i Kode/Nama Rumpun Ilmu : 191/Budidaya Kehutanan LAPORAN AKHIR PENELITIAN HIBAH BERSAING TAHUN KEDUA EKOLOGI DAN BUDIDAYA LONKIDA (Nauclea orientalis L.) YANG BERPOTENSI TANAMAN OBAT DAN FITOREMEDIASI DI SULAWESI TENGGARA Faisal Danu Tuheteru, S.Hut., M.Si NIDN 0028127805 La Ode Alimuddin, S.P., M.Si NIDN 0001017016 Dilaksanakan Atas Biaya Anggaran BOPTN UHO Nomor Kontrak : 063/PPK/UHO/IV/2014 Tanggal 1 April 2014 UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 2014 i ii ABSTRAK Lonkida merupakan salah satu jenis tumbuhan yang tumbuh alami di Indonesia, termasuk di Sulawesi Tenggara. Secara ekonomi, jenis ini memiliki nilai ekonomi, baik dari aspek pemanfaatan kayu maupun sebagai potensi tanaman obat. Pada aspek ekologis, lonkida dapat digunakan sebagai tanaman fitoremediasi karena kemampuannya beradaptasi baik pada kondisi tergenang (rawa) atau kering (savanna). Tujuan jangka panjang penelitian ini adalah memperoleh informasi ekologi lonkida dan paket teknologi budidayanya baik pada lahan atau media tailing dan tanah pasca tambang nikel. Target khusus yang ingin dicapai adalah mengembangkan jenis lonkida sebagai jenis potensial untuk rehabilitasi lahan basah dan lahan tercemar logam berat (jenis fitoremediasi). Hasil penelitian Karakterisasi Ukuran Buah Dan Benih Serta Mutu Benih Lonkida menunjukkan bahwa perbedaan habitat berkontribusi terhadap sifat biji lonkida baik ukuran biji maupun jumlah biji per buah, tetapi tidak terhadap ukuran buah. Ukuran biji dan jumlah biji per buah yang diperoleh dari habitat rawa cenderung lebih besar dan banyak dibanding habitat savanna dan hutan dataran rendah. Hasil penelitian Respon Pertumbuhan Lonkida Bermikoriza Terhadap Kondisi Genangan Pada Skala Rumah Kaca menunjukkan bahwa bibit lonkida tumbuh baik pada kondisi genangan dengan memodifikasi bagian morfologi tanaman berupa pembentukan akar liar dan lentisel yang cepat yaitu 5-7 hari sebagai peralatan mekanisme adaptasi. Meskipun demikian, pertumbuhan tinggi dan pertambahan daun lonkida tidak dipengaruhi oleh perlakuan. Pada peubah diameter, perlakuan genangan justru meningkatkan diameter lonkida. Selain itu, perlakuan FMA lokal yang dikoleksi dari habitat hutan dataran dan rawa cocok untuk pengembangan lonkida di Sulawesi Tenggara maupun di Indonesia. Sedangkan hasil analisis kandungan kimia daun lonkida menunjukkan bahwa komposisi senyawa maupun kuantitasnya sangat dipengaruhi oleh tipe habitat. Secara total sekurang-kurangnya terdapat 44 senyawa kimia yang teridentifikasi pada daun lonkida. Pada habitat hutan terdapat 7 senyawa kimia utama, dimana lebih rendah dibandingkan dengan habitat rawa terdiri dari 16 komponen) dan savanna terdapat 9 komponen utama. Senyawa aktif dominan yang ditemukan pada daun lonkida pada ketiga tipe habitat di TNRAW adalah Limonene. Keyword : fitoremediasi, lonkida, mikoriza, TNRAW iii ABSTRACT Lonkida (Nauclea orientalis L.) is one of the plant species that grow naturally in Indonesia, including at Watumohai-Rawa Aopa National Park, Southeast Sulawesi. Ecomically, this species have a great potential based on wood for many use and phytochemical contents in leaves for medicine material. In ecological aspect, lonkida can be used for phytoremediation plant because their well-adaptability to the flooded sites (swamp) or arid sites (savanna). For long period, purpose of this research was to obtain the information about lonkida ecology and silviculture technology package to the tailling in gold Post Mining sites and infertile soil in nickel post mining sites. A special target in this research was to develop lonkida as a potential species for wetlands and contaminated lands rehabilitation. Results of the research on Characterization of Lonkida’s Seed Size and Quality shown that the difference of habitat types significantly constributed to the differences of seed characters such as seeds size or number of seeds per fruit, but no significant to the fruit size parameter. The Seeds size and number of seeds per fruit come from swamp habitat tends bigger and many seeds compared with seed from savanna or lowland forest habitats. Results of the research on Respons of Lonkida’s Mycorrhizal Seedling To the Flooding Condition shown that a good growth of lonkida seedling in flooded condition. It is showed by a morphological modification i.e produced quickly adventive roots and lenticels in 5-7 days after planted as apparatus for adaptation mechanism. Conversely, flooding treatment was precisely increase the stem diameter when seedling aged 8 weeks after planted. Furthermore, the local Arbuscular Mycorrhizal Fungi treatment that colected from lowland forest and swamp habitats were suitable for developing of lonkida in Southeast Sulawesi or Indonesia. While in observation to the leaf phytochemical contents shown that, the composition and quantitative chemical compounds most affected by habitat types. In totally, there were found 44 chemical components. In lowland forest found 7 kind of primary chemical compounds where lower than 16 chemical compaunds in swamp and 9 chemical compounds in savanna habitats. The dominance active compound was Limonene which it is found in three habitat types in Watumohai-Rawa Aopa National Park. Keyword : phytoremediation, lonkida, mycorrhizae, WRANP iv DAFTAR ISI Halaman HALAMAN PENGESAHAN...................................................................... DAFTAR ISI................................................................................................. DAFTAR TABEL......................................................................................... DAFTAR GAMBAR.................................................................................... DAFTAR LAMPIRAN................................................................................ i ii iii iv vi vi vi BAB I. PENDAHULUAN........................................................................... 1 A. Latar Belakang........................................................................................ B. Permasalahan........................................................................................... 1 2 BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA.................................................................. 4 BAB 3. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN.................................. 7 Tujuan.................................................................................................... Manfaat.................................................................................................. 7 7 BAB 4. METODE PENELITIAN............................................................... 8 A. Karakterisasi Ukuran Buah Dan Benih Serta Mutu Benih Lonkida................................................................................................... 8 Tempat dan Waktu................................................................................. Bahan Percobaan.................................................................................... Rancangan Penelitian............................................................................. Prosedur Penelitian................................................................................ Peubah Yang Diamati............................................................................ Analisis Data.......................................................................................... 8 8 8 8 9 9 B. Respon Pertumbuhan Lonkida Bermikoriza Terhadap Kondisi Genangan Pada Skala Rumah Kaca..................................................... 10 Tempat dan Waktu................................................................................. Bahan dan Alat Percobaan.................................................................... Rancangan Penelitian............................................................................. Prosedur Penelitian................................................................................ Peubah Yang Diamati............................................................................ Analisis Data.......................................................................................... 10 10 10 10 12 12 C. Potensi Kandungan Obat Anthelminthic pada Tanaman Lonkida.................................................................................................... 12 Tempat dan Waktu................................................................................. Bahan dan Alat Percobaan..................................................................... Rancangan Penelitian............................................................................. Prosedur Penelitian................................................................................ 12 12 14 14 ABSTRAK ………………………………………………………………............... ABSTRACT.............................................................................................................. v Peubah Yang Diamati............................................................................ Analisis Data.......................................................................................... 14 15 BAB 5. HASIL DAN PEMBAHASAN....................................................... 16 A. B. C. Karakterisasi Ukuran Buah Dan Benih Serta Mutu Benih Lonkida.................................................................................................. Respon Pertumbuhan Lonkida Bermikoriza Terhadap Kondisi Genangan Pada Skala Rumah Kaca....................................................... Potensi Kandungan Obat pada Tanaman Lonkida................................ 16 19 27 BAB 6. KESIMPULAN DAN SARAN........................................................ 33 Kesimpulan............................................................................................ Saran...................................................................................................... 33 34 DAFTAR PUSTAKA.................................................................................... 35 LAMPIRAN.................................................................................................. 40 vi DAFTAR TABEL No. 1. 2. 3. 4. 5. Teks Halaman Ukuran Buah dan Benih Lonkida Berdasarkan Perbedaan Habitat................................................................................................. 16 Uji Fisik dan Fisiologis Benih Lonkida Berdasarkan Perbedaan Habitat................................................................................................. 17 Tingkat Signifikansi ANOVA Pengaruh Perlakuan Terhadap Peubah................................................................................................. 19 Pengaruh Perlakuan Terhadap Peubah Pertumbuhan Tanaman Lonkida Umur 2 dan 4 MST............................................................... 23 Komposisi Kimia Minyak Atsiri Daun Lonkida................................ 28 DAFTAR GAMBAR No. 1. Teks Halaman Roadmap Penelitian Ekologi dan Budidaya jenis berpotensi tanaman obat dan fitoremediasi Lonkida (Nauclea Orientalis L.) di Sulawesi Tenggara............................................................................................... 5 2. Diagram fishbone penelitian yang akan dilakukan............................ 6 3. Penyiapan inokulum FMA.................................................................. 11 4. Semai siap sapih (kiri atas), seleksi semai (kanan atas), pembuatan lubang dan inokulasi FMA (kanan bawah) dan bibit pada perlakuan genangan.............................................................................................. 11 Koleksi daun lonkida di tiga ekosistem TNRAW : rawa (kiri), savanna (tengah) dan hutan (kanan)................................................... 14 Buah hasil koleksi (a), sortir buah berdasarkan ukuran (b), pengukuran buah (c), ekstraksi benih (d), suasana penghitungan benih (e) dan kecambah benih lonkida (e).......................................... 18 Mekanisme adaptasi lonkida, pembentukan akar liar (a), lentisel (b), muncul akar serabut diatas permuka media (c) dan akar tembus polibag (d)........................................................................................... 21 Pengaruh perlakuan mikoriza terhadap tinggi, diameter batang dan jumlah daun bibit lonkida........................................................... 22 Pengaruh perlakuan sumber benih terhadap tinggi, diameter batang dan jumlah daun bibit lonkida........................................................... 24 5. 6. 7. 8. 9. vii 10. Pengaruh perlakuan genangan terhadap tinggi, diameter batang dan jumlah daun bibit lonkida........................................................... 26 11. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat hutan....... 31 12. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat rawa........ 32 13. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat savanna................................................................................................ 32 DAFTAR LAMPIRAN No. Teks Halaman 1. Surat Pemberitahuan lolos Seleksi Abstrak...................................... 40 2. Sertifikat Sebagai penyaji........................................................... 41 3. Full paper yang disampaikan dan dimuat dalam prosiding pada seminar Silvikultur Ke-2 dan Kongres Masyarakat Silvikultur Indonesia di UCH, UGM............................................................ 42 Draft Artikel yang akan diterbitkan pada jurnal terakreditasi........ 51 4. 1 BAB 1. PENDAHULUAN A. Latar Belakang Lonkida (Nauclea orientalis L. synonyms : N. coadunata Roxb. Ex J.E. Smith, Sarcocephalus cordatus Miq., S. undulatus Miq.) termasuk ke dalam famili Rubiaceae (LaFrankie, 2010). Jenis ini dikenal dengan nama Gempol (Sunda), klepu pasir (Jawa) dan lonkida (Sulawesi) (Sosef et al. 1998). Pohon lonkida memiliki tinggi dapat mencapai 35 (-50) m dengan diameternya mencapai 80-100 cm, selalu hijau (evergreen) dan cepat tumbuh (Dayan et al. 2007). Longkida memiliki daun yang kasar dan berukuran besar serta memiliki stipula (Boland et al. 2006). Jenis ini tumbuh alami di beberapa tipe habitat dan tersebar di wilayah Indonesia. Dilaporkan jenis ini mampu tumbuh dan adaptif di ekosistem rawa (Ruxton et al. 1967), dan hutan sepanjang aliran sungai (Pattarakulpisutti 2011). Studi ekologi lonkida di Indonesia telah dilakukan di beberapa wilayah penyebaran alaminya, diantaranya di Pulau Jawa (Danu et al. 2011) dan Papua (Kartikasari et al. 2012). Khusus di Sulawesi Tenggara, jenis ini merupakan vegetasi penyusun hutan hujan dataran rendah pada empat ekosistem alami di TN Rawa Aopa Watumohai (TNRAW) (Rais 2007; Tuheteru dan Alimuddin, 2013). Selain bermanfaat sebagai tumbuhan obat (medicinal plant), lonkida juga direkomendasikan sebagai tanaman pionir dalam program rehabilitasi lahan basah (Marghescu 2001) dan fitoremediasi (Mawaddah, 2012). Terkait dengan pemilihan jenis lonkida dalam mendukung keberhasilan rehabilitasi lahan basah, maka uji coba skala rumah kaca terkait kondisi fisik dan fisiologis benih, yang meliputi ukuran benih, pertumbuhan dan daya hidup lonkida berbeda habitat pada kondisi genangan perlu dilakukan. Salah satu mekanisme adaptasi lonkida pada kondisi genangan adalah pembentukan akar liar (adventious root) (Tuheteru dan Alimuddin, 2013). Lonkida merupakan jenis yang juga potensial untuk dikembangkan dalam kegiatan fitoremediasi. Jenis ini memenuhi persyaratan adaptif terhadap genangan 2 (Mawaddah 2012; Tuheteru dan Alimuddin, 2013) dan toleran terhadap toksitas logam (Mawaddah 2012), Jenis ini juga dilaporkan dapat berasosiasi dengan fungi mikoriza arbuskula (FMA) (Sudha & Ammani 2010; Tuheteru dan Alimuddin, 2013). Namun demikian, informasi mekanisme serapan logam tanaman lonkida di tailing emas dan tanah pasca tambang nikel belum pernah dilakukan. Salah satu faktor penting dalam proses fitoremediasi dan kemampuan tumbuh tanaman pada kondisi genangan adalah aplikasi fungi mikoriza (Takács 2012). Pada kondisi genangan, FMA dapat meningkatkan pertumbuhan (Osundina 1998). Sedangkan pada kondisi kontaminasi logam berat, FMA dapat memainkan peran dalam dua bentuk yakni phytoekstraksi (serap logam dan transfer akar ke pucuk) dan phytostabilisasi (immobilisasi logam) (Gohre and Pazkowski 2006; Takács 2012) Hingga saat ini penelitian tentang morfologi dan fisiologis benih lonkida dan uji fitokimia kandungan obat daun lonkida telah terlaksana dengan baik. Sedangkan penelitian terkait dengan studi tentang aplikasi FMA lokal yang dikoleksi dari tiga habitat berbeda di TNRAW dengan lonkida pada kondisi tergenang dan pada tailing dan media pasca tambang nikel masih dalam proses pengamatan. B. Permasalahan Hasil penelitian hibah bersaing tahun I (2013), menujukkan bahwa lonkida tumbuh alami pada tiga habitat (savanna, rawa dan hutan dataran rendah) di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai, Sulawesi Tenggara (Tuheteru dan Alimuddin, 2013). Selain itu, telah diidentifikasi dan diperbanyak jenis-jenis fungi mikoriza arbuskula dari rhizofer lonkida di ketiga habitat tersebut. Selain ekologi, eksplorasi lonkida pada tipe habitat perlu juga dilakukan. Eksplorasi buah dengan tujuan untuk pengumpulan buah demi mendukung kegiatan budidaya jenis lonkida. Informasi budidaya jenis lonkida di Indonesia sudah tersedia dengan baik (BPTH 2011, Danu et al. 2011, Tuheteru, 2013). Namun belum ada informasi mengenai ukuran buah dan benih serta mutu benih lonkida dari berbagai habitat di Sulawesi Tenggara, khususnya di Taman Nasional 3 Rawa Aopa Watumohai (TNRAW). Ukuran benih mempengaruhi kemampuan berkecambah (viabilitas) suatu benih karena berhubungan dengan ketersediaan cadangan makanan yang dibutuhkan selama proses perkecambangan benih. Umumnya, benih yang berukuran besar cenderung lebih baik dalam perkecambahannya karena tersedia cukup suplai energi ATP untuk membangun sel-sel baru. Kondisi habitat yaitu kesuburan tanah dan iklim sangat mempengaruhi kualitas benih yang dihasilkan karena berhubungan dengan pemenuhan kebutuhan unsur hara bagi pohon. Pada kondisi habitat yang ekstrim seperti cekaman kekeringan (savana), kejenuhan air (rawa), dan habitat optimal (hutan daratan) diduga akan menampilkan morfologi dan fisiologi benih yang berbeda pada tanaman lonkida. Ketiga kondisi habitat tersebut terdapat di kawasan Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai (TNRAW). Untuk itu perlu dilakukan penelitian guna menentukan pada habitat mana yang cocok sebagai sumber benih lonkida dalam menunjang pembudayaannya. Pengembangan tanaman lonkida sebagai jenis fitoremediasi di Sulawesi Tenggara perlu dilakukan karena potensi tambang yang cukup luas dan telah tereksplorasi antara lain tambang emas, nikel dan asphalt. Kegiatan penambangan umumnya meninggalkan lahan dengan ketersedian logam berat yang tinggi, unsur hara essensial dan keanekaragaman biologi yang rendah serta rusaknya sifat fisik tanah. Pada kondisi ini, pemilihan jenis tanaman lokal yang adaptif dan memiliki potensi fitoremediasi menjadi sangat perlu untuk dikembangkan. Untuk mendukung efektivitas tanaman lonkida pada fitoremediasi maka perlu dibekali dengan fungi mikoriza arbuskula. Berbagai literatur menunjukkan bahwa FMA dapat membantu pertumbuhan dan toleransi tanaman terhadap toksisitas logam berat. Namun demikian, studi tentang peran FMA sebagai tools fitoremediasi tanaman lonkida pada kondisi tailling dan tanah pasca tambang nikel belum pernah dilaporkan (Giasson et al. 2008; González-Guerrero et al. 2009). Dengan demikian, perlu diujikan aplikasi FMA lokal yang diisolasi dari rhizosfer lonkida terhadap performa bibit lonkida untuk tujuan fitoremediasi dan pengembangan lonkida pada kondisi cekaman genangan. 4 BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA Lonkida merupakan salah satu jenis pohon tropis yang memiliki kisaran habitat yang luas. Studi literature menunjukkan bahwa jenis ini dapat tumbuh dan adaptif, baik di ekosistem lahan basah diantaranya rawa (Ruxton et al.1967), gambut (Kartikasari et al. 2012) dan hutan sepanjang aliran sungai dan daerah tergenang air (Petty & Douglas 2010; Pattarakulpisutti 2011), maupun di lahan kering seperti savanah dan padang rumput (Ruxton et al.1967). Studi ekologi lonkida di Indonesia telah dilakukan di beberapa wilayah penyebaran alaminya. Danu et al. (2011) melaporkan bahwa N. orientalis dijumpai di wilayah Banten dan Majalengka, Jawa Barat. Di Papua, lonkida umumnya di hutan rawa dan hutan rawa gambut yang didominasi pohon sagu (Metroxylon sagu) dan hutan rawa gambut campuran dataran rendah (Kartikasari et al. 2012). Di Sulawesi lonkida dilaporkan ditemukan di bagian utara, selatan dan tenggara pada elevasi 0-970 mdpl (Keßler et al. 2002). Jenis ini berpotensi sebagai tanaman obat, terutama obat anti malaria (Sichaem et al. 2010). Selain kegunaan lonkida sebagai tanaman tanaman obat, lonkida juga memiliki produk kayu yang bernilai ekonomi serta berperan dalam kegiatan restorasi dan rehabilitasi hutan. Kayu dapat digunakan untuk berbagai kebutuhan industri perkayuan (flooring, furnitur, molding, veener dan kayu lapis) (Dayan et al. 2007; Van Sanh 2009). Sunyata (2011) menyatakan bahwa jenis lonkida berpotensi sebagai bahan baku pulp. Informasi budidaya jenis lonkida di Indonesia sudah tersedia, diantaranya informasi musim berbuah dan panen, ekstraksi serta mutu fisik dan fisiologi lonkida (BPTH 2011). Danu et al. (2011) melaporkan buah lonkida yang berasal dari Banten dan Majalengka Provinsi Jawa Barat memiliki ukuran 4-5 cm dengan ukuran benih 11,5 mm. Jumlah benih sebanyak 5,5 juta butir per kg dengan kecambah sekitar 1500 per 5 gr benih (BPTH 2011). Jenis ini dapat diperbanyak dengan cara generatif (Danu et al. 2011) dan vegetatif (Qurrataayun, 2011). Studi budidaya jenis lonkida di Sulawesi Tenggara belum banyak dilakukan. 5 Lonkida merupakan jenis yang potensial untuk dikembangkan dalam kegiatan revegetasi lahan pasca tambang dan fitoremediasi. Jenis ini memenuhi persyaratan adaptif terhadap genangan (Kurniawati 2012; Mawaddah 2012) dan toleran terhadap toksitas logam (Mawaddah 2012). Jenis ini memiliki kemampuan mengakumulasi Fe di akar pada kondisi genangan AAT (Mawaddah, 2012). Kemampuan tersebut diduga karena memproduksi metabolit sekunder (ß sitosterol dan senyawa phenolic) tertentu yang berfungsi sebagai chelator logam (metal chelating) dan memiliki kemampuan mengkompartemen logam dalam akar (Lane 2003 dalam Raghavamma et al. 2011). Jenis ini juga dilaporkan dapat berasosiasi dengan fungi mikoriza arbuskula (FMA) (Sudha & Ammani 2010; Tuheteru dan Alimuddin, 2013). Di India, jenis ini ditemukan berasosiasi dengan FMA dimana jenis Glomus mosseae yang paling dominan (Sudha & Ammani 2010). Sedangkan di tiga habitat lonkida di TNRAW ditemukan 13 jenis Fungi Mikoriza Arbuskula yang tergolong dalam tiga marga. Glomus sp.2 dan Glomus sp.5 termasuk jenis dengan penyebaran luas dan keragaman yang tinggi (Tuheteru dan Alimuddin, 2013). Berdasarkan uraian pada latar belakang dan tinjauan pustaka maka Roadmap penelitian ini sebagai berikut: Output Hasil Riset Data Base Ekologi Lonkida Di Sulawesi Tenggara dan Asosiasinya Dengan FMA Data Base Mutu Benih dan Performa Pertumbuhan Lonkida Bermikoriza Data Base Potensi Lonkida Dalam Fitoremediasi Logam Di Tailing dan Tanah Pasca Tambang Nikel Data Ekologi Lonkida dan FMA Data dan Informasi Mutu Benih dan Adaptasi Lonkida Data dan Informasi Pertumbuhan dan Serapan hara dan logam Ekologi Lonkida dan Ekologi FMA pada Lonkida di TNRAW Mutu Benih dan Adaptasibilitas Lonkida Bermikoriza Pada Kondisi Genangan Air Adaptasibilitas dan Pertumbuhan Lonkida Bermikoriza Pada Kondisi Cekaman Logam Berat Tahun I Tahun II Tahun III Gambar 1. Roadmap Penelitian Ekologi dan Budidaya jenis berpotensi tanaman obat dan fitoremediasi Lonkida (Nauclea Orientalis L.) di Sulawesi Tenggara 6 Secara garis besar penelitian ekologi dan budidaya lonkida yang berpotensi tanaman obat dan fitoremediasi ini melalui tahapan penelitian seperti disajikan pada Gambar 2. Gambar 2. Diagram fishbone penelitian yang akan dilakukan 7 BAB 3. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN Tujuan Penelitian ini dilaksanakan dengan tujuan untuk : 1) mengetahui ukuran buah dan mutu benih lonkida, 2) mengetahui status dan potensi FMA pada tanaman lonkida dan 3) menyusun paket teknologi budidaya lonkida pada kondisi genangan air dan tailing serta media tanah pasca nikel. D. Manfaat Manfaat penelitian ini adalah diperolehnya informasi budidaya lonkida di Sulawesi Tenggara, potensi lonkida sebagai tanaman yang adaptif dan toleran pada kondisi tergenang dan tercemari logam berat serta peran FMA dalam mendukung pertumbuhan dan toleransi tanaman lonkida di lahan tergenang untuk tujuan budidaya maupun bioremediasi. Selain itu, penelitian akan memberikan pertimbangan penting dalam upaya rehabilitasi lahan basah dan usaha membersihkan cemaran logam berat oleh industri tambang di Indonesia, khususnya di Sulawesi Tenggara. 8 BAB 4. METODE PENELITIAN A. Karakterisasi Ukuran Buah Dan Benih Serta Mutu Benih Lonkida Tempat dan Waktu Kegiatan pengumpulan buah dilakukan di kota Kendari, pengukuran buah dan ekstraksi benih di Laboratorium Jurusan Kehutanan Universitas Halu Oleo Kendari Sulawesi Tenggara dan pengujian mutu benih dilakukan Rumah Kaca Bagian Ekologi Fakultas Kehutanan IPB Bogor. Penelitian telah dilaksanakan pada bulan Mei sampai Juni 2013. Bahan Percobaan Buah lonkida diperoleh dari pohon-pohon induk pada dua tipe habitat (tergenang dan kering) di kota Kendari, Sulawesi Tenggara, media tanah steril, polybag, dan kotak berbahan mika. Sedangkan alat yang digunakan antara lain caliper dan mikroskop stereo. Rancangan Penelitian Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan tiga habitat sumber benih, yakni darat kering, rawa dan rawa temporal. Setiap perlakuan diulang 3 kali dengan setiap satuan percobaan digunakan 5 bak kecambah, dimana masing-masing bak terdiri atas 100 benih maka jumlah keseluruhan 13.500 benih uji. Prosedur Penelitian Buah lonkida dikoleksi dari pohon-pohon induk hasil eksplorasi dari tempat tumbuh yang telah ditetapkan. Pengumpulan buah lonkida dilakukan dengan cara dipungut di lantai hutan, dijolok dan dipanjat. Buah diekstraksi dengan menggunakan saringan teh. Pengukuran buah dan biji dengan menggunakan caliper dan pengamatan di bawah mikroskop dilakukan di Laboratorium Kehutanan Unhalu, Kendari. Benih yang digunakan sebagai contoh diperoleh secara acak dari lot benih. Media disterilkan dengan cara disangrai ± 2 9 jam, kemudian diletakkan di dalam kotak berbahan mika (20 cm x 20 cm x 5 cm) yang sudah dilubangi. Peubah yang Diamati Pengamatan dilakukan terhadap beberapa peubah diantaranya : 1. Ukuran buah dan biji. Buah diukur dengan menggunakan kaliper digital pada kedua sisi buah. Sedangkan ukuran biji dilakukan dengan mengamati dibawah mikrosokop stereo. 2. Berat benih 1000 butir. Mengambil dan menghitung 100 benih dengan 8 ulangan secara acak. Kemudian menghitung koefisien keragaman dari berat 100 butir benih antara 8 ulangan tersebut. Jika koefisien keragaman (CV) lebih kecil dari 4,0 maka analisis diterima (Peraturan Dirjen RLPS No. P.13/VPTH/2007) 3. Daya berkecambah (G) adalah banyaknya benih yang mampu berkecambah hingga akhir pengamatan perkecambahan yang telah ditentukan (Hartman et al. 2002). 4. Rata-rata waktu untuk berkecambah (MGT), diukur berdasarkan rata-rata hari yang diperlukan untuk berkecambah, dengan persamaan : MGT = {(Σ(tini)/Σ ni)}, dimana t adalah hari yang diperlukan untuk berkecambah (0) dan n = jumlah biji berkecambah pada akhir pengamatan (Hartman et al. 2002) 5. Rata-rata benih berkecambah per hari (MDG), diukur berdasarkan persamaan :MDG = N/t, dimana N adalah total jumlah biji yang berkecambah pada akhir pengamatan dan t adalah jumlah hari pengamatan (Hartman et al. 2002). Analisa Data Data pengujian dianalisis menggunakan analisis ragam (ANOVA). Apabila hasil uji ragam signifikan, akan dilanjutkan dengan uji pembanding rataan perlakuan dengan menggunakan Uji Jarak Berganda Duncan (Duncan’s Multiple Range Test) pada taraf signifikansi 95%. 10 B. Respon Pertumbuhan Lonkida Bermikoriza Terhadap Kondisi Genangan Pada Skala Rumah Kaca Tempat dan Waktu Penelitian ini akan dilaksanakan di di rumah kaca Bagian Ekologi Fakultas Kehutanan IPB. Penelitian akan berlangsung selama 2 (dua) bulan yaitu mulai bulan September sampai Oktober 2014. Bahan dan Alat Percobaan Bibit lonkida hasil seleksi dari masing-masing tipe habitat, propagul mikoriza micofer IPB, mikoriza lokal rawa, savanna dan hutan dataran rendah, dan media tanah steril, kotak media tumbuh dan polybag. Sedangkan alat yang digunakan antara lain meteran, cliper, mikroskop stereo, dan alat penyiram dan lain-lain. Rancangan Penelitian Penelitian ini menggunakan percobaan faktorial dengan rancangan acak lengkap (RAL) dengan 3 faktor. Faktor pertama adalah Fungi Mikoriza Arbuskula (A) : A0 = kontrol, A1 = Mycofer IPB, A2 = FMA lokal rawa dan A3 = FMA lokal hutan dataran rendah, faktor kedua adalah sumber benih lonkida (B) terdiri dari B0 = benih dari pohon induk pada habitat rawa, dan B1 = benih dari pohon induk pada habitat hutan dataran rendah. Faktor ketiga adalah genangan air (C) terdiri dari C0 = tanpa genangan dan C1 = tergenang air. Masing-masing perlakuan diulang 3 kali sehingga terdapat 48 unit perlakuan. Prosedur Penelitian Bibit lonkida pada penelitian ini diperoleh dari semai hasil penelitian pertama. Selanjutnya semai tersebut diinokulasi dengan FMA. Inokulum FMA yang digunakan adalah mycofer IPB dan FMA lokal. Sebelum inokulasi FMA, Polibag (ukuran 15 cm x 20 cm) diisi media tanah sebanyak ± 1,5 kg. Inokulasi FMA diberikan sesuai perlakuan untuk setiap polybag, yang diletakan dekat akar semai. Semai yang tidak diinokulasi dijadikan sebagai kontrol. 11 Bibit bermikoriza dan tanpa mikoriza yang telah berumur 60 hari, selanjutnya diberi perlakuan genangan air pada bak ukuran 25 cm x 50 cm. Sebanyak 24 bibit diberi genangan air setinggi 3-5 cm dari permukaan media polibag, sedangkan 24 bibit lainnya disiram setiap hari sebagai perlakuan tanpa genangan (kontrol) (Garcia et al. 2008). Semai/bibit dipelihara setiap hari pada kondisi rumah kaca. Pengamatan dilakukan selama 2 bulan dengan interval waktu pengamatan setiap 2 minggu. Gambar 3. Penyiapan inokulum FMA Gambar 4. Semai siap sapih (kiri atas), seleksi semai (kanan atas), pembuatan lubang dan inokulasi FMA (kanan bawah) dan bibit pada perlakuan genangan 12 Peubah yang Diamati Peubah yang diamati pada topik penelitian ini adalah : 1. Daya hidup (%) bibit. Pengamatan diakhir penelitian dimana membandingkan jumlah bibit yang hidup dengan bibit yang mati dikali 100%. 2. Pertambuhan tinggi bibit (cm) diukur dengan penggaris pada interval waktu pengamatan 2 minggu sekali. 3. Pertambahan diameter batang (mm) diukur dengan kaliper digital pada interval waktu pengamatan 2 minggu sekali. 4. Jumlah daun (helai) diukur pada interval waktu pengamatan 2 minggu sekali. 5. Pengamatan mekanisme adaptasi tanaman Analisis Data Data hasil pengamatan terlebih dahulu dianalis menggunakan uji ragam (ANOVA). Apabila hasil uji menunjukkan pengaruh yang signifikan, akan dilanjutkan dengan perbandingan rataan perlakuan dengan Uji Jarak Berganda Duncan (Duncan’s Multiple Range Test) pada taraf signifikansi 95%. C. Potensi Kandungan Obat pada Tanaman Lonkida Tempat dan Waktu Daun lonkida dikoleksi dari pohon-pohon induk di tiga habitat yaitu rawa, savanna dan hutan dataran rendah di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai, Sulawesi Tenggara. Analisis fitokimia daun lonkida dilakukan di Laboratorium Hasil Hutan Litbanghut IPB. Penelitian berlangsung selama 2 (dua) bulan yaitu mulai bulan Juni-Juli 2014. Bahan dan Alat Percobaan Bahan berupa daun lonkida diperoleh dari 17 pohon induk pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai yakni habitat hutan dataran rendah (4 pohon), rawa (6 pohon) dan savanna (7 pohon). Daun lonkida dikoleksi pada tanggal 20-21 Juni 2014. Setiap pohon induk diambil 4 daun yang diambil mewakili 2 arah yakni barat dan timur. Setiap daun dipotong ± 4 cm2 kemudian 13 dimasukkan diplastik kedap udara yang berisikan silika gel. Analisis GC-MS dilakukan di Laboratorium Pengujian Hasil Hutan Pusat Penelitian dan Pengembangan Keteknikan Kehutanan dan Pengolahan Hasil Hutan, Bogor. Komponen kimia penyusun dianalisa dengan menggunakan kromatografi Gas Spektrometri Massa (GC-MS, Shimadzu QP-5000). Spektrum massa masingmasing puncak senyawa hasil kromatogram GC-MS. Kromatografi Gas Massa berdasarkan pada fraksi n-hexane dari bagian atas tanamn dianalisis dengan menggunakan kromatografi yang terdapat pada detektor ionisasi pijar (Qayum et al., 2012; Falodun et al., 2009). Analisis kromatografi gas dilakuakn pada sistem Shimadzu QP-5000. Sistem kromatografi massa ini didukung oleh spectrometer Joel JMS-600H GC and Joel JMS HX 110. Menggunakan kolom kapilary sedikit polar DB-5 (Optima-5), disalut dalam silika lebur berdimensi 30 mm, diameter internal 0,25 mm dan ketebalan salut 0,25 mm. Sampel uji (1. 0 µl) diinjeksikan pada AOC-20i autosampler masuk kedalam Sistem Kromatografi Gas pada suhu 250oC dalam mode split dengan rasio 40:1. Temperatur awal Kromatografi Gas diatur pada suhu 50oC selama 60 detik dan 80oC selama 3 menit dan dibiarkan hingga mencapai suhu akhir 300oC. Carrier gas yaitu nitrogen dilewatkan pada kecepatan 35 cm/detik, sementara tekanan kecil selama percobaan diatur menjadi 99.31 Kpa. Detektor diatur pada suhu 280oC dengan menggunakan gas hydrogen (carrier) pada kecepatan aliran 55 ml/menit, sedangkan laju aliran udara mencapai 400 ml/menit. Spektrometer massa merupakan perangkat dalam mode EI dengan 70 eV (ionosasi energi) sedangkan kondisi ekspermental kromatografi gas tidak berubah. Mengenai carrier gas helium digunakan untuk mengoperasikan suhu 250oC. Penamaan kuantitativ senyawa dilakukan dengan membandingkan/mencocokkan waktu relativ tahanannya (RT) dan massa spektra dengan data yang tersedia pada spectral search databases (NIST 1998 and GC-MS Library Shimadzu, 1996). Dalam hal analisis kuantitativ individual komponen (persen komposisi konsentrasi relativ pada area puncak pada setiap konstituen dihitung terhadap total area puncak. 14 Rancangan Penelitian Desain penelitian yang digunakan adalah metode survei dengan sampling sumber daun dilakukan secara sengaja pada pohon induk lonkida yang memiliki keragaan fisik pohon yang baik pada setiap tipe habitat yaitu habitat rawa, savanna dan hutan dataran rendah. Pada masing-masing habitat diambil daun lonkida dewasa pada 3 pohon induk sehingga secara keseluruhan terdapat 12 unit pohon induk sampling. Prosedur Penelitian Daun-daun dewasa pada pohon terpilih yaitu pohon yang menunjukkan keragaan yang baik secara morfologi pada masing-masing tipe habitat diambil hingga mencapai berat kering sebanyak 100 g. Daun-daun yang telah dikering anginkan akan dikirim ke Laboratorium Kesehatan Provinsi Sulawesi Tenggara untuk dilakukan analisis kandungan obat yang terkandung dalam daun. Gambar 4. Koleksi daun lonkida di 3 ekosistem di TN Rawa Aopa Watumohai Gambar 5. Koleksi daun lonkida di tiga ekosistem TNRAW : rawa (kiri), savanna (tengah) dan hutan (kanan) Peubah yang Diamati Peubah yang diamati adalah komponen kimia penyusun minyak atsiri dianalisa dengan menggunakan kromatografi Gas Spektrometri Massa (GC-MS, Shimadzu QP-5000). Spektrum massa masing-masing puncak senyawa hasil kromatogram GC-MS selanjutnya dibandingkan dengan spektrum massa autentik 15 yang ada pada data bank NIST (Nayional Institute of Standard Technology) library. Analisis Data Data kandungan kimia pada daun lonkida hasil pengujian laboratorium disajikan dalam bentuk tabel dan grafik. 16 BAB 5. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Karakterisasi Ukuran Buah Dan Benih Serta Mutu Benih Lonkida Penelitian ini telah selesai dilaksanakan. Koleksi buah lonkida dari pohon- pohon induk di kota Kendari berdasarkan dua habitat yang berbeda yakni habitat rawa dan lahan kering. Koleksi buah, pengukuran buah dan pengujian mutu benih telah dilaksanakan pada bulan Mei 2013 pada saat puncak musim panen buah lonkida. Hasil penelitian disajikan pada Tabel 1 dan Tabel 2. Tabel 1. Ukuran Buah dan Benih Lonkida Berdasarkan Perbedaan Habitat Perlakuan Lebar buah (mm) Panjang buah (mm) Jumlah biji/buah Panjang biji (µm) Lebar biji (µm) P/L rasio Rawa 5,89 a 5,80 a 9234 a 1361,5 a 820,65 a 1,66 a D. kering 6,11 a 5,75 a 4329 b 1299,9 b 750,5 b 1,73 a Pr>F 0,3281 0,7367 0,0003 0,0364 0,0200 0,1480 1 14 10 3 5 4 CV Hasil studi menunjukkan bahwa pohon induk dari habitat rawa memiliki jumlah biji per buah 9234±2,033 biji, yang berbeda signifikan dibanding jumlah biji dari habitat dataran kering dengan jumlah biji buah 4329 biji. Demikian pula pada parameter panjang biji (1361±1,099 µm) berbeda lebih panjang dibanding dari habiatat dataran kering dengan panjang 1299,9 µm, serta lebar biji (820±1,047 mm) dibanding 750,5 µm pada habitat dataran kering. Sedangkan pada parameter panjang buah dan lebar buah serta rasio panjang dan lebarnya tidak signifikan perbedaan kedua habitat ini. Hal ini menunjukkan bahwa pada habitat rawa lebih cocok untuk tanaman lonkida. Meskipun terdapat cekaman kejenuhan air namun lonkida mampu beradaptasi sangat baik karena adanya lentisel yang berfungsi sebagai organ pernapasan bagi akar sehingga tanaman tidak mati akibat defisiensi oksigen. Pada kondisi optimal ini tampaknya lonkida mampu menghasilkan regenerasi reproduksi melalui jumlah buah dan biji yang lebih banyak dibanding habitat lainnya. 17 Berdasarkan hasil uji mutu fisik dan fisiologis terhadap benih lonkida menunjukkan bahwa baik berat benih maupun persentase daya berkecambah serta rata-rata benih berkecambah per hari (MDG) tidak berbeda signifikan antara sumber benih dari habitat rawa maupun dataran kering. Tabel 2. Uji Fisik dan Fisiologis Benih Lonkida Berdasarkan Perbedaan Habitat Perlakuan Berat Benih (g) Kecambah (%) MDG MGT Rawa 0,199 a 95,3 a 6,82 a 5,50 a Dataran kering 0,184 a 93,9 a 6,72 a 5,20 b Pr>F 0,2239 0,28 0,2598 0,0255 7 2 2 3 CV Akan tetapi terdapat perbedaan yang signifikan pada parameter rata-rata waktu berkecambah (MGT). Hal ini mengindikasikan bahwa benih yang diperoleh dari pohon yang tumbuh pada habitat rawa memiliki laju perkecambahan yang lebih cepat, yang diduga berkaitan dengan ukuran biji yang lebih besar (Tabel 2), sehingga cadangan makan tersimpan lebih banyak yang memungkinkan energi yang cukup untuk inisiasi perkecamban. Berikut disajikan gambar performa fisik, proses ekstraksi, dan pengukuran benih lonkida serta performa pertumbuhan kecambah benih lonkida. 18 Gambar 6. Buah hasil koleksi (a), sortir buah berdasarkan ukuran (b), pengukuran buah (c), ekstraksi benih (d), suasana penghitungan benih (e) dan kecambah benih lonkida (e) 19 B. Respon Pertumbuhan Lonkida Bermikoriza Terhadap Kondisi Genangan Pada Skala Rumah Kaca Hasil analisis ragam terhadap peubah yang diamati pada penelitian ini disajikan pada Tabel 3. Tabel 3. Tingkat Signifikansi ANAVA Pengaruh Perlakuan Terhadap Peubah Pertumbuhan Bibit Lonkida Pada Umur 2 dan 4 Minggu Setelah Tanam (MST) Tinggi Diameter Jumlah daun (cm) (mm) (helai) Perlakuan 4 MST 8 MST 4 MST 8 MST 4 MST 8 MST Nilai Probabilitas (Pr) FMA (A) 0,532 0,572 0,368 0,052 0,371 0,260 Sumber Benih (B) 0,907 0,609 0,114 0,280 0,167 0,304 Genangan (C) 0,285 0,25 0,327 0,001* 0,117 0,925 Interaksi A*B 0,959 0,566 0,373 0,318 0,881 0,676 Interaksi A*C 0,796 0,991 0,870 0,723 0,388 0,957 Interaksi B*C 0,407 0,338 0,370 0,964 0,902 0,538 Interaksi A*B*C 0,881 0,996 0,720 0,220 0,853 0,556 Keterangan : * = signifikan pada taraf kepercayaan 95% Tabel 3 menunjukkan bahwa pengaruh interaksi maupun pengaruh mandiri ketiga faktor yang dicobakan tidak signifikan terhadap semua peubah yang diamati yang ditunjukkan oleh nilai probabilitas (Pr) lebih besar dari nilai maksimum signifikasi yang ditetapkan yaitu 0,05%. Hal ini mengindikasikan bahwa hingga umur 8 MSP pertumbuhan bibit lonkida tidak signifikan dipengaruhi oleh perlakuan FMA dan sumber benih, tetapi pengaruh perlakuan genangan secara mandiri signifikan pengaruhnya terhadap peubah diameter batang. Interaksi akan terjadi apabila suatu faktor tergantung pada taraf tertentu dari faktor lainnya. Pertambahan tinggi bibit, diamter batang maupun jumlah daun tidak signifikan dipengaruhi oleh perlakuan FMA maupun sumber benih, diduga karena tanaman lonkida memiliki kemampun adaptasi yang tinggi pada kondisi tercekam sehingga meskipun tanpa inokulasi FMA mampu tumbuh dan berkembang pada 20 kondisi tergenang. Hal ini ditunjukkan oleh penampilan pertumbuhan bibit tanpa perlakuan (kontrol) yang berbeda tidak signifikan dengan perlakuan lainnya. Sedangkan perlakuan genangan secara mandiri signifikan pengaruhnya hanya terhadap peubah diameter batang (Tabel 4). Hal ini mengindikasikan bahwa ada ketergantungan pertumbuhan diameter batang pada perlakuan genangan. Daya Hidup dan Adaptasi Morfologi Bibit Lonkida Lonkida umur 2 minggu setelah penggenangan pada semua perlakuan memiliki daya hidup 100%. Mekanisme adaptasi morfologi lonkida terhadap kondisi genangan pada penelitian berupa pembentukan akar liar dan lentisel pada batang tanaman. Akar liar dan lentisel mulai terbentuk setelah 5-7 hari penggenangan (Gambar 3). Selama 2 minggu penggenangan tampak bahwa lonkida memiliki daya adaptasi tinggi terhadap kondisi genangan. Hal ini dibuktikan dengan persentase tumbuh mencapai 100%. Adaptasi tinggi didukung oleh mekanisme adaptasi tanaman melalui modifikasi morfologi tanaman. Pada penelitian ini lonkida membentuk akar liar dan lentisel sebagai bentuk mekanisme morfologi tanaman. Berbagai literatur melaporkan bahwa adaptasi tanaman pada kondisi genangan sangat dikaitkan dengan kehadiran akar liar dan lentisel tanaman (Ashraf 2012; Fougnies et al. 2007; Iwanaga and Yamamoto 2008; Kozlowski 1984). Menurut Yin et al. (2009) dan Tanaka et al. (2011) bahwa keberadaan akar liar dapat membantu ketersediaan oksigen di jaringan akar, mengurangi kebutuhan respirasi fermentatif (memilihara respirasi aerobik), mengakselerasi cepat adaptasi tanaman dan akhirnya dapat meningkatkan rata-rata daya hidup jenis toleran. Ashraf (2012) menjelaskan pula bahwa lentisel berperan dalam difusi oksigen dan tempat keluar produk metabolisme anaerobik (etanol, CO2 dan CH4) serta berperan dalam homoestatis air tanaman. Pada penelitian ini juga menunjukkan bahwa tanaman memproduksi akar serabut yang banyak di atas permukaan media dan akar yang menembus polibag. Fakta tersebut menunjukkan bahwa pertumbuhan dan perkembangan akar pada kondisi genangan tidak terhambat. Folzer et al. (2006) menyebutkan salah satu 21 efek negatif dari genangan adalah penghambatan pertumbuhan akar. Penghambatan dapat terjadi karena 1) penyumbatan fosforilasi oksidatif akibat penurunan produksi ATP akibat kondisi anaerobik, 2) penurunan aktivitas metabolisme, 3) akumulasi metabolit phytoksik dan 4) penurunan alokasi karbon ke akar. Dengan demikian, lonkida dapat mempertahankan proses fisiologis tanaman berjalan dengan baik. Gambar 7. Mekanisme adaptasi lonkida, pembentukan akar liar (a), lentisel (b), muncul akar serabut diatas permuka media (c) dan akar tembus polibag (d) 22 Pertumbuhan Bibit Lonkida Perlakuan FMA, sumber benih dan genangan masing-masing tidak signifikan mempengaruhi pertambahan tinggi dan jumlah daun lonkida umur 4 maupun 8 minggu setelah penggenangan (MSP), kecuali peubah diameter batang dipengaruhi secara signifikan oleh perlakuan genangan (Tabel 4). Meskipun secara statistik pengaruh FMA tidak signifikan, tetapi ada kecenderungan bahwa pengaruh baik FMA terutama apabila dibandingkan dengan isolat FMA asal IPB yaitu mycofer. Hal ini mengindikasikan bahwa lonkida lebih berasosiasi baik dengan FMA lokal tetapi kurang baik terhadap FMA asing. Pengetahuan efektivitas FMA lokal dan ketergantungan jenis tanaman terhadap aplikasi FMA sangat ditentukan oleh kecocokan jenis FMA dan tanaman inang (Estaun et al. 2010). Selain itu, penggunaan FMA terhadap tanaman selain kecocokan inang juga sangat tergantung dari kondisi tempat keberadaan FMA. Performa pertumbuhan bibit lonkida yang mendapatkan perlakuan mikoriza menurut umur pengamatan seperti disajikan pada Gambar 8 berikut : Gambar 8. Pengaruh perlakuan mikoriza terhadap tinggi, diameter batang dan jumlah daun bibit lonkida 23 Tabel 4. Pengaruh Perlakuan Mikoriza, Sumber Benih dan Genangan Terhadap Peubah Pertumbuhan Tanaman Lonkida Umur 2 dan 4 Minggu Setelah Penggenangan (MSP) Tinggi (cm) Perlakuan Diameter (mm) Jumlah daun (helai) 4 MSP 8 MSP 4 MSP 8 MSP 4 MSP 8 MSP Fungi Mikoriza Arbuskula Kontrol Mycofer IPB FMA Rawa FMA Hutan 7,33±0,732 5,89±0,645 6,28±0,431 6,54±0,695 11,34 ±1,248 9,51 ±1,007 10,87±0,725 11,82±1,337 2,10±0,351 1,57±0,188 1,67±0,113 1,84±0,142 3,06±0,259 2,45±0,242 3,13 ±0,245 3,21 ±0,271 3,58±0,288 3,50±0,386 2,83±0,261 3,50±0,359 5,58±0,379 5,17±0,389 5,00±0,297 6,17±0,520 Sumber Benih Rawa Dataran kering 6,55±0,493 6,47±0,410 10,57±0,843 11,19±0,717 1,61±0,058 1,97±0,110 2,84±0,166 3,08±0,202 3,08±0,269 3,62±0,179 5,25±0,290 5,71±0,292 Genangan Tanpa Genangan 6,13±0,379 10,17±0,664 1,68±0,102 2,54±0,128a 3,08±0,240 5,50±0,276 Dengan Genangan 6,89±0,506 11,59±0,865 1,91±0,075 3,39±0,194b 3,63±0,215 5,46±0,313 Keterangan : Angka-angka dengan huruf berbeda pada kolom yang sama berarti signifikan perbedaannya pada taraf signifikansi 95% 24 Hasil penelitian menunjukkan pula bahwa sumber benih tidak signifikan pengaruhnya terhadap performa pertumbuhan bibit lonkida. Tinggi bibit, diameter batang maupun jumlah daun dari benih yang diperoleh dari habitat rawa dan dataran kering tidak signifikan perbedaannya. Peningkatan ketiga peubah tersebut sesuai dengan peningkatan umur bibit sehingga secara fisiologis tidak ada hambatan pertumbuhan. Performa pengaruh sumber benih terhadap pertambahan tinggi bibit, diameter batang dan jumlah daun bibit lonkida pada umur 4 dan 8 MSP disajikan pada Gambar 9. Gambar 9. Pengaruh perlakuan sumber benih terhadap tinggi, diameter batang dan jumlah daun bibit lonkida Selanjutnya, pengaruh faktor genangan secara signifikan terjadi pada peubah diameter batang umur 8 MSP, sedangkan pada peubah tinggi bibit dan jumlah daun tidak signifikan perbedaannya. Hal ini mengindikasikan bahwa dalam interval waktu 8 minggu bibit lonkida mengalami perubahan yang signifikan dalam proses adaptasinya yaitu semakin adaptif. Meskipun pengaruh genangan dapat menghambat pertumbuhan tanaman juga dilaporkan oleh para 25 peneliti sebelumnya (Folzer et al. 2006; Kogawara et al. 2006; Nielsen et al. 2010), tetapi dalam perkembangan selanjutnya bibit lonkida telah mampu beradaptasi secara baik terdapat kondisi stress genangan dengan dampak utama yaitu toksitas oksigen. Hal ini ditunjukkan oleh performa pertumbuhan bibit lonkida pada umur 8 MSP yang mengalami peningkatan diamter batang yang signifikan lebih besar dibanding perlakuan tanpa genangan. Lonkida termasuk tumbuhan pepohonan lahan basah yang mengembangkan adaptasi khusus yang memungkinnya dapat hidup pada kondisi tertekan dengan karakterisitik lahan basah yaitu terjadi fluktuasi air, adanya kejenuhan air secara permanen dan difisiensi oksigen. Menurut Hoag et al., (2007) bahwa tumbuhan lahan basah (hydrofit) adalah tumbuhan yang beradaptasi secara spesifik terhadap penurunan kondisi tanah dan olehkarenanya dapat berlangsung hidup pada lahan basah. Adaptasi ini dapat berupa adaptasi morfologis, reproduksi atau fisiologis dan merupakan karakteristik dari banyak spesies lahan basah. Sebaliknya, spesies-spesies tanpa adaptasi khusus ini adalah spesies intoleran defisien oksigen dalam profil tanah, sehingga tidak dapat hidup pada kondisi ini. Sedangkan Genga et al. (2011) menegaskan bahwa ada dua mekanisme umum yang digunakan untuk mencegah stress abiotik yaitu penghindaran dan adaptasi. Dalam kasus penghindaran, organisme bermigrasi ke lapisan tanah yang lebih dalam dimana suhu dalam kisaran yang ditolelir. Adaptasi terhadap stress adalah didasarkan pada aktivasi dari jalur gen pertahanan stress, yang menghasilkan protein kejutan panas, protein LEA, protein pengaturan redox, larutan kompatibel yang berbeda, berasal mengatur protein, cytochrome P450s. Selanjutnya, Khan (2004) meringkas beberapa pendapat aahli terkait dengan adanya adaptasi tumbuhan lahan basah yaitu akar dan daun tumbuhan aquatik memiliki sistem lakuna (lacunae) udara yang berkembang dengan baik (Armstrong, 1979; Justin & Armstrong, 1987) yang mengizinkan transpor CO 2 dari sedimen melalui lakuna akar ke daun dan mengangkut O2 dalam arah yang berlawanan (Pedersen et al., 1995). Akar tumbuhan lahan basah dapat beradaptasi 26 terhadap kondisi anaerobik melalui perkembangan lakuna udaranya (Armstrong et al., 1991). Performa pertumbuhan bibit lonkida yang mendapat perlakuan genangan disajikan pada Gambar 10. Gambar 10. Pengaruh perlakuan geangan terhadap tinggi, diameter batang dan jumlah daun bibit lonkida 27 C. Potensi Kandungan Obat pada Tanaman Lonkida Hasil analisis GC-MS terhadap daun lonkida yang bersumber dari tiga tipe habitat sebagaimana disajikan pada Tabel 5. Tabel 5. Komposisi Kimia Minyak Atsiri Daun Lonkida Tipe Habitat Rawa Savanna (%) (%) 11.09 No RT Komponen Kimia Rumus 1. 2.53 CH3NO2 2. 10.95 C10H16 1.65 1.58 1.43 3. 11.77 C10H16 0.97 - - 4. 5. 6. 11.93 12.07 12.86 C6H6O C10 H16 C10 H16 0.90 32.83 0.94 20.46 - 1.13 30.90 - 7. 8. 9. 13.12 14.73 15.55 C7H8O C8H8O C10H14O 1.11 8.29 1.43 1.49 4.08 1.21 1.02 6.37 1.73 10. 16.18 C14H22 1.08 - 1.19 11. 12. 13. 14. 15. 16. 16.52 16.73 16.82 17.65 17.71 18.65 C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 C15H32O 1.30 1.25 1.00 5.89 1.93 1.44 1.62 1,94 - 1.29 1.17 1.36 - 17. 19.45 C20H40O 0.96 - - 18. 19. 20.20 20.34 C15H24 C15H24 1.32 2.66 1.19 - - 20. 20.55 C16H28O2 3.89 - 3.34 21. 20.63 C16H28O2 1.83 - 1.22 22. 23. 22.78 29.36 C15H24 C30H50 0.97 8.17 6.15 1.70 8.21 24. 30.45 Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate Cyclohexene, 1-methyl-4-(1methylethenyl)-, (R)- (CAS) D-1,8(9)P-MENTHADIENE 1,4,6-HEPTATRIENE, 2,3,6TRIMETHYLPhenol (CAS) Izal dl-Limonene 1,3-CYCLOPENTADIEN,5,5DIMETHYL-2-PROPYLPhenol, 4-methyl- (CAS) p-Cresol 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN Phenol, 2-methyl-5-(1-methylethyl)(CAS) Carvacrol 1,5-Cycloundecadiene, 8,8-dimethyl-9methylene- (CAS) Farnesene bicyclogermacrene .beta.-Chamigrene .delta.-Guaiene Tidak teridentifikasi Valencene 1-Dodecanol,3,7,11-trimethyl-(CAS) Hexahydrofarnesol 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15tetramethyl-, [R-[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol .GAMMA.-ELEMENE Tricyclo[2.2.1.0(2,6)]heptane, 1,7dimethyl-7-(4-methyl-3-pentenyl)(CAS) Santalen Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (-)-.beta.-Elemene 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23hexamethyl- (CAS) Squalene Tetratetracontane (CAS) nTetratetracontane Hutan (%) 10.54 C44H90 3.45 3.07 4.62 28 Tabel 4. Lanjutan... Tipe Habitat Rawa Savanna (%) (%) - No RT Komponen Kimia Rumus 25. 36.05 C44H90 26. 3.11 C5H8 - 9.34 - 27. 28. 10.70 15.90 C8H14O C8H10O3 - 1.24 2.27 1.04 29. 30. 16.20 16.73 C15H24 C15H24 - 2.15 2.64 - 31. 32. 17.17 17.74 C15H26 C6H10O5 - 1.71 9.92 8.72 33. 18.29 C10H16O - 4.33 - 34. 18.54 C14H26O2 - 2.93 - 35. 18.79 C11H14O3 - 4.59 - 36. 19.45 C20H40O - 5.23 1.78 37. 38. 20.04 20.58 C15H24 C15H24 - 3.78 2.77 1.36 - 39. 40. 30.47 38.87 C26H54 C35H60O7 - 3.06 1.28 4.22 - 41. 42. 16.40 18.65 C15H22O C15H32O - - 1.05 1.21 43. 44. 19.79 20.34 Tetratetracontane (CAS) nTetratetracontane 1,3-Butadiene, 2-methyl(CAS) Isoprene Cyclooctanone (CAS) Phenol, 2,6-dimethoxy- (CAS) 2,6Dimethoxyphenol CLOVEN N Germacrene B (CAS) 1,5Cyclodecadiene, 1,5-dimethyl-8-(1methylethylidene Ledane 1,6-ANHYDRO-BETA-DGLUCOPYRANOSE (LEVOGLUCOSAN) 3a,6-Methano-3aH-inden-5ol,octahydro-, (3a.alpha.,5.alpha.,6.alpha.,7a.beta) 2,6-Octadiene, 1-(1-ethoxyethoxy)-3,7dimethyl(CAS) 2-TERTBUTYLAMINO Phenol, 2,6-dimethoxy-4-(2-propenyl)(CAS) 4-Allyl-2,6-dimethoxyphenol 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15tetramethyl-, [R-[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol CIS-CARYOPHYLLENE CYCLOHEPTAN,4-METHYLEN-1METHYL-2-(2-METHYL-1PROPEN-1-YL)Hexacosane (CAS) n-Hexacosane ALPHA-TOCOPHERYL-BETA-DMANNOSID Dendrolasin 1-Dodecanol,3,7,11-trimethyl-(CAS) Hexahydrofarnesol Tidak teridentifikasi Tidak teridentifikasi Total Hutan (%) 4.21 100 100 1.05 2.01 100 Tabel 6 menunjukkan bahwa terdapat perbedaan profil kromatogram GCMS pada ketiga tipe habitat lonkida yang berbeda (hutan, rawa dan savanna) mengindikasikan adanya variasi komposisi kimia antara tipe habitat. Tabel 4 menunjukkan bahwa komponen kimia yang terdeteksi pada daun lonkida sebanyak 44 komponen kimiawi. 29 Pada habitat hutan ditemukan 25 komponen dimana terdapat 7 komponen utama (kandungan > 2%), ke 7 komponen utama tersebut adalah Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate (10.54%), dl-Limonene (32.83%), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (8.29 %), delta.-Guaiene (5.89 %), Tricyclo [2.2.1.0(2,6)] heptane, 1,7-dimethyl-7-(4-methyl-3-pentenyl)- (CAS) Santalen (2.66%), Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (5,72%), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (8,17%) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (7,66%). Hasil analisis GC-MS pada habitat rawa menunjukkan bahwa 25 komponen kimia terdeteksi. Enam belas diantara komponen kimia minyak atsiri tersebut merupakan komponen utama (>2%) yaitu dl-Limonene (20.46 %), 2,3DIHYDRO-BENZOFURAN (4.08 %), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene, 2,6,10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (6.15%), Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (3,07 %), 1,3-Butadiene, 2-methyl- (CAS) Isoprene (9,34%), Phenol, 2,6-dimethoxy- (CAS) 2,6-Dimethoxyphenol (2,27%), CLOVEN N (2,15%), Germacrene methylethylidene B (2,64%), (LEVOGLUCOSAN) (CAS) 1,5-Cyclodecadiene, 1,5-dimethyl-8-(1- 6-ANHYDRO-BETA-D-GLUCOPYRANOSE (9,92%), 3a,6-Methano-3aH-inden-5-ol,octahydro-, (3a.alpha.,5.alpha.,6.alpha.,7a.beta) (4,33%), 2,6-Octadiene, 1-(1-ethoxyethoxy)3,7-dimethyl- (CAS) 2-TERT-BUTYLAMINO (2,93%), Phenol, 2,6-dimethoxy4-(2-propenyl)- (CAS) 4-Allyl-2,6-dimethoxyphenol (4,59%), 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15-tetramethyl-, [R-[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol (5,23%), CIS- CARYOPHYLLENE (3,78%), CYCLOHEPTAN,4-METHYLEN-1-METHYL2-(2-METHYL-1-PROPEN-1-YL)- (2,77%) dan Hexacosane (CAS) n- Hexacosane (3,06%). Sedangkan pada habitat savanna ditemukan 8 komponen utama yakni Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate (11,09 %), dl-Limonene (30.90 %), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (6,37 %), Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (4,56 %), 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (8,21 %), Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (4,62 %), 1,6-ANHYDRO-BETA- 30 D-GLUCOPYRANOSE (LEVOGLUCOSAN) (8,72 %) dan Hexacosane (CAS) n-Hexacosane (4,22 %) dan 1 kompenen tidak teridentifikasi (2,01 %). Dintinjau dari aspek sebaran komponen kimia, tampak bahwa komponen kimia tidak tersebar merata pada ketiga habitat di TN Rawa Aopa Watumohai. Meskipun demikian terdapat beberapa komponen kimia yang ditemukan pada ketiga habitat dengan kandungan yang berbeda. Komponen kimia tersebut adalah Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-methylethenyl)-, (R)- (CAS) D-1,8(9)-P- MENTHADIENE, dl-Limonene, Phenol, 4-methyl- (CAS) p-Cresol, 2,3DIHYDRO-BENZOFURAN, Carvacrol, Farnesene, Phenol, 2-methyl-5-(1-methylethyl)- (CAS) 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23- hexamethyl- (CAS) Squalene dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane. Dari delapan komponen kimia tersebut terdapat empat komponen utama yakni dlLimonene (C10 H16), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (C8H8O), 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (C30H50) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (C44H90). Berdasarkan uraian di atas maka dapat dinyatakan bahwa hasil penelitian ini cenderung berbeda dengan studi fitokimia daun lonkida yang pernah dilaporkan sebelumnya. Banyak alkaloid yang diisolasi dan di identifikasi dari daun lonkida. Dua indole alkaloid glycosides, 10-hydroxystrictosamide and 6’-O– acetylstrictosamide (Erdelmeier et al. 1991) dan 9 tipe angustine alkaloid seperti 10-hydroxyangustine dan dua duastereoisomeric 3,14-dihydroangustolines (Erdelmeier et al. 1992). Beberapa alkaloid tersebut berperan sebagai antiproliferative. Senyawa aktif yang dominan ditemukan pada daun lonkida dari tiga habitat adalah Limonene. Senyawa ini pertama kali diisiolasi dan diindetifikasi dari daun jeruk. Di Indonesia, senyawa ini ditemukan pada daun daun dewa (Gynura procumbens Merr.), kirinyu (Tithonia diversifolia), Cinnamomum kinabaluensis, C. multiflorum, C. Subavenium, pala (Myristica fragrans), Eugenia lineata, siri hutan (Piper aduncum L.). selain pada daun, senyawa ini juga ditemukan pada kulit buah segar dari beberapa jenis jeruk (Agusta, 2000). 31 Perbedaan habitat berkontribusi terhadap kandungan senyawa aktif pada daun lonkida. Beberpa studi melaporkan hal yang sama pada beberapa jenis pohon hutan. Perbedaan komposisi monoterpen pada 12 provenans loblolly pine (Kozlowski and Palardy, 1997a). Variasi kandungan minyak atsiri Ki Lemo (Litsea cubeba Lour. Persoon) di beberapa tipe habitat di Gn. Papandayan Jawa Barat (Suwandhi, 2014). Menurut Kozlowski and Palardy (1997a) bahwa keberadaan senyawa aktif ditanaman dikontrol oleh faktor genetik dan lingkungan. Beberapa faktor lingkungan yang diduga berperan dalam keberadaan senyawa aktif tanaman diantaranya sifat kimia tanah (N, P,S, Mg), fisik tanah (pori tanah dan ketersedia air). Menutut Suwandi (2014) bahwa keberadaan S dan N yang tinggi dapat meningkatkan kandungan minyak atsiri Ki Lemo dan sebaliknya Mg dan pori tanah yang besar dapat menurunkan kandungan minyak atsiri. Pada kasus penelitia ini, peneliti berpendapat bahwa faktor kuat habitat rawa memiliki senyawa aktif lebih tinggi dari habitat lainnya karena kondisi genangan air. Diduga, pada kondisi cekaman genangan lonkida akan melakukan mekanisme pertahanan dengan memproduksi metabolit sekunder tertentu (Kozlowski and Palardy, 1997b). Pada gambar Gambar 11, 12, dan 13 berikut disajikan profil kromatogram dari masing-masing komponen kimia. Gambar 11. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat hutan 32 Gambar 12. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat rawa Gambar 10. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat savanna 33 BAB 6. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Kesimpulan yang dapat diambil dari penelitian ini adalah : 1. Perbedaan habitat berkontribusi terhadap sifat biji lonkida baik ukuran biji maupun jumlah biji per buah, tetapi tidak terhadap ukuran buah. Secara morfologis, jumlah biji per buah, panjang dan lebar biji benih lonkida dari habitat rawa signifikan perbedaannya lebih banyak dan panjang dibanding dari habitat dataran kering. Sedangkan secara fisiologi pengaruhnya tidak signifikan. 2. Daya hidup benih longkida sangat tinggi yaitu 100% pada umur 2 MSP. Bibit lonkida mulai membentuk mekanisme adaptasi pada kondisi tergenang pada umur 5-7 hari setelah penggenangan melalui pembentukan akar liar dan lentisel. 3. Pengaruh interaksi faktor FMA, sumber benih dan genangan atau interaksi dua faktor tidak signifikan terhadap semua peubah yang diamati. 4. Secara mandiri pengaruh perlakuan FMA hingga umur 8 minggu setelah penggenangan tidak signifikan terhadap semua peubah yang diamati. Namun pengaruh Fungi Mikoriza Arbuskula (FMA) lokal yaitu FMA asal habitat rawa dan habitat hutan dataran rendah cenderung lebih berasosiasi baik dengan tanaman lonkida dibanding isolat asing yaitu mycofer IPB terhadap peubah yang diamati. 5. Secara mandiri perlakuan sumber benih tidak signifikan pengaruhnya terhadap pertumbuhan bibit lonkida. 6. Secara mandiri perlakuan genangan signifikan meningkatkan diameter batang hingga 33,46% dibanding tanpa genangan, namun cenderung sama terhadap peningkatan tinggi bibit dan jumlah daun. 7. Terdapat 44 senyawa fitokimia yang teridentifikasi pada daun lonkida. Perbedaan habitat memberikan pengaruh yang berbeda terhadap sifat fitokimia daun lonkida, namun senyawa aktif yang dominan pada ketiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa adalah Limonene. 34 Saran Berdasarkan hasil penelitian maka disarankan bahwa : 1. Koleksi benih untuk tujuan pengembangan lonkida sebaiknya dari pohonpohon induk yang tumbuh baik di habitat rawa. 2. Perlu dilakukan penelitian selanjutnya untuk menguji kemampuan adaptasi bibit lonkida bermikoriza terhadap cekaman logam berat dan cekaman fisik pada tanah bekas tambang emas dan nikel. 35 DAFTAR PUSTAKA Agusta A. 2000. Minyak atsiri tumbuhan tropika Indonesia. Penerbit ITB. Bandung. Alimuddin LD dan FD Tuheteru. 2013. Analisis kerapatan dan persebaran lonkida (Nauclea orientalis Merr.) pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai Sulawesi Tenggara. Makalah seminar Nasional Silvikultur I, 29 Agustus 2013 Fakultas Kehutanan Unhas. Makassar. Amihan-Vega B and Josiefer D. Mendoza. 2005. Benefits From Tree Growing In The Degraded Uplands: Empirical Realities From Tabango, Leyte, The Philippines. Proceedings from the end-of-project workshop held in Ormoc city, The Philipines, 19-21 August 2004. Harrison, S., J. Herbohn., J. Suh., E. Mangaoang and J. Vanclay (editors). Filipina. Ashraf MA. 2012. Waterlogging stress in plants : A review. African Journal of Agricultural Research 7(13):1976-1981. Balai Perbenihan Tanaman Hutan Jawa dan Madura. 2011. Gempol (Nauclea orientalis L.). Informasi singkat Benih No. 118 Agustus 2011. Bauer CR, CH Kellogg, SD Bridgham and GA Lamberti. 2003. Mycorrhizal colonization across hydrologic gradients in restored and reference freshwater wetlands. Wetlands 23 (4):961-968 Boland DJ, MIH Brooker, GM Chippendale, N Hall, BPM Hyland, RB Johnston, DA Kleinig, MW McDonals and JD Turner. 2006. Forest Trees of Australia. CSIRO. Australia. Chaurasia B, A Pandeya and Lok Man S. Palni. 2005. Distribution, colonization and diversity of arbuscular mycorrhizal fungi associated with central Himalayan rhododendrons. Forest Ecology and Management 207 : 315– 324 Collins, S., X. Martins, A. Mitchell, A. Teshome, And J.T. Arnason. 2007. Fataluku medicinal ethnobotany and the East Timorese military resistance. Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine 3(5):1-10. Danu., N. Nurochim dan A.H. Haerujaman. 2011. Mengenal pohon Gempol (Nauclea orientalis L.) di Jawa Barat dan Banten. Info benih 15 (2) : 5559. Dayan M dP, Rosalinda SR and DB Bandian. 2007. Indigenous Forest tree Species in Laguna Province. DENR Recommends Vol 15b. de Marins JF, R Carrenho and SM Thomaz. 2009. Occurrence and coexistence of arbuscular mycorrhizal fungi and dark septate fungi in aquatic macrophytes in a tropical river-floodplain system. Aquatic Botany 91:1319 36 Delvian. 2003. Keanekaragaman Cendawan Mikoriza Arbuskula (CMA) di hutan pantai dan potensi pemanfaatannya. Studi Kasu di Hutan CagarAlam Leuweung Sancang kabupaten Garut, Jawa Barat [Disertasi]. Program Pascasarjana IPB. Bogor. Dolinar N and A. Gaberščik. 2010. Mycorrhizal colonization and growth of Phragmites australis in an intermittent wetland. Aquatic Botany 93:93-98 Erdelmeier CA, Wright AD, Orjala J, Baumgartner B, Rali T, Sticher O. 1991. New indole alkaloid glycosides from Nauclea orientalis . Planta Med 57(2):149–152 Erdelmeier CAJ, Regenass U, Rali T, Sticher O. 1992. Indole alkaloids with in vitro antiproliferative activity from the ammoniacal extract of Nauclea orientalis. Planta Med 58(1):43–48 Escudero V and R Mendoza. 2005. Seasonal variation of arbuscular mycorrhizal fungi in temperate grasslands along a wide hydrologic gradient. Mycorrhiza 15:291-299. Estaún, V., Cinta, C. dan Camprubí, A. 2010. Effect of Differences Among Crop Species and Cultivars on the Arbuscular Mycorrhizal Symbiosis [Chapter 13]. In: Koltai, H. and Kapulnik, Y. (Eds.). Arbuscular Mycorrhizas: Physiology and Function. Pp. 279295. Springer, New York. Folzer H, JF Dat, N Capelli, D Rieffel, Pierre-Marie Badot. 2006. Response of sessile oak seedlings (Quercus petraea) to flooding: an integrated study. Tree Physiology 26:759-766 Fougnies L, S Renciot, F Muller, C Plenchette, Y Prin, SM de Faria, JM Bouvet, S Nd Sylla, B Dreyfus, AM Bâ. 2007. Arbuscular mycorrhizal colonization and nodulation improve flooding tolerance in Pterocarpus officinalis Jacq. seedlings. Mycorrhiza 17:159–166 Genga, A., Mattana. M., Coraggio, I., Locatelli, F., Piffanelli,P., and Consonni, R., 2011. Plant Metabolomics: A Characterisation of Plant Responses to Abiotic Stresses. Chapter 14 in Abiotic Stress In Plants – Mechanisms And Adaptations. Edited by Arun Kumar Shanker and B. Venkateswarlu. Published by InTech, Janeza Trdine 9, 51000 Rijeka, Croatia, ISBN 978953-307-394-1 Giasson P, A. Karam and A. Jaouich. 2008. Arbuscular Mycorrhizae and Alleviation of Soil Stresses on Plant Growth [Chapter 4]. Di dalam : ZA Siddiqui, MS Akhtar and K Futai (editors) : Mycorrhizae Sustainable Agriculture and Forestry. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. Göhre V, Paszkowski U. 2006. Contribution of the arbuscular mycorrhizal symbiosis to heavy metal phytoremediation. Planta 223: 1115-1122. Gonzales-Guerrero, M, Karim B, N Ferrol and C Azcon-Aguilar. 2009. Mechanisms Underlying Heavy Metal Tolerance in Arbuscular Mycorrhizas [Chapter 8]. Di dalam : C Azcon-Aguilar, JM Barea, S Gianinazzi, Y Gianinazzi-Pearson (editors) : Mycorrhizas Funcional Processes and Ecological Impact. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. 37 Hoag, J.C., Melvin, N., and Tilley, D., 2007. Tumbuhan Lahan Basah: Fungsi, Adaptasi dan Hubungannya Dengan Level Air. Riparian/Wetland Project Series No. 21 May 2007. Husna, Adawiyah R, La Ode Alimuddin dan FD Tuheteru. 2006. Status Keanekaragaman Cendawan Mikoriza Arbuskula (CMA) pada Empat tanaman lokal Sulawesi Tenggara. Majalah Ilmiah Agriplus Faperta Vol 16 (02): 173-182. Iwanaga F, F Yamamoto. 2008. Effects of flooding depth on growth, morphology and photosynthesis in Alnus japonica species. New Forests 35:1–14 Kartikasari, S.N., A.J. Marshal and B.M Beehler. 2012. Ekologi Papua. Seri Ekologi Indonesia. Jilid VI. Yayasan Pustaka Obor Indonesia dan Conservation International. Kogawara S, T Yamanoshita, M Norisada, M Masumori, K Kojima. 2006. Photosynthesis and photoassimilate transport during root hypoxia in Melaleuca cajuputi, a flood-tolerant species, and in Eucalyptus camaldulensis, a moderately flood-tolerant species. Tree Physiology 26: 1413–1423 Kozlowski TT. 1984. Responses of Woody Plants to Flooding [Chapter 4]. In : Flooding and Plant Growth, Kozlowksi, T.T (Edited). Academic Press, INC. San Diego. Kozlowski TT and SG pallardy. 1997a. Physiology of woody plants. Secon edition. Academic Press. New York. Kozlowski TT and SG pallardy. 1997b. Growth control in woody plants. Academic Press. New York. Kramadibrata K. 2011. Keanekaragaman JA Bambu di Pulau Sumba. Berita Biologi 10(5):635-639 Kramadibrata K. 2012. Jamur Arbuskula di Taman Nasional Ujung Kulon. Berita Biologi 11(2): 205-209 Kramadibrata, K. 1993. Jenis-jenis jamur Glomales dari DAS Cisadane. Jurnal Mikrobiologi Indonesia 2 (2): 24-26 LaFrankie, J.V. 2010. Trees of Tropical Asia. BlackTree Publication, Inc. Philippines. Marghescu, T. 2001. Restoration of degraded forest land in Thailand: the case of Khao Kho. Unasylva 207 (52); 52-56. Mawaddah, M. 2012. Pertumbuhan kayu putih (Melaleuca leucadendron Linn.) dan Longkida (nauclea orientalis Linn.) pada kondisi tergenang air asam tambang [Skripsi]. Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan, Institut Pertanian Bogor. Bogor. Miller S.P and J.D Bever. 1999. Distribution of arbuscular mycorrhizal fungi in stands of the wetland grass Panicum hemitomon along a wide hydrologic gradient. Oecologia 119:586-592 38 Nielsen JL, Stewart BR, DW Pearce, MG Letts, H Jiskoot. 2010. Streamside trees: responses of male, female and hybrid cottonwoods to flooding. Tree Physiology 30:1479–1488 Osundina MA (1998) Nodulation and growth of mycorrhizal Casuarina equisetifolia J.R. and G. First in response to flooding. Biol Fertil Soils 26:95–99 Pattarakulpisutti, P & K. Sridith. 2011. The Floodplain Vegetation Of The Trang River Basin, Peninsular Thailand: The Threatened Remnants Of The Freshwater Swamp Vegetation. THAI FOR. BULL. (BOT.) 39: 120–139. Petty, AM and M.M. Douglas. 2010. Scale relationships and linkages between woody vegetation communities along a large tropical floodplain river, north Australia. Journal of Tropical Ecology (2010) 26:79–92. Puspitasari D, KIndah Purwani dan A Muhibuddin. 2012. Eksplorasi Vesicular Arbuscular Mycorrhiza (VAM) Indigenous pada Lahan Jagung di Desa Torjun, Sampang Madura. JURNAL SAINS DAN SENI ITS Vol. 1 :19-22 Raghavamma STV and NR Rao. 2010. In vitro Evaluation of anthelminthic activity of Nauclea orientalis leaves. Indian J Pharm Sci. 72(4): 520–521 Rais, S., Y. Ruchiat., A. Sartono dan T. Hideta. 2007. 50 Taman Nasional di Indonesia. Dirjen PHKA, Dephut., Lestari Hutan Indonesia dan JICA. Jakarta. Ruxton,BP., H. A. Haantjens, K. Paijmans, and J. C. Saunders. 1967. Lands of the Safia-Pongani Area,Territory of Papua and New Guinea. Land Research Series No. 17. Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization, Australia. Melbourne. Shi ZH, L.Y. Zhang, X.L. Li, G. Feng, C.Y. Tian and P. Christie. 2007. Diversity of arbuscular mycorrhizal fungi associated with desert ephemerals in plant communities of Junggar Basin, northwest China. Applied Soil Ecology 35:10–20 Shukla A, D Vyas, and Anuradha J. 2013. Soil depth: an overriding factor for distribution of arbuscular mycorrhizal fungi. Journal of Soil Science and Plant Nutrition 13(1), 23-33 Sichaem J, Surapinit S, Siripong P, Khumkratok S, Jong-Aramruang J, Tip-Pyang S. 2010. Two New Cytotoxic Isomeric Indole Alkaloids from The Roots of Nauclea Orientalis. Fitoterapia 81:830-833. Sosef, M.S.M., L.T. Hong and S. Prawirohatmodjo. 1998. Plant Resources of South-East Asia No. 5(3) : Timber trees : Lesser-known timbers. Prosea, Indonesia Bogor. Suciatmih dan K Kramidbrata. 2002. Arbuscular mycorrhizal fungi at different ecosystems of Gunung Halimun National Park. Berita biologi 6 (1):145149 Sudha K and Ammani K. 2010. .Arbuscular mycorrhizal fungi in medicinal plants in Thrissur district,Kerala. Mycorrhiza News 21(4): 13-18. 39 Suwandhi, I. 2014. Preferensi Ekologis Ki Lemo di Gunung Papandayan Jawa Barat dan Hubungannnya dengan Kandungan Minyak atssiri. Disertasi. Sekolah pasca sarjana IPB. Bogor. Tanaka K, M Masumori, T Yamanoshita, T Tange. 2011. Morphological and anatomical changes of Melaleuca cajuputi under submergence. Trees 25:695-704 Tuheteru FD and La Ode Alimuddin. 2013. Ekologi dan budidaya lonkida (Nauclea orientalis L.) yang berpotensi tanaman obat dan fitoremediasi di Sulawesi Tenggara. Laporan akhir Hibah Bersaing Tahun 2013, BOPTN Universitas Haluoleo. Kendari. Tuheteru FD. 2011. Biomassa dan ketergantungan mikoriza tanaman lonkida (Nauclea orientalis) yang diinokulasi Fungi Mikoriza Lokal. Penelitian Mandiri. Tidak dipublikasikan. Tuheteru, FD, Husna dan A. Arif. 2011. Respon pertumbuhan dan Ketergantungan Albizia saponaria (LOUR.) MIQ terhadap Inokulasi FMA Lokal Sulawesi Tenggara pada media Tanah Pasca Tambang Nikel. Be rita Biologi, 10 (5) : 605-611. Van Sanh, N and Duy Can, N. 2009. Study on Local Community Institutions to Cope with the Flood Situation of the Mekong Region. The Sustainable Mekong Research Network. Widiastuti H dan K. Kramadibrata. 1992. Jamur Mikoriza bervesikula-arbuskula di beberapa Tanah Masam dari jawa barat. Menara Perkebunan 60(1):9-19 Zhao Z, Xia Y, Qin X, Li X, Cheng L, Sha T, Wang G. 2001. Arbuscular mycorrhizal status of plants and the spore density of arbuscular mycorrhizal fungi in the tropical rain forest of Xushuangbanna, Southwest China. Mycorrhiza 11:159-162. 40 Lampiran 1. Surat Pemberitahuan Lolos Seleksi Abstrak Yogyakarta, 27 Juni 2014 Nomor : 81/PanSem. Silv2/VI/2014 Perihal : Pemberitahuan hasil seleksi abstrak Kepada Yth. Bapak/Ibu/Saudara: Faisal Danu Tuheteru dan La Ode Alimuddin Dengan ini kami beritahukan bahwa abstrak Bapak/Ibu/Saudara yang berjudul: Pengaruh Perbedaan Habitat Terhadap Ukuran Buah dan Morfo-Fisiologi Benih Lonkida (Nauclea orientalis L.) (No. Makalah: P42) dinyatakan lolos/tidak lolos untuk disajikan dalam Seminar Nasional Silvikultur ke-2 dan Konggres Masyarakat Silvikultur Indonesia 2014. Untuk itu, kami mengundang Bapak/Ibu/Saudara pada tanggal 28-29 Agustus 2014 di University Club Hotel UGM, Yogyakarta. Kehadiran Bapak/Ibu/Saudara merupakan syarat untuk diterbitkannya sertifikat sebagai penyaji. Selanjutnya, dimohon berkenan untuk membuat full paper sebagaimana panduan di dalam website. Kami mengharapkan dapat menerimanya via email: [email protected] dan [email protected] bersubyek: nomor dan judul makalah, maksimal Jum'at, 25 Juli 2014, pukul 12.00 WIB. Full paper yang Bapak/Ibu/Saudara kirimkan akan direview oleh tim reviewer. Mohon kerjasamannya untuk segera memperbaiki dan mengirimkannya kembali kepada sekretariat panitia maksimal 1 minggu setelah full paper direview. Jika tidak, maka makalah tersebut tidak dapat diikutsertakan di dalam prosiding. Pelunasan biaya pendaftaran maksimal dapat kami terima pada hari Jum'at, 11 Juli 2014. Formulir pendaftaran, bukti pembayaran (dan scan Kartu Tanda Mahasiswa bagi mahasiswa) agar juga dikirimkan ke sekretariat seminar. Adapun informasi mengenai nomor rekening, panduan poster dan full paper dapat diakses pada website seminar nasional dengan alamat: http://seminar.silvikultur.fkt.ugm.ac.id/. Demikian, terima kasih atas perhatian dan kerja samanya. Kami menunggu kehadiran Bapak/Ibu/Saudara di Yogyakarta! Hormat kami, Daryono Prehaten Ketua Panitia 41 Lampiran 2. Sertifikat Sebagai Penyaji 42 Lampiran 3. Full paper yang disampaikan dan dimuat dalam prosiding pada seminar Silvikultur Ke-2 dan Kongres Masyarakat Silvikultur Indonesia di UCH, UGM PENGARUH PERBEDAAN HABITAT TERHADAP UKURAN BUAH DAN MORFO-FISIOLOGI BENIH LONKIDA (Nauclea orientalis L.) Faisal Danu Tuheteru* dan La Ode Alimuddin Jurusan Kehutanan, Fakultas Kehutanan dan Ilmu Lingkungan, Universitas Halu Oleo Kendari *e-mail : [email protected] ABSTRAK Lonkida (Nauclea orientalis L.) merupakan jenis multiguna (obat, kayu, agroforestri, rehabilitasi lahan dan fitoremediasi) yang tersebar alami di Indonesia. Jenis ini ditemukan tumbuh alami di Sulawesi Tenggara pada berbagai habitat seperti rawa dan lahan kering. Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh perbedaan habitat rawa dan lahan darat kering terhadap ukuran buah dan morfofisiologi benih lonkida. Koleksi buah dilakukan pada 33 pohon induk, dengan rincian 14 pohon induk dari habitat rawa dan 19 pohon induk dari lahan darat kering di Kota Kendari, Sulawesi Tenggara pada bulan Mei 2013 (musim hujan). Hasil studi menunjukkan bahwa pohon induk dari habitat rawa memiliki jumlah biji per buah (9234±2,033 biji), panjang biji (1361±1,099 mm) dan lebar biji (820±1,047 mm) serta MGT lebih tinggi (5,5) dibanding habitat lahan kering. Habitat tidak berpengaruh nyata terhadap ukuran buah, berat benih, persen kecambah dan MDG. Kata kunci : biji dan buah lonkida, habitat rawa, Kendari, lonkida PENDAHULUAN Lonkida (Nauclea orientalis L.) merupakan jenis multiguna diantaranya sebagai tanaman obat (Lim, 2013), produksi kayu (Dayan dkk., 2007), serta jenis untuk agroforestri (Amihan-Vega & Mendoza, 2005), rehabilitasi lahan (Marghescu, 2001) dan fitoremediasi (Mawaddah, 2012). Jenis ini tumbuh baik pada berbagai kondisi ekologi dan tersebar secara alami di Indonesia, termasuk di Provinsi Sulawesi Tenggara (Tuheteru, 2013). Di Sulawesi Tenggara, lonkida ditemukan pada berbagai habitat seperti rawa dan lahan kering (Alimuddin & Tuheteru, 2013). 43 Informasi silvikultur lonkida di Indonesia, saat ini belum tersedia dan masih terbatas di wilayah Jawa Barat (Tuheteru 2013). Danu et al. (2011), melaporkan buah lonkida yang berasal dari Banten dan Majalengka Provinsi Jawa Barat memiliki ukuran 4-5 cm dengan ukuran benih 1-1,5 mm. Meskipun demikian, belum ada informasi karakteristik buah dan biji, serta mutu benih lonkida pada kedua habitat di Sulawesi Tenggara. Studi perbedaan habitat terhadap karakteristik buah dan benih tanaman hutan di wilayah tropis masih sangat terbatas (Mataruga et al., 2010). Perbedaan habitat diduga berpengaruh terhadap produksi buah dan biji lonkida serta mutu fisiologi benih. Variasi morfologi buah dan biji menjadi fenomena umum pada jenis-jenis pohon. Variasi tersebut terjadi karena pengaruh dua faktor penting yakni faktor lingkungan dan genetik (Schmidt, 2002). Perbedaan karakter buah dan biji tersebut juga akan berpengaruh terhadap perkecambahan. Ukuran dan berat biji merupakan faktor utama yang mempengaruhi komponen penting perkecambahan (Loha et al., 2009). Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh perbedaan habitat, rawa dan lahan darat kering, terhadap ukuran buah dan morfofisiologi benih lonkida BAHAN DAN METODE Waktu dan tempat Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei s/d Juni 2013 (musim hujan). Buah lonkida dikoleksi dari pohon-pohon induk pada dua habitat yaitu rawa dan lahan darat kering di Kota Kendari, Sulawesi Tenggara. Pengamatan bentuk dan pengukuran buah dan biji dilakukan di Laboratorium Kehutanan Universitas Halu Oleo, Kendari dan Laboratorium Anatomi Kayu, Litbang Kementerian Kehutanan, Bogor. Uji mutu fisiologis benih dilakukan di rumah kaca bagian Ekologi Hutan Departemen Silvikultur Fakultas Kehutanan IPB. 44 Tahapan penelitian Buah lonkida dikoleksi dari pohon-pohon induk hasil eksplorasi di Kota Kendari. Pengumpulan buah lonkida dilakukan dengan cara dipungut di lantai hutan. Buah dikoleksi dari 14 pohon induk dari habitat rawa dan 19 pohon induk dari lahan darat kering. Buah yang sudah dikoleksi selanjutnya diremas dan diekstraksi menggunakan saringan teh pada air mengalir. Biji yang telah dikeringanginkan disimpan dalam kantong plastik. Benih yang digunakan sebagai contoh/sampel diperoleh secara acak dari kumpulan benih masing-masing habitat. Media yang digunakan untuk perkecambahan adalah pasir : arang sekam (1:1 v/v). Media disterilkan dengan cara disangrai selama ± 2 jam, kemudian diletakkan di dalam kotak berbahan mika (20 cm x 20 cm x 5 cm) yang sudah dilubangi. Tidak ada perlakuan awal benih sebelum pengujian mutu fisiologis benih. Rancangan Penelitian Pengamatan ukuran buah dan biji serta mutu fisiologis menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan perlakuan perbedaan habitat. Terdapat 2 (dua) habitat yaitu rawa dan lahan darat kering. Khusus pengujian mutu fisiologis setiap perlakuan diulang 3 kali dengan setiap satuan percobaan terdiri dari 4 bak kecambah, masing-masing bak kecambah terdiri atas 100 biji, sehingga jumlah keseluruhannya adalah 1200 biji. Pengumpulan Data Pengamatan dilakukan terhadap beberapa peubah diantaranya : 1. Ukuran buah dan biji. Sebanyak 50 buah dari masing-masing habitat diambil secara acak dan diukur dengan menggunakan kaliper digital pada kedua sisi buah, sedangkan ukuran biji dilakukan dengan mengamati 60 biji dari masingmasing habitat di bawah mikrosokop stereo. 2. Berat benih 1000 butir. Mengambil dan menghitung 100 benih dengan 8 ulangan secara acak, kemudian menghitung koefisien keragaman dari berat 100 butir benih dari 8 ulangan tersebut. Jika koefisien keragaman (CV) lebih kecil 45 dari 4,0 maka analisis diterima (Peraturan Dirjen RLPS No. P.13/VPTH/2007). 3. Daya berkecambah (G), adalah banyaknya benih yang mampu berkecambah hingga akhir pengamatan perkecambahan yang telah ditentukan (Hartman et al., 2002). 4. Rata-rata waktu untuk berkecambah (MGT), diukur berdasarkan rata-rata hari yang diperlukan untuk berkecambah, dengan persamaan : MGT = {( dimana t adalah hari yang diperlukan untuk berkecambah (0) n = jumlah biji berkecambah pada akhir pengamatan dan i = waktu pengamatan (Hartman et al., 2002). 5. Rata-rata benih berkecambah per hari (MDG) diukur berdasarkan persamaan : MDG = N/t, dimana N adalah total jumlah biji yang berkecambah pada akhir pengamatan dan t adalah jumlah hari pengamatan (Hartman et al., 2002). Analisa data Data pengujian dianalisis menggunakan analisis ragam (ANOVA) yang jika nyata dilanjutkan dengan perbandingan rataan menggunakan uji Tukey pada taraf signifikansi 95%. HASIL DAN PEMBAHASAN Data ukuran buah dan biji lonkida disajikan pada Tabel 1. Tabel 1 menunjukkan bahwa perlakuan habitat tidak mempengaruhi lebar dan panjang buah. Pohon induk dari habitat rawa memiliki jumlah biji per buah (9234 ± 2,033 biji), panjang biji (1361 ± 1,099 mm) dan lebar biji (820 ± 1,047 mm) serta MGT (5,5) lebih tinggi dibanding habitat lahan kering. Rata-rata lebar dan panjang buah berkisar 5,89-6,11 cm dan 5,75-5,80 cm. Adapun rata-rata jumlah biji per buah berkisar 4329-9234 biji/buah dan koefisien keragaman adalah 110%. 46 Tabel 1. Ukuran buah dan benih lonkida berdasarkan perbedaan habitat Lebar Panjang Lebar P/L Jumlah Panjang buah buah biji rasio benih/buah biji (µm) (cm) (cm) (µm) Rawa 5,89 a* 5,80 a 9234 a 1361,5 a 820,6 a 1,66 a D. kering 6,11 a 5,75 a 4329 b 1299,9 b 750,5 b 1,73 a Pr>F 0,3281 0,7367 0,0003 0,0364 0,0200 0,1480 CV 1 14 110 3 5 4 Keterangan : *Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata menurut uji Tukey pada tingkat signifikansi 95%. Perlakuan Selain ukuran buah, habitat juga tidak berpengaruh terhadap berat benih, persen kecambah dan MDG (Gambar 1). Rata-rata berat benih 0,184-0,199 g dan persentase kecambah berkisar 94-95% (Gambar 1). Perkecambahan terjadi mulai lima hari setelah penaburan dan tingkat perkecambahan diatas 50% terjadi pada hari ke-7. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa terdapat variasi jumlah biji per buah, panjang biji dan lebar biji pada habitat yang berbeda. Secara umum, jumlah biji per buah, panjang biji dan lebar biji lebih besar dijumpai pada pohon induk dari habitat rawa. Hal yang sama juga ditemukan pada peubah MGT. Koefisien keragaman dapat dijadikan sebagai indikator pengaruh lingkungan terhadap peubah yang diamati. Keberadaan koefisien keragaman (CV=110%) pada peubah jumlah biji per buah mengindikasikan bahwa pengaruh lingkungan sangat kuat, sedangkan nilai KK rendah (CV=1-14%) pada peubah lainnya dikontrol oleh pengaruh genetik (Kimmins, 1987). 47 Gambar 1. Uji fisik dan fisiologis benih lonkida berdasarkan perbedaan habitat Berdasarkan penjelasan di atas, dapat diketahui bahwa perbedaan jumlah biji per buah dan ukuran biji pada penelitian ini mungkin sangat dipengaruhi oleh faktor lingkungan dan genetik. Loha et al., 2006), menjelaskan perbedaan ukuran biji tidak hanya diwariskan tetapi juga sangat dipengaruhi oleh variasi lingkungan. Wahid & Bounoua (2012), menjelaskan bahwa pengaruh lingkungan selama perkembangan biji dan kombinasinya dengan variabilitas genetik juga dapat berpengaruh terhadap ukuran biji. Faktor lingkungan yang diduga berpengaruh kuat adalah ketersediaan air selama pembentukan buah dan biji (Kozlowski & Pallardy, 1997). Kozlowski & Pallardy (1997) lebih lanjut menjelaskan bahwa perkembangan buah sangat tergantung pada mobilisasi karbohidrat hasil fotosintesis dan ketersediaan air. Fakta bahwa pada pohon-pohon induk di habitat rawa menghasilkan biji per buah dalam jumlah banyak dan ukuran biji yang lebih besar tidak sesuai dengan teori yang ada. Setiap jenis memiliki strategi tertentu antara memproduksi benih kecil dalam jumlah banyak atau sedikit benih namun dengan ukuran besar. Strategi jenis tersebut sangat terkait dengan alokasi fotosintat untuk tujuan reproduksi dan seleksi terhadap cekaman (Leishmen et al., 2000). 48 Pada penelitian ini, ukuran buah berkisar 5,89-6,11 x 5,80-5,75 cm dan ukuran biji 1,299-1,361 x 0,750-0,820 mm. Ukuran buah dan biji hampir sama dengan ukuran buah dan biji lonkida yang pernah dilaporkan di Australia (Boland et al., 2006), serta Banten dan Majalengka (Danu et al., 2011). Kesamaan ukuran buah dan biji lonkida pada sebaran alaminya menunjukkan bahwa kedua peubah tersebut lebih dipengaruhi oleh genetik tanaman lonkida. KESIMPULAN Pohon - pohon induk dari habitat rawa (tergenang air) memproduksi buah dengan jumlah biji per buah lebih banyak dengan ukuran biji lebih besar dibanding habitat lahan darat kering (tidak tergenang). Meskipun demikian, perbedaan habitat tidak mempengaruhi ukuran buah, mutu fisik dan fisiologis benih lonkida. Selain habitat, ukuran buah dan biji juga diduga dipengaruhi oleh faktor genetik. UCAPAN TERIMA KASIH Terima kasih penulis ucapkan kepada Dirjen DIKTI atas dukungan dana yang memungkinkan penelitian dapat terlaksana. Tulisan ini adalah sebagian dari hasil penelitian yang didanai oleh Dirjen DIKTI melalui Hibah Bersaing BOPTN Universitas Halu Oleo Tahun 2014. DAFTAR PUSTAKA Alimuddin, LD. & Tuheteru, FD. 2013. Analisis kerapatan dan persebaran Lonkida (Nuclea orientalis Merr.) pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai - Sulawesi Tenggara. Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional Silvikultur I, Fakultas Kehutanan Universitas Hasanuddin, Makassar, 29 Agustus 2013. Makassar. Amihan-Vega, B. & Mendoza, JD. 2005. Benefits from Tree Growing in the Degraded Uplands: Empirical Realities from Tabango, Leyte, The Philippines. Dalam : Harrison, S., Herbohn, J., Suh, J., Mangaoang E., and Vanclay, J., (editors). Proceedings from the End-of-project Workshop Held in Ormoc city, The Philipines; 19-21 August 2004; Filipina. 49 Boland, DJ., Brooker, MIH., Chippendale, GM., Hall, N., Hyland, BPM., Johnston, RB., Kleinig, DA., McDonals, MW. dan Turner, JD. 2006. Forest Trees of Australia. Australia: CSIRO. Danu, Nurochim, N. & Haerujaman, AH. 2011. Mengenal pohon Gempol (Nauclea orientalis L.) di Jawa Barat dan Banten. Info benih 15 (2) : 5559. Dayan, MdP., Rosalinda, SR. & Bandian, DB. 2007. Indigenous Forest Tree Species in Laguna Province. DENR Recommends Vol 15b. Hartman, HT., Kester, DE., Davies, FT. & Geneve, R. 2002. Plant propagation: Principle and Practices. 7th Ed. Prentice-Hall International, Inc. New Yersey. Kimmins, JP. 1987. Forest ecology: a foundation for sustainable management, 2nd. MacMillian Publishing Company, United States of America. Kozlowski, TT. & Pallardy, SG. 1997. Growth control in woody plant. Academic Press. Leishman, M.R., Wright, I.J., Moles, A.T., dan Westoby, M., 2000. The Evolutionary Ecology of Seed Size. dalam Fenner, M. (ed), The Ecology of Regeneration in Plant Communities, 2nd edition. CAB International, New York p 31-58. Lim, TK. 2013. Edible Medicinal and Non-Medicinal Plants:Volume 5, Fruits. Springer, New York. Hlm 754-757. Loha, A., Tigabu, M. & Fries, A. 2009. Genetic variation among and within populations of Cordia africana in seed size and germination responses to constant temperatures. Euphytica 165:189-196. Loha, A., Tigabu, M., Demel, T., Lundkvist, K. & Fries, A. 2006. Provenance variation in seed morphometric traits, germination, and seedling growth of Cordia africana Lam. New Forests 32:71–86 Marghescu, T. 2001. Restoration of degraded forest land in Thailand: The case of Khao Kho. Unasylva 207 (52):52-56. Mataruga, M., Haase, DL. & Isajev, V. 2010. Dynamics of seed imbibition and germination of Austrian pine (Pinus nigra Arnold) from extreme habitat conditions within five Balkan provenances. New Forests 40:229–242. Mawaddah, M. 2012. Pertumbuhan Kayu Putih (Melaleuca leucadendron Linn.) dan Lonkida (Nauclea orientalis Linn.) pada Kondisi Tergenang Air Asam Tambang.Skripsi (tidak dipublikasikan). Fakultas Kehutanan. Institut Pertanian Bogor, Bogor. Peraturan Dirjen Rehabilitasi Lahan dan Perhutanan Sosial Nomor : P. 13 /VPTH/2007 Tentang Petunjuk Teknis Pengujian Mutu Fisik-Fisiologi Benih. 50 Schmidt, L. 2002. Pedoman Penanganan Benih Tanaman Hutan tropis dan Sub tropis 2000. Dirjen Rehabilitasi Lahan dan Perhutanan Sosial, Departemen Kehutanan. Jakarta. Tuheteru, FD. 2013. Budidaya jenis berpotensi tanaman obat lonkida (Naucela orientalis L.) di Indonesia. Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional Silvikultur I, Fakultas Kehutanan Universitas Hasanuddin, Makassar, 29 Agustus 2013. Makassar. Wahid, N. & Bounoua, L. 2012. The relationship between seed weight, germination and biochemical reserve. New Forest 44 (3): 385-397. 51 Lampiran 4. Draft Artikel yang akan diterbitkan pada jurnal terakreditasi. STUDI FITOKIMIA DAUN LONKIDA (Nauclea orientalis L.) DARI TIGA HABITAT ALAMI DI TAMAN NASIONAL RAWA AOPA WATUMOHAI, SULAWESI TENGGARA (Study on Lonkida’s Leaf Phytochemical Contents Originated From Three Natural Habitats In Watumohai-Rawa Aopa National Park, Southeast Sulawesi) Faisal Danu Tuheteru1 and La Ode Alimuddin2 1,2 Department of Forestry, Faculty of Forestry and Environmental Science, Halu Oleo University, Kendari ABTRACT This research aimed to compare the potensial of chemical compounds into leaf of lonkida originated from swamp, savanna and lowland forest habitats. A Gas Chromatography-Mass System (GC-MS) was used in this reseach to quantify the chemical compounds into leaf. This analysis was conducted at Forest Product Test Laboratory, Research and Development of Technical Forestry and Forest Product Management Centre, Bogor. Results of the GC-MS analysis shown that, the composition and active chemical substancies into lonkida’s leaves was most various to the all of the habitats observed. In totally, there were detected 44 chemical compounds of potensial for medicinal substancies. In lowland forest has 7 primary chemical compounds where it is lower than in swamp habitat as much as 16 primary chemical compounds or to the savanna habitat as much as 9 primary chemical compounds as well. Despite of that, leaf chemical compound from all of the habitats has semilar on 4 primary chemical compounds i.e dl-Limonene (C10 H16), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (C8H8O), 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6, 10,15, 19,23-hexamethyl-(CAS) Squalene (C30H50) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (C44H90). Keyword : lonkida, phytochemical, GC-MS, habitat PENDAHULUAN Lonkida (Nauclea orientalis L. syn. N. coadunata Roxb. Ex J.E. Smith, Sarcocephalus cordatus Miq., S. undulatus Miq.) termasuk ke dalam famili Rubiaceae (LaFrankie, 2010). Jenis ini dikenal dengan nama Gempol (Sunda), klepu pasir (Jawa) dan lonkida (Sulawesi) (Sosef et al. 1998). Pohon lonkida memiliki tinggi dapat mencapai 35 (-50) m dengan diameternya mencapai 80-100 52 cm, selalu hijau (evergreen) (Dayan et al. 2007). Longkida memiliki daun yang kasar dan berukuran besar serta memiliki stipula (Boland et al. 2006). Jenis ini tumbuh alami di beberapa tipe habitat dan tersebar di wilayah Indonesia. Khusus di Sulawesi Tenggara, jenis ini merupakan vegetasi penyusun hutan hujan dataran rendah pada empat ekosistem alami di TN Rawa Aopa Watumohai (TNRAW) (Rais 2007; Alimuddin dan Tuheteru, 2013). Lonkida termasuk tanaman tropis berpotensi sebagai tanaman obat (medicinal plant) (Lim 2013). Berbagai hasil studi di luar Indonesia melaporkan bahwa seluruh bagian tanaman (daun, kulit batang, batang, dan akar) mengandung metabolit sekunder tertentu sebagai bahan aktif obat. Hampir seluruh bagian tanaman berpotensi menghasilkan obat-obatan terutama obat anti malaria (Sichaem et al. 2010), Anthelminthic activity (Raghavamma and Rao 2010), tumor dan sakit gigi (Boland et al. 2006), sakit perut (Damayanti 1999), kencing darah/nanah (Susiarti et al. 2009) dan obat perdarahan (Collins et al. 2006; Collins et al. 2007). Berdasarkan hasil penelusuran literatur yang dilakukan diketahui bahwa telah banyak dilaporkan tentang komponen kimia (metabolit sekunder) dari jenis bagian akar, batang dan daun pohon ini (Sichaem et al 2010; Zhang et al. 2001; Raghavamma and Rao, 2010). Namun demikian, Sampai saat ini, belum ada studi terkait bahan aktif (komponen kimia minyak atsiri) tanaman lonkida di Indonesia. Selain itu, perbedaan tempat tumbuh (habitat) yang diduga berpengaruh terhadap komposisi kimia bahan aktif juga perlu dikaji. Untuk itu, penelitian ini dilaksanakan untuk mengetahui perbedaan habitat terhadap komposisi kimia di daun lonkida. BAHAN DAN METODE Bahan Bahan berupa daun lonkida diperoleh dari 17 pohon induk pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai yakni habitat hutan dataran rendah (4 pohon), rawa (6 pohon) dan savanna (7 pohon). Daun lonkida dikoleksi pada tanggal 20-21 Juni 2014. Setiap pohon induk diambil 4 daun yang diambil 53 mewakili 2 arah yakni barat dan timur. Setiap daun dipotong ± 4 cm 2 kemudian dimasukkan diplastik kedap udara yang berisikan silika gel. Analisis GC-MS dilakukan di Laboratorium Pengujian Hasil Hutan Pusat Penelitian dan Pengembangan Keteknikan Kehutanan dan Pengolahan Hasil Hutan, Bogor. Alat Analisis Kimia Minyak Atsiri Komponen kimia penyusun minyak atsiri dianalisa dengan menggunakan kromatografi Gas Spektrometri Massa (GC-MS, Shimadzu QP-5000) yaitu spektrum massa masing-masing puncak senyawa hasil kromatogram GC-MS. Kromatografi Gas Massa berdasarkan pada fraksi n-hexane dari bagian atas tanaman dianalisis dengan menggunakan kromatografi yang terdapat pada detektor ionisasi pijar (Qayum et al., 2012; Falodun et al., 2009). Analisis kromatografi gas dilakukan pada sistem Shimadzu QP-5000. Sistem kromatografi massa ini didukung oleh spectrometer Joel JMS-600H GC and Joel JMS HX 110. Menggunakan kolom kapilary sedikit polar DB-5 (Optima-5), disalut dalam silika lebur berdimensi 30 mm, diameter internal 0,25 mm dan ketebalan salut 0,25 mm. Sampel uji (1. 0 µl) diinjeksikan pada AOC-20i autosampler masuk kedalam Sistem Kromatografi Gas pada suhu 250oC dalam mode split dengan rasio 40:1. Temperatur awal Kromatografi Gas diatur pada suhu 50oC selama 60 detik dan 80oC selama 3 menit kemudian dibiarkan hingga mencapai suhu akhir 300oC. Carrier gas nitrogen dilewatkan pada kecepatan 35 cm/detik, sementara tekanan kecil selama percobaan diatur menjadi 99.31 Kpa. Detektor diatur pada suhu 280oC dengan menggunakan gas hydrogen (carrier) pada kecepatan aliran 55 ml/menit, sedangkan laju aliran udara mencapai 400 ml/menit. Spektrometer massa merupakan perangkat dalam mode EI dengan 70 eV (ionosasi energi) sedangkan kondisi ekspermental kromatografi gas tidak berubah. Mengenai carrier gas helium digunakan untuk mengoperasikan suhu 250oC. Penamaan kuantitativ senyawa dilakukan dengan membandingkan/mencocokkan waktu relativ tahanannya (RT) dan massa spektra dengan data yang tersedia pada spectral search databases (NIST 1998 and GC-MS Library Shimadzu, 1996). Dalam hal analisis kuantitativ individual komponen (persen komposisi) 54 konsentrasi relativ pada area puncak pada setiap konstituen dihitung terhadap total area puncak. HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil analisis GC-MS memperlihatkan bahwa komponen kimia yang terdeteksi pada daun lonkida sebanyak 44 komponen kimia (Tabel 1). Tabel 1. Komposisi kimia minyak atsiri daun lonkida pada tiga tipe habitat di TNRAW habitat Rawa Savanna (%) (%) 11.09 No RT Komponen Kimia Rumus 1. 2.53 CH3NO2 2. 10.95 C10H16 1.65 1.58 1.43 3. 4. 5. 6. 11.77 11.93 12.07 12.86 C10H16 C6H6O C10 H16 C10 H16 0.97 0.90 32.83 0.94 20.46 - 1.13 30.90 - 7. 8. 9. 13.12 14.73 15.55 C7H8O C8H8O C10H14O 1.11 8.29 1.43 1.49 4.08 1.21 1.02 6.37 1.73 10. 16.18 C14H22 1.08 - 1.19 11. 12. 13. 14. 15. 16. 16.52 16.73 16.82 17.65 17.71 18.65 C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 C15H32O 1.30 1.25 1.00 5.89 1.93 1.44 1.62 1,94 - 1.29 1.17 1.36 - 17. 19.45 C20H40O 0.96 - - 18. 19. 20.20 20.34 C15H24 C15H24 1.32 2.66 1.19 - - 20. 20.55 C16H28O2 3.89 - 3.34 21. 20.63 C16H28O2 1.83 - 1.22 22. 23. 22.78 29.36 C15H24 C30H50 0.97 8.17 6.15 1.70 8.21 24. 25. 26. 27. 28. 30.45 36.05 3.11 10.70 15.90 C44H90 C44H90 C5H8 C8H14O C8H10O3 3.45 4.21 - 3.07 9.34 1.24 2.27 4.62 1.04 29. 16.20 Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-methylethenyl)-, (R)- (CAS) D-1,8(9)-P-MENTHADIENE 1,4,6-HEPTATRIENE, 2,3,6-TRIMETHYLPhenol (CAS) Izal dl-Limonene 1,3-CYCLOPENTADIEN,5,5-DIMETHYL-2PROPYLPhenol, 4-methyl- (CAS) p-Cresol 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN Phenol, 2-methyl-5-(1-methylethyl)- (CAS) Carvacrol 1,5-Cycloundecadiene, 8,8-dimethyl-9methylene- (CAS) Farnesene bicyclogermacrene .beta.-Chamigrene .delta.-Guaiene Tidak teridentifikasi Valencene 1-Dodecanol,3,7,11-trimethyl-(CAS) Hexahydrofarnesol 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15-tetramethyl-, [R[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol .GAMMA.-ELEMENE Tricyclo[2.2.1.0(2,6)]heptane, 1,7-dimethyl-7(4-methyl-3-pentenyl)- (CAS) Santalen Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (-)-.beta.-Elemene 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15, 19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane 1,3-Butadiene, 2-methyl- (CAS) Isoprene Cyclooctanone (CAS) Phenol, 2,6-dimethoxy(CAS) 2,6Dimethoxyphenol CLOVEN N Hutan (%) 10.54 C15H24 - 2.15 - 55 No RT 30. 16.73 Komponen Kimia Rumus Germacrene B (CAS) 1,5-Cyclodecadiene, 1,5-dimethyl-8-(1-methylethylidene 31. 17.17 Ledane 32. 17.74 1,6-ANHYDRO-BETA-DGLUCOPYRANOSE (LEVOGLUCOSAN) 33. 18.29 3a,6-Methano-3aH-inden-5-ol,octahydro-, (3a.alpha.,5.alpha.,6.alpha.,7a.beta) 34. 18.54 2,6-Octadiene, 1-(1-ethoxyethoxy)-3,7dimethyl- (CAS) 2-TERT-BUTYLAMINO 35. 18.79 Phenol, 2,6-dimethoxy-4-(2-propenyl)- (CAS) 4-Allyl-2,6-dimethoxyphenol 36. 19.45 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15-tetramethyl-, [R[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol 37. 20.04 CIS-CARYOPHYLLENE 38. 20.58 CYCLOHEPTAN,4-METHYLEN-1METHYL-2-(2-METHYL-1-PROPEN-1-YL)39. 30.47 Hexacosane (CAS) n-Hexacosane 40. 38.87 ALPHA-TOCOPHERYL-BETA-DMANNOSID 41. 16.40 Dendrolasin 42. 18.65 1-Dodecanol,3,7,11-trimethyl-(CAS) Hexahydrofarnesol 43. 19.79 Tidak teridentifikasi 44. 20.34 Tidak teridentifikasi Total Keterangan : RT = Retention Time atau waktu tahanan relativ habitat Rawa Savanna (%) (%) 2.64 - C15H24 Hutan (%) - C15H26 C6H10O5 - 1.71 9.92 8.72 C10H16O - 4.33 - C14H26O2 - 2.93 - C11H14O3 - 4.59 - C20H40O - 5.23 1.78 C15H24 C15H24 - 3.78 2.77 1.36 - C26H54 C35H60O7 - 3.06 1.28 4.22 - C15H22O C15H32O - - 1.05 1.21 100 100 1.05 2.01 100 Pada habitat hutan ditemukan 25 komponen dimana terdapat 7 komponen utama (kandungan > 2%), ke 7 komponen utama tersebut adalah Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate (10.54%), dl-Limonene (32.83%), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (8.29 %), .delta.-Guaiene (5.89 %), Tricyclo[2.2.1.0(2,6)]heptane, 1,7-dimethyl-7-(4-methyl-3-pentenyl)- (CAS) Santalen (2.66%), Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (5,72%), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (8,17%) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (7,66%). Hasil analisis GC-MS pada habitat rawa menunjukkan bahwa 25 komponen kimia terdeteksi. Enam belas diantara komponen kimia minyak atsiri tersebut merupakan komponen utama (>2%) yaitu dl-Limonene (20.46 %), 2,3DIHYDRO-BENZOFURAN (4.08%), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene, 2,6,10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (6.15%), Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (3,07 %), 1,3-Butadiene, 2-methyl- (CAS) Isoprene (9,34%), Phenol, 2,6-dimethoxy- (CAS) 2,6-Dimethoxyphenol (2,27%), CLOVEN N 56 (2,15%), Germacrene methylethylidene B (2,64%), (LEVOGLUCOSAN) (CAS) 1,5-Cyclodecadiene, 1,5-dimethyl-8-(1- 6-ANHYDRO-BETA-D-GLUCOPYRANOSE (9,92%), 3a,6-Methano-3aH-inden-5-ol,octahydro-, (3a.alpha.,5.alpha.,6.alpha.,7a.beta) (4,33%), 2,6-Octadiene, 1-(1-ethoxyethoxy)3,7-dimethyl- (CAS) 2-TERT-BUTYLAMINO (2,93%), Phenol, 2,6-dimethoxy4-(2-propenyl)- (CAS) 4-Allyl-2,6-dimethoxyphenol (4,59%), 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15-tetramethyl-, [R-[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol (5,23%), CIS- CARYOPHYLLENE (3,78%), CYCLOHEPTAN,4-METHYLEN-1-METHYL2-(2-METHYL-1-PROPEN-1-YL)- (2,77%) dan Hexacosane (CAS) n- Hexacosane (3,06%). Sedangkan pada habitat savanna ditemukan 8 komponen utama yakni Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate (11,09 %), dl-Limonene (30.90 %), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (6,37 %), Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (4,56 %), 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6, 10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (8,21 %), Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (4,62 %), 1,6-ANHYDRO-BETAD-GLUCOPYRANOSE (LEVOGLUCOSAN) (8,72 %) dan Hexacosane (CAS) n-Hexacosane (4,22 %) dan 1 kompenen tidak teridentifikasi (2,01 %). Dintinjau dari aspek sebaran komponen kimia, tampak bahwa komponen kimia tidak tersebar merata pada ketiga habitat di TN Rawa Aopa Watumohai. Meskipun demikian terdapat beberapa komponen kimia yang ditemukan pada ketiga habitat dengan kandungan yang berbeda. Komponen kimia tersebut adalah Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-methylethenyl)-, (R)- (CAS) D-1,8(9)-P- MENTHADIENE, dl-Limonene, Phenol, 4-methyl- (CAS) p-Cresol, 2,3DIHYDRO-BENZOFURAN, Carvacrol, Farnesene, Phenol, 2-methyl-5-(1-methylethyl)- (CAS) 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23- hexamethyl- (CAS) Squalene dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane. Dari delapan komponen kimia tersebut terdapat empat komponen utama yakni dlLimonene (C10 H16), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (C8H8O), 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6,10,15, 19,23-hexamethyl-(CAS) Squalene (C30H50) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (C44H90). 57 Berdasarkan uraian di atas maka dapat dinyatakan bahwa hasil penelitian ini cenderung berbeda dengan studi fitokimia daun lonkida yang pernah dilaporkan sebelumnya. Banyak alkaloid yang diisolasi dan di identifikasi dari daun lonkida. Dua indole alkaloid glycosides, 10-hydroxystrictosamide and 6’-O– acetylstrictosamide (Erdelmeier et al. 1991) dan 9 tipe angustine alkaloid seperti 10-hydroxyangustine dan dua duastereoisomeric 3,14-dihydroangustolines (Erdelmeier et al. 1992). Beberapa alkaloid tersebut berperan sebagai antiproliferative. Senyawa aktif yang dominan ditemukan pada daun lonkida dari tiga habitat adalah Limonene. Senyawa ini pertama kali diisiolasi dan diindetifikasi dari daun jeruk. Di Indonesia, senyawa ini ditemukan pada daun daun dewa (Gynura procumbens Merr.), kirinyu (Tithonia diversifolia), Cinnamomum kinabaluensis, C. multiflorum, C. Subavenium, pala (Myristica fragrans), Eugenia lineata, siri hutan (Piper aduncum L.). selain pada daun, senyawa ini juga ditemukan pada kulit buah segar dari beberapa jenis jeruk (Agusta, 2000). Perbedaan habitat berkontribusi terhadap kandungan senyawa aktif pada daun lonkida. Beberapa studi melaporkan hal yang sama pada beberapa jenis pohon hutan. Perbedaan komposisi monoterpen pada 12 provenans loblolly pine (Kozlowski and Palardy, 1997a). Variasi kandungan minyak atsiri Ki Lemo (Litsea cubeba Lour. Persoon) di beberapa tipe habitat di Gn. Papandayan Jawa Barat (Suwandhi, 2014). Menurut Kozlowski and Palardy (1997a) bahwa keberadaan senyawa aktif ditanaman dikontrol oleh faktor genetik dan lingkungan. Beberapa faktor lingkungan yang diduga berperan dalam keberadaan senyawa aktif tanaman diantaranya sifat kimia tanah (N, P,S, Mg), fisik tanah (pori tanah dan ketersedia air). Menutut Suwandi (2014) bahwa keberadaan S dan N yang tinggi dapat meningkatkan kandungan minyak atsiri Ki Lemo dan sebaliknya Mg dan pori tanah yang besar dapat menurunkan kandungan minyak atsiri. Pada kasus penelitia ini, peneliti berpendapat bahwa faktor kuat habitat rawa memiliki senyawa aktif lebih tinggi dari habitat lainnya karena kondisi genangan air. Diduga, pada kondisi cekaman genangan lonkida akan melakukan 58 mekanisme pertahanan dengan memproduksi metabolit sekunder tertentu (Kozlowski and Palardy, 1997b). Profil kromatogram dari masing-masing komponen kimia disajikan pada Gambar 1, 2, dan 3. Gambar 1. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat hutan Gambar 2. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat rawa Gambar 3. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat savanna 59 KESIMPULAN 1. Komposisi dan kandungan kimia bahan aktif pada daun lonkida yang diperoleh dari tiga tipe habitat sangat bervariasi. 2. Habitat rawa memiliki komponen kimia utama lebih tinggi (16 komponen) dibanding habitat hutan 7 senyawa kimia utama dan savanna terdapat 9 komponen utama. 3. Senyawa aktif dominan yang ditemukan pada daun lonkida pada ketiga tipe habitat di TNRAW adalah dl-Limonene (C10 H16), 2,3-DIHYDROBENZOFURAN (C8H8O), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15, 19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (C30H50) dan Tetratetracontane (CAS) nTetratetracontane (C44H90). UCAPAN TERIMA KASIH Terima kasih penulis ucapkan kepada Dirjen DIKTI atas dukungan dana yang memungkinkan penelitian dapat terlaksana. Tulisan ini adalah sebagian dari hasil penelitian yang didanai oleh Dirjen DIKTI melalui Hibah Bersaing BOPTN Universitas Halu Oleo Tahun 2014. DAFTAR PUSTAKA Alimuddin, LD. & Tuheteru, FD. 2013. Analisis kerapatan dan persebaran Lonkida (Nuclea orientalis Merr.) pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai - Sulawesi Tenggara. Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional Silvikultur I, Fakultas Kehutanan Universitas Hasanuddin, Makassar, 29 Agustus 2013. Makassar. Boland, DJ., Brooker, MIH., Chippendale, GM., Hall, N., Hyland, BPM., Johnston, RB., Kleinig, DA., McDonals, MW. dan Turner, JD. 2006. Forest Trees of Australia. Australia: CSIRO. Collins S, X Martins, A Mitchell, A Teshome, JT Arnason. 2006. Quantitative ethnobotany of two east Timorese cultures. Economic Botany, 60(4):347361. 60 Collins S, X Martins, A Mitchell, A Teshome, JT Arnason. 2007. Fataluku medicinal ethnobotany and the East Timorese military resistance. Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine 3(5):1-10. Damayanti EK. 1999. Kajian Tumbuhan Obat berdasarkan kelompok Penyakit penting pada berbagai Etnis di Indonesia [Skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Dayan, MdP., Rosalinda, SR. & Bandian, DB. 2007. Indigenous Forest Tree Species in Laguna Province. DENR Recommends Vol 15b. Falodun, A., R. Siraj and M.I. Choudhary. 2009. GC-MS Analysis of Insecticidal Leaf Essential Oil of Pyrenacantha Staudtii Hutch and Dalz (Icacinaceae). Tropical Journal ofPharmaceutical Research, 8:139-143. LaFrankie JV. 2010. Trees of Tropical Asia. BlackTree Publication, Inc. Philippines. Lim, TK. 2013. Edible Medicinal and Non-Medicinal Plants:Volume 5, Fruits. Springer, New York. Hlm 754-757. Qayum, M., M. Nisar, M.R. Shah, Zia-ul-Haq, W.A. Kaleem and I.K. Marwat. 2012. Biological screening of oils fromImpatiens bicolor Royle. Pakistan Journal of Botany, 44:355-359. Raghavamma STV, NR Rao. 2010. In vitro Evaluation of anthelminthic activity of Nauclea orientalis leaves. Indian J Pharm Sci. 72(4): 520–521 Rais S, Y Ruchiat, A Sartono, T Hideta. 2007. 50 Taman Nasional di Indonesia. Dirjen PHKA, Dephut., Lestari Hutan Indonesia dan JICA. Jakarta. Sichaem J, Surapinit S, Siripong P, Khumkratok S, Jong-Aramruang J, Tip-Pyang S. 2010. Two New Cytotoxic Isomeric Indole Alkaloids from The Roots of Nauclea Orientalis. Fitoterapia 81:830-833. Sosef MSM, LT Hong, S Prawirohatmodjo. 1998. Plant Resources of South-East Asia No. 5(3) : Timber trees : Lesser-known timbers. Prosea, Indonesia Bogor. Susiarti S, Y Purwanto, FI Windadri. 2009. Pengetahuan Masyarakat Pekurehua di Sekitar Taman Nasional Lore Lindu, Sulawesi Tengah Tentang Tumbuhan Obat dan Pemanfaatannya. Media Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Vol XIX (4) : 185-192. 61 Lampiran 1. Surat Pemberitahuan Lolos Seleksi Abstrak Yogyakarta, 27 Juni 2014 Nomor : 81/PanSem. Silv2/VI/2014 Perihal : Pemberitahuan hasil seleksi abstrak Kepada Yth. Bapak/Ibu/Saudara: Faisal Danu Tuheteru dan La Ode Alimuddin Dengan ini kami beritahukan bahwa abstrak Bapak/Ibu/Saudara yang berjudul: Pengaruh Perbedaan Habitat Terhadap Ukuran Buah dan Morfo-Fisiologi Benih Lonkida (Nauclea orientalis L.) (No. Makalah: P42) dinyatakan lolos/tidak lolos untuk disajikan dalam Seminar Nasional Silvikultur ke-2 dan Konggres Masyarakat Silvikultur Indonesia 2014. Untuk itu, kami mengundang Bapak/Ibu/Saudara pada tanggal 28-29 Agustus 2014 di University Club Hotel UGM, Yogyakarta. Kehadiran Bapak/Ibu/Saudara merupakan syarat untuk diterbitkannya sertifikat sebagai penyaji. Selanjutnya, dimohon berkenan untuk membuat full paper sebagaimana panduan di dalam website. Kami mengharapkan dapat menerimanya via email: [email protected] dan [email protected] bersubyek: nomor dan judul makalah, maksimal Jum'at, 25 Juli 2014, pukul 12.00 WIB. Full paper yang Bapak/Ibu/Saudara kirimkan akan direview oleh tim reviewer. Mohon kerjasamannya untuk segera memperbaiki dan mengirimkannya kembali kepada sekretariat panitia maksimal 1 minggu setelah full paper direview. Jika tidak, maka makalah tersebut tidak dapat diikutsertakan di dalam prosiding. Pelunasan biaya pendaftaran maksimal dapat kami terima pada hari Jum'at, 11 Juli 2014. Formulir pendaftaran, bukti pembayaran (dan scan Kartu Tanda Mahasiswa bagi mahasiswa) agar juga dikirimkan ke sekretariat seminar. Adapun informasi mengenai nomor rekening, panduan poster dan full paper dapat diakses pada website seminar nasional dengan alamat: http://seminar.silvikultur.fkt.ugm.ac.id/. Demikian, terima kasih atas perhatian dan kerja samanya. Kami menunggu kehadiran Bapak/Ibu/Saudara di Yogyakarta! Hormat kami, Daryono Prehaten Ketua Panitia 62 Lampiran 2. Sertifikat Sebagai Penyaji 63 Lampiran 3. Full paper yang disampaikan dan dimuat dalam prosiding pada seminar Silvikultur Ke-2 dan Kongres Masyarakat Silvikultur Indonesia di UCH, UGM PENGARUH PERBEDAAN HABITAT TERHADAP UKURAN BUAH DAN MORFO-FISIOLOGI BENIH LONKIDA (Nauclea orientalis L.) Faisal Danu Tuheteru* dan La Ode Alimuddin Jurusan Kehutanan, Fakultas Kehutanan dan Ilmu Lingkungan, Universitas Halu Oleo Kendari *e-mail : [email protected] ABSTRAK Lonkida (Nauclea orientalis L.) merupakan jenis multiguna (obat, kayu, agroforestri, rehabilitasi lahan dan fitoremediasi) yang tersebar alami di Indonesia. Jenis ini ditemukan tumbuh alami di Sulawesi Tenggara pada berbagai habitat seperti rawa dan lahan kering. Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh perbedaan habitat rawa dan lahan darat kering terhadap ukuran buah dan morfofisiologi benih lonkida. Koleksi buah dilakukan pada 33 pohon induk, dengan rincian 14 pohon induk dari habitat rawa dan 19 pohon induk dari lahan darat kering di Kota Kendari, Sulawesi Tenggara pada bulan Mei 2013 (musim hujan). Hasil studi menunjukkan bahwa pohon induk dari habitat rawa memiliki jumlah biji per buah (9234±2,033 biji), panjang biji (1361±1,099 mm) dan lebar biji (820±1,047 mm) serta MGT lebih tinggi (5,5) dibanding habitat lahan kering. Habitat tidak berpengaruh nyata terhadap ukuran buah, berat benih, persen kecambah dan MDG. Kata kunci : biji dan buah lonkida, habitat rawa, Kendari, lonkida PENDAHULUAN Lonkida (Nauclea orientalis L.) merupakan jenis multiguna diantaranya sebagai tanaman obat (Lim, 2013), produksi kayu (Dayan dkk., 2007), serta jenis untuk agroforestri (Amihan-Vega & Mendoza, 2005), rehabilitasi lahan (Marghescu, 2001) dan fitoremediasi (Mawaddah, 2012). Jenis ini tumbuh baik pada berbagai kondisi ekologi dan tersebar secara alami di Indonesia, termasuk di Provinsi Sulawesi Tenggara (Tuheteru, 2013). Di Sulawesi Tenggara, lonkida ditemukan pada berbagai habitat seperti rawa dan lahan kering (Alimuddin & Tuheteru, 2013). 64 Informasi silvikultur lonkida di Indonesia, saat ini belum tersedia dan masih terbatas di wilayah Jawa Barat (Tuheteru 2013). Danu et al. (2011), melaporkan buah lonkida yang berasal dari Banten dan Majalengka Provinsi Jawa Barat memiliki ukuran 4-5 cm dengan ukuran benih 1-1,5 mm. Meskipun demikian, belum ada informasi karakteristik buah dan biji, serta mutu benih lonkida pada kedua habitat di Sulawesi Tenggara. Studi perbedaan habitat terhadap karakteristik buah dan benih tanaman hutan di wilayah tropis masih sangat terbatas (Mataruga et al., 2010). Perbedaan habitat diduga berpengaruh terhadap produksi buah dan biji lonkida serta mutu fisiologi benih. Variasi morfologi buah dan biji menjadi fenomena umum pada jenis-jenis pohon. Variasi tersebut terjadi karena pengaruh dua faktor penting yakni faktor lingkungan dan genetik (Schmidt, 2002). Perbedaan karakter buah dan biji tersebut juga akan berpengaruh terhadap perkecambahan. Ukuran dan berat biji merupakan faktor utama yang mempengaruhi komponen penting perkecambahan (Loha et al., 2009). Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh perbedaan habitat, rawa dan lahan darat kering, terhadap ukuran buah dan morfofisiologi benih lonkida BAHAN DAN METODE Waktu dan tempat Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei s/d Juni 2013 (musim hujan). Buah lonkida dikoleksi dari pohon-pohon induk pada dua habitat yaitu rawa dan lahan darat kering di Kota Kendari, Sulawesi Tenggara. Pengamatan bentuk dan pengukuran buah dan biji dilakukan di Laboratorium Kehutanan Universitas Halu Oleo, Kendari dan Laboratorium Anatomi Kayu, Litbang Kementerian Kehutanan, Bogor. Uji mutu fisiologis benih dilakukan di rumah kaca bagian Ekologi Hutan Departemen Silvikultur Fakultas Kehutanan IPB. 65 Tahapan penelitian Buah lonkida dikoleksi dari pohon-pohon induk hasil eksplorasi di Kota Kendari. Pengumpulan buah lonkida dilakukan dengan cara dipungut di lantai hutan. Buah dikoleksi dari 14 pohon induk dari habitat rawa dan 19 pohon induk dari lahan darat kering. Buah yang sudah dikoleksi selanjutnya diremas dan diekstraksi menggunakan saringan teh pada air mengalir. Biji yang telah dikeringanginkan disimpan dalam kantong plastik. Benih yang digunakan sebagai contoh/sampel diperoleh secara acak dari kumpulan benih masing-masing habitat. Media yang digunakan untuk perkecambahan adalah pasir : arang sekam (1:1 v/v). Media disterilkan dengan cara disangrai selama ± 2 jam, kemudian diletakkan di dalam kotak berbahan mika (20 cm x 20 cm x 5 cm) yang sudah dilubangi. Tidak ada perlakuan awal benih sebelum pengujian mutu fisiologis benih. Rancangan Penelitian Pengamatan ukuran buah dan biji serta mutu fisiologis menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan perlakuan perbedaan habitat. Terdapat 2 (dua) habitat yaitu rawa dan lahan darat kering. Khusus pengujian mutu fisiologis setiap perlakuan diulang 3 kali dengan setiap satuan percobaan terdiri dari 4 bak kecambah, masing-masing bak kecambah terdiri atas 100 biji, sehingga jumlah keseluruhannya adalah 1200 biji. Pengumpulan Data Pengamatan dilakukan terhadap beberapa peubah diantaranya : 6. Ukuran buah dan biji. Sebanyak 50 buah dari masing-masing habitat diambil secara acak dan diukur dengan menggunakan kaliper digital pada kedua sisi buah, sedangkan ukuran biji dilakukan dengan mengamati 60 biji dari masingmasing habitat di bawah mikrosokop stereo. 7. Berat benih 1000 butir. Mengambil dan menghitung 100 benih dengan 8 ulangan secara acak, kemudian menghitung koefisien keragaman dari berat 100 butir benih dari 8 ulangan tersebut. Jika koefisien keragaman (CV) lebih kecil 66 dari 4,0 maka analisis diterima (Peraturan Dirjen RLPS No. P.13/VPTH/2007). 8. Daya berkecambah (G), adalah banyaknya benih yang mampu berkecambah hingga akhir pengamatan perkecambahan yang telah ditentukan (Hartman et al., 2002). 9. Rata-rata waktu untuk berkecambah (MGT), diukur berdasarkan rata-rata hari yang diperlukan untuk berkecambah, dengan persamaan : MGT = {( dimana t adalah hari yang diperlukan untuk berkecambah (0) n = jumlah biji berkecambah pada akhir pengamatan dan i = waktu pengamatan (Hartman et al., 2002). 10. Rata-rata benih berkecambah per hari (MDG) diukur berdasarkan persamaan : MDG = N/t, dimana N adalah total jumlah biji yang berkecambah pada akhir pengamatan dan t adalah jumlah hari pengamatan (Hartman et al., 2002). Analisa data Data pengujian dianalisis menggunakan analisis ragam (ANOVA) yang jika nyata dilanjutkan dengan perbandingan rataan menggunakan uji Tukey pada taraf signifikansi 95%. HASIL DAN PEMBAHASAN Data ukuran buah dan biji lonkida disajikan pada Tabel 1. Tabel 1 menunjukkan bahwa perlakuan habitat tidak mempengaruhi lebar dan panjang buah. Pohon induk dari habitat rawa memiliki jumlah biji per buah (9234 ± 2,033 biji), panjang biji (1361 ± 1,099 mm) dan lebar biji (820 ± 1,047 mm) serta MGT (5,5) lebih tinggi dibanding habitat lahan kering. Rata-rata lebar dan panjang buah berkisar 5,89-6,11 cm dan 5,75-5,80 cm. Adapun rata-rata jumlah biji per buah berkisar 4329-9234 biji/buah dan koefisien keragaman adalah 110%. 67 Tabel 1. Ukuran buah dan benih lonkida berdasarkan perbedaan habitat Perlakuan Lebar buah (cm) Rawa 5,89 a* 5,80 a 9234 a 1361,5 a 820,6 a 1,66 a D. kering 6,11 a 4329 b 1299,9 b 750,5 b 1,73 a Pr>F 0,3281 0,7367 0,0003 0,0364 0,0200 0,1480 1 14 110 3 5 4 CV Panjang Jumlah buah benih/buah (cm) 5,75 a Panjang biji (µm) Lebar biji (µm) P/L rasio Keterangan : *Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata menurut uji Tukey pada tingkat signifikansi 95%. Selain ukuran buah, habitat juga tidak berpengaruh terhadap berat benih, persen kecambah dan MDG (Gambar 1). Rata-rata berat benih 0,184-0,199 g dan persentase kecambah berkisar 94-95% (Gambar 1). Perkecambahan terjadi mulai lima hari setelah penaburan dan tingkat perkecambahan diatas 50% terjadi pada hari ke-7. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa terdapat variasi jumlah biji per buah, panjang biji dan lebar biji pada habitat yang berbeda. Secara umum, jumlah biji per buah, panjang biji dan lebar biji lebih besar dijumpai pada pohon induk dari habitat rawa. Hal yang sama juga ditemukan pada peubah MGT. Koefisien keragaman dapat dijadikan sebagai indikator pengaruh lingkungan terhadap peubah yang diamati. Keberadaan koefisien keragaman (CV=110%) pada peubah jumlah biji per buah mengindikasikan bahwa pengaruh lingkungan sangat kuat, sedangkan nilai KK rendah (CV=1-14%) pada peubah lainnya dikontrol oleh pengaruh genetik (Kimmins, 1987). 68 Gambar 1. Uji fisik dan fisiologis benih lonkida berdasarkan perbedaan habitat Berdasarkan penjelasan di atas, dapat diketahui bahwa perbedaan jumlah biji per buah dan ukuran biji pada penelitian ini mungkin sangat dipengaruhi oleh faktor lingkungan dan genetik. Loha et al., 2006), menjelaskan perbedaan ukuran biji tidak hanya diwariskan tetapi juga sangat dipengaruhi oleh variasi lingkungan. Wahid & Bounoua (2012), menjelaskan bahwa pengaruh lingkungan selama perkembangan biji dan kombinasinya dengan variabilitas genetik juga dapat berpengaruh terhadap ukuran biji. Faktor lingkungan yang diduga berpengaruh kuat adalah ketersediaan air selama pembentukan buah dan biji (Kozlowski & Pallardy, 1997). Kozlowski & Pallardy (1997) lebih lanjut menjelaskan bahwa perkembangan buah sangat tergantung pada mobilisasi karbohidrat hasil fotosintesis dan ketersediaan air. Fakta bahwa pada pohon-pohon induk di habitat rawa menghasilkan biji per buah dalam jumlah banyak dan ukuran biji yang lebih besar tidak sesuai dengan teori yang ada. Setiap jenis memiliki strategi tertentu antara memproduksi benih kecil dalam jumlah banyak atau sedikit benih namun dengan ukuran besar. Strategi jenis tersebut sangat terkait dengan alokasi 69 fotosintat untuk tujuan reproduksi dan seleksi terhadap cekaman (Leishmen et al., 2000). Pada penelitian ini, ukuran buah berkisar 5,89-6,11 x 5,80-5,75 cm dan ukuran biji 1,299-1,361 x 0,750-0,820 mm. Ukuran buah dan biji hampir sama dengan ukuran buah dan biji lonkida yang pernah dilaporkan di Australia (Boland et al., 2006), serta Banten dan Majalengka (Danu et al., 2011). Kesamaan ukuran buah dan biji lonkida pada sebaran alaminya menunjukkan bahwa kedua peubah tersebut lebih dipengaruhi oleh genetik tanaman lonkida. KESIMPULAN Pohon - pohon induk dari habitat rawa (tergenang air) memproduksi buah dengan jumlah biji per buah lebih banyak dengan ukuran biji lebih besar dibanding habitat lahan darat kering (tidak tergenang). Meskipun demikian, perbedaan habitat tidak mempengaruhi ukuran buah, mutu fisik dan fisiologis benih lonkida. Selain habitat, ukuran buah dan biji juga diduga dipengaruhi oleh faktor genetik. UCAPAN TERIMA KASIH Terima kasih penulis ucapkan kepada Dirjen DIKTI atas dukungan dana yang memungkinkan penelitian dapat terlaksana. Tulisan ini adalah sebagian dari hasil penelitian yang didanai oleh Dirjen DIKTI melalui Hibah Bersaing BOPTN Universitas Halu Oleo Tahun 2014. DAFTAR PUSTAKA Alimuddin, LD. & Tuheteru, FD. 2013. Analisis kerapatan dan persebaran Lonkida (Nuclea orientalis Merr.) pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai - Sulawesi Tenggara. Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional Silvikultur I, Fakultas Kehutanan Universitas Hasanuddin, Makassar, 29 Agustus 2013. Makassar. Amihan-Vega, B. & Mendoza, JD. 2005. Benefits from Tree Growing in the Degraded Uplands: Empirical Realities from Tabango, Leyte, The Philippines. Dalam : Harrison, S., Herbohn, J., Suh, J., Mangaoang E., and 70 Vanclay, J., (editors). Proceedings from the End-of-project Workshop Held in Ormoc city, The Philipines; 19-21 August 2004; Filipina. Boland, DJ., Brooker, MIH., Chippendale, GM., Hall, N., Hyland, BPM., Johnston, RB., Kleinig, DA., McDonals, MW. dan Turner, JD. 2006. Forest Trees of Australia. Australia: CSIRO. Danu, Nurochim, N. & Haerujaman, AH. 2011. Mengenal pohon Gempol (Nauclea orientalis L.) di Jawa Barat dan Banten. Info benih 15 (2) : 5559. Dayan, MdP., Rosalinda, SR. & Bandian, DB. 2007. Indigenous Forest Tree Species in Laguna Province. DENR Recommends Vol 15b. Hartman, HT., Kester, DE., Davies, FT. & Geneve, R. 2002. Plant propagation: Principle and Practices. 7th Ed. Prentice-Hall International, Inc. New Yersey. Kimmins, JP. 1987. Forest ecology: a foundation for sustainable management, 2nd. MacMillian Publishing Company, United States of America. Kozlowski, TT. & Pallardy, SG. 1997. Growth control in woody plant. Academic Press. Leishman, M.R., Wright, I.J., Moles, A.T., dan Westoby, M., 2000. The Evolutionary Ecology of Seed Size. dalam Fenner, M. (ed), The Ecology of Regeneration in Plant Communities, 2nd edition. CAB International, New York p 31-58. Lim, TK. 2013. Edible Medicinal and Non-Medicinal Plants:Volume 5, Fruits. Springer, New York. Hlm 754-757. Loha, A., Tigabu, M. & Fries, A. 2009. Genetic variation among and within populations of Cordia africana in seed size and germination responses to constant temperatures. Euphytica 165:189-196. Loha, A., Tigabu, M., Demel, T., Lundkvist, K. & Fries, A. 2006. Provenance variation in seed morphometric traits, germination, and seedling growth of Cordia africana Lam. New Forests 32:71–86 Marghescu, T. 2001. Restoration of degraded forest land in Thailand: The case of Khao Kho. Unasylva 207 (52):52-56. Mataruga, M., Haase, DL. & Isajev, V. 2010. Dynamics of seed imbibition and germination of Austrian pine (Pinus nigra Arnold) from extreme habitat conditions within five Balkan provenances. New Forests 40:229–242. Mawaddah, M. 2012. Pertumbuhan Kayu Putih (Melaleuca leucadendron Linn.) dan Lonkida (Nauclea orientalis Linn.) pada Kondisi Tergenang Air Asam Tambang.Skripsi (tidak dipublikasikan). Fakultas Kehutanan. Institut Pertanian Bogor, Bogor. 71 Peraturan Dirjen Rehabilitasi Lahan dan Perhutanan Sosial Nomor : P. 13 /VPTH/2007 Tentang Petunjuk Teknis Pengujian Mutu Fisik-Fisiologi Benih. Schmidt, L. 2002. Pedoman Penanganan Benih Tanaman Hutan tropis dan Sub tropis 2000. Dirjen Rehabilitasi Lahan dan Perhutanan Sosial, Departemen Kehutanan. Jakarta. Tuheteru, FD. 2013. Budidaya jenis berpotensi tanaman obat lonkida (Naucela orientalis L.) di Indonesia. Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional Silvikultur I, Fakultas Kehutanan Universitas Hasanuddin, Makassar, 29 Agustus 2013. Makassar. Wahid, N. & Bounoua, L. 2012. The relationship between seed weight, germination and biochemical reserve. New Forest 44 (3): 385-397. 72 Lampiran 4. Draft Artikel yang akan diterbitkan pada jurnal terakreditasi. STUDI FITOKIMIA DAUN LONKIDA (Nauclea orientalis L.) DARI TIGA HABITAT ALAMI DI TAMAN NASIONAL RAWA AOPA WATUMOHAI, SULAWESI TENGGARA (Study on Lonkida’s Leaf Phytochemical Contents Originated From Three Natural Habitats In Watumohai-Rawa Aopa National Park, Southeast Sulawesi) Faisal Danu Tuheteru1 and La Ode Alimuddin2 1,2 Department of Forestry, Faculty of Forestry and Environmental Science, Halu Oleo University, Kendari ABTRACT This research aimed to compare the potensial of chemical compounds into leaf of lonkida originated from swamp, savanna and lowland forest habitats. A Gas Chromatography-Mass System (GC-MS) was used in this reseach to quantify the chemical compounds into leaf. This analysis was conducted at Forest Product Test Laboratory, Research and Development of Technical Forestry and Forest Product Management Centre, Bogor. Results of the GC-MS analysis shown that, the composition and active chemical substancies into lonkida’s leaves was most various to the all of the habitats observed. In totally, there were detected 44 chemical compounds of potensial for medicinal substancies. In lowland forest has 7 primary chemical compounds where it is lower than in swamp habitat as much as 16 primary chemical compounds or to the savanna habitat as much as 9 primary chemical compounds as well. Despite of that, leaf chemical compound from all of the habitats has semilar on 4 primary chemical compounds i.e dl-Limonene (C10 H16), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (C8H8O), 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6, 10,15, 19,23-hexamethyl-(CAS) Squalene (C30H50) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (C44H90). Keyword : lonkida, phytochemical, GC-MS, habitat PENDAHULUAN Lonkida (Nauclea orientalis L. syn. N. coadunata Roxb. Ex J.E. Smith, Sarcocephalus cordatus Miq., S. undulatus Miq.) termasuk ke dalam famili Rubiaceae (LaFrankie, 2010). Jenis ini dikenal dengan nama Gempol (Sunda), klepu pasir (Jawa) dan lonkida (Sulawesi) (Sosef et al. 1998). Pohon lonkida memiliki tinggi dapat mencapai 35 (-50) m dengan diameternya mencapai 80-100 73 cm, selalu hijau (evergreen) (Dayan et al. 2007). Longkida memiliki daun yang kasar dan berukuran besar serta memiliki stipula (Boland et al. 2006). Jenis ini tumbuh alami di beberapa tipe habitat dan tersebar di wilayah Indonesia. Khusus di Sulawesi Tenggara, jenis ini merupakan vegetasi penyusun hutan hujan dataran rendah pada empat ekosistem alami di TN Rawa Aopa Watumohai (TNRAW) (Rais 2007; Alimuddin dan Tuheteru, 2013). Lonkida termasuk tanaman tropis berpotensi sebagai tanaman obat (medicinal plant) (Lim 2013). Berbagai hasil studi di luar Indonesia melaporkan bahwa seluruh bagian tanaman (daun, kulit batang, batang, dan akar) mengandung metabolit sekunder tertentu sebagai bahan aktif obat. Hampir seluruh bagian tanaman berpotensi menghasilkan obat-obatan terutama obat anti malaria (Sichaem et al. 2010), Anthelminthic activity (Raghavamma and Rao 2010), tumor dan sakit gigi (Boland et al. 2006), sakit perut (Damayanti 1999), kencing darah/nanah (Susiarti et al. 2009) dan obat perdarahan (Collins et al. 2006; Collins et al. 2007). Berdasarkan hasil penelusuran literatur yang dilakukan diketahui bahwa telah banyak dilaporkan tentang komponen kimia (metabolit sekunder) dari jenis bagian akar, batang dan daun pohon ini (Sichaem et al 2010; Zhang et al. 2001; Raghavamma and Rao, 2010). Namun demikian, Sampai saat ini, belum ada studi terkait bahan aktif (komponen kimia minyak atsiri) tanaman lonkida di Indonesia. Selain itu, perbedaan tempat tumbuh (habitat) yang diduga berpengaruh terhadap komposisi kimia bahan aktif juga perlu dikaji. Untuk itu, penelitian ini dilaksanakan untuk mengetahui perbedaan habitat terhadap komposisi kimia di daun lonkida. BAHAN DAN METODE Bahan Bahan berupa daun lonkida diperoleh dari 17 pohon induk pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai yakni habitat hutan dataran rendah (4 pohon), rawa (6 pohon) dan savanna (7 pohon). Daun lonkida dikoleksi pada tanggal 20-21 Juni 2014. Setiap pohon induk diambil 4 daun yang diambil 74 mewakili 2 arah yakni barat dan timur. Setiap daun dipotong ± 4 cm 2 kemudian dimasukkan diplastik kedap udara yang berisikan silika gel. Analisis GC-MS dilakukan di Laboratorium Pengujian Hasil Hutan Pusat Penelitian dan Pengembangan Keteknikan Kehutanan dan Pengolahan Hasil Hutan, Bogor. Alat Analisis Kimia Minyak Atsiri Komponen kimia penyusun minyak atsiri dianalisa dengan menggunakan kromatografi Gas Spektrometri Massa (GC-MS, Shimadzu QP-5000) yaitu spektrum massa masing-masing puncak senyawa hasil kromatogram GC-MS. Kromatografi Gas Massa berdasarkan pada fraksi n-hexane dari bagian atas tanaman dianalisis dengan menggunakan kromatografi yang terdapat pada detektor ionisasi pijar (Qayum et al., 2012; Falodun et al., 2009). Analisis kromatografi gas dilakukan pada sistem Shimadzu QP-5000. Sistem kromatografi massa ini didukung oleh spectrometer Joel JMS-600H GC and Joel JMS HX 110. Menggunakan kolom kapilary sedikit polar DB-5 (Optima-5), disalut dalam silika lebur berdimensi 30 mm, diameter internal 0,25 mm dan ketebalan salut 0,25 mm. Sampel uji (1. 0 µl) diinjeksikan pada AOC-20i autosampler masuk kedalam Sistem Kromatografi Gas pada suhu 250oC dalam mode split dengan rasio 40:1. Temperatur awal Kromatografi Gas diatur pada suhu 50oC selama 60 detik dan 80oC selama 3 menit kemudian dibiarkan hingga mencapai suhu akhir 300oC. Carrier gas nitrogen dilewatkan pada kecepatan 35 cm/detik, sementara tekanan kecil selama percobaan diatur menjadi 99.31 Kpa. Detektor diatur pada suhu 280oC dengan menggunakan gas hydrogen (carrier) pada kecepatan aliran 55 ml/menit, sedangkan laju aliran udara mencapai 400 ml/menit. Spektrometer massa merupakan perangkat dalam mode EI dengan 70 eV (ionosasi energi) sedangkan kondisi ekspermental kromatografi gas tidak berubah. Mengenai carrier gas helium digunakan untuk mengoperasikan suhu 250oC. Penamaan kuantitativ senyawa dilakukan dengan membandingkan/mencocokkan waktu relativ tahanannya (RT) dan massa spektra dengan data yang tersedia pada spectral search databases (NIST 1998 and GC-MS Library Shimadzu, 1996). Dalam hal analisis kuantitativ individual komponen (persen komposisi) 75 konsentrasi relativ pada area puncak pada setiap konstituen dihitung terhadap total area puncak. HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil analisis GC-MS memperlihatkan bahwa komponen kimia yang terdeteksi pada daun lonkida sebanyak 44 komponen kimia (Tabel 1). Tabel 1. Komposisi kimia minyak atsiri daun lonkida pada tiga tipe habitat di TNRAW habitat Rawa Savanna (%) (%) 11.09 No RT Komponen Kimia Rumus 1. 2.53 CH3NO2 2. 10.95 C10H16 1.65 1.58 1.43 3. 4. 5. 6. 11.77 11.93 12.07 12.86 C10H16 C6H6O C10 H16 C10 H16 0.97 0.90 32.83 0.94 20.46 - 1.13 30.90 - 7. 8. 9. 13.12 14.73 15.55 C7H8O C8H8O C10H14O 1.11 8.29 1.43 1.49 4.08 1.21 1.02 6.37 1.73 10. 16.18 C14H22 1.08 - 1.19 11. 12. 13. 14. 15. 16. 16.52 16.73 16.82 17.65 17.71 18.65 C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 C15H32O 1.30 1.25 1.00 5.89 1.93 1.44 1.62 1,94 - 1.29 1.17 1.36 - 17. 19.45 C20H40O 0.96 - - 18. 19. 20.20 20.34 C15H24 C15H24 1.32 2.66 1.19 - - 20. 20.55 C16H28O2 3.89 - 3.34 21. 20.63 C16H28O2 1.83 - 1.22 22. 23. 22.78 29.36 C15H24 C30H50 0.97 8.17 6.15 1.70 8.21 24. 25. 26. 27. 28. 30.45 36.05 3.11 10.70 15.90 Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-methylethenyl)-, (R)- (CAS) D-1,8(9)-P-MENTHADIENE 1,4,6-HEPTATRIENE, 2,3,6-TRIMETHYLPhenol (CAS) Izal dl-Limonene 1,3-CYCLOPENTADIEN,5,5-DIMETHYL-2PROPYLPhenol, 4-methyl- (CAS) p-Cresol 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN Phenol, 2-methyl-5-(1-methylethyl)- (CAS) Carvacrol 1,5-Cycloundecadiene, 8,8-dimethyl-9methylene- (CAS) Farnesene bicyclogermacrene .beta.-Chamigrene .delta.-Guaiene Tidak teridentifikasi Valencene 1-Dodecanol,3,7,11-trimethyl-(CAS) Hexahydrofarnesol 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15-tetramethyl-, [R[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol .GAMMA.-ELEMENE Tricyclo[2.2.1.0(2,6)]heptane, 1,7-dimethyl-7(4-methyl-3-pentenyl)- (CAS) Santalen Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (-)-.beta.-Elemene 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15, 19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane 1,3-Butadiene, 2-methyl- (CAS) Isoprene Cyclooctanone (CAS) Phenol, 2,6-dimethoxy(CAS) 2,6- Hutan (%) 10.54 C44H90 C44H90 C5H8 C8H14O C8H10O3 3.45 4.21 - 3.07 9.34 1.24 2.27 4.62 1.04 76 No RT 29. 30. 16.20 16.73 31. 32. 17.17 17.74 33. 18.29 34. 18.54 35. 18.79 36. 19.45 37. 38. 20.04 20.58 39. 40. 30.47 38.87 41. 42. 16.40 18.65 43. 44. 19.79 20.34 Komponen Kimia Dimethoxyphenol CLOVEN N Germacrene B (CAS) 1,5-Cyclodecadiene, 1,5-dimethyl-8-(1-methylethylidene Ledane 1,6-ANHYDRO-BETA-DGLUCOPYRANOSE (LEVOGLUCOSAN) 3a,6-Methano-3aH-inden-5-ol,octahydro-, (3a.alpha.,5.alpha.,6.alpha.,7a.beta) 2,6-Octadiene, 1-(1-ethoxyethoxy)-3,7dimethyl- (CAS) 2-TERT-BUTYLAMINO Phenol, 2,6-dimethoxy-4-(2-propenyl)- (CAS) 4-Allyl-2,6-dimethoxyphenol 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15-tetramethyl-, [R[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol CIS-CARYOPHYLLENE CYCLOHEPTAN,4-METHYLEN-1METHYL-2-(2-METHYL-1-PROPEN-1-YL)Hexacosane (CAS) n-Hexacosane ALPHA-TOCOPHERYL-BETA-DMANNOSID Dendrolasin 1-Dodecanol,3,7,11-trimethyl-(CAS) Hexahydrofarnesol Tidak teridentifikasi Tidak teridentifikasi Total habitat Rawa Savanna (%) (%) Rumus Hutan (%) C15H24 C15H24 - 2.15 2.64 - C15H26 C6H10O5 - 1.71 9.92 8.72 C10H16O - 4.33 - C14H26O2 - 2.93 - C11H14O3 - 4.59 - C20H40O - 5.23 1.78 C15H24 C15H24 - 3.78 2.77 1.36 - C26H54 C35H60O7 - 3.06 1.28 4.22 - C15H22O C15H32O - - 1.05 1.21 100 100 1.05 2.01 100 Keterangan : RT = Retention Time atau waktu tahanan relativ Pada habitat hutan ditemukan 25 komponen dimana terdapat 7 komponen utama (kandungan > 2%), ke 7 komponen utama tersebut adalah Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate (10.54%), dl-Limonene (32.83%), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (8.29 %), .delta.-Guaiene (5.89 %), Tricyclo[2.2.1.0(2,6)]heptane, 1,7-dimethyl-7-(4-methyl-3-pentenyl)- (CAS) Santalen (2.66%), Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (5,72%), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (8,17%) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (7,66%). Hasil analisis GC-MS pada habitat rawa menunjukkan bahwa 25 komponen kimia terdeteksi. Enam belas diantara komponen kimia minyak atsiri tersebut merupakan komponen utama (>2%) yaitu dl-Limonene (20.46 %), 2,3DIHYDRO-BENZOFURAN (4.08%), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10, 15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (6.15%), Tetratetracontane (CAS) n- 77 Tetratetracontane (3,07 %), 1,3-Butadiene, 2-methyl- (CAS) Isoprene (9,34%), Phenol, 2,6-dimethoxy- (CAS) 2,6-Dimethoxyphenol (2,27%), CLOVEN N (2,15%), Germacrene methylethylidene B (2,64%), (LEVOGLUCOSAN) (CAS) 1,5-Cyclodecadiene, 1,5-dimethyl-8-(1- 6-ANHYDRO-BETA-D-GLUCOPYRANOSE (9,92%), 3a,6-Methano-3aH-inden-5-ol,octahydro-, (3a.alpha.,5.alpha.,6.alpha.,7a.beta) (4,33%), 2,6-Octadiene, 1-(1-ethoxyethoxy)3,7-dimethyl- (CAS) 2-TERT-BUTYLAMINO (2,93%), Phenol, 2,6-dimethoxy4-(2-propenyl)- (CAS) 4-Allyl-2,6-dimethoxyphenol (4,59%), 2-Hexadecen-1-ol, 3,7,11,15-tetramethyl-, [R-[R*,R*-(E)]]- (CAS) Phytol (5,23%), CIS- CARYOPHYLLENE (3,78%), CYCLOHEPTAN,4-METHYLEN-1-METHYL2-(2-METHYL-1-PROPEN-1-YL)- (2,77%) dan Hexacosane (CAS) n- Hexacosane (3,06%). Sedangkan pada habitat savanna ditemukan 8 komponen utama yakni Carbamic acid, monoammonium salt (CAS) Ammonium carbamate (11,09 %), dl-Limonene (30.90 %), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (6,37 %), Oxacycloheptadec-8-en-2-one (CAS) Ambrettolide (4,56 %), 2,6,10,14,18,22Tetracosahexaene,2,6, 10,15,19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (8,21 %), Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (4,62 %), 1,6-ANHYDRO-BETAD-GLUCOPYRANOSE (LEVOGLUCOSAN) (8,72 %) dan Hexacosane (CAS) n-Hexacosane (4,22 %) dan 1 kompenen tidak teridentifikasi (2,01 %). Dintinjau dari aspek sebaran komponen kimia, tampak bahwa komponen kimia tidak tersebar merata pada ketiga habitat di TN Rawa Aopa Watumohai. Meskipun demikian terdapat beberapa komponen kimia yang ditemukan pada ketiga habitat dengan kandungan yang berbeda. Komponen kimia tersebut adalah Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-methylethenyl)-, (R)- (CAS) D-1,8(9)-P- MENTHADIENE, dl-Limonene, Phenol, 4-methyl- (CAS) p-Cresol, 2,3DIHYDRO-BENZOFURAN, Carvacrol, Farnesene, Phenol, 2-methyl-5-(1-methylethyl)- (CAS) 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15,19,23- hexamethyl- (CAS) Squalene dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane. Dari delapan komponen kimia tersebut terdapat empat komponen utama yakni dlLimonene (C10 H16), 2,3-DIHYDRO-BENZOFURAN (C8H8O), 2,6,10,14,18,22- 78 Tetracosahexaene,2,6,10,15, 19,23-hexamethyl-(CAS) Squalene (C30H50) dan Tetratetracontane (CAS) n-Tetratetracontane (C44H90). Berdasarkan uraian di atas maka dapat dinyatakan bahwa hasil penelitian ini cenderung berbeda dengan studi fitokimia daun lonkida yang pernah dilaporkan sebelumnya. Banyak alkaloid yang diisolasi dan di identifikasi dari daun lonkida. Dua indole alkaloid glycosides, 10-hydroxystrictosamide and 6’-O– acetylstrictosamide (Erdelmeier et al. 1991) dan 9 tipe angustine alkaloid seperti 10-hydroxyangustine dan dua duastereoisomeric 3,14-dihydroangustolines (Erdelmeier et al. 1992). Beberapa alkaloid tersebut berperan sebagai antiproliferative. Senyawa aktif yang dominan ditemukan pada daun lonkida dari tiga habitat adalah Limonene. Senyawa ini pertama kali diisiolasi dan diindetifikasi dari daun jeruk. Di Indonesia, senyawa ini ditemukan pada daun daun dewa (Gynura procumbens Merr.), kirinyu (Tithonia diversifolia), Cinnamomum kinabaluensis, C. multiflorum, C. Subavenium, pala (Myristica fragrans), Eugenia lineata, siri hutan (Piper aduncum L.). selain pada daun, senyawa ini juga ditemukan pada kulit buah segar dari beberapa jenis jeruk (Agusta, 2000). Perbedaan habitat berkontribusi terhadap kandungan senyawa aktif pada daun lonkida. Beberapa studi melaporkan hal yang sama pada beberapa jenis pohon hutan. Perbedaan komposisi monoterpen pada 12 provenans loblolly pine (Kozlowski and Palardy, 1997a). Variasi kandungan minyak atsiri Ki Lemo (Litsea cubeba Lour. Persoon) di beberapa tipe habitat di Gn. Papandayan Jawa Barat (Suwandhi, 2014). Menurut Kozlowski and Palardy (1997a) bahwa keberadaan senyawa aktif ditanaman dikontrol oleh faktor genetik dan lingkungan. Beberapa faktor lingkungan yang diduga berperan dalam keberadaan senyawa aktif tanaman diantaranya sifat kimia tanah (N, P,S, Mg), fisik tanah (pori tanah dan ketersedia air). Menutut Suwandi (2014) bahwa keberadaan S dan N yang tinggi dapat meningkatkan kandungan minyak atsiri Ki Lemo dan sebaliknya Mg dan pori tanah yang besar dapat menurunkan kandungan minyak atsiri. Pada kasus penelitia ini, peneliti berpendapat bahwa faktor kuat habitat rawa memiliki senyawa aktif lebih tinggi dari habitat lainnya karena kondisi 79 genangan air. Diduga, pada kondisi cekaman genangan lonkida akan melakukan mekanisme pertahanan dengan memproduksi metabolit sekunder tertentu (Kozlowski and Palardy, 1997b). Profil kromatogram dari masing-masing komponen kimia disajikan pada Gambar 1, 2, dan 3. Gambar 1. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat hutan Gambar 2. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat rawa Gambar 3. Kromatogram GC minyak atsiri daun lonkida dari habitat savanna 80 KESIMPULAN 4. Komposisi dan kandungan kimia bahan aktif pada daun lonkida yang diperoleh dari tiga tipe habitat sangat bervariasi. 5. Habitat rawa memiliki komponen kimia utama lebih tinggi (16 komponen) dibanding habitat hutan 7 senyawa kimia utama dan savanna terdapat 9 komponen utama. 6. Senyawa aktif dominan yang ditemukan pada daun lonkida pada ketiga tipe habitat di TNRAW adalah dl-Limonene (C10 H16), 2,3-DIHYDROBENZOFURAN (C8H8O), 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene,2,6,10,15, 19,23-hexamethyl- (CAS) Squalene (C30H50) dan Tetratetracontane (CAS) nTetratetracontane (C44H90). UCAPAN TERIMA KASIH Terima kasih penulis ucapkan kepada Dirjen DIKTI atas dukungan dana yang memungkinkan penelitian dapat terlaksana. Tulisan ini adalah sebagian dari hasil penelitian yang didanai oleh Dirjen DIKTI melalui Hibah Bersaing BOPTN Universitas Halu Oleo Tahun 2014. DAFTAR PUSTAKA Alimuddin, LD. & Tuheteru, FD. 2013. Analisis kerapatan dan persebaran Lonkida (Nuclea orientalis Merr.) pada tiga tipe habitat di Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai - Sulawesi Tenggara. Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional Silvikultur I, Fakultas Kehutanan Universitas Hasanuddin, Makassar, 29 Agustus 2013. Makassar. Boland, DJ., Brooker, MIH., Chippendale, GM., Hall, N., Hyland, BPM., Johnston, RB., Kleinig, DA., McDonals, MW. dan Turner, JD. 2006. Forest Trees of Australia. Australia: CSIRO. Collins S, X Martins, A Mitchell, A Teshome, JT Arnason. 2006. Quantitative ethnobotany of two east Timorese cultures. Economic Botany, 60(4):347361. 81 Collins S, X Martins, A Mitchell, A Teshome, JT Arnason. 2007. Fataluku medicinal ethnobotany and the East Timorese military resistance. Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine 3(5):1-10. Damayanti EK. 1999. Kajian Tumbuhan Obat berdasarkan kelompok Penyakit penting pada berbagai Etnis di Indonesia [Skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Dayan, MdP., Rosalinda, SR. & Bandian, DB. 2007. Indigenous Forest Tree Species in Laguna Province. DENR Recommends Vol 15b. Falodun, A., R. Siraj and M.I. Choudhary. 2009. GC-MS Analysis of Insecticidal Leaf Essential Oil of Pyrenacantha Staudtii Hutch and Dalz (Icacinaceae). Tropical Journal ofPharmaceutical Research, 8:139-143. LaFrankie JV. 2010. Trees of Tropical Asia. BlackTree Publication, Inc. Philippines. Lim, TK. 2013. Edible Medicinal and Non-Medicinal Plants:Volume 5, Fruits. Springer, New York. Hlm 754-757. Qayum, M., M. Nisar, M.R. Shah, Zia-ul-Haq, W.A. Kaleem and I.K. Marwat. 2012. Biological screening of oils fromImpatiens bicolor Royle. Pakistan Journal of Botany, 44:355-359. Raghavamma STV, NR Rao. 2010. In vitro Evaluation of anthelminthic activity of Nauclea orientalis leaves. Indian J Pharm Sci. 72(4): 520–521 Rais S, Y Ruchiat, A Sartono, T Hideta. 2007. 50 Taman Nasional di Indonesia. Dirjen PHKA, Dephut., Lestari Hutan Indonesia dan JICA. Jakarta. Sichaem J, Surapinit S, Siripong P, Khumkratok S, Jong-Aramruang J, Tip-Pyang S. 2010. Two New Cytotoxic Isomeric Indole Alkaloids from The Roots of Nauclea Orientalis. Fitoterapia 81:830-833. Sosef MSM, LT Hong, S Prawirohatmodjo. 1998. Plant Resources of South-East Asia No. 5(3) : Timber trees : Lesser-known timbers. Prosea, Indonesia Bogor. Susiarti S, Y Purwanto, FI Windadri. 2009. Pengetahuan Masyarakat Pekurehua di Sekitar Taman Nasional Lore Lindu, Sulawesi Tengah Tentang Tumbuhan Obat dan Pemanfaatannya. Media Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Vol XIX (4) : 185-192.