekali pakai.
Determine HIV-1/2 merupakan jenis pemeriksaan serologi yang dapat
mendeteksi HIV dengan cepat dan berbasis imunologi. Determine HIV-1/2 hanya
dapat digunakan untuk skrining, bukan untuk diagnosis pasti HIV (Constantine et al.,
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
31
2005; Branson, 2003). Setelah dilakukan skrining, pemeriksaan Western blot dan
Indirect
fluorescence
assays
(IFA)
digunakan
sebagai
konfirmasi
untuk
mengeliminasi hasil positif palsu dari pemeriksaan skrining. Diagnosis pasti infeksi
HIV yang telah mendapat persetujuan dari US Food and Drug Administration (FDA)
adalah pemeriksaan berbasis molekuler Nucleic Acid Test (NAT) yang dapat
mendeteksi RNA virus (Darko et al., 2007). Pemeriksaan NAT ini di antaranya
dilakukan dengan teknik isolasi DNA, PCR, dan elektroforesis. Selain itu, secara
klinis sering digunakan pemeriksaan CD4+ dan viremia untuk menentukan stadium
infeksi HIV (Simon et al., 2006).
Hasil deteksi molekuler untuk ketiga responden HIV seropositif tersebut
memberikan hasil negatif yang ditunjukkan dengan tidak didapatkannya pita pada
hasil elektroforesis. Hasil negatif yang didapat bukan berasal dari kesalahan teknis
laboratorium karena peneliti telah mengulang pemeriksaan dan telah menggunakan
kontrol amplifikasi eksternal. Kontrol amplifikasi eksternal menggunakan sampel
yang sudah diketahui HIV positif dengan menggunakan kit dan metode deteksi yang
sama menunjukkan hasil positif pada PCR dan elektroforesis. Selain itu, dalam
deteksi molekuler HIV juga dilakukan deteksi gen pol menggunakan kit dan sampel
yang sama namun tetap memberikan hasil negatif meskipun kontrol ekternal untuk
amplifikasi gen HIV pol memberikan hasil positif. Hal tersebut menunjukkan tidak
ada kesalahan dalam teknik, kit, dan primer yang digunakan dalam penelitian.
Hasil negatif pada deteksi molekuler kemungkinan besar disebabkan virus yang
tidak terambil saat pengambilan darah intravena karena jumlah RNA virus yang
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
32
sedikit. Sedikitnya jumlah virus bisa disebabkan sifat virus yang kurang patogen
sehingga mudah ditangani oleh sistem imun yang relatif lebih kuat (Cao et al., 1995;
Pantaleo et al., 1995). Sistem imunitas yang berperan dalam hal ini adalah CD8+
yang mampu menekan replikasi virus sehingga mengurangi jumlahnya (Simon et al.,
2006). Jumlah CD8+ yang telah diketahui meningkat dapat menghambat replikasi
virus sampai 90 % (Cao et al., 1995). Sedangkan, monitor jumlah CD4+ lebih dari
600 sel/mm3 secara berkelanjutan dapat menetapkan individu tersebut temasuk kasus
HIV non progresif (Pantaleo et al., 1995). Sayangnya, dalam penelitian ini tidak
dilakukan pemeriksaan jumlah CD4 dan CD8.
Kemungkinan yang mengakibatkan hasil negatif deteksi molekuler dapat
dikarenakan jumlah RNA virus di bawah batas deteksi untuk mampu memberikan
tanda (pita) saat dielektroforesis yaitu 104 kopi/ml (Promega, 2011). Perjalanan
penyakit yang lambat pada individu tersebut, sistem imun yang relatif kuat, adanya
delesi pada gen gag yang membuat virus tersebut kurang patogen, atau terinfeksi oleh
HIV subtipe lain yang belum bisa terdeteksi juga mengakibatkan hasil deteksi
molekuler negatif (Kovacs, 2001). Tidak menutup kemungkinan adanya resistensi
terhadap virus HIV pada responden, seperti kasus HIV non progresif yang sudah
pernah dilaporkan sebelumnya akibat adanya polimorfisme atau variasi genetik dari
koreseptor C-C Chemokine Receptor type 5 (CCR5) berupa delesi sebanyak 32 bp
pada gen CCR5 yang dikenal dengan nama CCR5Δ32 (atau CCR5delta32 atau
CCR5-D32). Individu dengan CCR5Δ32 ini memiliki proteksi terhadap infeksi virus
HIV karena virus kehilangan koreseptornya (CCR5) dan tidak bisa mengenali
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
33
reseptor CCR5Δ32 ini sehingga invasi virus ke dalam sel target tidak terjadi (Simon
et al., 2006; Pantaleo et al., 1995; Ioannidis et al., 2001). Selain itu, individu dengan
mutasi koreseptor C-C Chemokine Receptor type 2 (CCR2) yang dikenal dengan
CCR2-64I juga menunjukkan jumlah RNA virus yang rendah (Ioannidis et al., 2001)
Di Indonesia, sejauh yang peneliti ketahui, data tentang resistensi akibat mutasi ini
belum pernah diteliti.
Selain gen penyandi koreseptor CCR5 dan CCR2, terdapat genom lain yang
memiliki variasi genetik terkait infeksi virus HIV pada manusia. Dalam studi yang
dilakukan genome-wide association studies (GWAS) ditemukan bahwa variasi atau
polimorfisme pada genom tersebut berefek pada status klinis pasien yang terinfeksi
HIV, dapat mempercepat atau menghambat perjalanan penyakit dan mempengaruhi
jumlah RNA atau DNA virus. Daftar gen dengan polimorfismenya dapat dilihat pada
Lampiran 3. Sampel yang diambil dalam studi GWAS ini berasal dari orang
Kaukasia, Afrika, dan Eropa (Aouizerat et al., 2011). Eksplorasi variasi genom
manusia terkait status klinis pasien yang terinfeksi HIV pada orang Asia, khususnya
Indonesia, masih belum ada. Oleh sebab itu, penelitian eksplorasi genom manusia ini
menjadi sangat menarik untuk dilakukan guna mengetahui jumlah, distribusi, dan
perjalanan penyakit orang dengan infeksi HIV di Indonesia. Jika penelitian genom
manusia ini terus dilanjutkan, hasil yang didapat sangat mungkin untuk digunakan
dalam pembuatan antibodi atau antagonis sebagai pencegahan dan pengobatan infeksi
HIV.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
34
BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan
1. Hasil pemeriksaan serologi HIV yang dilakukan dengan Determine HIV-1/2
(Inverness) memberikan hasil seropositif HIV pada tiga responden dari tiga
puluh responden yang diperiksa.
2. Ketiga responden HIV seropositif memiliki riwayat risiko terinfeksi melalui
hubungan seksual yang tidak aman, pemakaian tato, dan tindik.
3. Deteksi molekuler dengan Nested PCR HIV gag memberikan hasil negatif
pada ketiga responden HIV seropositif.
B. Saran
1. Perlu dilakukan pemeriksaan dan monitoring CD4 dan CD8 untuk ketiga
responden HIV seropositif yang rutin dilakukan setiap enam bulan sekali.
2. Perlu diadakan penelitian tentang eksplorasi variasi genom manusia terkait
status klinis pasien yang terinfeksi HIV.
3. Perlu dilanjutkan kegiatan surveillance untuk melengkapi data epidemiologi
molekuler HIV pada komunitas Gigolo di Indonesia sehingga dapat digunakan
dalam program pencegahan dan pemberantasan HIV di Indonesia.
commit to user