Ekspresi Gen Protease Bacillus pumilus Y1 dalam

SKRIPSI
EKSPRESI GEN PROTEASE Badlus pumilus Y 1 DALAM
Escherichia coli DH5a: ORIENTASPGEN DAN PENGARUH
PENAMBAHAN IPTG (Isopropilthiogalaktosida)
Oleh
LILY
F 30.0024
1998
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
Lily. F 30.0024. EKSPRESI GEN PROTEASE Bacillus pumi7us Y1 DALAM
Escherichia coli DHScr: ORIENTASI GEN DAN PENGARUEI PENAMBAHAN
IPTG (Isopropilthiogalakto9ida). Di bawab bimbingan Dr. IT. Maggy T.
Subartono dan Dr. IT.Antonius Suwanto, MSc
Bacillus pumilus Y1 yang diisolasi dari limbah cair tahu di Indonesia
diketahui menghasilkan protease s e ~ p asubtilisin (Likumahwa, 1993; Ristiarini,
1996). Gen penghasil protease serupa subtilisin berukuran 3 kilo pasangbasa (kb)
telah dicoba diklon dari B. pwnilus Y1 ke &lam Escherichia coli DH5a (Naibaho,
1997). Gen baukwan 3 kb tersebut dipotong dengan enzim restriksi EcoRI,
diligasikan pada vektor pUC19, dan ditransformasikan ke &lam E. coli DH5a.
Plasmid rekombinan yang dihasiikan disebut pBN1. Ekspresi protease dari pBNl
temyata tidak sebaik protease asalnya. Untuk itu, dilakukan penelitian untuk
mempelajari
orientasi
gen
dan
pengaruh
penambahan
IPTG
(isopropilthiogalaktosida) terhadap ekspresi gen tersebut, dengan h a r a p akan
memperbaiki ekspresi dan meningkatkan produksi enzimnya.
Analisis terhadap orientasi gen pBNl dilakukan dengan meretransformasi
pBNI. Plasmid dipotong dengan EcoRI, diberi perlakuan fenol dan presipitasi etanol
untuk memurnikan DNA, kemudian diligasikan dan ditransformasikan kembali.
Seleksi dilakukan dengan media LA+Ampisilin yang diberi X-gal. Dari
retransformasi ini diperoleh empat koloni putih, yang selanjutnya disebut TI, T2, T3,
dan T4.
Untuk mengetahui orientasi pBNl dan plasmid yang dibawa oleh TI, T2, T3,
dan T4, dicari situs khusus pada pBNl yang diperoleh dengan pemotongan dengan
enzim restriksi BamHI. Pemotongan pBNl dengan BamHI menghasilkan dua
m e n DNA yang masing-masing berukuran 4.5 kb dan 1.2 kb. Dengan
berpedoman pada letak situs BamHI pada pBNl dan pUC19 sebagai vektomya,
pembalikan terhadap gen protease pBNl diperkirakan akan menghasilkan potongan
DNA dengan ukuran 3.9 kb dan 1.8 kb. Penelitian &vitas protease terhadap gen
dengan orientasi beriawanan ini akan menunjukkan arah orientasi gen &lam pBNl
terhadap promotor lac dari vektomya. Pemotongan TI, T2, T3, dan T4 dengan
BamHI ternyata menghasilkan fragmen DNA dengan panjang 4.5 kb dan 1.2 kb
seperti pada pBNI. Dengan demikian, plasmid dengan orientasi yang berlawanan
dari pBNl belum dldapatkan.
Analisis aktivitas protease pBNl dan TI setelah diberi IPTG 25 mglml
sampai konsentrasi akhir 37.5 pdml menunjukkan hasil tertinggi pada waktu
fermentasi 15 jam. Aktivitas protease dari pBNl dan TI tersebut masing-masing
adalah 0.062 Ulml dan 0.105 Ulml, sedangkan aktivitas spesifiknya masing-masing
1.069 Ulmg dan 0.981 Ulmg. Aktivitas spesifik protease pUC19 sebagai kontrol juga
menunjukkan kenaikan yang nyata dengan penambahan IPTG,yaitu 0.971 Ulmg
untuk inkubasi IS jam dan 1.673 Ulmg untuk 18jam.
EKSPRESI GEN PROTEASE Bacillus pumaus Y1 DALAM
Escherichia coli DHSa: ORIENTASK GEN DAN PENGARUH
PENAMBAHAN IPTG (Isopropilthiogahktosida)
Oleh:
LILY
F 30.0024
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
pada JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
1998
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSPRESI GEN PROTEASE Bacillus pumilus Y 1 DALAM
Escherichia coli DHSa: ORIENTASI GEN DAN PENGARUH
PENAMBAHAN IPTG (Isopropilthiogalaktosida)
.."
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
pada JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
Fakultas Teknofogi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Oleh:
LILY
F 30.0024
Dilahirkan pada tanggal 14 April 1975
di Bandung
Tanggal lulus: 14 Februari 1998
Menyetujui
Bogor, : E k b ~1998
.n
:,,,;x,.
. ." .. ,
.
-
.
, :>. .
~
,
I
~-),y,.-~7
,/
~.-T)
<?. ,' . Z 7 ,--,-
,
Dosen Pembimbing II
I'
/"
, /
~ rIr.. ~ a kT.i SUMOKO
Gosen Pembimbing I
/'
-~7
,;7