UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK METANOL DAUN LABAN ABANG

UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK METANOL
DAUN LABAN ABANG (Aglaia elliptica BLUME) TERHADAP LARVA
UDANG (Artemia salina LEACH) DENGAN METODE
BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Proposal Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN
OLEH :
Nurul Khafidz Subekti
NIM : 1111103000056
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1435H/2014 M
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan
rahmat dan hidayah-Nya sehingga pada kesempatan kali ini penulis dapat
menyelesaikan laporan penlitian ini. Tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai
pihak maka penelitian ini tidak akan pernah terselesaikan. Oleh karena itu, penulis
mengucapkan terimakasih kepada:
1.
Prof. Dr (hc). dr. M.K Tadjudin, SpAnd selaku Dekan FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta yang selalu membimbing dan memberikan kesempatan
kepada penulis untuk belajar di Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta.
2.
dr. Witri Ardini, M.Gizi, SpGK selaku Ketua Program Studi Pendidikan
Dokter atas bimbingan yang diberikan selama penulis menempuh pendidikan
di PSPD FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.
dr. Nurul Hiedayati, PhD selaku pembimbing 1 yang telah banyak
memberikan waktu, pikiran dan tenaga untuk membimbing penulis dalam
melakukan penelitian dan menyusun laporan penelitian ini. dr. Nurul
Hiedayati, PhD juga selaku PJ Laboratorium Farmakologi yang telah
memberikan izin penggunaan laboratorium.
4.
Ibu Puteri Amelia, M.Farm, Apt selaku pembimbing 2 yang telah memberikan
masukan judul penelitian dan banyak mencurahkan waktu, pikiran dan tenaga
untuk membimbing penulis dalam melakukan penelitian dan menyusun
laporan penelitian ini.
5.
Dr. Flori Ratna Sari, PhD dan drg. Laifa Annisa Hendarmin, PhD selaku
penanggung jawab modul Riset yang selalu mengingatkan penulis untuk
segera menyelesaikan penelitian.
6.
Ayah, Sirwan Nurul Hidayat, SH dan Ibu Ida Purwidyastui yang tak pernah
letih mencurahkan kasih sayang, memberikan pengorbanan tanpa pamrih serta
doa yang selalu diberikan kepada penulis.
7.
Kakak, Nurkholis Setyaningsih, SH yang selalu memberikan doa dan
dukungannya kepada penulis.
v
8.
Keluarga besar Eyang Tamirja dan Eyang Wasilem beserta keluarga besar
Simbah Pardiyo Tirtowaluyo dan Simbah Siti Salbiyah yang selalu
memberikan doa dan dukungan kepada penulis.
9.
Mbak Rani selaku laboran lab Famakognosi dan Fitofarmaka, dan Mas
Rachmadi selaku laboran lab Farmakologi yang telah banyak membantu
penulis dalam mengerjakan penelitian di laboratorium masing-masing.
10. Muflikha Mayazi yang selalu memberikan dukungan, semangat dan doa untuk
kelancaran dalam penelitian ini.
11. Teman-teman satu kelompok penelitian Akbar Sepadan, Feby Wulandari, Ayu
Reskianingsih. Terimakasih atas kerja sama yang luar biasa 1 tahun ini.
12. Teman-teman satu rumah kosan GPL, Bimo Dwi Pramesta, Hanindyo Riezky B,
Muhammad Arif Rahman, Andhika Pangestu, Dimas Bagus Pamungkas, Muhammad
Fahreza Kautsar dan Lintang Suryaning Bhumi, yang telah memberi dukungan
serta doanya.
13. Teman-teman PSPD 2011 yang selalu memberikan dukungan, semangat dan
selalu berjuang bersama-sama.
14. Orang-orang yang telah memberikan banyak bantuan kepada penulis dan tak
bisa penulis satu-persatu sebutkan disini.
Penulis menyadari bahwa laporan penelitian ini masih belum mendekati sempurna,
oleh karena itu saran dan kritik dari berbagai pihak sangat di harapkan. Demikian
laporan penelitian ini penulis susun, semoga bermanfaat bagi kemajuan ilmu
pengetahuan.
Ciputat, 12 September 2014
Penulis
vi
ABSTRAK
Nurul Khafidz Subekti. Program Studi Pendidikan Dokter. Uji Toksisitas Akut
Ekstrak Metanol Daun Laban Abang (Aglaia elliptica Blume) Terhadap Larva
(Artemia salina Leach) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). 2014
Laban Abang (Aglaia elliptica Blume) merupakan tumbuhan dari keluarga Meliaceae
yang dikenal sebagai tanaman obat keluarga. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui kadar toksisitas akut (LC50) yang terkandung dalam ekstrak metanol
daun Labang Abang. Metode yang digunakan adalah Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT). Uji ini terdiri dari 6 perlakuan konsentrasi yaitu 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm,
50 ppm, 25 ppm dan 12,5 ppm beserta kontrol negatif yang masing-masing
dilakukan tiga kali pengulangan. Pada tiap konsentrasi menggunakan 10 ekor larva
Artemia salina Leach dan dilakukan pengamatan mortalitas larva setelah 48 jam.
Nilai LC 50 didapatkan dari analisa probit. Nilai LC 50 dari ekstrak metanol daun Laban
Abang adalah 68,87 ppm. Hasil LC50 < 1000 ppm menunjukkan ekstrak metanol
daun Laban Abang bersifat toksik dan berpotensi sebagai senyawa anti kanker.
Kata kunci : Ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume, BSLT, Artemia salina
Leach, Toksisitas, LC50
ABSTRACT
Nurul Khafidz Subekti. Medical Education Study Program. Acute Toxicity Test
Extract Methanol Laban Abang Leaves (Aglaia elliptica Blume) to Larva Artemia
salina Leach with Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Method. 2014
Laban Abang (Aglaia elliptica Blume) belongs to the family Meliaceae, has been
known as family herbal remedies. The aims of this research is to determine the
lethal toxicity value (LC50) in extract methanol Laban Abang leaves. The method that
used in this research is Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). The test consisted of six
concentration treatments namely 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 50 ppm, 25 ppm and
12,5 ppm and negative control with three replications. In each concentration used
10 Artemia salina Leach larvae, and observations were made during 48 hours of
larvae mortality. LC50 value was determined by probit analysis. The result of LC50
from extract methanol Laban Abang leaves is 68,87 ppm. LC50 < 1000 ppm showed
that the crude extract methanol Laban Abang leaves classified as toxic and have
potent anti cancer compounds.
Keywords : Extract methanol Aglaia elliptica Blume leaves, BSLT, Artemia salina
Leach, Toxicity, LC50
vii
DAFTAR ISI
LEMBAR JUDUL ................................................................................................. i
LEMBAR PERNYATAAN .................................................................................. ii
LEMBAR PERSETUJUAN ................................................................................ iii
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................. iv
KATA PENGANTAR .......................................................................................... v
ABSTRAK ............................................................................................................. vii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ................................................................................................. x
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xi
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang ........................................................................................ 1
1.2 Rumusan masalah ...............................................................................2
1.3 Tujuan penelitian ................................................................................2
1.3.1 Tujuan umum ................................................................................ 2
1.3.2 Tujuan khusus .............................................................................. 2
1.4 Manfaat penelitian ...............................................................................3
1.4.1 Bagi masyarakat ............................................................................ 3
1.4.2 Bagi institusi .................................................................................. 3
1.4.3 Bagi peneliti .................................................................................. 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan teori......................................................................................... 4
2.1.1 Tumbuhan Sebagai Obat Tradinsional .......................................... 4
2.1.2 Tumbuhan Aglaia elliptica Blume................................................. 5
2.1.3 Definisi Toksikologi ..................................................................... 7
2.1.4 Uji Toksisitas Akut ....................................................................... 8
2.1.5 Simplisia ....................................................................................... 9
2.1.6 Metode Ekstraksi Simplisia ......................................................... 11
2.1.7 La r v a U d a n g Artemia salina Leach......................................... 13
2.1.8 Metode BSLT................................................................................ 16
2.2 Kerangka konsep ................................................................................... 16
2.3 Definisi operasional ............................................................................17
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Desain penelitian ................................................................................... 18
3.2 Waktu dan tempat penelitian ................................................................. 18
3.3 Populasi dan sampel ............................................................................... 18
3.3.1 Populasi ......................................................................................... 18
3.3.2 Sampel ........................................................................................... 18
3.3.2.1 Kriteria Inklusi ...........................................................................18
3.3.2.2 kriteria Eksklusi .................................................................. 18
3.3.2.3 Besar Sampel ...................................................................... 18
3.3.2.4 Cara Pengambilan Sampel .................................................. 19
viii
3.4 Determinasi Tanaman ............................................................................. 19
3.5 Bahan yang diuji ...................................................................................... 19
3.6 Alat dan bahan penelitian ....................................................................... 19
3.6.1 Alat penelitian .............................................................................. 19
3.6.2 Bahan penelitian ........................................................................... 20
3.7 Cara kerja penelitian ............................................................................... 20
3.7.1 Ekstraksi Daun Aglaia elliptica Blume dengan Maserasi.............. 20
3.7.2 Penetasan Larva Udang ................................................................. 21
3.7.3 Pembuatan Konsentrasi Ekstrak yang Diuji .................................. 21
3.7.4 Prosedur uji Toksisitas dengan metode BSLT............................... 22
3.8 Alur Penelitian ......................................................................................... 24
3.9 Pengolahan dan Analisis Data ................................................................. 25
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Ekstraksi Daun Aglaia elliptica Blume ........................................ 26
4.2 Hasil Uji Toksisitas dengan Metode BSLT .............................................. 27
BAB V SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan ................................................................................................. 33
5.2 Saran ....................................................................................................... 33
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 34
LAMPIRAN .......................................................................................................... 36
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Kriteria tingkatan nilai toksisitas akut LC50............................................................. 9
Tabel 3.1 Ilustrasi Konsentrasi Ekstrak pada Plate.............................................. 23
Tabel 4.1 Data Berat Ekstrak Kental Daun Aglaia elliptica Blume ..................... 26
Tabel 4.2 Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Metanol daun Aglaia
elliptica Blume terhadap Larva Artemia salina Leach ......................... 28
Tabel 4.3 Penetapan LC50 ............................................................................................................................. 30
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Pohon Aglaia elliptica Blume...............................................................6
Gambar 2.2 Artemia salina Leach ............................................................................13
Gambar 2.3 Morfologi Artemia salina Leach...........................................................14
Gambar 2.4 Siklus hidup Artemia salina Leach .......................................................15
Gambar 4.1 Grafik pengaruh Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Aglaia
elliptica Blume Terhadap kematian larva Artemia salina Leach .........29
Gambar 4.2 Grafik Regresi Linier Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Aglaia
elliptica Blume Terhadap Nilai Probit ..................................................31
xi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Surat Determinasi Daun Aglaia elliptica Blume........................... .......36
Lampiran 2 Tabel Nilai Probit ………….................................................................37
Lampiran 3 Gambar Alat dan Bahan…………………………………......,,............39
Gambar 6.1
Simplisia daun Aglaia elliptica Blume………….......... 39
Gambar 6.2
Tabung Maserasi…………………………………. ......39
Gambar 6.3
Penyaringan Hasil Maserasi ..........................................39
Gambar 6.4
Mesin rotatory evaporator…………………………... .....39
Gambar 6.5
Gambar 6.5 Pembuatan Larutan Induk…………... ......39
Gambar 6.6
Ekstrak Kental Daun Aglaia elliptica Blume…............39
Gambar 6.7
Penimbangan Eksrak Kental Daun
Aglaia elliptica Blume ..................................................40
Gambar 6.8
Microplate BSLT……………………………...….. .....40
Gambar 6.9
Pembuatan Konsentrasi .................................................40
Gambar 6.10 Kaleng Larva Udang Artemia salina Leach ..................40
Gambar 6.11 Media perkembangbiakan Larva ...................................40
Gambar 6.12 Hasil BSLT....................................................................40
Lampiran 4 Perhitungan Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Aglaia elliptica
Blume....................................................................................................41
Lampiran 5 Riwayat Penulis ....................................................................................46
xii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1
Latar Belakang Masalah
Menurut data dari World Health Organization (WHO), penderita kanker di
dunia pada tahun 2012 mencapai 12,7 juta dan mengalami peningkatan setiap
tahunnya. Angka kematian karena kanker juga meningkat dari 7,6 juta jiwa
menjadi 8,2 juta jiwa dan 75% diantara penderita kanker tersebut berada di negara
berkembang.1
Dalam pengobatan kanker, terdapat berbagai jenis obat antikanker yang
tersebar di Indonesia, namun obat tersebut mempunyai efek samping yang
beragam diantaranya mukositis, diare, dan trombositopenia. Oleh karena itu tidak
sedikit masyarakat Indonesia beralih menggunakan obat-obat tradisional yang
berbahan dasar alami.2
Badan kesehatan dunia WHO menyatakan bahwa 80% dari populasi
masyarakat di negara berkembang masih percaya pada obat tradisional, terutama
pada obat herbal. Obat tradisional tersebut dapat berasal dari tumbuhan, hewan,
mineral, maupun biota laut. Tumbuhan yang telah berhasil diidentifikasi sebagai
obat tradisional sebanyak 1.845 spesies dan 1.300 diantarnya tersebar di hutan
tropis di seluruh wilayah Indonesia.3,4
Salah satu tumbuhan yang memiliki potensi sebagai obat antikanker
adalah Aglaia elliptica Blume atau sering disebut oleh masyarakat Indonesia
sebagai Laban Abang. Tumbuhan ini masuk dalam genus Aglaia sp. dan termasuk
dalam famili Meliaceae. Aglaia elliptica Blume dapat ditemukan pada ketinggian
0-2000 mdpl. Bagian tumbuhan ini yang dapat dijadikan sebagai obat tradisional
adalah batang, akar, daun, daging buah, dan bijinya.5
Dalam fraksi semi polar ekstrak daun Aglaia elliptica Blume terkandung
senyawa pirolidin bisamida (senyawa mayor) yang diidentifikasi sebagai odorin
(C18H24N2O2)
dan
senyawa
aktif
rocaglamide
(senyawa
minor)
yang
diidentifikasi sebagai desmethylrocaglamid (C31H35O8N). Senyawa tersebut dapat
menghambat proliferasi dari sel-sel kanker.6
1
2
Sebagai uji awal untuk mengetahui sifat toksisitas ekstrak daun Aglaia
elliptica Blume, dilakukan uji tokisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT) dengan pelarut metanol.7
BSLT adalah suatu metode uji toksisitas akut yang sederhana, mudah
pengerjaannya, cepat mendapatkan hasil, dan murah dalam pelaksanaannya.
Selain itu, BSLT merupakan suatu bioassay-guided fractionation yang dapat
digunakan untuk penelusuran senyawa bioaktif yang bersifat toksik dari suatu
bahan alam.8
Metode BSLT menggunakan larva udang (Artemia salina Leach) sebagai
hewan coba. Artemia salina Leach merupakan organisme yang mempunyai
kepekaan cukup tinggi terhadap toksik. Hasil uji toksisitas dengan metode ini
telah terbukti memiliki korelasi positif dengan daya sitotoksik senyawa
antikanker. Jika pada uji toksisitas menunjukkan LC50 dibawah 1000 ppm berarti
bahan tersebut memiliki potensi sebagai antikanker.8,9
Pada penelitian lain telah dilakukan uji toksisitas akut ekstrak daun Aglaia
elliptica Blume, namun pada penelitian tersebut menggunakan etanol sebagai
pelarutnya.5 Pada penilitian ini, peniliti melakukan uji toksisitas akut ekstrak daun
Aglaia elliptica Blume dengan menggunakan metanol sebagai pelarutnya.
Alasan peneliti melakukan penelitian ini adalah sebagai upaya untuk
memberikan informasi bahwa ekstrak daun Aglaia elliptica Blume memiliki
potensi toksisitas terhadap sel kanker.
1.2
Rumusan Masalah
Bagaimanakah aktivitas sitotoksik ekstrak metanol daun Laban Abang
(Aglaia elliptica Blume) terhadap larva Artemia salina Leach menggunakan
metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) ?
1.3
Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Mengetahui aktivitas sitotoksisitas dari ekstrak metanol daun Aglaia
elliptica Blume terhadap larva Artemia salina Leach menggunakan metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT).
3
1.3.2 Tujuan Khusus
A. Mengetahui persentase kematian larva udang Artemia salina Leach
setelah pemberian ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume.
B. Mengetahui nilai LC50 dari ekstrak metanol daun Aglaia elliptica
Blume terhadap larva Artemia salina Leach menggunakan metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
1.4
Manfaat Penelitian
1.4.1 Bagi Masyarakat
Menambah informasi mengenai manfaat tumbuhan Laban Abang yang
dapat dijadikan sebagai obat antikanker.
1.4.2 Bagi Intitusi
A. Penelitian ini menambah jumlah dan jenis penelitian di Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
B. Sebagai implementasi Tri Dharma Perguruan Tinggi pada bidang
penelitian.
C. Penelitian ini dapat menambah referensi kepustakaan penelitian dan
rujukan penelitian selanjutnya.
1.4.3 Bagi Peneliti
A. Menambah wawasan mengenai obat berbahan dasar alami yang
digunakan sebagai obat antikanker.
B. Sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar sarjana kedokteran di
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri
Syarif Hidayatullah Jakarta.
C. Memperoleh pengalaman dalam bidang penelitian eksperimental pada
bidang kesehatan.
D. Mengimplementasikan ilmu metodologi penelitian yang telah didapat
selama perkuliahan di Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1
Landasan Teori
2.1.1 Tumbuhan Sebagai Obat Tradisional
Obat tradisional adalah obat-obatan yang diolah secara tradisional, turuntemurun, berbahan dasar alami, berdasarkan resep nenek moyang, adat-istiadat,
kepercayaan, atau kebiasaan setempat. Bagian tumbuhan yang dapat dijadikan
sebagai bahan obat tradisional adalah akar, rimpang, batang, buah, daun dan
bunga.3
Dalam undang-undang No 23 Tahun 1992 tentang kesehatan disebutkan
bahwa obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan
tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian (galenik) atau campuran
bahan tersebut yang secara turun-temurun telah digunakan untuk pengobatan
berdasarkan pengalaman maupun yang telah melalui uji pra-klinik/klinik seperti
obat herbal terstandar dan fitofarmaka.4
Sebagai landasan penggunaan obat tradisional, telah ditetapkan Sistem
Kesehatan Nasional (SKN) melalui Keputusan Menteri Kesehatan No.
131/Menkes/SK/II/2004. Dalam salah satu subsistem SKN disebutkan bahwa
pengembangan dan peningkatan obat tradisional dibutuhkan agar diperoleh obat
tradisional yang bermutu tinggi, aman, memiliki khasiat nyata yang teruji secara
ilmiah, dan dimanfaatkan secara luas baik untuk pengobatan sendiri oleh
masyarakat maupun digunakan dalam pelayanan kesehatan formal.4
Penelitian yang bertujuan untuk mengetahui efektivitas obat tradisional
dengan tahapan pengembangan obat tradisional menjadi fitofarmaka dilakukan
dengan langkah sebagai berikut4 :
A. Seleksi
Tumbuhan yang diteliti adalah tumbuhan yang berdasarkan pengalaman memiliki
khasiat untuk pengobatan suatu penyakit dan merupakan alternatif pengobatan
secara turun-temurun.
4
5
B. Uji Preklinik
Uji preklinik terdiri atas uji toksisitas dan uji farmakodinamik. Uji toksisitas
digunakan untuk melihat dan mengetahui keamanannya sedangkan uji
farmakodinamik digunakan untuk memprediksi efek pada manusia.
C. Standarisasi
Standarisasi dilakukan dengan cara penentuan identitas dan pembuatan sediaan
terstandar. Efek terapi yang ditimbulkan dari sediaan tersebut dapat berbeda
karena zat aktif yang terlarut, bentuk sediaan dan prosedur ekstraksinya
berbeda sesuai kebutuhan.
D. Uji Klinik
Apabila hasil dari penelitian tersebut menunjukkan adanya khasiat dan aman
digunakan sebagai obat tradisional pada manusia, maka dapat menjadi
pertimbangan penggunaannya di bidang kesehatan formal/profesi dokter.
2.1.2 Tumbuhan Aglaia elliptica Blume
Tumbuhan Aglaia elliptica Blume tumbuh di hutan primer, hutan sekunder,
rawa, sisi jalan maupun sepanjang bantaran sungai. Aglaia elliptica Blume
tersebar di beberapa negara Asia diantaranya Myanmar, Thailand, Indonesia, dan
Filipina.9
Aglaia elliptica Blume dapat mencapai ketinggian 40 m, mempunyai batang
keras dengan warna coklat kehijauan, daun berwarna hijau dengan 6-19 anak daun
dan bunga yang memiliki 5 kelopak. Tanaman ini memiliki buah dengan diameter
2 - 2,5 cm dan satu biji. Daerah hidupnya adalah daerah dengan ketinggian antara
0 hingga 2.000 m diatas permukaan laut.5,9
6
Taksonomi
tumbuhan
Aglaia
elliptica Blume sebagai berikut 9 :
Kingdom
: Plantae
Divisi
: Magnoliophyta
Sub Divisi
: Angiospermae
Kelas
: Magnoliopsida
Ordo
: Sapindales
Familia
: Meliaceae
Genus
: Aglaia
Spesies
: Aglaia elliptica Blume
Gambar 2.1. Pohon Aglaia elliptica Blume
Sumber : Aglaia elliptica Blume : www.biotik.org. 2014
Nama lain dari tanaman ini adalah Aglaia harmsiana Perk, Aglaia
havilandii Ridley, Aglaia longipetiolata Elmer, dan Aglaia oxypetala Valeton.
Masyarakat Indonesia mengenal tanaman ini sebagai Laban Abang (Sumatera),
Langsat-langsat (Kalimantan), Pisek (Sulawesi), serta Segera (Melayu).
Masyarakat
luar
negeri
mengenal
tumbuhan ini
sebagai
Peler
Tupai
(Semenanjung Malaysia), Segara dan Bunyau (Iban, Serawak, Malaysia), Matamata (Bikol, Filipina), serta Malasaging (Filipino, Filipina).5,9
Aglaia elliptica Blume berkhasiat sebagai insektisida karena mengandung 5
senyawa turunan rocaglamide. Tumbuhan ini juga berkhasiat sebagai antikanker
karena
mengandung
penghambatan
senyawa
proliferasi
odorin.
pertumbuhan
Senyawa
sel
tersebut
kanker
berefek
MONO-MAC-6
pada
dan
MELJUSO. Senyawa lain yang telah diidentifikasi sebelumnya antara lain 10-Oacetyagalain B, 4-epigliain A, aglaian A dan 3 jenis senyawa golongan
cycloarthanes.5
7
2.1.3 Definisi Toksikologi
Toksikologi merupakan kajian mengenai mekanisme efek berbahaya (efek
toksik) dari suatu bahan kimia terhadap makhluk hidup. Toksin mempunyai arti
sebagai zat yang berpotensi memberikan efek berbahaya terhadap organisme
tertentu.10
Faktor yang menentukan sifat toksik dari suatu senyawa adalah dosis,
konsentrasi racun di reseptor, sifat senyawa tersebut, paparan terhadap organisme
dan bentuk efek yang ditimbulkan.11
Toksisitas merupakan sifat relatif dari suatu bahan kimia yang dapat
menimbulkan efek berbahaya. Pada umumnya, efek farmakologis timbul apabila
terjadi interaksi antara zat kimia dengan organisme hidup.10,11
Uji toksisitas merupakan suatu uji untuk menentukan potensial suatu
senyawa sebagai racun, mengenali kondisi biologis setelah efek toksik tersebut
timbul dan mengenali karakteristik efek tersebut.10,11
Menurut Weil, terdapat lima pedoman pada uji toksisitas, yaitu 12 :
1.
Menggunakan satu atau lebih spesies yang secara kualitatif memperlakukan
suatu bahan mirip dengan manusia.
2.
Menggunakan beberapa jumlah dosis, dengan alasan pemberian dosis yang
berbeda dapat menimbulkan tingkat efek yang berbeda.
3.
Efek yang ditimbulkan pada tingkat dosis yang lebih tinggi bermanfaat
untuk menggambarkan mekanisme kerjanya.
4.
Uji stastitika untuk uji ini dilakukan hanya pada satuan eksperimental yang
secara matematika telah berada diantara dosis dan kelompok kontrol.
5.
Efek yang diperoleh melalui suatu jalur pemberian kepada hewan uji tidak
semerta-merta dapat diterapkan kepada manusia, namun harus melalui uji
lainnya.
8
2.1.4 Uji Toksisitas Akut
Uji toksisitas merupakan uji hayati yang digunakan untuk menentukan
tingkat toksisitas dari suatu zat atau bahan pencemar. Suatu senyawa kimia
bersifat “racun akut” jika senyawa tersebut dapat menimbulkan efek racun dalam
jangka waktu singkat. Suatu senyawa kimia bersifat “racun kronis” jika senyawa
tersebut dapat menimbulkan efek racun dalam jangka waktu panjang (karena
kontak yang berulang-ulang walaupun dalam jumlah yang sedikit).13
Ada tiga cara utama bagi senyawa kimia untuk dapat memasuki tubuh, yaitu
melalui paru-paru (pernafasan), mulut, dan kulit. Melalui ketiga rute tersebut,
senyawa yang bersifat racun dapat masuk ke aliran darah, dan kemudian terbawa
ke jaringan tubuh lainnya.14
Salah satu perhatian utama dalam toksisitas adalah kuantitas/dosis senyawa
yang diuji. Sebagian besar senyawa yang berada dalam bentuk murninya memiliki
sifat racun (toksik). Sebagai contohnya adalah senyawa oksigen yang berada pada
tekanan parsial 2 atm mempunyai sifat toksik. Konsentrasi oksigen yang terlalu
tinggi dapat merusak sel.11
Median Lethal Concentration (LC50) yaitu konsentrasi yang menyebabkan
kematian sebanyak 50% dari organisme uji yang dapat diestimasi dengan grafik
dan perhitungan pada waktu pengamatan tertentu, misalnya LC50 48 jam, LC50 96
jam sampai waktu hidup hewan uji.15
Berdasarkan waktu yang diperlukan, metode penambahan larutan uji dan
berdasarkan tujuannya maka uji toksisitas diklasifikasikan sebagai berikut 15 :
1.
2.
Klasifikasi menurut waktu
A.
Uji hayati jangka pendek (short term bioassay)
B.
Uji hayati jangka menengah (intermediate bioassay)
C.
Uji hayati jangka panjang (long term bioassay)
Klasifikasi menurut metode penambahan larutan
A.
Uji hayati statik (static bioassay)
B.
Uji hayati pergantian larutan (renewal biossay)
C.
Uji hayati mengalir (flow trough bioassay)
9
3.
Klasifikasi menurut tujuan penelitian
A.
Pemantauan kualitas air limbah
B.
Uji bahan atau satu jenis senyawa kimia
C.
Penentuan toksisitas serta daya tahan
D.
Pertumbuhan organisme uji
Terdapat dua tahapan dalam penelitian menggunakan LC50, yaitu 7 :
1.
Uji Pendahuluan. Untuk menentukan batas kritis konsentrasi yaitu
konsentrasi yang dapat menyebabkan kematian terbesar mendekati 50% dan
kematian terkecil mendekati 50%.
2.
Uji Lanjutan. Setelah diketahui batas
kritis, selanjutnya ditentukan
konsentrasi akut berdasarkan seri logaritma konsentrasi yang dimodifikasi
oleh Rochini dkk (1982) diacu dalam Rossiana (2006). Adapun kriteria
toksisitas suatu perairan adalah sebagai berikut:
Tabel 2.1. Kategori toksisitas berdasarkan nilai LC50
Kategori
Nilai LC50 (ug/ml)
Sangat toksik
< 30
Toksik
30 – 1000
Tidak toksik
>1000
Sumber: Wagner dkk (1993) dalam Rossiana (2006)
2.1.5 Simplisia
Simplisia adalah suatu bahan alami yang belum mengalami pengolahan
apapun selain pengeringan dan dapat digunakan sebagai obat tradisional.
Simplisia dapat digolongkan sebagai simplisia hewani dan simplisia tumbuhan.16
Jenis simplisia tumbuhan sangat beragam bergantung jenis dan bagian
tumbuhan yang dimanfaatkan seperti daun, bunga, buah, biji, rimpang, batang dan
akar.17
10
Terdapat beberapa parameter standar umum untuk simplisia yang baik, yaitu 16 :
a)
Memiliki 3 kriteria mutu suatu bahan yaitu kebenaran jenis (identifikasi),
kemurnian (bebas dari bahaya kimia, biologis, dan bahaya fisik) dan aturan
penstabilan (wadah, penyimpanan dan transportasi). Bahaya kimia adalah
bahan kimia yang tidak boleh digunakan pada simplisia. Bahaya biologis
adalah bahaya dari bakteri yang dapat menyebabkan penyakit. Bahaya fisik
adalah benda-benda yang apabila tertelan dapat menimbulkan luka misalnya
pecahan gelas, kerikil, dan jarum pentul.
b)
Memenuhi 3 kriteria paradigma obat pada umumnya yaitu Quality-SafetyEfficacy (Mutu-Aman-Manfaat).
c)
Mempunyai spesifikasi kimia yaitu informasi mengenai jenis dan kadar dari
senyawa yang terkandung di dalamnya.
Tahapan-tahapan dalam pembuatan simplisia adalah sebagai berikut 17 :
a)
Pengumpulan bahan baku
Pemilihan bahan baku simplisia dapat berupa buah, biji, daun muda, daun
tua, ranting, akar, umbi, dan rimpang bergantung keperluan peneliti.
b)
Sortasi basah
Sortasi basah merupakan proses untuk mengurangi bahan kontaminasi yang
menempel pada bahan simplisia sebelum proses pengeringan.
c)
Pencucian
Pencucian dilakukan menggunakan air mengalir agar air bekas cucian
langsung terbuang dan tidak mengkontaminasi ulang bahan yang telah
dicuci.
d)
Perajangan
Perajangan
dilakukan
bertujuan
untuk
memudahkan
pengeringan.
Perajangan dapat dilakukan dengan menggunakan pisau ataupun mesin
rajang.
e)
Pengeringan
Pengeringan bertujuan untuk mengurangi kandungan air pada simplisia.
Pengeringan biasanya dilakukan pada suhu 30° – 90° C .
11
f)
Sortasi kering
Tahap ini bertujuan untuk memisahkan benda yang tidak digunakan dan
mengurangi kontaminasi yang ada setelah pengeringan.
Setelah melalui proses di atas, simplisia dimasukkan ke dalam wadah
tertutup dan diletakkan di tempat yang memiliki suhu kamar 15° - 30° C.17
2.1.6 Metode Ekstraksi Simplisia
Simplisia merupakan bahan alami yang diperlukan sebagai bahan dasar
pembuatan obat dan belum mengalami pengolahan. Simplisia nabati adalah
simplisia yang dapat digunakan sebagai obat dan terdiri dari seluruh bagian
tanaman mulai dari akar, batang dan daun.18
Ekstraksi merupakan proses yang bertujuan untuk memperoleh kandungan
senyawa kimia dari bagian tumbuhan maupun hewan dengan pelarut yang sesuai.
Ekstrak dapat berupa ekstrak kental, padat atau cair dengan cara menyaring
simplisia.18
Ekstraksi ini didasarkan pada perpindahan massa komponen zat padat ke
dalam pelarut. Ekstraksi yang menggunakan pelarut dapat dilakukan dengan dua
cara, yaitu 18,19 :
1.
Ekstraksi cara dingin
a.
Maserasi
Maserasi merupakan suatu proses pengeksrtraksian simplisia dengan
cara menggunakan pelarut sebagai perendam dan dilakukan beberapa
kali pengadukan dengan suhu kamar yang terlindung dari cahaya.
Metode ini digunakan untuk menarik kandungan kimia yang mudah
larut dalam zat cair.
b.
Perkolasi
Perkolasi adalah proses ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru
sampai sempurna (exhaustive extraction). Metode ini umumnya
dilakukan pada temperatur ruangan dan dilakukan dengan cara
melewatkan pelarut yang sesuai secara lambat pada simplisia dalam
satu perkulator.
12
2.
Ekstraksi cara panas
a.
Refluks
Refluks merupakan metode ekstraksi dengan pelarut pada temperatur
titik didihnya selama waktu tertentu dan menggunakan jumlah pelarut
yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Ekstraksi refluks
digunakan untuk bahan yang tahan terhadap pemanasan.
b.
Digesti
Digesti adalah proses maserasi kinetik, yaitu proses pengekstraksian
dengan pengadukan terus-menerus pada temperatur yang lebih tinggi
dari suhu kamar (40-500C).
c.
Soxhlet
Soxhlet merupakan ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru dan
dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstrak terus-menerus
dengan jumlah pelarut yang relatif konstan dengan adanya pendingin
balik.
d.
Infudasi dan dekoktasi
Infudasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 900C
selama 15 menit. Metode ini umunya digunakan untuk mengekstraksi
kandungan zat aktif yang larut dalam air. Dekoktasi adalah metode
infudasi dengan waktu yang lebih lama dan menggunakan temperatur
yang sesuai dengan titik didih air.
e.
Destilasi uap
Destilasi uap merupakan metode ekstraksi untuk mendapatkan zat
aktif yang mudah menguap dari bahan segar atau simplisia dengan
berdasarkan tekanan parsial.
Pelarut yang digunakan untuk proses maserasi dapat bermacam-macam
bergantung dengan kebutuhan penelitian. Dalam penlitian ini digunakan pelarut
metanol. Metanol adalah senyawa kimia dengan rumus CH3OH atau dikenal
sebagai metil alcohol, wood alcohol atau spiritus. Pada keadaan atmosfer, metanol
berbentuk cairan yang ringan, mudah menguap, tidak berwarrna, mudah terbakar,
beracun, dan memiliki bau yang khas.20
13
Metanol diproduksi secara alamiah dari metabolisme anaerobik oleh bakteri
yang dapat digunakan sebagai bahan pendingin anti beku, pelarut, bahan bakar,
dan bahan additif bagi industri etanol.19
Metanol dapat diabsorbsi melalui kulit, paru-paru dan saluran pencernaan
kemudian didistribusikan secara luas ke dalam cairan tubuh dengan volume
distribusi 0,6 L/Kg. Metanol dimetabolisme di hati dan sekitar 3% diekskresikan
melalui paru-paru atau melalui urin.19
2.1.7 Larva Udang Artemia salina Leach
Hewan yang diuji dalam metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) adalah
Artemia salina Leach. Artemia merupakan kelompok udang yang diklasifikasikan
sebagai berikut 21 :
Kingdom
: Animalia
Subkingdom : Metazoa
Filum
: Arthropoda
Subfilum
: Mandibulata
Classis
: Crustacea
Subclassis
: Branchiopoda
Ordo
: Anostraca
Famili
: Artemiidae
Genus
: Artemia
Spesies
: Artemia Salina Leach
Gambar 2.2 Artemia salina Leach
Sumber : Bowen dan Sterling at al. 2006
14
Artemia hidup di perairan yang mengandung kadar garam tinggi dengan
suhu berkisar 25-300, oksigen terlarut sekitar 3 mg/L dan pH antara 7,5-8,5.
Artemia salina tidak dapat mempertahankan hidupnya karena tidak mempunyai
alat perlindungan diri, namun satu-satunya cara untuk mempertahankan hidupnya
hanya dengan lingkungan yang mengandung kadar garam tinggi.22
Panjang Artemia dewasa mencapai 1-2 cm dengan berat 10 mg. Nauplius
instar I (anak yang baru menetas) panjang sekitar 0,4 mm dengan berat sekitar 15
mikogram. Nauplius instar II panjangnya 0,6 mm sedangkan Nauplius instar III
sepanjang 0,7 mm. Pada Artemia dewasa, terdapat tangkai mata yang terlihat jelas
pada kedua sisi bagian kepala.21
1.
Mata nauplius
2.
Antennula
3.
Antena
4.
Calon thoracopoda
5.
Saluran pencernaan
6.
Mandibula
Gambar 2.3 Morfologi Artemia salina Leach
Sumber : Abatzopoulos et al. 1996
Artemia berkembang biak secara biseksual dan beberapa jenis lainnya
secara parhtenogenesis. Artemia dengan jenis biseksual memiliki proses
perkawinan antara betina dan induk jantan. Pada artemia jenis ini tidak dapat
berkembang
biak
dengan
parthenogenesis.
Sedangkan
artemia
jenis
parthenogenesis tidak melalui proses perkawinan dan pada jenis ini tidak dapat
berkembang biak dengan biseksual.21,22
15
Gambar 2.4 siklus hidup Artemia salina Leach
Sumber : Abatzopoulos et al. 1996
Telur yang siap menetas berwarna coklat keabu-abuan dan membutuhkan
media penetasan berupa air laut biasa (kadar garam 30 permil). Untuk mencapai
hasil penetasan yang lebih baik digunakan air berkadar garam 5 permil.21,22
Suhu air laut yang baik selama proses penetasan adalah berkisar 25-300C
dengan kadar oksigen lebih dari 2 mg/L. Untuk merangsang penetasan diperlukan
lampu penyinaran yang diletakkan disamping media penetasan. Dalam waktu 24 36 jam setalah pemasukkan telur, telur tersebut menetas menjadi nauplius.
Terdapat beberapa tahap penetasan yaitu hidrasi, pecah cangkang, dan tahap
payung atau pengeluaran.22
Artemia salina Leach memiliki kesamaan tipe DNA-dependent RNA
polimerase dengan mamalia. DNA-dependent RNA polimerase berfungsi sebagai
komponen utama pembentuk protein. Jika DNA-dependent RNA polimerase
dihambat, maka tidak akan terjadi pembukaan pilinan DNA menjadi RNA. Proses
ini menyebabkan tidak terjadinya penerjemahan kodon pada tiap–tiap kodon yang
ada di RNA, sehingga protein baru tidak dapat terbentuk. Penghentian
pembentukan protein ini akan menyebabkan gangguan metabolisme dan akhirnya
terjadi kematian sel.
16
2.1.8 Metode BSLT
Uji toksisitas dengan metode BSLT ini dapat ditentukan dari jumlah
kematian Artemia salina Leach akibat pengaruh ekstrak atau senyawa bahan alam
dengan konsentrasi tertentu yang dinyatakan dalam LC50. Nilai LC50 merupakan
angka konsentrasi ekstrak yang dapat menyebabkan kematian sebesar 50 % dari
jumlah hewan uji. Sifat toksisitas dari suatu senyawa dapat diasosiasikan sebagai
aktifitas antikanker, namun dalam metode BSLT ini tidak spesifik untuk
mendeteksi senyawa antikanker.23
Uji dengan metode BSLT ini merupakan uji awal untuk mengetahui
senyawa yang berpotensi sebagai antikanker. Keuntungan dari metode BSLT
antara lain pengerjaan yang cepat hanya membutuhkan waktu pengamatan selama
24 jam, murah, merupakan metode yang sederhana, dan hanya dibutuhkan sampel
yang sedikit, selain itu dalam pelaksanaannya tidak membutuhkan keahlian
khusus.23
2.2
Kerangka Konsep
Daun Laban Abang (Aglaia elliptica Blume) dipisahkan dari
ranting, dibersihkan, dan dibuat menjadi serbuk halus
Ekstraksi mengunakan
pelarut metanol
Ekstrak kental daun Laban Abang (Aglaia elliptica
Blume)
Pembuatan larutan uji
Uji toksisitas akut dengan metode BSLT
Kematian larva Artemia salina Leach setelah perlakuan 24 jam
Penentuan nilai LC50
17
2.3
Definisi Operasional
No
Variabel
Definisi
Cara ukur
1.
Konsentrasi
Konsentrasi
ekstrak metanol
larutan uji dalam
daun Aglaia
ppm (1 μg/mL)
Alat
ukur
Skala ukur
Hasil ukur
V1M1=V2M2
Numerik
Jumlah larva
Numerik
500 ppm
250 ppm
125 ppm
50 ppm
25 ppm
12,5 ppm
Persentase
elliptica Blume
3.
Persentase
Hasil
mortalitas larva perhitungan
mati
Artemia
jumlah larva
Leach
salina total larva yang
mati dibagi
awal
dengan jumlah
100%
dibagi
kematian
larva
dikali
larva awal dikali
100% untuk tiap
replikasi
4.
LC50
Konsentrasi
suatu zat yang
diberikan dalam
24 jam pada
hewan coba
yang dapat
membunuh 50%
hewan coba
tersebut.
Ditentukan
melalui
persamaan
garis lurus
y=mX+b
dengan
memasukkan
nilai 5 (probit
dari 50%
kematian
hewan coba)
sebagai y
sehingga
dihasilkan x
sebagai nilai
log
konsentrasi
dan antilog
sebagai nilai
LC50
Kategorik
LC50
kurang
dari 1000
ppm
termasuk
senyawa
toksik.
LC50 lebih
dari 1000
ppm
senyawa
tidak
toksik.
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1
Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan post test only
control group design untuk menguji toksisitas dari ekstrak metanol daun Laban
Abang (Aglaia elliptica Blume) terhadap larva Artemia salina Leach
menggunakan metode BSLT.
3.2
Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan Maret 2014 sampai dengan bulan
Agustus 2014 di Laboratorium Farmakognosi dan Fitofarmaka dan Laboratorium
Farmakologi FKIK Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.
3.3
Populasi dan Sampel
3.3.1 Populasi
Populasi pada penilitian ini adalah larva Artemia salina Leach
3.3.2 Sampel
3.3.2.1. Kriteria Inklusi
Larva Artemia salina Leach berumur 48 jam yang masih bergerak aktif.
3.3.2.2. Kriteria Eksklusi
Larva Artemia salina Leach yang tidak menunjukkan pergerakan
sebelum perlakuan.
3.3.2.3. Besar Sampel
Jumlah larva Artemia salina Leach yang digunakan adalah 10 ekor larva
untuk tiap sumur perlakuan. Pada penilitan ini terdapat 6 konsentrasi
yaitu
konsentrasi 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 50 ppm, 25 ppm, 12,5 ppm dan satu
kontrol negatif. Kemudian dilakukan replikasi tiga kali untuk kelompok
perlakuan. Jadi, jumlah sampel total yang diperlukan adalah 210 ekor larva
Artemia salina Leach setiap kali perlakuan.
18
19
3.3.2.4. Cara Pengambilan Sampel
Sampel diambil secara purposive random sampling. Larva Artemia salina
Leach dengan jenis dan cara penyediaan yang sama sehingga mempunyai
kesempatan yang sama untuk diseleksi sebagai sampel. Hal ini disebabkan
anggota populasi telah bersihat homogen.
3.4
Determinasi Tanaman
Determinasi dilakukan di Herbarium Bogoriense, Balai Penelitian dan
Pengembangan Botani Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi, LIPI Bogor.
Determinasi dilakukan untuk mengetahui struktur dan morfologi makroskopis
daun Aglaia elliptica Blume.
3.5
Bahan yang Diuji
Sejumlah 4 kg daun basah Aglaia elliptica Blume diperoleh dari Kebun
Raya Bogor dan dipersiapkan simplisia kering dari daun Aglaia elliptica Blume
tersebut. Daun tersebut dipisiahkan dari buah dan rantingnya kemudian dikeringanginkan disuhu ruangan supaya daun tersebut kering dan siap untuk diblender.
Daun yang sudah kering dan terpisah dari rantingnya, kemudian dihaluskan
dengan cara diblender sampai berbentuk serbuk halus sehingga didapatkan 2 kg
serbuk halus simplisia kering daun Aglaia elliptica Blume. Serbuk simplisia
kering ini yang akan diekstrak.
3.6
Alat dan Bahan Penelitian
3.6.1 Alat Penelitian
Rotatory evaporator Eyela, refrigerator, oven, destilator, corong, bejana
maserasi, Erlenmeyer 100 ml, mikropipet 10 ml, mikropipet 5 ml, mikropipet 1
ml, blender, neraca analitik, pipet tetes, spatula, desk lamp, erator, sendok plastik,
hand gloves, seperangkat alat penetasan telur (wadah plastik berbentuk kotak dan
sterofoam), lup, cawan petri, cawan penguap, kaca arloji, microplate.
20
3.6.2 Bahan Penelitian
Air laut, akuades, aluminium foil, serbuk kering daun Aglaia elliptica
Blume, kertas saring, pelarut metanol teknis (BRATACO), telur udang Artemia
salina Leach (BBAT), dimetilsulfoksida 2% (DMSO 2%)(BIOMATIK≠A2A424).
3.7
Cara Kerja Penelitian
3.7.1 Ekstraksi Daun Aglaia elliptica Blume dengan Maserasi
Metode ekstraksi dilakukan secara maserasi. Simplisia yang sudah
berbentuk serbuk kering ditimbang sebanyak 2000 g dan dimasukkan kedalam
bejana maserasi (terlindung dari cahaya). Kemudian dimaserasi selama 2 hari
dengan menggunakan pelarut metanol yang sebelumnya sudah didestilasi. Selama
proses maserasi dilakukan pengocokan sekali sehari agar pelarut masuk ke seluruh
permukaan serbuk simplisia dan meratakan konsentrasi larutan. Perendaman
dilakukan sampai filtrat mendekati bening.24
Selanjutnya, hasil rendaman disaring dengan menggunakan kertas saring
untuk memisahkan filtrat dan ampasnya. Ampasnya diambil dan direndam
kembali menggunakan metanol untuk mengulangi proses maserasi selama 2 hari.
Selanjutnya filtrat dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 450C hingga
didapatkan
ekstrak
kental
metanol
daun
Aglaia
elliptica
Blume.
Ekstrak yang sudah kental kemudian dimasukkan ke dalam cawan penguap.
Kemudian ekstrak kental dalam cawan penguap dioven dengan suhu 450C selama
tiga hari untuk memastikan ekstrak bebas dari pelarut metanol. Selanjutnya,
ekstrak yang sudah bebas dari pelarut metanol ditutup dengan aluminium foil dan
diletakkan di dalam refrigerator. Hasil akhir didapatkan ekstrak kental metanol
daun Aglaia elliptica Blume sebanyak 50 gram. Setelah didapatkan ekstrak kental
metanol daun Aglaia elliptica Blume, kemudian dilakukan penghitungan
persentase rendaman.
21
3.7.2 Penetasan Larva Udang
Wadah plastik berbentuk kotak disiapkan untuk penetasan telur udang.
Wadah yang diperlukan sebanyak dua buah. Satu wadah dibagi menjadi dua
bagian, yaitu ruang terang dan ruang gelap. Kedua bagian tersebut dibatasi dengan
sterofoam. Pada bawah sterofoam dilubangi sebagai tempat keluarnya telur yang
telah menetas.25
Sejumlah 1 liter air laut dimasukkan ke dalam wadah hingga kedua lubang
pada sterofoam terendam. Air laut yang digunakan terlebih dahulu diukur pH
dengan kertas lakmus, pH yang digunakan berkisar 8-9.3,25
Kemudian salah satu ruang dalam wadah tersebut diberi penerangan dengan
cahaya lampu pijar untuk menghangatkan suhu dalam wadah penetasan dan
merangasang proses penetasan. Untuk penerangan, lampu dinyalakan selama 24
jam untuk menetaskan telur. Ruangan yang satunya diisi 1 gram telur udang
kemudian ditutup dengan aluminium foil dan lakban agar tidak terkena cahaya
lampu.25
Setelah 24 jam, telur akan menetas menjadi larva dan akan bergerak secara
alamiah menuju ruang terang. Kemudian larva yang sehat dan aktif bergerak
dipindahkan ke wadah satunya dengan keadaan yang sama (air laut dengan pH
berkisar 8-9 dan seluruh bagian wadah terkena cahaya lampu pijar). Setelah 24
jam kemudian, larva sudah berumur 48 jam. Larva yang digunakan untuk hewan
uji pada metode BSLT adalah larva yang sudah berumur 48 jam, aktif bergerak
dan bersifat fototropik.3,25
3.7.3 Pembuatan Konsentrasi Ekstrak yang Diuji
Dalam pembuatan konsentrasi ekstrak yang efektif untuk membunuh larva
Artemia salina Leach, dilakukan trial atau orientasi dengan konsentrasi ekstrak
sebesar 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 50 ppm, 25 ppm, dan 12,5 ppm.
Ekstrak kental metanol daun Aglaia elliptica Blume ditimbang dengan
menggunakan neraca analitik hingga mencapai berat 2000 mg. Ekstrak kental
tersebut dimasukkan ke dalam tabung Erlenmeyer kemudian dilarutkan dengan
DMSO 2% sebanyak 2 ml.
22
Selanjutnya, diaduk dan ditambah akuades sebanyak 98 ml secara perlahan
sehingga di dalam tabung Erlenmeyer terdapat 100 ml larutan dengan konsentrasi
20.000 ppm, konsentrasi ini yang digunakan sebagai larutan induk.
Kemudian membuat larutan uji dengan konsentrasi 1000 ppm, 500 ppm,
250 ppm, 50 ppm dan 25 ppm, dengan menggunakan rumus pengenceran :
V1M1=V2M2
Keterangan :
V1 = Volume awal
M1 = Konsentrasi awal
M2 = Konsentrasi akhir
V2 = Volume akhir
Konsentrasi tersebut masing-masing akan menjadi sebesar ½ dari
konsentrasi awal karena di dalam microplate sudah terdapat air laut sebanyak 1
ml, sehingga di dalam microplate terdapat 2 ml larutan yang berasal dari air laut
sebanyak 1 ml dan larutan konsentrasi awal sebanyak 1 ml.
Dari tindakan tersebut didapatkan konsentrasi akhir masing-masing sebesar
500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 25 ppm, dan 12,5 ppm yang ada di dalam
microplate.
3.7.4 Prosedur Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Pada uji BSLT digunakan microplate yang berisi 24 sumur. Langkah
pertama yang dilakukan adalah membagi 6 kelompok sumur untuk masing –
masing konsentrasi dan satu kelompok sumur untuk kontrol negatif (air laut).
Percobaan ini dilakukan pengulangan 3 kali (triplo) sehingga masing – masing
perlakuan mendapatkan 3 sumur.
Sebagian larva Artemia salina Leach berumur 48 jam dan masih bergerak
aktif dipindahkan ke dalam cawan petri. Untuk memudahkan pengamatan dan
perhitungan larva dapat menggunakan lup. Pada masing-masing sumur,
dimasukkan 10 larva udang menggunakan pipet tetes dan dicampur 1 ml air laut
yang terlebih dahulu diukur pHnya.
23
Setelah itu, pada setiap sumur diteteskan sebanyak 1 ml masing-masing
konsentrasi kecuali pada kontrol negatif yang dimasukkan adalah 1 ml air laut.
Sehingga volume dalam 1 sumur menjadi 2 ml yaitu 1 ml ekstrak dan 1 ml air
laut.
Microplate dibiarkan di udara terbuka selama 24 jam. Setelah 24 jam,
kemudian dihitung jumlah larva yang masih hidup pada masing-masing tabung
reaksi. Kriteria standar untuk mengukur kematian larva udang yaitu apabila larva
udang tidak menunjukkan pergerakan selama beberapa detik pengamatan.
Perhitungan secara manual yaitu dengan mengamati larva di dalam tabung
reaksi dengan bantuan lup, kemudian diamati dalam kaca arloji dengan bantuan
cahaya. Jumlah larva yang mati dihitung dengan mengurangkan jumlah total larva
pada tiap konsentrasi dengan jumlah larva yang masih hidup.
1 ml
ekstrak
1000 ppm
+ 1 ml air
laut
1 ml
ekstrak
1000 ppm
+ 1 ml air
laut
1 ml
ekstrak
1000 ppm
+ 1 ml air
laut
1 ml
ekstrak 50
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 50
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 50
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 500
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 500
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 500
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 25
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 25
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 25
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 250
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 250
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 250
ppm + 1 ml
air laut
2 ml air
laut
2 ml air
laut
2 ml air
laut
1 ml
ekstrak 100
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 100
ppm + 1 ml
air laut
1 ml
ekstrak 100
ppm + 1 ml
air laut
Tabel 3.1 Ilustrasi Konsentrasi Ekstrak pada microplate
24
3.8
Alur Penelitian
1 gram telur Artemia salina Leach
Penetasan telur Artemia salina Leach
Larva Artemia salina Leach berumur 48 jam
Larva Artemia salina Leach dengan jenis dan cara penyediaan yang sama
dan telah bersifat homogen
Pengambilan larva secara random
Sumur A: 10 larva + 1 ml ekstrak 1000 ppm + 1 ml air laut
Sumur B : 10 larva + 1 ml ekstrak 500 ppm + 1 ml air laut
Sumur C : 10 larva + 1 ml ekstrak 250 ppm + 1 ml air laut
Sumur D : 10 larva + 1 ml ekstrak 100 ppm + 1 ml air laut
Sumur E : 10 larva + 1 ml ekstrak 50 ppm + 1 ml air laut
Sumur F : 10 larva + 1 ml ekstrak 25 ppm + 1 ml air laut
Sumur 19 – 21 : 10 larva + 2 ml air laut
Volume akhir masing masing sumur adalah 2 ml
Dilakukan replikasi 3 kali pada tiap konsentrasi
Setelah 24 jam pemberian ekstrak, dilakukan perhitungan jumlah larva yang mati
Menghitung persentase kematian larva pada tiap konsentrasi
Menentukan LC50 dengan metode probit
Gambar 3.2 Bagan Alur Penelitian
25
3.9
Pengolahan dan Analisis Data
Melakukan
pengamatan
dengan
menghitung
persentase
kematian
(mortalitas) larva Artemia salina Leach pada tiap konsentrasi. Hasil perhitungan
kematian diperoleh dari hasil perkalian rasio dengan 100% untuk tiap konsentrasi.
Setelah itu, dibandingkan dengan kontrol negatif dan dilakukan analisis sehingga
didapatkan nilai LC50. Dengan menggunakan metode analisis probit manual, maka
dapat diketahui nilai probit dengan mengkonversi nilai persen kematian larva pada
tiap konsentrasi ke nilai probit.
Setelah mendapatkan persentase kematian, nilai probit dari tiap kelompok
hewan uji ditentukan melalui tabel probit. Kemudian menentukan log konsentrasi
dan dibuat grafik dengan persamaan garis lurus hubungan antara nilai probit
dengan log konsentrasi dengan rumus y=mX+b.21
Nilai slope (m) dihitung dengan rumus :
Nilai Intersep (b) dihitung dengan rumus :
Metode analisis dapat pula menggunakan Microsoft Office Excel dengan
membuat grafik persamaan garis lurus hubungan antara nilai probit dengan log
konsentrasi. Nilai LC50 dapat dihitung dengan persamaan garis lurus tersebut
dengan memasukkan nilai 5 (probit 50% kematian hewan uji) sebagai y sehingga
dihasilkan x sebagai nilai log konsentrasi. Antilog nilai x tersebut merupakan nilai
LC50.21
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1
Hasil Ekstraksi Daun Aglaia elliptica Blume
Penelitian ini menggunakan daun Aglaia Elliptica Blume. Sebelumnya daun
tersebut dideterminasi terlebih dahulu untuk menghindari kesalahan dalam
pengambilan spesies tanaman. Daun yang sudah disortir dan telah melalui tahap
pengeringan, kemudian diblender untuk mendapatkan serbuk simplisia kering.
Simplisia yang sudah berbentuk serbuk lebih mudah dalam proses ekstraksi
karena semakin tinggi tingkat kehalusan maka permukaan simplisia akan semakin
besar sehingga memudahkan pengambilan zat aktif dalam simplisia tersebut.
Namun tingkat kehalusan yang terlalu tinggi menyebabkan pelarut akan sulit
dipisahkan setelah proses ekstraksi.17
Metode ekstrak yang dilakukan adalah metode maserasi. Metode maserasi
lebih mudah dalam pelaksanaannya dan tidak memerlukan peralatan yang
spesifik. Selain itu metode maserasi dapat digunakan untuk jenis senyawa yang
tahan panas maupun yang tidak tahan panas dan dapat digunakan untuk jenis
senyawa yang belum diidentifikasi.17
Setelah didapatkan hasil maserasi, kemudian dilakukan evaporasi dengan
menggunakan rotatory evaporator untuk menguapkan pelarut metanol sehinga
didapatkan ekstrak kental daun Laban Abang. Peneliti melakukan pengukuran
berat ekstrak kental metanol daun Aglaia ellipica Blume yang diperoleh dari hasil
maserasi.
Tabel 4.1 Data Berat Ekstrak Kental Daun Aglaia elliptica Blume
Nama Simplisia
Berat Ekstrak Kental
Aglaia elliptica Blume
50 gram
Pada proses ekstraksi dilakukan penambahan larutan DMSO 2%
sebanyak 2 ml untuk membantu proses pembuatan larutan ekstrak. DMSO bersifat
toksik jika kadar DMSO ≥ 7,5 % , namun pada penelitian ini kadar DMSO yang
digunakan ≤ 2 %. Kadar DMSO tersebut termasuk kategori tidak toksik.26
26
27
4.2
Hasil Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Daun Laban Abang yang sudah melalui proses ekstraksi dengan pelarut
metanol siap digunakan untuk uji BSLT. BSLT sebagai uji pendahuluan untuk
mengetahui kadar toksisitas ekstrak metanol daun Laban Abang. Uji toksisitas
dengan metode BSLT lebih mudah dalam pengerjaannya, cepat mendapatkan
hasilnya, dan murah dalam pembiayaannya.6
Larutan ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume dibuat menjadi 6
konsentrasi untuk terlebih dahulu digunakan sebagai orientasi, yaitu konsentrasi
500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 50 ppm, 25 ppm, dan 12,5 ppm dengan ditambah
sisipan kontrol negatif yang hanya berisi air laut dan larva udang. Penambahan
kontrol negatif dilakukan untuk mengetahui pengaruh air laut maupun faktor lain
terhadap kematian larva. Sehingga kematian larva dapat dipastikan karena efek
dari ekstrak yang ditambahkan.
Setelah dilakukan orientasi kosentrasi untuk mendapatkan persesentase
kematian larva pada rentang 10 % -90 % maka didapatkan konsentrasi uji yaitu
500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 50 ppm, 25 ppm, dan 12,5 ppm.
Uji BSLT ini dilakukan masing-masing sebanyak 3 kali perlakuan dan
dikerjakan 3 kali pengulangan (triplo) untuk memperoleh keakuratan data dan
mengurangi kesalahan dalam proses penelitian.
Pada uji BSLT memerlukan larva Artemia salina Leach yang diperoleh
dengan cara penetasan telur Artemia salina Leach. Penetasan telur dapat
dilakukan dalam wadah plastik yang berbentuk kotak dengan menggunakan media
air laut yang terbagi menjadi bagian terang dan bagian gelap. Kedua bagian
tersebut dipisahkan oleh sekat yang berlubang. Pada bagian gelap dimasukkan
telur Artemia salina Leach. Selama proses penetasan, larva akan berpindah ke
daerah yang terang melalui sekat yang berlubang tersebut. Pada bagian terang
diberi penerangan cahaya lampu yang sesuai untuk penetasan, yaitu sebesar 40-60
watt dengan suhu berkisar 25-300C.6
Setelah melalui proses penetasan selama 24 jam, telur menjadi larva atau
dengan nama lain nauplii. Nauplii yang digunakan untuk BSLT adalah nauplii
yang berumur 48 jam dan aktif bergerak. Pada fase nauplii ini terjadi fase paling
aktif membelah secara mitosis sehingga identik dengan sel kanker.
28
Nauplii yang berumur dibawah 48 jam mempunyai epitel saluran
pencernaan yang belum dapat berkontak dengan medium eksternal dan nauplii ini
hanya hidup dari kantung kuning telurnya sehingga dikhawatirkan kematian larva
tidak berhubungan dengan efek toksisitas dari ekstrak daun Aglaia elliptica
Blume.25
Larva yang digunakan sebanyak 10 ekor untuk setiap perlakuan konsentrasi
ekstrak dengan penambahan kontrol negatif dan dilakukan pengulangan sebanyak
tiga kali untuk masing-masing perlakuan sehingga jumlah larva Artemia salina
Leach seluruhnya berjumlah 210 ekor larva.
Perlakuan terhadap hewan uji dilakukan dengan 6 konsentrasi ekstrak yaitu
500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 50 ppm, 25 ppm, dan 12,5 ppm, disertai 1 kontrol
negatif yang hanya berisi air laut tanpa penambahan konsentrasi ekstrak. Pada
masing-masing sumur perlakuan dimasukkan 1 ml air laut bersamaan dengan 10
ekor larva, kemudian dimasukkan 1 ml dari masing-masing konsentrasi ekstrak
kecuali untuk kontrol negatif ditambahkan 1 ml air laut.
Pengamatan dilakukan 24 jam setelah perlakuan konsentrasi ekstrak.
Perhitungan kematian larva dilakukan dengan cara mengamati pergerakan larva
selama beberapa detik. Kematian larva dihitung jika tidak ada pergerakan pada
larva tersebut. Berikut ini hasil uji toksisitas akut dengan metode BSLT dari
ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume.
Tabel 4.2. Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Metanol daun Aglaia elliptica
Blume terhadap Larva Artemia salina Leach.
Angka Kematian Larva Artemia salina Leach
dari 10 Larva
Konsentrasi ekstrak pada sumur uji (ppm)
Sumur
Kontrol
negatif
500
250
125
50
25
12,5
1
9
8
6
3
2
1
0
2
9
8
7
5
3
1
0
3
10
9
7
4
2
1
0
Total
Rata-rata
kematian
% kematian
28 ± 0,58
25 ± 0,58
20 ± 0,58
12 ± 1,00
7 ± 0,58
3 ± 0,00
0
0.93
0.83
0.66
0.40
0.23
0.10
0
93.33
83.33
66.67
40.00
23.33
10.00
0.00
29
Total kematian dihitung dengan menjumlahkan larva yang mati pada setiap
konsentrasi. Rata-rata kematian larva diperoleh dari total kematian larva pada tiap
konsentrasi dibagi dengan jumlah total larva awal pada konsentrasi yang sama.
Perhitungan persentase kematian larva pada setiap konsentrasi diperoleh dengan
cara rata-rata kematian pada tiap konsentrasi dikali 100%.
100.00
93.33
90.00
83.33
80.00
66.67
70.00
60.00
50.00
40.00
40.00
30.00
20.00
10.00
Presentase Kematian
23.33
10.00
0.00
12.5
25
50
125
250
500
Konsentrasi ekstrak pada sumur uji (ppm)
Gambar 4.1 Grafik Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Aglaia elliptica
Blume Terhadap Kematian Larva Artemia salina Leach.
Berdasarkan grafik diatas, jumlah kematian larva terbanyak terdapat pada
konsentrasi 500 ppm. Hal ini
sesuai dengan teori, bahwa semakin tinggi
konsentrasi ekstrak semakin banyak jumlah larva yang mati. Selain itu dari
persentase kematian larva tersebut dapat disimpulkan bahwa semakin tinggi
konsentrasi ekstrak menghasilkan jumlah kematian larva yang semakin tinggi
pula.
30
Tabel 4.3 Penetapan LC50
Konsentrasi
Log
Persentase
Konsentrasi (X)
Kematian
1.0969
1.3979
1.6989
2.0969
2.3979
2.6989
11.3874
10.00
23.33
40.00
66.67
83.33
93.33
12,5
25
50
125
250
500
Jumlah
Probit (Y)
X2
Y2
XY
3.7184
4.2710
4.7467
5.4289
5.9661
6.4985
30.6296
1.2031
1.9541
2.8862
4.3969
5.7499
7.2840
23.4742
13.8264
18.2414
22.5311
29.4729
35.5943
42.2305
162.01
4.0787
5.9704
8.0641
11.3838
14.3075
17.5388
61.3433
Nilai slope (m) dihitung dengan rumus :
= 1,7246
Nilai Intersep (b) dihitung dengan rumus :
= 1.8317
Sehingga didapatkan persamaan garis lurus hubungan antara Y (nilai probit
dari persentase kematian) dengan X (log konsentrasi) adalah Y=mX+b
Y = 1,7246x + 1,8317
5 = 1,7246x + 1,8317
5 – 1,8317 = 1,7246x
3,1683 = 1,7246x
X = 1,8371
LC50 = antilog X = antilog 1,8371 = 68.7226 ppm
Berdasarkan hasil perhitungan manual tersebut didapatkan LC50 sebesar
68,7226 ppm, sehingga ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume memiliki
sifat toksisitas yang tinggi.
31
Gambar 4.2 Grafik Regresi Linier Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Aglaia
elliptica Blume Terhadap Nilai Probit
Log Konsentrasi
Dari grafik diatas didapatkan persamaan garis lurus Y = 1.723x + 1.833.
Grafik tersebut menunjukkan log konsentrasi terhadap nilai probit yang didapat
dari presentase kematian larva.
Grafik analisis regresi diatas menunjukkan bahwa semakin besar
konsentrasi yang digunakan maka semakin besar nilai persentase kematian larva
Artemia salina Leach
Perhitungan LC50 menggunakan Microsoft Office Excel didapatkan hasil
sebagai berikut :
Y = 1,723x + 1,833
5 = 1,723x + 1,833
5 – 1,833 = 1,723x
3, 167 = 1,723x
X = 1,838
LC50 = antilog X = antilog 1,838 = 68,87 ppm
32
Perhitungan dengan cara manual dan menggunakan Microsoft Office Excel
menunjukan hasil yang tidak jauh berbeda yaitu pada cara manual didapatkan
LC50 sebesar 68,7226 ppm sedangkan perhitungan dengan Microsoft Office Excel
didapatkan LC50 sebesar 68,87 ppm. Perbedaan hasil tersebut tidak signifikan
karena termasuk dalam kategori toksik namun untuk mengindari human error
dalam perhitungan LC50, peniliti mengambil hasil dari perhitungan menggunakan
Microsoft Office Excel.
Berdasarkan penelitian lain mengenai uji toksisitas akut ekstrak etanol daun
Aglaia elliptica Blume didapatkan hasil LC50 sebesar 373,23 ppm. Penelitian
tersebut dengan penelitian yang dilakukan ini memiliki kesamaan dalam
penggunaan daun Aglaia elliptica Blume, namun memiliki perbedaan dalam
penggunaan pelarut. Perbedaan tersebut menyebabkan hasil uji toksisitas akut
ekstrak daun Aglaia elliptica Blume berbeda.8
Pengujian terhadap ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume
didapatkan konsentrasi untuk membunuh 50% larva Artemia salina Leach (LC50)
adalah 68,87 ppm sehingga ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume pada
penelitian ini termasuk dalam kategori toksik dan memiliki potensi sebagai
senyawa antitumor atau antikanker.5
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1
Simpulan
1. Hasil perhitungan nilai LC50 dari ekstrak metanol daun Laban Abang
(Aglaia elliptica Blume) dengan menggunakan analisis probit dan
Microsoft Office Excel adalah 68,87 ppm sehingga diklasifikasikan
sebagai toksik.
2. Ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume memiliki potensi toksisitas
akut terhadap larva Artemia salina Leach dengan menggunkan metode
Brine Shrimp Lethality test (BSLT) dan berpotensi sebagai senyawa
antitumor atau antikanker.
5.2
Saran
1. Perlu dilakukan penelitian selanjutnya untuk mengetahui kandungan zat
yang memiliki potensi toksik di dalam ekstrak metanol daun Aglaia
elliptica Blume.
2. Perlu melakukan pengukuran kadar abu dan kadar air pada ekstrak
metanol daun Aglaia elliptica Blume supaya nilai toksisitas akut LC50
lebih terukur.
3. Membandingkan aktivitas antikanker ekstrak daun Aglaia elliptica
Blume dengan obat antikanker yang lazim digunakan oleh masyarakat
seperti methotrexate.
4. Perhitungan LC50 pada penelitian ini dilakukan oleh lebih dari satu orang
untuk menghindari kesalahan pada saat perhitungan.
33
DAFTAR PUSTAKA
1. WHO. International Agency for Research on Cancer. Globocan 2008:
Estimated cancer Incidence, Mortality, Prevalence and Disability-adjusted life
years (DALYs) Worldwide in 2008 [Internet]. 2014 [cited 2014 Jun 21].
Available from: http://www.globocan.iarc.fr/
2. Klasco RK. Methotrexate [Internet]. 2006 [cited 2014 Jun 23]. Available
from: http://www.periodicos.capes.gov.br/
3. Pa Batugal, J Kanniah, Lee SY and JT Oliver. Medicinal Plants Research in
Asia. 2004;1(8):33-36.
4. Keputusan
Menteri
Kesehatan
Republik
Indonesia
Nomor
381/MENKES/SK/III/2007 mengenai Kebijakan Obat Tradisional Nasional
[internet].
2007
[cited
13
Juli
2014];
Available
from:
http://perpustakaan.depkes.go.id:8180/bitstream/
5. Ranasasmita, Raafqi. Aktivitas Antikanker Ekstrak Etanol Daun Aglaia
elliptica Blume pada Tikus Betina yang Diinduksi 7,12-dimetilbenz antrasena.
Bogor: FMIPA; 2008.
6. Pisutthanan, Sirintorn. Brine Shrimp Lethality Activity of Thai Medicinal
Plants in the Family Meliaceae. Naresuan University Journal. 2004; 12(2): 1318.
7. Juniarti, Delvi Osmeli, Yuhernita. Kandungan Senyawa Kimia, Uji Toksisitas
(Brine Shrimp Lethality Test) dan Antioksidan (1,1-Diphenyl-2-Pikrilhydrazyl)
Dari Ekstrak daun Saga (Abrus Precatorius L.). Makara Sains. 2009
April;13(1): 50-54.
8. Wibowo, Agung. Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol Daun Laban Abang
(Aglaia elliptica Blume) Dan Fraksi-fraksinya Terhadap Galur Sel kanker
Payudara MCF-7. Jakarta: Pusat Teknologi Farmasi dan Medik; 2009.
9. Dung, Vu Van. Vietnam Forest Trees [internet]. 1996 [cited 26 Jun 2014];
Available from: http://www.biotik.org/laos/species/a/aglel/aglel_en.html
10. Frank CL. Toksikologi Dasar: Asas, Organ Sasaran, dan Penilaian Resiko. 2nd
ed. Jakarta: UI Press; 1995.
11. Priyanto. Toksikologi: Mekanisme, Terapi Antidotum, dan Penilaian Resiko.
Depok: Leskonfi; 2009.
12. Hodgson, E. Dan Levi, P.E. ATextbook of Modern Toxicology. 2nd ed.
Singapore: McGraw-Hill Higher Education; 2000.
34
35
13. Dhahiyat, Yayat. Uji Toksisitas Akut Lc-50 Dan Kronis Terhadap Daphnia
Carinata King. Bandung: Universitas Padjadjaran; 2009.
14. Departemen Farmakologi dan Terapeutik. Farmakologi dan Terapi. Edisi 5.
Jakarta: FKUI; 2007.
15. Pourfraidon, Zahra. Biological activity of prominent anti-cancer plants using
Brine Shrimp Lethality Test. Journal of Microbial World. 2009.
16. Depkes R.I. Parameter Standar umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Media Litbang
kesehatan [internet]. 2002 [cited 13 Juli 2014]; Available from:
http://ejournal.litbang.depkes.go.id/index.php/MPK/article/download/1070/553
17. Herawati, Dian. Cara Produksi Simplisia yang Baik. Bogor: Seafast center;
2012.
18. Agoes, Goeswin. Teknologi Bahan Alam. Bandung: Penerbit ITB; 2007.
19. Tiwari P. Phytochemical screening and extraction: A review. Internationale
Pharmaceutica Sciencia (IPS). 2011.
20. Paine A, Davan AD. Methanol [internet]. 2004 [cited 2014 May 5]; Available
from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8490201.
21. Asem A, Pouyani NR dan Escalente PD LR. The genus Artemia Leach. Iran:
Lat. Am. J Aquat Res; 2010. P. 501-506.
22. Ramdhini, RN. Uji toksisitas terhadap Artemia salina Leach dan toksisitas akut
komponen bioaktif Pandanu conoideus var. Conoideus Lam sebagai kandidat
antikanker. Surakarta: Universitas Sebelas Maret; 2010.
23. McLauughlin, JL and Rogers LL. The use of biological assays to evaluate
botanicals. Drug Information Journal. 1998;32:512-524.
24. Nurhayati APD, Abdulgani N, Febrianto R. Uji Toksisitas Ekstrak Eucheuma
Alvarezii Terhadap Artemia Salina Sebagai Studi Pendahuluan Potensi
Antikanker. Akta Kimindo. 2006;2:41– 46.
25. Panggabean, MG. Teknik penetasan dan pemanenan Artemia salina Leach.
Jakarta: Pusat Penelitian Ekologi Laut, Lembaga Oseanologi Nasional-LIPI;
1984:9(2): 57-65.
26. Amalia FR. Pengaruh Glutathione Terhadap Kualitas Semen Kambing Boer
Post Thawing Dalam Pengencer Yang Mengandung Dimetylsulfoxie (DMSO).
Malang: Universitas Brawijaya; 2012.
36
LAMPIRAN
Lampiran 1
37
Lampiran 2
Tabel Nilai probit
38
39
Lampiran 3
Gambar Alat dan Bahan Penelitian
Gambar 6.1 Simplisia daun Aglaia elliptica
Blume
Gambar 6.3 Penyaringan Hasil Maserasi
Gambar 6.5 Pembuatan Larutan Induk
Gambar 6.2 Tabung Maserasi
Gambar 6.4 Mesin rotatory evaporator
Gambar 6.6 Eksrak Kental Daun Aglaia
elliptica Blume
40
Gambar 6.7 Penimbangan Ekstrak Kental
Daun Aglaia elliptica Blume
Gambar 6.9 Pembuatan Konsentrasi
Gambar 6.11 Media Perkembangbiakan
larva
Gambar 6.8 Microplate BSLT
Gambar 6.10 Kaleng Larva Udang Artemia
salina Leach
Gambar 6.12 Hasil BSLT
41
Lampiran 4
Perhitungan Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Aglaia elliptica Blume
Konsentrasi larutan induk =
=
=
ekstrak metanol daun Aglaia elliptica Blume (ug)
Volume aquades (mL)
2g
(98 mL aquades + 2 mL DMSO 2%)
.
.
= 20.000 ug/mL = 20.000 ppm
Perhitungan Penggunaan DMSO
Perhitungan kadar DMSO 2 % pada larutan induk 20.000 ppm
=
2 ml DMSO 2 %
100 ml aquades
x 100 %
= 0,02 x 100 %
=2%
Untuk mendapatkan ekstrak dengan konsentrasi 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 50
ppm, 25 ppm, 12,5 ppm dilakukan dengan menggunakan rumus pengenceran
yaitu V1M1 = V2M2
a. Konsentrasi ekstrak 500 ppm
Untuk mendapatkan konsentrasi 500 ppm di dalam microplate, dibuat
konsentrasi 1000 ppm terlebih dahulu di dalam tabung reaksi sebanyak 20
mL
V1M1 = V2M2
V1 x 20.000 ug/mL = 1000 ug/mL x 20 mL
V1 =
20.000 ug
20.000 ug/mL
= 1 mL
42
Maka diambil 1 mL dari larutan induk dan 19 mL aquades kemudian
dimasukkan ke tabung reaksi. Konsentrasi ekstrak 500 ppm di dalam
microplate didapatkan dengan cara :
V1M1 = V2M2
V1 x 1000 ug/mL = 500 ug/mL x 2 mL
V1 =
1000 ug
1000 ug/mL
= 1 mL
Maka diambil 1 mL dari larutan konsentrasi 1000 ppm kemudian
dimasukkan ke dalam microplate yang sebelumnya telah diisi dengan 1
mL air laut beserta 10 ekor larva udang, sehingga konsentrasi ekstrak di
dalam microplate menjadi 500 ppm.
b.
Konsentrasi ekstrak 250 ppm
Untuk mendapatkan konsentrasi 250 ppm di dalam microplate, dibuat
konsentrasi 500 ppm terlebih dahulu di dalam tabung reaksi sebanyak 4
mL
V1M1 = V2M2
V1 x 1000 ug/mL = 500 ug/mL x 4 mL
V1 =
2000 ug
1000 ug/mL
= 2 mL
Maka diambil 2 mL dari larutan 1000 ppm dan 2 mL aquades kemudian
dimasukkan ke tabung reaksi. Konsentrasi ekstrak 250 ppm di dalam
microplate didapatkan dengan cara :
V1M1 = V2M2
V1 x 500 ug/mL = 250 ug/mL x 2 mL
V1 =
500 ug
500 ug/mL
= 1 mL
Maka diambil 1 mL dari larutan konsentrasi 500 ppm kemudian di
masukkan ke dalam microplate yang sebelumnya telah diisi 1 mL air laut
beserta 10 ekor larva udang, sehingga konsentrasi ekstrak di dalam
microplate menjadi 250 ppm.
43
c.
Konsentrasi ekstrak 125 ppm
Untuk mendapatkan konsentrasi 125 ppm di dalam microplate, dibuat
konsentrasi 250 ppm terlebih dahulu di dalam tabung reaksi sebanyak 4
mL
V1M1 = V2M2
V1 x 1000 ug/mL = 250 ug/mL x 4 mL
V1 =
1000 ug
500 ug/mL
= 2 mL
Maka diambil 1 mL dari larutan 1000 ppm dan 2 mL aquades kemudian
dimasukkan ke tabung reaksi. Konsentrasi ekstrak 125 ppm di dalam
microplate didapatkan dengan cara :
V1M1 = V2M2
V1 x 250 ug/mL = 125 ug/mL x 2 mL
V1 =
250 ug
250 ug/mL
= 1 mL
Maka diambil 1 mL dari larutan konsentrasi 250 ppm kemudian di
masukkan ke dalam microplate yang sebelumnya telah diisi 1 mL air laut
beserta 10 ekor larva udang, sehingga konsentrasi ekstrak di dalam
microplate menjadi 125 ppm.
d.
Konsentrasi ekstrak 50 ppm
Untuk mendapatkan konsentrasi 50 ppm di dalam microplate, dibuat
konsentrasi 100 ppm terlebih dahulu di dalam tabung reaksi sebanyak 4
mL
V1M1 = V2M2
V1 x 1000 ug/mL = 100 ug/mL x 4 mL
V1 =
400 ug
1000 ug/mL
= 0,4 mL
44
Maka diambil 0,4 mL dari larutan 1000 ppm dan 3,6 mL aquades
kemudian dimasukkan ke tabung reaksi. Konsentrasi ekstrak 50 ppm di
dalam microplate didapatkan dengan cara :
V1M1 = V2M2
V1 x 100 ug/mL = 50 ug/mL x 2 mL
100 ug
V1 = 100 ug/mL = 1 mL
Maka diambil 1 mL dari larutan konsentrasi 100 ppm kemudian di
masukkan ke dalam microplate yang sebelumnya telah diisi 1 mL air laut
beserta 10 ekor larva udang, sehingga konsentrasi ekstrak di dalam
microplate menjadi 50 ppm.
e.
Konsentrasi ekstrak 25 ppm
Untuk mendapatkan konsentrasi 25 ppm di dalam microplate, dibuat
konsentrasi 50 ppm terlebih dahulu di dalam tabung reaksi sebanyak 4 mL
V1M1 = V2M2
V1 x 1000 ug/mL = 50 ug/mL x 4 mL
V1 =
200 ug
1000 ug/mL
= 0,2 mL
Maka diambil 0,2 mL dari larutan 1000 ppm dan 3,8 mL aquades
kemudian dimasukkan ke tabung reaksi. Konsentrasi ekstrak 25 ppm di
dalam microplate didapatkan dengan cara :
V1M1 = V2M2
V1 x 50 ug/mL = 25 ug/mL x 2 mL
V1 =
50 ug
50 ug/mL
= 1 mL
Maka diambil 1 mL dari larutan konsentrasi 50 ppm kemudian di
masukkan ke dalam microplate yang sebelumnya telah diisi 1 mL air laut
beserta 10 ekor larva udang, sehingga konsentrasi ekstrak di dalam
microplate menjadi 25 ppm.
45
f.
Konsentrasi ekstrak 12,5 ppm
Untuk mendapatkan konsentrasi 12,5 ppm di dalam microplate, dibuat
konsentrasi 25 ppm terlebih dahulu di dalam tabung reaksi sebanyak 4 mL
V1M1 = V2M2
V1 x 1000 ug/mL = 25 ug/mL x 4 mL
V1 =
100 ug
1000 ug/mL
= 0,1 mL
Maka diambil 0,1 mL dari larutan 1000 ppm dan 3,9 mL aquades
kemudian dimasukkan ke tabung reaksi. Konsentrasi ekstrak 12,5 ppm di
dalam microplate didapatkan dengan cara :
V1M1 = V2M2
V1 x 25 ug/mL = 12,5 ug/mL x 2 mL
V1 =
25 ug
25 ug/mL
= 1 mL
Maka diambil 1 mL dari larutan konsentrasi 25 ppm kemudian di
masukkan ke dalam microplate yang sebelumnya telah diisi 1 mL air laut
beserta 10 ekor larva udang, sehingga konsentrasi ekstrak di dalam
microplate menjadi 12,5 ppm.
46
Lampiran 5
RIWAYAT PENULIS
IDENTITAS
Nama
: Nurul Khafidz Subekti
Tempat, tanggal lahir
: Cilacap, 11 Juli 1993
Agama
: Islam
Alamat
: Jl. Iroyudan Rt 001 Kel. Guwosari Kec. Pajangan
Kab. Bantul Yogyakarta
No. HP
: +62 856 4368 6470
Email
: [email protected]
RIWAYAT PENDIDIKAN
1. 1997-1999
: TK Masyithoh Bantul Yogyakarta
2. 1999-2005
: SDN 1 Iroyudan Bantul Yogyakarta
3. 2005-2008
: SMPN 1 Bantul Yogyakarta
4. 2008-2011
: SMAN 1 Bantul Yogyakarta
5. 2011- sekarang
: Program Studi Pendidikan Dokter FKIK
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta