Isolasi dan Transfer DNA Bacillus licheniformis ke dalam Sel

ISOLASI DAN TRANSFER DNA Bacillus licheniforinis
KE DALAM SEL Saccharomyces cerevisiae
Oleh
S U S A N T I
F 24. 1087
1 9 9 1
FAKULTAS TEKNOLOGl PERTANIAN
INSTITUT P E R T A N W
B O G O R
BOGOR
SUSANTI. F 24.1087.
ISOLASI DAN TRANSFER DNA B a c i l l u s
lichenformis
KE DALAM SEL Saccharomyces
cerevisiae.
Dibawah
bimbingan
Dr. Ir. Maggy T. Suhartono dan
Ir. Dahrul Syah
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari salah
metoda
rekombinasi
genetika
yaitu
tanpa
menggunakan
vektor.
Metoda
'ilakukan
proses
satu
transformasi
transfo.rmasi
ini
denqan cara mengisolasi dan memindahkan DNA dari
licheniformis
Bacillus
ke
dalam
sel
Saccharomyces
cerevisiae.
Tahap pertama yang dilakukan dalam proses isolasi
adalah
pemecahan dinding sel dari aacillus
ciengan
perlakuan
protein
ion
Hz
berfungsi untuk
melakukan
pratein dan membantu koagulasi protein.
dari
organik
dan klo.roform : isoamil alkohol (24
masing-masing
dan
Untuk selanjutnya pemisahan DNA
dilakukan dengan cara penambahan pelarut
perklorat
yang
licheniformis
meng.gunakan sonikator pada 100
penambahan SDS 25%.
DNA
:
1)
disosiasi
DNA yang berhasil
dipisahkan selanj,utnyadiendapkan dengan alkohol 70%.
L'ntuk menguji kemurnian dari DNA yang telah
mak;-:
dilakukan
karakterisasi
penelitian
ini
dilakukan dengan uji spektrofotometer
pada
panjang
gelombang
Etidium
Bromida.
karakterisasi.
Pada
diisolasi
200 nm sampai 300 nm
dan
uji
dengan
Pembentukan
protoplas
cerevisiae
ditandai
morf ologi
sel.
dari
dengan
Bentuk
sebelum diberi lisozim
sel
terjadinya
sel
kompetensi
terjadi
oleh larutan
PEG-6000
cerevisiae
pengrusakan
lebih bundar.
dari sel inang
khususnya
cerevisiae untuk menerima DNA
rontyces
dalam
dengan konsentrasi 1 0 mg/ml buffer
dinding sel bentuk sel menja'i
Sifat
perubahan
Saccharonlyces
adalah ellips sedangkan setelah
TEN
Saccharonlyces
asing
Saccha-
dipengaruhi
sebagai senyawa penstabil
osmotik,
lama inkubasi dan suhu.
Dari
hasil pengujian dapat diketahui bahwa sel
transformasi
(TMS 1) dapat
dengan
aktifitas
unit
memproduksi
enzim
sebesar
enzim
hasil
protease
unitlml,
0.0701
sedangkan TMS 2 selain dapat menghidrolisa pati juga dapat
menghidrolisa. gelatin dan mampu tumbuh dalam media
Proskauer.
Hasil
licheniformis
uji yang dilakukan
terhadap
sebagai sel donor adalah
Voges
Baciilus
memberikan
sifat
yang pcsitif terhadap uji proteolitik, uji hidrolisa pati,
uji
Voges
Proskauer,
uji hid.rolisa
aktifitas protease sebasar
inanq
memberikan
uji
0.0344
unit/ml.
yang negatif
fisiologis yang dilakukan.
gelatin
dan
nilai
Sedangkan sel
terhadap
semua
uji
ISOLASI DAN TRASSFEII IJNA Boci1i:i.r lic./~ei~i/brii~i.s
KE DALAM SEl~.S ( i c . c . l ~ r i ~ . or.crt*t.isirre
i~~r;~
Skripsi ini disi~sunseh;~g:~i
salah s:tru sylnlt
u n t ~ r l ,rne~nperolehgelilr S;~rj:in:~
.fEKNOLOGI PERTANIAN
{xidaJURUSAN TEKKOL.OGI PANGAX DAN GlZI
FAKULTAS TEKNOLOGt PERTANIAN
INSTiTUT PERTANIAN BOGOR
1Y02
JURUSAN TEKh'OLOGi PANGAN DAN CIZI
FAKULTAS TEKXOLOGI PERT.AYIAN
INS1'ITL'T I'ERTANIAN BOGOR
13 0 C i 0 f<
FAKULTAS TEKNOI*O<;I I'l~l<fA,":
IAN
INS?'ITU?' I'ERTANIAI'; 130(;011
ISOLASI DAN TRANSFER DNA L'[~cillii.sliclreiri/orn~ir
KE DALAM SELS~~ccl~or~~i~iyces
cerevisirrr
Oleh:
SUSANI'I
F 24.1 OX7
Dilahirkan pada tarl2:;ll 31 Juli IWhY
di Ciarljur
Tanggal lulus :
I 1 J::nuari IF)?.
disctujui :
a n u a r i 1992
,
7
KATA I'ENGANTAR
Segala
Tuhan
puji dan syukur penulis panjatkan
yang PIaha Kuasa yang telah
ke
melimpahkan
hadirat
rahmat-Nya
sehingga skripsi ini dapat terselesaikan.
Skripsi
nyelesaikan
Pangan
ini
merupakan salah satu
studi
di tingkat sarjana
dan Gizi, Fakultas Teknologi
syarat
dalam
Jurusan
me-
Teknologi
Pertanian,
Institut
Pertanian Bogor.
Pada
Resempatan ini penulis ingin
menyampaikan
rasa
-
Lcrima kasih yang sebesar-besarnya kepada :
4.
i.
Dr. I .
dan
Maggy T. Suhartono selaku dosen pembimbing
Ir. Cahrui Syah selaku dosen pembimbing
telah
mengarahkan,
perhatian
dari
membimbing, memberi
mulai pelaksanaan
11
yang
bantuan
penelitian
I
dan
sampai
penyusunan skrlpsi ini.
L .
Ir. Sutrisno Koswara yang telah bersedia untuk mengujl
penulis.
3.
Staf
dan karyawan Laboratorium PAU-IPB khususnya
Bioteknologi
IPB, Jurusan Teknologi Pangan dan
PAU
Gizi,
d,an BFPHP.
4.
Ibu
dan
Kakakku
yang
telah
memberikan
perhatian,
dorongan dan semangat kepada penulis
5.
Bapak
dan
doronqan
studi.
Ibu
Rahmat
yang
dan tasillras selama
telah
memberikan
penulis
doa,
menyelesaikan
6.
Liliani E.S, Kristali dan
doa, dorongan,
5.
Rudy yang telah
memberikan
bantuan dan semangat kepada penulis.
Jusuf, Hekleman, Wie Sian dan Maryani atas kerja samanya
dalam mekakukan penelitian, tenan-teman
rekan-rekan
di
PT. Makindo Perdana
dan
lain
yang tidak dapat penulis sebutkan
yang
telah banyak membantu penulis
se-kost,
rekan-rekan
satu
dalam
persatu
penyusunan
skripsi ini.
Penulis
ada
menyadari bahwa penulisan skripsi
ini
kekurangan, karena itu kritik dan saran dalam
perbaikan
penulis
skripsi
ini
sangac
diharapkan.
berharap agar skripsi ini dapat
masih
rangka
Akhir
kata
bermanfaat
bagi
semua pihak yang membutuhkannya.
Bogor, Januari 1992
Penulis
Haiaman
i
KATA PENGANTAR
iii
DAFTAR IS1
DAFTAR TABEL
vi
DAFTAR GXMBAR
vi i
ix
DAFTAR LAMPIRAN
I.
11.
III.
1
PENDAHULUAN
TINJAUAN PUSTAKA
A.
Saccharomyces cerevisiae
B.
Bacillus licheniformis
C.
DNA (Asam Deoksiribonukieat)
1.
Struktur dan Fungsi DNA
2.
Ekspresi DNA daiam Biosintesa Prorein
3.
Pengaturan Ekspresi Genetika
D.
REKOMBINASI DNA
E.
ISOLASI DAN KARAKTERISASI DNA
F.
PEMBENTUKAN PROTOPLAS
G.
TRANSFORMASI
1.
Sejarah Transformasi
2.
Pengertian transformasi
BAHAN DAN METODA PENELITIAN
A.
BAHAN
B.
ALAT
iii
C.
METODA PENELITIAN
1.
Aktifasi liofil
37
2.
Persiapan Inokulum
38
3.
Isolasi DNA Bacillus 2icheniformis
39
4.
Pembentukan Protoplas Saccharoiiiyces
cerevisiae
Karakterisasi DNA
41
5.
I".
37
42
6.
Proses Transfer DNA Bacillus lichenifor- 53
mis k e dalam sel Saccharomyces cerevisiae
7.
Uji Fisiologis Mikroba
43
8.
Menentukan Aktifitas Protease
45
HASIL DAN PEMSAHASAN
47
A.
PERTUMBUHAN MIKROORGANISME
47
3.
ISOLASI DNA
48
C.
KARAKTERISASI DNA
5C
D.
PEMBENTUKAN PROTOPLAS
54
E.
TRANSFER DNA Bacillus licheniformis k e
daiam sel Saccharomyces cerevisiae
57
F.
PENGAMATAN MORFOLOGI SEL
59
G.
UJi FISIOLOGIS SEL
55
1. Uji Proteolitik
61
2. Uji Hidrolisa Pati
62
3. Uj,i Voges Proskauer
65
4. Uji Hidrolisa Gelatin
66
H.
UJi AKTIFITAS PROTEASE
69
I.
INTEGRASI D1;A DONOR DENGAI; DNA SEL INANG
70
V.
KESIMPULAN DAN SARAN
A.
KESIMPULAN
B.
SARAN
DAFTAR PUSTAKA
L A F i F I RAN