Deteksi otoantibodi anti trombosit dalam serum pasien demam

Universitas Indonesia Library >> UI - Tesis (Membership)
Deteksi otoantibodi anti trombosit dalam serum pasien demam berdarah
dengue
Deskripsi Lengkap: http://lib.ui.ac.id/abstrakpdfdetail.jsp?id=70943&lokasi=lokal
-----------------------------------------------------------------------------------------Abstrak
Perdarahan merupakan gejala klinis yang ditakuti terjadi pada demam berdarah dengue (DBD). Jumlah
trombosit dalam darah penderita DBD mengalami penurunan hingga kurang dari 105/mL. Transfusi
trombosit kepada penderita pada masa akut tidak menghasilkan peningkatan jumlah trombosit secara
signifikan. Biasanya jumlah trombosit penderita yang telah diobati dengan kortikosteroid akan meningkat
dengan sendirinya sehingga tidak memerlukan lagi transfusi trombosit. Mekanisme yang menyebabkan
fenomena ini belum diketahui secara pasti. Meskipun demikian, fenomena ini menimbulkan dugaan akan
adanya faktor imun, dalam hal ini otoimun terhadap trombosit penderita sendiri.
<br /><br />
Untuk mencari kemungkinan adanya otoantibodi anti trombosit pada penderita DBD dengan jumlah
trombosit kurang dari 105/mL, serum DBD tersebut dicampur dengan lisat trombosit normal. Lisat didapat
dengan cara freeze-thawing. Pelacakan dilakukan dengan menggunakan teknik ELISA dengan mengikat
lisat trombosit pada rase padat, yaitu dinding sumur plastik mikroplat ELISA. Setelah penambahan serum
DBD, yang disusul dengan pencucian, ditambahkan dengan antibodi kelinci anti protein serum manusia.
Adanya kompleks imun dilacak dengan penambahan antibodi kambing anti IgG kelinci yang telah ditandai
dengan peroksidase. Reaksi positif yang menunjukan adanya kompleks imun ditunjukan oleh terbentuknya
senyawa yang berwarna jingga kekuning-kuningan pada penambahan substrast H202 dan kromogen
odianisidine. Pembacaan dilakukan pada k 450 nm. Berdasarkan rata-rata nilai serapan basil ELISA melalui
uji t telah terbukti bahwa perbedaan rata-rata nilai serapan optik hasil ELISA kelompok pasien berbeda
secara sangat signifikan dari kelompok serum normal. Rata-rata nilai serapan optik kelompok pasien setelah
dikoreksi dengan rata-rata nilai serapan optik blanko berkisar 0,103 sampai dengan 0,193 dengan rata-rata
0,145 ± 0,0340. Rata-rata nilai serapan optik kelompok normal setelah dikoreksi dengan rata-rata nilai
serapan optik blanko berkisar antara 0,004 sampai dengan 0,089 dengan rata-rata 0,037 ± 0,0339. Kemudian
juga dilakukan deteksi otoantibodi tersebut dengan menggunakan teknik Western Bloat. Ternyata protein
dengan berat molekul sekitar (160-200) kDa, 97 kDa dan 50 kDa dapat dikenali dan diikat oleh serum yang
berasal dari pasien. Hasil yang sama tidak ditemukan pada serum normal.
<hr>
Detection of Anti Trombocyte Autoantibody in Dengue Hemorrhagic Fever PatientsHemorrhage is a
frightening clinical symptom in dengue hemorrhagic fever (DHF). Thrombocytes count in DHF patient's
decreases to less than 105/µL. Thrombocyte transfusion in acute stage does not significantly elevate the
thrombocyte count. Corticosteroid treatment usually cause elevation of thrombocyte count, so that no further
transfusion is required, no clear explanation is avaible to the mechanism behind this phenomenon. It is
strongly suggests the existence of a particular immune mechanism, i.e. the autoimmune towards patient's
thrombocytes.
<br /><br />
To look for a possible existence of anti thrombocyte autoantibody in DHF patient with the thrombocyte
level less than 105/µL, a specific immunoassay has been carried out. Thrombocyte lysat was obtained by
freeze-thawing method. ELISA technique was performed by coating the polystyrene microplate wells of
with thrombocyte Iysat antigen. After the antigen fixation followed by blocking and washing with phosphate
buffered saline pH 7,2, DHF serum was added, and incubated 37 °C, for two hours. After washing, the wells
were incubated with rabbit IgG anti human normal serum protein. The presence of immune complex was
further detected by the addition of peroxidase labeled goat anti rabbit IgG antibody. Positive reaction was
shown as yellowish-orange color after the addition of H202 substrate and o-dianisidine chromogen followed
by stop solution. The blank corrected 1 450.nm optical density (OD) of DHF serum and normal serum
control were statistically analyzed by. The OD of DHF sera ranges from 0,103 to 0.193 with average 0,145
± 0,0340, while the control sera ranges from 0,004 to 0,089 with average 0,037 ± 0,0339, respectively.
<br /><br />
The presence of autoantibody was also confirmed by Western BIot Technique. It revealed that patient's sera
bound thrombocyte antigen proteins with molecular weight of 97 kDa, while the normal sera did not.