plagiat merupakan tindakan tidak terpuji plagiat
advertisement
PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI EFEK EKSTRAK ETANOLIK BUAH LABU AIR (Langenaria siceraria (Mol.) Standley) SEBAGAI IMUNOMODULATOR MELALUI PENGAMATAN KAPASITAS DAN INDEKS FAGOSITOSIS MAKROFAG PADA TIKUS JANTAN Sprague Dawley YANG DIPEJANI DOKSORUBISIN SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi Oleh : Maria Larizza Handoyo NIM : 098114075 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI EFEK EKSTRAK ETANOLIK BUAH LABU AIR (Langenaria siceraria (Mol.) Standley) SEBAGAI IMUNOMODULATOR MELALUI PENGAMATAN KAPASITAS DAN INDEKS FAGOSITOSIS MAKROFAG PADA TIKUS JANTAN Sprague Dawley YANG DIPEJANI DOKSORUBISIN SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi Oleh : Maria Larizza Handoyo NIM : 098114075 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013 i PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI ii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI iii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI HALAMAN PERSEMBAHAN “Jika yang lebih baik bagimu masih mungkin, mengapakah engkau berhenti pada yang cukup?” -(Mario Teguh)JESUS looked at them and said, “With man this is impossible, But with GOD all things are possible.” Matthew 19:26 Skripsi ini aku persembahkan kepada : Mami, dan OOku, sebagai ungkapan rasa hormat dan baktiku karena telah menyerahkan segala waktu, tenaga, dan pikirannya untuk merawat dan mendampingiku terus bertumbuh. Otniel Sanjaya, yang menghadirkan semangat dan kebahagian dalam hidupku. Sahabatku Vincentia Adelina serta almamaterku. iv PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI v PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI vi PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PRAKATA Puji syukur kepada Tuhan karena berkat rahmat dan karunia-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Efek Ekstrak Etanolik Buah Labu Air (Langenaria siceraria (Mol.) Standley) sebagai Imunomodulator melalui Pengamatan Kapasitas dan Indeks Fagositosis Makrofag pada Tikus Jantan Sprague Dawley yang Dipejani Doksorubisin” sebagai salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Dalam proses penelitian dan penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan dan dukungan dari semua pihak sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada : 1. Bapak Prof. Dr. CJ. Soegihardjo, Apt. sebagai Dosen Pembimbing yang telah memberikan bimbingan, pengarahan serta ilmu dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini. 2. Ibu Agustina Setiawati, S. Farm., Apt., M.Sc. sebagai Dosen Pembimbing yang telah memberikan bimbingan, pengarahan serta ilmu dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini. 3. Ibu Phebe Hendra, Ph. D., Apt. sebagai Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini. 4. Ibu Yunita Linawati, M.Sc., Apt. sebagai Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini. 5. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. sebagai Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. vii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 6. Segenap dosen, laboran dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 7. Instalasi Tulip Rumah Sakit Dr. Sardjito atas kesediaanya menyediakan doksorubisin untuk kepentingan penelitian ini. 8. Pimpinan dan staff LPPT UGM : Ibu Istini dan Pak Sutari yang telah mengijinkan penulis untuk melakukan penelitian serta membantu selama masa penelitian. 9. Kelompok labu air (Vincentia Adelina Hariyanto, Joseph Singgih Dwilaksono, dan Reza Eka Putra) terimakasih atas kesabaran dan kerjasama yang telah dilewati bersama dalam penelitian ini 10. Sahabat-sahabatku, Christina, Vanny Christy, dan Yenny atas doa dan dukungannya selama ini. 11. Teman-teman Farmasi kelas B angkatan 2009, serta teman-teman kos Difa (Melantina Maria, Maretta Putri, Defillia Anogra, Oki Christina, Flavia Norphina Sungkit, dan Galih). 12. Semua pihak yang telah memberi dukungan dan bantuan yang tidak dapat disebutkan satu persatu. Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini banyak kekurangan dan jauh dari sempurna, untuk itu dengan segala kerendahan hati penulis mengharapkan saran dan kritik guna perbaikan dan penyempurnaan skripsi ini. Harapan penulis semoga penelitian dan penyusunan skripsi ini bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang Farmasi. Penulis viii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ....................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING................................................ ii HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI ........................................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................... iv PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ................ v PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................... vi PRAKATA ...................................................................................................... vii DAFTAR ISI ................................................................................................... viii DAFTAR TABEL ........................................................................................... xii DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xiii DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiv INTISARI ........................................................................................................ xv ABSTRACT ...................................................................................................... xvi BAB I PENGANTAR ...................................................................................... 1 A. Latar Belakang ............................................................................................ 1 1.Permasalahan .......................................................................................... 3 2.Keaslian penelitian .................................................................................. 4 3. Manfaat penelitian.................................................................................. 5 B. Tujuan ......................................................................................................... 5 1.Tujuan umum .......................................................................................... 5 2.Tujuan khusus ......................................................................................... 5 ix PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ............................................................... 6 A.Kemoterapi dan Kemoterapi Kombinasi (Ko-Kemoterapi) ........................... 6 B. Doksorubisin ............................................................................................... 8 C. Respon Seluler dan Humoral Terhadap Sel Tumor ...................................... 11 D. Makrofag .................................................................................................... 12 E. Imunomodulator .......................................................................................... 15 F. Labu Air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) .......................................... 16 G. Landasan Teori ........................................................................................... 18 I. Hipotesis ...................................................................................................... 20 BAB III METODE PENELITIAN ................................................................... 21 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................... 21 B. Variabel dan Definisi Operasional ............................................................... 21 C. Bahan Penelitian.......................................................................................... 22 D. Alat Penelitian............................................................................................. 23 E. Tata Cara Penelitian..................................................................................... 24 1. Determinasi tanaman ............................................................................ 24 2. Pembuatan ekstrak etanolik................................................................... 24 3. Pembuatan sediaan................................................................................ 25 4. Penyiapan hewan uji ............................................................................. 25 5. Perlakuan hewan uji .............................................................................. 25 6. Isolasi makrofag ................................................................................... 26 7. Uji fagositosis makrofag dengan menggunakan latex ........................... 27 8. Perhitungan statistik.............................................................................. 28 x PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 30 A. Hasil Determinasi Tanaman ........................................................................ 30 B. Penetapan Kadar Air Serbuk Kering dan Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Labu Air (Lageneraria siceraria)........................................................................ 31 C. Penetapan Dosis dan Lama Perlakuan Ekstrak Etanol Buah Lageneraria siceraria..................................................................................................... 33 D. Uji Fagositosis Makrofag ............................................................................ 34 E. Efek Imunomodulator Ekstrak Etanol Buah Labu Air (Lagenaria siceraria) Terhadap Tikus Jantan Galur Sprague Dawley yang Dipejani Doksorubisin .................................................................................................................. 38 1. Pengaruh ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) dosis 1000 mg/kgBB; 750 mg/kgBB; dan 500 mg/kgBB terhadap kapasitas fagositosis makrofag pada hewan uji tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin .......................................................................................... 43 2. Pengaruh ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) dosis 1000 mg/kgBB; 750 mg/kgBB; dan 500 mg/kgBB terhadap indeks fagositosis makrofag pada hewan uji tikus jantan galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin .......................................................................................... 47 3. Dosis efektif pemberian ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) terhadap peningkatan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag serta terhadap proliferasi limfosit pada hewan uji tikus jantan galur Sprague dawley yang dipejani doksorubisin......................................................... 50 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................... 53 xi PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI A. Kesimpulan ................................................................................................. 53 B. Saran ........................................................................................................... 53 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 55 LAMPIRAN .................................................................................................... 60 BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................... 71 xii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR TABEL Tabel I. Perlakuan terhadap hewan uji........................................................ Tabel II. Purata ± SE kapasitas fagositosis makrofag setelah pemberian ekstrak etanol labu air dalam berbagai peringkat dosis.................. Tabel III. 38 Purata ± SE indeks fagositosis makrofag setelah pemberian ekstrak etanol labu air dalam berbagai peringkat dosis.................. Tabel IV. 26 39 Hasil analisis uji Post-hoc LSD kapasitas fagositosis makrofag setelah pemberian ekstrak etanol labu air dalam berbagai peringkat dosis................................................................................ Tabel V. 41 Hasil analisis uji Post-hoc LSD indeks fagositosis makrofag setelah pemberian ekstrak etanol labu air dalam berbagai peringkat dosis................................................................................ xiii 41 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Struktur doksorubisin…………………………………………… Gambar 2. Struktur antrasiklin yang terkonjugasi dengan formaldehid: 8 doxoform (R=OH)……………………………………………… 9 Gambar 3. Virtual cross-linking antara doksorubisin dan DNA..…………. 10 Gambar 4. Buah labu air……………………………………………………. 17 Gambar 5. Perbandingan morfologi makrofag tikus dengan pengecatan Giemsa perbesaran 100x............................................................... Gambar 6. 37 Diagram batang kapasitas fagositosis tikus perlakuan ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai peringkat dosis.............................................................................. Gambar 7. 43 Diagram batang indeks fagositosis tikus perlakuan ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai peringkat dosis.............................................................................. xiv 47 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Buah labu air.............................................................................. 61 Lampiran 2. Komposisi media tumbuh makrofag.......................................... 62 Lampiran 3. Data orientasi kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag pada tiap kelompok kontrol………………………... Lampiran 4. 62 Analisis statistik kapasitas fagositosis pengaruh ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai variasi dosis terhadap imunosupresan doksorubisin………………….. Lampiran 5. Analisis 63 tatistic indek fagositosis makrofag pengaruh ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai variasi dosis terhadap imunosupresan doksorubisin………………………………………………….. Lampiran 6. Lampiran 7. 66 Determinasi buah labu air (Langenaria siceraria (Mol.) Standley)…………………………………………………….. 69 Persetujuan ethical clearance………………………………… 70 xv PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Intisari Penggunaan doksorubisin sebagai agen kemoterapi dapat menimbulkan efek supresi sumsum tulang belakang, penurunan interleukin-2 (IL-2) dan produksi interferon-γ (INF-γ), sehingga produksi monosit mengalami penurunan yang diikuti penurunan produksi makrofag yang merupakan sistem imun seluler. Oleh karena itu perlu dikembangkan agen ko-kemoterapi untuk mengurangi efek imunosupresi dari doksorubisin salah satunya buah labu air (Langenaria siceraria) sebagai imunomodulator. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh informasi mengenai pengaruh pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) terhadap kapasitas dan indeks fagositosis makrofag tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin.. Penelitian ini merupakan eksperimental murni. Sebanyak 25 ekor tikus Sprague Dawley dibagi menjadi 5 kelompok : Kelompok I sebagai kelompok kontrol pelarut. Kelompok II sebagai kelompok kontrol doksorubisin. Kelompok III diberikan doksorubisin dan ekstrak labu air dosis 1000 mg/kg BB secara p.o. Kelompok IV diberikan doksorubisin dan ekstrak labu air dosis 750 mg/kg BB secara p.o. Dan kelompok V diberikan doksorubisin dan ekstrak labu air dosis 500 mg/kg BB secara p.o. Perlakuan dilakukan selama 15 hari terus-menerus kemudian diamati kapasitas dan indeks fagositosis makrofag. Data dianalisis dengan uji one way ANOVA taraf kepercayaan 95% yang dilanjutkan dengan uji LSD. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) berpengaruh terhadap kapasitas dan indeks fagositosis makrofag pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin dimana dosis paling efektif pemberian ekstrak etanolik buah labu air untuk meningkatkan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag, yaitu 1000 mg/KgBB. Kata kunci : Langenaria siceraria, imunomodulator, kapasitas fagositosis, indeks fagositosis makrofag, doksorubisin xvi PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI ABSTRACT Doxorubicin, as chemotherapy, has immunosupresion effect such as bone marrow suppression, interleukin-12 (IL-12) depression, and interferon- γ (INF-γ) depression. The depression of monocyte productions followed by depression of macrophage productions which plays role as cellular immune system. Therefore, it’s need to develop co- chemotherapy to reduce doxorubicin’s immunosupresion effect by Langenaria siceraria fruits as immunomodulator. The objective of this study was to obtain information on the effect of ethanolic extract of Langenaria siceraria on the phagocytic capacity and phagocytic index of macrophages on Sprague Dawley rats induced by doxorubicin. This research design was experimental using one way randomized complete design. Each group was given doxorubicin 4,5 mg/Kg BW + ethanolic extract of Langenaria siceraria with dose of 1000 mg/Kg BW; 750 mg/Kg BW; 500 mg/Kg BW, solvent control group was given CMC Na 1%, and doxorubicin control group was given doxorubicin 4,5 mg/Kg BW. Treatment was given 15 days respectively and then it was continued by evaluating capacity and index phagocytosis of macrophages. Data were analyzed by one way ANOVA test with a confidence level of 95%, followed by LSD. The result showed that administration of ethanolic extract of Langenaria siceraria has an effect on capacity and index phagocytosis of macrophages on Sprague Dawley rats induced by doxorubicin with 1000 mg/Kg BW as the most effective dose to increase capacity and index phagocytosis of macrophages. Key words : Ethanolic extract of Langenaria siceraria, immunomodulator, phagocytic capacity of macrophage, phagocytic index of macrophages, doxorubicin xvii PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Kanker disebabkan oleh sel abnormal dalam jaringan tubuh yang tumbuh dan berkembang dengan cepat dan tak terkendali. Kanker merupakan penyakit mematikan kedua di dunia setelah penyakit jantung. Peningkatan jumlah pasien kanker di dunia sebanyak 6,25 juta setiap tahunnya. Data dunia menyatakan bahwa sebanyak 11-12 juta orang saat ini merupakan pengidap berbagai jenis kanker (Zuhud, 2011). Penyembuhan kanker secara medis ditangani dengan kemoterapi, operasi, dan radioterapi (Zuhud, 2011). Penggunaan agen kemoterapi sistemik tidak selektif dan sangat toksik bagi jaringan lain yang normal. Selain itu, penggunaan kemoterapi yang berkepanjangan dapat menyebabkan melemahnya sistem imunitas tubuh dan menyebabkan pasien rentan terhadap penyakit dan infeksi yang lain (Patel, Shukla, dan Gupta 2007). Doksorubisin merupakan salah satu agen kemoterapi yang banyak digunakan dalam terapi kanker. Doksorubisin merupakan antibiotik golongan antrasiklin yang banyak digunakan untuk terapi berbagai macam jenis kanker seperti leukemia akut, kanker payudara, kanker tulang dan ovarium (Childs, Phaneuf, Dirks, Phillips, and Leeuwenburgh, 2002). Penggunaan doksorubisin dapat menimbulkan efek supresi sumsum tulang belakang (Phillip, Garai, dan Valenzuela, 2006), penurunan interleukin-2 (IL-2) dan produksi interferon-γ (INF-γ) (Zhang, Li, Wu, Yong Jie, dan Ming Tang, 1 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 2005) secara signifikan sehingga menyebabkan timbulnya 2 leucopenia (penurunan sel darah putih) (Anonima, 2007). Salah satu komponen sel darah putih (leukosit) yang berperan dalam sistem imun seluler yaitu monosit. Monosit yang meninggalkan sirkulasi darah kemudian mengalami perubahan-perubahan dan menetap di jaringan yang disebut makrofag (Baratawidjaja, 2000). Makrofag yang teraktivasi menjalankan fungsi fagositosis terhadap bakteria, protozoa dan sel tumor dalam sistem imun non spesifik maupun berfungsi sebagai antigen presenting cells (APC) (Baratawidjaja dan Rengganis, 2009). Oleh karena itu, penggunaan doksorubisin sebagai agen kemoterapi dapat menyebabkan penurunan sistem imun seluler yang disebabkan oleh penurunan produksi makrofag. Dengan melihat efek imunosupresan dari penggunaan doksorubisin tersebut, maka pengembangan agen antikanker dengan efek imunosupresan yang rendah maupun agen kombinasi yang dapat menurunkan efek imunosupresan dari doksorubisin masih perlu terus diupayakan. Salah satu agen kombinasi yang dapat digunakan untuk mengurangi efek imunosupresan dari doksorubisin yaitu buah labu air (Langenaria siceraria). Menurut Gangwal, Panmar, Gupta, Rana and Sheth. (2008) adanya kandungan terpenoid dan flavonoid yang diidentifikasi merupakan asam oleanolat dan isoquersitrin pada ekstrak methanol fraksi nbutanol dan etil asetat buah labu air (Langenaria siceraria) secara signifikan dapat meningkatkan total sel darah putih, neutrofil, dan jumlah limfosit. Menurut Deshpande, Choundhari, Mishra, Meghre, Wadodkar, dan Dorle (2008), ekstrak etanol Langenaria siceraria secara signifikan dapat mencegah penurunan respon sistem imun humoral, respon imun seluler, dan persen neutrofil pada tikus yang PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 3 dipejani chemical stressor seperti pyrogallol (Deshpande, et al., 2008). Hal ini menunjukkan bahwa adanya kandungan terpenoid dan flavonoid pada ekstrak buah labu air yang memiliki potensi sebagai imunomodulator. Penelitian ini dirancang untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak entanol buah labu air pada sistem imun dengan mengkaji kemampuan fagositosis makrofag melalui pengamatan kapasitas dan indeks fagositosis pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang sebelumnya telah dipejani doksorubisin, sehingga dapat diperoleh informasi penggunaan ekstrak entanol buah labu air sebagai imunomodulator yang dapat digunakan sebagai ko-kemoterapi untuk mengurangi efek imunosupresan dari penggunaan doksorubisin. Setelah diketahui efek ekstrak etanolik buah labu air sebagai imunomodulator, hasil dari penelitian ini dapat digunakan untuk melengkapi penelitian bersama mengenai ekstrak etanolik buah labu air sebagai hepatoprotektor, kardioprotektor dan imunomodulator pada tikus jantan galur Sprague Dawley yang sebelumnya telah dipejani doksorubisin. 1. Rumusan masalah Dari uraian diatas, dapat ditarik rumusan permasalahan: a. Apakah pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) bepengaruh terhadap kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin? b. Berapa dosis paling efektif pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) untuk meningkatkan kapasitas fagositosis dan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 4 indeks fagositosis makrofag pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin? 2. Keaslian penelitian Berdasarkan penelusuran literatur yang dilakukan, penelitian mengenai efek ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) sebagai imunomodulator melalui pengamatan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag pada tikus Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin belum pernah dilakukan. Penelitian tentang labu air sebagai imunomodulator yang pernah dilakukan adalah Efek Imunomodulator Buah Lagenaria siceraria pada Tikus (Gangwal, et al., 2008) dan Beneficial Effects of Lagenaria siceraria (Mol.) Standley Fruit Eficarp in Animal Model (Deshpande, et al., 2008). Pada penelitian sebelumnya, dilakukan pengamatan buah labu air (Lagenaria siceraria) sebagai imunomodulator. Akan tetapi, pada penelitian Gangwal, et al. (2008) pengamatan efek imunomodulator ekstrak metanolik Lagenaria siceraria dengan induksi cyclophospamide dan pada penelitian Deshpande, et al. (2008) pengamatan efek imunomodulator ekstrak etanolik Lagenaria siceraria dengan induksi pyrogallol, sedangkan pada penelitian ini pengamatan efek imunomodulator ekstrak etanolik Lagenaria siceraria dengan induksi doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 5 3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat mengetahui bahwa buah labu air (Langenaria siceraria) dapat digunakan sebagai ko-kemoterapi untuk mengurangi efek imunosupresi pada penggunaan doksorubisin. b. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan menghasilkan sebuah bukti ilmiah yang dapat menunjukkan pengaruh ekstrak etanolik buah labu air dalam modulasi sistem imun sehingga dapat dijadikan dasar penggunaan tanaman labu air (Langenaria siceraria) sebagai agen ko-kemoterapi. B. Tujuan penelitian 1. Tujuan umum Menemukan alternatif ko-kemoterapi yang dapat digunakan untuk mengurangi efek imunosupresi dalam terapi kanker. 2. Tujuan khusus Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) terhadap kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Kemoterapi dan Kemoterapi Kombinasi (Ko-Kemoterapi) Penyembuhan kanker secara medis biasanya ditangani dengan kemoterapi, operasi, dan radioterapi (Zuhud, 2011). Kemoterapi adalah pengobatan sistemik kanker, yang sering digunakan sebagai terapi “adjuvant” pada pembedahan dan radiasi. Kemoterapi berarti menggunakan obat-obatan untuk membunuh sel kanker. Agen kemoterapeutik bekerja dengan mempengaruhi siklus hidup sel kanker sehingga dapat mengatasi penyakit metastatik atau risiko tinggi kekambuhan (Marrelli, 2000). Berbeda dengan pembedahan dan terapi radiasi yang bersifat lokal, kemoterapi bersifat sistemik. Ada empat cara penggunaan kemoterapi: 1. Terapi adjuvant, merupakan suatu sesi kemoterapi yang digunakan sebagai tambahan terapi lainnya (misalnya pembedahan, radiasi, dan bioterapi) dan ditujukan untuk mengobati mikrometastasis 2. Kemoterapi neoadjuvant, merupakan pemberian kemoterapi untuk mengecilkan tumor sebelum dilakukan pembedahan untuk pengangkatan tumor 3. Kemoterapi primer, merupakan terapi untuk pasien dengan kanker lokal. 4. Kemoterapi kombinasi, pemberian dua atau lebih zat kemoterapi sehingga pada pengobatan dapat memperkuat obat lainnya atau bertindak secara sinergis (Shirley, 2003). 6 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 7 Akibat penggunaan obat-obat kemoterapi ini maka menimbulkan kerusakan pada sel tumor maupun sel normal. Kerusakan yang terjadi pada sel tumor merupakan tujuan penggunaan obat kemoterapi.Kerusakan yang terjadi pada sel normal memberikan manifestasi efek samping. Pemberian kemoterapi membutuhkan waktu yang cukup lama.Biasanya dinamakan dengan istilah siklus. Satu siklus terdiri dari masa pemberian obat, yang biasanya bervariasi antara 1 -5 hari, yang setelah itu dilanjutkan dengan masa istirahat (Leung, Miyashita, Young, and Tsao, 1993). Pemberian kemoterapi dapat dilakukan sebanyak 4 – 8 siklus, sesuai dengan tujuan pemberian kemoterapi tersebut (Feusner, 1996). Masa istirahat dalam satu siklus ditentukan berdasarkan lamanya kejadian efek samping. Efek samping yang paling ditakutkan adalah mielosupresi, yang akan pulih dalam waktu 21 – 28 hari paska kemoterapi (Leung, et al., 1993). Siklus sel merupakan serangkaian kejadian yang menghasilkan mitosis (replikasi DNA dan pembagian yang merata pada sel anakan). Sel normal dan sel kanker mengalami siklus yang sama yang ditandai dengan fase: G0 (fase istirahat/dorman), G1 (fase sintesis protein untuk menyiapkan fase S sintesis DNA) dan D2 (fase untuk sintesis protein lebih lanjut dan mempersiapkan fase Mmitosis dan pembelahan sel). Obat-obat kemoterapi aktif dalam melawan sel yang membelah dalam tiap fase, kecuali pada fase G0. Agen kemoterapi akan mempengaruhi sel-sel normal yang membelah termasuk sumsum tulang (trombosit, sel darah merah dan putih), folikel rambut, mukosa saluran cerna, sel germinal (sperma dan ovum), dan sel-sel kulit (Shirley, 2003). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 8 Kemoterapi yang diberikan biasanya merupakan suatu kombinasi atau yang biasa disebut dengan ko-kemoterapi. Salah satu tujuan utama pemberian kokemoterapi adalah untuk mencegah timbulnya sel kanker yang resisten serta mengurangi toksisitas agen kemoterapi pada jaringan normal tanpa mempengaruhi efektivitas dari agen kemoterapi (Meiyanto, 2012). B. Doksorubisin Gambar 1. Struktur Doksorubisin (Scalabrin, 2011) Doksorubisin (Gambar `1) merupakan antibiotik golongan antrasiklin yang banyak digunakan untuk terapi berbagai macam jenis kanker seperti leukemia akut, kanker payudara, kanker tulang dan ovarium (Childs et al., 2002). Mekanisme kerja doksorubisin melalui 4 cara, yaitu: (1). Penghambatan topoisomerase II, (2). interkalasi DNA yang mengakibatkan penghambatan sintesis DNA dan RNA, (3). pengikatan membran sel yang menyebabkan aliran dan transport ion, dan (4). pembentukan radikal bebas semiquinon dan radikal bebas oksigen melalui proses yang tergantung besi dan proses reduktif yang diperantarai enzim (Bruton, Lazo, dan Parker, 2005). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 9 Doksorubisin merupakan prodrug yang dapat bersifat lebih sitotoksik terhadap sel kanker dalam bentuk konjugatnya dengan formaldehid (doxoform) (Gambar 2). Gambar 2. Struktur antrasiklin yang terkonjugasi dengan formaldehid: doxoform (R=OH) (Scalabrin, 2011) Adanya formaldehid (H2CO) in vivo, dapat mengaktivasi doksorubisin menjadi lebih elektrofil sehingga membentuk ikatan kovalen dengan DNA (Cutts, et al., 2005). Doksorubisin mengkatalasi pembentukkan formaldehid (H2CO) pada kondisi stress oxidative dalam kondisi buffer terkontrol. Adanya besi dalam tubuh memperantarai pembentukan radikal bebas sehingga doksorubisin dapat memproduksi formaldehid (H2CO) dari karbon dalam sel seperti lipid. Terlebih lagi, doksorubisin dapat berikatan dengan formaldehid membentuk konjugat di mana dua molekul antrasiklin menjadi berikatan melalui tiga gugus metilen Konjugat ini disintesis melalui reaksi antara antrasiklin (doksorubisin) dengan formaldehid dalam larutan metanol dalam dapar asetat pada pH 6, kemudian konjugat diekstraksi dalam kloroform. Reaksi ini akan menunjukkan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 10 pembentukan doxazolidin (bentuk intermediet) diikuti pembentukan pembentukan doxoform. Konjugat antrasiklin-formaldehid ini (Gambar 3) menunjukkan peningkatan toksisitas terhadap sel tumor karena kemampuannya dalam menginterkalasi DNA, membentuk ikatan kovalen antara gugus amino pada doksorubisin dan 2-amino pada basa guanin pada DNA dihubungkan melalui jembatan metilen dari formaldehid serta ikatan hydrogen pada 9-OH dari basa guanin (Taatjes, Guadiano, Resing, and Koch, 1997). Secara keseluruhan kombinasi interkalasi, ikatan kovalen, dan ikatan hidrogen ini disebut dengan virtual cross-linking DNA oleh antrasiklin (Taatjes, and. Koch, 2001). Gambar 3. Virtual cross-linking antara doksorubisin dan DNA (Scalabrin, 2011) Pada penggunaan doksorubisin banyak dijumpai efek toksik secara imunologis. Hal ini disebabkan obat-obat sitostatik seperti doksorubisin akan berefek pada sel-sel yang mengalami pembelahan sel secara cepat seperti sumsum tulang (Phillip et al., 2006), folikel rambut, mukosa saluran cerna, sel germinal (sperma dan ovum), dan sel-sel kulit. Di antara sel sumsum tulang belakang, PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 11 prekusor hemopoetik merupakan sel yang paling sensitif terhadap sitotoksisitas dari doksorubisin (Uspenkaya et al, 2004). Oleh karena itu, pada penggunaan doksorubisin banyak dijumpai efek supresi sumsum tulang belakang (myelosuppresi) (Anonima, 2007), kerontokan rambut, serta muntah-muntah. Depresi sumsum tulang sangat memudahkan terjadinya infeksi karena dapat menyebabkan neutropenia (penurunan sel darah putih), penurunan interleukin-2 (IL-2) dan produksi interferon-γ (IFN-γ) yang merupakan komponen penting dalam sistem imun. Hal ini dapat menurunkan jumlah sel sitotoksik natural killer (NK), proliferasi limfosit serta ratio limfosit T CD4+/CD8+ (Zhang et al., 2005). Menurut hasil penelitian pada pasien penderita kanker paru-paru, neuropenia parah dan infeksi berkurang saat dibandingkan penggunaan doksorubisin 20 mg per m2 setiap minggu dengan penggunaan doksorubisin 60 mg per m2 setiap 3 minggu sekali (31 % dengan 19%, p= 0,29) (Perry, 2008). C. Respon Seluler dan Humoral Terhadap Sel Tumor Respon imun merupakan hasil interaksi antara antigen dengan sel-sel imunokompeten. Limfosit merupakan unit dasar terbentuknya respon imun karena mampu berdiferensiasi menjadi sel lain serta berperan dalam mengenal sekaligus bereaksi dengan antigen. Induksi limfosit T dalam respon imun hampir selalu bersifat makrofag-dependent.Makrofag berfungsi untuk memproses imunogen dan menyajikannya ke limfosit T spesifik (immune T cells) (Goodman, 1994). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 12 D. Makrofag Makrofag terdistribusi di berbagai jaringan dan sinus cavity, seperti paruparu (alveolar), otak (microglial), ginjal (masangial), tulang (osteoclast), hati (kupffer), limpa, dan lymphonode (marginal) sebagai sel bebas dan tetap. Makrofag mempunyai waktu hidup yang panjang dan aktif menfagosit dengan granula lisosom yang berkembangbiak untuk degranulasi dan eliminasi sebagai bagian dari mekanisme proteksi terhadap infeksi (Dasgupta, 1992). Makrofag mempunyai fungsi tambahan saat pengenalan antigen terhadap sel limfosit T dan aktivasi pada fase adaptive immunity. Fungsi tambahan makrofag yaitu meningkatkan pertemuan antara mikroba dengan sitokin saat respon imun alami sedang berlangsung. Pada respon imun spesifik, makrofag akan memfagosit antigen lebih efektif dengan bantuan sel limfosit T (Abbas and Litchman, 2005). Fungsi terpenting makrofag adalah fagositosis atau pencenaan seluler terhadap bahan yang mengganggu. Makrofag mempunyai sejumlah besar lisosom yang berfungsi untuk mencerna bahan asing serta lipase yang dapat mencerna membran lipid tebal pada bakteri tertentu (Campbell, Reece, and Mitchell, 1999). Bila bakteri menyerang tubuh, sumsum tulang dirangsang untuk menghasilkan dan mengeluarkan netrofil dalam jumlah besar sebagai garis pertahanan pertama (Handayani, 2009). Monosit mengikuti netrofil masuk daerah infeksi dan membentuk garis pertahanan kedua. Monosit berasal dari sel induk yang sama dengan sel induk granulosit, sel ini mengalami maturasi di dalam PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 13 sumsum tulang, beredar sebentar kemudian masuk ke dalam jaringan untuk menjadi makrofag (Ganong, 2002). Makrofag menelan dan membunuh kuman melalui proses yang sama dengan netrofil (Handayani, 2009). Proses fagositosis terjadi saat bakteri yang masuk ditangkap dan ditelan dengan bantuan reseptor pada membran sel. Makrofag menonjolkan pseudopodia ke semua arah di sekeliling partikel kemudian pseudopodia akan saling bergabung sehingga terjadi ruang tertutup berisi partikel yang difagositosis (Handayani, 2009). Apabila bakteri sudah ditelan, membran akan menutup, selanjutnya bakteri akan digerakan ke sitoplasma sel dan terbentuk vesikel intraseluler yang mengandung bakteri yang disebut fagosom. Sel fagosit mengandung enzim lisosom yang akan bersatu dengan fagosom yang akan membentuk fagolisosom. Fagolisosom ini akan memungkinkan terjadinya degradasi bakteri oleh enzim yang terkandung dalam granul lisosom. Isi lisosom ini diperlukan untuk memecah bakteri. Major Histocompatibility Complex (MHC) kelas II kemudian akan mengikat bakteri tersebut dan dikenal kepada T helper untuk mengaktivasi limfosit (Baratawidjaja dan Rengganis, 2009). Selain itu, makrofag berperan sebagai APC (Antigen Precenting Cell), yaitu proses pengenalan antigen kepada sel T. Makrofag sebagai APC ini akan mengenalkan antigen kepada sel T kemudian mengaktivasinya melalui mekanisme interaksi efektor sel T dengan makrofag. Proses ini akan menghasilkan produk respon imun yang disebut sitokin dan akan mengaktivasi makrofag untuk memfagositosis antigen (Abbas dan Lichtman, 2005). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 14 Makrofag yang berperan dalam mekanisme lisisnya sel tumor, yaitu makrofag aktif. Makrofag aktif merupakan makrofag yang diaktifkan oleh MAF, suatu sitokin yang dihasilkan oleh limfosit T yang distimulasi antigen. Makrofag yang tidak aktif tidak memiliki kemampuan melisiskan sel tumor (Goodman, 1994). Kapasitas fagositosis menunjukan persentase jumlah sel makrofag yang aktif dari 100 sel makrofag , sedangkan indeks fagositosis menunjukan jumlah rata-rata lateks yang dapat difagositosis oleh setiap sel makrofag yang aktif (Jensch-Junior, Pressinoti, Berges and Silva, 2006). Faktor –faktor yang mempengaruhi fagositosis makrofag: a. Stres Menurut hasil penelitian Tambunan (2006), pada pemberian stres berupa renjatan listrik pada mencit betina BALB/c ternyata terbukti secara bermakna dapat menurunkan kemampuan fagositosis makrofagnya. Adanya stres melalui hormon katekolamin dapat menekan sintesis IL-12 dan meningkatkan produksi IL-10. b. Obat-obatan Xu, et al. (1996) dalam penelitiannya menyebutkan bahwa antibiotika golongan makrolida kecuali asitromisin secara signifikan menstimulasi pertumbuhan dari sel fagosit. c. Makanan Menurut penelitian Susilaningsih ,Johan , Gunardi, dan Winarto (2005), polifenol yang terkandung dalam teh dapat meningkatkan sistem pertahanan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 15 tubuh yaitu mempunyai efek meningkatkan proliferasi limfosit, meningkatkan produksi IL-12 dan meningkatkan fagositosis. d. Bahan asal bakteri Endotoksin atau lipopolisakarida (LPS) adalah komponen dinding bakteri Gram negative seperti E.coli, Shigella dan Salmonela yang dapat merangsang proliferasi sel B dan sel T serta megaktifkan makrofag. Keterbatasan pemakaiannya terutama disebabkan karena sifatnya yang imumogenik dan pirogenik (Baratawidjaja , 2000). E. Imunomodulator Imunomodulator merupakan zat yang dapat memodulasi (mengubah atau memengaruhi) sistem imun tubuh menjadi ke arah normal. Imunomodulator terutama menginduksi pertahanan non spesifik (paramunitas) baik melalui mekanisme pertahanan seluler maupun humoral. Induktor semacam ini bekerja sebagai mitogen, yaitu menaikan proliferasi sel yang berperan pada imunitas.Induktor paramunitas biasanya menginduksi sel makrofag, granulosit, limfosit T dan B, untuk menstimulasi mekanisme pertahanan seluler. Mekanisme pertahanan spesifik maupun non spesifik biasanya saling barpengaruh (Widianto, 1987). Obat golongan imunomodulator bekerja menurut tiga cara: 1. Imunorestorasi: merupakan suatu cara untuk mengembalikan fungsi sistem imun yang terganggu dengan memberikan berbagai komponen sistem imun, seperti: imunoglobulin dalam bentuk immune serum globulin (ISG), PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 16 hyperimmune serum globulin (HSG), plasma dan transplantasi sumsum tulang, jaringan hati, dan timus (Baratawidjaja , 2000). 2. Imunostimulasi / imunopotensiasi: cara memperbaiki fungsi sistem imun dengan menggunakan bahan yang merangsang sistem tersebut (Biological Response Modifier (BRM)) (Baratawidjaja , 2000). 3. Imunosupresi: suatu tindakan untuk menekan respons imun, kegunaannya di klinik terutama pada transplantasi alat tubuh dalam usaha mencegah reaksi penolakan dan pada penyakit autoimun untuk menghambat pembentukan antibodi (Baratawidjaja , 2000). F. Labu Air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) 1. Klasifikasi taksonomi: Kingdom : Plantae Division : Magnoliophyta Class : Magnoliopsida Order : Cucurbitales Family : Cucurbitaceae Genus : Lagenaria Species : L. siceraria Part used : Fruit, root, leaves and seed oil (Kubde, Khadabadi, Farooqui and Deore, 2010). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 17 2. Buah labu air sebagai imunomodulator Gambar 4. Buah Labu Air (Belly, J., 2012) Buah labu air (gambar 4) diketahui memiliki efek imunomodulator. Menurut hasil penelitian Gangwal, et al. (2008) ekstrak metanol fraksi n-butanol dan etil asetat buah labu air (Langenaria siceraria) memiliki aktifitas imunomodulator karena dapat meningkatkan jumlah antibodi primer dan sekunder serta mampu menghambat reaksi hipersensitivitas pada tikus. Kedua fraksi secara signifikan dapat meningkatkan total sel darah putih, neutrofil, dan jumlah limfosit, tetapi perubahan yang tidak signifikan pada monosit, eusinofil, dan basofil. Campuran terpenoid dan flavonoid yang diisolasi dari ekstrak metanol fraksi nbutanol dan etil asetat buah labu air diidentifikasi merupakan asam oleanolat dan isokuersetin (Shah, Seth and Desai, 2010). Flavonoid sebagai imunomodulator bekerja pada sel sel tubuh yang menjadi bagian dari sistem imun. Mekanisme imunomodulator dari flavonoid dapat melalui beberapa cara, yaitu: (1). mengirimkan sinyal intraseluler pada reseptor sel, sehingga sel bekerja lebih optimal, (2). meningkatkan pengeluaran mediator yang menambah ketahanan tubuh, dan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 18 (3). memperbaiki proses penguraian sel lain (Ma’at, 2009). Flavonoid dapat memperbaiki sistem imun karena berpotensi terhadap limfokin yang dihasilkan oleh sel T sehingga merangsang sel-sel fagosit untuk meningkatkan aktivitas fagositosis (Kusmardi, Kumala, dan Triana, 2007). Adanya kandungan asam oleanolat dalam ekstrak etanol labu air dapat meningkatkan sekresi IFN-γ (Rios,2010) yaitu aktivator poten fagosit mononuclear yang akan menstimulasi makrofag membunuh sel tumor dan mikroba fagosit. Selain itu, adanya senyawa fenolik dapat menstimulasi pelepasan sitokin IL-12 (Shen and Louine, 1999). IL-12 berfungsi merangsang produksi IFN-γ oleh sel NK, sementara IFN-γ berperan dalam aktivasi makrofag (Baratawidjaja dan Rengganis, 2009). Selain itu, hasil penelitian menggunakan ekstrak etanol labu air juga menunjukkan hasil ekstraksi etanolik labu air mencegah penurunan respon imun humoral, respon imun seluler, dan persen netrofil secara signifikan pada tikus yang diinduksi dengan pyrogallol (Deshpande, et al., 2008). G. Landasan Teori Penyembuhan kanker secara medis dapat ditangani dengan kemoterapi, operasi, dan radioterapi. Salah satu agen kemoterapi yang sering digunakan, yaitu doksorubisin. Penggunaan doksorubisin dapat menimbulkan efek supresi sumsum tulang belakang, sehingga menyebabkan timbulnya neuropenia (penurunan sel darah putih) demikian pula produksi monosit mengalami penurunan yang diikuti penurunan produksi makrofag. Sel makrofag merupakan sel yang berperan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 19 terhadap sistem imun seluler. Oleh karena itu, perlu dikembangkan agen kokemoterapi untuk mengurangi efek imunosupresi dari doksorubisin. Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai imunomodulator adalah buah labu air. Adanya kandungan asam oleanolat dan isokuersetin pada ekstrak metanolik fraksi n-butanol dan fraksi etil asetat buah labu air dapat meningkatkan total sel darah putih, neutrofil, dan jumlah limfosit secara signifikan (Shah, et al., 2010). Selain itu, ekstrak etanol buah labu air dapat mencegah penurunan respon imun humoral, respon imun seluler, dan persen neutrofil secara signifikan pada tikus yang diinduksi dengan pyrogallol (Deshpande, et al., 2008). Oleh karena itu, pada percobaan diamati pengaruh pemberian ekstrak etanol buah labu air terhadap tikus jantan Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin terhadap kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag untuk mengetahui efek imunomodulator ekstrak etanol buah labu air. Hasil pengamatan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag dari kelompok perlakuan Ekstrak Etanol Buah Labu Air (EELA) dibandingkan dengan kelompok kontrol menggunakan uji statistik. Batas nilai yang dianggap signifikan dalam penelitian adalah jika p<0,05 dengan interval kepercayaan 95%. Apabila EELA dapat meningkatkan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag dibandingkan kontrol doksorubisin, menunjukkan EELA memiliki efek imunomodulator pada tikus uji yang telah dipejani doksorubisin sehingga dapat digunakan sebagai agen ko-kemoterapi pada terapi kanker. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 20 H. Hipotesis Berdasarkan landasan teori, dapat dihipotesiskan bahwa ekstrak etanolik buah labu air dapat meningkatkan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag pada tikus galur Spargue Dawley yang dipejani doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB III METODOLOGI PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni karena adanya perlakuan berupa pemberian ekstrak etanolik buah labu air terhadap hewan uji. Rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan penelitian acak lengkap pola searah. B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variabel a. Variabel bebas : dosis pemberian ekstrak etanolik buah labu air. b. Variabel tergantung : kemampuan ekstrak etanolik buah labu air untuk meningkatkan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag. c. Variabel pengacau terkendali : galur hewan uji, yaitu galur Sprague Dawley, umur hewan uji 2–3 bulan, jenis kelamin jantan, berat badan 150 -300 g, jalur pemejanan doksorubisin secara intraperitonial dan ekstrak etanolik buah labu air secara oral serta jenis pakan yang diberikan pada hewan uji. d. Variabel pengacau tak terkendali : kondisi patologis hewan uji. 2. Definisi Operasional a. Ekstrak etanolik buah labu air 21 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 22 Ekstrak kental yang diperoleh dengan mengekstraksi serbuk kering buah labu air (Langenaria siceraria (Mol.) Standley) dalam pelarut etanol 80% yang dibuat dengan proses remaserasi dengan perbandingan serbuk dan pelarut 1:10. Filtrat yang diperoleh diuapkan menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh bobot tetap. b. Kapasitas fagositosis Kapasitas fagositosis menunjukan persentase jumlah sel makrofag yang aktif dari 100 sel makrofag (Jensch-Junior, et al., 2006). c. Indeks fagositosis Indeks fagositosis menunjukan jumlah rata-rata lateks yang dapat difagositosis oleh setiap sel makrofag yang aktif (Jensch-Junior, et al., 2006). C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Bahan uji yang digunakan, yaitu buah labu air (Lagenaria siceraria (Mol.) Standley) yang diperoleh dari Pasar Beringharjo. b. Subyek uji yang digunakan yaitu tikus jantan putih galur Sprague Dawley usia 2-3 bulan, berat badan 150-300 g yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi USD Yogyakarta. 2. Bahan kimia a. Bahan penginduksi penurunan sistem imun yang digunakan adalah doksorubisin, yang diperoleh dari PT. Genepharm b. Kontrol pelarut berupa CMC Na 1% (E.Merck). PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI c. Pelarut untuk maserasi berupa etanol 80% 23 yang diperoleh dari PT. Brataco. d. Pelarut untuk doksorubisin berupa cairan NaCl Fisiologis yang diperoleh dari PT. Otsuka. e. Bahan untuk mengukur kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis berupa klorofom, coverslips bulat diameter 12mm, akuades, Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI 1640) (Sigma), alkohol 70%, Phosphate Buffer Saline (PBS) steril, latex beads diameter 3 μm (Sigma Chem. Co), Giemsa 20%, Water for Injection (Otsuka, Indonesia), medium komplit yang terdiri dari RPMI 1640, Fetal Bovine Serum (FBS) (Gibco) 10%, Penisilin-Streptomisin 2% (Gibco) dan fungizon 1% (Gibco). D. Alat Penelitian a. Pengujian kadar air serbuk kering buah labu air (Lagenaria siceraria) Halogen moisture analyser (HG 53, Mettler- Toledo). b. Pembuatan ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) Seperangkat alat gelas, yaitu gelas piala, gelas ukur, labu ukur, cawan porselen, pipet tetes, batang pengaduk, mesin penyerbuk, shaker, oven, timbangan analitik (Mettler PM 4600 Delta Range dan Mettler AE 200), corong Buchner, pompa vakum, rotary evaporator. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 24 c. Pengujian kapasitas dan indeks fagositosis makrofag Inkubator CO2 5%; 37oC (Heraeus), plate 24 well (Nunc), sentrifus Eppendorf (Sorfall MC 12 V, Dupont), Eppendorf tube, Laminar Air Flow (Labquib), hemositometer (Nebaeur), mikropipet (Eppendorf), neraca elektronik (Sartorius), filter 0,22 μm (Sartorius), tabung sentrifus 15 mL (Nunc), spet injeksi 10 mL (Terumo), mesin Vortex, pipet Pasteur, yellow dan blue tip, Inverted Microscope (Olympus), mikroskop binokuler, lampu spiritus, pinset, gunting, tabung reaksi, dan alat-alat gelas yang telah disterilkan. E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi tanaman Determinasi sampel buah labu air yang digunakan berdasarkan pengamatan ciri morfologinya dilakukan di Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Pembuatan ekstrak etanolik Buah labu air yang didapat dari pasar Beringharjo dibersihkan dengan cara dicuci dengan air mengalir, dikupas kulitnya, dipotong kecil – kecil, dibuang bijinya kemudian dikeringkan, diblender dan dimaserasi dengan pelarut etanol. Maserasi diulangi sebanyak tiga kali. Maserasi yang pertama dilakukan selama 2 kali 24 jam, kemudian disaring dengan penyaring Buchner sehingga diperoleh filtrat dan ampas. Ampas dimaserasi lagi selama 1 kali 24 jam. Ampas yang didapat dimaserasi kembali selama 1 kali 24 jam. Kemudian filtrat digabung dan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 25 diuapkan pelarutnya dengan rotary evaporator hingga tidak ada pelarut yang menetes lagi. 3. Pembuatan sediaan Ekstrak etanol buah labu air dibuat suspensi dengan konsentrasi 15% dalam CMC Na 1%. 4. Penyiapan hewan uji Hewan uji yang digunakan disiapkan, dan ditempatkan dalam kandang berisi sekam dengan tutup kawat kasa selama 1 minggu untuk adaptasi.Setiap kandang berisi lima ekor tikus. Kandang ditempatkan dalam ruangan ber AC dengan suhu 20 – 25oC dan kelembapan udara yang tetap (± 50%), ventilasi cukup dan dengan penerangan 12 jam sehari. Hewan uji diberi pakan pellet AD-II (PT. Japfa Comfeed Indonesia Tbk), setiap satu kali sehari dan minum air kran secara ad libitum melalui botol yang diletakkan dibagian atas kandang. 5. Perlakuan hewan uji Dua puluh lima ekor tikus yang telah diadaptasikan dibagi secara acak dalam lima kelompok di mana tiap kelompok berisi lima ekor tikus. Perlakuan (Tabel 1) dilakukan selama 15 hari terus-menerus. a. Kelompok I sebagai kelompok kontrol pelarut senyawa uji (CMC-Na 1%) 2,5 mL setiap hari dari H1 hingga H10. b. Kelompok II sebagai kelompok kontrol doksorubisin dengan dosis 4,5 mg/kg BB secara intraperitonial diberikan pada H11, H13, dan H15. c. Kelompok III diberikan EELA dosis 1000 mg/kg BB secara p.o setiap hari PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 26 d. dari H1 hingga H10 serta doksorubisin dosis 4,5 mg/kg BB secara intraperitonial pada H11, H13, dan H15. e. Kelompok IV diberikan EELA dosis 750 mg/kg BB secara p.o setiap hari dari H1 hingga H10 serta doksorubisin dosis 4,5 mg/kg BB secara intraperitonial pada H11, H13, dan H15. f. Kelompok V diberikan EELA dosis 500 mg/kg BB secara p.o setiap hari dari H-1 hingga H10 serta doksorubisin dosis 4,5 mg/kg BB secara intraperitonial pada H11, H13, dan H15. Tabel 1. Perlakuan terhadap Hewan Uji Kelompok Hari ke1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 I II III IV V Pelarut ekstrak (CMC Na 1%) p.o EELA 1000 mg/kg p.o EELA 750 mg/kg p.o EELA 500 mg/kg p.o Pelarut doksorubisin (NaCl fisiologis) i.p Doksorubisin i.p Pengambilan cairan intraperitonial 6. Isolasi makrofag Isolasi makrofag dilakukan pada H19. Tikus dikorbankan dengan cara inhalasi menggunakan kloroform, lalu dibaringkan telentang dan kemudian kulit bagian perut dibuka dan dibersihkan selubung peritoniumnya dengan 18 19 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 27 alkohol 70%. Sebanyak 10 mL RPMI dingin disuntikan ke rongga peritoneum tikus kemudian ditunggu tiga menit sambil digoyang-goyang agar makrofag yang menempel di rongga tersebut dan di sekitar usus dapat terlepas dan tersuspensi dalam RPMI Cairan peritoneal dikeluarkan dengan cara menekan organ dalam dengan kedua jari, cairan diaspirasi dengan tabung injeksi, dipilih bagian yang tidak berlemak dan jauh dari usus. Aspirat disentrifugasi 1200 rpm 4oC selama 4 menit. Supernatan dibuang dan ditambah 3 mL medium komplit pada pellet yang didapat. Jumlah sel dihitung dengan hemositometer, kemudian diresuspensi dengan medium komplit sehingga didapat suspense sel dengan kepadatan 5 x 106 /mL. Suspensi yang telah dihitung kemudian dikulturkan pada plate 24 sumuran yang telah diberi coverslips bulat dengan diameter 12 mm, setiap sumuran berisi 1 mL. Sel diinkubasi dalam incubator CO2 5% pada suhu 37oC selama 30 menit, lalu ditambahkan medium komplit 1mL/sumuran, diinkubasi 2 jam. Sel dicuci RPMI sebanyak 2 kali kemudian ditambah medium komplit 1mL/sumuran, dan inkubasi dilanjutkan sampai 24 jam. 7. Uji fagositosis makrofag dengan menggunakan Latex Latex beads diameter 3 µm disuspensikan dalam PBS sehingga didapat konsentrasi 2,5 x 107 /mL. Makrofag peritoneum yang dikulturkan sehari sebelumnya dicuci menggunakan RPMI sebanyak dua kali, kemudian ditambahkan suspensi lateks 200 µL / sumuran dan diinkubasi selama 60 menit PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 28 dalam inkubator CO2 5% 37oC. Sel dicuci PBS 3 kali untuk menghilangkan lateks yang tidak terfagositosis. Dikeringkan pada suhu ruangan dan difiksasi dengan methanol 30 detik, kemudian methanol dibuang dan coverslips didiamkan sampai kering. Setelah kering coverslips dipulas dengan Giemsa 20% v/v selama 30 menit kemudian dicuci akuabides dan dikeringkan pada suhu kamar.Makrofag diamati dan dihitung jumlah makrofag yang memfagositosis partikel lateks dan jumlah lateks yang difagositosis oleh makrofag. Pengamatan makrofag menggunakan mikroskop cahaya perbesaran 400x. Kemampuan fagositosis makrofag dinyatakan dapal kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis. Kapasitas fagositosis = x 100% Indeks fagositosis = (a) : Jumlah lateks yang difagosit oleh satu makrofag (b) : Jumlah makrofag yang memfagositosis (c) : Jumlah makrofag yang diperiksa (Jensch-junior, et al., 2006). 8. Perhitungan statistik Data kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag dari tiap kelompok uji selanjutnya diolah dan dilakukan analisa statistik menggunakan SPSS 17.0. Data dinilai normalitas dengan uji Kolmogorov-Smirnov. Jika distribusi data dinilai normal maka dilanjutkan ke uji hipotesis dengan uji one way analysis of variance (ANOVA) yang dilanjutkan dengan uji Post hoc. Apabila distribusi data dinilai tidak normal maka uji hipotesis dilakukan menggunakan uji Kruskal-Wallis yang dilanjutkan dengan uji Mann- Whitney. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 29 Batas nilai yang dianggap signifikan dalam penelitian adalah jika p<0,05 dengan interval kepercayaan 95%. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dan membuktikan khasiat dari ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) sebagai imunomodulator pada tikus jantan yang diinduksi doksorubisin melalui pengamatan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis. Kemampuan fagositosis makrofag dapat dilihat dari jumlah makrofag yang mampu memfagositosis partikel lateks selain itu ditunjukkan pula dari jumlah lateks yang dapat difagositosis oleh makrofag. Data yang diperoleh dari uji fagositosis dianalisis secara statistik menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui normalitas data, selanjutnya dilakukan analisis one way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95%. A. Hasil Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dilakukan bertujuan menetapkan kebenaran sampel yang digunakan berkaitan dengan ciri-ciri morfologis tanaman berdasarkan kepustakaan dan menghindari kesalahan dalam proses pengumpulan bahan. Bagian tanaman yang digunakan dalam determinasi adalah bagian buah. Menurut Stephens (2009), deskripsi buah labu air: 1. Berwarna hijau muda atau hijau tua, warna hijau tua dapat berupa warna hijau pekat dengan garis-garis tidak beraturan dan bercak yang tidak beraturan. 30 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 2. 31 Ukuran buah beragam mulai dari diameter 2 inci hingga 12 inci dan panjang 4 hingga 40 inci. 3. Buah dapat memiliki bagian leher yang steril (tidak berbiji) dangan panjang hingga 15 inci dan lebar 1 hingga 2 inci. Bagian leher yang lebih lebar biasanya berbiji dan memiliki tonjolan. Biji bervariasi mulai dari pipih hingga bundar, silinder, atau panjang dan sempit. Dari hasil determinasi dinyatakan bahwa tanaman yang digunakan adalah benar buah labu air (Lagenaria siceraria) dengan ciri – ciri berwarna hijau muda, panjang 14 inci, diameter leher 3 inci, diameter badan buah 5 inci, dan biji berbentuk pipih dengan panjang 12 mm (Lampiran 1). B. Penetapan Kadar Air Serbuk Kering dan Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Labu Air (Lageneraria siceraria) Pembuatan ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) menggunakan metode maserasi. Pertimbangan menggunakan metode maserasi karena sterol dan flavonoid yang akan disari mudah larut dalam etanol 80% serta proses serta peralatan yang digunakan sederhana. Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat yang mudah larut dalam cairan penyari. Pada penelitian ini akan dilakukan penyarian terpenoid dan flavonoid dari simplisia dimana senyewa-senyawa tersebut mudah larut dalam etanol 80%. Pada proses ekstraksi ini pelarut yang digunakan adalah etanol 80%. Penggunaan etanol 80% sebagai pelarut karena etanol memiliki perbedaan kepolaran yang kecil dengan metanol 80% yang merupakan pelarut universal. Perbedaan kepolaran antara etanol dan metanol hanya 0,05, sehingga diharapkan etanol dapat menyari PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 32 senyawa terpenoid dan flavonoid yang terkandung di serbuk simplisia. Proses maserasi yang dilakukan merupakan proses remaserasi. Proses remaserasi ini dilakukan dengan tujuan untuk menghindari kondisi jenuh saat penyarian sehingga proses penyarian senyawa dalam serbuk simplisia menjadi maksimal. Sebelum dilakukan maserasi, simplisia dibuat serbuk terlebih dahulu untuk memperkecil ukuran partikel simplisia labu air sehingga memiliki luas permukaan partikel yang besar. Luas permukaan partikel yang besar ini akan memudahkan kontak dengan pelarut sehingga ekstraksi dapat lebih maksimal. Luas permukaan yang besar ini juga memudahkan partikel serbuk kontak dengan lembab di udara. Adanya lembab dapat memicu tumbuhnya mikroba dan kapang serta menyebabkan senyawa aktif mudah terhidrolisis. Oleh karena itu, serbuk terlebih dahulu dihitung kadar airnya menggunakan metode gravimetri dan dilakukan sebanyak tiga replikasi hingga didapatkan rerata kadar air sebesar 7,86%. Menurut Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan (1999), persyaratan kadar air dalam serbuk simplisia yang baik adalah kurang dari 10%. Hasil pengujian ini menunjukkan bahwa serbuk kering buah L. siceraria telah memenuhi persyaratan serbuk simplisia yang baik. Ekstrak cair yang didapatkan dari proses maserasi kemudian diuapkan pelarutnya dengan menggunakan rotary evaporator. Penguapan pelarut dengan menggunakan rotary evaporator ini dilakukan sampai tidak ada lagi tetesan pelarut. Untuk lebih memastikan ada atau tidaknya pelarut yang terkandung dalam esktrak kental, dilakukan pengeringan di oven sampai bobot tetap. Penyimpanan ekstrak kental dilakukan di dalam desikator agar terhindar dari lembab. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 33 C. Penetapan Dosis dan Lama Perlakuan Ekstrak Etanol Buah Lageneraria siceraria Penelitian yang dilakukan bersifat preventif dimana hewan uji diberikan ekstrak dengan berbagai dosis terlebih dahulu sebelum dipejani dengan doksorubisin. Hewan uji dibagi menjadi lima kelompok sebagai kelompok kontrol pelarut (CMC Na 1%), kontrol doksorubisin, dan perlakuan berupa variasi dosis ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) sebesar 1000 ; 750 ; dan 500 mg/KgBB. Dosis doksorubisin yang digunakan sebesar 4,5 mg/KgBB. Tidak digunakan kontrol ekstrak etanol buah labu air karena menurut hasil orientasi, nilai kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis ekstrak etanol buah labu air dosis 1000 mg/kgBB hampir sama dari kontrol pelarut, namun menunjukkan hasil yang jauh lebih tinggi dari kontrol doksorubisin (Lampiran 3.). Hal ini menunjukkan ekstrak etanol buah labu air tidak memberikan pengaruh penurunan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis pada tikus sehingga dapat diartikan kondisi sama seperti normal. Dikarenakan belum adanya penelitian sejenis, maka dipilih dosis ekstrak etanolik buah labu air adalah sebesar 500 mg/kgBB, 750 mg/kgBB, dan 1000 mg/kgBB yang bertujuan sebagai skrining awal dosis efektif ekstrak etanol labu air sebagai imunomodulator yang sebelumnya telah diinduksi dengan doksorubisin. Peringkat dosis ekstrak etanol buah labu air ini diperoleh dengan penambahan dosis, yaitu sebanyak 250 mg/KgBB. Dengan penambahan dosis ini tidak dapat ditentukan dosis efektif (ED) ekstrak etanol buah labu air. Perlu dilakukan penelitian serupa dengan dosis ekstrak menggunakan kelipatan dosis PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 34 agar dapat ditentukan dosis efektif ekstrak etanol buah labu air dalam meningkatkan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag. Lama pemberian ekstrak etanolik buah labu air adalah 10 hari. Penelitian bersama ini bersifat eksploratif sehingga dapat mengetahui pemberian ekstrak etanol buah labu air selama 10 hari dapat menimbulkan efek imunomodulator, hepatoprotektor serta kardioprotektor akibat pemejanan doksorubisin. Menurut hasil penelitian Gangwal, Parmar, and Sheth (2010) pemberian ekstrak metanolik Langenaria siceraria selama 5 hari sudah dapat meningkatkan kemampuan fagositosis pada tikus melalui pengamatan carbon clearance. Pada penelitian selanjutnya lebih baik dilakukan orientasi lamanya pemejanan ekstrak etanol buah labu air yang dapat menaikan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag paling maksimal. Pengambilan cairan intraperitonium dilakukan 4 hari setelah induksi doksorubisin. Pengambilan sampel pada hari ke-4 setelah pemberian doksorubisin terakhir dilakukan karena menurut hasil penelitian Kasianningsih (2011) sistem imun hewan uji mengalami penurunan 4 hari setelah pemberian doksorubisin terakhir. D. Uji Fagositosis Makrofag Pada penelitian ini sel makrofag diisolasi melalui cairan intraperitonial karena menurut Rosanti (2005), sel makrofag pada cairan intraperitonial jumlahnya lebih banyak (70%-95%) dibanding dengan organ limfa. Makrofag dapat ditemui antara lain di paru-paru, hati, dan permukaan sinusoid limpa. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 35 Makrofag biasanya tergantung di dalam jaringan yang ditempati, oleh karena itu biasa disebut fixed macrophage, tetapi pada cairan intraperitonial berada dalam bentuk bebas dalam cairan intraperitonium sehingga memudahkan dalam isolasi makrofag (Baratawidjaja dan Rengganis, 2009). Isolasi sel makrofag dari cairan intraperitonium dilakukan dengan cara menyuntikan medium RPMI dingin ke dalam rongga peritoneal kemudian dipijat-pijat agar sel makrofag terbawa dalam RPMI kemudian cairan diaspirasi ke dalam spuit. Digunakan medium RPMI dingin agar sel makrofag yang diisolasi tidak rusak, karena makrofag lebih stabil pada suhu rendah (dingin). Medium RPMI merupakan medium pertumbuhan sel yang mengandung asam amino, vitamin, dan garam-garam organik. Pada penelitian ini juga digunakan medium komplit yang terdiri dari campuran medium RPMI, FBS (Fetal Bovine Serum) yang merupakan serum untuk memacu pertumbuhan sel dan membuat sel bertahan lebih lama. Selain itu adanya penisilinstreptomisin (penstrep) dan fungison yang berfungsi sebagai antimikroba. Pada cairan peritoneum yang diisolasi, selain terdapat sel makrofag juga ditemukan sel-sel lain seperti limfosit dan sel granulosit yang saling berdekatan sehingga sulit dibedakan antara sel makrofag dengan sel lain. Kemampuan sel makrofag untuk menempel pada coverslip membedakan sel makrofag dengan sel yang lain. Oleh karena itu, dalam percobaan digunakan coverslips sebagai tempat penempelan makrofag. Perbedaan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag antara kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol dapat dilihat dari kemampuan sel makrofag memfagositosis partikel lateks secara in vitro (Leijh, Furth and Zwet, 1986). Pengamatan aktivitas makrofag yang memfagositosis latex bertujuan untuk PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 36 mengetahui sejauh mana kemampuan ekstrak etanolik Lagenaria siceraria sebagai imunomodulator sehingga dapat digunakan sebagai agen ko-kemoterapi pada penggunaan doksorubisin. Makrofag merupakan salah satu sel fagosit yang berperan penting pada saat terjadi invasi oleh bakteri atau parasit. Latex tersebut berfungsi sebagai antigen, sehingga diharapkan makrofag tersebut dapat memfagositosis latex. Setelah itu, dilakukan penghitungan makrofag yang memfagositosis latex berdasarkan hasil pengamatan mikroskop, yaitu mengamati makrofag yang menempel atau sudah memakan latex (Hutomo, Sutarno, Winarno, Kusmardi, 2005). Dilakukan pengecatan Giemsa untuk memberikan warna pada sel makrofag sehingga sel makrofag tampak berwarna keunguan sehingga mudah diamati di bawah mikroskop. Sebelum diwarnai dengan Giemsa, sel difiksasi dengan metanol absolut sehingga membran makrofag lebih terbuka dan zat warna Giemsa lebih mudah masuk. Latex merupakan polystyrene yang tidak bereaksi dengan Giemsa sehingga partikel lateks tidak berwarna, penambahan metanol memperkecil pori-pori latex sehingga akan mengkerut. Pengamatan menggunakan mikroskop memperlihatkan makrofag yang berwarna ungu dan latex yang berwarna putih (Gambar 5) sehingga dapat dibedakan antara latex dan sel makrofag yang difagositosis dan latex yang tidak difagositosis (Nie, Perry, Zhao, Huang, Kincade, Farrar, and Sun 2008). Kemampuan fagositosis sel makrofag dapat dilihat dari kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag dimana tahap paling awal untuk memfagositosis latex dimulai dengan pembentukan pseudopodia dan pembentukan fagosom. Berikut merupakan perbandingan PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 37 morfologi sel makrofag yang memfagositosis latex setelah dilakukan pengecatan Giemsa pada masing-masing kelompok perlakuan. Gambar 5. Perbandingan morfologi makrofag tikus dengan pengecatan Giemsa perbesaran 100x (a) (b) (c) Kontrol pelarut Kontrol doxo EELA 1000 mg/kgBB EELA 750 mg/kgBB EELA 500 mg/kgBB : Latex berwarna putih : Sel makrofag berwarna ungu : Partikel latex yang difagositosis oleh sel makrofag : kelompok tikus yang diberi CMC Na 1%, menunjukkan morfologi sel makrofag yang teraktivasi dengan membentuk kaki semu maupun fagososom. : kelompok tikus yang diberi doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB : kelompok tikus yang diberi doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 1000 mg/kgBB menunjukkan morfologi sel makrofag yang teraktivasi dengan membentuk kaki semu maupun fagosom. : kelompok tikus yang diberi doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 750 mg/kgBB menunjukkan morfologi sel makrofag yang teraktivasi dengan membentuk kaki semu maupun fagosom : kelompok tikus yang diberi doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 500 mg/kgBB menunjukkan morfologi sel makrofag yang teraktivasi dengan membentuk kaki semu maupun fagosom PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI E. 38 Efek Imunomodulator Ekstrak Etanol Buah Labu Air (Lagenaria siceraria)Terhadap Tikus Jantan Galur Sprague dawley yang Dipejani Doksorubisin Pada penelitian ini dilakukan pembuktian terhadap efek imunomodulator dari ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) sebagai agen kokemoterapi akibat induksi doksorubisin. Efek imunomodulator diamati melalui peningkatan kapasitas dan indeks fagositosis setelah pemberian ekstrak etanol labu air peringkat dosis tinggi, sedang dan rendah dibandingkan dengan kontrol doksorubisin dan kontrol pelarut. Tabel II. Purata ± SE Kapasitas Fagositosis Makrofag setelah Pemberian Ekstrak Etanol Labu Air dalam Berbagai Peringkat Dosis Kelompok perlakuan Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V Ket. Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V B : Berbeda bermakna n 5 5 5 5 5 Purata ± SE (%) 50,08 ± 4,47 37,79 ± 3,19 57,86 ± 2,54 51,54 ± 4,73 39,71 ± 2,78 P 0,004B : CMC Na 1% : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 1000 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 750 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 500 mg/kgBB PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 39 Tabel III. Purata ± SE Indeks Fagositosis Makrofag setelah Pemberian Ekstrak Etanol Labu Air dalam Berbagai Peringkat Dosis Kelompok perlakuan Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V Ket. Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V n 5 5 5 5 5 Purata ± SE 1,26± 0,27 0,66± 0,05 1,28± 0,10 1,05± 0,14 0,76± 0,07 P 0,028B : CMC Na 1% : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 1000 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 750 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 500 mg/kgBB B : Berbeda bermakna Kontrol pelarut dibuat untuk mengetahui nilai kapasitas fagositosis normal dan indeks fagositosis normal sebelum diinduksi doksorubisin. Dari percobaan (Tabel II dan III) diketahui rata-rata nilai kapasitas fagositosis kelompok kontrol pelarut sebesar 50,08± 4,47 % dan rata-rata indeks fagositosis kelompok kontrol pelarut sebesar 1,26 ± 0,27. Nilai kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis ini yang dijadikan patokan nilai normal untuk penelitian ini selanjutnya. Doksorubisin merupakan salah satu agen kemoterapi yang dapat menyebabkan penurunan sistem imun seluler sehingga digunakan kontrol doksorubisin untuk mengetahui pengaruh penggunaan doksorubisin sebagai imunosupresan melalui pengamatan penurunan nilai kapasitas dan indeks fagositosis makrofag. Selain itu, kontrol doksorubisin juga digunakan sebagai patokan dalam menganalisa efek imunomodulator dari ekstrak etanol labu air. Menurut Herwandhani, Nagadi, dan Saktiningtyas (2011) dosis doksorubisin sebesar 9,35 mg/KgBB dapat menginduksi penurunan sistem imun namun bersifat PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 40 toksik bagi tikus uji apabila diberikan dalam dosis tunggal, sehingga doksorubisin diberikan dalam 2 kali pemberian yaitu 4,67 mg/KgBB. Penelitian bersama ini digunakan dosis yang dapat menginduksi ketiga efek imunosupresan, hepatotoksik, maupun kardiotoksik sehingga digunakan dosis yang lebih tinggi berupa 3 kali pemberian yaitu 4,5 mg/KgBB. Rata-rata nilai kapasitas fagositosis kelompok kontrol doksorubisin sebesar 37,79± 3,19% dan rata-rata indeks fagositosis kelompok kontrol doksorubisin sebesar 0,66± 0,05. Dibandingkan dengan kapasitas fagositosis kontrol CMC Na 1% sebesar 50,08 ± 4,47 % maka terlihat terjadi penurunan kapasitas fagositosis lebih kurang 0,75 kalinya dibandingkan dengan kontrol pelarut. Indeks fagositosis bila dibandingkan dengan indeks fagositosis kontrol CMC Na 1% sebesar 1,26 ± 0,27 maka terlihat adanya penurunan indeks fagositosis lebih kurang 0,52 kalinya dibandingkan dengan kontrol pelarut. Hal ini menunjukkan pemberian doksorubisin dalam 3 kali pemberian yaitu 4,5 mg/KgBB dapat menimbulkan efek imunosupresan melalui penurunan nilai kapasitas dan indeks fagositosis. Meskipun pemberian doksorubisin dalam 3 kali pemberian yaitu 4,5 mg/KgBB dapat menimbulkan efek imunosupresan, dikhawatirkan penurunan sistem imun lebih baik pada 2 kali pemberian dibandingkan dengan 3 kali pemberian. Oleh karena itu, pada penelitian selanjutnya sebaiknya dilakukan orientasi dosis doksorubisin yang dapat menurunkan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang paling maksimal. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 41 Tabel IV. Hasil Analisis Uji Post-hoc LSD Kapasitas Fagositosis Makrofag setelah Pemberian Ekstrak Etanol Labu Air dalam Berbagai Peringkat Dosis Ket. Kelompok Perlakuan I II III IV V I - BB BTB BTB BTB II BB - BB BB BTB III BTB BB - BTB BB IV BTB BB BTB - BB V BTB BTB BB BB - Kelompok I Kelompok II Kelompok III : CMC Na 1% : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 1000 mg/kgBB Kelompok IV : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 750 mg/kgBB Kelompok V : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 500 mg/kgBB BB : Berbeda bermakna; BTB : Berbeda tidak bermakna Tabel V. Hasil Analisis Uji Post-hoc LSD Indeks Fagositosis Makrofag setelah Pemberian Ekstrak Etanol Labu Air dalam Berbagai Peringkat Dosis Ket. Kelompok Perlakuan I II III IV V I - BB BTB BTB BB II BB - BB BTB BTB III IV BTB BB - BTB BB BTB BTB BTB - BTB V BB BTB BB BTB - Kelompok I Kelompok II Kelompok III : CMC Na 1% : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 1000 mg/kgBB Kelompok IV : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 750 mg/kgBB Kelompok V : doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 500 mg/kgBB BB : Berbeda bermakna; BTB: Berbeda tidak bermakna Dari hasil analisis statistik (Tabel IV dan V), adanya penurunan kapasitas fagositosis maupun indeks fagositosis makrofag kelompok kontrol doksorubisin PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 42 yang berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kelompok kontrol pelarut (CMC Na 1%) menandakan doksorubisin dapat menyebabkan penurunan jumlah makrofag yang aktif memfagosit lateks. Hal ini dikarenakan pemberian doksorubisin akan berefek pada sel-sel yang mengalami pembelahan sel secara cepat seperti sumsum tulang (Phillip et al., 2006). Di antara sel sumsum tulang belakang, prekusor hemopoetik merupakan sel yang paling sensitif terhadap sitotoksisitas dari doksorubisin (Uspenkaya et al, 2004). Oleh karena itu, pada penggunaan doksorubisin banyak dijumpai leucopenia (jumlah sel darah putih yang terlalu rendah) serta penurunan interleukin-2 (IL-2) dan produksi interferon-γ (IFN-γ) yang merupakan komponen penting dalam sistem imun. Hal ini dapat menurunkan jumlah sel sitotoksik natural killer (NK), proliferasi limfosit serta ratio limfosit T CD4+/CD8+ (Zhang et al., 2005) yang juga menurunkan jumlah makrofag aktif dalam sistem imun. Doksorubisin dapat menyebabkan penurunan jumlah makrofag yang aktif memfagosit lateks, namun tidak diketahui seberapa besar penurunan kapasitas dan indeks fagositosisnya akibat tidak adanya patokan nilai kapasitas dan indeks fagositosis yang mengalami penurunan akibat doksorubisin. Pada penelitian selanjutnya, sebaiknya dilakukan pengkajian ulang obat kemoterapi lain yang dapat menimbulkan efek penekanan nilai kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang lebih baik dari doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 43 1. Pengaruh Ekstrak Etanol Buah Labu Air (Lagenaria siceraria) Dosis 1000 mg/kgBB; 750 mg/kgBB; dan 500 mg/kgBB terhadap Kapasitas Fagositosis Makrofag pada Hewan Uji Tikus Jantan Galur Sprague Dawley yang Dipejani Doksorubisin Kapasitas fagositosis menunjukkan persentase jumlah sel makrofag yang aktif dari 100 sel makrofag (Jensch-Junior, et al., 2006). Semakin tinggi persentase kapasitas fagositosis makrofag maka kemampuan fagositosis sel makrofag semakin baik. Berikut merupakan hasil penelitian yang disajikan dalam diagram batang. Gambar 6. Diagram batang kapasitas fagositosis tikus perlakuan ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai peringkat dosis Ket. Mean KF: rata-rata kapasitas fagositosis setiap kelompok; Kontrol pelarut: CMC Na 1%; Kontrol doxo: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB; EELA 1000 mg/KgBB: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 1000 mg/kgBB; EELA 750 mg/KgBB: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 750 mg/kgBB; EELA 500 mg/KgBB: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 500 mg/kgBB PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 44 Uji normalitas dan homogenitas varian data dilakukan menggunakan uji Kolmogorov-Smironov dan Levene Test (Lampiran 4). Hasil uji Kolmogorov-Smironov menunjukkan bahwa p = 0,565 ( p> 0,05) artinya data terdistribusi normal. Dan hasil Levene Test menunjukkan nilai p = 0,297 ( p> 0,05) yang artinya varian dari data sama. Data tersebut selanjutnya diuji dengan one way ANOVA taraf kepercayaan 95%. Hasil uji one way ANOVA (Tabel II) menunjukkan bahwa nilai p = 0,004 (p < 0,05). Hal ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna setidaknya pada 2 kelompok uji. Selanjutnya dilakukan uji LSD untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol buah labu air pada jumlah sel makrofag yang memfagositosis lateks antar kelompok perlakuan, antara kelompok perlakuan dan kelompok kontrol pelarut, serta antara kelompok perlakuan dan kelompok doksorubisin Kelompok III adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol buah labu air dosis 1000 mg/kgBB. Kapasitas fagositosis pada kelompok ini sebesar 57,86 ± 2,54 % (Tabel II). Dibandingkan dengan kontrol doksorubisin, terjadi peningkatan sebesar 1,53 kalinya dan menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik (Tabel IV). Dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol buah labu air dosis 1000 mg/kgBB memiliki efek imunomodulator melalui peningkatan kapasitas fagositosis yang terinduksi doksorubisin. Nilai kapasitas fagositosis pada kelompok III ini menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) dengan kelompok kontrol CMC Na 1% pada uji PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 45 statistik. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol buah labu air pada dosis 1000 mg/kgBB dapat meningkatkan kapasitas fagositosis makrofag hingga keadaan normal (sama dengan kontrol pelarut) meskipun sebelumnya telah dipejani doksorubisin. Kelompok IV adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol buah labu air dosis 750 mg/kgBB. Kapasitas fagositosis pada kelompok ini sebesar 51,54 ± 4,73% (Tabel II). Dibandingkan dengan kontrol doksorubisin, terjadi peningkatan sebesar 1,36 kalinya dan menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik (Tabel IV). Dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol buah labu air dosis 750 mg/kgBB memiliki efek imunomodulator melalui peningkatan kapasitas fagositosis yang terinduksi doksorubisin. Nilai kapasitas fagositosis pada kelompok IV ini menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) dengan kelompok kontrol CMC Na 1% pada uji statistik. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol buah labu air pada dosis 750 mg/kgBB dapat meningkatkan kapasitas fagositosis makrofag hingga keadaan normal (sama dengan kontrol pelarut) meskipun sebelumnya telah dipejani doksorubisin. Kelompok V adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol buah labu air dosis 500 mg/kgBB. Kapasitas fagositosis pada kelompok ini sebesar 39,71 ± 2,78% (Tabel II). Dibandingkan dengan kontrol doksorubisin, terjadi peningkatan sebesar 1,05 kalinya tetapi menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) pada uji statistik (Tabel IV). Nilai kapasitas fagositosis pada kelompok V ini menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 46 dengan kelompok kontrol CMC Na 1% pada uji statistik. Dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol buah labu air dosis 500 mg/kgBB belum dapat meningkatan kapasitas fagositosis tikus jantan yang terinduksi doksorubisin hingga keadaan normal. Hal ini dikarenakan dosis 500 mg/kgBB merupakan peringkat dosis terendah sehingga dimungkinkan kadar ekstrak etanolik buah labu air belum dapat menimbulkan efek farmakologi yang diinginkan. Analisis statistik kapasitas fagositosis pada kelompok III terhadap kelompok IV menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) dan menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) terhadap kelompok V. Pada kelompok IV terhadap kelompok V menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) (Tabel IV). Hal ini menunjukkan bahwa perlakuan ekstrak etanol buah labu air dosis 500 mg/Kg BB belum efektif meningkatkan kapasitas fagositosis pada tikus yang dipejani doksorubisin. Sedangkan dosis 1000 mg/KgBB dan 750 mg/KgBB menunjukkan efek yang sama dalam meningkatkan nilai kapasitas fagositosis makrofag pada tikus yang dipejani doksorubisin. Namun, bila dilihat dari grafik rata-rata kapasitas fagositosis makrofag (Gambar 6) terdapat peningkatan kapasitas fagositosis makrofag seiring meningkatnya peringkat dosis ekstrak etanol buah labu air, yaitu pada ekstrak etanol labu air dosis 1000 mg/kgBB sebesar 57,86%, ekstrak etanol labu air dosis 750 mg/kgBB sebesar 51,55%, dan ekstrak etanol labu air dosis 500 mg/kgBB sebesar 39,71%. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 47 2. Pengaruh Ekstrak Etanol Buah Labu Air (Lagenaria siceraria) Dosis 1000 mg/kgBB; 750 mg/kgBB; dan 500 mg/kgBB terhadap Indeks Fagositosis Makrofag pada Hewan Uji Tikus Jantan Galur Sprague Dawley yang Dipejani Doksorubisin Indeks fagositosis menunjukan jumlah rata-rata lateks yang dapat difagositosis oleh setiap sel makrofag yang aktif (Jensch-Junior, et al., 2006). Semakin besar nilai indeks fagositosis maka semakin besar aktivitas setiap sel makrofag tersebut. Berikut merupakan hasil penelitian yang disajikan dalam diagram batang. Gambar 7. Diagram batang indeks fagositosis tikus perlakuan ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai peringkat dosis Ket. Mean IF: rata-rata indeks fagositosis setiap kelompok; Kontrol pelarut: CMC Na 1%; Kontrol doxo: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB; EELA 1000 mg/KgBB: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 1000 mg/kgBB; EELA 750 mg/KgBB: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 750 mg/kgBB; EELA 500 mg/KgBB: doksorubisin dosis 4,5 mg/kgBB + ekstrak etanolik buah labu air dosis 500 mg/kgBB PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 48 Hasil uji Kolmogorov-Smirnov dan Levene Test (Lampiran 5), didapat nilai p = 0,830 (p>0,05) dan p = 0,053 (p>0,05) sehingga dapat dinyatakan bahwa data indeks fagositosis makrofag terdistribusi normal dan varian dari data sama. Hasil uji one way ANOVA, didapat p = 0,028 (p < 0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat terdapat perbedaan yang bermakna setidaknya pada 2 kelompok uji. Tabel III menunjukkan bahwa indeks fagositosis kelompok III sebesar 1,28 ± 0,10. Dibandingkan dengan kontrol doksorubisin menunjukkan kenaikan indeks fagositosis sebesar 1,94 kalinya serta perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik (Tabel V). Dibandingkan dengan kontrol pelarut, indeks fagositosis pada kelompok ini menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) pada uji statistik. Dapat diartikan bahwa ekstrak etanol buah labu air dosis 1000 mg/kgBB memiliki efek peningkatan indeks fagositosis yang terinduksi doksorubisin. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol buah labu air konsentrasi 1000 mg/kgBB pada tikus jantan yang dipejani doksorubisin mempunyai efek imunomodulator dimana peningkatan indeks fagositosis makrofag kembali hingga normal. Indeks fagositosis kelompok IV sebesar 1,05 ± 0,14 (Tabel III). Dibandingkan dengan kontrol doksorubisin menunjukkan kenaikan indeks fagositosis sebesar 1,59 kalinya namun perbedaan tersebut tidak bermakna (p<0,05) pada uji statistik (Tabel V). Dibandingkan dengan kontrol pelarut, indeks fagositosis pada kelompok ini menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) pada uji statistik. Dapat diartikan bahwa ekstrak etanol PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 49 buah labu air dosis 750 mg/kgBB belum memiliki efek peningkatan indeks fagositosis yang terinduksi doksorubisin. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol buah labu air dosis 750 mg/kgBB pada tikus jantan yang dipejani doksorubisin belum mempunyai efek imunomodulator. Indeks fagositosis kelompok V sebesar 0,76 ± 0,07 (Tabel III). Dibandingkan dengan kontrol doksorubisin menunjukkan perbedaan tersebut tidak bermakna (p<0,05) pada uji statistik (Tabel V). Dibandingkan dengan kontrol pelarut, indeks fagositosis pada kelompok ini menunjukkan perbedaan yang bermakna (p>0,05) pada uji statistik. Dapat diartikan bahwa ekstrak etanol buah labu air dosis 500 mg/kgBB belum memiliki efek peningkatan indeks fagositosis yang terinduksi doksorubisin.Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol buah labu air dosis 500 mg/kgBB pada tikus jantan yang dipejani doksorubisin belum mempunyai efek imunomodulator. Analisis statistik indeks fagositosis pada kelompok III terhadap kelompok IV dan kelompok V menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05). Pada kelompok IV terhadap kelompok V menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) (Tabel IV). Hal ini menunjukkan bahwa hanya perlakuan ekstrak etanol buah labu air dosis 1000 mg/Kg BB yang efektif meningkatkan indeks fagositosis pada tikus yang dipejani doksorubisin. Sedangkan dosis 750 mg/KgBB dan 500 mg/KgBB belum dapat meningkatkan nilai kapasitas fagositosis makrofag pada tikus yang dipejani doksorubisin. Namun, bila dilihat dari grafik rata-rata indeks fagositosis makrofag (Gambar 7) terdapat peningkatan indeks fagositosis makrofag PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 50 seiring meningkatnya peringkat dosis ekstrak etanol buah labu air, yaitu pada ekstrak etanol labu air dosis 1000 mg/kgBB sebesar 1,28, ekstrak etanol labu air dosis 750 mg/kgBB sebesar 1,05, dan ekstrak etanol labu air dosis 500 mg/kgBB sebesar 0,76. 3. Dosis Paling Efektif Pemberian Ekstrak Etanol Buah Labu Air (Lagenaria siceraria) terhadap Peningkatan Kapasitas dan Indeks Fagositosis Makrofag pada Hewan Uji Tikus Jantan Galur Sprague Dawley yang Dipejani Doksorubisin Pemberian ekstrak etanol labu air dosis 500 mg/kg BB menunjukkan hasil peningkatan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang tidak berbeda bermakna secara statistik (Tabel IV dan V) terhadap kontrol doksorubisin. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol labu air dosis 500 mg/kg BB belum dapat menaikkan persen makrofag yang aktif serta jumlah latex yang difagositosis oleh setiap makrofag yang aktif akibat induksi doksorubisin. Pemberian ekstrak etanol labu air dosis 750 mg/kg BB menunjukkan hasil peningkatan kapasitas fagositosis makrofag berbeda bermakna secara statistik terhadap kontrol doksorubisin (Tabel IV) tetapi menunjukkan peningkatan indeks fagositosis yang berbeda tidak bermakna secara statistik terhadap doksorubisin (Tabel V). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol labu air dosis 750 mg/kg BB dapat menaikkan persen makrofag yang aktif tetapi belum dapat menaikkan jumlah latex yang difagositosis oleh setiap makrofag yang aktif akibat induksi doksorubisin. Hal ini dapat dikarenakan sampel membentuk gel pada saat pencucian dengan PBS untuk PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 51 menghilangkan latex yang tidak terfagositosis, sehingga dimungkinkan makrofag yang aktif memfagositosis latex terjebak dalam gel dan terbuang. Dimungkinkan pembentukan gel ini yang menyebabkan dosis 750 mg/KgBB dapat menaikan kapasitas fagositosis namun belum dapat menaikan indeks fagositosis. Pemberian ekstrak etanol labu air dosis 1000 mg/kg BB menunjukkan hasil peningkatan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang berbeda bermakna secara statistik terhadap kontrol doksorubisin tetapi berbeda tidak bermakna terhadap kontrol pelarut (Tabel IV dan V). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol labu air dosis 1000 mg/kg BB merupakan dosis paling efektif yang dapat menaikkan persen makrofag yang aktif serta jumlah lateks yang difagositosis oleh setiap makrofag yang aktif akibat induksi doksorubisin hingga keadaan normal. Dosis paling efektif ini jika dikonversi dalam dosis manusia menjadi 160 mg/KgBB atau 11200 mg untuk satu kali penggunaan. Dosis yang terlalu besar akan menimbulkan ketidaknyamanan pada saat penggunaan, sehingga perlu dilakukan fraksinasi ekstrak etanolik buah labu air agar dosis paling efektifnya dapat diturunkan. Efek imunomodulator dari ekstrak etanol buah labu air disebabkan adanya kandungan terpenoid dan flavonoid yang diidentifikasi merupakan asam oleanolat dan isokuersetin (Shah, et al., 2010). Adanya kandungan asam oleanolat dapat meningkatkan sekresi IFN-γ (Rios,2010) yaitu aktivator poten fagosit mononuclear yang menstimulasi makrofag membunuh sel tumor dan mikroba fagosit. Flavonoid dapat memperbaiki sistem imun karena berpotensi PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 52 terhadap proliferasi sel limfosit T maupun sel limfosit B serta terhadap limfokin yang dihasilkan oleh sel T sehingga merangsang sel-sel fagosit untuk meningkatkan aktivitas fagositosis (Kusmardi, et al., 2007). Flavonoid akan menstimulasi pelepasan sitokin IL-12 oleh sel T (Shen and Louine, 1999). IL12 berfungsi merangsang produksi IFN-γ oleh sel NK, sementara IFN-γ berperan dalam aktivasi makrofag (Baratawidjaja dan Rengganis, 2009), sehingga adanya kandungan terpenoid dan flavonoid pada ekstrak etanolik buah labu air dapat meningkatkan aktivasi makrofag yang dinyatakan dengan kapasitas dan indeks fagositosis yang sebelumnya telah diinduksi dengan doksorubisin. Kemampuan ekstrak etanolik buah labu air dalam meningkatkan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang sebelumnya telah dipejani doksorubisin berpengaruh terhadap peningkatan fungsi makrofag sebagai APC (Antigen Precenting Cell). Meningkatnya fungsi makrofag sebagai APC akan meningkatkan kemampuan makrofag dalam mengenalkan antigen (sel tumor) kepada sel-sel imun lain kemudian mengaktivasinya. Oleh karena itu, sebaiknya dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai efek imunomodulator ekstrak etanolik buah labu air melalui pengamatan komponen sistem imun non spesifik lain seperti neutrofil, eusinofil, sel NK, maupun pengamatan komponen sistem imun spesifik seperti rasio CD4/CD8 yang sebelumnya telah dipejani doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) berpengaruh terhadap kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin 2. Dosis paling efektif pemberian ekstrak etanolik buah labu air (Langenaria siceraria) untuk meningkatkan kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag pada tikus galur Sprague Dawley yang dipejani doksorubisin sebesar 1000 mg/KgBB. B. Saran 1. Perlu dilakukan fraksinasi ekstrak etanolik buah labu air agar dosis paling efektifnya dapat diturunkan. 2. Perlu dilakukan penelitian serupa dengan tingkatan dosis ekstrak etanol buah labu air menggunakan kelipatan dosis. 3. Perlu mengkaji ulang lama pemberian ekstrak etanol buah labu air yang dapat menaikkan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang paling maksimal. 4. Perlu mengkaji ulang dosis doksorubisin yang dapat menurunkan kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang paling maksimal. 53 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 54 5. Perlu dilakukan penelitian serupa dengan pengamatan komponen sistem imun non spesifik lainnya seperti neutrofil, eosinofil, sel NK, maupun pengamatan komponen sistem imun spesifik seperti rasio CD4/CD8. 6. Pengkajian ulang obat kemoterapi lain yang dapat menimbulkan efek penekanan nilai kapasitas dan indeks fagositosis makrofag yang lebih baik dari doksorubisin. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 55 DAFTAR PUSTAKA Abbas , A.K., dan Lichtman, A.h., 2005, Cellular and Molecular Immunology, 5th editon, Elsevier Publisher, Philadelpia, pp. 5-6. Abbas A.K., Lichtman, A.H., Pober, J.S., 2007, Cellular and Molecular Immunology, 3rded, WB Saunders Company, Philadelphia, pp 94-177. Anonima, 2007, Kanker : Pertumbuhan, Terapi dan Nanomedis, diambil dari situs http://www.nano.lipi.go.id/utama.cgi?artikel&1187593839 diakses pada bulan agustus 2008. b Anonim , 2007, Sistem Kekebalan Tubuh, diakses dari situs http://mikrobia.wordpress.com/2007/03/08/sistem-kekebalantubuh068114009068114048068114055/, diakses pada bulan Mei 2012. Baratawidjaja , K.G., 2000, Imunologi Dasar, Edisi IV, Balai Penerbit fakultas Kedokteran umum Universitas Indonesia, Jakarta, p. 49. Baratawidjaja , K.G., dan Rengganis, I, 2009, Imunologi Dasar, Edisi VIII, Balai Penerbit fakultas Kedokteran umum Universitas Indonesia, Jakarta, pp. 29, 61-75. Belly, J., 2012, Bottle Gourd, http://www.joyfulbelly.com/Ayurveda/ingredient/Bottle-Gourd/116, diakses tanggal 20 Mei 2012. Bruton, L., Lazo, J. S., and Parker, K. L., 2005, Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition, McGrawHill, Lange. Campbell, N.A., Reece, J.B.,and Mitchell, L.G., 1999, Biology, Edisi V, Jilid 3, diterjemahkan oleh Rahayu lestari, Ellyzar Adil, Nova anita, Andri, Wishnu Wibowo, Washmen manalu, penerbit Erlangga, Jakarta, pp. 7385. Childs, A.C., Phaneuf, S.L., Dirks, A.J., Phillips, T., and Leeuwenburgh, 2002, Doksorubisin Treatment in Vivo Causes Cytochrome c Release and Cardiomyocyte Apoptosis, As Well As Increased Mitochondrial Efficiency, Superoxide Dismutase Activity, and Bcl-2:Bax Ratio, Cancer Research, 62, 4592-4598. Cutts, S.M., et al., 2005, Formaldehyde-releasing prodrugs in combination with adriamycin can overcome cellular drug resistance. Oncol Res, 15(4): p. 199-213. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 56 Dasgupta, A., 1992, Modern Immunology, 131, Jaypee Brothers Medical Publishers (P) Ltd, New Delhi. Deshpande, J.R., Choundhari, A.A., Mishra, M.R., Meghre, V.S., Wadodkar, S.G., and Dorle, A.K., 2008, Beneficial Effects of Lagenaria siceraria (Mol.) Standley fruit eficarp in animal Model, Indian J. Exp Biol, 46, 234-242. Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1999, Peraturan Perundangundangan di bidang Obat Tradisonal, Depkes RI ,hal 76 – 77. Feusner, J., 1996, The Role of Ascorbic Acid in The Prevention of Cancer, Nutr Bytes, 2(2), article 2. Gangwal, A., Panmar, S.K., Gupta, G.L., Rana A.C., and Sheth, N.R., 2008, Immunomodulatory Effects of Langenaria siceraria Fruits in rats, Pharmacognosy Mag., 4, S234-S238. Gangwal, A., Parmar S.K., and Sheth, N.R., 2010, Phytochemical Investigation and Inmunomodulatory Activity of Lagenaria siceraria Fruits, J. Natural Remedies, vol. 10/2 (2010) 170-174 Ganong, W.F., 2002, Fisiologi Kedokteran, ed. 20, Penerbit Buku Kedokteran, EGC, Jakarta, pp. 496-500. Goodman J.W., 1994, The Immune Response, in Basic and Clinical Immunology, 8th ed., Prentice Hall Int.Inc., USA, p. 57. Handayani, T., 2009, Respon imun Non Spesifik, http://arifwr.wordpress.com/2009/06/09/respon-imun-non-spesifik/, diakses tanggal 1 Oktober 2010. Herwandhani, P., Nagadi, S.. dan Saktiningtyas, I.A. 2011, Potensi Kulit Jeruk Purut (Citrus hystrix D.C.) sebagai Agen Imunomodulator yang Prospektif pada Penekanan Efek Imunosupresi Kemoterapi, Jurnal Saintifika Gadjah Mada, III(2) Hutomo, R., Sutarno, Winarno, W., Kusmardi, 2005, Uji Antimalaria Ekstrak Buah Morinda citrifolia dan Aktivitas Makrofag pada Mencit (Mus musculus) setelah Diinfeksi Plasmodium berghei, Jurnal Biofarmasi, 3 (2), 61-69. Israels, L.G., 2002, Mechanism in Hematology CDROOM, Core Health Service Inc, Ontario-Canada. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 57 Jensch-junior, B.E.Z., Pressinoti, L.N., Berges, J.C.,S., and Silva, J.R.M.C., 2006, Characterization of Macrophage Phagocytosis of The Tropical Fish Prochilous scrofa (Steindacher,1881), J Agriculture, 251, 509-615. Kasianningsih, S., 2011, Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanolik Daun Jombang (Taraxacum officinale wigger) terhadap Profil Sel limfosit T CD4 dan CD8 serta Histopatologi Jantung pada Tikus Galur Sprague dawley yang Dipejani Doksorubisin, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Kubde, M.S., Khadabadi, S.S., Farooqui, I.A. , Deore, S. L., 2010, Lagenaria siceraria:Phytochemistry, Pharmacognosy and Pharmacological Journal, 2(3), 91-98. Kusmardi, Kumala,S., dan Triana, E.E., 2007, Efek Imunomodulator Ekstrak Daun Ketepeng cina (Cassia alata l.) terhadap Aktivitas dan Kapasitas fagositosis Makrofag, Makara, J Kesehatan,11(2). 50-53. Leijh, P.J.C., Furtth, R.V., and Zwet, T.L.V., 1986, In Vitro Determination of Phagocytosis and Intracellular Killing by Polimorphonuclear and Mononuclear Phagocytes, In: Weir DM, Editor, Cellular Imunology, 2, 74085 Blackwell Scintific Publication, London. Leung, P.Y., Miyashita, K., Young, M., and Tsao, C.S., 1993, Cytotoxyc Effect of Ascorbate and Its Derivates on Cultured Malignant and Nonmalignant Cell Lines.Anticancer res. 13(2), 475-80. Ma’at, S., 2009, Membangun Sistem Kekebalan Tubuh dengan Herbal,http:’//www.indospiritual.com/artikel_membangun-sistemkekebalan-tubuh-dengan-herbal.html, diakses tanggal 13 November 2009. Marrelli, T.M., 2000, Nursing Documentation Handbook, 3th Ed, diterjemahkan oleh Rosidah, D., et al., EGC, Jakarta. Meiyanto, E., 2012, Ko-kemoterapi, Alternatif untuk Penyembuhan Kanker, http://nationalgeographic.co.id/berita/2012/03/ko-kemoterapi-alternatifuntuk-penyembuhan-kanker, diakses tanggal 10 Mei 2012. Nie, L., Perry, S., Zhao, Y., Huang, J., Kincade, P., Farrar, M.,A., and Sun, X., 2008, Regulation of Lymphocyte Development by Cell-Type-Specific Interpretation of Notch Signals, Mol Cell Biol, Mar;28(6):2078-90. Patel, D., Shukla, S., Gupta., 2007, Apigenin and Cancer Chemoprevention: Progress, Potensial, Promise (Review), J. Oncology, 30, 233-245. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 58 Perry, M.C., 2008, The Chemotherapy Source Book, 4th Ed, Williams And Wilkins, USA. Phillip A. H., Garai, A.S., and Valenzuela, M.A., 2006, Reduction of Doksorubisin (Adriamycin) Bone Marrow Toxicity, J. Pharmaceutical Sciences, Volume 64 Issue 9, pp. 1574 – 1576. Rios, J.L. 2010, Effects of Triterpens on the immune System, Journal of Ethnopharmacology,128,1-14. Rosanti, T.I., 2005, Pengaruh Infeksi Brugia malayi dan Imunisasi Protein Ekskretori-sekretori Brugia malayi terhadap Aktivasi Makrofag dan Proriferasi Limfosit T (Meriones unguiculatus): Kajian pada Mencit Balb/c dan Gerbil (Meriones unguiculatus), Tesis, Program Pascasarjana Univesitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Scalabrin M., 2011, Analyses of Cross-linking Between DNA and Anthracycline, Ph.D School in Molecular Science Orientation: Pharmaceutical Science XXIII Cycle Shah, B.N., Seth, A.K., and Desai, R.V., 2010, Phytopharmacological Prodile of Lagenaria siceraria: A Review, Asian Journal of Plant Sciences, 9 (3), 152-157. Shen, W.C., and Louie S.G., 1999, Immunology for Pharmacy Students ,Harwood Academic Publishers, USA, p. 4, 6. Shirley E.O., 2003, Pocket Guide of Oncology Nursing, diterjemahkan oleh Meiliya., E., EGC,Jakarta. Stephens, J.M., 2009, Gourd, Bottle — Lagenaria siceraria (Mol.) Standl, Horticultural Sciences Department, University of Florida Susilaningsih N,Johan A, Gunardi, dan Winarto, 2005, Pengaruh Polifenol Teh Hijau dan Komponen Aktifnya terhadap Aktifitas Fagositosis Makrofag dalam Membunuh Bakteri. Media Medika Indonesia, pp 40 : 76-81. Taatjes, D.J., Guadiano G, Resing K, and Koch TH., 1997, Redox pathway leading to the alkylation of DNA by the anthracycline, antitumor drugs adriamycin and daunomycin. J Med Chem, 40(8): p. 1276-86. Taatjes, D.J. and T.H. Koch, 2001, Nuclear targeting and retention of anthracycline antitumor drugs in sensitive and resistant tumor cells. Curr Med Chem, 8(1): p.15-29. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 59 Tambunan, C.A., 2006, Pengaruh Pemberian Vaksinasi BCG, Stres, dan Kombinasi Vaksinasi BCG-Stres Terhadap Kemampuan Fagositosis Makrofag pada Mencit BALB/c, Artikel penelitian, Universitas Diponegoro, Semarang. Trease, G.E. and Evans, W.C., 2002, Pharmacognosy, 15th Ed, Harcourt brace & Co. Asia, Pvt. Ltd., W.B.Saunders Company Ltd. Uspenskaya, Y.A., Mikhutkina, S.,V., taksanova, E.I., Popova, N.N., Olovyannikova, R.Y.,and A.b., Salmina,2004, Induction of Apoptosis in Bone Marrow Cells in Mediated via Purigenic Receptors, Byulleten’Eksprimental’noi Biologii I Meditsiny, pp. 138, 8, 135-138. Wagner, H., and Jurcic K., 1991, Assay For Immunomodulation and Effect on Mediators of Inflammation, In: Methods in Plants Biochemistry: Assay for Bioactivity VI, PM Dey And JB Harbone (Eds.), Academic Press, London. Widianto, M.B., 1987, Imunomodulator, Cermin Dunia Kedokteran No. 44, Pusat Penelitian dan Pengembangan PT. Kalbe Farma, pp. 43-46. Xu, G., Fujita, K., Negayama, K., Yuube, S., Hojo, Y., Yamaji, K., Kawanishi and, Takahara, J., 1996, Effect of Macrolide Antibiotics on Macrophage Functions, Microbiol Immunol 7: 473-479. Zhang, X., Li,W., Wu, yong-Jie,G., and Ming-tang, 2005, Amelioration of Doksorubisin-Induced Myocardial Oxydative stress and imunosuppresion by Grape Seed Proanthocyanidins in tumour-bearing Mice, J Pharm Pharmacol, 57, 8, 1043-1051. Zuhud,E. AM., 2011, Kanker Lenyap Berkat Sirsak, Argomedia Pustaka, Jakarta, pp. 345-355. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI LAMPIRAN PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 1. Buah labu air 61 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 62 Lampiran 2. Komposisi media tumbuh makrofag 1. Medium RPMI RPMI : 10,4 g NaHCO3 :2g Hepes : 2,6 g Aquades add 1000 mL 2. Medium Komplit Medium RPMI : 100 mL FBS : 30 mL Penstrep : 6 mL Fungison : 3 mL Lampiran 3. Data orientasi kapasitas fagositosis dan indeks fagositosis makrofag pada tiap kelompok kontrol No. Kelompok 1 Kontrol Negatif 2 Kontrol Doxorubicin Kontrol Ekstrak (1000 3 mg/kgBB) Rata-rata KF (%) Rata-rata IF 50,08 37,79 1,26 0,66 59,4 1,19 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 63 Lampiran 4. Analisis statistik kapasitas fagositosis pengaruh ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai variasi dosis terhadap imunosupresan doxorubicin Descriptives Descriptive Statistics N Minimum Maximum Statistic KF 25 Valid N (listwise) 25 Statistic 28.30 Statistic 66.36 Mean Std. Deviation Statistic Std. Error Statistic 47.3996 NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test KF N 25 a,,b Normal Parameters Mean Std. Deviation Most Extreme Differences 47.3996 10.72925 Absolute .113 Positive .113 Negative -.097 Kolmogorov-Smirnov Z .565 Asymp. Sig. (2-tailed) .907 a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. 2.14585 10.72925 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 64 Oneway Descriptives KF 95% Confidence Interval for Mean N Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum Kontrol 5 50.0840 10.00152 4.47281 37.6655 62.5025 38.74 59.83 Kontrol Doxorubicin 5 37.7900 7.13709 3.19180 28.9281 46.6519 28.30 46.36 EELA 1000mg/kg 5 57.8640 5.68329 2.54164 50.8073 64.9207 50.98 64.86 EELA 750 mg/kg 5 51.5460 10.57766 4.73047 38.4121 64.6799 40.78 66.36 EELA 500 mg/kg 5 39.7140 6.23712 2.78932 31.9696 47.4584 33.33 46.67 25 47.3996 10.72925 2.14585 42.9708 51.8284 28.30 66.36 Total Test of Homogeneity of Variances KF Levene Statistic 1.319 df1 df2 4 Sig. 20 .297 ANOVA KF Sum of Squares df Mean Square Between Groups 1426.576 4 356.644 Within Groups 1336.226 20 66.811 Total 2762.802 24 F 5.338 Sig. .004 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 65 Post Hoc Tests Multiple Comparisons KF LSD (I) Kelompok (J) Kelompok Kontrol Kontrol Doxorubicin 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std. Error 12.29400* 5.16958 Sig. .027 Lower Bound Upper Bound 1.5105 23.0775 EELA 1000mg/kg -7.78000 5.16958 .148 -18.5635 3.0035 EELA 750 mg/kg -1.46200 5.16958 .780 -12.2455 9.3215 EELA 500 mg/kg 10.37000 5.16958 .059 -.4135 21.1535 * Kontrol Kontrol Doxorubicin EELA 1000mg/kg -12.29400 5.16958 .027 -23.0775 -1.5105 * -20.07400 5.16958 .001 -30.8575 -9.2905 EELA 750 mg/kg -13.75600* 5.16958 .015 -24.5395 -2.9725 EELA 500 mg/kg -1.92400 5.16958 .714 -12.7075 8.8595 EELA 1000mg/kg Kontrol Kontrol Doxorubicin EELA 750 mg/kg EELA 500 mg/kg EELA 750 mg/kg Kontrol Kontrol Doxorubicin EELA 1000mg/kg EELA 500 mg/kg 7.78000 5.16958 .148 -3.0035 18.5635 20.07400* 5.16958 .001 9.2905 30.8575 6.31800 5.16958 .236 -4.4655 17.1015 18.15000 5.16958 .002 7.3665 28.9335 1.46200 5.16958 .780 -9.3215 12.2455 13.75600* 5.16958 .015 2.9725 24.5395 .236 -17.1015 4.4655 * -6.31800 5.16958 * EELA 500 mg/kg 11.83200 5.16958 .033 1.0485 22.6155 Kontrol -10.37000 5.16958 .059 -21.1535 .4135 Kontrol Doxorubicin 1.92400 5.16958 -8.8595 12.7075 EELA 1000mg/kg * -18.15000 5.16958 .002 -28.9335 -7.3665 EELA 750 mg/kg -11.83200* 5.16958 .033 -22.6155 -1.0485 *. The mean difference is significant at the 0.05 level. .714 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 5. 66 Analisis statistik indek fagositosis makrofag pengaruh ekstrak etanol buah labu air (Lagenaria siceraria) pada berbagai variasi dosis terhadap imunosupresan doksorubisin Descriptives Descriptive Statistics N Minimum Maximum Statistic IF 25 Valid N (listwise) 25 Statistic .49 Statistic Mean Std. Deviation Statistic Std. Error Statistic 2.19 1.0064 NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test IF N 25 a,,b Normal Parameters Most Extreme Differences Mean 1.0064 Std. Deviation .40489 Absolute .166 Positive .166 Negative -.101 Kolmogorov-Smirnov Z .830 Asymp. Sig. (2-tailed) .496 a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. .08098 .40489 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 67 Oneway Descriptives IF 95% Confidence Interval for Mean Std. Std. Mean Deviation Error N Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum Kontrol 5 1.2620 .62351 .27884 .4878 2.0362 .68 2.19 Kontrol Doxorubicin 5 .6640 .12720 .05689 .5061 .8219 .49 .77 EELA 1000mg/kg 5 1.2840 .23394 .10462 .9935 1.5745 .94 1.59 EELA 750 mg/kg 5 1.0540 .31769 .14208 .6595 1.4485 .63 1.49 EELA 500 mg/kg 5 .7680 .15675 .07010 .5734 .9626 .60 .95 25 1.0064 .40489 .08098 .8393 1.1735 .49 2.19 Total Test of Homogeneity of Variances IF Levene Statistic 2.808 df1 df2 4 Sig. 20 .053 ANOVA IF Sum of Squares df Mean Square Between Groups 1.594 4 .398 Within Groups 2.341 20 .117 Total 3.934 24 F 3.404 Sig. .028 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 68 Post Hoc Tests Multiple Comparisons IF LSD (I) Kelompok (J) Kelompok Mean Difference (I-J) 95% Confidence Interval Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound Kontrol Doxorubicin .59800* .21637 .012 .1467 1.0493 EELA 1000mg/kg -.02200 .21637 .920 -.4733 .4293 EELA 750 mg/kg .20800 .21637 .348 -.2433 .6593 EELA 500 mg/kg .49400* .21637 .033 .0427 .9453 Kontrol Kontrol Doxorubicin EELA 1000mg/kg -.59800* .21637 .012 -1.0493 -.1467 * .21637 .010 -1.0713 -.1687 EELA 750 mg/kg -.39000 .21637 .087 -.8413 .0613 EELA 500 mg/kg -.10400 .21637 .636 -.5553 .3473 .02200 .21637 .920 -.4293 .4733 * .21637 .010 .1687 1.0713 EELA 750 mg/kg .23000 .21637 .300 -.2213 .6813 EELA 500 mg/kg .51600 * .21637 .027 .0647 .9673 Kontrol -.20800 .21637 .348 -.6593 .2433 .39000 .21637 .087 -.0613 .8413 EELA 1000mg/kg -.23000 .21637 .300 -.6813 .2213 EELA 500 mg/kg .28600 .21637 .201 -.1653 .7373 * .21637 .033 -.9453 -.0427 .10400 .21637 .636 -.3473 .5553 * .21637 .027 -.9673 -.0647 -.28600 .21637 .201 -.7373 .1653 Kontrol EELA 1000mg/kg EELA 750 mg/kg EELA 500 mg/kg Kontrol Kontrol Doxorubicin Kontrol Doxorubicin Kontrol Kontrol Doxorubicin EELA 1000mg/kg EELA 750 mg/kg -.62000 .62000 -.49400 -.51600 *. The mean difference is significant at the 0.05 level. PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 6. Determinasi buah labu air (Langenaria siceraria (Mol.) Standley) 69 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 7. Persetujuan Ethical Clearance 70 PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 71 BIOGRAFI PENULIS Skripsi yang berjudul ” Efek Ekstrak Etanolik Buah Labu Air (Langenaria siceraria (Mol.) Standley) sebagai Imunomodulator melalui Pengamatan Kapasitas dan Indeks Fagositosis Makrofag pada Tikus Jantan Sprague Dawley yang Dipejani Doxorubicin” ini ditulis oleh Maria Larizza Handoyo. Penulis merupakan anak kedua dari dua bersaudara, yang lahir di Tegal, Jawa Tengah pada tanggal 7 Juli 1991. Pada tahun 1996-1997 penulis menempuh pendidikan di TK Elkana Tegal. Kemudian pada tahun 1997, penulis melanjutkan pendidikan ke SD Pius Tegal hingga tahun 2003. Pada tahun 2003 – 2006 penulis menempuh pendidikan menengah pertama di SLTP Katolik Pius Tegal. Selepas dari pendidikan menengah pertama penulis melanjutkan pendidikan di SMA Katolik Pius Tegal pada tahun 2006 – 2009. Selanjutnya mulai tahun 2009 penulis melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Pada tahun 2010 penulis pernah menjabat sebagai Panitia Musyawarah Wilayah JMKI (Jaringan Mahasiswa Kesehatan Indonesia). Pada tahun 2011 menjadi pelaksana Pengabdian Masyarakat bersama Dosen dalam rangka merayakan lustrum III Fakultas Farmasi Sanata Dharma, menjadi Panitia Malam keakraban JMKI sebagai Sekretaris, dan ikut serta menjadi panitia Pelepasan Wisuda Sanata Dharma sebagai Sie Kesekretariatan. Pada tahun 2011 penulis pernah menjadi Asisten Dosen Kimia Organik II, Asisten Dosen Praktikum Spektroskopi, Asisten Dosen Praktikum Farmakognosi Fitokimia I, serta menjadi Tentor di bimbel Perfecta kids. Pada tahun 2012 penulis menjadi Asisten Dosen FTS Solid, Asisten Dosen FTS Semi Solid, serta Asisten Dosen Kimia Dasar.
