isolasi dna

Nama
NIM
Kelas
Asist
:
:
:
:
Yudhistira Wharta Wahyudi
105040204111013
K
Mita
Pengertian

 Isolasi DNA adalah pemisahan DNA
untuk mengetahui sifat dari tanaman
untuk rekayasa genetika.
Tahapan

 ada 3 tahapan dalam isolasi DNA, yaitu :
1. Perusakan dinding sel
2. Lisis membran sel
3. Presipitasi.
1. Perusakan dinding sel
Perusakan dinding sel ini menggunakan
nitrogen cair yang memiliki suhu -169˚C.
Penggunakan nitrogen cair dimaksudkan
untuk membekukan sel, setelah sel beku lalu
sel dirusak (digerus) sampai benar benar
halus dengan mortar agar dinding sel rusak.
Perlakuan ini dilakukan engan gesit sebelum
nitorgen cair menguap.
Dokumentasi

2.
Lisis Membran Sel
 Lisis membran sel yaitu proses untuk meluruhkan
membran sel pada nukleus dengan larutan deterjen
kationik (CTAB).
 Penggunakan CTAB berfungsi untuk mengurangi
kontaminan, mengurangi browning dan untuk
menjaga DNA agar tidak rusak.
3.
Pemurnian
 Pemurnian
yaitu
menghilangkan
beberapa
kontaminan seperti senyawa sekunder (fenol), poli
sakarida, Rna dan juga protein.

 Pemurnian ini merupakan tahapan
paling penting dalam Isolasi DNA.
Karena bila ada kontaminan selain
DNA maka hasil isolasi DNA yang
dilakukan diangap gagal. Kontaminasi
ini dapat menurunkan kwalitas DNA
hasil isolasi dan mengakibatkan data
yang didapat tidak valid.
 Dalam
pemurnian
juga
dilakukan
kegiatan
Presipitasi. Kegiatan ini yaitu proses pengumpulan
DNA menggunakan isopropanol dingin.
Cara kerja

Alat
• Mortar
• Mikro
pipet
• Pipet
• Vortex
• Pastle
• Stirer
• oven
•
•
•
•
•
•
•
•
Mikrowave
Kamera
Mesin PCR
Lemari es
Ingkubator
Spatula
Erlenmeyer
Tabung
reaksi
• Mesin UV
translumina
tor
• Timbangan
analitik
• Plastik
pembungku
s
• Tabung
Ependorf
Cara kerja

Bahan
•
•
•
•
Daun kakao
Nitrogen cair
CIA
CISA
Langkah kerja
Timbang daun 0.5 gr gerus
(+nitrogen cair dan PVP)
+ 500µl buffer TE (resuspensi
DNA) + 1µl RNASE, inkubasi
T=350C, 30 menit

Setelah dingin + ethanol dingin,
inkubasi dalam freezer 30 menit
+ buffer CTAB 1 ml + beta
mertcaptoethanol 5 µl
+ 200µl buffer pencuci (2x)
Endapan dikeringanginkan
Sentrifuse 6000 rpm, 10 menit
Endapan dikeringanginkan
Vortek, inkubasi T=650C 30
menit
+ CHISAM/CIA 500µl, vortek
Sentrifuse 6000 rpm, 10 menit
Ambil pelet dan buang
supernatannya
Resuspensi 200µl buffer TE
Sentrifuse 6000 rpm, 10 menit
Ambil supernatan + 1 ml
CHISAM
Sentrifuse 8000 rpm, 10 menit
Ambil fase atas + 1 ml
isopropanol dingin, inkubasi
freezer 30 menit
Elektroforesis

Metode
isolasi
Dna
yang
saya
ikuti,
mengikuti alur kerja dari Karsinah. Mungkin
dari buku atau jrnal lain akan beda alur kerja
dan
perlakuannya
serta
komoditas yang digunakan.
berbeda
setiap
TERIMA KASIH
