Uploaded by Abdul Aziz

PCR

advertisement
BIOKIMIA ANALISIS DAN KETEKNIKAN
REAL TIME PCR
ABDUL AZIZ
G851190021
SEKOLAH PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2019
REAL TIME PCR
1 Instrumen PCR 2
Dogma Sentral
3
Mekanisme
perbanyakan DNA
4
Tahap PCR
5
Aplikasi PCR
2
PCR (POLIMERASE CHAIN REACTION)
Amplifikasi pita DNA yang dilakukan diluar sel makhluk hidup
Fungsi utama: untuk memperbanyak DNA target dalam waktu
relatif cepat
Instrumen
Aplikasi
sepasang primer
template/cetakan
enzim Taq DNA poly
merase
dNTP dan buffer
isolasi gen
DNA sequencing
Forensik
diagnosa penyakit.
Teknik ini diperkenalkan oleh Kary Mullis pada tahun 1983 dan ia
memperoleh hadiah Nobel pada tahun 1994 berkat temuannya.
Dogma sentral aliran informasi genetik
Teknik PCR, berdasarkan mekanisme replikasi DNA
pada semua sel (in vivo)
RT PCR
Pada real time PCR hasil amplifikasi melalui
metode real time PCR terukur secara “real time”
seiring dengan berlangsungnya reaksi PCR
STEP 3
DATA
ANALISIS
STEP 2
REAKSI
PCR
STEP 1
PRIMER
DESIGN
Tahap PCR
1. Denaturasi
2. Annealing
3. Perpanjangan
(extention)
INDIKATOR
-% GC (>50%)
-Panjang Primer (15-30 pb)
- Hindari self dimmer, pair dimmer, hairpin
-Temperatur penempelan primer tidak jauh berbeda
Aplikasi
-Forensik
-dna Sequencing
-diagnosa penyakit
RT-PCR
Komponen reaksi PCR
1
DNA TARGET
DNA sampel
mengandung DNA
target
Denaturasi
2
PRIMER
Oligonukleotida
komplemen DNA
target
Annealing
5
dNTP
Nukleotida untuk
perpanjangan
utas DNA
3
DNA Polimerase
Enzim yang cukup
stabil dalam
pemanasan
Extention
6
Fluorescent
Detector
Ethidium bromide
4
BUFFER
MgCl2, Tris HCL dan
KCL
Monitoring
2010
Tahap RT PCR
Annealing
Denaturasi
1,5 menit 50 oC
5 menit 95 oC
rt PCR
1-10 menit 72
oC
Extention
Analisa
Denaturasi
Annealing
Pemanjangan
Pemanjangan
Proses amplifikasi DNA target
Elektroforegram hasil PCR
1
2
3
23.1 kb
9.4 kb
6.5 kb
2,6 kb
4.3 kb
2.3 kb
1
2.0 kb 3
2
0,2 kb
More Cycles = More DNA
Jumlah siklus
Ukuran
Marker 0 10 15 20 25 30
Aplikasi RT-PCR
01
Isolasi Gen
• DNA Makhluk hidup
cukup besar
• DNA manusia -/+ 3 miliar
basa
• Isolasi gen penghasil
Insulin
• menyisipkannya gen
insulin ke sel bakteri
02
DNA Sequencing
• Melihat urutan basa
suatu DNA
• Identifikasi organisme
hasil isolasi
• Identifikasi tingkat
kekerabatan organisme
03
04
Forensik
• Identifikasi korban
atau pelaku
kejahatan
• Penatibus sit amet
• Lorem ipsum dolor
Diagnosa Penyakit
• Diagnosa flu babi
• Hasil akurat
• Amplifikasi hanya
dilakukan pada fragmen
DNA virus flu babi
(H1N1)
13
Terimakasih
Download
Random flashcards
hardi

0 Cards oauth2_google_0810629b-edb6-401f-b28c-674c45d34d87

Rekening Agen Resmi De Nature Indonesia

9 Cards denaturerumahsehat

Nomor Rekening Asli Agen De Nature Indonesia

2 Cards denaturerumahsehat

Secuplik Kuliner Sepanjang Danau Babakan

2 Cards oauth2_google_2e219703-8a29-4353-9cf2-b8dae956302e

Card

2 Cards

Create flashcards