Kadar Fenolik Total - Lumbung Pustaka UNY
advertisement
PENENTUAN KADAR FENOLIK TOTAL DAN STANDARDISASI EKSTRAK KULIT KAYU SECANG (CAESALPINIA SAPPAN L) SKRIPSI Diajukan kepada Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Yogyakarta Untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan Guna Memperoleh Gelar Sarjana Sains Kimia Oleh : Zainab Muthi’ah 12307144035 PROGRAM STUDI KIMIA JURUSAN PENDIDIKAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS NEGERI YOGYAKARTA 2016 MOTTO “Sesungguhnya beserta kesulitan itu ada kemudahan. Maka apabila engkau telah selesai, maka tegaklah. Dan hanya kepada Tuhanmu, hendaknya engkau berharap.” (QS. Al-Insyiraa (94): 5-8) “... Cukuplah Allah (menjadi penolong) bagi kami dan Dia sebaik-baik pelindung.” (QS. Ali ‘Imran (3): 173) PERSEMBAHAN Dengan menyebut nama Allah Yang Maha Pengasih lagi Maha Penyayang Karya ini saya persembahkan untuk: Orang tuaku tercinta, Bapak Nacep & Ibu Titik Kakakku, M. Yusuf Abdul Karim Adikku, Ali Abdul Hakim Sahabat-sahabatku, Kawanan Wanita Bahagia vi PENENTUAN KADAR FENOLIK TOTAL DAN STANDARDISASI EKSTRAK KULIT KAYU SECANG (CAESALPINIA SAPPAN L) Oleh : Zainab Muthiah NIM. 12307144035 Pembimbing: Dra., C. Budimarwanti, M.Si dan Idah Rosidah, M.Farm.Apt ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar fenolik total dalam ekstrak kental dan ekstrak kering, kandungan senyawa metabolit sekunder ekstrak kulit kayu secang (Caesalpinia Sappan L.) berdasarkan uji fitokimia kualitatif, dan standardisasi ekstrak kental dan ekstrak kering kulit kayu secang. Proses pembuatan ekstrak dilakukan dengan metode maserasi-perkolasi menggunakan pelarut etanol 30%, 50%, dan 70%, dilanjutkan dengan penapisan fitokimia kualitatif terhadap alkaloid, flavanoid, tanin, steroid, dan saponin. Hasil ekstraksi dibuat ekstrak kental dan ekstrak kering kemudian ditentukan kadar fenolik totalnya menggunakan metode Folin-Cioulciateu dengan standar ekivalen asam galat (EAG) dan standardisasi ekstrak terhadap parameter spesifik dan parameter non-spesifik. Hasil penapisan fitokimia menunjukkan ekstrak kulit kayu secang mengandung senyawa metabolit sekunder flavanoid, tanin/polifenol, steroid, dan saponin. Hasil penentuan kadar fenolik total dari ekstrak kulit kayu secang menggunakan pelarut etanol 30%, 50%, dan 70% bertrut-turut adalah 396,29 ± 10,85 mg EAG/g Ekstrak, 409,46 ± 14,16 mg EAG/g Ekstrak, dan 608,23 ± 28,13 mg EAG/g Ekstrak. Kadar fenolik total pada ekstrak kering terbaik adalah ekstrak kering (laktosa) sebesar 513,70 ± 44,52 mg EAG/g Ekstrak. Ekstrak kental dan ekstrak kering kulit kayu tanaman secang yang dibuat memenuhi standar yang telah ditentukan dalam FHI (Farmakope Herbal Indonesia). Kata kunci: secang (Caesalpinia Sappan L.), ekstraksi, kadar fenolik total, standardisasi, penapisan fitokimia vii DETERMINATION OF TOTAL PHENOLIC CONTENT AND STANDARDIZATION OF SECANG (CAESALPINIA SAPPAN L.) WOOD EXTRACT By : Zainab Muthiah Number of Student: 12307144035 Supervisor: Dra., C. Budimarwanti, M.Si and Idah Rosidah, M.Farm.Apt ABSTRACT The aim of this research were to determine total phenolic content in secang (Caesalpinia sappan L) wood extract, to know it’s secondary metabolites content based on qualitative phytochemical screening, and it’s standardization of the thick and dried extract. The production process of secang wood extract was carried out by maceration-percolation extraction method using ethanol 30%,50%,and 70% solvent, and then the qualitative phytochemical screening. The determination total phenolic content of thick and dried extract using Folin-Cioulciateu Assay method with gallic acid equivalent (EAG) standard and extracts standardization against specific and non-specific parameters. Based on screening phytochemical, secang wood extract contains flavonoids, tannin/polyphenol, steroids, and sapponins. The total phenolic content of the extracts respectively from ethanol 30%, 50%, and 70% solvent was 396.29 ± 10.85 mg GAE/g Extract, 409.46 ± 14.16 mg GAE/g Extract, dan 608.23 ± 28.13 mg GAE/g Extract. Total phenolic content of the best dried extract (lactose) was 513.70 ± 44.52 mg GAE/g Extract. These Results were in accordance with FHI (Farmakope Herbal Indonesia) standard. Keywords: secang (Caesalpinia Sappan L ), extraction, total phenolic content, standardization, screening phytochemical viii KATA PENGANTAR Assalamu’alaikum Warahmatullahi Wabarakatuh Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT atas limpahan rahmat, karunia, dan hidayah-Nya sehingga laporan tugas akhir skripsi ini mampu penulis selesaikan. Sholawat serta salam semoga terlimpah kepada Nabi Muhammad SAW beserta keluarga, sahabat, dan para pengikutnya sampai hari kiamat. Pada kesempatan ini perkenankanlah penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Bapak Dr. Hartono selaku Dekan FMIPA Universitas Negeri Yogyakarta yang telah memberikan izin dalam penulisan tugas akhir ini. 2. Bapak Drs. Jaslin Ikhsan, M.App.Sc., Ph.D selaku Ketua Program Studi dan Koordinator Tugas Akhir Skripsi Program Studi Kimia, Jurusan Pendidikan Kimia, Universitas Negeri Yogyakarta yang telah memberikan kelancaran pelayanan dan urusan akademik. 3. Ibu Dra. C. Budimarwanti, M.Si selaku ketua penguji dan dosen pembimbing utama yang telah memberikan bimbingan, pengarahan, dan saran. 4. Dr. Amanatie, M.Pd., M.Si. selaku sekretaris penguji, atas pertanyaan, kritik, dan saran yang diberikan. 5. Prof. Dr. Indyah Sulistyo Arty, M.S. selaku penguji utama dan Drs. Karim Theresih, SU selaku penguji pendamping, atas pertanyaan, kritik, dan saran yang diberikan. 6. Ibu Dra. Eddy Sulistyowati, M. Apt., MS. selaku Dosen Penasehat Akademik yang telah memberikan dorongan dalam penulisan tugas akhir ini. 7. Bapak Prasetyawan Yunianto, S.Si., MP. selaku kepala LTFM-BPPT Serpong, Ibu Idah Rosidah, M.Farm.Apt selaku dosen pembimbing di Laboratorium LTFM-BPPT Serpong, dan Bapak Ibu pelaksana di Laboratorium Teknologi Farmasi dan Medika BPPT yang tidak dapat ix disebutkan satu per satu yang telah memberikan, bimbingan, pengarahan, dan saran. 8. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu yang telah membantu terselesaikannya penyusunan Tugas Akhir Skripsi ini. Semoga laporan ini dapat bermanfaat. Wassalamu’alaikum Warahmatullahi Wabarakatuh Yogyakarta, 10 Oktober 2016 Penulis x DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN ......................................................................... ii HALAMAN PERNYATAAN .......................................................................... iii HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iv HALAMAN MOTTO ....................................................................................... v HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................... vi ABSTRAK ......................................................................................................... vii ABSTRACT ........................................................................................................ viii KATA PENGANTAR ...................................................................................... ix DAFTAR ISI ..................................................................................................... Xi DAFTAR TABEL ............................................................................................. Xv DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xviii DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xxi BAB I PENDAHULUAN ................................................................................. 1 A. Latar Belakang ............................................................................................. 1 B. Identifikasi Masalah .................................................................................... 4 C. Pembatasan Masalah .................................................................................... 5 D. Rumusan Masalah ........................................................................................ 6 E. Tujuan Penelitian ......................................................................................... 6 F. Manfaat Penelitian ....................................................................................... 7 BAB II KAJIAN PUSTAKA .......................................................................... 8 A. KAJIAN PUSTAKA ................................................................................... 8 1. Secang (Caesalpinia sappan L) .............................................................. 8 2. Ekstraksi .................................................................................................. 14 a. Metode Ekstraksi ............................................................................. 14 b. Jenis Ekstrak .................................................................................... 19 3. Uji Fitokimia ( Penapisan Fitokimia) ..................................................... 23 4. Uji Fenolik Total ................................................................................... 27 xi 5. Spektroskopi UV-Visibel ........................................................................ 30 a. Absorpsi cahaya ............................................................................... 30 b. Hukum Dasar Spektroskopi Absorpsi ............................................. 31 c. Instrumen Spektroskopi UV-Vis ..................................................... 33 6. Standardisasi Ekstrak .............................................................................. 35 a. Parameter Non-Spesifik ................................................................... 36 b. Parameter Spesifik ........................................................................... 37 B. Penelitian yang Relevan .............................................................................. 38 C. Kerangka Berfikir Teoritis ........................................................................... 40 BAB III METODE PENELITIAN ................................................................. 42 A. Subjek dan Objek Penelitian ........................................................................ 42 1. Subjek Penelitian .................................................................................... 42 2. Objek Penelitian ..................................................................................... 42 B. Alat dan Bahan ............................................................................................ 42 1. Alat utama penelitian ............................................................................. 42 2. Bahan utama penelitian .......................................................................... 43 C. Prosedur Penelitian ...................................................................................... 44 1. Penyiapan Simplisia ................................................................................ 44 2. Ekstraksi .................................................................................................. 44 3. Uji Fitokimia Pada ekstrak cair .............................................................. 46 a. Alkaloid ........................................................................................... 46 b. Uji Flavonoid ................................................................................... 47 c. Uji Tanin .......................................................................................... 48 d. Uji Saponin ...................................................................................... 48 e. Uji Steroid ........................................................................................ 49 4. Standardisasi Ekstrak Kental Kayu Secang ........................................... 49 a. Susut Pengeringan ........................................................................... 49 b. Kadar Abu Total .............................................................................. 50 c. Kadar Abu yang Larut Dalam Asam ............................................... 51 d. Sisa Pelarut ...................................................................................... 51 e. Senyawa Terlarut dalam Pelarut ...................................................... 53 xii 5. Analisa Kandungan Total Fenolik .......................................................... 54 a. Mencari λ maksimal ......................................................................... 54 b. Membuat Kurva Standar Asam Galat .............................................. c. Mengukur Absorbansi Sampel ......................................................... 54 54 6. Standardisasi Ekstrak Kering ................................................................. 55 a. Organoleptik .................................................................................... 55 b. Kadar Air ......................................................................................... 55 c. Laju Alir ........................................................................................... 55 BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN............................... 56 A. Hasil ............................................................................................................. 56 1. Pembuatan Ekstrak Secang .................................................................... 56 2. Penapisan Fitokimia Kualitatif .............................................................. 57 3. Standardisasi Ekstrak Kental ................................................................. 60 4. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kental.............................................. 60 5. Standardisasi Ekstrak Kering ................................................................ 61 a. Organoleptik .................................................................................... 61 b. Kadar Air ......................................................................................... 62 c. Sifat Alir .......................................................................................... 62 6. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kering ............................................. 63 B. Pembahasan ................................................................................................. 63 1. Pembuatan Ekstrak Secang ..................................................................... 63 2. Penapisan Fitokimia Kualitatif .............................................................. 64 a. Alkaloid ....................................................................................... 65 b. Tanin & Polifenol ........................................................................ 67 c. Saponin ........................................................................................ 68 d. Flavanoid ..................................................................................... 68 e. Steroid ......................................................................................... 69 f. Pembandingan Sampel Ekstrak Secang Dengan Standar Asam Galat Menggunakan KLT ................................................................ 70 3. Standardisasi Ekstrak Kental ................................................................ 71 4. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kental ........................................... 74 xiii a. Mencari λ Maksimal untuk pengukuran dengan cara scaning dari panjang Membuat Kurva Standar..................................................... 74 b. Membuat Kurva Standar .................................................................. 75 c. Mengukur Absorbansi Sampel ........................................................ 76 5. Standardisasi Ekstrak Kering ............................................................... 78 6. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kering ........................................... 81 a. Membuat Kurva Standar .................................................................. 81 b. Mengukur Absorbansi Sampel ........................................................ 83 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN............................................................. 85 A. Kesimpulan .................................................................................................. 85 B. Saran ............................................................................................................ 86 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 87 LAMPIRAN ....................................................................................................... 91 xiv DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Spektrum Tampak dan Warna-warna Komplementer ........................... 30 Tabel 2. Parameter Standar Ektrak Tanaman Obat .............................................. 35 Tabel 3. Hasil Ekstrak Cair dan Ekstrak kental ................................................... 56 Tabel 4. Hasil Skrining Fitokimia ekstrak etanol 30%, 50%, 70% kayu secang.. 58 Tabel 5. Hasil perhitungan Rf KLT...................................................................... 59 Tabel 6. Standardisasi ekstrak kental .................................................................... 60 Tabel 7. Kadar Total Fenolik Ekstrak Kental ....................................................... 60 Tabel 8. Hasil Pengamatan Organoleptik ............................................................. 61 Tabel 9. Hasil Perhitungan Kadar Air .................................................................. 61 Tabel 10. Hasil Perhitungan Sifat Alir .................................................................. 62 Tabel 11. Kandungan Total Fenolik Ekstrak Kering 70% ................................... 63 Tabel 12. Absorbansi Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kental ....................... 75 Tabel 13. Absorbansi Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kering ....................... 82 Tabel 14. Perhitungan Parameter Susut Pengeringan ........................................... 92 Tabel 15. Perhitungan Parameter Kadar Abu Total .............................................. 93 Tabel 16. Perhitungan Parameter Kadar Abu Tak Larut Asam ............................ 94 Tabel 17. Perhitungan Parameter Sari Larut Air .................................................. 95 Tabel 18. Perhitungan Parameter Sari Larut Etanol ............................................. 96 Tabel 19. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 1 ( etanol 1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... 97 Tabel 20. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 2 ( etanol 1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... 98 Tabel 21. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 3 ( etanol 1% nxv propanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 22. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 4 ( etanol 1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 23. Data Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 1 ( etanol 0,75% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 24. Data Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 2 ( etanol 0,75% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 25. Data Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 3 ( etanol 0,75% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 26. Data Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 1 ( etanol 0,5% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 27. Data Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 2 ( etanol 0,5% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 28. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 1 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 29. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 2 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 30. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 3 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 31. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 4 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 32. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 1 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 33. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 2 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 34. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 3 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 35. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 4 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 36. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 5 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 37. Data Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 1 ( etanol 0,05% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 38. Data Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 2 ( etanol 0,05% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 39. Data Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 3 ( etanol 0,05% npropanol 0,5% ) .................................................................................... Tabel 40. Rasio Perbandingan luas area etanol dengan n-propanol standar ......... 99 Tabel 41. Tabel Konsentrasi dan Rasio Perbandingan ......................................... 119 xvi 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 Tabel 42. Perhitungan Persamaan Regresi ........................................................... 120 Tabel 43. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 1 ... 121 Tabel 44. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 2 ... 122 Tabel 45. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 3 ... 123 Tabel 46. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 1 ... 124 Tabel 47. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 2 ... 125 Tabel 48. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 3 ... 126 Tabel 49. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 1 ... 127 Tabel 50. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 2 ... 128 Tabel 51. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 3 ... 129 Tabel 52. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 4.... 130 Tabel 53. Kadar Sisa Pelarut Etanol ekstrak Kental Secang ................................. 131 Tabel 54. Absorbansi Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kental ....................... 132 Tabel 55. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Linier Asam Galat untuk 134 Ekstrak Kental ...................................................................................... Tabel 56. Perhitungan Kadar Fenolik Total Ekstrak Kental Secang .................... 135 Tabel 57. Perhitungan Kadar Air .......................................................................... 137 Tabel 58. Perhitungan Sifat alir/ Sudut diam ........................................................ 138 Tabel 59. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Linier Asam Galat untuk Ekstrak Kering ...................................................................................... Tabel 60. Perhitungan Kadar Fenolik Total Ekstrak Kental Secang .................... xvii 140 141 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Struktur Asam Galat ............................................................................ 10 Gambar 2. Struktur Kimia Tanin ........................................................................... 12 Gambar 3. Struktur Asam Urat .............................................................................. 13 Gambar 4. Persamaan perubahan warna folin (kuning) menjadi kompleks molybdenum (biru) ............................................................................. 28 Gambar 5. Mekanisme metode folin-ciocalteu ...................................................... 29 Gambar 6. Landasan Hukum Lambert-Beer .......................................................... 31 Gambar 7. Skema Spektroskopi UV-Vis Single Beam ........................................ 33 Gambar 8. Skema Spektroskopi UV-Vis Double-Beam ...................................... 34 Gambar 9. Skema alat perkolator .......................................................................... 45 Gambar 10. Ekstrak cair secang hasil ekstraksi maserasi-perkolasi ..................... 56 Gambar 11. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Secang Berbagai variasi (a) Sinar Visibel, (b) UV 366 .................................................................. 59 Gambar 12. Reaksi uji Mayer ................................................................................ 66 Gambar 13. Reaksi Uji Wagner ............................................................................. 66 Gambar 14. Persamaan reaksi salah satu gugus hidroksil pada senyawa tanin berekasi dengan reagen FeCl3 menghasilkan kompleks warna dan endapan .............................................................................................. 67 Gambar 15. Reaksi hidrolisis saponin dalam air ................................................... 68 Gambar 16. Persamaan reaksi pembentukan garam flavilium .............................. 69 Gambar 17. Persamaan reaksi terpenoid/steroid dengan H2SO4 yang menyebabkan perubahan warna ......................................................... 70 Gambar 18. Kurva Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kental ............................ 75 Gambar 19. Grafik Perbandingan Kadar Fenolik Total Sampel ........................... 77 Gambar 20. Kurva Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kering ............................ 82 Gambar 21. Desain penelitian ............................................................................... 91 Gambar 22. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 1 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) ................................................................................................. xviii 96 Gambar 22. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 2 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) ................................................................................................. 97 Gambar 23. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 3 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) ................................................................................................. 98 Gambar 24. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 4 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) ................................................................................................. 99 Gambar 25. Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 1 ( etanol 0,75% npropanol 0,5% ) ................................................................................. 100 Gambar 26. Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 2 ( etanol 0,75% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 101 Gambar 27. Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 3 ( etanol 0,75% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 102 Gambar 28. Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 1 ( etanol 0,5% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 103 Gambar 29. Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 2 ( etanol 0,5% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 104 Gambar 30. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 1 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 105 Gambar 31. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 2 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 106 Gambar 32. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 3 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 107 Gambar 33. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 4 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 108 Gambar 34. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 1 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 109 Gambar 35. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 2 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 110 Gambar 36. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 3 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................. Gambar 37. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 4 ( etanol 0,1% nxix 111 propanol 0,5% ) .................................................................................. 112 Gambar 38. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 5 ( etanol 0,1% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 113 Gambar 39. Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 1 ( etanol 0,05% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 114 Gambar 40. Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 2 ( etanol 0,05% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 115 Gambar 41. Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 3 ( etanol 0,05% npropanol 0,5% ) .................................................................................. 116 Gambar 42. Kurva Standar Sisa Pelarut Etanol ..................................................... 117 Gambar 43. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 1.......... 121 Gambar 44. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 2 ......... 122 Gambar 45. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 3.......... 123 Gambar 46. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 1.......... 124 Gambar 47. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 2.......... 125 Gambar 48. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 3.......... 126 Gambar 49. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 1.......... 127 Gambar 50. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 2.......... 128 Gambar 51. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 3.......... 129 Gambar 52. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 4 .......... 130 Gambar 52. Grafik Spektroskopi UV-Vis Pengukuran λ Maksimum ................... xx 132 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Desain Penelitian ............................................................................... 91 Lampiran 2. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Susut Pengeringan) ....... 92 Lampiran 3. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Kadar Abu Total).......... 93 Lampiran 4. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Kadar Abu Tidak Larut 94 Asam) .............................................................................................. Lampiran 5. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Sari Larut Air) .............. 95 Lampiran 6. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Sari Larut Etanol).......... 96 Lampiran 7. Data Kromatogram Standar Etanol dalam penentuan Sisa Pelarut 97 Etanol (Standardisasi Ekstrak Kental) ............................................. Lampiran 8. Perhitungan Kurva Standar Etanol dalam penentuan Sisa Pelarut 117 Etanol (Standardisasi Ekstrak Kental).............................................. Lampiran 9. Data Kromatogram Pengukuran Sampel dalam penentuan Sisa 121 Pelarut Etanol (Standardisasi Ekstrak Kental) ................................. Lampiran 10. Perhitungan Sisa Pelarut Etanol dalam sampel (Standardisasi 131 Ekstrak Kental) ................................................................................ Lampiran 11. Kandungan Fenolik Total dalam Ekstrak Kental ............................ 132 Lampiran 12. Standardisasi Ekstrak Kering Organoleptik .................................... 136 Lampiran 13. Perhitungan Kadar Air Ekstrak Kering ........................................... 137 Lampiran 14. Perhitungan Sifat Alir Ekstrak Kering ............................................ 138 Lampiran 15. Kandungan Total Fenolik Ekstrak Kering ...................................... 139 xxi BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah Hasil alam yakni yang berasal dari tanaman maupun hewan sudah sejak lama dimanfaatkan manusia dalam berbagai aspek kehidupan. Salah satu penggunaan hasil alam yang paling sering digunakan adalah sebagai obat. Penggunaan tanaman sebagai obat sudah tercatat sejak 5000 tahun yang lalu, selain itu pengobatan herbal juga sudah dikenal di China selama lebih dari 2000 tahun, dalam litelatur kuno China tercatat lebih dari 100.000 resep pengobatan herbal tradisional China yang menggunakan tanaman sebagai bahan utamanya (Tri Joko Raharjo,2013,1-3). Hasil alam juga memegang peranan penting dalam pencarian obat-obatan modern, seperti sitesis aspirin, taxol, efedrin, dan kuinin serta masih banyak lagi, dimana merupakan senyawa alam yang memiliki kegunaan farmakologis tertentu. Pengembangan obat baru dari hasil alam memerlukan waktu yang lama, serta sangat dimungkinkan dari sekian ribu senyawa yang ditemukan hanya beberapa yang sampai digunakan menjadi obat, tahap-tahap dalam pengembangan senyawa hasil alam menjadi obat dengan cara sebagai berikut : pencarian senyawa aktif secara farmakologis yang struktur senyawanya dijadikan dasar untuk pengembangan obat, uji praklinik (uji farmakologi terhadap hewan), uji klinis (tes efek obat terhadap manusia), pendaftaran obat, dan terakhir persetujuan dari FDA (Food and Drug Administration). Tahap-tahap seperti diatas memerlukan waktu yang relatif lama, memakan waktu sekitar 10-15 tahun (Tri Joko Raharjo, 2013, 71 9). Proses pengembangan obat tidak selalu berjalan mulus, suatu tanaman maupun ekstrak tanaman yang sudah digunakan dalam pengobatan dalam waktu yang lama dan terbukti efektif, setelah diisolasi senyawa-senyawanya belum tentu menghasilkan senyawa yang aktif, serta tidak selalu senyawa aktif diperoleh dari tanaman obat atau ekstrak aktif. Penjelasan yang masuk akal yang mungkin dari fenomena tersebut adalah kemungkinan bahwa aktivitas yang terbaca dalam ekstrak tanaman dimungkinkan merupakan hasil sinergi dari berbagai senyawa, yang mana senyawa – senyawa tersebut apabila dipisahkan tidak mempunyai aktifias seperti yang diharapkan (Tri Joko Raharjo, 2003,9). Asam urat adalah produk dari metabolisme purin yang mengendap di persendian dan membentuk kristal kecil sehingga menimbulkan rasa nyeri yang hebat dan kaku, juga pembesaran dan penonjolan sendi yang bengkak. Pada kondisi tertentu dapat terjadi peningkatan kadar asam urat dalam darah melebihi batas normal yang disebut hiperurisemia (Walker dan Edward, 2003). Hiperurisemia dapat disebabkan oleh tingkat produksi asam urat yang berlebih, ekskresi asam urat melalui ginjal yang berkurang atau kombinasi keduanya. Hiperurisemia yang lanjut dapat berkembang menjadi gout. Gout merupakan jenis penyakit metabolik yang keberadaannya cukup populer di kalangan masyarakat Indonesia khususnya orang berusia pertengahan hingga yang berusia lanjut (Price dan Wilson, 2005). Obat sintetik yang biasa digunakan untuk mengatasi asam urat adalah allopurinol. Allopurinol merupakan suatu analog asam urat, bekerja menghambat pembentukan asam urat dari prekursornya (xantin dan hipoxantin) dengan menghambat aktivitas enzim xantin oksidase (Price dan Wilson, 2005). 2 Akan tetapi allopurinol memiliki beberapa efek samping yaitu kemerahan pada kulit, leukopenia, kadang–kadang terjadi toksisitas pada gastrointestinal dan meningkatkan serangan akut gout pada awal terapi (Dipiro dkk., 2005). Oleh karena itu, sekarang masyarakat banyak yang menggunakan tanaman obat sebagai obat tradisional dalam mengatasi penyakit hiperurisemia karena memiliki efek samping yang relatif aman, mudah didapatkan, dan harganya relatif murah dibandingkan dengan obat sintesis. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan secang mampu menghambat aktivitas enzim xantin oksidase sampai 56,47%, yang memiliki 2/3 dari aktivitas penghambat enzim xantin oksidase dari obat sintesis allopurinol yakni sebesar 87,47% (Pertamawati dan Mutia, 2015, 12-15). Menurut literatur penghambatan kerja enzim xantin oksidase disebabkan olehkandungan gugus fenolik yang tinggi dalam tanaman secang. Selain dapat mengahambat kerja xantin oksidase gugus fenolik juga dapat dijadikan antioksidan, yakni sumber antioksidan alami. Polifenol biasanya disebut sebagai kelompok senyawa alami yang mengandung beberapa fungsi fenolik (Tuchmantel dkk, 1999). Polifenol alami memiliki banyak aktivitas biologi, khususnya sebagai antioksidan. Flight dan Clifton (2006) menyatakan bahwa dengan mengkonsumsi senyawa polifenol dapat memberikan manfaat bagi kesehatan. Asam galat (GA) adalah senyawa fenolik antioksidan alami yang secara luas digunakan dalam makanan, obatobatan, dan kosmetik. Sedangkan asam klorogenat (CGA) adalah komponen antioksidan yang diproduksi oleh tanaman sebagai respons terhadap kondisi 3 lingkungan seperti infeksi oleh mikroba patogen, mekanik, dan sinar UV atau tingkat cahaya tampak yang berlebihan (Farah dan Donangelo, 2006). Kulit kayu secang (Caesalpinia sappan L.) secara empiris dimanfaatkan sebagai bahan untuk pengobatan penyakit asam urat. Berbagai macam zat yang terkandung dalam kulit kayu secang antara lain brazilin, alkaloid, flvonoid, saponin, tanin, fenilpropana dan terpenoid. Selain itu juga mengandung asam galat, delta-aphellandrene, oscimene, resin dan resorin (Xu dkk, 1994. ) Penelitian mengenai efek secang sebagai agen antihiperurisemia, anti bakteri, obat kanker dan masih banyak lagi telah banyak dikembangkan, sedangkan penelitian mengenai standardisasi ekstrak secang terhadap berbagai konsentrasi pelarut belum banyak dilakukan, maka dilakukan penelitian terhadap standardisasi ekstrak herbal secang terstandar dengan berbagai pelarut, sehingga diperoleh ekstrak herbal secang terstandar. B. Identifikasi Masalah Berdasarkan latar belakang penelitian ini maka dapat diidentifikasi beberapa masalah seperti berikut: 1. Tanaman yang akan dibuat ekstrak 2. Jenis metode yang digunakan untuk ekstraksi 3. Pelarut yang digunakan untuk mengekstraki 4. Metode identifikasi yang digunakan untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak 5. Senyawa penanda (senyawa marker) yang akan dianalisa 6. Instrumen yang digunakan untuk menentukan kadar fenolik total 4 7. Aspek Standardisasi obat herbal (berasal dari bahan alami) yang digunakan untuk ekstrak kering maupun kental C. Pembatasan Masalah Batasan masalah dalam penelitian “Penentuan Kadar Fenolik Total Dan Standardisasi Ekstrak Kulit Kayu Secang (Caesalpinia Sappan L) “ ini adalah: 1. Tanaman yang akan dibuat ekstrak adalah kulit kayu tanaman secang (Caesalpina Sappan L). 2. Pembuatan ekstrak dilakukan dengan metode ekstraksi maserasi-perkolasi. 3. Pelarut yang digunakan untuk mengekstraksi adalah etanol 30%, 50%, dan 70%. 4. Metode yang digunakan untuk identifikasi kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak kulit kyu secang aadalah penapisan fitokimia secara kualitatif. 5. Senyawa penanda (senyawa marker) yang akan dianalisa adalah senyawa fenolik total. 6. Penentuan kadar fenolik total dilakukan dengan instrumen spektroskopi UVVisible. 7. Standardisasi ekstrak kental yang dilakukan adalah susut pengeringan, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, sisa pelarut, kelengketan, Senyawa terlarut dalam air, serta senyawa terlarut dalam etanol. Serta standardisasi ekstrak kering yang dilakukan adalah organoleptik, kadar air, dan sifat alir. 5 D. Rumusan Masalah Rumusan masalah dari penelitian “Penentuan Kadar Fenolik Total Dan Standardisasi Ekstrak Kulit Kayu Secang (Caesalpinia Sappan L) “ yaitu: 1. Berapa kadar fenolik total dalam ekstrak kental dan ekstrak kering kayu secang (Caesalpinia Sappan L.) yang dibuat? 2. Apa saja kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak kayu secang (Caesalpinia Sappan L.) berdasarkan uji fitokimia kualitatif? 3. Apakah ekstrak kayu kulit secang yang telah dibuat memenuhi standar yang telah ditetapkan dalam FHI (Farmakope Herbal Indonesia? E. Tujuan Penelitian Tujuan dari penelitian “Penentuan Kadar Fenolik Total Dan Standardisasi Ekstrak Kulit Kayu Secang (Caesalpinia Sappan L)“ yaitu: 1. Mengetahui kadar fenolik total yang terdapat dalam ekstrak kental dan ekstrak kering kulit kayu secang (Caesalpinia Sappan L.). 2. Mengetahui kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak kayu secang (Caesalpinia Sappan L.) berdasarkan uji fitokimia kualitatif. 3. Mengetahui apakah ekstrak yang telah dibuat telah memenuhi standar yang telah ditetapkan dalam FHI (Farmakope Herbal Indonesia. 6 F. Manfaat Penelitian Manfaat dari penelitian “Penentuan Kadar Fenolik Total Dan Standardisasi Ekstrak Kulit Kayu Secang (Caesalpinia Sappan L) “ yaitu: 1. Memberikan pengetahuan tentang kadar fenolik total yang terdapat dalam ekstrak kental dan ekstrak kering kayu secang (Caesalpinia Sappan L.). 2. Memberikan pengetahuan tentang kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak kayu secang (Caesalpinia Sappan L.). 3. Memberikan pengetahuan tentang apakah ekstrak yang telah dibuat telah memenuhi standar yang telah ditetapkan dalam FHI (Farmakope Herbal Indonesia. 7 BAB II KAJIAN PUSTAKA A. KAJIAN PUSTAKA 1. Secang (Caesalpinia sappan L) a. Deskripsi Secang atau sepang (Caesalpinia sappan L.) adalah pohon anggota suku polong-polongan (Fabaceae) yang dimanfaatkan kulit kayu dan kayunya sebagai komoditi perdagangan rempah-rempah. Secang merupakan semak atau pohon kecil dengan tinggi sampai 10 meter. Ranting-ranting secang berlentisel dan berduri dengan bentuk duri bengkok dan tersebar. Secang memiliki daun majemuk dengan panjang 25 sampai 30 cm, bersirip, setiap sirip mempunyai 10 sampai 20 pasang anak daun yang berhadapan. Anak daun tersebut tidak bertangkai, berbentuk lonjong, pangkal hampir rompang ujung bundar dan sisinya agak sejajar (BPOM RI , 2004: 15). Tumbuhan ini berasal dari Asia Tenggara maritim (Nusantara) dan mudah ditemukan di Indonesia. Kulit kayunya dimanfaatkan orang sebagai bahan pengobatan, pewarna, dan minuman penyegar. Hingga abad ke-17 kulit kayunya menjadi bagian perdagangan rempah-rempah dari Nusantara ke berbagai tempat di dunia. Ia dikenal dengan berbagai nama, seperti seupeng (Aceh), sepang (Gayo), sopang (Toba), cacang (Minangkabau), secang (Sunda), secang (Jawa), secang (Madura), sepang (Sasak), supa (Bima), sepel (Timor), hape (Sawu), hong (Alor), sepe (Roti), kayu sema (Manado), dolo (Bare), sapang (Makasar), sepang (Bugis), sefen (Halmahera selatan), sawala, 8 hiniaga, sinyiang, singiang (Halmahera Utara), sunyiang (Ternate), roro (Tidore), sappanwood (Inggris), dan suou (Jepang). Kerabat dekatnya yang berasal dari Amerika Selatan, kayu brazil atau brezel (C. echinata), juga dimanfaatkan untuk hal yang sama (BPOM RI, 2008: 18). b. Klasifikasi Tanaman Secang Kerajaan :Plantae (Tumbuhan) Divisi :Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga) Kelas :Magnoliopsida (Berkeping dua / dikotil) Ordo :Fabales Famili :Fabaceae(Polong-polongan) Genus :Caesalpinia Spesies :C. Sappan L Nama binomial :Caesalpinia sappan L.(Depkes, 2008:19) c. Kandungan kimia Secang kaya kandungan kimia, kayunya mengandung asam galat, brasilin, brasilein, delta-alpa-phellandrene, oscimene, resin,resorsin, minyak atsiri, dan tanin. Sementara daunnya mengandung 0,16-0,20% minyak atsiri yang beraroma enak dan tidak berwarna. Secara keseluruhan tanaman ini bersifat sepat serta tidak berbau. Adapun yang memegang peran penting dalam aktivitas antioksidan dan obat anti-hiperurisemiaadalah senyawasenyawa fenolik yang terkndung dalam tanaman secang yakni asam galat dan 9 taninyang kebanyakan terdapat dalam batang pohonnya, berikut penjelasan mengenai kedua senyawa tersebut. 1) Asam Galat (Asam 3,4,5-trihidroksibenzoat) Asam galat adalah senyawa golongan asam fenolik C6-C1 atau hidroksibenzoat, yaitu asam 3,4,5-trihidroksibenzoat. Asal kata galat adalah kata galle dalam bahasa Prancis yang berarti pembengkakan pada jaringan tanaman setelah terserang serangga parasit. Senyawa ini dapat ditemukan pada daun ek dan anggur dan memiliki aktivitas sebagai antioksidan (penangkal radikal bebas). Asam galat adalah subunit dari galotanin, yaitu polimer heterogen yang mengandung beberapa asam galat yang saling terikat dengan glukosa (monosakarida). galotanin dapat menghambat pertumbuhan tanaman karena dapat merombak enzim sitoplasma dengan cara mendenaturasi protein (dimana enzim terdiri dari protein). Struktur senyawa asam galat tertera pada Gambar 1. Gambar 1. Struktur Asam Galat / Asam 3,4,5-trihidroksibenzoat (Mujica.,dkk, 2009, 652) 2) Asam Tanat (Tanin) Tanin memiliki nama IUPAC1,2,3,4,6-pentagalat-β-D-glukopiranosa termasuk kelas utama dari metabolit sekunder yang tersebar luas pada 10 tanaman. Tanin merupakan polifenol yang larut dalam air dengan berat molekul biasanya berkisar 1000-3000 (Waterman dan Mole tahun 1994, Kraus dkk., 2003). Menurut definisi, tanin mampu menjadi pengompleks dan kemudian mempercepat pengendapan protein serta dapat mengikat makromolekul lainnya (Zucker, 1983). Tanin merupakan campuran senyawa polifenol yang jika semakin banyak jumlah gugus fenolik maka semakin besar ukuran molekulnya. Apabila dilihat dengan mikroskop, tanin tampak sebagai butir berwarna kuning, merah, atau cokelat. Tanin dapat ditemukan di daun, tunas, biji, akar, dan batang jaringan. Sebagai contoh dalam jaringan batang yakni di daerah pertumbuhan pohon, seperti floem sekunder dan xylem dan lapisan antara korteks dan epidermis. Tanin dapat membantu mengatur pertumbuhan jaringan ini. Tanin dapat bereaksi dengan protein membentuk kopolimer mantap yang tak larut dalam air. Dalam industri, tanin adalah senyawa yang berasal dari tumbuhan, yang mampu mengubah kulit hewan yang mentah menjadi kulit siap pakai karena kemampuannya menyambung silang protein. Secara fisika, tanin memiliki sifat-sifat: jika dilarutkan kedalam air akan membentuk koloid dan memiliki rasa asam dan sepat, jika dicampur dengan alkaloid dan glatin akan terjadi endapan, tidak dapat mengkristal, dan dapat mengendapkan protein dari larutannya dan bersenyawa dengan protein tersebut sehingga tidak dipengaruhi oleh enzim protiolitik. 11 Secara kimiawi, taninmemiliki sifat-sifat diantaranya: merupakan senyawa kompleks dalam bentuk campuran polifenol yang sukar dipisahkan sehingga sukar mengkristal, tanin dapat diidentifikasi dengan kromotografi, dan senyawa fenol dari tanin mempunyai aksi astrigensia (zat yang dapat meringkas pori), antiseptik dan pemberi warna Gambar 2. Struktur Kimia Tanin (1,2,3,4,6-pentagalat-β-D-glukopiranosa) (Mujica.,dkk, 2009, 652) d. Efek farmakologis Tanaman secang dapat dapat diajadikan obat beberapa penyakit, antara lain diare, disentri, batuk darah (TBC), luka dalam, sifilis, darah kotor, muntah darah, buang air besar berdarah, luka berdarah, memar berdarah, 12 malaria, tetanus, tumor, asam urat, kanker, anti bakteri dan radang selaput lendir mata (Kusmiati, 2014). Kandungan yang terdapat dalam batang pohon secang dapat bekerja sebagai penghenti pendarahan, pembersih darah, penawar racun, dan obat antiseptik . Karena tanaman ini mengandung senyawa anti bakteri dan bersifat anti koagulasi atau anti penggumpalan, maka secang dapat digumakan sebagai obat diare, batuk dan dapat menyembuhkan luka. Menurut penelitian lain secang juga memiliki aktivitas anti mikroba (Candra dan Saravakumar,2013,172-174) Pertamawati dan Mutia(2015) menyatakan bahwasecang mampu menghambat aktivitas enzim xantin oksidase sampai 56,47%, 2/3 dari aktivitas penghambat enzim xantin oksidase dari allopurinol (87,47%). Enzim xantin oksidase dalam tubuh merupakan enzim yang bekerja dalam pembentuk asam purin yang apabila menumpuk akan menjadi penyakit asam urat (hiperurisemia). Berikut ini penjelasan mengenai penyakit asam urat. Asam urat merupakan produk akhir dari metabolisme purin. Dalam keadaan normal, 90% dari hasil metabolit nukleotida yakni adenin, guanin, dan hipoxantin akan digunakan kembali sehingga terbentuk menjadi adenosine monophosphate (AMP), inosine monophosphate (IMP), dan guanosine monophosphate (GMP) dengan bantuan enzim adenine phosphoribosyl transferase (APRT) dan hipokxantine guanine phosphoribosyl transferase (HGPRT). Selanjutnya 10% sisa metabolit nukleotida akan diubah 13 menjadi xantin yang selanjutnya diubah menjadi asam urat, struktur asam urat seperti pada Gambar 3. Gambar 3. Struktur Asam Urat 2. Ekstraksi Ekstraksi adalah metode pemisahan bahan dari suatu zat padat maupun cair berdasarkan kelarutan bahan yang akan dipisahkan. Ekstrak merupakan sediaan pekat yang diperoleh dari proses ekstraksi simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai,kemudian pelarut diuapkan menggunakan alat evaporator. a. Metode Ekstraksi Berdasarkan suhuekstraksi, metode ekstraksi dibagi menjadi dua, yakni metode dingin dan metode panas. 1) Metode Dingin Merupakan metode ekstraksi tanpa penaikan atau penambahan temperatur awal (ekstraksi dilakukan pada temperatur ruang), berikut ini merupakan ekstraksi yang termasuk metode dingin: a) Maserasi Maserasi merupakan proses ekstraksi dengan perendaman simplisia menggunakan pelarut.Setelah beberapa kali pengadukan pada 14 suhu ruang kemudian simplisia direndam beberapa lama, biasanya selama 24 jam. Remaserasi dilakukann dengan menambahkan pelarut pada residu setelah dilakukan penyaringan ekstrak hasil maserasi yang pertama dan seterusnya. b) Perkolasi Perkolasi merupakan cara ekstraksi sederhana seperti halnya maserasi. Pada perkolasi, pelarut yang digunakan selalu baru,karena pelarut dialirkan melalui serbuk simplisia dan kemudian ditampung kedalam sebuah wadah yang ada selang menuju pompa, sehingga pelarut dipompa kembali ke tabung perkolasi. Prinsip perkolasi adalah sebagai berikut: serbuk simplisia ditempatkan dalam suatu bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut, cairan penyari akan melarutkan zat aktif sel-sel yang dilalui sampai mencapai keadaan jenuh. Gerak kebawah disebabkan oleh kekuatan gaya beratnya sendiri dan cairan diatasnya, dikurangi dengan daya kapiler yang cenderung untuk menahan. Kekuatan berperan pada perkolasi antara lain: gaya berat, kekentalan, daya larut, tegangan permukaan, difusi, osmosa, adesi, daya kapiler dan daya geseran. Secara umum proses perkolasi ini dilakukan pada suhu kamar. Sedangkan parameter berhentinya penambahan pelarut adalah perkolat sudah tidak mengandung senyawa aktif lagi. Pengamatan secara fisik 15 pada ekstraksi bahan alam terlihat pada tetesan perkolat yang sudah tidak berwarna. Cara perkolasi lebih baik dibandingkan dengan cara maserasi karena: (1) Sirkulasi pelarut menyebabkan adanya pergantian larutan yang terjadi dengan larutan yang konsentrasinya lebih rendah, sehingga meningkatkan derajat perbedaan konsentrasi larutan. (2) Ruangan diantara serbuk-serbuk simplisia membentuk saluran tempat mengalir cairan penyari.karena kecilnya saluran kapiler tersebut,maka kecepatan pelarut cukup untuk mengurangi lapisan batas,sehingga dapat meningkatkan perbedaan konsentrasi larutan. c) Maserasi-perkolasi Maserasi-perkolasi merupakan penggabungan metode maserasi dan perkolasi, dimana proses maserasi adalah perendaman, sedangkan proses perkolasi adalah proses sirkulasi pelarut, metode maserasiperkolasi ini juga tidak menggunakan pemanasan, pada metode ini lamanya perendaman serbuk simplisia adalah 30 menit serta lamanya sirkulasi pelarut sekitar 90 menit. 2) Metode Panas Merupakan metode ekstraksi dengan penaikan atau penambahan temperatur (ekstraksi dilakukan dengan pemanasan), berikut ini merupakan ekstraksi yang termasuk metode panas: 16 a) Refluks Refluks merupakan ekstraksi menggunakan pelarut pada suhu titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarutnya terbatas yang relatif konstan, menggunakan labu refluks leher tiga dengan rangkaian pendingin balik untuk mencegah pelarut menguap ke luar sistem refluks. b) Soxhlet Soxhlet merupakan ekstraksi menggunakan pelarut yang disirkulasi, pada umumnya dilakukan menggunakan alat khusus soxhlet sehingga terjadi ekstraksi secara terus menerus. Proses ekstraksi ini dilakukan pada suhu titik didih pelarut dengan pelarut yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Perbedaan soxhletasi dengan metode maserasi dan perkolasi adalah pada soxhletasi dilakukan pada suhu tertentu (suhu titik didih pelarut) sedangkan pada maserasi dilakukan pada suhu ruangan. c) Digesti Digesti adalah metode ekstraksi dengan cara maserasi kinetik (pengadukan kontinyu) menggunakan pemanasan lemah, yaitu pada suhu 40° – 50°C. Cara maserasi ini hanya dapat dilakukan untuk simplisia yang zat aktifnya tahan terhadap pemanasan. Dengan pemanasan diperoleh keuntungan antara lain: (1) Kekentalan pelarut berkurang, berkurangnya lapisan-lapisan batas. 17 yang dapat mengakibatkan (2) Daya melarutkan cairan penyari akan meningkat, sehingga pemanasan tersebut mempunyai pengaruh yang sama dengan pengadukan. (3) Koefisien difusi berbanding lurus dengan suhu dan berbanding terbalik dengan kekentalan, sehingga kenaikan suhu akan berpengaruhpada kecepatan difusi. Umumnya kelarutan zat aktif akan meningkat bila suhu dinaikkan. Jika cairan penyari mudah menguap pada suhu yang digunakan, maka perlu dilengkapi dengan pendingin balik, sehingga cairan akan menguap kembali ke dalam bejana. d) Infus Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur pemanasan air (bejana infus tercelup dalam air penangas yang mendidih), temperatur terukur (96-98 °C) selama waktu tertentu antara 15 hingga 20 menit. b. Jenis Ekstrak 1) Ekstrak Cair Ekstrak cair merupakan hasil dari suatu ekstarksi yang belum diberikan perlakuan apapun sehingga ekstrak yang didapat masih mengandung banyak pelarut. 18 2) Ekstrak Kental Ekstrak kental merupakan ekstrak kering yang telah melalui tahapan evaporasi (penguapan pelarut) sehingga ekstrak berbentuk pasta dengan sisa sedikit pelarut. 3) Ekstrak Kering Ekstrak kering merupakan hasil olahan dari ekstrak kental yang telah melalui tahapan penambahan filler dan pengeringan di dalam oven vakum, penambahan filler juga dilakukan untuk mendapatkan tekstur ekstrak kering yang baik, berikut ini penjelasan mengenai filler. a) Pengertian Filler Bahan pengisi juga disebut bahan pengencer / Filler / Diluents. Penambahan filler bertujuan untuk menyesuaikan bobot dan ukuran tablet sesuai yang dipersyaratkan, untuk membantu kemudahan dalam pembuatan, dan meningkatkan mutu sediaan tablet. Disamping sifat filler yang harus netral, secara kimia dan fisiologis harus dapat dicerna oleh tubuh. Walaupun filler biasanya dianggap netral, namun zat ini secara signifikan mempengaruhi sifat biofarmasetik, kimia dan fisik tablet.Filler yang digunakan pada pembuatan tablet umumnya jenis pati dan laktosa. Berbagaifiller merupakan hidrat (dibasik kalsium fosfat atau kalsium sulfat). Pada pemilihan filler akan dijumpai filler yang mengandung 2 jenis lembab yaitu terikat dan tidak terikat. Cara filler mengikat lembab lebih penting 19 dibandingkan daya tarik zat pada lembab atau jumlah lembab yang ada.Berdasarkan kelarutan filler dalam air dibagi menjadi 2 macam yaitu: (1) Filler yang larut air: laktosa sukrosa, glukosa, manitol, sorbitol (2) Filler tidak larut air: dikalsium fosfat, kalsium fosfat, amilum termodifikasi, mikrokristalin selulosa. Kriteria yang harus dimiliki oleh filler antara lain, sebagai berikut: harus non toksik, tidak kontraindikasi antar bahan, stabil secara fisik dan kimia, Bebas mikroba, netral secara fisiologis, tidak mengganggu metabolisme obat Jenis filler untuk tablet kempa sangat banyak, tetapi yang paling sering adalah laktosa. Banyak jenis laktosa dan semua laktosa tersebut tidak sama baiknya secara kimia, fisikokimia atau fungsional. Oleh karena itu dalam memilih filler beberapa faktor harus dipertimbangkan. b) Jenis-Jenis Filler Berikut ini beberapa jenisfiller yang sering digunakan dalam pembuatan ekstrak kering: (1) Laktosa Merupakan filler yang paling luas digunakan dalam formulasi sediaan tablet. Bentuk hidrat biasanya digunakan dalam sistem granulasi basah dan granulasi kering. Formula laktosa biasanya menunjukkan kecepatan pelepasan zat aktif dengan baik, mudah dikeringkan dan tidak peka terhadap variasi moderat dalam kekerasan tablet pada pengempaan.Laktosa dapat memadatkan massa granul dalam granulasi 20 basah atau metode kempa langsung. Laktosa merupakan filler yang baik sekali, digunakan dalam tablet yang mengandung zat aktif berkonsentrasi rendah karena mudah campur homogen. Selain itu harga laktosa lebih murah daripadafiller lainnya. (2) Pati (Amilum) Tablet yang menggunakan pati dalam konsentrasi tinggi sering lunak dan sulit dikeringkan. Secara komersial pati dapat mengandung lembab yang beragam antara 11-14%. Pati pada umumnya digunakan sebagai filler dan pengikat dalam tablet yang dibuat dengan metode granulasi basah dan kering. Satu-satunya pati modifikasi yang telah diterima sebagai filler dalam kempa langsung adalah Starch 1500 (3) Starch 1500 / Corn Starch Starch 1500 secara fisik dibuat dari pati jagung. Apabila dikempa sendirian, zat ini mudah melubrikasi dan hancur. Sehingga pada starch 1500 harus dikombinasikan dengan 5-10% komponen yang tidak bersifat lubrikan. Starch 1500 memiliki kemampuan mengalir yang lebih baik daripada pati biasa dan memenuhi spesifikasi untuk pati pragelatinasi. Starch 1500 memiliki kandungan lembab yang cukup tinggi yaitu 12-13% ( Siregar, C.J.P dan Wikarsa, S : 2010). (4) Mikrokristalin Selulosa / Avicel PH 102 Dalam perdagangan, bahan ini sering dihubungkan sebagai Avicel PH 101 (serbuk) dan Avicel PH 102 (granula) yang digunakan luas dalam pembuatan tablet kempa langsung dan menunjukkan 21 kekerasan dan friabilitas yang baik. Avicel PH 103 juga baik digunakan untuk tablet kempa langsung. Avicel filler yang relatif mahal dibandingkan dengan laktosa atau amilum. Avicel memiliki fungsi kemampuan yang baik sebagai pengikat maupun desintegran dalam beberapa formula tablet sehingga sangat berguna dalam tablet yang memerlukan peningkatan kekuatan kohesif, tetapi tidak boleh memperpanjang waktu hancur yang dipersyaratkan. Menghasilkan tablet yang keras dengan tekanan kecil) kompresibilitas baik) dan friabilitas tablet rendah, waktu stabilitas panjang. (Lachman, L., dkk : 1994). (5) Maltodekstrin Maltodekstrin adalah suatu polisakarida yang digunakan sebagai bahan tambahan pangan. Senyawa ini dibuat dari amilum dengan cara hidrolisis parsial, dan biasanya dijumpai dalam bentuk serbuk putih yang dikeringkan dengan cara spray-drying dan bersifat higroskopis. Maltodekstrin mudah dicerna, diserap dengan cepat sebagai glukosa, dan berasa sedikit manis atau hampir tak berasa. Umum digunakan dalam produksi soda dan kembang gula. Dapat pula dijumpai sebagai bahan campuran berbagai makanan olahan. Maltodekstrin terkadang digunakan dalam pembuatan bir untuk meningkatkan massa jenis produk akhir. Maltodekstrin digunakan dalam mentega kacang untuk mempertahankan tekstur meski kadar lemak rendah. Maltodekstrin seringkali digunakan sebagai sumplemen oleh 22 binaragawan dan atlet lainnya dalam bentuk serbuk, karena ini adalah karbohidrat yang mudah dicerna sehingga dapat mensupai energi yang cukup ke seluruh tubuh untuk memicu sintesis protein. Maltodekstrin digunakan sebagai bahan tambahan yang murah untuk menebalkan makanan seperti pada formula bayi. Ini digunakan juga sebagai filler pada pengganti gula dan produk lainnya. Maltodekstrin mempunya indeks glikemik antara 85 hingga 103. (6) Dekstrin Dekstrin merupakan sejenis oligosakarida yang dihasilkan dari aktivitas pemecahan polisakarida (pati atau glikogen). Dekstrin dapat berupa α-1,6 dan α-1,4. Dekstrin dapat digunakan untuk berbagai pelapis untuk produk farmaseutikal, lem yang dapat dimakan, dan sealant. Filler yang lain antara lain seperti Sorbitol, Emdex, Dekstrosa, Sugartab, Trikalsium Fosfat, Kalsium Sulfat Dihidrat. 3. Uji Fitokimia ( Penapisan Fitokimia) Penapisan fitokimia atau sering disebut skrining fitokimia adalah tahapan awal untuk mengidentifikasi kandungan kimia yang terkandung dalam tumbuhan, karena pada tahap ini kita bisa mengetahdapat diketahui golongan senyawa kimia yang dikandung tumbuhan yang sedang diuji. Golongan senyawa kimia dapat ditentukan dengan cara: Uji warna, Penentuan kelarutan, Bilangan Rf menggunakan Plat Kromatografi Lapis Tipis, Ciri spektrum UV. Namun secara umum penentuan golongan senyawa kimia dilakukan dengan cara uji warna dengan menggunakan 23 pereaksi yang spesifik karena dirasakan lebih sederhana, dalam penelitian ini akan dilakukan uji fitokimia serta uji KLT, seperti pada uji-uji berikut ini: a. Uji alkaloid. Uji Alkaloid dilakukan dengan metode Mayer, Wagner dan Dragendorff. Sampel diletakkan dalam cawan porselin kemudian ditambahkan HCl 2 M, diaduk dan kemudian didinginkan pada temperatur ruangan. Setelah sampel dingin ditambahkan serbuk NaCl lalu diaduk dan disaring. Filtrat yang diperoleh ditambahkan HCl 2 M, kemudian dipisahkan menjadi 4 bagian A, B, C, D. Filtrat A sebagai blangko, filtrat B ditambah pereaksi Mayer, filtrat C ditambah pereaksi Wagner, sedangkan filtrat D digunakan untuk uji penegasan. Apabila terbentuk endapan pada penambahan pereaksi Mayer dan Wagner maka identifikasi menunjukkan adanya alkaloid. Uji penegasan dilakukan dengan menambahkan amonia 25% pada filtrat D hingga PH 8-9. Kemudian ditambahkan kloroform, dan diuapkan diatas waterbath. Selanjutnya ditambahkan HCl 2M, diaduk dan disaring. Filtratnya dibagi menjadi 3 bagian. Filtrat A sebagai blangko, filtrat B diuji dengan pereaksi Mayer, filtrat C diuji dengan pereaksi Wagner, sedangkan filtrat C diuji dengan pereaksi Dragendorff. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya alkaloid. b. Uji tanin dan polifenol. 24 Uji tanin dan polifenol dilakukan dengan mengekstrak sampel menggunakan akuades panas, kemudian didinginkan. Setelah itu ditambahkan NaCl 10% dan disaring. Filtrat dibagi 3 bagian A, B, dan C. Filtrat A digunakan sebagai blangko, ke dalam filtrat B ditambahkan reagen FeCl3, dan ke dalam filtrat C ditambah garam gelatin. Kemudian diamati perubahan yang terjadi. Apabila pada filtrat B terjadi perubahan warna hal tersebut menunjukkan adanya tanin ataupun polifenol dikarenakan apabila tanin atau polifenol bereaksi dengan FeCl3 akan terbentuk sebuah kompleks warna. Apabila pada filtrat C terjadi pengendapan hal tersebut menunjukkan adanya tanin maupun polifenol dikarenakan tanin dapat mengendapkan protein dalam gelatin yang berupa kopolimer mantap yang tidak larut dalam air c. Uji saponin. Uji Saponin dilakukan dengan metode Forth yaitu dengan cara memasukkan sampel kedalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 10 mL akuades lalu dikocok selama 30 detik, diamati perubahan yang terjadi. Apabila terbentuk busa yang mantap (tidak hilang selama 30 detik) maka identifikasi menunjukkan adanya saponin. d. Uji flavonoid. Uji flavonoid dilakukan dengan menguapkan sampel kemudian dicuci dengan heksana sampai jernih. Residu dilarutkan dalam 20 mL 25 etanol kemudian disaring. Filtrat dibagi 4 bagian A, B, dan C. Filtrat A sebagai blangko, filtrat B ditambahkan HCl pekat kemudian dipanaskan pada penangas air, jika terjadi perubahan warna merah tua sampai ungu menunjukkan hasil yang positif (metode Bate Smith-Metchalf). Filtrat C kemudian diamati Wilstater). Warna ditambahkan HCl dan perubahan warna yang logam Mg terjadi (metode merah sampai jingga diberikan oleh senyawa flavon, warna merah tua diberikan oleh flavonol atau flavonon, warna hijau sampai biru diberikan oleh aglikon atau glikosida. e. Uji Steroid. Uji steroid dilakukan dengan cara menguapkan pelarut dalam larutan uji di atas cawan, kemudian residu yang tersisa ditambahkan asam asetat anhidrat dan H2SO4 pekat, lalu diamati perubahan warna yang terjadi pada residu tersebut, dimana menunjukkan positif steroid bila terjadi perubahan warna menjadi merah setelah penambahan H2SO4 pekat dalam suasana asam. f. Uji Kromatografi Lapis Tipis 1) Deskripsi. Kromatografi lapis tipis (KLT), terdiri dari zat penjerap yang berupa lapisan tipis serbuk halus yang dilapiskan pada lempengan kaca, plastik, ataupun logam secara merata, umumnya digunakan lempeng kaca. Lempeng yang dilapisi dapat dianggap sebagai kolom kromatografi terbuka dan pemisahan yang tercapai dapat 26 didasarkan pada adsorpsi, partisi, atau kombinasi keduanya, yang tergantung dari jenis lempeng, cara pembuatan, dan jenis pelarut yang digunakan. Perkiraan identifikasi diperoleh dengan pengamatan bercak dengan harga rf yang identik dan ukuran yang hampir sama, dengan cara menotolkan bahan uji dan pembanding pada plat yang sama (Depkes, 2008, 163-164). 2) Penggunaan pembanding dalam uji fitokimia Penggunaan KLT pada uji fitokimia ini dilakukan hanya untuk uji penegasan bahwa dalam ekstrak yang dibuat mengandung senyawa fenolik. Uji penegasan dilakukan dengan larutan pembanding asam galat dan larutan uji berupa ekstrak secang dengan pelarut etanol 30%, ekstrak secang dengan pelarut etanol 50%, dan ekstrak secang dengan pelarut etanol 70% yang ditotolkan pada lempeng silika gel, dengan jarak penotolan tertentu. Uji ini menggunakan fasa gerak (pelarutan pemisah) berupa campuran antara n-heksan dengan etil asetat dengan perbandingan tertentu. 4. Uji Fenolik Total Uji fenolik total merupakan uji yang dilakukan untuk menentukan kandungan fenolik total dalam suatu ekstrak, pada penelitian ini pengukuran fenolik total menggunakan metode Folin-Ciocalteu. Prinsip metode FolinCiocalteu adalah reaksi redoks kolorimetrik untuk mengukur semua senyawa fenolik dalam sampel uji. Pereaksi Folin-Ciocalteu merupakan larutan kompleks ion polimerik yang dibentuk dari asam fosfomolibdat dan asam 27 heteropolifosfotungstat. Pereaksi ini terbuat dari air, natrium tungstat, natrium molibdat, asam fosfat, asam klorida, litium sulfat, dan bromin (Folin dan Ciocalteu, 1927: 265-275). Pada kenyataannya reagen ini mengandung rangkaian polimerik yang memiliki bentukan umum dengan pusat unit tetrahedral fosfat (PO4)3- yang dikelilingi oleh beberapa unit oktahedral asamoksi molibdenum. Campuran Reagen Folin-Ciocalteu terdiri dari fosfomolibídico dan asam fosfotungstat di mana molibdenum dalam keadaan oksidasi (VI) (kompleks 3H2O-P2O5-13WO3-5MoO3.10H2Oberwarna kuning); diman apa bila diberikan suatu agen pereduksi tertentu, seperti fenol, akan membentuk yang disebut tungsten-molybdenum kompleks biru [(PMoW 11O4)4]. Reagen Folin-Ciocalteu dapat membentuk kompleks dengan prinsip oksidasi gugus fenolik hidroksil. Pereaksi ini mengoksidasi fenolat (garam alkali), mereduksi asam heteropoli menjadi suatu kompleks molibdenum-tungsten (Mo-W). Fenolat hanya terdapat pada larutan basa, tetapi pereaksi Folin-Ciocalteu dan produknya tidak stabil pada kondisi basa. Selama reaksi belangsung, gugus fenolik-hidroksil bereaksi dengan pereaksi Folin-Ciocalteu, membentuk (kompleks molybdenum-blue) kompleks berwarna biru fosfotungstat-fosfomolibdat mekanisme tertera pada gambar 4. dengan struktur yang belum diketahui dan dapat dideteksi dengan spektrofotometer. Warna biru yang terbentuk akan semakin pekat setara dengan konsentrasi ion fenolat yang terbentuk, artinya semakin besar konsentrasi senyawa fenolik maka semakin banyak ion fenolat yang akan 28 mereduksi asam heteropoli sehingga warna biru yang dihasilkan semakin pekat (Singleton dan Rossi, 1965). Gambar 4.Persamaan reaksi dalam perubahan warna folin (kuning) menjadi kompleks molybdenum (biru) Pada metode Folin-Ciocalteu ini sebelum penambahan reagen Folin ditambahkan terlebih dahulu Na2CO3 yang bertujuan untuk mendeprotonasi senyawa fenolik sehingga menjadi anion fenolat, dalam penelitian ini digunakan standar asam galat untuk menentukan kadar fenolik total dalam ekstrak. Setelah itu, terjadi reaksi redoks antara anion fenolat dan Folin, dimana menurut untuk Singleton Orthofer dan Lamuela-Raventos, molibdenum, komponen reaktan Folin mengalami pengurangan dan bereaksi berubah warna dari kuning menjadi biru seperti tertera pada gambar 5. 29 Gambar 5. Mekanisme metode Folin-Ciocalteu 5. Spektroskopi UV-Visibel Daerah UV sekitar 10 nm – 380 nm, tetapi paling banyak penggunaannya secara analitik dari 200 – 380 nm dan disebut sebagai UV pendek (dekat). Di bawah 200 nm, udara dapat mengabsorpsi sehingga instrumen harus dioperasikan kondisi vakum, daerah ini disebut dengan daerah UV Vakum. Daerah tampak (visibel) sangat kecil panjang gelombang yang dikaitkan dengan cahaya tampak itu mampu mempengaruhi selaput pelangi pada manusia, dan karenanya menimbulkan kesan subyektif akan ketampakan (vision). λ daerah tampak dari 380 nm – sekitar 780 nm. a. Absorpsi cahaya Secara kualitatif absorpsi cahaya dapat diperoleh dengan pertimbangan absorpsi cahaya pada daerah tampak. Kita dapat melihat obyek dengan pertolongan cahaya yang diteruskan atau dipantulkan. 30 Apabila cahaya polikromatis (cahaya putih) yang berisi seluruh spektrum panjang gelombang melewati medium tertentu, akan menyerap panjang gelombang lain, sehingga medium itu akan tampak berwarna. Oleh karena hanya panjang gelombang yang diteruskan yang sampai ke mata maka panjang gelombang inilah yang menentukan warna medium. Warna ini disebut warna komplementer terhadap warna yang diabsorpsi. Spektrum tampak dan warna-warna komplementer ditunjukkan dalam Tabel 1 berikut ini Tabel 1. Spektrum tampak dan warna-warna komplementer Panjang Gelombang Warna yang Warna yang Dipantulkan (Nm) Diabsorpsi (Komplementer) 340 –450 Lembayung Kuning – hijau 450 – 495 Biru Kuning 495 – 570 Hijau Violet 570 – 590 Kuning Biru 590 – 620 Jingga Hijau – biru 620 - 750 Merah Biru - hijau b. Hukum Dasar Spektroskopi Absorpsi Jika suatu berkas cahaya melewati suatu medium homogen, sebagian dari cahaya datang (Po) diabsorpsi sebanyak (Pa), sebagian dapat diabaikan dipantulkan (Pr), sedangkan sisanya ditransmisikan (Pt) dengan efek intensitas murni sebesar : Po = Pa + Pt + Pr 31 Dengan Po = intensitas cahaya masuk, Pa = intensitas cahaya diabsorpsi, Pr = intensitas cahaya dipantulkan, Pt = intensitas cahaya ditransmisikan. Pada prakteknya, nilai Pr adalah kecil ( - 4 %), sehingga untuk tujuan praktis : Po = Pa + Pt Lambert (1760), Beer (1852) dan Bouger menunjukkan hubungan berikut : Gambar 6. Landasan Hukum Lambert-Beer T= Log (T) = Log = 10-abc dengan b = jarak tempuh optik, c = konsentrasi. = - abc dengan a = tetapan absorptivitas, T = transmitansi. Log = Log = abc = A dengan A = absorbansi. -log T = abc = A = Ɛ bc ... Turunan Hukum Lambert-Beer Hukum di atas dapat ditinjau sebagai berikut : 32 1) Jika suatu berkas cahaya monokromatis yang sejajar jatuh pada medium pengabsorpsi pada sudut tegak lurus setiap lapisan yang sangat kecil akan menurunkan intensitas berkas. 2) Jika suatu cahaya monokromatis mengenai suatu medium yang transparan, laju pengurangan intensitas dengan ketebalan medium tertentu sebanding dengan intensitas cahaya. 3) Intensitas berkas cahaya monokromatis berkurang secara eksponensial bila konsentrasi zat pengabsorpsi bertambah. Hal diatas menunjukkan persamaan mendasar untuk spektroskopi absorpsi, dan dikenal sebagai hukum Lambert Beer. atau hukum Beer Bouger. Satuan untuk b (cm), c (mol/ L), a = absorptivitas molar adalah absorpsi larutan yang diukur dengan ketebalan 1 cm dan konsentrasi 1 mol/ L. A = abc 4) Jika konsentrasi (c) diekspresikan sebagai molaritas (mol/L) dan ketebalan sel (b) dinyatakan dalam centimeter (cm), koefisien absorptivitas molekuler (a) disebut koefisien ekstingsi molar (ε) dan memiliki satuan [L/(mol.cm)]. A =Ɛbc c. Instrumen Spektroskopi UV-Vis Menurut konfigurasinya instrumen spektroskopi UV-Vis , dibagi dalam: 1) Single-beam instrument 33 Single-beam instrument dapat digunakan untuk kuantitatif dengan mengukur absorbansi pada panjang gelombang tunggal. Single-beam instrument mempunyai beberapa keuntungan yaitu sederhana, harganya murah, dan mengurangi biaya yang ada merupakan keuntungan yang nyata. Beberapa instrumen menghasilkan single-beam instrument untuk pengukuran sinar ultra violet dan sinar tampak. Panjang gelombang paling rendah adalah 190 sampai 210 nm dan paling tinggi adalah 800 sampai 1000 nm (Skoog, DA, 1996, 572574). Gambar 7. Skema Spektroskopi UV-Vis Single Beam 2) Double-beam instrument Double-beam dibuat untuk digunakan pada panjang gelombang 190 sampai 750 nm. Double-beam instrument dimana mempunyai dua sinar yang dibentuk oleh potongan cermin yang berbentuk V yang disebut pemecah sinar. Sinar pertama melewati larutan blangko dan sinar kedua secara serentak melewati sampel, mencocokkan fotodetektor yang keluar menjelaskan perbandingan yang ditetapkan 34 secara elektronik dan ditunjukkan oleh alat pembaca (Skoog, DA, 1996, 572-574). Gambar 8. Skema Spektroskopi UV-Vis Double-Beam 6. Standardisasi Ekstrak Standardisasi ekstrak dilakukan untuk mengetahui apakah ekstrak dari bahan alam yang dibuat dapat memenuhi standar yang telah ditentukan, sehingga diharapkan obat-obatan herbal yang berasal dari bahan alam memiliki konsitensi mutu seperti standar berikut pada tabel 1. Tabel 2. Parameter Standar Ektrak Tanaman Obat No. Parameter Standar Standar FHI / Quality Standard (%) 1. Kadar air/ Moisture content ≤10,00 2. Kadar sari air/ Water extractable ≤18,00 3. Kadar sari alkohol/ Alcohol ≤9,70 extractable 4. Kadar abu/Ash content ≤ 1,40 5. Kadar abu tak larut asam/ ≤ 0,6 Insoluble in HCl Sumber : Farmakope Herbal Indonesia (2009) 35 a. Parameter Non-Spesifik 3) Parameter susut pengeringan Susut pengeringan merupakan pengukuran sisa zat setelah pengeringan pada temperatur 105°C selama 30 menit atau sampai berat konstan, yang dinyatakan dalam nilai persen . tujuan dari dilakukan parameter standar susut pengeringan ini adalah untuk memberikan batasan maksimal (rentan) tentang besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan ( Depkes RI, 2000, 13.) 4) Parameter kadar air Pengukuran kandungan air yang berada di dalam bahan, biasanya dapat dilakukan dengan cara titrasi, destilasi, atau gravimetri. namun yang sering dilakukan adalah metode titrasi dengan pereaksi Karl Fischer, dalam penelitian ini digunakan alat Karl-Fischer Moisture Titrator MKS-520 untuk memudahkan pengukuran (Depkes RI, 2000, 14-16.) 5) Parameter kadar abu total Pengukuran kadar abu total dilakukan dengan memanaskan bahan pada temperatur tertentu dimana senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap, sehingga tinggal unsur mineral dan anorganiknya saja. sehingga dapat diketahui gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuk ekstrak ( Depkes RI, 2000, 17.) 36 6) Parameter Kadar abu tidak larut asam pengukuran kadar abu tidak larut asam dilakukan setelah bahan awal diabukan, abu yang tersisa dilarutkan dalam asam sulfat encer dan dipanaskan pada temperatur dimana larutan asam yang melarutkan mineral terdestruksi dan menguap sehingga tinggal unsur mineral dan anorganik yang tidak larut asam (Depkes RI, 2000, 17.) 7) Sisa pelarut Menentukan kandungan sisa pelarut tertentu yang secara umum ditentukan dengan kromatografi gas, untuk ekstrak cair berati kandungan pelarutnya, misalnya dalam penelitian ini digunakan pelarut etanol untuk mengekstraksi sehingga kadar yang diukur adalah sisa pelarut etanolnya. tujuan daridilakukan penentuan kadar pelarut adalah untuk memberikan jaminan bahwa selama proses tidak meninggalkan sisa pelarut, terutama pelarut yang berbahaya seperti pelarut kloroform harus bernilai negatif sesuai batas deteksi instrumen. sedangkan ekstrak kental boleh terdapat sisa pelarut dengan batas maksimal tertentu (Depkes RI, 2000, 17-18.) b.Parameter Spesifik 1) Organoleptik Merupakan pengamatan terhadap ekstrak menggunakan pancaindra untuk mendeskripsikan bentuk, warna, bau, rasa sebagai berikut: 1. bentuk : padat, cair, serbuk-kering, kental 2. warna : kuning, coklat, merah, dll 3. Bau :aromatik, tidak berbau, dll 37 4. Rasa : pahit, manis, kelat, dll dengan pengenalan awal yang sederhana dan seobjektif mungkin (Depkes RI, 2000, 31.) 2) Terlarut dalam air Melarutkan ekstrak dengan pelarut air untuk ditentukan jumlah solut yang identik dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetri. tujuan dari parameter senyawa terlarut dalam pelarut air ini adalah untuk mengetahui gambaran awal senyawa yang terlarut dalam pelarut air (Depkes RI, 2000, 31.) 3) Terlarut dalam etanol Melarutkan ekstrak dengan pelarut etanol untuk ditentukan jumlah solut yang identik dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetri. tujuan dari parameter senyawa terlarut dalam pelarut etanol ini adalah untuk mengetahui gambaran awal senyawa yang terlarut dalam pelarut air (Depkes RI, 2000, 31.) B. Penelitian yang Relevan Penelitian mengenai“Penentuan Kadar Fenolik Total Dan Standardisasi Ekstrak Kulit Kayu Secang (Caesalpinia Sappan L)“ yang dilakukan didasarkan pada penelitian-penelitia yang telah dilakukan sebelumnya. Penelitian yang dilakukan oleh Wahyu Widowati pada tahun 2011 berjudul “Uji Fitokimia dan Potensi Antioksidan Ekstrak Etanol Kulit kayu Secang (Caesalpinia sappan L.)”, bertujuan untuk mengekstraksi kulit kayu 38 secang dengan etanol 96% menggunakan metode maserasi selama 24 jam, kemudian ekstrak yang dihasilkan diuji fitokimianya Ekstrak kulit kayu secang mengandung senyawa terpenoid, fenol sangat tinggi, mengandung flavonoid tinggi, tidak namun steroid dan tanin. Ekstrak kulit kayu secang diukur kandungan fenolik totalnya dengan standar epigalokatekin (EGC) dan epikatekin galat (ECG) dimana penentuan kandungan fenolik totalnya menggunakan metode Folin-Ciousalteu, didapatkan informasi bahwa ekstrak kulit kayu secang mengandung kadar fenolik total ekivalen EGC 849,11 μg/mg dan ekivalen ECG 825,11 μg/mg. Penelitian mengenai kandungan senyawa metabolit sekunder ekstrak dilakukan dengan metode penapisan fitokimia dan standardisasi ekstrak seperti yang dilakukan oleh Pandey, Gangrale, Upadhyay dan Priyanka, pada tahun 2014 yang berjudul“Physiochemical Analysis Of Pterocarpus Santalinus L. Extracts” dalam penelitian ini dilakukan pengujian fitokimia dan menstandardisasi tanaman Raktachandan (Pterocarpus santalinus L.)tersebut.Uji fitokimia kualitatif yang dilakukan adalah terhadap keberadaan alkaloid, saponin, flavonoid and glikosida dalam ekstrak Pterocarpus santalinus L.Dilakukan pula penstandardisasi parameter fisik kimia seperti menghitung susut pengeringan, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, kadar abu larut air, dengan hasil total abu tidak lebih dari 2% , kadar abu tak larut asam kurang dari 0,3%, kelarutan dalam alkohol tidak kurang dari 3% dan kelarutan dalam air tidak kurang dari 1% . 39 C. Kerangka Berfikir Teoritis Kulit kayu secang (Caesalpinia sappan L.) secara empiris dimanfaatkan sebagai bahan untuk pengobatan penyakit asam urat. Berbagai macam zat yang terkandung dalam kulit kayu secang antara lain brazilin, alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, fenil propana dan terpenoid. Selain itu juga mengandung asam galat, brasilein, delta-aphellandrene, oscimene, resin dan resorin (Xu dkk, 1994. ) Penelitian mengenai efek secang (Caesalpinia sappan L.) sebagai agen antihiperurisemia, anti bakteri, obat kanker dan masih banyak lagi telah banyak dikembangkan, sedangkan penelitian mengenai standardisasi ekstrak secang terhadap berbagai konsentrasi pelarut belum banyak dilakukan, maka dilakukan penelitian terhadap standardisasi ekstrak herbal secang terstandar dengan berbagai pelarut, sehingga diperolehekstrak herbal secang terstandar. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui kadar fenolik total dari ekstrak kental dan ekstrak kering ekstrak kulit kayu secang dan menstandardisasi ekstrak kulit kayu secang (Caesalpinia Sappan L), dengan langkah penelitian sebagai berikut: kulit kayu secang disiapkan dan diekstrak menggunakan pelarut etanol 30%, 50%, dan 70% menggunakan metode ekstraksi maserasi-perkolasi. Hasil ekstraksi berupa ekstrak cair yang kemudian dilakukan uji fitokimia terhadap ekstrak cair tersebut terhadap alkaloid, saponin, tanin/polifenol, flavonoid, serta steroid,. Dilanjutkan dengan pemekatan ekstrak cair dengan cara menguapkan pelarut ekstrak cair menggunakan alat evaporasi, kemudian setelah pelarut menguap didapatkan 40 ekstrak kental, kemudian ekstrak kental yang dibuat digunakan untuk analisis kandungan fenolik total dan dilakukan standardisasi ekstrak kental. Penentuan kadar fenolik total dalam penelitian ini menggunakan standar asam galat dan regen folin Ciolte 1:10 dan Na2CO3 6%, dimana untuk menentukan kadar fenolik totalnya dilakukan dengan membaca absorbansi ekstrak kulit kayu secang yang telah diberi folin dan Na2CO3 menggunakan spektroskopi UV-Vis. standardisasi ekstrak kental yang dilakukan pada aspek spesifik dan aspek non-spesifik seperti kadar air, susut pengeringan, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, serta kadar sisa etanol yang terdapat dalam ekstrak. Ekstrak kental dengan variasi konsetrasi yang memiliki kadar fenolik total tertinggi dijadikan ekstrak kering dengan menambahkan filler (bahan pengisi), dalam hal ini dilakukan beberapa jenis penambah filler untuk melihat pengaruhnya terhadap ekstrak kering yang dihasilkan. Melihat pengaruh penambahan filler terhadap ekstrak kental dengan cara mengukur kadar fenolik totalnya serta melakukan standardisasi ekstrak kering terhadap kadar air, sifat alir dan uji organoleptik. 41 BAB III METODE PENELITIAN A. Subjek dan Objek Penelitian 1. Subjek Penelitian Subjek dalam Penelitian Ini adalah kayu dari tanaman secang (Caesalpinia Sappan L. ) 2. Objek Penelitian Objek penelitian ini adalah penentuan kadar fenolik total dan standardisasi ekstrak kental dan ekstak kering dari kayu secang (Caesalpinia Sappan L.) B. Alat dan Bahan 1. Alat penelitian a. Spektroskopi UV-Vis b. Karl Fischer Titrator (Karl-Fischer Moisture Titrator MKS-520) c. Hot Plate and Stirer (Hidolph RZR 2051, Jerman) d. Sonication Bath (Elmasonic S15) e. Timbangan Analitik (Precisa XT 220, Swiss dan KERN ALJ 2204NM) f. Shaker (GFL 3017) g. Grinder (Retsch) h. Mousture Balance (Precisa HA60, Swiss) i. MikroPipet (Ependolph) j. Alat Gelas dan ukur (Pyrex) 42 k. Desikator l. Kuvet kotak m. Stopwatch n. Vacum Rotavapor (Heidolph, Jerman) o. Krus p. Kertas Saring Bebas Abu q. Furnace (Thermolyne 1400) r. Kromatografi Gas (GC DANI 1000) s. Pompa Vakum (Buchi V-700) t. Kromatografi Lapis Tipis 2. Bahan penelitian a. Kayu Secang b. Etanol 96% c. HgCl (Merck, Jerman) d. KI (Merck, Jerman) e. Bi(NO3).H2O (Merck, Jerman) f. HNO3 (Scharlau, Spayol) g. NaCl (Merck, Jerman) h. Kloroform 10 (Sigma-Aldrich, USA) i. H2SO4 j. n-Heksan (Scharlau, Spayol) k. Mg Powder (Sigma-Aldrich, USA) l. Folin Ciocalteu 1:10 (Sigma-Aldrich, USA) 43 m. Na2CO3 (Sigma-Aldrich, USA) n. Standar Asam Galat (Merck, Jerman) o. HCL (Scharlau, Spayol) p. Dekstrin (Brataco Chemika, indonesia) q. Corn Starch (Brataco Chemika, indonesia) r. Laktosa (Brataco Chemika, indonesia) s. Maltodekstrin (Brataco Chemika, indonesia) t. Avicel ph 102 (Brataco Chemika, indonesia) u. Amprotab (Brataco Chemika, indonesia) C. Prosedur Penelitian 1. Penyiapan Simplisia Kayu secang (Caesalpinia Sappan L) sebanyak 10 Kg dibersihkan, kemudian kayu secang yang telah bersih dipotong-potong dan dikeringkan di dalam oven dengan suhu 40°C, setelah kering kayu diserut menjadi potongan lebih kecil. Kemudian hasil simplisia kering kayu secang disimpan dalam wadah penampung untuk menunggu tindakan selanjutnya. 2. Ekstraksi Metode yang digunakan dalam ekstraksi kayu secang ini adalah metode maserasi-perkolasi, dengan metode ini digunakan perbandingan kayu secang dengan pelarutnya adalah 1 : 10, sehingga untuk sekali proses ekstraksi secang sebanyak 500 gram dibutuhkan pelarut sebanyak 5 liter. Pada proses ekstraksi ini dilakukan variasi konsentrasi pelarut etanol yakni 44 etanol dengan konsentrasi etanol 30%, 50%, dan 70%. Langkah awal dari metode maserasi-perkolasi ini adalah dengan cara membungkus 500 gram serutan kayu secang menggunakan kertas saring dimana bagian atas dari kertas saring dibuat terbuka (kertas saring dibuat seperti kantong dengan menggulung kertas dan bagian bawah diikat dengan benang kemudian bagian atas dibiarkan). Kemudian serutan kayu secang tersebut ditempatkan ke dalam alat perkolator (Gambar 9). kemudian ke dalam alat perkolator dimasukkan pelarut hingga batas atas dan sisa pelarut dimasukkan ke dalam penampung pelarut di bawah tabung perkolator, metode maserasi-perkolasi ini dijalankan selama 120 menit dengan rincian 30 menit perendaman (maserasi) dan 90 menit sirkulasi pelarut (perkolasi), setelah selesai alat perkolasi dimatikan dan diperoleh ekstrak cair. Ekstrak cair kemudian dipekatkan dengan alat evaporasi untuk menguapkan sisa pelarut etanol yang ada menggunakan alat evaporasi dengan kecepatan putar 60-80 rpm, suhu 50 °C , dan tekanan 70 – 200 mBar, penguapan dihentikan pada saat ekstrak mulai mengental seperti pasta. Ekstrak hasil dari evaporasi ditampung dalam botol selai yang telah ditimbang dan dilanjutkan dengan memasukkan botol selai berisi ekstark kedalam oven pada suhu 50°C, hal tersebut dilakukan untuk menghilangkan sisa pelarut air yang tersisa. 45 Gambar 9. Skema alat perkolator 3. Uji Fitokimia Pada ekstrak cair Penapisan Fitokimia a. Alkaloid (Depkes, 1995 dan Sirait, 2007) 1) Ekstrak ditambahkan dengan 1 ml HCl 2N dan 9 ml akuades, kemudian dipanaskan di penangas air selama 2 menit, dinginkan. Kemudian filtrat disaring dan ditampung. Filtrat digunakan sebagai larutan percobaan selanjutnya (larutan uji). 2) Larutan uji diambil 1 ml dan dituang ke dalam kaca arloji, kemudian ditambahkan 2 tetes Reagen Bouchardart, jika terbentuk endapan coklat sampai dengan hitam menunjukkan adanya alkaloid 46 3) Larutan uji diambil 1 ml dan dituang ke dalam kaca arloji, kemudian ditambahkan 2 tetes Reagen Wagner, jika terbentuk endapan coklat muda sampai kuning menunjukkan adanya alkaloid 4) Larutan uji diambil 1 ml dan dituang ke dalam kaca arloji, kemudian ditambahkan 2 tetes Reagen Mayer, jika terbentuk endapan menggumpal putih atau kuning yang larut dalam metanol menunjukkan adanya alkaloid. 5) Larutan uji diambil 1 ml dan dituang ke dalam kaca arloji, kemudian ditambahkan 2 tetes Reagen Dragendorf, jika terbentuk endapan jingga coklat menunjukkan adanya alkaloid. b. Uji Flavonoid (Depkes, 1995 dan Farnsworth, 1966) Ekstrak ditambahkan dengan 5 ml etil asetat hingga ekstrak larut (larutan uji). 1) 1 ml larutan uji diuapkan dan ditambahkan 2 ml etanol 95% dan 0,5 gram serbuk seng, kemudian ditambahkan 2 ml HCl 2N, diamkan 1 menit.Setelah itu, ditambahkan 10 tetes HCl pekat. Kocok perlahan, kemudian didiamkan 2 sampai 5 menit. Terbentuk warna merah intensif (flavonoid positif). 2) 1 ml larutan uji diuapkan dan ditambahkan 1 ml etanol 95% dan 0,1 gram serbuk magnesium. Kemudian ditambahkan 10 tetes HCl pekat dan kocok perlahan. Hasil positif jika terbentuk warna merah jingga hingga merah ungu (flavonoid positif) atau kuning jingga (flavon, kalkon, auron). 47 3) 1 ml larutan diuapkan dan ditambahkan dengan 2 ml aseton, kemudian dilarutkan. Setelah itu, ditambahkan sedikit serbuk asam borat dan asam oksalat, panaskan hati-hati. Lalu, ditambahkan 10 ml eter. Amati dengan sinar ultraviolet 366 nm. Larutan akan berfluoresensi kuning intensif (flavonoid positif). c. Uji Tanin (Farnsworth, 1966 dan Trease, 1961) Ekstrak kental ditambahkan dengan 50 ml air panas. Kemudian dipanaskan hingga mendidih selama 5 menit. Filtrat disaring (larutan uji). 1) Sejumlah 5 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan beberapa tetes FeCl3 2) Sejumlah 5 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan beberapa tetes larutan gelatin 10%, terbentuk endapan putih (tanin positif). terbentuk warna hijau violet (tanin positif). 3) Sejumlah 5 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan beberapa tetes larutan NaCl-gelatin (larutan gelatin 1% dalam larutan NaCl 10%), terbentuk endapan putih (tanin positif). d. Uji Saponin (Depkes, 1995b & Farnsworth, 1966) Ekstrak ditambahkan dengan 10 ml air panas dan kemudian didinginkan. Larutan uji dikocok vertikal selama 10 detik, kemudian 48 diamkan selama 10 menit. Terbentuk buih setinggi 1 hingga 10 cm. Pada penambahan 1 tetes HCl 2N buih tidak hilang. e. Uji Steroid Ekstrak ditambahkan asam asetat anhidrat dan H2SO4 pekat jika terjadi perubahan warna menjadi merah darah pekat menunjukkan adanya steroid . f. Pembandingan Sampel Ekstrak Secang Dengan Standar Asam Galat Menggunakan KLT 1) Menyiapkan plat KLT sebesar 12 x 7 cm sebagai fasa diam, dan menyiapkan fasa gerak yang terdiri dari campuran larutan n-heksan : etil asetat dengan perbandingan 1: 3 2) Menotolkan standar dan sampel pada plat KLT dengan masing masing berjarak 1 cm, kemudian KLT tersebut dielusikan sepanjang 10 cm. 3) Menandai pemisahan noda dan menngukur nilai Rf dibawah lampu UV 366 4. Standardisasi Ekstrak Kental Kayu Secang a. Susut Pengeringan Memanaskan oven hingga suhunya stabil pada suhu 105 °C , kemudian wadah yang akan digunakan yang berupa wadah berbentuk botol bertutup yang dangkal ditimbang terlebih dahulu, kemudian dimasukkan ke dalam oven yang telah disiapkan selama 30 menit kemudian ditimbang kembali saat sudah dingin. 49 Ekstrak kental sebanyak satu gram ditimbang dan dimasukkan ke dalam wadah yang kemudian diratakan dengan cara menggoyangkan wadah. Setelah itu dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 105°C hingga berat konstan. Biarkan wadah yang berisi ekstrak mendingin dalam eksikator hingga suhu ruang kemudian ditimbang kembali. Massa simplisia yang hilang setelah dioven dinyatakan sebagai besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan (susut pengeringan) Persentase susut pengeringan ekstrak dapat diketahui dengan perhitungan menggunakan rumus berikut: % Susut Pengeringan = x 100% Keterangan: A = Massa Krus dan tutup kosong (gram) B = Massa Wadah + Simplisia Awal (gram) C = Massa Wadah + Simplisia Akhir (gram) b. Kadar Abu Total Furnace yang akan digunakan disiapkan, kemudian dimasukkan krus dan tutupnya ke dalam furnace dan dipanaskan (dibakar) hingga temperatur 450°C, perlakuan ini dilakukan untuk menghilangkan kontaminan seperti sisa senyawa yang terjebak di dalam krus dan air yang masih menempel, sehingga diharapkan faktor faktor lain tidak mengganggu hasil perhitungan, krus dipanaskan 50 selama 30 menit. Setelah itu krus didinginkan dalam desikator dan ditimbang massanya. Sebanyak setengah gram ekstrak ditimbang dan dimasukkan kedalam krus yang sebelumnya telah ditimbang. Setelah itu dibakar di dalam furnace dengan temperatur 450°C selama satu jam. Kemudian didinginkan dan ditimbang, setelah ditimbang krus dimasukkan kembali ke dalam furnace selama tiga puluh menit. setelah itu krus didinginkan dan ditimbang, apabila massanya telah konstan maka tidak perlu dilakukan pembakaran ulang. Rumus untuk menghitung % kadar abu total adalah sebagai berikut: % Kadar Abu total = ( 1 - ) X 100% Keterangan : A : Massa Krus dan tutup kosong (gram) B : Massa Krus dan tutup + ekstrak awal (gram) C : Massa krus dan tutup + ekstrak akhir (gram) c. Kadar Abu yang Larut Dalam Asam Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu dididihkan dengan asam sulfat encer selama 5 menit kemudian campuran disaring dengan kertas saring bebas abu dan residunya dibilas dengan air panas. Abu disaring dan kertas saringnya dimasukkan kembali dalam wadah yang sama lalu bakar pada temperatur 450°C selama tiga puluh menit, kemudian keluarkan dan dinginkan setelah dingin ditimbang 51 hingga bobot tetap. Rumus untuk menghitung % kadar abu yang tidak larut dalam asam adalah: % Kadar abu tak larut asam = X 100 X % Abu Total Keterangan : A : Massa Krus dan tutup kosong (gram) B : Massa Krus dan tutup + ekstrak awal (gram) D : Massa krus dan tutup + abu yang tidak larut asam(gram) d. Sisa Pelarut Penentuan sisa pelarut etanol dalam penelitian ini menggunakan instrumen kromatografi Gas (GC DANI 1000) berikut prosedur pengukuran sisa pelarut menggunakan kromatografi gas. 1) Pembuatan Standar Larutan standar etanol dibuat dengan konsentrasi 0,005 % ; 0,0075% ; 0,01 % ; 0,025 % ; 0,05 % ; dan 0,1 % v/v. Dipipet sejumlah tertentu etanol sesuai dengan konsentrasi kemudian ditambahkan 25 µl n-propanol dan dilarutkan dengan akuades sehingga volume berjumlah 5 ml. Larutan strandar etanol masing-masing disuntikkan ke dalam kromatografi gas sebanyak 1 µl dengan kondisi suhu kolom 235 °C, detektor FID, suhu detektor 260 °C, suhu oven 205 °C, jenis gas H2/O2/N2 , tekanan gas masing masing 0,4 Bar (400 mBar). Luas area yang diperoleh pada masing – masing konsentrasi kemudian digunakan untuk membuat kurva kalibrasi dengan memplotkan 52 konsentrasi dan luas area. Dihitung persamaan regresinya (y = a +bx) dengan konsentrasi sebagai x dan rasio perbandingan luas area sebagai y. 2) Penentuan Kadar etaol dalam ekstrak kayu secang Dipipet sejumlah tertentu ekstrak sampel sesuai dengan konsentrastertentu ditambahkan 25 µl n-propanol dan dilarutkan dengan akuades sehingga volume berjumlah 5 ml. Larutan sampel masing-masing disuntikkan ke dalam kromatografi gas sebanyak 1 µl dengan kondisi suhu kolom 235 °C, detektor FID, suhu detektor 260 °C, suhu oven 205 °C, jenis gas H2/O2/N2, tekanan gas masing masing 0,4 Bar (400 mBar). Luas area yang diperoleh pada masing – masing konsentrasi kemudian digunakan untuk menghitung sisa pelarut dengan memasukkan luas area ke dalam persamaan garis regresi. e. Senyawa Terlarut dalam Pelarut 1) Kadar senyawa yang terlarut dalam air Sebanyak lima gram ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml air kloroform menggunakan labu bersumbat sambil berkali-kali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian dibiarkan selama 18 jam. Disaring, diuapkan, residu dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Persen kadar senyawa yang larut dalam air dihitung dengan rumus : % Kadar senyawa yang larut dalam air = Dengan keterangan sebagai berikut 53 x 100% A : Massa Krus dan tutup kosong (gram) B : Massa Krus dan tutup + ekstrak awal (gram) C : Massa krus dan tutup + ekstrak akhir (gram) 2) Kadar senyawa yang terlarut dalam etanol Sebanyak lima gram ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml etanol 100% p.a. menggunakan labu bersumbat sambil berkalikali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian dibiarkan selama 18 jam. Disaring, diuapkan, residu dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Persen kadar senyawa yang larut dalam etanol dihitung dengan rumus : % Kadar senyawa yang larut dalam air = x 100% Keterangan:A : Kadar ekstrak awal B : Kadar ekstrak setelah perlakuan 5. Analisa Kandungan Total Fenolik Analisa kandungan total fenolik dilakukan menggunakan spektroskopi UV-Vis dengan menggunakan standar asam galat dengan langkah-langkah sebagai berikut a. Mencari λ maksimal untuk pengukuran dengan cara scaning dari panjang gelombang 350 nm hingga panjang gelombang 800 nm. b. Membuat Kurva Standar Asam Galat Membuat variasi konsentrasi 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, 100 ppm, dan 120ppm asam galat sebagai larutan standar dengan metode yang akan digunakan pada pengukuran sampel dan mencari absorbansi standar 54 dengan ketentuan absorbansi berada pada range 0,2 sampai 0,8 c. Mengukur Absorbansi Sampel Sampel ekstrak kental yang telah dibuat pada tahapan sebelumnya diencerkan hingga konsentrasinya 200 ppm, kemudian diambil sebanyak 0,1 ml sampel dan dimasukkan kedalam kuvet kemudian ditambahkan 0,75 ml folin ciocalteu 1:10 dan menunggu 5 menit sambil di kocok, setelah itu menambahkan Na2CO3 6% kedalam kuvet dan didiamkan selama 90 menit Mengukur absorbansi sampel dan menghitung kadar sampel berdasarkan kurva standar asam galat yang dibuat. 6. Standardisasi Ekstrak Kering a. Organoleptik Pengamatan terhadap warna, bau, rasa, dan bentuk dari ekstrak kering yang dibuat. b. Kadar Air Kadar air dapat ditentukan dengan menggunakan alat karl-fischer moisture titrator, alat karl-fischer moisture titrator ini bekerja dengan . menurut Standar FHI kadar air yang terdapat dalam ekstrak kering tidak boleh lebih dari 10%. c. Laju Alir Laju alir merupakan waktu yang dibutuhkan serbuk untuk mengalir, apakah termasuk sulit mengali , hal ini akan berpengaruh dengan cara mengkonsumsi obat nantinya. 55 BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN A. Hasil 1. Pembuatan Ekstrak Kulit kayu tanaman Secang Ekstrak kulit kayu tanaman secang dibuat dengan metode maserasi-perkolasi menggunakan pelarut etanol tehnis konsenrasi 30%, 50%, dan 70%. Hasil ekstrak cair tertera dalam Gambar 10, serta perincian hasil tertera pada Tabel 3. Gambar 10. Ekstrak cair secang hasil ekstraksi maserasi-perkolasi, ekstrak cair dengan pelarut (a) Etanol 30%, (b) Etanol 50%, dan (c) Etanol 70% Tabel 3. Hasil Ekstrak Cair dan Kental Kulit Kayu Secang No. 1 2 3 Nama Ekstrak Jumlah Bahan Awal Secang dengan Pelarut Etanol 30% Secang dengan Pelarut Etanol 50% Secang dengan Pelarut Etanol 70% Secang : 1,5 Kg Etanol 30% :15 L Secang : 1,5 Kg Etanol 50% :15 L Secang : 1,5 Kg Etanol 70% :15 L 56 Jumlah Ekstrak yang Didapatkan Ekstrak Cair Ekstrak Kental (Liter) (Gram) 12,1 68,5 12,1 105 11,95 75,71 2. Penapisan Fitokimia Kualitatif Penapisan fitokimia dalam penelitian kimia ini dilakukan secara kualitatif yakni untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak maupun serbuk simplisia kayu secang. Adapun penapisan fitokimia yang dilakukan antara lain penapisan alkaloid, tanin, polifenol, saponin, flavonoid, kuinon dan steroid. Hasil penapisan fitokimia tertera dalam Tabel 4. Tabel 4. Hasil Skrining Fitokimia ekstrak etanol 30%, 50%, 70% kulit kayu tanaman secang Keterangan Metode Pengujian Kualitatif Pendahuluan Mayer Serbuk Kayu Secang EKS 30% EKS 50% EKS 70% - - - - Tdk terbentuk endapan - - - - Tdk terbentuk endapan + FeCl3 + + + + +Gelatin + +++ ++ + Pendahuluan +H2O dikocok Penegasan + Terbentuk Violet Tua Pekat Terbentuk Endapan Busa Mantap +++ + + + HCL Pekat + + + + + 0,5 HCL + ++ + + Serbuk Mg + + + + +Amil Alkohol + + + Alkaloid Wagner Tanin & Polifenol Saponin + Flavonoid 57 + Keterangan Busa tidak hilang Terbentuk Merah Tua Mg larut Terbentuk Merah Tua Mg larut Terbentuk Merah Tua Steroid Sampel diuapkan + As.Asetat + H2SO4 pekat + + + + Warna Orange merah-merah darah pekat Keterangan: SKS = simplisia kulit kayu tanaman secang EKS 30% = ekstrak kulit kayu tanaman secang dengan pelarut etanol 30% EKS 50% = ekstrak kulit kayu tanaman secang dengan pelarut etanol 50% EKS 70% = ekstrak kulit kayu tanaman secang dengan pelarut etanol 70% (+) = uji positif ( - ) = uji negatif Perbandingan Sampel Ekstrak Kulit Kayu Secang dengan Standar Asam Galat Menggunakan KLT Dilakukan pembandingan Rf ekstrak secang dengan etanol 30% (2), ekstrak secang dengan etanol 50% (3), dan ekstrak secang dengan etanol 70% (4) dengan standar asam galat (AG) menggunakan KLT (kromatografi lapis tipis) dengan fasa diam silika gel F 60 dan fasa gerak n-heksan : etil asetat dengan perbandingan 1: 3 serta dielusikan sepanjang 10 cm. Hasil kromatografi lapis tipis tertera pada Gambar 11, dimana dalam gambar tersebut terdapat 5 totolan denagan kode AG adalah standar pembanding dan kode dengan angkan 1 sampai 4 merupakan sampel yang dapat dijelaskan dalam Tabel 5. 58 ( a ) (b) Gambar 11. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Secang Berbagai variasi dibandingkan asam galat di bawah sinar (a) Tampak (b) UV 366 Tabel 5. Hasil perhitungan Rf dari KLT Perbandingan No. Keterangan 1. 2. Asam Galat Simplisia 3. Ekstrak Secang Etanol 30% 4. Ekstrak Secang Etanol 50% Ekstrak Secang Etanol 70% 5. Noda Ke 1 1 2 1 2 3 1 2 1 2 59 Noda Panjang 2,85 cm 1,6 cm 3 cm 1,7 cm 3,15 cm 5,1 cm 1,8 cm 3,2 cm 1,6 cm 3 cm Rf 0,285 0,160 0,300 0,170 0,315 0,510 0,180 0,320 0,160 0,300 3. Standardisasi Ekstrak Kental Kulit Kayu Secang Tabel 6. Standardisasi ekstrak kental kulit kayu secang No. Aspek 1. Susut Pengeringan Ekstrak Secang Ekstrak Secang Ekstrak Secang dengan Etanol dengan Etanol dengan Etanol 30 % 50 % 70 % 15,30% ± 2,84% 21,23% ± 7,89% 8,25%±2,64% 2. Kadar Abu Total 4,317% ± 0,071% 3,758% ± 0,102% 1,912% ± 0,076% 3. Kadar Abu Tidak Larut Asam 0,400% ± 0,288% 0,447% ± 0,090% 0,146% ± 0,041% 4. Kelengketan >Secang 50% >Secang 70% < Secang 30% > Secang 70% < Secang 50% < Secang 70% 5. Sari Larut Air 0,476%±0,003% 0,410%±0,003% 0,532%±0,001% 6. Sari Larut Etanol 0,924% ± 0,002% 1,092 ± 0,006% 1,223% ± 0,004% 7. Sisa Pelarut Etanol 0,006% ± 0,00071% 0,018% ±0,00045% 0,010% ± 0,00717% 4. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kental Perhitungan kadar fenolik total dengan standar ekivalen asam galat (EAG) tertera dalam lampiran 11, sedangkan hasil perhitungan kadar fenolik total terdapat pada Tabel 7. Tabel 7. Kadar Fenolik total Ekstrak Kental Ekstrak Simplisia Ekstrak Secang etanol 30% Kadar Fenolik Total (61,942 ± 1,653) mg EAG/g Simplisia (396,296 ±10,85) mg EAG/g Ekstrak Ekstrak Secang etanol 50% (409,465 ±14,16) mg EAG/g Ekstrak Ekstrak Secang etanol 70% (608,230 ±28,127) mg EAG/g Ekstrak 60 5. Standardisasi Ekstrak Kering Penelitian ini menggunakan filler (Bahan pengisi) yang digunakan untuk mengeringkan ekstrak kental adalah Laktosa, Dekstrin, Corn Starch, Amrotab, Maltodekstrin, dan Avicel PH 102. Standardisasi perlu dilakukan terhadap ekstrak secang ini adalah organoleptik, kadar air dan sifat alir. a. Organoleptik Pengamatan terhadap warna, bau, dan bentuk/tekstur ekstrak kering yang dihasilkan tertera dalam Tabel 8 berikut ini. Tabel 8. Hasil Pengamatan Organoleptik Aspek Ekstrak Secang 70 % 1. Ekstrak Kering (Laktosa) Warna:merah bata, Bau :bau khas, Bentuk : butiran halus 2. Ekstrak Kering (Dekstrin) Warna:merah bata tua, Bau :bau khas, Bentuk : butiran halus 3. Ekstrak Kering (Corn Starch) Warna:merah bata, Bau :bau khas, Bentuk : butiran halus 4. Ekstrak Kering (Amrotab) Warna:merah bata, Bau :bau khas, Bentuk : butiran halus 5. Ekstrak Kering Warna:merah bata, Bau :bau khas, (Maltodekstrin) Bentuk : butiran halus 6. Ekstrak Kering (Avicel PH 102) Warna:merah bata, Bau :bau khas, Bentuk : butiran agak kasar 61 b. Kadar Air Tabel 9. Hasil Perhitungan Kadar Air Aspek Ekstrak Secang 70 % 1. Ekstrak Kering (Laktosa) 5,77% ± 2,44% 2. Ekstrak Kering (Dekstrin) 5,35% ± 0,49% 3. Ekstrak Kering (Corn Starch) 6,13% ± 2,65% 4. Ekstrak Kering (Amrotab) 4,77% ± 0,71% 5. Ekstrak Kering (Maltodekstrin) 4,80% ± 2,23% 6. Ekstrak Kering (Avicel PH 102) 8,18% ± 2,11% c. Sifat Alir Tabel 10. Hasil Perhitungan Sifat Alir Aspek Ekstrak Secang 70 % 1. Ekstrak Kering (Laktosa) 19,433° ± 4,293° (Sangat Baik Mengalir) 2. Ekstrak Kering (Dekstrin) 14,483° ± 3,501° (Sangat Baik Mengalir) 3. Ekstrak Kering (Corn Starch) 15,500° ± 3,072° (Sangat Baik Mengalir) 4. Ekstrak Kering (Amrotab) 12,430° ± 5,251° (Sangat Baik Mengalir) 5. Ekstrak Kering (Maltodekstrin) 18,080° ± 3,222° (Sangat Baik Mengalir) 6. Ekstrak Kering (Avicel PH 102) 23,157° ± 4,534° (Sangat Baik Mengalir) 62 Keterangan Sifat Alir: Sudut Diam <25 ° : Sangat Baik Sudut Diam 25 °-30° : Baik Sudut Diam 30 ° - 40° : Cukup Sudut Diam > 40 ° : Buruk 6. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kering Tabel 11. Kandungan Fenolik total Ekstrak Kering 70% Ekstrak + Filler Kadar Fenolik Total Ekstrak Kering (Laktosa) (513,70 ± 44,52 ) mg EAG/g Ekstrak Ekstrak Kering (Dekstrin) (228,52 ± 13,39) mg EAG/g Ekstrak Ekstrak Kering (Corn Starch) (304,81 ± 31,24) mg EAG/g Ekstrak Ekstrak Kering (Amrotab) (302,59 ± 9,96) mg EAG/g Ekstrak Ekstrak Kering (Maltodekstrin) (310,00 ± 68,59) mg EAG/g Ekstrak Ekstrak Kering (Avicel PH 102) (500,37 ± 22,48) mg EAG/g Ekstrak B. Pembahasan 1. Pembuatan Ekstrak Secang Kulit kayu tanaman secang dibersihkan, dikeringkan, potong , dan diserut kemudian dapat langsung digunakan dalam proses ekstraksi. Ekstraksi sampel kulit kayu tanaman secang menggunakan pelarut etanol 30%, 50%, dan 70% menghasilkan ekstrak cair berwarna merah tua dengan kepekatan warna merah yang berbeda pada setiap konsentrasi pelarut etanol. Ekstraksi 63 ini dilakukan untuk mengambil komponen polar dari sampel kulit kayu secang, pengambilan komponen senyawanya dilakukan dengan metode perkolasi selama 2 jam dengan perendaman bahan selama 0,5 jam dan sirkulasi pelarut selama 1,5 jam. Ekstrak etanol ini selanjutnya digunakan untuk analisis berikutnya. 2. Penapisan Fitokimia Kualitatif Penapisan fitokimia dalam penelitian kimia ini dilakukan secara kualitatif yakni untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak kulit kayu secang maupun serbuk simplisia kulit kayu secang, batang kayu secang mengandung senyawa tanin, fenol, resin, oleoresin dan masih banyak lagi (Depkes,2008), sehingga penelitian ini dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya kandungan yang disebutkan di atas dalam ekstrak yang dibuat dalam penelitian ini. Adapun penapisan fitokimia yang dilakukan antara lain penapisan alkaloid, tanin, polifenol, saponin, flavonoid, dan steroid. Komponen yang terdapat dalam ekstrak etanol secang dianalisis golongan senyawanya dengan tes uji warna dengan beberapa pereaksi untuk golongan Flavonoid, senyawa alkaloid, tanin dan Steroid. Pereaksi-pereaksi kebanyakan bersifat polar dan spesifik sehingga bisa berinteraksi polifenol, saponin, yang digunakan dengan sampel berdasarkan prinsip ‘like dissolve like’. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol disajikan pada Tabel 4. 64 a. Alkaloid Terbentuknya endapan pada uji Mayer, Wagner dan Dragendorff berarti dalam ekstrak etanol secang terdapat alkaloid. Tujuan penambahan HCl adalah karena alkaloid bersifat basa sehingga biasanya diekstrak dengan pelarut yang mengandung asam (Harborne, 1996). Perlakuan ekstrak dengan NaCl sebelum penambahan pereaksi dilakukan untuk menghilangkan protein. Adanya protein yang mengendap pada penambahan pereaksi yang mengandung logam berat (pereaksi Mayer) dapat memberikan reaksi positif palsu pada beberapa senyawa (Santos., dkk, 1998). Hasil terbentuknya positif endapan alkaloid putih. pada uji Mayer ditandai dengan Diperkirakan endapan kompleks kalium-alkaloid. Pada pembuatan pereaksi tersebut adalah Mayer, larutan merkurium(II) klorida ditambah kalium iodida akan bereaksi membentuk endapan merah merkurium(II) iodida. Jika ditambahkan berlebih maka terbentuk tetraiodomerkurat(II)) (Svehla, nitrogen yang akan 1990). kalium iodida yang K2[HgI4]- (kalium Alkaloid mengandung atom mempunyai pasangan elektron bebas sehingga dapat digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinassi dengan ion logam (McMurry, 2004). Pada uji alkaloid dengan pereaksi Mayer, diperkirakan nitrogen pada alkaloid akan bereaksi dengan ion logam K+ dari kalium tetraiodomerkurat(II) membentuk kompleks kalium-alkaloid berwarna putih- 65 kuning yang mengendap. Reaksi yang terjadi pada uji Mayer ditunjukkan pada Gambar 12. HgCl2 + 2KI HgI2 + 2KCI HgI2 + 2KI K2[HgI4]- (Kalium tetraiodomerkurat(II)) Warna reagen coklat-merah Gambar 12. Reaksi uji Mayer (Soerya D. M., dkk, 2005) Hasil positif alkaloid pada uji Wagner ditandai dengan terbentuknya endapan coklat muda sampai kuning. Diperkirakan endapan tersebut adalah kalium-alkaloid. Pada pembuatan pereaksi Wagner, iodin bereaksi dengan ion I- dari kalium iodida menghasilkan ion I3- yang berwarna coklat. Pada uji Wagner, ion logam K+ akan membentuk ikatan kovalen koordinat dengan nitrogen pada alkaloid membentuk kompleks kalium-alkaloid yang mengendap. Reaksi yang terjadi pada uji Wagner ditunjukkan pada Gambar 13. I2 + I- I3coklat Gambar 13. Reaksi Uji Wagner (Soerya D. M., dkk, 2005) 66 Berdasarkan metode mayer dan wagner yang telah dilakukan, didapatkan hasil bahwa tidak terbentuk endapan kalium alkaloid, sehingga pada uji ini dapat dikatakan negatif alkaloid dimana tidak perlu dilakukan uji penegasan alkaloid lebih lanjut menggunakan reagen Dragondraf. b. Tanin & Polifenol Pada uji tanin diperoleh hasil positif, adanya tanin akan mengendapkan protein pada gelatin. Tanin bereaksi dengan gelatin membentuk kopolimer mantap yang tidak larut dalam air (Harborne, 1996). Pada penambahan larutan besi(III) klorida diperkirakan larutan FeCl3 bereaksi dengan salah satu gugus hidroksil yang ada pada senyawa tanin yang terdapat dalam ekstrak secang sehingga menimbulkan warna ungu tua dengan mekasime seperti pada Gambar 14. Pereaksi besi(III) klorida dipergunakan secara luas untuk mengidentifikasi senyawa fenolik termasuk tanin. Hasil pengujian yang dilakukan pada tabung reaksi yang menggunakan larutan besi (III) klorida menunjukkan terjadinya perubahan warna dan pembentukan endapan dengan menggunakan gelatin. Gambar 14. Reaksi salah satu gugus fenol pada senyawa tanin berekasi dengan reagen FeCl3 menghasilkan kompleks warna ungu 67 c. Saponin Timbulnya busa pada uji Forth menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya (aglikon) (Rusdi, 1990). Pembentukan busa pada uji forth ini disebabkan terbentuknya senyawa aglikon yang merupakan sabun, pada uji saponin ditunjukkan pada Gambar 15. Selain uji Forth juga dilakukan uji LiebermanBurchard yang merupakan uji karakteristik untuk sterol tidak jenuh dan triterpen (Santos et al., 1978). Gambar 15. Reaksi hidrolisis saponin dalam air d. Flavanoid Warna orange yang terbentuk pada uji Bate Smith-Mertcalf dan warna merah pada uji Wilstater disebabkan karena terbentuknya garam flavilium (Achmad, 1986). Jenis flavanoid yang terdapat dalam ekstrak kulit kayu secang tidak diketahui, sehingga untuk mekanisme uji flavonoid diambil contoh senyawa flavon (salah satu jenis flavanoid), apabila dalam suatu zat 68 mengandung senyawa flavanol, saat ditambahkan Mg dan HCl akan mengalami reduksi menjadi garam flavanol klorida yang berwarna merah tua, dengan reaksi seperti pada Gambar. Sehingga selain warna larutannya berubah menjadi merah tua, dapat diamati pula serbuk Mg yang dimasukkan kedalam larutan bereaksi dengan gugus flavanol dan lama kelamaan habis. Gambar 16. Reaksi pembentukan garam flavilium e. Steroid Pengujian steroid/triterpenoid didasarkan pada kemampuan senyawa steroid/triterpenoid untuk membentuk warna dengan H2SO4 pekat dalam pelarut asam asetat anhidrat (Sangi dkk., 2008, 48). Pada uji steroid ini didapatkan hasil positif yang ditandai dengan perubahan warna pada ekstrak etanol secang yang telah diuapkan pelarutnya yang awalnya berwarana orange kemerahan setelah ditambahkan asam asetat dan H2SO4 pekat 69 warnanya berubah menjadi merah darah pekat. Persamaan reaksi pada Gambar 14. Gambar 17. Reaksi terpenoid/steroid dengan H2SO4 yang menyebabkan perubahan warna Hasil skrining fitokimia yang telah dilakukan menunjukkan bahwa dalam sampel ekstrak etanol secang mengandung tanin dan polifenol, saponin, steroid, dan flavonoid, namun tidak mengandung alkaloid. f. Pembandingan Sampel Ekstrak Secang Dengan Standar Asam Galat Menggunakan KLT Dilakukan pembandingan Rf ekstrak secang etanol 30% (2), ekstrak secang etanol 50% (3), dan ekstrak Secang etanol 70% (4) dengan standar asam galat (AG) menggunakan KLT (kromatografi lapis tipis). Hasil kromatografi lapis tipis tertera pada Gambar 11, terlihat pada totolan asam galat (AG) terdapat 1 noda dengan Rf 0,280 sedangkan pada totolan(2) terdapat 3 noda dengan noda ke satu bernilai Rf 0,170, noda kedua bernilai Rf 0,315 dan noda ke tiga bernilai Rf 0,510 sedang pada totolan (3) terdapat 2 noda dengan noda ke satu bernilai Rf 0,180 dan noda kedua bernilai Rf 0,320 sedang pada totolan (4) terdapat 2 noda dengan noda ke satu bernilai Rf 0,160 dan noda kedua bernilai Rf 0,300 dengan rician seperti pada Tabel 5. Dapat dilihat bahwa pada noda kedua disetiap totolan sampel bernilai hampir sama dengan nilai Rf asam galat, sehingga dapat dikatakan bahwa ekstrak secang 70 yang dibuat memilki kandungan asam galat, walaupun ekstrak secang yang dibuat belum murni. 3. Standardisasi Ekstrak Kental Standardisasi ekstrak kental yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi parameter berikut: susut pengeringan, kadar abu total, kadar abu tak larut asam, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, dan sisa pelarut etanol. Parameter standar yang pertama adalah susut pengeringan dengan menggunakan alat Mousture Balance (Precisa HA60, Swiss) dengan tiga kali pengulangan perhitungan, didapatkan susut pengeringan untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 30% sebesar 15,30% ± 2,84%, susut pengeringan untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 50% sebesar 21,23% ± 7,89%, serta susut pengeringan untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 70% sebesar 8,25% ± 2,64%. Sehingga dapat di katakan bahwa susut pengeringan dari ekstrak-ekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 21,24%. Parameter standar yang kedua adalah kadar abu total dengan mengukur kadar abu total menggunakan metode seperti yang telah dijelaskan dalam prosedur pengukuran kadar abu total, dengan tiga kali pengulangan perhitungan didapatkan kadar abu total untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 30% sebesar 4,317% ± 0,071%, kadar abu total untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 50% sebesar 3,758% ± 0,102%, serta kadar abu total untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 70% sebesar 1,912% ± 0,076%. Sehingga dapat di katakan bahwa kadar abu total 71 dari ekstrak-ekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 4,318%. Menurut standar FHI dikatakan bahwa kadar abu total tidak boleh melebihi 12,00%, dimana kadar abu merupakan implementasi dari kadar mineral dan senyawa anorganik dalam ekstrak yang tidak dapat terdestruksi saat dipanaskan, sehingga ditetapkan standar tersebut. Parameter standar yang ketiga adalah kadar abu tak larut asam dengan mengukur kadar abu tak larut asam menggunakan metode seperti yang telah dijelaskan dalam prosedur pengukuran kadar abu tak larut asam, dengan tiga kali pengulangan perhitungan didapatkan kadar abu tak larut asam untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 30% sebesar 0,400% ± 0,288%, kadar abu tak larut asam untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 50% sebesar 0,447% ± 0,090%, serta kadar abu tak larut asam untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 70% sebesar 0,146% ± 0,041%. Sehingga dapat di katakan bahwa kadar abu tak larut asam dari ekstrakekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 0,448%. Menurut standar FHI dikatakan bahwa kadar abu total tidak boleh melebihi 2,00%, dimana kadar abu tak larut asam merupakan implementasi dari kadar mineral dan senyawa anorganik yang tak larut dalam ekstrak yang tidak dapat terdestruksi saat dipanaskan, sehingga ditetapkan standar tersebut. Parameter standar yang keempat adalah sari larut air dengan mengukur kadar sari larut air menggunakan metode seperti yang telah dijelaskan dalam prosedur pengukuran kadar sari larut air, dengan tiga kali pengulangan perhitungan didapatkan kadar sari larut air untuk ekstrak secang 72 menggunakan pelarut etanol 30% sebesar 0,476% ± 0,003%, kadar sari larut air untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 50% sebesar 0,410% ± 0,003%, serta kadar sari larut air untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 70% sebesar 0,532% ± 0,001%. Sehingga dapat di katakan bahwa kadar sari larut air dari ekstrak-ekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 0,533%. Menurut standar FHI dikatakan bahwa sari larut air tidak boleh melebihi 18,00%. Parameter standar yang kelima adalah sari larut etanol dengan mengukur kadar sari larut etanol menggunakan metode seperti yang telah dijelaskan dalam prosedur pengukuran kadar sari larut etanol, dengan tiga kali pengulangan perhitungan didapatkan kadar sari larut etanol untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 30% sebesar 0,924% ± 0,002%, kadar sari larut etanol untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 50% sebesar 1,092 ± 0,006%, serta kadar sari larut etanol untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 70% sebesar 1,223% ± 0,004%. Sehingga dapat dikatakan bahwa kadar sari larut etanol dari ekstrak-ekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 1,224%. Menurut standar FHI dikatakan bahwa kadar sari larut etanol tidak boleh melebihi 9,70%. Parameter standar yang terakhir adalah sisa pelarut etanol yang pengukurannya menggunakan instrumen kromatografi gas (GC DANI 1000) dengan pengukuran kadar sisa pelarut etanol menggunakan metode seperti yang telah dijelaskan dalam prosedur pengukuran kadar sisa pelarut etanol pada BAB II, dengan tiga kali pengulangan perhitungan didapatkan kadar sisa 73 pelarut etanol untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 30% sebesar 0,006% ± 0,00071%, kadar sisa pelarut etanol untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 50% sebesar 0,018% ± 0,00045%, serta kadar sisa pelarut etanol untuk ekstrak secang menggunakan pelarut etanol 70% sebesar 0,010% ± 0,00717%. Sehingga dapat dikatakan bahwa kadar sisa pelarut etanol dari ekstrak-ekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 0,019% yang merupakan kadar yang sangat sedikit. Menurut standar FHI dikatakan bahwa kadar sisa pelarut etanol harus sesedikit mungkin. Dalam penelitian ini yang dihitung adalah kadar sisa pelarut etanol dalam ekstrak kental, dimana ekstrak memang masih mengandung pelarut yang berjumlah sangat sedikit. Perhitungan sisa pelarut ini dilakukan sebagai pendahuluan untuk mengetahui kadar pelarut etanol yang terkandung sebelum ekstrak kental dibuat menjadi ekstrak kering. Sehingga dapat dipastikan saat dibuat menjadi ekstrak kering sudah tidak mengandung pelarut etanol sama sekali, karena apabila di dalam suatu ekstrak kering (sedian obat) masih terkandung sisa pelarut etanol akan berbahaya untuk konsumsi pasien (Depkes RI, 2000, 17-18). 4. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kental a. Mencari λMaksimal untuk pengukuran dengan cara scaning dari panjang gelombang 350 nm hingga panjang gelombang 800 nm, dalam pencarian ini didapatkan panjang gelombang 734 nm (data scanning dalam lampiran 11) dimana hampir serupa dengan penelitian sebelumnya yang 74 dilakukan oleh Jannat.,dkk tahun 2010 yakni pada panjang gelombang maksimum pada 725 nm. b. Membuat Kurva Standar Standar yang digunakan merupakan asam galat dengan rentan antara 40 ppm hingga 120 ppm dengan interval 20 ppm. Dalam pembuatan kurva standar ini didapatkan data seperti pada Tabel 12. Tabel 12. Absorbansi Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kental Serapan Rata-rata Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 40 ppm 0,312 0,32 0,319 0,317 60 ppm 0,546 0,541 0,53 0,539 80 ppm 0,699 0,68 0,685 0,688 100 ppm 0,892 0,83 0,855 0,859 120 ppm 0,978 0,966 0,957 0,967 Dari data absorbansi standar di atas kemudian data standar tersebut dibuat KONSENTRASI kurva linier untuk digunakan dalam penentuan kadar fenolik total selanjutnya. STANDAR ASAM GALAT SERAPAN 1.500 y = 0.0081x + 0.026 R² = 0.9868 1.000 0.500 0.000 0 20 40 60 80 100 120 KONSENTRASI Gambar 18. Kurva Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kental Kurva standar asam galat diatas memberikan informasi persamaan garis linier asam galat adalah y= 0,0081x + 0,026 dengan nilai linieritas 75 140 mendekati 1 yakni R2 = 0,9868. Dengan perincian perhitungan pada lampiran 11. c. Mengukur Absorbansi Sampel Mengukur absorbansi sampel dilakukan dengan metode yang digunakan oleh Jannat.,dkk,2010 dengan sedikit modifikasi pada jumlah reagen dan λ maksimal yang digunakan. Pengukuran diawali dengan menyiapkan stok sampel dengan konsentrasi 10000 ppm yang selanjutnya diencerkan menjadi 200 ppm kemudian dipipet kedalam kuvet yang kemudian ditambahkan Na2CO3 6% setelah lima menit ditambahkan Folin Ciolciaute 10% kemudian dikocok selama 90 menit dan diukur absorbansinya menggunakan spektroskopi UV-Vis pada λ maksimal 734 nm, kemudian untuk menghitung kadar fenolik total digunakan persamaan garis linier asam galat yang telah dicari sebelumnya (perhitungan kadar asam galat ekivalen tertera dalam lampiran) sehingga diketahui kadar fenolik total pada Tabel 7. Hasil penentuan kadar fenolik total dalam ekstrak secang mengalami peningkatan seiring dengan meningkatnya kadar etanol dalam pelarut yang digunakan, dari data di atas terlihat perbedaan yang cukup signifikan dengan menggunakan metode ekstraksi dan pengukuran yang sama namun kadar fenolik totalnya berbeda, hal ini dimungkinkan disebabkan oleh sifat kepolaran antara air dan etanol yang berbeda, menurut literatur yang ada, air dan etanol merupakan senyawa yang polar, namun tingkat kepolarannya berbeda, sehingga dengan menggunakan 76 etanol 30% (perbandingan etanol : air adalah 3:7), etanol 50% (perbandingan etanol : air adalah 1:1), serta etanol 70% (perbandingan etanol : air adalah 7: 3). Kadar Fenolik Total mg EAG/GEkstrak Kadar Fenolik Total 700.000 600.000 Secang dengan Etanol 30% 500.000 400.000 Secang dengan Etanol 50% 300.000 Secang dengan Etanol 70% 200.000 100.000 0.000 1 2 3 Gambar 19. Grafik Perbandingan Kadar Fenolik Total Sampel Berdasarkan Gambar 19 menunjukkan bahwa pelarut dengan etanol yang konsentrasinya lebih tinggi memiliki kadar fenolik total lebih banyak. Hal tersebut karena pengaruh kepolaran dari etanol yang digunakan. Etanol memiliki sifat semipolar karena adanya gugus OH yang bersifat polar dan struktur etil yang bersifat non-polar, sedangkan air merupakan senyawa polar. Tingkat kepolaran etanol yang digunakan dipengaruhi oleh banyaknya kadar air dalam larutan tersebut, semakin banyak kadar air dalam larutan (etanol : air), maka semakin tinggi tingkat kepolaran. Dimana senyawa fenolik yang ditarik bersifat semi polar yakni gugus benzen bersifat non-polar dan gugus OH bersifat polar. Itulah sebab 77 mengapa ekstrak secang dengan pelarut etanol 70% dapat menarik gugus fenolik paling banyak. 5. Standardisasi Ekstrak Kering Standardisasi perlu dilakukan terhadap ekstrak sedian obat herbal adapun standardisasi ekstrak kering yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi parameter berikut: pengamatan organoleptik, kadar air, dan sifat alir. Ekstrak kering yang dibuat dari ekstrak kental dengan pelarut etanol 70% hal ini dikarenakan pada konsentrasi pelarut ini memiliki kadar fenolik total yang paling banyak sehingga ekstrak kental etanol 70% ini dibuat menjadi ekstrak kering. Ekstrak kering dibuat dengan cara ditambahkan filler ke dalam ekstaknya dan dimasukkan kedalam oven dengan suhu 50°C selama 3 jam, filler sendiri merupakan zat pengikat atau dapat dikatakan sebagai zat pengisi yang berfungsi untuk memadatkan dan memperbaiki tekstur ekstrak agar mudah dijadikan serbuk, dalam penelitian ini filler yang digunakan adalah Laktosa, Dekstrin, Corn Starch, Amrotab, Maltodekstrin, dan Avicel PH 102. Parameter standar ekstrak kering pertama yang dilakukan dalam penelitian ini adalah pengamatan organoleptik, dimana hasil dari keenam ekstrak kering secang dengan pelarut etanol 70% dengan penambahan filler yang berbeda menunjukkan hasil ekstrak kering yang baik dimana serbuk yang dihasilkan halus dengan warna antara merah hingga merah 78 tua, rasa agak pahit, serta berbau khas dengan perincian terdapat pada Tabel 8. Parameter standar ekstrak kering yang kedua adalah kadar air dengan menggunakan alat Karl Fischer Titrator (Karl-Fischer Moisture Titrator MKS-520) dengan tiga kali pengulangan, dari hasil perhitungan didapatkan kadar air untuk ekstrak secang kering menggunakan filler laktosa sebesar 5,77% ± 2,44%, kadar air untuk ekstrak secang kering menggunakan filler dekstrin sebesar 5,35% ± 0,49%, kadar air untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Corn Starch sebesar 6,13% ± 2,65%, kadar air untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Amrotab sebesar 4,77% ± 0,71%, kadar air untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Maltodekstrin sebesar 4,80% ± 2,23%, serta kadar air untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Avicel PH 102 sebesar 8,18% ± 2,11%, Sehingga dapat dikatakan bahwa kadar dari ekstrakekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 10,00%. Kadar air akan tidak boleh terlalu besar kareana akan mempengaruhi lama penyimpanan, karena apabila kadar air tinggi maka akan lebih mudah ditumbuhi bakteri dan jamur, sehingga sediaan obat tidak akan bertahan lama. Berdasarkan data yang didapatkan penambahan filler sangat berpengaruh dengan kadar air yang diikat oleh ekstrak kering, karena setiap filler memiliki kualifikasi pengikatan bahan dan air yang berbeda-beda kemungkinan lain terjadi karena kondisi suhu pada saat pengeringan, kadar air menurun dengan meningkatnya suhu pengeringan (Rathanan., dkk, 2007) dari keenam 79 ekstrak yang dibuat ekstrak kering dengan tambahan filler maltodekstrin memiliki kadar air paling kecil, sehingga dalam parameter kandungan kadar air ekstrak kering secang dengan penambahan filler maltodekstrin adalah yang paling baik. Parameter standar ekstrak kering yang terakhir adalah sifat alir dengan menggunakan alat yang sederhana yakni corong, statif dan klem, serta penggaris. Sifat alir berhubungan dengan sudut diam, dengan penjelasan sudut diam <25 ° menyatakan sifat alir sangat baik, sudut diam 25 °-30° menyatakan sifat alir baik, sudut diam 30 ° - 40° menyatakan sifat alir cukup, dan sudut diam > 40 ° menyatakan sifat alir buruk. Dimana untuk menetukan sudut diam dari ekstrak kering digunakan rumus dibawah ini : Tan α = dimana H merupakan ketinggian serbuk dijatuhkan dan D merupakan diameter rata-rata dari serbuk yang jatuh sehingga akan diketahui sudut diam α-nya perhitungan sifat alir tertera dalam lampiran 14. Penelitian sifat alir ini dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan, dari hasil perhitungan didapatkan sifat alir untuk ekstrak secang kering menggunakan filler laktosa sebesar 19,433° ± 4,293° (Sangat Baik Mengalir) , sifat alir untuk ekstrak secang kering menggunakan filler dekstrin sebesar 14,483° ± 3,501° (Sangat Baik Mengalir), sifat alir untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Corn Starch sebesar 15,500° ± 80 3,072° (Sangat Baik Mengalir) , sifat alir untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Amrotab sebesar 12,430° ± 5,251° (Sangat Baik Mengalir), sifat alir untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Maltodekstrin sebesar 18,080° ± 3,222° (Sangat Baik Mengalir), serta sifat alir untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Avicel PH 102 sebesar 23,157° ± 4,534° (Sangat Baik Mengalir), Sehingga dapat di katakan bahwa sifat alir dari ekstrak-ekstrak yang telah dibuat tidak lebih dari 25° dan dapat dinyatakan bahwa keenam ekstrak kering dengan filler berbeda-beda menghasilkan ekstrak kering yang sangat mudah mengalir, namun walaupun keenam ekstrak kering tersebut memiliki sifat yang sama-sama dalam kategori mudah mengalir, sudut diam yang dimiliki oleh setiap ekstrak kering berbeda, hal ini disebakan karena setiap filler memiliki karakteristik tersendiri dalam membentuk sifat fisik ekstrak kering, apabila dilihat dari parameter sudut diam/sifat alir, ekstrak kering yang memiliki sifat alir terbaik adalah ekstrak kering dengan penambahan filler Amrotab. 6. Kandungan Fenolik Total Ekstrak Kering a. Membuat Kurva Standar Standar yang digunakan merupakan asam galat dengan rentan antara 40 ppm hingga 120 ppm dengan interval 20 ppm. Dalam pembuatan kurva standar ini didapatkan data seperti pada Tabel 13. 81 Tabel 13. Absorbansi Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kering Konsentrasi Serapan Serapan Deviasi Ulangan1 Ulangan2 Ulangan3 Rata-rata 140 PPM 0,7020 0,7130 0,7620 0,7257 0,0319 120 PPM 0,5970 0,6030 0,5990 0,5997 0,0031 100 PPM 0,4580 0,4620 0,4700 0,4633 0,0061 80 PPM 0,3640 0,3700 0,3670 0,3670 0,0030 60 PPM 0,2610 0,2550 0,2700 0,2620 0,0075 40 PPM 0,1910 0,1980 0,1890 0,1927 0,0047 Dari data absorbansi standar diatas kemudian data standar tersebut dibuat kurva linier untuk digunakan dalam penentuan kadar fenolik total selanjutnya. STANDAR ASAM GALAT SERAPAN 0.8000 y = 0.0054x - 0.0502 R² = 0.9894 0.6000 0.4000 0.2000 0.0000 0 20 40 60 80 100 120 140 KONSENTRASI Gambar 20. Kurva Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kering 82 160 Kurva standar asam galat diatas memberikan informasi persamaan garis linier asam galat adalah y= 0,0054x - 0,0502 dengan nilai linieritas mendekati 1 yakni R2 = 0,9894. Dengan perincian perhitungan pada lampiran 15. b. Mengukur Absorbansi Sampel Mengukur absorbansi sampel dilakukan dengan metode yang digunakan oleh Jannat.,dkk,2010 dengan sedikit modifikasi pada jumlah reagen dan λ maksimal yang digunakan. Pengukuran diawali dengan menyiapkan stok sampel dengan konsentrasi 10000 ppm yang selanjutnya diencerkan menjadi 200 ppm kemudian dipipet ke dalam kuvet yang kemudian ditambahkan Na2CO3 6% setelah lima menit ditambahkan Folin Ciolciaute 10% kemudian di-shake selama 90 menit dan diukur absorbansinya menggunakan spektroskopi UV-Vis pada λ maksimal 734 nm, kemudian untuk menghitung kadar fenolik total digunakan persamaan garis linier asam galat yang telah dicari sebelumnya (perhitungan kadar asam galat ekivalen tertera dalam lampiran) sehingga diketahui kadar fenolik total pada Tabel 11. Hasil penentuan kadar fenolik total dalam ekstrak kering kulit kayu tanaman secang dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan perhitungan didapatkan kadar fenolik total untuk ekstrak secang kering menggunakan filler laktosa sebesar (513,70 ± 44,52 ) mg EAG/g Ekstrak, kadar fenolik total untuk ekstrak secang kering menggunakan filler dekstrin sebesar (228,52 ± 13,39) mg EAG/g Ekstrak, kadar fenolik total 83 untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Corn Starch sebesar (304,81 ± 31,24) mg EAG/g Ekstrak, kadar fenolik total untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Amrotab sebesar (302,59 ± 9,96) mg EAG/g Ekstrak, kadar fenolik total untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Maltodekstrin sebesar (310,00 ± 68,59) mg EAG/g Ekstrak, serta kadar fenolik total untuk ekstrak secang kering menggunakan filler Avicel PH 102 sebesar (500,37 ± 22,48) mg EAG/g Ekstrak. Dari penelitian yang telah dilakukan terhadap ekstrak kental dan ekstrak kering tanaman secang data yang didapatkan telah memenuhi standar yang telah ditentukan dalam FHI (Farmakope Herbal Indonesia). 84 BAB V KESIMPPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat ditarik beberapa kesimpulan sebagai berikut ini: 1. Kadar fenol total dari ekstrak kental dan ekstrak cair kayu secang adalah untuk ekstrak kental secang etanol 30% sebesar (390,241 ± 10,9) mg EAG /g Ekstrak, ekstrak secang etanol 50% sebesar (403,092 ± 14,33) mg EAG /g Ekstrak, dan ekstrak Secang etanol 70% sebesar (597,068 ± 28,39) mg EAG /g Ekstrak, serta untuk ekstrak kering dengan pelarut etanol 70%, yakni ekstrak kering (Laktosa) sebesar (513,70 ± 44,52 ) mg EAG /g Ekstrak, ekstrak kering (Dekstrin) sebesar (228,52 ± 13,39) mg EAG /g Ekstrak, ekstrak kering (Corn Starch) sebesar (304,81 ± 31,24) mg EAG /g Ekstrak, ekstrak kering (Amrotab) sebesar (302,59 ± 9,96) mg EAG /g Ekstrak, ekstrak kering (Maltodekstrin) sebesar (310,00 ± 68,59) mg EAG /g Ekstrak, dan ekstrak kering (Avicel PH 102) sebesar (500,37 ± 22,48) mg EAG /g Ekstrak. 2. Kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak kayu secang (Caesalpinia Sappan L.) adalah saponin, tanin / polifenol, steroid, flavanoid yang diketahui dari uji fitokimia kualitatif. 3. Ekstrak secang yang dibuat telah memenuhi standar yang ditetapkan dalam FHI (Farmakope Herbal Indonesia) yakni Susut pengeringan tidak lebih dari 26%, Kadar abu tidak lebih dari 4,4%, kadar abu tak 85 larut asam tidak lebih dari 0,45%, kadar sari larut air antara 0,41% sampai 0,532%, kadar sari larut etanol 0,924% sampai 1,223%, kadar sisa pelarut etanol sangat kecil tidak lebih dari 0,019% . B. Saran Saran yang diberikan oleh penulis dalam pengerjaan penelitian ini adalah sebagai berikut: 1. Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk melengkapi data standardisasi pada aspek cemaran mikroba dan cemaran logam berat 2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui tingkat aktivitas dari setiap ekstrak, misal uji invitro terhadap kerja enzim xantin oxidase 86 DAFTAR PUSTAKA Achmad, S.A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Jakarta: Karnunika. BPOM RI. 2004. Monograph of Indonesia Medical Plant extracts volume 1. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan. Hlm.15-16 BPOM RI. 2008. Direktorat Obat Asli Indonesia. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan. Hlm.18 Candra, J. Helan dan S, Saravakumar. 2013 . Screening of antimicrobial activity and phytochemical analysis of Caesalpinia sappan L. Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 2013, 5(2):171-175. Department of Biotechnology, Jeppiaar Engineering College, Chennai, Tamil Nadu, India Depkes RI. 1971. Materi Medika Indonesia JILID III. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Depkes RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hlm. 1036-1043. Depkes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Direktorat Pengawasan Obat dan Makanan. Hlm 12- 32 Depkes RI. 2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Jakarta: Direktorat Jendral Bina Farmasi dan Alat Kesehatan Depkes RI. 2010. Suplemen I Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta: Direktorat Jendral Bina Farmasi dan Alat Kesehatan Dipiro, J. T., Talbert, R. L., Yee, G. C., Matzke, G. R., Wells, B. G., Posey,L. M. 2005. Pharmacotherapy: A Pathophysiological Approach (Eds). 6th edition. Chapter 95. Acne Vulgaris. Hlm. 1755- 1768. diakses pada tanggal 30 Agustus 2016 pukul 11.52 melalui web. http://www.accesspharmacy.com/content.aspx?aID=3212123. Farah, A. dan Donangelo,C.M. 2006. Phenolic compounds in coffee. Brazilian Journal of Plant Physiology, 18. Hlm. 23–36. Farnsworth, Norman R. 1966. Biological and phytochemical screening of plants. USA: American Pharmaceutical Association. Flight, I.dan Clifton, P. 2006. Cereal grains and legumes in the prevention of coronary heart disease and stroke: A review of the literature. European Journal of Clinical Nutrition, 60. Hlm. 1145–1159 Follin, Otto dan Ciocalteu, Vintila. 1927. On Tyrosine And Tryptophane Determinations In Proteins. Joural From the Biochemical Laboratory of 87 Harvard Medical School.1927 April 1. Diakses pada tanggal 30 Agustus 2016 pukul 10.33 melalui web. http://www.jbc.org/content/73/2/62 7.full.pdf Harborne, J., 1996. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Cetakan kedua. Penerjemah: Padmawinata, K. dan I. Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Jannat, B., Oveisi,M. R., Sadeghi N., Hajimahmoodi, M., Behzad, M., Choopankari,E. dan Behfar, A. A. 2010. Effects Of Roasting Temperature And Time On Healthy Nutraceuticals Of Antioxidants And Total Phenolic Content In Iranian Sesame Seeds ( Sesamum Indicum L.) Iran. J. Environ. Health. Sci. Eng., 2010, Vol. 7, No. 1, Hlm. 97-102 Kraus,Tamara E. C., Dahlgren, Randy A., dan Zasoski, Robert J. 2003. Tannins in nutrient dynamics of forest ecosystems - a review. Plant and Soil 256. Netherlands: Kluwer Academic Publishers. Hlm. 41–66 Kusmiati., Dameria dan Dody Priadi. 2014. Analisis Senyawa Aktif Ekstrak Kayu Secang (Caesalpinia Sappan L) yang Berpotensi Sebagai Antimikroba. Prosiding. Seminar Nasional Teknologi Industri Hijau I tahun 2014. Lachman, L., Liebermann, H.A., dan Kanig, J.I. (1994). Teori and Praktek Farmasi Industri II. Edisi III. Jakarta: UI Press. Hlm. 645-660. M. Sangi M., M.R.J. Runtuwene., H.E.I. Simbala dan V.M.A. Makang. 2008. Analisis Fitokimia Tumbuhan Obat di kabupaten Minahasa Utara. Chem. Prog, 1(1). Hlm. 47-53. McMurry, J. and R.C. Fay. 2004. Organic Chemistry. 4th edition. Belmont, Canada: Nelson Education, Ltd. Mirhosseini, Hamed ., Amid, Bahareh T. dan Cheong, Kok W.(2013) .Effect of different drying methods on chemical and molecular structure of heteropolysaccharideeprotein gum from durian seed. Food Hydrocolloids 31 (2013) 210-219 journal homepage: www.elsevier.com/locate/foodhyd Department of Food Technology, Faculty of Food Science and Technology, University Putra Malaysia, 43400 UPM Serdang, Mujica, María Virginia., Granito, Marisela., dan Soto, Naudy. 2009. Importance of the extraction method in the quantification of total phenolic compounds in Phaseolus Vulgaris L. INCI v.34 n.9 Caracas. diakses melalui web: http://www.scielo.org.ve/pdf/inci/v34n9/art11.pdf. pada tanggal 18 oktober 2016. Hlm.650-654 Oliveira, A. C de., Valentim, I. B., Goulart, M. O. F., Silva, C. A., Bechara, E. J. H., Trevisan, M. T. S. 2009. Plants As a Source Of Natural Antioxidants. Quím. Nova vol.32 no.3 São Paulo 88 Pandey, Bhawana ., Gangrale, Divya ., Upadhyay, Nikita dan Priyanka, Tiwari. (2014). Physiochemical Analysis Of Pterocarpus Santalinus L. Extracts. Indian Journal Sciens Resech .4 (1). Hlm. 201-204 Pertamawati dan Mutia Hardhiyuna. 2015. Uji Penghambatan Aktivitas Enzim Xantin Oksidase Terhadap Ekstrak Kulit Kayu Secang (Caesalpinia Sappan L). Kartika-Jurnal Ilmiah Farmasi, Des 2015, 3(2), 12-17. Jakarta: Pusat Teknologi Farmasi dan Medika-LAPTIAB-BPPT Price, S dan Wilson, L, 2005. Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit. Edisi 6. Jakarta: EGC Rathanand., dkk. 2007. Preparation of Mucoadhesive Microspheres for Nasal Delivery by Spray Drying. indian J Pharm Sci(69), Hlm. 651-657 Roth, Herman J. dan Blaschkel, Gottfried. 1981. Analisis Farmasi. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Rusdi. 1990. Tetumbuhan Sebagai Sumber Bahan Obat. Padang: Universitas Andalas Santos, A.F., B.Q. Guevera, A.M. Mascardo, dan C.Q. Estrada. 1978. Phytochemical, Microbiological and Pharmacological, Screening of Medical Plants. Journal of Research Center University of Santo Thomas . Manila: Research Center University of Santo Thomas. Singleton, Vernon L., Orthofer,R. dan Lamuela-Raventós, Rosa M. 1999. [14] Analysis Of Total Phenols And Other Oxidation Substrates And Antioxidants By Means Of Folin-Ciocalteu Reagent. Polyphenols And Flavonoids. Hlm. 152- 178. Sirait, Midian. 2007. Penuntun fitokimia dalam farmasi. Bandung : Penerbit ITB. Siregar, Charles C. P. dan Wikasara. 2010. Teknologi Farmasi Sediaan Tablet Dasar-Dasar Praktis. Jakarta: EGC Skoog, D.A., West, D.M. dan Holler, F.J. 1996. Fundamental of Analytical Chemistry. 7th ed. New York: Saunders College Publishing. Hlm. 572574. Soerya Dewi Marliana., Venty Suryanti dan Suyono . (2005) . Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechium edule Jacq. Swartz.) dalam Ekstrak Etanol. Jurnal Biofarmasi 3 (1): 26-31, Pebruari 2005, ISSN: 1693-2242 . Solo: Jurusan Kimia FMIPA Universitas Sebelas Maret (UNS) Surakarta. Svehla, G. 1990. Buku Teks Analisis Anorganik Kualitatif Makro dan Semimakro Edisi II. Jakarta: Kalman Media Pustaka 89 Trease, George Edward. 1961. A textbook of pharmacognosy. London : Bailliere, Tindall, & Cox. Tri Joko Raharjo .2013. Kimia Hasil Alam. Yogyakarta : Pustaka Pelajar Tuchmantel, W., Kozikowski, A. P., dan Romanczyk, L. J. Jr. 1999. Studies in polyphenol chemistry and bioactivity. Preparation of building blocks from (+)1-catechin. Procyanidin formation. Synthesis of the cancer cell growth inhibitor, 3-O-galloyl‐(2R,3R)-epicatechin-4,8-[3-O-galloyl-(2R,3R)-epicatechin]. Journal of the American Chemical Society, (121). Hlm.12073–12081. Wahyu Widiowati. 2011. Uji Fitokimia dan Potensi Antioksidan Ekstrak Etanol Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.). JKM. Vol.11 No.1 Juli 2011. Hlm. 23-31 Walker, R. dan Edward, C. 2003. Clinical Pharmacy And Therapeutics. Edisi 3. USA: Churchill Livingstone Waterman, P.G. dan Mole, S. 1994. Analysis of Phenolic Plant Metabolites. UK: Oxford Xu, H., Zhou, Z., dan Yang, J. 1994. Chemical Constituents of Caesalpinia sappan L. Zhongguo Zhongyao Zazhi, 19, (8). Hlm.485-492 Zucker, Wiliam V. 1983. Taninnins: Does Structure Determine Funcition? An Ecological Perspective. The American Naturalist Vol. 121, No.3. USA: University of Chicago. Hlm. 335-365 90 LAMPIRAN Lampiran 1. Desain Penelitian Gambar 21. Desain penelitian 91 Lampiran 2. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Susut Pengeringan) Tabel 14. Perhitungan Parameter Susut Pengeringan Menggunakan Alat Mousture Balance Ekstrak Kental Secang Etanol 30% Secang Etanol 50% Secang Etanol 70% Bobot Pengulangan Ekstrak (g) 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Susut Pengeringan 0,139 0,141 0,142 0,143 0,144 0,142 0,141 0,14 0,14 12,12% 16,23% 17,56% 12,12% 25,66% 25,92% 6,57% 6,89% 11,30% 92 Susut Pengeringan Rata-Rata Standar Deviasi 15,30% 2,84% 21,23% 7,89% 8,25% 2,64% Lampiran 3. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Kadar Abu Total) Perhitungan parameter standar kadar abu total dilakukan menggunakan rumus berikut: % Kadar Abu total = ( 1 - ) X 100% Dengan keterangan sebagai berikut A : Massa Krus dan tutup kosong (gram) B : Massa Krus dan tutup + ekstrak awal (gram) C : Massa krus dan tutup + ekstrak akhir (gram) Tabel 15. Perhitungan Parameter Kadar Abu Total Ekstrak Kental Nomer Krus Secang Etanol 30% Krus 1 Krus 2 Krus 3 Krus 4 Krus 5 Krus 6 Krus 7 Krus 8 Krus 9 Secang Etanol 50% Secang Etanol 70% Krus + Ekstrak Krus kosong(A) Sebelum(B) Sesudah(C) 34,8651 32,5487 36,753 33,2616 36,2379 36,318 36,8726 36,5893 35,5507 35,3653 33,0497 37,253 33,7618 36,7561 36,8168 37,3754 37,0899 36,0539 93 34,8871 32,5701 36,7744 33,2805 36,2568 36,3372 36,8823 36,5992 35,5599 Kadar Abu Total 4,398% 4,271% 4,280% 3,778% 3,647% 3,849% 1,929% 1,978% 1,828% Kadar Abu Total RataRata Standar Deviasi 4,317% 0,071% 3,758% 0,102% 1,912% 0,076% Lampiran 4. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Kadar Abu Tidak Larut Asam) Perhitungan parameter standar kadar abu total dilakukan menggunakan rumus berikut: % Kadar Abu tak larut asam = ( 1 - ) X 100 X %Abu Total Dengan keterangan sebagai berikut A : Massa Krus dan tutup kosong (gram) B : Massa Krus dan tutup + ekstrak awal (gram) D : Massa krus dan tutup + abu yang tidak larut asam(gram) Tabel 16. Perhitungan Parameter Kadar Abu Tak Larut Asam Krus + Ekstrak Krus Ekstrak Nomer Kosong Kental Krus Sebelum Sesudah (A) (B) (D) Secang Etanol 30% Secang Etanol 50% Secang Etanol 70% Krus 1 Krus 2 Krus 3 Krus 4 Krus 5 Krus 6 Krus 7 Krus 8 Krus 9 34,8651 32,5487 36,753 33,2616 36,2379 36,318 36,8726 36,5893 35,5507 34,8871 32,5701 36,7744 33,2805 36,2568 36,3372 36,8823 36,5992 35,5599 34,8683 32,5491 36,7554 33,2634 36,2407 36,3202 36,8735 36,5898 35,5515 94 Kadar Abu Total 4,398% 4,271% 4,280% 3,778% 3,647% 3,849% 1,929% 1,978% 1,828% Kadar Kadar Abu Abu Tak Tidak Larut SD Larut Asam Asam Rata-Rata 0,640% 0,080% 0,400% 0,288% 0,480% 0,360% 0,540% 0,447% 0,090% 0,441% 0,179% 0,100% 0,146% 0,041% 0,159% Lampiran 5. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Sari Larut Air) Perhitungan parameter standar sari larut air dilakukan menggunakan rumus berikut: % Kadar senyawa yang larut dalam air = x 100% Dengan keterangan sebagai berikut A : Massa Krus dan tutup kosong (gram) B : Massa Krus dan tutup + ekstrak awal (gram) C : Massa krus dan tutup + ekstrak akhir (gram) Tabel 17. Perhitungan Parameter Sari Larut Air Ekstrak Ulangan Kental 30% 50% 70% 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Kosong (A) 34,8628 32,5445 36,7503 33,2597 36,2331 36,315 35,18 34,4424 34,8879 Bobot Krus Sebelum (B) 53,9262 51,818 55,825 52,4381 55,3131 55,4883 54,2797 53,3522 53,8459 95 Sesudah (C) 34,9542 32,6361 36,8408 33,3385 36,3119 36,3929 35,2815 34,5433 34,9888 % Sari Larut Air 0,479% 0,475% 0,474% 0,411% 0,413% 0,406% 0,531% 0,534% 0,532% % Sari Larut Air Rata- Rata SD 0,476% 0,003% 0,410% 0,003% 0,532% 0,001% Lampiran 6. Perhitungan Standardisasi Ekstrak Kental (Sari Larut Etanol) Perhitungan parameter standar sari larut etanol dilakukan menggunakan rumus berikut: % Kadar senyawa yang larut dalam etanol = x 100% Dengan keterangan sebagai berikut A : Massa Krus dan tutup kosong (gram) B : Massa Krus dan tutup + ekstrak awal (gram) C : Massa krus dan tutup + ekstrak akhir (gram) Tabel 17. Perhitungan Parameter Sari Larut Etanol Ekstrak Ulangan Kental 30% 50% 70% 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Kosong (A) 34,8633 32,5418 36,7493 33,2589 36,2316 36,3142 35,1779 34,4416 34,8854 Bobot Krus Sebelum (B) 50,0869 47,6406 51,9684 48,5515 51,4341 51,6026 50,5257 49,5843 50,18 96 Sesudah (C) 35,0042 32,6812 36,8897 33,4249 36,3985 36,4811 35,3655 34,6262 35,0731 % Sari % Sari Larut Larut Etanol SD Etanol Rata- Rata 0,926% 0,923% 0,923% 0,924% 0,002% 1,085% 1,098% 1,092% 1,092% 0,006% 1,222% 1,219% 1,227% 1,223% 0,004% Lampiran 7. Data Kromatogram Standar Etanol dalam penentuan Sisa Pelarut Etanol (Standardisasi Ekstrak Kental) 1. Pengukuran Standar a) Standar A (Etanol 1% dan n-Propanol 0,5%) 1) Standar A (Etanol 1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 1 5 [V] 7.9 A 01-Feb-2016 14_33 7.4 4 0.05 Voltage 0.04 0.03 6 7 9.1 3 5.2 8.4 2 0.01 4.6 3.6 1 0.02 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 22. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 1 ( etanol 1% npropanol 0,5% ) Tabel 19. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 1 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 Reten. Time [min] Area [mV.s] Height [mV] Area [%] Height [%] W05 [min] 3,57 4,186 0,29 0,7 0,3 0,18 4,587 3,601 0,319 0,6 0,3 0,16 5,233 1,267 0,182 0,2 0,2 0,17 7,393 340,929 50,478 54,2 53,9 0,11 7,907 261,535 41,411 41,6 44,2 0,1 8,387 14,309 0,633 2,3 0,7 0,43 9,11 3,594 0,377 0,6 0,4 0,15 Total 629,421 93,691 100 100 97 2) Standar A (Etanol 1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 2 [V] A 01-Feb-2016 14_10 7.3 Voltage 0.4 7.9 5 6 0.5 0.3 7 8 8.6 9.2 4 7.2 3 5.2 2 3.6 0.1 4.6 1 0.2 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 23. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 2 ( etanol 1% npropanol 0,5% ) Tabel 20. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 2 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 8 Reten. Time [min] Area [mV.s] Height [mV] Area [%] Height [%] W05 [min] 3.58 7.985 0.321 0.2 3.00E-02 0.33 4.557 7.595 0.409 0.2 3.80E-02 0.2 5.217 1.138 0.172 2.60E-02 1.60E-02 0.12 7.16 3.367 0.704 0.1 0.1 0.08 7.337 2189.616 502.064 49.3 47.2 0.07 7.857 2213.979 558.694 49.9 52.5 0.06 8.61 12.338 0.496 0.3 4.70E-02 0.38 9.18 3.315 0.363 0.1 3.40E-02 0.15 Total 4439.332 1063.222 100 100 98 3) Standar A (Etanol 1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 3 [V] 0.14 A 01-Feb-2016 13_39 Voltage 6 0.10 7.8 7.3 5 0.12 0.08 0.06 7 8 9 8.6 9.2 9.9 4 7.1 3 5.2 3.5 0.02 4.6 1 2 0.04 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 24. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 3 ( etanol 1% npropanol 0,5% ) Tabel 21. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 3 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3,543 1,489 0,216 0,1 0,1 0,12 4,58 7,506 0,397 0,7 0,2 0,2 5,22 1,107 0,174 0,1 0,1 0,15 7,113 1,506 0,316 0,1 0,1 0,08 7,287 588,673 132,412 53,8 52,2 0,07 7,787 476,686 119,129 43,5 46,9 0,06 8,59 12,353 0,606 1,1 0,2 0,33 9,167 2,643 0,26 0,2 0,1 0,24 9,903 2,805 0,364 0,3 0,1 0,14 Total 1094,769 253,874 100 100 99 4) Standar A (Etanol 1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 4 [V] A 01-Feb-2016 13_03 Voltage 7.7 7.2 5 6 0.6 0.4 7 8 9 8.2 9.1 9.7 4 3 5.2 7.0 2 4.6 3.6 1 0.2 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 25. Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 4 ( etanol 1% npropanol 0,5% ) Tabel 22. Data Kromatogram GC 1µl Standar A ulangan 4 ( etanol 1% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3,607 4,318 0,276 0,1 2,00E-02 0,24 4,597 8,036 0,416 0,1 3,10E-02 0,19 5,23 1,184 0,177 2,10E-02 1,30E-02 0,18 6,973 4,157 0,908 0,1 0,1 0,08 7,15 2822,873 655,684 50,2 48,7 0,07 7,69 2766,096 687,661 49,2 51,1 0,06 8,22 4,201 0,303 0,1 2,20E-02 0,22 9,077 4,126 0,264 0,1 2,00E-02 0,3 9,68 3,119 0,38 0,1 2,80E-02 0,15 Total 5618,11 1346,068 100 100 100 b) Standar B (Etanol 0,75% dan n-Propanol 0,5%) 1) Standar B (Etanol 0,75% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 1 [V] B 01-Feb-2016 15_23 5 7.4 7 8 9.1 9.9 4 7.2 3 5.2 3.6 1 0.1 2 0.2 4.6 Voltage 0.3 7.9 6 0.4 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 26. Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 1 ( etanol 0,75% n-propanol 0,5% ) Tabel 23. Data Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 1 ( etanol 0,75% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3.587 12.427 0.373 5.00E-01 1.00E-01 0.39 2 4.567 3.685 0.321 0.1 0.1 0.17 3 5.22 1.214 0.18 4.90E-02 3.00E-02 0.17 4 7.223 1.927 0.426 0.1 0.1 0.08 5 7.393 896.275 211.596 35.8 3.46E+01 0.07 6 7.907 1582.924 397.966 63.3 65.1 0.06 7 9.143 1.282 0.191 0.1 3.10E-02 0.16 8 9.867 1.744 0.261 0.1 4.30E-02 0.15 Total 2501.478 611.315 100 100 101 2) Standar B (Etanol 0,75% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 2 [V] B 01-Feb-2016 12_14 7.4 0.6 5 9.0 5.2 1 0.2 2 0.4 7.3 Voltage 8.1 3 4 0.8 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 27. Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 2 ( etanol 0,75% n-propanol 0,5% ) Tabel 24. Data Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 2 ( etanol 0,75% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 5,193 1,698 0,215 2,70E-02 1,50E-02 0,19 2 7,267 8,182 0,999 0,1 0,1 0,09 3 7,44 2236,038 531,012 36,2 37,9 0,07 4 8,14 3926,627 868,094 63,6 62 0,07 5 8,963 4,419 0,436 0,1 3,10E-02 0,13 Total 6176,963 1400,757 100 100 102 3) Standar B (Etanol 0,75% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 3 [V] B 01-Feb-2016 16_57 Voltage 7.5 8.1 4 5 0.04 0.03 2 3 5.2 3.6 0.01 4.6 1 0.02 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 28. Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 3 ( etanol 0,75% n-propanol 0,5% ) Tabel 25. Data Kromatogram GC 1µl Standar B ulangan 3 ( etanol 0,75% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,553 3,527 0,296 1,20E+00 4,00E-01 0,16 2 4,607 8,948 0,436 3,1 0,7 0,18 3 5,23 1,122 0,188 4,00E-01 3,00E-01 0,14 4 7,45 109,775 24,296 37,5 36,2 0,07 5 8,12 169,378 41,93 57,9 6,24E+01 0,06 Total 292,75 67,146 100 100 103 c) Standar C (Etanol 0,5% dan n-Propanol 0,5%) 1) Standar C (Etanol 0,5% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 1 [V] C 01-Feb-2016 11_50 Voltage 7.4 0.4 6 8.0 5 0.5 0.3 7 8 8.4 9.1 4 7.3 3 5.2 2 3.6 0.1 4.6 1 0.2 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 29. Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 1 ( etanol 0,5% npropanol 0,5% ) Tabel 26. Data Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 1 ( etanol 0,5% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 8 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3.61 9.212 0.252 2.00E-01 3.00E-02 0.47 4.59 3.916 0.326 0.1 3.90E-02 0.18 5.233 1.084 0.146 2.70E-02 1.80E-02 0.16 7.257 4.285 0.761 0.1 0.1 0.1 7.43 1366.407 315.351 33.9 3.81E+01 0.07 7.97 2628.776 509.794 65.2 61.6 0.08 8.413 13.896 0.681 0.3 1.00E-01 0.38 9.057 4.653 0.452 0.1 1.00E-01 0.14 Total 4032.229 827.761 100 100 104 2) Standar C (Etanol 0,5% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 2 [V] C 29-Jan-2016 17_46 5 8.5 7 0.8 7.8 8.1 4 7.6 3 5.3 3.6 1 0.2 2 6 0.4 4.8 Voltage 0.6 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 30. Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 2 ( etanol 0,5% npropanol 0,5% ) Tabel 27. Data Kromatogram GC 1µl Standar C ulangan 2 ( etanol 0,5% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3,63 13,887 0,413 1,00E-01 3,00E-02 0,28 4,75 9,284 0,431 0,1 3,10E-02 0,17 5,293 1,701 0,22 1,80E-02 1,60E-02 0,15 7,57 6,858 1,349 0,1 0,1 0,08 7,757 2465,604 455,013 26 3,26E+01 0,08 8,053 740,447 45,956 7,8 3,3 0,31 8,473 6256,007 892,073 65,9 6,39E+01 0,11 Total 9493,788 1395,456 100 1,00E+02 105 d) Standar D (Etanol 0,25% dan n-Propanol 0,5%) 1) Standar D (Etanol 0,25% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 1 [V] 6 D 01-Feb-2016 11_25 7.9 5 0.4 7.4 Voltage 0.6 7 8 9.1 9.8 4 3 5.1 7.2 2 4.3 3.4 1 0.2 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 31. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 1 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) Tabel 28. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 1 ( etanol 0,25% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3,4 3,637 0,273 1,00E-01 2,80E-02 0,2 4,29 18,573 3,886 0,4 4,00E-01 0,07 5,073 2,242 0,223 4,90E-02 2,30E-02 0,24 7,207 5,395 0,995 0,1 0,1 0,09 7,383 962,31 216,829 21,2 2,25E+01 0,07 7,92 3541,713 740,374 78 76,9 0,08 9,13 4,605 0,408 0,1 4,20E-02 0,14 106 2) Standar D (Etanol 0,25% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 2 [V] 8.3 6 D 29-Jan-2016 16_50 7.6 5 Voltage 0.10 4 3 5.2 7.4 2 4.6 3.6 1 0.05 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 32. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 2 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) Tabel 29. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 2 ( etanol 0,25% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,557 3,997 0,309 5,00E-01 2,00E-01 0,17 2 4,627 9,274 0,448 1,2 3,00E-01 0,19 3 5,237 1,214 0,203 2,00E-01 1,00E-01 0,14 4 7,43 2,39 0,357 0,3 0,2 0,11 5 7,607 194,345 40,643 24,7 2,30E+01 0,07 6 8,26 575,282 134,383 73,1 76,2 0,07 Total 786,503 176,343 100 1,00E+02 107 3) Standar D (Etanol 0,25% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 3 [V] D 03-Feb-2016 12_01 7.8 6 1.0 5 0.6 7.3 Voltage 0.8 8 9 9.0 9.7 7 8.1 4 7.1 3 5.2 2 3.5 0.2 4.5 1 0.4 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 33. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 3 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) Tabel 30. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 3 ( etanol 0,25% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3,537 10,309 0,412 1,00E-01 2,60E-02 0,27 4,543 8,013 0,423 0,1 2,70E-02 0,2 5,203 1,324 0,202 1,40E-02 1,30E-02 0,13 7,093 9,057 2,153 0,1 0,1 0,07 7,27 2090,278 404,906 22,1 2,59E+01 0,06 7,833 7096,778 1126,823 75 72,1 0,1 8,12 240,14 26,367 2,5 1,70E+00 0,16 8,993 1,239 0,208 1,30E-02 1,30E-02 0,14 9,743 5,107 0,508 0,1 3,20E-02 0,16 Total 9462,244 1562,002 100 100 108 4) Standar D (Etanol 0,25% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 4 [V] D 03-Feb-2016 13_12 7.8 6 1.0 5 0.6 7.2 Voltage 0.8 7 8 9.1 9.8 4 7.0 3 5.2 2 3.6 0.2 4.5 1 0.4 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 34. Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 4 ( etanol 0,25% npropanol 0,5% ) Tabel 31. Data Kromatogram GC 1µl Standar D ulangan 4 ( etanol 0,25% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 8 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3.56 9.511 0.383 1.00E-01 2.50E-02 0.31 4.55 8.586 0.435 1.00E-01 2.80E-02 0.2 5.213 1.654 0.228 1.70E-02 1.50E-02 0.15 7.013 10.605 2.379 0.1 0.2 0.07 7.193 2146.418 416.625 22.6 2.69E+01 0.06 7.753 7315.757 1127.172 77 72.8 0.1 9.073 6.525 0.379 0.1 2.40E-02 0.32 9.817 4.743 0.531 5.00E-02 3.40E-02 0.14 Total 9503.799 1548.132 100 1.00E+02 109 e) Standar E (Etanol 0,1% dan n-Propanol 0,5%) 1) Standar E (Etanol 0,1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 1 [V] E 29-Jan-2016 13_22 8.6 5 1.0 0.6 8 9 10 10.9 11.1 11.8 6 9.5 7 3 7.9 2 5.2 7.7 1 0.2 4.6 4 0.4 10.1 Voltage 0.8 0.0 0 2 4 6 8 10 Time 12 [min.] Gambar 35. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 1 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) Tabel 32. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 1 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 4,623 6,763 0,398 1,00E-01 3,10E-02 0,19 5,243 0,776 0,172 9,70E-03 1,30E-02 0,12 7,743 10,947 2,321 1,00E-01 2,00E-01 0,08 7,92 827,485 151,086 10,3 11,8 0,07 8,613 7142,576 1126,512 89,2 8,78E+01 0,09 9,47 4,577 0,287 0,1 2,20E-02 0,25 10,133 2,553 0,299 3,20E-02 2,30E-02 0,18 10,883 5,259 0,439 1,00E-01 3,40E-02 0,22 11,123 5,556 0,844 0,1 1,00E-01 0,08 11,763 2,93 0,202 3,70E-02 1,60E-02 0,2 Total 8009,423 1282,56 100 1,00E+02 110 2) Standar E (Etanol 0,1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 2 [V] E 29-Jan-2016 15_12 8.2 6 0.08 5 7 9.3 4 7.5 3 5.2 3.6 1 0.02 2 7.6 0.04 4.6 Voltage 0.06 0.00 0 2 4 6 8 10 Time 12 [min.] Gambar 36. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 2 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) Tabel 33. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 2 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3,573 1,413 0,169 2,00E-01 2,00E-01 0,12 4,567 7,681 0,404 8,00E-01 4,00E-01 0,19 5,21 1,09 0,184 1,00E-01 2,00E-01 0,12 7,45 1,335 0,279 0,1 0,3 0,08 7,627 100,652 22,851 11,1 2,25E+01 0,07 8,19 790,785 77,505 87,2 7,62E+01 0,17 9,25 3,422 0,381 4,00E-01 4,00E-01 0,14 Total 906,378 101,774 1,00E+02 1,00E+02 111 3) Standar E (Etanol 0,1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 3 [V] E 03-Feb-2016 09_52 8.2 4 0.10 0.06 3 Voltage 0.08 9.1 7.3 7.4 0.02 5 1 2 7.6 0.04 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 37. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 3 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) Tabel 34. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 3 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 7,253 1,319 0,381 2,00E-01 3,00E-01 0,06 2 7,393 1,075 0,267 2,00E-01 2,00E-01 0,07 3 7,57 79,516 17,586 1,26E+01 1,38E+01 0,07 4 8,207 545,569 108,602 86,5 85,4 0,08 5 9,073 3,305 0,301 0,5 2,00E-01 0,15 Total 630,784 127,136 100 1,00E+02 112 4) Standar E (Etanol 0,1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 4 [V] E 03-Feb-2016 10_17 0.10 4 5 9.9 7.4 1 7.6 0.05 9.1 2 Voltage 8.2 3 0.15 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 38. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 4 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) Tabel 35. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 4 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 7,427 1,601 0,302 2,00E-01 2,00E-01 0,08 2 7,6 117,149 22,761 1,15E+01 1,24E+01 0,08 3 8,237 891,059 158,911 8,72E+01 8,69E+01 0,09 4 9,08 6,786 0,359 0,7 0,2 0,32 5 9,853 5,27 0,539 0,5 3,00E-01 0,15 Total 1021,864 182,872 100 1,00E+02 113 5) Standar E (Etanol 0,1% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 5 [V] 1.0 5 E 03-Feb-2016 11_29 0.6 0.4 6 7 8.5 9.1 7.2 2 5.2 4.6 1 0.2 3 7.4 4 Voltage 7.9 0.8 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 39. Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 5 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) Tabel 36. Data Kromatogram GC 1µl Standar E ulangan 5 ( etanol 0,1% n-propanol 0,5% ) 1 2 3 4 5 6 7 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 4,627 3,691 0,33 1,00E-01 3,10E-02 0,17 5,24 0,783 0,141 1,60E-02 1,30E-02 0,13 7,183 6,609 1,36 1,00E-01 1,00E-01 0,08 7,36 507,222 114,543 10,3 10,7 0,07 7,883 4376,673 956,451 89,1 8,90E+01 0,07 8,52 14,919 0,983 0,3 1,00E-01 0,21 9,137 3,045 0,355 1,00E-01 3,30E-02 0,13 Total 4912,944 1074,161 1,00E+02 1,00E+02 114 f) Standar F (Etanol 0,05% dan n-Propanol 0,5%) 1) Standar F (Etanol 0,05% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 1 [V] F 29-Jan-2016 15_40 8.5 8 0.8 11 12 10 9.9 11.1 9 9.1 10.6 6 7 8.1 8.3 7.6 4 7.8 5 3 5.2 3.6 1 0.2 2 0.4 4.6 Voltage 0.6 0.0 0 2 4 6 8 10 Time 12 [min.] Gambar 40. Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 1 ( etanol 0,05% n-propanol 0,5% ) Tabel 37. Data Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 1 ( etanol 0,05% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,597 13,825 0,395 3,00E-01 4,30E-02 0,36 2 4,64 8,147 0,41 2,00E-01 4,50E-02 0,19 3 5,243 0,801 0,15 1,50E-02 1,60E-02 0,13 4 7,607 5,773 1,182 0,1 0,1 0,08 5 7,787 175,985 39,161 3,3 4,30E+00 0,07 6 8,083 67,133 4,445 1,3 5,00E-01 0,3 7 8,27 29,802 4,022 6,00E-01 4,00E-01 0,14 8 8,467 5054,689 862,545 9,41E+01 9,44E+01 0,07 9 9,147 5,213 0,364 0,1 4,00E-02 0,31 10 9,87 2,486 0,299 4,60E-02 3,30E-02 0,15 11 10,62 3,225 0,405 0,1 4,40E-02 0,13 12 11,117 2,527 0,443 4,70E-02 4,80E-02 0,07 Total 5369,605 913,822 100 100 115 2) Standar F (Etanol 0,05% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 2 [V] 6 F 02-Feb-2016 10_36 7.9 7 8 9.2 3 7.2 2 5.2 4.6 1 0.1 8.7 0.2 7.4 4 7.6 5 Voltage 0.3 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 41. Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 2 ( etanol 0,05% n-propanol 0,5% ) Tabel 38. Data Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 2 ( etanol 0,05% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 4.607 3.421 0.304 1.00E-01 1.00E-01 0.17 2 5.23 0.706 0.132 2.20E-02 3.20E-02 0.12 3 7.203 4.643 0.826 1.00E-01 2.00E-01 0.09 4 7.387 131.515 22.662 4.10E+00 5.60E+00 0.09 5 7.553 54.896 8.482 1.7 2.10E+00 0.11 6 7.893 2988.182 374.919 93.4 9.19E+01 0.15 7 8.67 12.354 0.509 4.00E-01 1.00E-01 0.4 8 9.217 2.894 0.325 1.00E-01 1.00E-01 0.14 Total 3198.611 408.159 100 1.00E+02 116 3) Standar F (Etanol 0,05% dan n-Propanol 0,5%) Pengulangan 3 [V] F 29-Jan-2016 12_58 8.5 6 1.0 Voltage 0.8 0.6 9.7 11.2 8 9 7 8.9 3 5.2 7.6 4 7.8 5 2 3.6 0.2 4.6 1 0.4 0.0 0 2 4 6 8 10 Time 12 [min.] Gambar 42. Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 3 ( etanol 0,05% n-propanol 0,5% ) Tabel 39. Data Kromatogram GC 1µl Standar F ulangan 3 ( etanol 0,05% n-propanol 0,5% ) Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,57 4,418 0,327 1,00E-01 2,60E-02 0,17 2 4,597 3,533 0,332 4,00E-02 2,70E-02 0,16 3 5,237 1,216 0,184 1,40E-02 1,50E-02 0,17 4 7,637 11,702 2,417 0,1 0,2 0,08 5 7,82 326,148 69,645 3,7 5,60E+00 0,08 6 8,49 7849,002 1126,824 89,7 9,01E+01 0,09 7 8,873 540,664 50,276 6,20E+00 4,00E+00 0,18 8 9,713 5,377 0,499 1,00E-01 4,00E-02 0,16 9 11,153 8,295 0,645 0,1 1,00E-01 0,07 Total 8750,355 1251,149 1,00E+02 1,00E+02 117 Lampiran 8. Perhitungan Kurva Standar Etanol dalam penentuan Sisa Pelarut Etanol (Standardisasi Ekstrak Kental) Perhitungan kurva Standar Data kromatogram yang telah didapatkan selanjutnya diolah untuk mengetahui rasio perbandingan luas area etanol dengan n-propanol dengan rumus: Rasio perbandingan = Dengan perhitungan tertera pada tabel 40. Tabel 40. Rasio Perbandingan luas area etanol dengan n-propanol standar No 1 2 3 4 5 6 Standar A A A B B B C C D D D D E E E E E F F F Kadar Etanol 1% 0,75% 0,50% 0,25% 0,10% 0,05% Waktu Retensi Etanol Luas Area Etanol Kadar n-prop 7,337 7,287 7,150 7,440 7,450 7,337 7,430 7,757 7,383 7,607 7,270 7,193 7,920 7,627 7,570 7,600 7,36 7,510 7,387 7,82 2189,616 588,673 2822,873 2236,038 109,775 1392,189 1366,407 2465,604 962,310 194,345 2090,278 2146,418 827,485 100,652 79,516 117,149 507,222 587,091 131,515 326,148 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 118 Waktu Retens i nprop 7,857 7,787 7,690 8,140 8,120 7,877 7,970 8,473 7,920 8,260 7,833 7,753 8,613 8,190 8,207 8,237 7,883 8,157 7,893 8,49 Luas Area n-prop Rasio 2213,979 476,686 2766,096 3926,627 169,378 1881,395 2628,776 6256,007 3541,713 575,282 7096,778 7315,757 7142,576 790,785 545,569 891,059 4376,673 11231,451 2988,182 7849,002 0,989 1,235 1,021 0,569 0,648 0,740 0,520 0,394 0,272 0,338 0,295 0,293 0,116 0,127 0,146 0,131 0,116 0,052 0,044 0,042 RataRata 1,081 0,694 0,457 0,299 0,127 0,046 Kurva Standar Etanol Kemudian melalui perhitungan rasio tersebut dilanjutkan dengan pembuatan kurva standar Rasio Vs Konsentrasi etanol, dengan rasio sebagai sumbu y dan konsentrasi sebagai sumbu x. Tabel 41. Tabel Konsentrasi dan Rasio Perbandingan Konsentrasi Rasio Etanol (x) (y) 1% 1,081 0,75 % 0,694 0,5 % 0,457 0,25 % 0,299 0,1 % 0,127 0,05 % 0,046 Kurva Standar Etanol 1.200 1.000 Rasio 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 0 0.2 0.4 0.6 Konsentrasi Gambar 43. Kurva Standar Sisa Pelarut Etanol 119 0.8 1 1.2 Penentuan Persamaan Garis Regresi Linier Tabel 42. Perhitungan Persamaan Regresi Konsentrasi Etanol % (X) 1,000 0,750 0,500 0,250 0,100 0,050 2,650 7,023 No. 1 2 3 4 5 6 Σ Σ2 Rasio (Y) 1,081 0,694 0,457 0,299 0,127 0,046 2,705 7,317 X2 Y2 XY 1,000 0,563 0,250 0,063 0,010 0,003 1,888 3,563 1,170 0,482 0,209 0,090 0,016 0,002 1,968 3,873 1,081 0,521 0,228 0,075 0,013 0,002 1,920 3,688 a. Menentukan persamaan garis regresi y = bx + a Menentukan a, menggunakan rumus berikut: a= a= )( (( ( ( )) (( )( )) ( ) ( )) ) a = 0,0039 Menentukan b, menggunakan rumus berikut: b= b= ( ( )) (( ( ( )( )) ( )) ) ( ) b = 1,0119 Sehingga persamaan garis regresi menjadi Y = 1,0119x + 0,0039 ...(5) b. Uji signifikansi garis regresi (r) r= r= r= √( ( ( ( ) (( )) ( ) ( )( ( ( ))) )) ( ) ) ) √ ( ) √ r = 0,9905 120 Lampiran 9. Data Kromatogram Pengukuran Sampel dalam penentuan Sisa Pelarut Etanol (Standardisasi Ekstrak Kental) Pengukuran Sisa Pelarut Menggunakan GC a) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 30% 1) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 30% Pengulangan 1 [V] Secang 30% 04-Feb-2016 14_08 Voltage 8.0 6 0.15 0.10 7 8 9 8.3 9.1 9.8 4 5 7.3 7.5 3 5.2 2 4.5 3.5 1 0.05 0.00 0 2 4 6 8 Time Gambar 44. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 1 Tabel 43. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 1 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,54 1,69 0,178 2,00E-01 1,00E-01 0,13 2 4,503 6,237 0,38 8,00E-01 2,00E-01 0,21 3 5,197 1,407 0,191 2,00E-01 1,00E-01 0,15 4 7,297 0,969 0,201 1,00E-01 1,00E-01 0,08 5 7,47 7,129 1,698 0,9 1,00E+00 0,07 6 7,963 753,612 165,649 97,1 9,80E+01 0,07 7 8,343 1,121 0,162 1,00E-01 1,00E-01 0,17 8 9,083 2,922 0,361 4,00E-01 2,00E-01 0,2 9 9,833 1,151 0,193 1,00E-01 1,00E-01 0,13 Total 776,237 169,013 1,00E+02 1,00E+02 121 10 [min.] 2) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 30% Pengulangan 2 [V] Secang 30% 04-Feb-2016 14_59 Voltage 7.9 6 0.15 0.10 7 8 8.4 9.1 4 5 7.3 7.4 3 5.2 2 4.5 3.6 1 0.05 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 45. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 2 Tabel 44. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 2 1 2 3 4 5 6 7 8 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 3.59 12.428 0.345 1.90E+00 2.00E-01 0.41 4.55 3.511 0.326 5.00E-01 2.00E-01 0.16 5.2 1.196 0.169 2.00E-01 1.00E-01 0.16 7.253 0.935 0.209 1.00E-01 1.00E-01 0.08 7.43 6.464 1.562 1 1.00E+00 0.07 7.913 632.63 161.272 95.6 9.81E+01 0.06 8.39 0.907 0.126 1.00E-01 1.00E-01 0.13 9.133 3.381 0.373 5.00E-01 2.00E-01 0.15 Total 661.452 164.382 1.00E+02 1.00E+02 122 3) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 30% Pengulangan 3 [V] 0.30 Secang 30% 04-Feb-2016 15_24 8.2 4 0.25 Voltage 0.20 0.15 4.6 0.05 5 9.1 1 7.4 2 7.6 3 0.10 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 46. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 3 Tabel 45. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 30% ulangan 3 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 4,613 3,398 0,316 2,00E-01 1,00E-01 0,17 2 7,42 1,066 0,226 1,00E-01 1,00E-01 0,09 3 7,59 13,504 2,616 9,00E-01 9,00E-01 0,07 4 8,2 1537,134 283,175 9,86E+01 9,88E+01 0,08 5 9,073 3,242 0,365 0,2 1,00E-01 0,14 Total 1558,344 286,698 100 1,00E+02 123 b) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 50% 1) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 50% Pengulangan 1 [V] Secang 50% 03-Feb-2016 15_35 Voltage 7.7 5 0.6 0.4 6 7 8.3 9.0 2 5.2 7.0 3 7.2 4 1 4.6 0.2 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 47. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 1 Tabel 46. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 1 1 2 3 4 5 6 7 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 4,637 3,504 0,325 1,00E-01 4,70E-02 0,16 5,247 0,891 0,156 3,10E-02 2,30E-02 0,15 7,037 4,571 0,678 2,00E-01 1,00E-01 0,13 7,21 60,443 10,366 2,10E+00 1,50E+00 0,09 7,727 2773,993 674,3 97,4 9,82E+01 0,07 8,29 2,539 0,205 0,1 3,00E-02 0,31 9,04 2,984 0,384 1,00E-01 1,00E-01 0,13 Total 2848,925 686,414 1,00E+02 1,00E+02 124 2) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 50% Pengulangan 2 [V] Secang 50% 03-Feb-2016 16_01 Voltage 7.8 6 0.15 0.10 8.9 7 7.2 4 7.3 5 3 5.2 2 4.6 3.6 1 0.05 0.00 0 2 4 6 8 Time Gambar 48. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 2 Tabel 47. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 2 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,637 3,641 0,133 5,00E-01 1,00E-01 0,11 2 4,64 5,262 0,378 7,00E-01 2,00E-01 0,18 3 5,247 1,01 0,174 1,00E-01 1,00E-01 0,15 4 7,157 1,255 0,271 2,00E-01 2,00E-01 0,08 5 7,33 16,317 3,881 2,1 2,30E+00 0,07 6 7,837 744,387 162,56 96 9,69E+01 0,07 7 8,92 3,24 0,393 4,00E-01 2,00E-01 0,13 Total 775,111 167,79 1,00E+02 1,00E+02 125 10 [min.] 3) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 50% Pengulangan 3 [V] Secang 50% 04-Feb-2016 10_59 4 0.5 Voltage 7.7 0.4 0.3 5 6 9.2 4.5 0.1 8.7 1 7.0 2 7.2 3 0.2 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 49. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 3 Tabel 48. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 50% ulangan 3 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 4,537 6,459 0,842 3,00E-01 2,00E-01 0,11 2 7,01 5,07 0,708 2,00E-01 1,00E-01 0,1 3 7,187 47,068 9,343 2,20E+00 1,70E+00 0,07 4 7,697 2079,754 525,646 9,63E+01 9,78E+01 0,06 5 8,65 15,768 0,602 0,7 1,00E-01 0,41 6 9,18 6,074 0,521 0,3 1,00E-01 0,17 Total 2160,192 537,663 1,00E+02 1,00E+02 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] 1 4,537 6,459 0,842 3,00E-01 2,00E-01 2 7,01 5,07 0,708 2,00E-01 1,00E-01 3 7,187 47,068 9,343 2,20E+00 1,70E+00 4 7,697 2079,754 525,646 9,63E+01 9,78E+01 5 8,65 15,768 0,602 0,7 1,00E-01 6 9,18 6,074 0,521 0,3 1,00E-01 Total 2160,192 537,663 1,00E+02 1,00E+02 126 c) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 70% 1) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 70% Pengulangan 1 [V] Secang 70% 04-Feb-2016 11_23 4 0.5 Voltage 7.7 0.4 0.3 5 6 7 8.5 9.1 9.8 5.2 0.1 7.0 7.2 1 2 3 0.2 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 50. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 1 Tabel 49. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 1 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 5,213 4,262 0,23 2,00E-01 4,40E-02 0,39 2 7,04 2,96 0,616 2,00E-01 1,00E-01 0,08 3 7,213 19,025 4,183 1,00E+00 8,00E-01 0,07 4 7,713 1874,122 515,93 9,74E+01 9,88E+01 0,06 5 8,493 9,751 0,43 0,5 1,00E-01 0,39 6 9,07 8,216 0,455 0,4 1,00E-01 0,31 7 9,837 6,01 0,588 3,00E-01 1,00E-01 0,15 Total 1924,347 522,431 1,00E+02 1,00E+02 127 2) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 70% Pengulangan 2 [V] Secang 70% 04-Feb-2016 12_12 0.3 8.2 7 7.1 4 7.3 5 3 5.2 3.6 1 0.1 2 0.2 4.6 Voltage 7.8 6 0.4 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 50. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 2 Tabel 49. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 2 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,65 11,21 0,211 6,00E-01 4,50E-02 0,65 2 4,59 2,815 0,131 1,00E-01 2,80E-02 0,22 3 5,183 1,42 0,208 1,00E-01 4,50E-02 0,18 4 7,11 2,39 0,498 1,00E-01 1,00E-01 0,08 5 7,283 48,592 12,157 2,4 2,60E+00 0,06 6 7,793 1928,546 453,646 96,5 9,71E+01 0,07 7 8,153 3,349 0,343 2,00E-01 1,00E-01 0,15 Total 1998,321 467,194 1,00E+02 1,00E+02 128 3) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 70% Pengulangan 3 [V] Secang 70% 04-Feb-2016 12_49 7.9 6 0.4 8.9 7 7.2 4 7.3 5 3 5.2 3.6 1 0.1 2 0.2 4.5 Voltage 0.3 0.0 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 52. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan3 Tabel 51. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 3 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3,583 7,182 0,338 3,00E-01 1,00E-01 0,33 2 4,533 8,044 0,43 4,00E-01 1,00E-01 0,2 3 5,207 1,003 0,167 4,80E-02 3,80E-02 0,13 4 7,16 3,137 0,54 1,00E-01 1,00E-01 0,1 5 7,337 21,417 4,345 1 1,00E+00 0,07 6 7,857 2065,412 427,284 97,9 9,86E+01 0,08 7 8,943 2,888 0,379 1,00E-01 1,00E-01 0,12 Total 2109,084 433,482 1,00E+02 1,00E+02 129 4) Pengukuran ekstrak kental secang etanol 70% Pengulangan 4 [V] Secang 70% 04-Feb-2016 15_57 0.15 7 8 9.2 9.9 4 5 7.4 7.6 3 5.2 3.6 1 0.05 2 0.10 4.6 Voltage 8.2 6 0.20 0.00 0 2 4 6 8 Time 10 [min.] Gambar 53. Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 4 Tabel 52. Data Kromatogram GC 1µl Ekstrak Secang Etanol 70% ulangan 4 Reten. TimeArea [min][mV.s]Height [mV]Area [%] Height [%] W05 [min] 1 3.59 11.897 0.346 9.00E-01 1.00E-01 0.4 2 4.56 3.746 0.327 3.00E-01 1.00E-01 0.18 3 5.207 1.055 0.168 1.00E-01 1.00E-01 0.13 4 7.423 2.291 0.404 2.00E-01 2.00E-01 0.1 5 7.597 15.477 2.758 1.1 1.20E+00 0.07 6 8.21 1317.265 234.122 96.4 9.79E+01 0.08 7 9.15 10.613 0.501 8.00E-01 2.00E-01 0.34 8 9.863 4.303 0.462 3.00E-01 2.00E-01 0.14 Total 1366.647 239.087 1.00E+02 1.00E+02 130 Lampiran 10.Perhitungan Sisa Pelarut Etanol dalam sampel (Standardisasi Ekstrak Kental) Perhitungan Sisa Pelarut Etanol dalam Ekstrak Data kromatogram yang telah didapatkan selanjutnya diolah untuk mengetahui rasio perbandingan luas area etanol dengan n-propanol dengan rumus: Rasio perbandingan = Setelah rasio diketahui kemudian nilai rasio dimasukkan kedalam persamaan regresi linier yang telah dihitung sebelumnya, yakni: Y = 1,0119x + 0,0039 ..... (5) Sehingga, X = .... (6) Dimana y merupakan lambang rasio dan x merupakan lambang konsentrasi etanol. Perhitungan dan hasil tertera pada Tabel 52. Tabel 53. Kadar Sisa Pelarut Etanol ekstrak Kental Secang 7,4700 Luas Area Etanol 7,1290 Kadar n-prop % 0,5000 Kadar Etanol Rata2 0,0095 Kadar Etanol % 0,0134 7,4300 6,4640 632,6300 0,0102 0,0141 0,013% 7,5900 8,2000 1537,1340 0,0088 0,0127 0,5000 7,7270 2773,9930 0,0218 0,0254 16,3170 0,5000 7,8370 744,3870 0,0219 0,0255 7,1870 47,0680 0,5000 7,6970 2079,7540 0,0226 0,0262 7,2130 19,0250 0,5000 7,7130 1874,1220 0,0102 0,0141 7,2830 48,5920 0,5000 7,7930 1928,5460 0,0252 0,0287 7,3370 21,4170 0,5000 7,8570 2065,4120 0,0104 0,0143 7,5970 15,4770 0,5000 8,2100 1317,2650 0,0117 0,0156 N Ekstrak o Waktu Retensi Secang 30% 1 2 3 Secang 50% Secang 70% Waktu Retensi Luas Area n-Prop Rasio 7,9630 753,6120 0,5000 7,9130 13,5040 0,5000 7,2100 60,4430 7,3300 131 0,026% 0,018% Lampiran 11. Kandungan Fenol Total dalam Ekstrak Kental 1. Pengukuran λ maksimal Gambar 53. Grafik Spektroskopi UV-Vis Pengukuran λ Maksimum 132 2. Pembuatan kurva Standar Kurva Standar Etanol Kemudian melalui perngukuran absorbansi standar menggunakan spektroskopi UV-Vis didapatkan data serapan dan konsentrasi seperti pada Tabel 54. Dilanjutkan dengan pembuatan kurva standar serapan Vs Konsentrasi asam galat, dengan serapan sebagai sumbu y dan konsentrasi sebagai sumbu x. Tabel 54. Absorbansi Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kental Serapan Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Serapan Rata-rata 40 ppm 0,312 0,32 0,319 0,317 60 ppm 0,546 0,541 0,53 0,539 80 ppm 0,699 0,68 0,685 0,688 100 ppm 0,892 0,83 0,855 0,859 120 ppm 0,978 0,966 0,957 0,967 Konsentrasi KURVA STANDAR ASAM GALAT 1.200 SERAPAN 1.000 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 0 20 40 KONSENTRASI 60 80 100 Gambar 18. Kurva Standar Asam Galat untuk Ekstrak Kental 133 120 140 Penentuan Persamaan Garis Regresi Linier Tabel 55. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Linier Asam Galat untuk Ekstrak Kental Konsentrasi Absorbansi (Y) X2 (ppm)(X) 1 40 0,317 1600 2 60 0,539 3600 3 80 0,688 6400 4 100 0,859 10000 5 120 0,967 14400 Σ 400 3,370 36000 Σ2 160000 11 1296000000 a. Menentukan persamaan garis regresi y = bx + a No. Menentukan a, menggunakan rumus berikut: a= a= )( (( )) (( )( )) ( ) ( ( ( )) ) a = 0,0026 Menentukan b, menggunakan rumus berikut: b= ( ( )) (( ( ( )) ( ( b= )( )) ) ) b = 0,0081 Sehingga persamaan garis regresi menjadi Y = 0,0081x + 0,0026 ..... (7) b. Uji signifikansi garis regresi (r) r= r= r= √( ( ( ( ) (( )) ( ) ( )( ( ( ))) )) ( ) ) ) √ ( ) √ r = 0,9934 134 Y2 XY 0,100 0,291 0,473 0,738 0,935 2,537 6 12,68 32,34 55,04 85,90 116,04 302,00 91204 3. Perhitungan Kadar Fenolik Total Setelah Serapan ekstrak diketahui kemudian nilai serapan dimasukkan kedalam persamaan regresi linier (6) yang telah dihitung sebelumnya, yakni: Y = 0,0081x + 0,026 ..... (7) Sehingga, X= ..... (8) Dimana y merupakan lambang serapan dan x merupakan lambang konsentrasi asam galat. Perhitungan dan hasil tertera pada Tabel 56. Tabel 56. Perhitungan Kadar Fenolik Total Ekstrak Kental Secang Konsentrasi Sampel Sampel (ppm) 30% 50% 70% 200 200 200 200 200 200 200 200 200 Pengulangan Serapan 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0,655 0,661 0,688 0,663 0,700 0,705 0,960 1,027 1,047 135 Kadar Fenol Dalam Ekstrak (ppm ) 77,654 78,395 81,728 78,642 83,210 83,827 115,309 123,580 126,049 mg GAE /g Ekstrak 388,272 391,975 408,642 393,210 416,049 419,136 576,543 617,901 630,247 mg GAE /g Ekstrak (rata rata) Standar Deviasi 396,296 ±10,9 409,465 ±14,338 608,230 ±28,39 Lampiran 12. Standarisasi Ekstrak Kering Organoleptik 1. Ekstak Secang 70% + Laktosa 4. Ekstak Secang 70% + Amrotab 2. Ekstak Secang 70% + Dekstrin 5. Ekstak Secang 70% + Maltodekstrin 3. Ekstak Secang 70% + Corn Starch 6. Ekstak Secang 70% + Avicel Ph 102 Gambar 54. Ekstrak Kering Secang dengan Filler (1) Laktosa, (2)Dekstrin, (3)Corn Starch, (4) Amrotab, (5)Maltodekstrin, (6)Avicel Ph 102 136 Lampiran 13. Perhitungan Kadar Air Ekstrak Kering Tabel 57. Perhitungan Kadar Air Ekstrak Kering Secang Laktosa Dekstrin Corn Starch Amrotab Maltodekstrin Avicel Ph 102 Pengulangan Kadar Air 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 3,47% 8,33% 5,52% 5,00% 5,15% 5,91% 3,38% 8,67% 6,33% 4,17% 5,56% 4,58% 3,13% 3,95% 7,33% 5,77% 9,68% 9,09% 137 Rata-Rata Kadar Air Standar Deviasi 5,77% 2,44% 5,35% 0,49% 6,13% 2,65% 4,77% 0,71% 4,80% 2,23% 8,18% 2,11% Lampiran 14. Perhitungan Sifat Alir Ekstrak Kering Perhitungan parameter standar sifat alir menggunakan rumus sebagai berikut: Tan α = Dimana H merupakan ketinggian serbuk dijatuhkan dan D merupakan diameter rata-rata dari serbuk yang jatuh sehingga akan diketahui sudut diam αnya. Perhitungan sifat alir sangat dekat korelasinya dengan sudut diam, berikut korelasinya: sudut diam <25 ° menyatakan sifat alir sangat baik, sudut diam 25 °30° menyatakan sifat alir baik, sudut diam 30 ° - 40° menyatakan sifat alir cukup, dan sudut diam > 40 ° menyatakan sifat alir buruk. Perhitungan sifat alir dapat dilihat dalam tabel dibawah ini. Tabel 58. Perhitungan Sifat alir/ Sudut diam Sampel Laktosa Dekstrin Corn Starch Amrotab Maltodekstrin Avicel PH 102 Ulangan Diameter (Cm) ̅ D1 D2 H (Cm) Sudut Diam RataRata Standar Deviasi Sifat Alir 1 4 3 3,5 0,6 18,92° 2 2,5 3,3 2,9 0,4 15,42° 3 2 2,5 2,25 0,5 23,96° Mudah Mengalir 1 2,5 3,5 3 0,4 14,93° Mudah Mengalir 2 2,5 2,5 2,5 0,4 17,74° 3 3 3,3 3,15 0,3 10,78° Mudah Mengalir 1 2 3,8 2,9 0,5 19,03° Mudah Mengalir 2 3,2 3,5 3,35 0,4 13,43° 3 3,2 3,2 3,2 0,4 14,04° Mudah Mengalir 1 2,5 3 2,75 0,3 12,31° Mudah Mengalir 2 3 3,3 3,15 0,2 7,24° 3 2,5 2,5 2,5 0,4 17,74° Mudah Mengalir 1 2,5 3 2,75 0,4 16,22° Mudah Mengalir 2 2,5 2,5 2,5 0,5 21,8° 3 2,5 3 2,75 0,4 16,22° Mudah Mengalir 1 3 2,5 2,75 0,6 23,57° Mudah Mengalir 2 2,5 2,5 2,5 0,65 27,47° 3 3 3 3 0,5 18,43° 138 Mudah Mengalir 19,433° 14,483° 15,500° 12,430° 18,080° 23,157° 4,293° 3,501° 3,072° 5,251° 3,222° 4,534° Mudah Mengalir Mudah Mengalir Mudah Mengalir Mudah Mengalir Mudah Mengalir Mudah Mengalir Mudah Mengalir Lampiran 15. Kandungan Total Fenol Ekstrak Kering 1. Pembuatan kurva Standar Kurva Standar Etanol Kemudian melalui perngukuran absorbansi standar menggunakan spektroskopi UV-Vis didapatkan data serapan dan konsentrasi seperti pada Tabel 11. Dilanjutkan dengan pembuatan kurva standar serapan Vs Konsentrasi asam galat, dengan serapan sebagai sumbu y dan konsentrasi sebagai sumbu x. Tabel 11. Absorbansi Standar Asam Galat Untuk Ekstrak Kering Konsentrasi 140 PPM 120 PPM 100 PPM 80 PPM 60 PPM 40 PPM 1 0,7020 0,5970 0,4580 0,3640 0,2610 0,1910 Serapan 2 0,7130 0,6030 0,4620 0,3700 0,2550 0,1980 3 0,7620 0,5990 0,4700 0,3670 0,2700 0,1890 Serapan Rata-rata 0,7257 0,5997 0,4633 0,3670 0,2620 0,1927 SD 0,0319 0,0031 0,0061 0,0030 0,0075 0,0047 STANDAR ASAM GALAT SERAPAN 0.8000 0.6000 0.4000 0.2000 0.0000 0 20 40 60 80 100 120 KONSENTRASI Gambar 19. Kurva Standar Asam Galat untuk Ekstrak Kering 139 140 160 Penentuan Persamaan Garis Regresi Linier Tabel 59. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Linier Asam Galat untuk Ekstrak Kering 1 2 3 4 5 6 Σ Konsentrasi (ppm)(X) 40 60 80 100 120 140 540 Σ2 291600 No. Absorbansi (Y) X2 Y2 XY 0,193 0,262 0,367 0,463 0,600 0,726 2,610 1600 3600 6400 10000 14400 19600 55600 0,037 0,069 0,135 0,215 0,360 0,527 1,341 7,71 15,72 29,36 46,33 71,96 101,60 272,68 7 3091360000 2 74354 a. Menentukan persamaan garis regresi y = bx + a Menentukan a, menggunakan rumus berikut: )( (( a= )) (( )( )) ( ) ( ( ( a= )) ) a = - 0,0502 Menentukan b, menggunakan rumus berikut: b= b= ( ( )) (( ( ( )) ( )( )) ) ( ) b = 0,0054 Sehingga persamaan garis regresi menjadi Y = 0,0054x - 0,0502 ..... (9) b. Uji signifikansi garis regresi (r) r= r= r= √( ( ( ( ) (( )) ( ) ( )( ( ( ))) )) ( ) ) ) √ ( ) √ r = 0,9947 140 4. Perhitungan Kadar Fenolik Total Setelah Serapan ekstrak diketahui kemudian nilai serapan dimasukkan kedalam persamaan regresi linier (9) yang telah dihitung sebelumnya, yakni: Y = 0,0054x - 0,0502 ..... (9) Sehingga, X= ..... (10) Dimana (y) merupakan lambang serapan dan (x) merupakan lambang konsentrasi asam galat. Perhitungan dan hasil tertera pada Tabel 60. Tabel 60. Perhitungan Kadar Fenolik Total Ekstrak Kering Secang Sampel Laktosa Dekstrin Corn Starch Amrotab Maltodekstrin Avicel PH 102 Konsentrasi Sampel(ppm) Pengulangan Serapan 200 1 0,564 Kadar Fenol Dalam Ekstrak (ppm ) 113,74 200 2 0,484 98,93 494,63 200 3 0,528 107,07 535,37 200 1 0,27 59,30 296,48 200 2 0,28 61,15 305,74 200 3 0,256 56,70 283,52 200 1 0,356 75,22 376,11 200 2 0,351 74,30 371,48 200 3 0,305 65,78 328,89 200 1 0,325 69,48 347,41 200 2 0,34 72,26 361,30 200 3 0,341 72,44 362,22 200 1 0,301 65,04 325,19 200 2 0,413 85,78 428,89 200 3 0,312 67,07 335,37 200 1 0,524 106,33 531,67 200 2 0,526 106,70 533,52 200 3 0,49 100,04 500,19 141 mg GAE /g Ekstrak mg GAE /g Ekstrak (rata rata) Standar Deviasi 532,90 37,10 295,25 11,16 358,83 26,03 356,98 8,30 363,15 57,16 521,79 18,73 568,70
