Isolasi Bacillus sphaericus Isolat Lokal Pulau Lombok dan

Isolasi Bacillus sphaericus Isolat Lokal Pulau Lombok
dan Pemanfaatannya Sebagai Agen Hayati Pengendali
Larva Anopheles sp.
Oleh:
Bambang Fajar Suryadi
NIM. 127090100111004
Pra Propososal I
Program Doktor Biologi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Brawijaya
2012
1
DAFTAR ISI
Halaman
Sampul Depan ................................................................................................................
i
Daftar Isi ......................................................................................................................... ii
Daftar Gambar ................................................................................................................ iii
Daftar Tabel .................................................................................................................... iv
Daftar Lampiran ............................................................................................................. v
Ringkasan ....................................................................................................................... vi
I. Pendahuluan ...............................................................................................................
1.1. Latar Belakang ........................................................................................................
1.2. Masalah ....................................................................................................................
1.3. Tujuan Penelitian ....................................................................................................
1.4. Manfaat Penelitian ...................................................................................................
1
1
2
3
3
II. Tinjauan Pustaka ........................................................................................................
2.1. Biologi Malaria .........................................................................................................
2.2. Biologi Nyamuk Anopheles ....................................................................................
2.3. Biologi Bacillus sphaericus ....................................................................................
4
4
5
8
III. Metodologi .................................................................................................................
3.1. Waktu dan Lokasi Penelitian ..................................................................................
3.2. Bahan dan Prosedur ...............................................................................................
3.2.1. Pengambilan Sampel ...........................................................................................
3.2.2. Isolasi B. sphaericus ............................................................................................
3.2.3. Produksi Endospora B. sphaericus ....................................................................
3.2.4. Penentuan Toksisitas Kristal Protoksin Bakteri Pada Larva Anopheles ..........
3.2.5. Analisis Protein Kristal Protoksin .......................................................................
3.2.6. Identifikasi Gen Penyandi Kristal Toksin ...........................................................
3.2.7. Bakteri Berdasar Karakter Biokimia dan Fisiologis ............................................
3.2.8. Identifikasi Bakteri Secara Filogenetik ...............................................................
3.3. Luaran Penelitian ....................................................................................................
10
10
10
10
11
12
12
12
13
14
14
15
IV. Daftar Pustaka .......................................................................................................... 16
2
Daftar Gambar
Halaman
Gambar 2.1. Siklus hidup Plasmodium ........................................................................ 4
Gambar 2.2. Anatomi nyamuk Anopheles sp betina .................................................... 6
Gambar 3.1. Peta Pulau Lombok dan titik pengambilan
sampel yang direncanakan ...................................................................... 11
3
Daftar Tabel
Halaman
Tabel 3.1. Pasangan primer untuk deteksi gen toksin B. sphaericus ......................... 13
Tabel 3.2. Pasangan primer untuk amplifikasi 16s rRNA ............................................ 14
4
Daftar Lampiran
Halaman
Lampiran 1 Bagan Alir Penelitian ................................................................................. 19
5
Isolasi Bacillus sphaericus Isolat Lokal Pulau Lombok
dan Pemanfaatannya Sebagai Agen Hayati Pengendali
Larva Anopheles sp.
Bambang Fajar Suryadi
NIM. 127090100111004
Ringkasan
Prevalensi malaria di Pulau Lombok termasuk dalam angka sedang hingga
tinggi, karenanya diperlukan upaya untuk mengendalikan nyamuk
Anopheles sebagai vektor parasit ini. Salah satu upaya pengendaliannya
adalah menggunakan endopora Bacillus sphaercus yang diisolasi dari
lingkungan pantai Pulau Lombok. Bakteri diisolasi dari sedimen pantai di
Lombok Barat, Lombok Timur, Lombok Utara dan Lombok Selatan. Dari
sedimen yang diberi perlakuan panas kemudian diisolasi B. sphaericus
yang memiliki ciri: Bentuk sel batang, reaksi Gram positif, memiliki
endospora terminal dan dengan sporangium yang membesar (swollen
sporangium). Isolat yang memiliki ciri tersebut kemudian dimurnikan dan
diuji sifat toksisitasnya pada larva instar III nyamuk Anopheles. Isolat
dengan kemampuan membunuh larva nyamuk Anopheles lebih dari 50%
kemudian dilakukan analisis protein endosporanya. Karakter sel, biokimia
dan fisiologisnya juga dianalisis untuk menentukan spesiesnya. Karakter
biologi molekuler isolat berupa gen penyandi protein toksin dan 16s rDNA
kemudian dianalisis dengan teknik PCR. Dari sequence gen 16s rRNA
yang didapat kemudian dibandingkan dengan data serupa tersimpan di
kepustakaan GenBANK/NCBI untuk melihat kekerabatan isolat B.
sphaericus yang didapat.
Kata kunci: Bacillus sphaericus, Anopheles, malaria, sedimen pantai, Pulau
Lombok.
6