PEMANFAATAN LIMBAH PENGOLAHAN AGAR SEBAGAI
advertisement
Pemanfaatan Limbah Pengolahan Agar sebagai Komponen Medium..............................(Yusro Nuri Fawzya et al.) PEMANFAATAN LIMBAH PENGOLAHAN AGAR SEBAGAI KOMPONEN MEDIUM PRODUKSI SELULASE DARI MIKROBA The Use of Agar Processing Waste as A Component of Microbial Cellulase Producing Medium Yusro Nuri Fawzya1*, Amelia Latifa2, dan Nita Noriko2 1 Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan, Jl. K.S. Tubun Petamburan VI, Jakarta Pusat, Indonesia 2 Universitas Al-Azhar Indonesia, Indonesia * Korespondensi Penulis: [email protected] Diterima: 9 April 2014; Disetujui: 21 Mei 2014 ABSTRAK Pengolahan agar dari rumput laut berkembang pesat di Indonesia. Hal ini berkaitan dengan produksi rumput laut yang cenderung meningkat dari tahun ke tahun. Produksi yang meningkat ini diikuti dengan meningkatnya limbah pengolahan agar. Limbah ini diketahui memiliki kandungan selulosa yang tinggi. Pemanfaatan limbah ini umumnya untuk pembuatan pupuk dan komponen pakan. Penelitian ini bertujuan untuk memanfaatkan limbah pengolahan agar sebagai komponen medium produksi enzim selulase dari mikroba. Tiga jenis isolat mikroba yaitu PMP1206, Serratia marcescens SGS 1609, dan isolat bakteri PC3, dikultivasi dalam medium padat yang mengandung karboksimetil selulosa (CMC). Isolat mikroba yang menghasilkan zona bening paling besar, dipilih dan enzim diproduksi dalam medium cair yang mengandung selulosa dari limbah agar. Enzim yang dihasilkan dari perlakuan terbaik dilakukan karakterisasi. Medium produksi enzim adalah medium sintetik minimal (MSM) cair dengan penambahan 1% limbah agar yang telah diberi perlakuan dengan NaOH 0, 2, 4, dan 6%. Inkubasi dilakukan pada suhu 30 o C, 150 rpm. Pengambilan sampel dilakukan setiap hari untuk diuji aktivitas enzimnya. Hasil seleksi isolat menunjukkan bahwa S. marcescens SGS 1609 menghasilkan zona bening paling besar dengan indeks selulolitik 2,25. Produksi enzim selulase dari isolat ini pada medium limbah agar menunjukkan bahwa waktu optimal produksi enzim diperoleh pada inkubasi selama 1–3 hari dari perlakuan NaOH 6%. Enzim yang dihasilkan bekerja optimum pada pH 6 dan suhu 50 o C. Enzim bersifat stabil terhadap panas. Pada suhu 40–60 oC selama 4 jam penurunan aktivitas enzim tidak lebih dari 30%. Aktivitas selulase meningkat dengan penambahan ion Ca2+, dan Mg2+, dan menurun dengan adanya 10 mM ion Zn2+. KATA KUNCI: selulase mikroba, limbah pengolahan agar, perlakuan NaOH ABSTRACT Processing of agar from seaweeds has been growing rapidly in Indonesia. This is related to the seaweeds production which increases yearly. This production is followed with the increasing of agar processing waste. The waste is known having high cellulose content. It is commonly used for organic fertilizer as well as feed component. This research was purposed to utilize agar processing waste as production medium component of microbial cellulase. Three bacterial isolates, PMP1206, Serratia marcescens SGS 1609 and PC3 were cultivated in agar media containing carboxymethylcellulose (CMC). The isolate producing the largest clear zone, was selected and enzyme was produced in liquid medium containing cellulose from agar processing waste. The enzyme product from the best treatment was characterized. The medium for enzyme production was liquid Minimal Synthetic Media (MSM) added with 1% agar waste which had been treated with NaOH 0, 2, 4 and 6%. Incubation was conducted at 30 oC, 150 rpm. Sampling was carried out daily to determine enzyme activity. The result showed that S. marcescens SGS 1609 produced the largest clear zone with the cellulolytic index of 2.25. The production of S. marcescens SGS 1609 cellulase in medium containing cellulose from agar processing waste indicated that the optimum production time was 1–3 days using NaOH 6% treatment. The enzyme worked optimally at 50 oC pH 6 and was stabil against heat. Incubation the enzyme at 40–60 oC for 4 hours decreased the activity not more than 30%. The cellulase activity increased by the addition of Ca2+, and Mg2+, and decreased by the addition of 10 mM ion Zn2+. KEYWORDS: microbial cellulase, agar processing waste, NaOH treatment 51 JPB Perikanan Vol. 9 No. 1 Tahun 2014: 51–60 PENDAHULUAN Rumput laut merupakan salah satu komoditas unggulan Indonesia yang menghasilkan devisa negara dari hasil ekspornya. Produksi budidaya rumput laut terus meningkat, rata-rata sebesar 29% per tahun; dan pada tahun 2013 mencapai 8,2 juta ton, dengan nilai total ekspor sebesar US$162,5 juta (Global Energi, 2014). Salah satu pemanfaatan rumput laut adalah untuk pengolahan agar. Kim et al. (2007) menyatakan bahwa ekstraksi agar dari rumput laut menghasilkan limbah sekitar 65–75%. Limbah agar ini mengandung selulosa cukup tinggi, yaitu 27,38– 39,45% (Fithriani et al., 2007). Meningkatnya produksi rumput laut Indonesia mengakibatkan hasil samping pengolahan rumput laut juga meningkat. Pemanfaatan limbah pengolahan rumput laut, termasuk pengolahan agar sampai saat ini terbatas pada penggunaan untuk komponen pakan dan pupuk. Limbah pengolahan agar kaya akan selulosa, sehingga memungkinkan untuk digunakan sebagai substrat bagi mikroba-mikroba pendegradasi selulosa, seperti yang dilaporkan oleh Hariadi (2001) yang memanfaatkan limbah agar sebagai media penghasil produk biomassa mikroorganisme. Tingginya kadar selulosa di dalam limbah agar berpotensi juga sebagai sumber bioetanol yang merupakan energi terbarukan. Hidrolisis selulosa dalam limbah agar dapat dilakukan secara biologi maupun cara kimia. Proses hidrolisis secara biologi mel ibatkan enzim selulase yang mampu mendegradasi selulosa. Enzim selulase merupakan salah satu enzim yang permintaannya cukup tinggi. Enzim ini semakin banyak dibutuhkan dengan meningkatnya produksi bioetanol dari bahan berselulosa. Salah satu penghasil enzim selulase adalah mikroorganisme seperti kapang Trichoderma, Humicola, dan Aspergillus (Sukumaran et al., 2005, Kuhad et al., 2011). Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan memiliki koleksi isolat bakteri penghasil enzim potensial, diantaranya adalah isolat bakteri SGS 1609 yang diisolasi dari rumput laut Sargassum sp., PMP1206 dari rumput laut Gracilaria sp. dan PC3 dari sumber air panas. Isolat bakteri SGS 1609 dan PMP1206 diketahui bersifat selulolitik (Munifah et al., 2011), dan isolat bakteri SGS 1609 telah teridentifikasi sebagai Serratia marcescens. Penelitian bertujuan untuk (1) melakukan seleksi terhadap ketiga isolat sebagai penghasil enzim selulase, (2) memanfaatkan limbah pengolahan agar, sebagai komponen media produksi enzim selulase dari isolat terpilih, dan (3) melakukan karakterisasi enzim yang dihasilkan dari perlakuan terbaik untuk mengetahui kondisi optimum bekerjanya enzim tersebut. 52 BAHAN DAN METODE Bahan Bahan yang digunakan pada penelitian ini meliputi isolat bakteri PMP1206, S. marcescens SGS 1609, dan isolat bakteri PC3, limbah industri pengolahan agar yang diperoleh dari salah satu industri pengolahan agar di Tangerang, Jawa Barat, dan NaOH untuk pretreatment limbah. Selain itu digunakan bahan-bahan kimia untuk pengujian aktivitas enzim dan karakterisasi enzim, serta bahan-bahan media/ mikrobiologi untuk kultivasi bakteri. Metode Penelitian dilakukan secara bertahap, diawali dengan seleksi isolat bakteri yang didasarkan atas kemampuannya menghasilkan enzim selulase pada media CMC padat, ditunjukkan oleh zona bening yang dihasilkan. Isolat bakteri terpilih kemudian ditumbuhkan pada medium cair yang mengandung limbah agar yang telah mengalami pretreatment. Pretreatment dilakukan menggunakan NaOH dengan 4 variasi konsentrasi 0, 2, 4, dan 6%. Setiap hari dilakukan pengambilan sampel, sebanyak 3 kali ulangan; kemudian sampel disentrifugasi. Filtrat sebagai enzim kasar, diuji aktivitas enzimnya. Enzim yang dihasilkan dari kondisi optimum kemudian dilakukan karakterisasi, meliputi pengaruh suhu dan pH, ketahanan panas dan pengaruh ion logam. Secara garis besar, penelitian ini dilakukan mengikuti diagram alir yang disajikan pada Gambar 1. Analisis data yang digunakan dalam penelitian ini adalah analisis deskriptif dan analisis statistik. Analisis deskriptif dilakukan terhadap seleksi isolat bakteri selulolit ik dan karakterisasi enzim, berdasarkan pengamatan dan kurva atau histogram hasil pengolahan data aktivitas enzim. Analisis statistik dilakukan pada penentuan perlakuan konsentrasi NaOH terbaik terhadap aktivitas enzim, menggunakan Rancangan Acak Kelompok dengan faktor konsentrasi NaOH, dan inkubasi sebagai kelompok. Data diolah menggunakan Program SPSS versi 19. Perlakuan yang berbeda nyata dilanjutnya dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) Duncan. Seleksi isolat bakteri selulolitik Seleksi isolat bakteri selulolitik didasarkan atas uji kualitatif aktivitas selulase melalui pengamatan terhadap zona bening. Uji kualitatif dilakukan dengan metode pewarnaan merah kongo 0,1% (Ponnambalam et al., 2011). Terbentuknya zona bening di sekitar koloni bakteri menunjukkan bahwa isolat bakteri mampu menghasilkan enzim selulase. Secara Pemanfaatan Limbah Pengolahan Agar sebagai Komponen Medium..............................(Yusro Nuri Fawzya et al.) Isolat S.marcescens SGS 2609, isolat bakteri PMP 1206, dan PC3Isolate S.marcescens SGS 2609, bacterial isolate PMP 1206 and PC3 Preparasi substrat limbah agar dengan perlakuan NaOH/Preparation of agar waste substrate by NaOH treatments Seleksi isolat melalui kultivasi isolat pada medium padat yang mengandung CMC/ Selection of isolate through cultivation of bacterial isolate onto solid medium containing of CMC Optimasi produksi selulase/Optimation of cellulase production Isolat terpilih berdasarkan zona bening/Selected isolate based on clear zone Enzim dari perlakuan terbaik/Enzyme from the best treatment Karakterisasi enzim (suhu dan pH optimum, stabilitas panas, pengaruh ion logam)/enzyme characterization (optimum temperatures and pHs, heat stability and effect of metal ions) Gambar 1. Diagram alir produksi enzim selulase menggunakan medium yang mengandung limbah agar. Figure 1. Flow chart of cellulase production using medium containing of agar waste. kualitatif, besarnya aktivitas selulase ini dinyatakan sebagai Indeks selulolitik atau indeks aktivitas selulase (IAS), diperoleh dengan menggunakan rumus sebagai berikut (Kader & Omar 1998) : A - B Indeks selulolitik = B Keterangan/Note: A = diameter zona bening (mm) B = diameter koloni (mm) Preparasi limbah pengolahan agar Preparasi limbah pengolahan agar dilakukan 2 tahap, yaitu menghilangkan sisa agar yang masih terkandung dalam limbah dan diberi pretreatment dengan penambahan NaOH. Menghilangkan agar dilakukan dengan menambahkan air mendidih ke dalam limbah dengan perbandingan 1:20, kemudian didiamkan selama 1 jam, lalu dicuci hingga pH netral dan disaring. Limbah pengolahan agar selanjutnya dikeringkan dengan cara dijemur. Limbah kering kemudian diberi pretreatment/delignifikasi mengikuti metode Gunam et al. (2010) dengan penambahan NaOH dengan konsentrasi 0, 2, 4, dan 6%, kemudian dipanaskan pada suhu 121 oC selama 15 menit. Campuran kemudian disaring, dicuci dengan air sampai netral (pH 7) disiapkan untuk komponen media kultur bakteri penghasil enzim lalu dikeringkan menggunakan oven pada suhu 105 oC selama 10 jam. Limbah agar siap diaplikasikan sebagai substrat untuk produksi enzim selulase. 53 JPB Perikanan Vol. 9 No. 1 Tahun 2014: 51–60 Produksi enzim selulase Produksi enzim selulase dilakukan dengan cara mengkultivasi isolat bakteri terpilih pada media yang mengandung limbah agar yang telah diberi perlakuan NaOH. Starter dibuat dengan cara menginokulasikan kultur segar ke dalam medium cair yang mengandung MgSO4.7H2O 0,02%; K2HPO4 0,05%; FeSO4.7H2O 0,002%, CaCl2.2H2O 0,004%; yeast extract 0,2%, NH 4NO 3 0,03%, KH 2 PO 4 0,1% dan CMC 1%. Selanjutnya starter dipindahkan ke dalam media produksi sebanyak 20% dari volume media produksi dengan komposisi media sama dengan media starter, kecuali CMC diganti dengan limbah pengolahan agar yang telah mengalami perlakuan. Kultur kemudian diinkubasi pada suhu 30 oC, 150 rpm selama 6 hari. Setiap hari dilakukan pengambilan sampel, disentrifugasi pada 9000 x g, 4oC selama 10 menit dan filtrat sebagai enzim kasar diuji aktivitasnya dengan metode Miller yang dimodifikasi (Wood & Saddler 1988). Enzim yang dihasilkan dari perlakuan terbaik, yaitu yang memberikan aktivitas enzim tertinggi, kemudian dilakukan karakterisasi enzim. Karakterisasi enzim Karakterisasi enzim dilakukan untuk menentukan pH dan suhu optimum enzim serta pengaruh ion-ion logam terhadap aktivitas enzim. Pengaruh pH terhadap aktivitas enzim diuji dengan mereaksikan enzim dengan substrat pada berbagai pH (3–9), dengan menggunakan 0,05 M bufer asetat (pH 3, 4, dan 5); 0,05 M bufer sitrat fosfat (pH 5, 6, dan 7); dan 0,05 M bufer tris-HCl (pH 7, 8, dan 9). Penentuan suhu optimum dilakukan dengan mereaksikan enzim dengan substrat pada pH optimum dan berbagai suhu (30–90oC). Pengaruh ion logam diamati terhadap ionion logam bivalen (Ca2+, Mg2+, Zn2+) dan trivalen (Fe3+) yang ditambahkan dalam bentuk garam khlorida dengan konsentrasi 5 dan 10 mM. Aktivitas enzim selulase diukur sesuai dengan prosedur pengujian sebelumnya. HASIL DAN PEMBAHASAN Seleksi Isolat Bakteri Selulolitik Dari 3 isolat bakteri yang diuji kemampuannya dalam menghasilkan selulase secara kualitatif, diperoleh hasil bahwa isolat S.marcescens SGS 1609 menghasilkan indeks selulolitik terbesar (IS = 2,25), dibandingkan 2 isolat lainnya (Tabel 1 dan Gambar 2). Pewarna congo red akan diserap oleh polisakarida yang memiliki ikatan -D-glukan. Terbentuknya zona bening menunjukkan bahwa polisakarida telah Tabel 1. Nilai Indeks Selulolitik dari isolat bakteri PMP1206, S. marcescens SGS 1609, dan isolat bakteri PC3 pada medium CMC Table 1. Cellulolytic Index Values of bacterial isolates PMP1206, S. marcescens SGS 1609, dan bacterial isolate PC3 Diameter Zona Bening/ Clear Zone Diameter (mm) Diameter Koloni/ Colony Diameter (mm) Indeks Selulolitik/ Cellulolytic index PMP1206 25 9 1.78 S. marcescens SGS 1609 39 12 2.25 PC3 5 3 0.67 Isolat/Isolate A B C Gambar 2. Zona bening isolat PMP 1206 (A), S.marcescens SGS 1609 (B), dan PC3 pada medium CMC (C). Figure 2. Clear zone of isolate PMP 1206 (A), S. marcescens SGS 1609 (B) and PC3 (C). 54 Pemanfaatan Limbah Pengolahan Agar sebagai Komponen Medium..............................(Yusro Nuri Fawzya et al.) Tabel 2. Hasil perlakuan NaOH pada limbah pengolahan agar Table 2. Result of NaOH treatment on agar processing waste Konsentrasi NaOH/NaOH Concentration (%) Parameter 0 Hitam Kecoklatan/ Browny Black Warna/Colour Rendemen/Yield (%) 2 Coklat Keabuabuan/Greyish Brown 4 Abu-abu Kehitaman/ Black y Grey 6 Abu-abu Kehitam an/ Black y Grey 33.5 24.8 25.5 23.9 Kadar Air/Moisture Content (%) 5.6 5.6 5.4 5.2 Kadar Abu/Ash Content (%) 6.4 6.4 6.3 6.0 terdegradasi menjadi sakarida dengan rantai yang lebih pendek sehingga tidak dapat menyerap pewarna congo red (Zhang et al., 2006). Dengan demikian ketiga isolat yang digunakan memang memiliki kemampuan mendegradasi selulosa dari limbah agar, yang memiliki ikatan -D-glukan. Berdasarkan hasil kualitatif ini maka isolat S.marcescens SGS 1609 diteliti lebih lanjut untuk dikultivasi pada medium yang mengandung limbah agar, guna mendapatkan informasi karakter enzimnya. Preparasi Limbah Pengolahan Agar Produksi Selulase S. mercescens SGS 1609 Aktivitas enzim selulase yang diproduksi dengan menggunakan medium yang mengandung selulosa dari limbah pengolahan agar disajikan pada Gambar 3. Hasil uji statistik (Anova) menunjukkan bahwa baik Aktivitas Enzim/ Enzyme Activity (U/ml) Penghilangan sisa agar dari limbah pengolahan agar menghasilkan rendemen berupa limbah yang lebih bersih dari pengotor sebesar 33,5%. Selanjutnya perlakuan pemanasan dengan larutan NaOH menghasilkan rendemen yang lebih rendah, berkisar antara 23,9-25,5% dan sedikit penurunan kadar abu dari 6,4% menjadi 6,0% pada penggunaan NaOH konsentrasi 6% (Tabel 2). Kadar abu yang tinggi pada limbah pengolahan agar diduga berasal dari celite yang mengandung silika (Si) yang digunakan dalam proses penyaringan pada pengolahan agar di industri. Semakin tinggi konsentrasi NaOH juga menghasilkan kenampakan limbah yang lebih baik, yaitu lebih pucat (keabu-abuan) dari yang semula berwarna coklat kehitaman. Dengan demikian NaOH berkontribusi terhadap pengurangan mineral dan pigmen. Waktu Produksi (hari)/Production Time (days) NaOH 0% Gambar 3. Figure 3. NaOH 2% NaOH 4% NaOH 6% Aktivitas selulase S. marcescens SGS 1609 yang dihasilkan dari substrat yang mengalami pretreatment dengan berbagai konsentrasi NaOH. S. marcescens SGS 1609 cellulase activity produced by substrates preatreating with various concentration of NaOH. 55 JPB Perikanan Vol. 9 No. 1 Tahun 2014: 51–60 konsent rasi NaOH maupun waktu produksi menghasilkan aktivitas enzim yang berbeda nyata (Gambar 4 dan 5). Limbah pengolahan agar yang mengalami pretreatment NaOH dengan konsentrasi yang lebih tinggi menghasilkan aktivitas enzim yang lebih tinggi. Aktivitas enzim tertinggi dihasilkan dari perlakuan konsentrasi NaOH 6%. Waktu produksi, meskipun memberikan pengaruh nyata (p<0,05) namun hasil uji BNT menunjukkan bahwa aktivitas enzim yang diproduksi selama 1 hari, yang menghasilkan aktivitas enzim tertinggi, tidak berbeda nyata dengan 2 dan 3 hari. Menurut Yi-Zheng et al. (2009), perlakuan dengan alkali pada dasarnya adalah proses delignifikasi. Dinyatakan bahwa mekanisme proses ini merupakan saponifikasi ikatan ester intermolekuler pada ikatan silang antara xilan hemiselulosa dengan komponen lain seperti lignin dan hemiselulosa yang lain. Perlakuan alkali juga menghilangkan asetil dan berbagai substitusi asam uronat pada hemiselulosa yang dapat mengurangi akses enzim terhadap selulosa dan hemiselulosa (Chang et al, 2000). Fan et al. di dalam Yi-Zheng et al. (2009), menyatakan bahwa perlakuan alkali pada bahan lignoselulosa menyebabkan longgarnya struktur selulosa, meningkatkan luas permukaan, rusaknya struktur lignin dan terpisahnya ikatan struktural antara lignin dengan karbohidrat. Pemisahan/isolasi selulosa dari limbah agar menggunakan NaOH juga dilaporkan oleh Nurhayati et al. (2014) yang mempelajari sintesis selulosa asetat dari limbah pengolahan agar. Dil aporkan bahwa konsentrasi NaOH 6% menghasilkan kadar selulosa yang paling tinggi dibandingkan dengan konsentrasi 3 dan 9%. Terkait dengan hal ini, maka NaOH dengan konsentrasi 6% telah cukup untuk memberikan perlakuan pada limbah agar guna menumbuhkan mikroba penghasil enzim selulase. Rata-rata aktivitas enzim selulase S.marscescens SGS 1609 yang dihasilkan dari perlakuan NaOH berkisar antara 0,06–0,07 U/ml (Gambar 4). Terjadi peningkatan aktivitas enzim sekitar 16,7% dengan adanya perlakuan NaOH 6% dibandingkan kontrol. Meskipun berbeda nyata, namun nilai ini relatif rendah. Limbah agar yang berasal dari industri mengandung mineral cukup tinggi, mengurangi akses enzim untuk bereaksi dengan selulosa. Fawzya et al. (2013) melakukan pengujian aktivitas enzim selulase S.marscescens SGS 1609 pada berbagai substrat, dan mendapatkan bahwa substrat limbah agar dari industri yang mendapat perlakuan NaOH 6% menghasilkan aktivitas enzim yang lebih rendah (0,087 U/ml) dibanding limbah agar dari pengolah tradisional yang sama-sama mendapat perlakuan NaOH 6% (0,134). Limbah agar dari pengolah tradisional yang dalam prosesnya tidak menggunakan celite lebih mudah dalam proses delignifikasi oleh NaOH, sehingga substrat yang dapat diakses oleh enzim lebih banyak. Gunam et al. (2010) melaporkan bahwa perlakuan NaOH 6% pada jerami padi dapat meningkatkan aktivitas enzim endoglukanase dari 0,0271 menjadi 0,0365 U/ml atau meningkat sekitar 34,6%. Efektivitas perlakuan NaOH untuk delignifikasi dipengaruhi oleh kondisi substrat maupun perlakuannya. Menurut Bjerre et al. (1996) dalam Yi-Zheng et al. (2009), perlakuan alkali lebih efektif untuk delignifikasi bahan berselulosa dari jenis hardwood, tanaman herba dan limbah pertanian yang umumnya mengandung lignin tidak terlalu tinggi. Kandungan lignoselulosa pada rumput laut dilaporkan sekitar 3-4% (Santi et al., 2012); sedangkan Chasanah et al. (2010) menemukan bahwa kandungan lignin pada rumput laut Gracilaria c a d b Gambar 4. Pengaruh berbagai konsentrasi NaOH terhadap aktivitas enzim selulase. Figure 4. Effect of various NaOH on the cellulase activity. 56 Pemanfaatan Limbah Pengolahan Agar sebagai Komponen Medium..............................(Yusro Nuri Fawzya et al.) c bc bc ab ab a Gambar 5. Figure 5. Pengaruh waktu produksi terhadap aktivitas enzim selulase S. marcescens SGS 1609 menggunakan medium limbah agar Effect of production time on the cellulase activity of S. marcescens SGS 1609 in agar waste medium mencapai sekitar 12%. Menurut Milled et al. (1976) dalam Yi-Zheng et al. (2009), kemampuan enzim mendegradasi kayu keras yang diberi perlakuan NaOH bisa meningkat sekitar 14–55% Perlakuan alkali untuk delignif ikasi bahan berselulosa umumnya lebih sering digunakan dibandingkan dengan perlakuan menggunakan asam kuat seperti asam sulfat atau asam khlorida. Hal ini disebabkan adanya beberapa kelemahan penggunaan asam kuat, seperti bersifat korosif, menghasilkan produk degradasi yang menghambat fermentasi biomassa alami, diperlukan penanganan/pembuangan garam-garam hasil penetralan terhadap sisa asam dan perlunya penanganan reduksi partikel biomassa (Yi-Zheng et al., 2009). Waktu optimum produksi selulase S. marcescens SGS 1609 dengan menggunakan medium yang mengandung limbah agar adalah 1–3 hari (Gambar A 5). Hasil serupa dilaporkan oleh Sudto et al. (2008) yang menggunakan beberapa jenis limbah pertanian sebagai substrat untuk produksi selulase dari Bacillus subtilis, E.coli dan Rhizobium sp. Aktivitas selulase tertinggi dihasilkan pada inkubasi selama 20 jam. Acharya dan Chaudhary (2011) menemukan bahwa waktu optimum produksi selulase dari Bacillus licheniformis WBS1 dan Bacillus sp. WBS3 dalam medium cair yang mengandung jerami padi dan jerami gandum adalah 60 jam. Produksi selulase dari kapang Aspergillus niger menggunakan medium yang mengandung jerami padi memerlukan waktu lebih lama yaitu sampai dengan 5 hari (Jadhav et al., 2013). Karakterisasi Enzim Selulase Hasil karakterisasi enzim menunjukkan bahwa enzim selulase S. marcescens SGS 1609 bekerja optimal pada pH 6 dan suhu 50 oC (Gambar 6). B Gambar 6. Pengaruh pH (A) dan suhu (B) terhadap aktivitas enzim selulase S.marcescens SGS 1609. Figure 6. Effect of pH (A) and temperature (B) on the cellulase activity of S.marcescens SGS 1609. 57 JPB Perikanan Vol. 9 No. 1 Tahun 2014: 51–60 Gambar 7. Stabilitas panas enzim selulase S. marcescens SGS 1609. Figure 7. Heat stability of S. marcescens SGS 1609 cellulase. Dibandingkan dengan hasil penelitian sebelumnya yaitu selulase dari S.marcescens SGS 1609 yang diproduksi dalam medium cair mengandung CMC sebagai substrat (Fawzya et al., 2013) pH optimum enzim sedikit bergeser dari 7 menjadi 6, sedangkan suhu optimum enzim sama, yaitu 50 oC. Optimasi pada suhu 40–60oC pada penelitian ini ditinjau dari nilai aktivitas enzim dan standar deviasinya masih berada dalam kisaran yang sama, sehingga dapat dikatakan enzim bekerja optimum pada kisaran suhu 40–60 oC. Beberapa selulase mikroba memiliki pH dan suhu optimum yang hampir sama dengan hasil penelitian ini, seperti selulase Streptomyces ruber yang memiliki pH dan suhu optimum 6 dan 40 oC Kontrol/ Control 2+ (Nermeen et al., 2010), dan selulase Pseudomonas sp. yang bekerja optimum pada suhu 40 oC (Gautam et al., 2010). Selulase mikroba lain yang bekerja optimal pada pH 6 adalah selulase Bacillus subtilis YJ1 (Yin et al., 2010), dan selulase Bacillus sp. yang diisolasi dari sawah (Vijayaraghavan & Vincent, 2012). Hasil pengujian stabilitas enzim terhadap panas menunjukkan bahwa enzim selulase S.marcescens SGS 1609 relatif stabil pada suhu 40–60 oC (Gambar 7). Selama 4 jam enzim yang diinkubasi pada kisaran suhu tersebut hanya mengalami penurunan aktivitas enzim tidak lebih dari 30%; bahkan pada suhu 60 oC, aktivitas enzim masih mencapai sekitar 90%. Pola serupa ditemukan pada enzim dari mikroba yang 2+ 3+ 2+ Gambar 8. Pengaruh ion logam terhadap aktivitas selulase S.marcescens SGS 1609. Figure 8. Effect of metal ions on the cellulase activity of S.marcescens SGS 1609. 58 Pemanfaatan Limbah Pengolahan Agar sebagai Komponen Medium..............................(Yusro Nuri Fawzya et al.) sama tetapi diproduksi menggunakan medium yang berbeda, yaitu dengan substrat karboksimetil selulosa. Pada substrat ini, penurunan aktivitas enzim tidak lebih dari 20% (Fawzya et al., 2013). Enzim yang stabil terhadap panas sangat diminati oleh berbagai industri. Selulase yang stabil terhadap panas sangat berguna dalam proses sakarifikasi bahan-bahan berserat yang umumnya memerlukan waktu cukup panjang untuk proses hidrolisisnya (Nigam, 2013). Salah satu faktor yang berperan terhadap ketahanan panas enzim adalah banyaknya ikatan disulfida dalam molekul protein enzim (Pons et al., 1995). Karakteristik selulase S. marcescens SGS 1609 terkait dengan pengaruhnya terhadap berbagai ion logam menunjukkan bahwa ion kalsium merupakan aktiv ator sehingga adanya ion kalsium akan meningkatkan aktivitas enzim cukup signifikan, demikian juga ion Mg2+. Diantara ion-ion logam yang diamati pengaruhnya, hanya ion Zn2+ pada konsentrasi 10 mM yang bersifat menghambat aktivitas enzim sekitar 40% (Gambar 8). KESIMPULAN Serratia marcescens SGS 1609 mempunyai aktivitas selulolitik terbesar berdasarkan pembentukan zona bening dibandingkan dengan isolat PMP1206 dan PC3. Pemanfaatan limbah pengolahan agar untuk media produksi enzim selulase dari mikroba sebaiknya didahului dengan perlakuan terhadap limbah tersebut. Penggunaan 1% limbah pengolahan agar yang diberi perlakuan NaOH 6% dalam medium MSM cair menghasilkan enzim selulase dari S. marcescens SGS 1609 dengan aktivitas paling tinggi dibandingkan perlakuan NaOH 0; 2; dan 4%. Waktu optimal produksi enzim selulase S. marsescens SGS 1609 dalam medium tersebut adalah 1–3 hari. Enzim selulase yang dihasilkan bekerja optimum pada pH 6, suhu 50 °C, dan stabil pada suhu 40–60 °C selama 4 jam. Enzim dapat ditingkatkan aktivitasnya dengan penambahan ion kalsium dan magnesium pada konsentrasi 5–10 mM. UCAPAN TERIMAKASIH Terimakasih penulis sampaikan kepada Ifah Munifah dan Dewi S. Zilda yang telah menyediakan isolat bakteri untuk penelitian ini. DAFTAR PUSTAKA Acharya, S. & Chaudhar, A. (2011). Effect of nutritional and environmental factors on cellulases activity by thermophilic bacteria isolated from hot spring. Journal of Scientific & Industrial Research. 70: 142– 148. Chang, V. & Holtzapple, M. (2000). Fundamental factors affecting biomass enzymatic reactivity. Appl Biochem Biotechnol. 84/86: 5–37. Chasanah, E., Fawzya, Y.N., Poernomo, A., Munifah, I., Dewi, A.S., Pratitis, A. & Patantis, G. (2010). Penelitian Pemanfaatan Mikroorganisme dan Enzim untuk Pengembangan Produk Berbasis Surimi Tropical Catfish, Bioenergi dari Limbah Rumput Laut, dan Nutrasetikal dari Limbah Udang. Laporan Teknis. Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan, Jakarta. Fawzya, Y.N., Putri, S., Noriko, N. & Patantis, G. (2013). Identification of SGS 1609 cellulolytic bacteria isolated from Sargassum spec. and characterization of the cellulase produced. Squalen, Bulletin Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan. 8(2): 57– 68. Fithriani, D., Rodiah, N., & Bakti, B.S. (2007). Ekstraksi selulosa dari limbah pembuatan karaginan. Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan. 2(2): 91–97. Gautam, S.P., Bundela, P.S., Pandey, A.K., Jamaluddin, Awasthi, M.K., & Sarsaiya, S. (2010). Cellulase production by Pseudomonas sp. isolated from municipal solid waste compost. International Journal of Academic Research. 2(6): 330–333. http:// www.ijar.lit.az Global Energi. (2014). LPEI : Rumput Laut : Produk Ekspor Unggulan. http://www.global-energi.com/ index.php?option=com_content&view=article&id= 1829:lpei—rumput-laut-produk-e ksporunggulan&catid=61:industri&Itemid=87 Gunam, I.B.M, Buda Ketut, & Guna, M.Y.S.I. (2010). Effect of delignification with NaOH solution and rice straw substrat concentration on production of cellulase enzyme from Aspergillus niger NRRL A-II. 264. Jurnal Biologi XIV. (1): 55–61. Hariadi, R. (2001). Mempelajari Pemanfaatan Limbah Pengolahan Agar-Agar Kertas sebagai Media Penghasil Produk Biomassa Mikroorganisme dengan Menggunakan Ragi Roti dan Ragi Tempe. Skripsi. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB. 41 pp. Jadhav, A.R., Girde A.V., More S.M., More S.B., & Saiqua Khan. (2013). Cellulase Production by Utilizing Agricultural Wastes. Research Journal of Agriculture and Forestry Sciences. 1(7): 6–9. Kader, A.J. & Omar, O. (1998). Isolation of cellulolytic fungi from Sayap-Kinabalu Park, Sabah. Serawak. J Biodiversity Bio-Conserv (ARBEC). p. 1–6. Kim, G.S., Myung, K.S., Kim, Y.J., Oh, K.K., Kim, J.S., Ryu H.J., & Kim, K.H. (2007). Methode of Producing Biofuel Using Sea Algae. Seoul: W orld Intelectual Property Organization Kuhad, R.C., Gupta, R., & Singh, A. (2011). Microbial cellulases and their industrial applications. Enzyme Research Volume 2011, Article ID 280696, 10 pages. http://dx.doi.org/10.4061/2011/280696. Diakses pada bulan November 2013. 59 JPB Perikanan Vol. 9 No. 1 Tahun 2014: 51–60 Munifah, I.,Chasanah, E., & Fawzya, Y.N. (2011). Screening of cellulolytic microbes from Indonesia’s marine environment. Paper presented on International Seminar of Indonesian Society for Microbiology (ISISM) and IUMS-Outreach Program on Food Safety at Bali, 22–24 Juni 2011. Nermeen A. El-Sersy, N.A., Abd-Elnaby, H., Abou-Elela, G.M., Ibrahim, H.A.H., & El-Toukhy, N.M.K. (2010). Optimization, economization and characterization of cellulase produced by marine Streptomyces ruber. African Journal of Biotechnology. 9(38): 6355–6364 Nigam, P.S. (2013). Microbial Enzymes with Special Characteristics for Biotechnological Applications. Review. Biomolecules. 3: 597–611; doi:10.3390/ biom3030597 Nurhayati & Rinta Kusumawati. (2014). Sintesis selulosa asetat dari limbah pengolahan agar. Dalam proses penerbitan Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan. Pons, J., Planas, A., & Querol, E. (1995). Contribution of a disulfide bridge to the stability of 1,3-1,4-P-D-glucan 4-glucanohydrolase from Bacillus licheniformis. Protein Eng. 8: 939–945. Ponnambalam, A.S., Deepthi, R.S., and Ghosh, A.R. (2011). Qualitative display and measurement of enzyme activity of isolated cellulolytic bacteria. Research Article, Biotechnol. Bioinf. Bioeng. 2011. 1(1): 33–37. Santi, R.A., Sunarti, T.C., Santoso, D., & Triwisari, D.A. 2012. Komposisi kimia dan profil polisakarida rumput laut hijau. J. Akuatika III (2): 105–114. 60 Sudto, A., Punyathiti, Y., & Pongsilp, N. (2008). The use of agricultural wastes as substrates for cell growth and carboxymethyl cellulase (CMCase) production by Bacillus subtilis, Escherichia coli AND Rhizobium sp. KMITL Sci. Tech. J. 8(2): 84 Sukumaran, R.K., Singhania, R.R., & Pandhey, A.S. (2005). Microbial cellulases: Production, applications and challenges. J. of Scientific and Industrial Research. 64: 832–844. Vijayaraghavan, P. and Vincent, S.G.P. (2012). Purification and characterization of carboxymethyl cellulase of Bacillus sp. isolated from a paddy field. Polish journal of Microbiology. 61(1): 51–55. W ood, T.M. & Saddler, J.N. (1988). Increasing the availability of cellulose in biomass materials. In W ood, W.A. and Kellog, J.A. (eds.). Methode in Enzymology Cellulose and Hemicellulose. Volume ke-160. New York: Academic press. p. 3–11. Yin, Li-Jung, Lin, Hsin-Hung & Xiao, Zheng-Rong. (2010). Purification and characterization of a cellulose from Bacillus subtilis YJ1. Journal of Marine Science and Technology, 18(3): 466-471. http://jmst.ntou. edu.tw/ marine/18-3/466-471.pdf. Diakses pada bulan April 2012. Yi-Zheng, Zhongli Pan, & Ruihong Zhang. (2009). Overview of biomass pretreatment for cellulosic ethanol production. Int J Agric & Biol Eng. 2(3): 51– 68. DOI: 10.3965/j.issn.1934-6344.2009.03.051-068 Zhang Y.H.P, Himmel M.E., & Mielenz J.R. (2006). Outlook for cellulase improvement: screening and selection strategies. Biotechnol Adv. 24: 452–481.
