Infeksi Cytomegalovirus Manusia Bawah Mengatur Ekspresi Kelas

Infeksi Cytomegalovirus Manusia Bawah Mengatur Ekspresi Kelas major histocompatibility Kompleks saya Molekul
Gatot S. Lawrence
Penelitian Vascular Unit, Departemen Patologi, Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin, Dr Wahidin Sudirohusodo Rumah Sakit Umum, Makassar
RINGKASAN
Manusia sitomegalovirus (HCMV) adalah patogen Umum Yang menginfeksi sekitar 40-90% populasi manusia. PADA umumnya infeksi inisial MEDIA
NUSANTARA menunjukkan Gambaran klinis Yang bermakna PADA individu imunokompeten yang.HCMV diduga telah mengembangkan mekanisme untuk
menghindari Serangan bahasa Dari mekanisme imun tubuh manusia Dan Canada produksi mekanisme Suami menjadi infeksi laten. HCMV Akhir-Akhir
Suami juga diduga berperan PADA kejadian aterosklerosis. Kami adalah hipotesis bahwa HCMV menghambat Ekspresi antigen MHC Kelas I PADA sel
endotel Yang terinfeksi. Model in vitro sel endotel manusia Yang digunakan adalah Kultur sel endotel vena umbilikus manusia. Kultur sel endotel Suami
kemudian diinfeksikan Mencari Google Artikel HCMV. Berbagai Terbalik inkubasi infeksi dilakukan untuk menentukan kinetik bahasa Dari penurunan
Ekspresi MHC Kelas I PADA sel endotel Yang terinfeksi. Dalam Percobaan Suami digunakan antibodi monoklonal W6/32, Yang Mengenal epitop antigen
HLA bahasa Dari-A,-B, dan-C Yang berikatan degan SS2-mikroglobulin. Dampak bahasa Dari infeksi HCMV terhadap Ekspresi antigen MHC Kelas I
dianalisis Mencari Google Artikel imunofluoresensi sitometri arus. Sebagai terangkan untuk infeksi HCMV Yang viabel Dan Komponen degradasi bahasa
Dari sel endotel, Maka secara berurutan digunakan sel endotel Yang terinfeksi Mencari Google Artikel HCMV Yang telah dilakukan radiasi Mencari Google
Artikel Lampu ultraviolet, dan sel endotel Yang diinfeksi secara semu (= mock terinfeksi). Pewarnaan imunohistokimia dapat mendeteksi Ekspresi protein
sitoplasma maupun superfisial. Hasil penelitian menunjukkan bahwa inisial HCMV secara Langsung menurunkan Ekspresi permukaan antigen MHC Kelas
bahasa Dari Saya PADA sel endotel Yang terinfeksi. Temuan Suami memberikan tambahan Informasi tentang mekanisme bahasa Dari HCMV sehingga
dapat menghindari sergapan bahasa Dari Pengawasan SISTEM kekebalan tubuh manusia (J Med Nus 2004;. 25:26-34).
RINGKASAN
Sitomegalovirus Manusia (HCMV) adalah patogen umum yang menginfeksi 40-90% dari populasi. Dalam kebanyakan kasus, infeksi tidak menimbulkan
gejala klinis yang signifikan pada individu imunokompeten. HCMV diperkirakan memiliki mekanisme yang dikembangkan untuk menghindari respon host
kekebalan tubuh dan menentukan infeksi laten. HCMV baru-baru ini berspekulasi untuk terlibat dalam perkembangan aterosklerosis. Kami hipotesis bahwa
HCMV menghambat ekspresi antigen MHC kelas I pada sel endotel yang terinfeksi (EC). Model in vitro sel endotel manusia yang digunakan dalam
penelitian ini adalah sel-sel endotel vena umbilikalis manusia (HUVECs) budaya. Sel-sel yang terinfeksi dengan strain virus sitomegalo manusia.Berbagai
panjang dari infeksi digunakan untuk menentukan kinetika regulasi down dari MHC kelas I permukaan ekspresi pada sel endotel yang terinfeksi. Untuk
percobaan ini, Antibodi monoklonal W6/32, yang mengenali epitop umum untuk HLA-A,-B, dan C-antigen dirakit dengan manusia SS2-mikroglobulin,
digunakan. Pengaruh HCMV pada ekspresi antigen MHC kelas I dianalisis dengan sitometri imunofluoresensi. Sebagai kontrol untuk dampak infeksi HCMV
aktif layak dan komponen protein terdegradasi dari ECs, ultraviolet-cahaya disinari HCMV sel endotel yang terinfeksi dan mengejek sel endotel yang
terinfeksi digunakan, masing-masing. Pewarnaan imunohistokimia memiliki kemampuan untuk mendeteksi protein sitoplasma dan permukaan. Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa HCMV langsung menurunkan ekspresi permukaan antigen MHC kelas I pada ECs terinfeksi. Temuan ini memberikan satu
mekanisme yang HCMV bisa lepas dari pengawasan kekebalan tubuh inang (J Med Nus 2004;. 25:26-34).
{Mospagebreak}
Latar belakang
Sitomegalovirus Manusia (HCMV) adalah patogen umum yang menginfeksi 40% sampai 90% dari population.1 Dalam kebanyakan kasus, bagaimanapun,
infeksi tidak menimbulkan gejala klinis yang signifikan pada individu imunokompeten. HCMV diperkirakan telah mengembangkan mekanisme untuk
menghindari respon host kekebalan tubuh dan membangun laten infection.2 Diperkirakan bahwa 35% individu yang terinfeksi mengalami gejala yang
berkisar dari ringan sampai penyakit klinis berat.Namun, infeksi dapat memiliki konsekuensi yang parah atau mematikan pada orang yang sistem
kekebalannya belum matang, seperti janin atau neonatus, mereka yang menjalani terapi imunosupresif, atau mereka dengan kondisi imunodefisiensi seperti
Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) 0,3-5 Selain itu , HCMV baru-baru ini berspekulasi untuk terlibat dalam pengembangan atherosclerosis.6-9
Penelitian telah ditujukan terhadap pencegahan dan pengelolaan penyebaran HCMV.Tujuan dari upaya ini adalah untuk mencegah infeksi primer atau
sekunder, serta untuk mencegah perkembangan penyakit dari infeksi tanpa gejala HCMV untuk HCMV gejala disease.10 Untuk mencapai tujuan tersebut,
pemahaman tentang infeksi HCMV, kemampuan laten, dan HCMVâ € ™ interaksi dengan sistem kekebalan tubuh inang adalah kepentingan utama.
Endotelium adalah antarmuka antara komponen sirkulasi darah dan jaringan di bawahnya. Untuk alasan ini sel endotel (EC) memainkan peran penting
dalam respon inflamasi dan penyajian antigen peptida untuk bodyâ € ™ s immunosurveillance.11 Selain itu, ECs telah terbukti sebagai situs umum infeksi
HCMV persisten.
Ciri dari sistem kekebalan tubuh adalah kemampuannya untuk membedakan diri dari non diri. Karena itu kecenderungan yang unik, agen infeksi diakui dan
dieliminasi.Sekarang diketahui bahwa glikoprotein permukaan sel yang terdiri dari antigen major histocompatibility complex (MHC), adalah pusat untuk
respon kekebalan tubuh.Manusia MHC pertama kali ditemukan pada tahun 1950, dan awalnya disebut Antigen leukosit manusia (HLA). Molekul
histokompatibilitas adalah protein yang mengikat peptida dan fungsi untuk menyajikan peptida antigen diproses untuk sel T. Dua jenis MHC yang telah
dipelajari secara luas adalah kelas I dan kelas II kompleks histokompatibilitas utama. MHC kelas I dan kelas II mengikat peptida diolah dari berbagai
sumber, dan dalam kompartemen intraseluler berbeda. Secara umum, kelas I molekul peptida ini diproses dan / atau disintesis dari protein endogen,
sedangkan molekul kelas II peptida hadir dari endocytosed (eksogen) serta antigen endogen antigens.12
Sel endotel (ECs) membentuk antarmuka antara sirkulasi dan jaringan subendothelial.Karena itu posisi yang unik, salah satu fungsi ECs adalah untuk
mengatur interaksi antara compartments.13, 14 Jauh dari menjadi penghalang pasif antara darah dan jaringan di bawahnya, sel endotel berperan penting
dalam hemostasis vaskular, regulasi tonus vaskuler , presentasi antigen, dan mensintesis hormon pertumbuhan sintesis dan dapat mengekspresikan adhesi
leukosit molecules.15 Selanjutnya, ECs memberikan kondisi yang memfasilitasi akumulasi limfosit dan menghasilkan molekul yang penting dalam aktivasi
limfosit.
{Mospagebreak}
Beberapa studi telah menunjukkan bahwa sel-sel endotel adalah target umum untuk infeksi HCMV. Baik in vitro dan in vivo telah menunjukkan bahwa
HCMV mampu bereplikasi dalam ECs terinfeksi. Meskipun EC dapat berfungsi sebagai antigen sel presentasi (APC), dan endogen ini diproses antigen virus
dalam hubungan dengan major histocompatibility complex (MHC) kelas I sampai limfosit T sitotoksik (CTL), beberapa laporan telah menunjukkan penurunan
ekspresi MHC kelas I padapermukaan HCMV terinfeksi ECs. Hal ini tampaknya menjadi mekanisme yang dikembangkan oleh HCMV untuk melarikan diri
dari host immunosurveillance.13, 16, 17
Major histocompatibility Kompleks Kelas I
MHC kelas I gen menyandikan glikoprotein membran polimorfik yang menyajikan peptida asing dan diri untuk CD8 sel T positif. Protein ini dengan demikian
memainkan peran penting dalam penolakan jaringan cangkok dan respon imun terhadap virus dan sel-sel neoplastik. Ada tiga klasik, lokus baik ditandai
dalam genom manusia (HLA-A, B dan HLAÂ HLA-C) yang menyandikan MHC kelas polimorfik Saya protein. Domain ekstraseluler protein MHC kelas
ditemukan terkait dengan SS2-mikroglobulin. Gen lain (HLA-E, HLA-F, HLA-G dan HLA-H) yang terletak di lokus MHC terkait dengan gen MHC kelas I, dan
menyandi protein yang kurang polymorphic.18
Secara umum, endogen disintesis antigen virus terikat pada molekul MHC kelas I rantai berat, disajikan untuk CD8 sel T positif, mekanisme untuk
membasmi sel yang terinfeksi virus. Pengolahan protein virus menjadi peptida kecil, dan asosiasi peptida dengan MHC kelas I adalah fungsi yang harus
dilakukan oleh APC. Kebanyakan sel berinti dapat berfungsi sebagai APC dan mengekspresikan MHC kelas I. Manusia ECS konstitutif mensintesis dan
mengekspresikan MHC kelas I.18
Struktur Molekul MHC Kelas I
Kelas molekul MHC saya terdiri dari rantai berat glikosilasi 45 kD yang non-kovalen terikat SS2-mikroglobulin, 12 polipeptida kD. Rantai berat dikodekan
dalam kelas saya HLA daerah pada kromosom 6, dan 62m dikodekan dalam kromosom 15,19 Kelas I rantai berat terdiri dari tiga domain ekstraseluler yang
berbeda, sebuah domain transmembran pendek dan domain sitoplasmik. Tiga domain ekstraseluler ditujukan al, a2 dan 3, dan setiap domain terdiri dari
sekitar 90 asam amino. Situs al terletak di ujung N-dan domain a3 paling dekat dengan permukaan sel. Domain a2 dan a3 masing-masing memiliki ikatan
disulfida intrachain, dan domain al memiliki situs glikosilasi tunggal. Wilayah transmembran terdiri dari heliks sekitar 25 asam amino.Sekelompok lima asam
amino dasar ditemukan segera C-terminal ke daerah ini, merupakan karakteristik dari protein transmembran, dan diyakini jangkar polipeptida dalam
membran sel dengan berinteraksi dengan fosfolipid bermuatan negatif pada permukaan bagian dalam dari lapisan ganda membran . Domain sitoplasmik
merupakan wilayah hidrofilik dari sekitar 30 asam amino. Setengah dari residu ini kutub, terutama serin, dan beberapa terfosforilasi oleh adenosin
monofosfat siklik (cAMP) protein tergantung kinase.20, 21
Fungsi utama dari antigen MHC kelas I adalah untuk mengikat peptida endogen virus diproses dan sekarang mereka di permukaan sel. Pengakuan antigen
asing dalam kaitannya dengan MHC kelas I adalah sinyal yang diperlukan untuk CTL activation.12 Produk translokasi utama dari kedua rantai berat dan
SS2-mikroglobulin mRNA memiliki N-terminal ekstensi yang berisi urutan sinyal yang mengarahkan rantai polipeptida baru lahir ke endoplasma retikulum
(ER). Setelah penyisipan rantai berat ke dalam membran ER, ini urutan sinyal secara sistematis dihapus. Glikosilasi terjadi bersamaan dengan asosiasi
penerjemahan, dan antara rantai berat dan SS2-mikroglobulin terjadi dalam ER. Studi menggunakan sel-sel mutan RMA-S telah menunjukkan bahwa SS2mikroglobulin memfasilitasi lipat dari subunit al dan a2 dari chains.22 berat Bernabeu dkk. melaporkan bahwa dalam baris sel T leukemia, molekul MHC
kelas I menunjukkan kecenderungan untuk mengasosiasikan dengan serum SS2-mikroglobulin. 23 Namun, hubungan yang stabil antara rantai berat dan
SS2-Â mikroglobulin telah dilaporkan terjadi hanya dengan adanya peptida. Dengan tidak adanya peptida, MHC kelas I molekul sangat labil pada 37 0 C,
tetapi mereka dapat stabil pada suhu yang lebih rendah. Peptida ini kecil sekitar 9-10 asam amino, dapat menyebabkan perubahan konformasi dalam rantai
berat bebas dengan menstabilkan bentuk dilipat rantai berat yang berada dalam kesetimbangan dengan dilipat form.24, 25
{Mospagebreak}
Interaksi antara immunopeptides dan kelas protein MHC saya
Permukaan ekspresi MHC kelas I antigen diperlukan MHC kelas I antigen kompleks yang stabil, yang dibentuk oleh asosiasi peptida endogen diproses dan
kelas lengkap saya molecule.25 peneliti Reveral telah menunjukkan bahwa pembentukan kompleks trimolecular MHC kelas I rantai berat, peptida diproses
62m dan endogen selesai sebelum memasuki kompartemen Golgi medial. Peptida diproses diperkirakan menstabilkan struktur molekul MHC kelas, saya
antigen.21 26, 27
Baru calnexin, sebuah 90-kD membran pendamping terikat ER, dilaporkan memainkan peran penting dalam memastikan bahwa kelas peptida MHC stabil
kompleks saya telah terpasang dengan benar sebelum mencapai kompartemen Golgi. Calnexin juga telah dilaporkan untuk mempromosikan asosiasi MHC
kelas berat dengan rantai, SS2-microglobulin.28 29 Untuk mencapai pembentukan stabil molekul MHC kelas I, calnexin telah ditunjukkan untuk menunda
transportasi intraselular peptida-kekurangan MHC kelas I molecules.30
Permukaan ekspresi MHC kelas I dan presentasi peptida
Untuk merangsang limfosit T sitotoksik (CTL) sekitar 200-1000 permukaan molekul MHC kelas I harus ditempati oleh peptides.31 relevan Presentasi antigen
virus diproses untuk CTLs membutuhkan exocytosis MHC kelas I, yang berfungsi sebagai kendaraan, dari ER ke permukaan sel. Beberapa peneliti
menunjukkan fenomena ini dengan menggunakan virus vaccinia rekombinan mengekspresikan adenovirus E19 glikoprotein. Glikoprotein E19 memiliki
kecenderungan untuk berasosiasi dengan molekul MHC kelas I dan mencegah transportasi mereka dari UGD ke permukaan sel.Akibatnya, penyajian
protein virus untuk CTLs terbatas MHC adalah prevented.32 Namun, studi yang dilakukan oleh Ljunggren dkk. 1990, memang menunjukkan bahwa molekul
MHC kelas I masih dapat dirakit dan diekspresikan pada permukaan sel bahkan tanpa adanya peptida, namun jenis ini kosong MHC kelas I molekul tidak
stabil pada suhu tubuh.
Manusia Cytomegalovirus (HCMV)
Berdasarkan klasifikasi virus herpes pada tahun 1979, keluarga Herpesviridae dibagi menjadi tiga subfamilies di mana herpes simplex virus, HCMV dan
kelompok virus lymphoproliferative digolongkan sebagai Alphaherpesviridae, Betaherpesviridae dan Gamma-Herpesviridae respectively.33 sitomegalovirus
Manusia (HCMV) infeksi umumnya tetap asimtomatik pada individu imunokompeten. Namun, tidak dapat sepenuhnya dibasmi oleh sistem kekebalan tubuh
inang, yang dapat menyebabkan infeksi persisten. Infeksi HCMV biasanya diperoleh melalui kontak pribadi yang dekat dengan individu terinfeksi atau darah
transfusion.2
Istilah â € œcytomegaliaâ €?? diperkenalkan oleh Goodpasture dan Talbot (1921), untuk menggambarkan badan inklusi eosinofilik intraseluler. HCMV mirip
dengan herpesvirus lain sehubungan dengan replikasi virus. Replikasi terjadi secara temporal diatur, di mana awal langsung (IE) gen mengatur transkripsi
dan translasi gen awal (E), dan selanjutnya produk gen terlambat. HCMVs memiliki kompleksitas urutan lebih dari herpesvirus lain, dan genom dengan
komponen panjang dan pendek yang dapat membalikkan selama replication.4, 5 Memiliki kemampuan untuk melintasi penghalang plasenta dan
menyebabkan cacat lahir bawaan.
HCMV juga telah mengembangkan cara untuk melarikan diri dari surveilans kekebalan tubuh inang. Pertahanan tuan rumah utama untuk HCMV dianggap
respon imun seluler dimediasi. Pasien dengan defisiensi imunitas diperantarai sel sangat rentan terhadap infeksi HCMV. Natural killer (NK) sel, dan respon
imun humoral juga memainkan peran protektif dalam mencegah penyebaran HCMV di host.4 terinfeksi
{Mospagebreak}
Para HCMV memiliki DNA beruntai ganda linier dan genom sangat besar (sekitar sekitar 240 kb). HCMV memiliki inti protein, yang terdiri dari protein kapsid
dengan total 162 subunit capsomere. Dari kapsomer, 150 yang berlubang selama setengah sumbu panjang dan heksagonal dalam bagian crossÂ,
sedangkan sisanya 12 kapsomer adalah pentameric. Kapsid ukuran 100 nm diameter dan dikelilingi oleh tegument, area pleomorfik. Amplop telah
dilaporkan berasal dari kedua membran nuklir internal dan ER.33 Disarankan bahwa DNA sintesis virus di dalam sel yang terinfeksi mengalami â € œrolling
circleâ €?? replikasi pola. DNA disintesis sebagai molekul concatemeric panjang, dan kemudian dibelah ke dalam genom individu untuk kemasan di dalam
putri capsids.4
Pola ekspresi genom HCMV telah digambarkan sebagai kaskade karena ekspresi dari produk gen kemudian membutuhkan adanya produk gen
sebelumnya. A-protein (protein awal langsung) mengaktifkan sintesis dari B-mRNA (protein dini), dan B-protein izin replikasi DNA yang diikuti dengan
sintesis mRNA akhir. Cytomegalovirus telah dilaporkan memiliki kecenderungan untuk kode untuk lebih dari 100 protein ukuran rata-rata, masing-masing
yang mungkin akan dikenakan pasca-translasi modifikasi dengan belahan dada, glikosilasi fosforilasi, atau sulphation. Karena protein glikosilasi yang
translokasi dalam vesikel melalui aparat Golgi, kompartemen ini menjadi menonjol dalam sitomegalovirus terinfeksi cells.34
Oleh karena itu dalam penelitian ini, kita hipotesis bahwa sitomegalovirus Manusia (HCMV) langsung menghambat ekspresi antigen MHC kelas I pada sel
endotel yang terinfeksi (ECs). Ada kemungkinan bahwa dengan mekanisme ini HCMV bisa lepas dari Surveilance kekebalan tubuh inang, sehingga
mengerahkan peradangan ringan pada pembuluh darah manusia.
Bahan dan Metode
Model in vitro sel endotel manusia yang digunakan dalam penelitian ini adalah sel-sel endotel vena umbilikalis manusia (HUVECs) budaya. Sel-sel yang
terinfeksi dengan strain cytomegalovirus manusia VHL / E, isolat klinis HCMV yang telah serial diperbanyak dalam sel endotel 35
Berbagai panjang dari infeksi digunakan (Waktu Oh, 24jam, 48 jam, 72h, 96h pasca infeksi) untuk menentukan kinetika regulasi down dari MHC kelas I
permukaan ekspresi pada sel endotel yang terinfeksi. Untuk percobaan ini, mAb W6/32, yang mengenali epitop umum untuk HLA-A,-B, dan C-antigen dirakit
dengan manusia SS2-mikroglobulin, digunakan. Pengaruh HCMV pada ekspresi antigen MHC kelas I dianalisis dengan sitometri imunofluoresensi. Sebagai
kontrol untuk dampak infeksi HCMV aktif layak dan komponen protein terdegradasi dari ECs, ultraviolet-cahaya disinari HCMV sel endotel yang terinfeksi
dan mengejek sel endotel yang terinfeksi digunakan, masing-masing.
Pewarnaan imunohistokimia memiliki kemampuan untuk mendeteksi protein sitoplasma dan permukaan. Dengan menggabungkan pewarnaan
immunoperoxidase dan cytometry aliran, ada atau tidak adanya kelas MHC lengkap saya molekul atau subunit dalam sitoplasma, dievaluasi.
Manusia Cytomegalovirus (HCMV) Infeksi
HUVECs terinfeksi HCMV ketegangan VHL / E 36, isolat klinis HCMV yang telah disebarkan melalui beberapa pasal dalam budaya HUVEC. Secara singkat,
VHL / E diisolasi dari bahan ulkus duodenum biopsi yang menunjukkan infeksi HCMV histologis.Beberapa bagian VHL / E didirikan pada budaya HUVEC
untuk propagasi serial. Ini mengisolasi ditunjukkan untuk memiliki cytopathogenicity endotel lebih besar dari HCMV AD 169, serial disebarkan dalam
fibroblas.
Konsentrasi HCMV ditentukan dengan alat tes plak, teknik dimodifikasi dari metode Wentworth dan French.37 Titer dari HCMV digunakan dalam penelitian
ini adalah 6,75 X unit pembentuk plak 105 (PFU) / ml. Persen infeksi HCMV pada budaya HUVEC ditentukan dengan pewarnaan imunohistokimia dengan
mouse anti-HCMV-IE (72-kD antigen awal langsung) (DuPont Co, Wilmington, DE) antibodi monoklonal.
Saham virus diambil dari freezer -80 0C dan dicairkan dengan cepat di bawah air keran hangat berjalan. Suspensi virus dipindahkan ke tabung steril 50 ml
dan disonikasi dengan sonikator Vibracell (Sonics & Bahan Inc, Danbury, Connecticut, USA) pada skala 60 dan amplitudo = 1 (siklus kerja 50%)
pulsa. Tingkat yang tepat dari sonikasi ditentukan mikroskopis dengan menempatkan setetes inokulum pada slide dan memeriksa di bawah perbesaran
daya rendah (10X). Tingkat sonicating optimal dicapai ketika tidak lebih dari dua sel utuh ditemukan di satu bidang daya rendah.
Monolayers konfluen dari HUVECs berbudaya dicuci dua kali dengan PBS dan inokulum virus (2-3 PFU / sel) ditambahkan ke sel. Sebuah 24-baik (2
cm2/well) piring budaya yang dibutuhkan 0,2 ml inokulum per sumur, sedangkan 6-baik (10 cm2/well) piring budaya yang dibutuhkan 1,0 ml inokulum
ditambah 0,5 ml ECGM. Kemudian piring yang berputar pada 300 xg selama 30 menit dan dicuci dua kali dengan PBS.Titik waktu ini ditetapkan T = 0 jam
pasca HCMV infeksi. Sampel selanjutnya dipanen dengan EDTA tripsin / 0.01% 0,005% pada setiap 24 jam selama 6 hari (T = 6).
{Mospagebreak}
Mock HCMV endotel Sel Terinfeksi
Prosedur menginfeksi tiruan mirip dengan protokol yang digunakan untuk infeksi HCMV. Infeksi Mock digunakan sebagai kontrol untuk infeksi HCMV untuk
memastikan bahwa efek terlihat pada HUVECs adalah hasil dari infeksi virus, daripada efek
diinduksi oleh HUVECs terdegradasi. Untuk infeksi pura-pura, HUVECs yang tidak terinfeksi dari garis keturunan yang sama dengan yang digunakan untuk
perbanyakan virus dipindahkan dari-80A € ™ C freezer untuk tabung steril 50 ml dan disonikasi dengan sonikator Vibracell (Sonics & Bahan Inc, Danbury,
Connecticut, USA), di bawah kondisi percobaan yang identik dengan yang dijelaskan untuk inokulum virus. Tingkat yang tepat dari sonikasi ditentukan
mikroskopis, seperti dijelaskan di atas.
{Mospagebreak}
Your Permeabilization Protokol
Untuk mendeteksi antigen sitoplasma, sel permeabilized sebagai berikut. Konfluen HUVEC monolayers dipanen dengan tripsin dan dicuci dua kali dengan
Seligmannâ € ™ s buffer larutan garam (sbss). Sel permeabilized dengan menambahkan aseton 34% pada sbss selama 20 menit pada 4 o C, kemudian
dibilas dua kali dengan sbss diikuti dengan inkubasi mAb utama dengan anti-HCMV-IE selama 1 jam pada 4 * C. Inkubasi ini kemudian diikuti oleh tiga
mencuci sbss, dan disentrifugasi pada 300 xg selama 1 menit. Sampel diinkubasi dengan suspensi l0Âμ1 / l50Âμ1 tikus tikus anti phycoerythrin (RAM-PE)
di 40C selama 20 menit, diikuti oleh dua mencuci sbss, dan tergantung di penyangga sbss untuk analisis aliran cytometric.
Arus cytometry
Komponen utama dari aliran cytometer termasuk sistem cairan yang mengangkut sel-sel di seluruh bidang mikroskopis, optik dari pencahayaan dan deteksi,
dan elektronik untuk pengumpulan cahaya, manajemen data dan kontrol. Arus analisis sel cytometric adalah mengesankan cepat, menghitung di urutan
ribuan sel per menit. Data yang diperoleh dari sitometri adalah objektif, kuantitatif, dan direproduksi. Kecepatan cytometer aliran membuatnya cocok untuk
studi yang melibatkan sejumlah besar sel.
Sebelum analisis ekspresi permukaan MHC kelas I dengan sitometri, sel dipanen dengan 0,005% trypsin/0.01% EDTA, disentrifugasi pada 300 xg selama
satu menit, dan dicuci dua kali dengan sbss. Suspensi sel (2x105 sel / ml) kemudian diinkubasi 30 menit pada 40C dengan salah satu mAbs berikut: W6/32
(Dako Corporation) yang reaktif dengan determinan nonpolymorphic pada HLA-ABC, fluorescein berlabel A IA yang reaktif dengan MHC kelas utuh dan
bebas, saya rantai berat, HC 10 yang reaktif dengan MHC kelas bebas, saya rantai berat, atau B2M-01 yang reaktif dengan penentu nonpolymorphic dari
132-mikroglobulin. Setelah inkubasi, sel dicuci tiga kali dalam sbss kemudian disentrifugasi pada g 300x selama 1 menit. Sampel-sampel kemudian
diinkubasi dengan suspensi 5Âμ1/150Âμl mouse anti kambing (GAM-FITC) (1:20 pengenceran di Solution Antibodi Menipiskan) (Coulter) di 40C selama 20
menit, diikuti oleh dua mencuci sbss, dan tergantung di sbss untuk aliran cytometric analisis.
Minimal 5X103 sel dianalisis pada cytometer Profil aliran epos dengan laser argon (Coulter, Hialeah, FL), dikalibrasi dengan microbeads neon 2% (Beads
Brite Standar, Coulter). MHC kelas I persen sel positif dianalisis pada skala logaritmik, dan intensitas fluoresensi rata-rata dianalisis pada skala linier. Tidak
adanya sel-sel mati di kawasan berpagar dikonfirmasi dengan pewarnaan iodida propidium. Fluoresensi nonspesifik untuk MHC kelas I, HC 10, dan B2M-01,
dinilai dengan menggantikan ini mAb utama dengan mAb IgG2a tidak relevan (Dako perusahaan), dan FITC-label IgG2b mAb (Olympus) untuk A1.4.
Fluoresensi Activated your Sortasi (FACS)
Sel layak spesifik yang terdapat dalam populasi campuran sel, yaitu terinfeksi dibandingkan HUVECs tidak terinfeksi atau sel besar versus kecil, dapat
secara fisik diisolasi dengan ketelitian tinggi dengan menggunakan sel penyortir diaktifkan fluoresensi (FACS). Fungsi pemilahan didasarkan pada prinsip
bahwa sel-sel dalam aliran cairan bergetar, setelah melewati titik analisis, akan ditangkap dalam tetesan yang pecah pada akhir sungai. Setiap tetesan yang
mengandung sel bunga diberikan muatan listrik. Sebagai tetesan lewat di antara dua piring bermuatan listrik, itu dibelokkan ke dalam pembuluh koleksi
dengan media cairan yang sesuai. Tiga populasi yang berbeda dapat dikumpulkan (positif, negatif dan netral). Untuk tujuan studi ini dua populasi sel yang
berbeda yang diurutkan berdasarkan intensitas pewarnaan fluoresen mereka, yaitu intensitas pewarnaan samar dibandingkan yang cerah untuk mAb W6/32
(MHC kelas I), dan atas dasar ukuran sel (besar versus kecil) .Sel-sel diurutkan dievaluasi untuk kemurnian mereka melalui analisis kemurnian FACS dan
pewarnaan immunoperoxidase.
Prosedur pewarnaan untuk analisis sel penyortiran dilakukan mengikuti protokol yang sama seperti dijelaskan di atas. Sebelum penyortiran, sekitar 2x106
sel dipanen dengan 0,005% trypsin/0.01% EDTA, disentrifugasi pada 300 xg selama satu menit, dan dicuci dua kali dengan sbss. Sel-sel kemudian
diinkubasi dengan cairan 1:20 mAb W6/32 (Dako Corporation) yang reaktif dengan determinan nonpolymorphic pada HLA-ABC selama 30 menit, diikuti oleh
tiga mencuci sbss. Sampel diinkubasi dengan antibodi sekunder GAM FITC selama 25 menit pada 4 ° C. Setelah inkubasi ini sampel dicuci dua kali dengan
sbss, d resuspended dalam I ml sbss dalam tabung untuk analisis sel penyortiran.
Pewarnaan imunohistokimia
Langsung pewarnaan
Slide diwarnai dengan teknik avidin berlabel dijelaskan oleh Sharma et al. (1989).Secara singkat, antibodi primer diencerkan dalam larutan antibodi
pengenceran (ADS) untuk konsentrasi yang telah ditentukan sebelumnya untuk menghasilkan pewarnaan yang spesifik maksimum dengan latar belakang
minimal. Slide yang terhidrasi dalam Tris-buffered saline (TBS) kemudian ditempatkan di 20% (v / v) larutan serum (dalam TBS) dari hewan sumber antibodi
sekunder untuk memblokir pewarnaan spesifik.Setelah inkubasi dengan antibodi primer selama 30 menit pada 370C dalam ruang dilembabkan, slide dicuci
dalam TBS dan diinkubasi selama 10 menit dengan dimurnikan afinitas terbiotinilasi, kuda anti-mouse IgG (BHAM). Antibodi sekunder (BHAM) diencerkan
dalam larutan antibodi pengenceran (ADS), Slide dicuci dalam TBS dan diinkubasi dengan peroksidase berlabel avidin-D selama 10 menit, dicuci lagi di
TBS, dan ditempatkan dalam buffer asetat (0,02 M natrium asetat / asam asetat, pH 5,2) selama 5 menit. Sebuah reaksi warna dikembangkan dengan
0,024% (b / v) 3-amino-9-etil karbazol (AEC) di NN diethylformamide diencerkan 1 sampai 10 dalam buffer asetat 0,02 M untuk hidrogen peroksida yang
ditambahkan 0,02%, kontra-diwarnai dengan Insang III hematoxylin, dan menutup-tergelincir dengan jeli gliserin.
{Mospagebreak}
Dual-immunoperoxidase pewarnaan
Untuk dual-label, sel dibuat seperti yang dijelaskan di atas, diinkubasi dengan anti-HCMV-IE, konsentrasi 100 Âμg / ml, dan divisualisasikan dengan metode
D-alkali fosfatase avidin dengan chromogen Biru Cepat (Vector). Selanjutnya, biotin terikat diblokir dengan avidin-biotin memblokir kit (Vector) dan salah
satu mAbs kedua berikut diterapkan: W6/32, konsentrasi 148 Âμg / mL (Dako korporasi), Konsentrasi 1,4 0,1 Âμg / mL (UBI Olympus ), HC 10, konsentrasi
106 Âμg / mL, atau B2M-01 konsentrasi 100 Âμg / mL (Monosan, Belanda) (Tabel 1). Kompleks antibodi terikat terdeteksi menggunakan teknik avidin-D
berlabel dan chromogen 3-amino-9-ethylcarbazole. Untuk kontrol negatif, antibodi primer dan sekunder mAbs diganti dengan mAbs tidak relevan dari isotipe
murine sama dan konsentrasi.
Untuk kuantisasi persentase sel yang terinfeksi dan noninfected mengekspresikan MHC kelas I, dua ratus pusat sel dalam slide cytocentrifuged dihitung dua
kali oleh standar terang-bidang mikroskop dan hasil rata-rata dihitung.
Tabel 1. Karakteristik pengikatan antibodi monoklonal (mAbs) yang digunakan dalam penelitian ini
Hasil dan Pembahasan
Hasil penelitian ini mendukung hipotesis bahwa infeksi HCMV turun mengatur ekspresi endotel MHC kelas I. Kami telah menunjukkan bahwa penurunan
ekspresi MHC kelas I terjadi baik di permukaan (Gambar 1) dan dalam sitoplasma sel yang terinfeksi HCMV(Gambar 2). Selanjutnya, dengan pewarnaan
immunoperoxidase ganda, kita 38, 39consistently mengamati pola penurunan ekspresi saya kelas sebagai sel yang terinfeksi berkembang menjadi
cytomegaly. Sementara sel-sel yang baru terinfeksi terus menunjukkan dekat tingkat normal kelas I antigen, besar, sel granular karakteristik dari tahap
infeksi terlambat mengungkapkan sedikit atau tidak terdeteksi MHC kelas I antigen pada permukaan dan sitoplasma. Namun, temuan ini bertentangan
dengan hasil Grundy et al, di mana mereka mendeteksi peningkatan kelas I molekul MHC di daerah perinuklear dari fibroblasts.40 terinfeksi Perbedaanperbedaan yang luar biasa. Mungkin karena epitop yang berbeda diakui oleh antibodi monoklonal digunakan , atau bahwa fibroblas memiliki karakteristik
yang berbeda daripada ECs.
Gambar 1. Perbandingan ekspresi MHC kelas antigen pada sel endotel, yang diukur dengan persen dari sel positif untuk antigen MHC kelas I, di pura-pura,
UV-HCMV dan budaya yang terinfeksi.
Beberapa laboratorium telah melaporkan hasil yang bertentangan mengenai regulasi antigen MHC kelas I pada sel HCMV terinfeksi. Data yang dihasilkan
oleh beberapa laboratorium tampaknya mendukung HCMV-dimediasi peningkatan ekspresi MHC kelas antigen 41-43, sedangkan laporan lainnya
menunjukkan penurunan dalam ekspresi MHC kelas I antigen.40, 44, 45 Perlu dicatat bahwa data mereka diperolehbawah berbagai kondisi
percobaan. Satu penjelasan yang mungkin dari perbedaan ini adalah bahwa nilai-nilai ekspresi MHC kelas I dihitung dengan mengukur tingkat rata-rata
MHC kelas seluler saya ekspresi di tingkat populasi. Pendekatan ini dapat mengakibatkan peningkatan keseluruhan MHC kelas I antigen ekspresi dalam
budaya yang terinfeksi yang memiliki persentase rendah infeksi, karena efek interferon B diproduksi oleh sel yang terinfeksi pada cells.46 tidak terinfeksi
Gambar 2. Photomcrograph dual-immunopero-xidase pewarnaan HUVECs HCMV terinfeksi, pada 72 pi jam, menggunakan mAb anti-HCMV-IE untuk CMV
(warna gelap nuklir), dan mAb W6/32 (warna sitoplasma gelap) untuk MHC kelas I. Pada titik waktu ada sel yang terinfeksi banyak besar (mutinucleated)
yang negatif untuk MHC kelas I pewarnaan. Perbesaran 100x asli.
{Mospagebreak}
Mekanisme yang tepat dimana HCMV turun mengatur ekspresi permukaan MHC kelas I belum dijelaskan. Satu penjelasan yang mungkin mungkin
berhubungan dengan produk gen UL18, yang homolog MHC kelas rantai berat. Ini mimikri molekuler dapat menyebabkan pengikatan kompetitif untuk 82
mikroglobulin antara kelas I rantai berat dan UL18 gen product.47 ini mengikat kompetitif bisa bertanggung jawab atas gangguan dari antigen MHC kelas I
dalam retikulum endoplasma / cis-kompartemen Golgi, kemudian mencegah sisi rantai glikosilasi dari antigen MHC kelas I, sehingga transportasi ini
molecules.2 Teori lain adalah bahwa HCMV mencegah perakitan antara MHC kelas I rantai berat dan mikroglobulin ß2Â. Studi kami menunjukkan bahwa
penurunan ekspresi permukaan antigen MHC kelas I didampingi oleh penurunan ekspresi di tingkat sitoplasma. Ekspresi sitoplasma B2-m pada HUVECs
yang terinfeksi juga menurun sebagai infeksi berlangsung (data tidak dipublikasikan).HUVECs baru terinfeksi ditandai dengan inti kecil dengan anti-HCMVIE pewarnaan, masih normal untuk mengekspresikan menurunnya tingkat 132-mikroglobulin ekspresi dibandingkan dengan HUVECs yang tidak terinfeksi,
sementara muka HUVECs terinfeksi menunjukkan penurunan terhadap pewarnaan 132m non terdeteksi.Penurunan ekspresi kelas bebas sitoplasma MHC
rantai berat terlihat pada HUVECs yang terinfeksi. Kemungkinan bahwa mAb HC10 digunakan dalam penelitian ini terikat untuk UL18 produk gen, kelas
saya rantai homolog berat dikodekan oleh HCMV, bisa dikeluarkan sejak mAb HC10 memiliki kekhususan untuk mengikat hanya rantai berat gratis. 20, 48
Selain itu, pewarnaan immunoperoxidase ganda untuk HCMV-IE antigen dan kelas I rantai berat bebas pada sel cytocentrifuged menunjukkan bahwa EC
yang baru terinfeksi masih menyatakan tingkat tertentu kelas I rantai berat gratis dan EC tidak terinfeksi menyatakan intensitas yang lebih tinggi dari rantai
berat gratis. Percobaan ini memberikan kontrol internal pada spesifisitas HC mAb I0. Hasil ini memberikan dukungan tambahan untuk asumsi bahwa HCMV
turun mengatur ekspresi permukaan MHC kelas I dengan mengganggu produksi SS2-mikroglobulin dan kelas bebas, saya rantai berat, dan perakitan
selanjutnya dari kelas I subunit. Sebaliknya, beberapa peneliti menunjukkan 49 bahwa penurunan tingkat kelas I antigen tidak mempengaruhi mRNA kelas I
rantai berat dan tingkat 62m. Dapat disimpulkan bahwa penurunan ekspresi permukaan dari kelas I MHC, sebagian, adalah akibat dari gangguan perakitan
kelas I molekul MHC. Selain itu, studi pada murine CMV (MCMV) mengungkapkan bahwa gen MCMV awal mencegah penyajian peptida MCMV endogen,
pp89, dengan menghalangi pengangkutan peptida-load MHC kelas I molekul ke dalam kompartemen medial-Golgi 45 Gangguan serupa di transportasi
intraseluler antigen MHC kelas I telah diteliti secara rinci dalam sel tipe adenovirus 2 yang terinfeksi. 50
Kesimpulannya, kami telah menunjukkan bahwa HCMV langsung menurunkan permukaan dan ekspresi sitoplasmik dari antigen MHC kelas I pada ECs
terinfeksi.Mekanisme yang tepat dari fenomena ini belum dijelaskan, namun hasil studi ini sangat menyarankan bahwa HCMV menyebabkan gangguan
pada sintesis protein subunit MHC kelas I, sehingga HCMV dapat melarikan diri dari imunosurveilans host.
Aknowledgements
Saya ingin menyampaikan penghargaan saya kepada Prof Dr Daniel D. Sedmak, Prof William J Buesching, PhD, dan Assoc Prof W. James Waldman, PhD,
The Ohio State University, bimbingan kritik ilmiah mereka. OTO-BAPPENAS (Bahasa Indonesia Pembangunan Nasional dan Badan Perencanaan) untuk
pelatihan Pascasarjana dan pendanaan.
Referensi
1. Lamberson H, Jr Cytomegalovirus (CMV): agen, patogenesis dan epidemiologi.Prog Clin Biol Res 1985; 182:149-173.
2. Bruggeman C. Cytomegalovirus dan latensi: gambaran umum. Virchows Arch B your Jalan 1993; 64:325-333.
3. Gnann J, Jr, Ahlmen J, Svalander C, Olding L, M Oldstone, Nelson J. sel inflamasi dalam transplantasi ginjal yang terinfeksi oleh sitomegalovirus
manusia. Am J Pathol 1988; 132:239-247.
4. Griffiths P, Grundy J. Molekuler biologi dan imunologi dari sitomegalovirus. Biochem J 1987; 241:313-324.
5. Merigan T, Resta S. Cytomegalovirus: di mana kita berada dan di mana kita akan pergi? Wahyu Infect Dis 1990; 12: S693-S700.
6. Muhlestein JB, Horne BD, Carlquist JF, Madsen TE, Bair TL, Pearson RR, dkk.Cytomegalovirus seropositif dan C-Reactive Protein Memiliki Nilai prediktif
Independen dan Gabungan untuk Kematian Pasien Penyakit Arteri Koroner Menunjukkan angiographically. Sirkulasi 2000; 102 (16) :1917-2891.
7. Zhu J, Shearer GM, Norman JE, Pinto LA, Marincola FM, Prasad A, et al. Tuan rumah Respon untuk Infeksi Cytomegalovirus sebagai Determinan dari
Kerentanan terhadap Penyakit Arteri Koroner: Seks Berbasis Perbedaan Peradangan dan Jenis Respon kekebalan. Sirkulasi 2000; 102 (20) :2491-2891.
8. Lawrence GS. Transplantasi aterosklerosis terkait: peran infeksi sitomegalovirus.Dalam: Simposium Nasional Pertama dari Asosiasi indonesian
Aterosklerosis dan Penyakit Vaskular; 1998; Jakarta, Indonesia; 1998.
9. Lawrence GS. Sensitivitas tinggi C Reactive Protein di Cluster Sindrom Metabolik.In: 8th Asia Pasifik Masyarakat Patolog Kongres; 2003; Denpasar-Bali,
Indonesia; 2003.
10. Farrugia E, Schwab T. klinik Subspeciality: nefrologi - manajemen dan pencegahan infeksi sitomegalovirus setelah transplantasi ginjal. Mayo Clin Proc
1992; 67:879-890.
11. Pober J, R. Cotran Sitokin dan biologi sel endotel. Fisiologis Rev 1990; 70:427-451.
12. Neefjes J, Momburg F. your biologi presentasi antigen. Sekarang pendapat dalam imunologi 1993; 5:27-34.
13. Oldstone M. anatomi Molekuler kegigihan virus. J Virol 1991; 65:6381-6386.
14. Smiley M, Wlodaver C, Grossman R, Barker C, Perloff L, Tustin N, et al. Peran imunitas pretransplant dalam perlindungan dari penyakit sitomegalovirus
setelah transplantasi ginjal. Transplantasi Proc 1985; 40:157-161.
15. Faull R, R Starr, Russ G. Vascular sel endotel ekspresi molekul adhesi dan antigen HLA di allografts ginjal. Transplantasi Proc 1989; 21:316-317.
16. Rinaldo C, Jr Penekanan kekebalan oleh herpesvirus. Annu Rev Med 1990; 41:331-338.
17. Rinaldo C, Jr modulasi ekspresi antigen major histocompatibility kompleks dengan infeksi virus. Am J Pathol 1994; 144:637-650.
18. Pober J, interaksi Cotran imunologi R. limfosit T dengan endotelium pembuluh darah. Kemajuan dalam Immunol 1991; 50:261-302.
19. Goodfellow P, Jones E, van Heyningen V, Salomo E, Bobrow M. Gen Beta2-mocroglobulin adalah pada kromosom 15 dan tidak di daerah HL-A. Alam
1975; 254:267-268.
20. Stam N, Vroom T, P Peters, Pastoors E, Ploegh H. HLA-A dan HLA-B antibodi monoklonal spesifik reaktif dengan rantai berat bercak gratis di barat,
dalam formalin-fixed, parafin-embedded bagian jaringan dan dalam cryoimmuno-elektron mikroskop .Internasional Imunologi 1990; 2:113-125.
21. Townsend A, Ohlen C, Bastin J, Ljunggren H, Foster L, Karre K. Asosiasi kelas I major histocompatibility berat dan rantai ringan yang disebabkan oleh
peptida virus.Alam 1989; 340:443-448.
22. Townsend A, Elliot T, Cerundolo V, Foster L, Pemangkas Rambut B, Tse A. Majelis MHC kelas I molekul dianalisis secara in vitro. Your 1990; 62:285295.
23. Bernabeu C, van de Rijn M, Lerch P, Terhorst C. Beta 2-mikroglobulin dari rekan serum dengan MHC kelas I antigen pada permukaan sel kultur. Alam
1984; 308:642-645.
24. del Val M, Schlicht H, Ruppert T, Reddehase M, Koszinowski U. Efisien pengolahan urutan antigen untuk presentasi oleh molekul MHC kelas I
tergantung pada residu tetangganya dalam protein. Your 1991; 66:1145-1153.
25. Elliott T, Elvin J, Cerundolo V, Allen H, Townsend A. Persyaratan Struktural untuk perubahan peptida-induced konformasi kelas bebas histokompatibilitas
utama kompleks saya rantai berat. Eur J Immunol 1992; 22:2085-2091.
26. Christinck E, Luscher M, Pemangkas Rambut B, D. Williams Peptida mengikat untuk kelas I MHC pada sel-sel hidup dan kuantisasi kompleks diperlukan
untuk lisis CTL. Alam 1991; 352:67-70.
27. Otten G, Bikoff E, Ribaudo R, S Kozlowski, Margulies D, Germain R. Peptida dan Beta2-mikroglobulin regulasi kelas permukaan sel MHC konformasi
dan ekspresi. J Immunol 1992; 148:3723-3732.
28. Libby P, Salomon R, DD P, Schoen M, Pober J. Fungsi sel dinding pembuluh darah yang berkaitan dengan pengembangan transplantasi terkait
arteriosklerosis koroner.Transplantasi Proc 1989; 21:3677-3684.
29. Ou W, Cameron P, Thomas D, Bergeron J. Asosiasi intermediet lipat dari glikoprotein dengan calnexin selama pematangan protein. Alam 1993;
364:771-776.
30. Jackson M, Cohen-Doyle M, Peterson P, D. Williams Peraturan MHC kelas I transportasi oleh pendamping molekul, calnexin (P88, IP90). Ilmu 1994;
263:384-387.
31. Brodsky F, Guagliardi L. biologi sel pengolahan antigen dan presentasi. Annu Rev Immunol 1991; 9:707-744.
32. Carpenter S, Chesebro B. Perubahan tropisme sel inang yang terkait dengan dalam replikasi in vitro virus anemia kuda menular. J Virol 1989; 63:24922496.
33. Ho M. Epidemiologi infeksi sitomegalovirus. Wahyu Infect Dis 1990; 12: S701-S710.
34. Wathen M, Stinski M. pola Temporal transkripsi sitomegalovirus manusia: pemetaan RNA virus disintesis pada langsung awal, awal kali, dan akhir
setelah terinfeksi. J Virol 1982; 41:462-477.
35. Waldman W, Sneddon J, R Stephens, Roberts W. Peningkatan cytopathogenicity endotel yang disebabkan oleh strain virus sitomegalo diperbanyak
dalam sel endotel. J Med Virol 1989; 28:223-230.
36. Waldman W, W Roberts, Davis D, Williams M, Sedmak D, Stephens R. Pelestarian cytopathogenicity endotel alami sitomegalovirus oleh propagasi
dalam sel endotel. Arch Virol 1991; 117:143-164.
37. Wentworth B, Perancis L. Plak uji strain sitomegalovirus dari asal-usul manusia.Proc Soc Exp Biol Med 1970; 135:253-258.
38. Lawrence GS, Waldman J, Sedmak DD. Peraturan bawah kompleks histokompatibilitas kelas utama saya di cytomgalovirus manusia terinfeksi sel-sel
endotel. In: Prosiding 4th Asia Pasifik Asosiasi Patolog; 1995; Beijing, Cina; 1995.
39. Lawrence GS, Sedmak DD. Kaitan Infeksi Cytomegalovirus Mencari Google Artikel Transplantasi. In: Up-date Nasional Ilmu Peyakit Infeksi 1997 Dan
Diskusi Panel Infeksi Cytomegalovirus di Indonesia, Dies Natalis Univeristas Indonesia Ke-48; 1997; Universitas Indonesia-Jakarta; 1997.
40. Barnes P, Grundy J. Down-peraturan dari kelas I dan HLA heterodimer Beta2-mikroglobulin pada permukaan sel yang terinfeksi sitomegalovirus. J Gen
Virol 1992; 73:2395-2403.
41. Grundy J, Ayles H, McKeating J, Jagal R, Griffiths P, Poulter L. Peningkatan kelas ekspresi antigen HLA I oleh sitomegalovirus: peran dalam amplifikasi
infeksi virus. J Med Virol 1988; 25:483-495.
42. Hosenpud J, Chou S, Wagner C. Cytomegalovirus akibat regulasi kelas major histocompatibility kompleks saya ekspresi antigen dalam sel otot aorta
manusia halus.Transplantasi Proc 1991; 52:896-903.
43. van Dorp W, Jonges E, Bruggeman C, Daha M, L van Es, van der Woude F. Induksi Langsung MHC kelas I, tapi tidak kelas II, ekspresi pada sel endotel
oleh infeksi sitomegalovirus. Transplantasi Proc 1989; 48:469-472.
44. Campbell A, J. Slater Down-peraturan histokompatibilitas utama kelas kompleks saya sintesis oleh sitomegalovirus ekspresi gen murin awal. J Virol
1994; 68:1805-1811.
45. del Val M, Hengel, H., Hacker, H., Hartlaub, U., Ruppert, T., Lucin, P., dan Koszinowski, UH (1992). Cytomegalovirus mencegah presentasi antigen
dengan menghalangi pengangkutan peptida-load kelas major histocompatibility kompleks saya molekul ke dalam kompartemen medial-Golgi. J Exp Med
1992; 176:729-738.
46. Steinmassl M, Hamprecht K. analisis fluoresensi Ganda cytomegalovirus manusia (HCMV) terinfeksi budaya fibroblast manusia dengan meningkatkan
aliran cytometry dari kelas I ekspresi MHC pada sel yang tidak terinfeksi dan mengurangi pada sel yang terinfeksi. Arch Virol 1994; 135:75-87.
47. Grundy J. Peran B2-mikroglobulin pada infeksi sitomegalovirus. Scand J Rheumatology 1990; S87 :98-101.
48. Stam N, meludah H, Ploegh H. Antibodi monoklonal yang diajukan terhadap didenaturasi HLA-B rantai lokus berat mengizinkan karakterisasi biokimia
tertentu HLA-C produk lokus. J Immunol 1986; 137:2299-2306.
49. Beersma M, Bijlmakers M, Ploegh H. sitomegalovirus Manusia turun-mengatur ekspresi HLA kelas I dengan mengurangi stabilitas rantai IH kelas. J
Immunol 1993; 151:4455-4464.
50. Andersson M, Paabo S, T Nilsson, Peterson PA. Gangguan transportasi intraseluler antigen MHC kelas I sebagai alat mungkin untuk adenovirus untuk
menghindari pengawasan kekebalan. Your 1985; 43:215-222.
Terakhir Tidak dapat melakukan fork (Senin, 29 Mei 2006 04:35