brine shrimp lethality test - Widya Mandala Catholic University

UJI SITOTOKSIK (BRINE SHRIMP LETHALITY TEST) SENYAWA
ASAM 3-KLOROBENZOIL SALISILAT
DAN ASAM O-(4-METOKSIBENZOIL) SALISILAT
MENGGUNAKAN LARVA UDANG Artemia salina Leach
ANGELIA WULANSARI BUDIMAN
2443007056
FAKULTAS FARMASI
UNIKA WIDYA MANDALASURABAYA
2011
ABSTRAK
UJI SITOTOKSIK (BRINE SHRIMP LETHALITY TEST)
SENYAWA ASAM 3-KLOROBENZOIL SALISILAT DAN
ASAM O-(4-METOKSIBENZOIL) SALISILAT
MENGGUNAKAN LARVA UDANG Artemia salina Leach
Angelia Wulansari Budiman
2443007056
Pada penelitian sebelumnya dilakukan modifikasi asam salisilat untuk
mendapatkan aktivitas yang lebih baik daripada asam asetilsalisilat, namun
belum diketahui sitotoksisitas dari senyawa baru tersebut. Penelitian ini
dilakukan untuk mengetahui sitotoksisitas dari asam 3-klorobenzoil salisilat
dan asam O-(4-metoksibenzoil) salisilat terhadap larva Artemia salina
Leach dibandingkan dengan asam asetilsalisilat serta mengetahui LC50 dari
senyawa asam 3-klorobenzoil salisilat, asam O-(4-metoksibenzoil) salisilat
dan asam asetil salisilat. Dalam penelitian ini setiap senyawa dibuat 5
konsentrasi berbeda yang diperoleh dari uji pendahuluan asam 3klorobenzoil salisilat dan asam O-(4-metoksibenzoil) salisilat dibuat 250,
300, 350, 400 dan 450 ppm. Sedangkan asam asetilsalisilat dibuat 150 ppm,
200 ppm, 250 ppm, 300 ppm dan 350 ppm. Tiap senyawa tersebut diujikan
pada larva Artemia salina Leach dengan waktu pengamatan selama 24 jam.
Data yang diperoleh dihitung dengan menggunakan Probit Analysis
Program. Dari program ini akan didapatkan nilai LC50. Parameter yang
digunakan dalam penelitian ini adalah untuk ekstrak tumbuhan yang diuji
dikatakan mempunyai efek toksik apabila nilai LC50 kurang dari 1000
mg/ml dan untuk senyawa murni bila senyawa tersebut mempunyai nilai
LC50 kurang dari 30 g/ml. Dari Probit Analysis Program didapatkan LC50
asam 3-klorobenzoil salisilat adalah 349,87 ppm, asam O-(4metoksibenzoil) salisilat adalah 374,61 ppm sedangkan asam asetilsalisilat
adalah 255,60 ppm. Berdasarkan harga LC50 menunjukkan bahwa asam 3klorobenzoil salisilat, asam O-(4-metoksibenzoil) salisilat dan asam
asetilsalisilat tidak toksik. Kesimpulan ini sesuai dengan parameter yang
digunakan yaitu suatu senyawa aktif dikatakan toksik jika nilai LC50-nya
kurang dari 30 ppm.
Kata kunci : asam 3-klorobenzoil salisilat, asam O-(4-metoksibenzoil)
salisilat, toksisitas, larva Artemia salina Leach, LC50
i
ABSTRACT
CYTOTOXICITY ASSAY (BRINE SHRIMP LETHALITY TEST ) OF
3-CHLOROBENZOYL SALICYLIC ACID AND
O-(4-METHOXYBENZOYL)SALICYLIC ACID USING
Artemia salina Leach SHRIMP LARVAE
Angelia Wulansari Budiman
2443007056
In the previous research, salicylic acid modification was conducted to
achieve a better activity than acetyl salicylic acid, but the cytotoxicity of the
new compounds were still unknown. This research was conducted to
determine the cytotoxicity of the 3-chlorobenzoyl salicylic acid and O-(4methoxybenzoyl) salicylic acid against larvae of Artemia salina Leach
compared with acetyl salicylic acid, by determining the LC50 of the acid
compound 3-chlorobenzoyl salicylic acid, O-(4-methoxybenzoyl) salicylic
acid and acetyl salicylic acid. In this study each compound was made into
five different concentrations which were obtained from the preliminary
assay. Three-chlorobenzoyl salicylic acid and O-(4-methoxybenzoyl)
salicylic acid were made into 250, 300, 350, 400 and 450 ppm. Acetyl
salicylic acid was made into 150, 200, 250, 300 and 350 ppm. Each
compound was tested on larvae of Artemia salina Leach for 24 hours. The
data obtained was calculated by Probit Analysis Program. The value
obtained was LC50. The parameters used in this study was based on the LC50
values, which was categorized as having toxic effects if LC50 value of the
plant extract was less than 1000/ml and less than 30/ml for pure compound.
The LC50 values obtained from Probit Analysis Program of 3-chlorobenzoyl
salicylic acid, O-(4-methoxybenzoyl) salicylic acid and acetylsalicylic acid
were 349.87, 374.61 and 255.60 ppm respectively. Based on the LC50
obtained, it can be concluded that 3-chlorobenzoyl salicylic acid, O-(4methoxybenzoyl) salicylic acid and acetylsalicylic acid were not toxic.
Key words : 3-chlorobenzoyl salicylic acid, O-(4-methoxybenzoyl)
salicylic acid, cytotoxicity, Artemia salina Leach, larvae,
LC50
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala rahmat dan
karuniaNya penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Uji
Toksisitas (Brine Shrimp Letality Test) Senyawa Asam 3-Klorobenzoil
Salisilat dan Asam O-(4-Metoksibenzoil) Salisilat Menggunakan Larva
Udang Artemia salina Leach” ini, yang disusun dan diajukan untuk
memenuhi persyaratan guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi Universitas
Katolik Widya Mandala Surabaya.
Telah diselesaikannya skripsi ini tidak mungkin terlepas dari
dukungan, bantuan dan bimbingan baik secara langsung maupun tidak
langsung dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dalam kesempatan ini dengan
segala ketulusan dan kerendahan hati, ucapan terima kasih disampaikan
kepada :
1.
Prof. Dr. Bambang Soekardjo, SU., Apt., sebagai pembimbing I dan
Catherina Caroline, S.Si., M.Si., Apt., sebagai pembimbing II, yang
telah meluangkan banyak waktu, tenaga, pikiran, dan dengan penuh
kesabaran mengarahkan serta memberikan petunjuk yang amat
berharga bagi penulisan skripsi ini.
2.
Prof. Dr. Siswandono, MS., Apt., dan DR. Ratna Megawati
Widharna, SKG, MFT., sebagai tim penguji, yang telah memberikan
kritik dan saran yang sangat berguna bagi penulisan skripsi ini.
3.
Prof. Dr. Ami Soewandi, Apt, selaku Rektor Universitas Katolik
Widya Mandala Surabaya yang telah memberikan kesempatan dan
fasilitas kepada penulis selama mengikuti dan menyelesaikan
pendidikan program sarjana.
iii
4.
Martha Ervina, S.Si., M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Katolik Widya Mandala yang telah memberikan fasilitas
dan bantuan dalam penyusunan skripsi ini.
5.
Catherina Caroline, S.Si., M.Si., Apt., selaku Sekretaris Dekan FF
UKWMS yang telah memberikan bantuan serta dukungan hingga
diselesaikannya naskah skripsi ini.
6.
Dra. Hj. Liliek S. Hermanu, MS., Apt. selaku dosen wali studi yang
telah banyak memberikan bimbingan dan nasehat dalam kepada
penulis selama melaksanakan studi.
7.
Henry Kurnia S., S.Si., MSi., Apt. selaku koordinator Laboratorium
Ilmu Instrumen dan staf Laboratorium Ilmu Instrumen yang telah
banyak memberikan bantuan.
8.
Laboran – laboran : mbak Mega, pak Samsul, bu Nina, mas Didik
yang telah banyak membantu kelancaran proses penelitian, serta doa
dan dukungannya.
9.
Bapak Abror selaku staf pelaksana stasiun lapangan praktek
pembenihan, Akademi Perikanan Sidoarjo, atas pemberian ijin untuk
melaksanakan penelitian di Pembenihan Akademi Perikanan
Sidoarjo, Lamongan.
10. Bapak Azis selaku karyawan di Pembenihan Akademi Perikanan
Sidoarjo, Lamongan atas bantuan dan bimbingan selama penelitian
ini berlangsung.
11. Orang tua tercinta, Papa Sugianto Budiman dan Mama Nurina
Damayanti yang tiada henti memberikan dukungan moral, spiritual
dan material, tiada hentinya memberikan perhatian, doa, dan
semangat kepada penulis dengan penuh kasih sayang dan kesabaran.
iv
12. Adikku Rahmad Darmawan yang telah memberikan doa, dukungan,
dan bantuannya selama ini.
13. Sahabat-sahabat Silfiana, Merry, Senny, Savitri, Devy, Anthony,
Riwok, Beby, dan semua sahabat serta teman-teman yang tidak bisa
disebutkan satu-persatu yang telah menemani dan memberikan
dukungan moral serta mengajarkan arti persahabatan dan teman yang
telah menemani dalam suka dan duka.
14. Teman-teman seperjuangan FARMASI angkatan 2007 yang telah
memberikan kebersamaan yang baik selama ini dan semua pihak
yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu dan telah memberikan
kelancaran dalam penelitian dan penyelesaian skripsi ini.
15. Semua staf maupun karyawan yang ada di Unika Widya Mandala
Surabaya yang telah mendukung penulisan skripsi ini.
Skripsi ini masih jauh dari sempurna. Akhir kata dengan segala
kerendahan hati, semoga hasil penelitian ini dapat memberikan sumbangan
yang bermanfaat bagi kepentingan masyarakat luas pada umumnya dan bagi
perkembangan ilmu pengetahuan pada khususnya.
Surabaya, 11 April 2011
v
DAFTAR ISI
Halaman
ABSTRAK………………………………………………………….......
i
ABSTRACT……………………………...……………………………....
ii
KATA PENGANTAR……………………………….………………....
iii
DAFTAR ISI………………………………………….…………….......
vi
DAFTAR LAMPIRAN……………………………………..………......
viii
DAFTAR TABEL………………………………………….……….......
ix
DAFTAR GAMBAR…………………………………….....………......
x
BAB
1
PENDAHULUAN………………………………………...........
1
2
TINJAUAN PUSTAKA……………………………………......
5
2.1. Tinjauan tentang Asam Asetilsalisilat………………........
5
2.2. Tinjauan tentang Asam 3-Klorobenzoil Salisilat................
6
2.3. Tinjauan tentang Asam O-(4-Metoksibenzoil) Salisilat.....
7
2.4. Tinjauan tentang Hewan Coba………………...................
7
2.5. Tinjauan tentang Sitotoksisitas.........………….................
13
2.6. Tinjauan mengenai Metode Uji Kematian Larva Artemia
salina Leach atau Metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT)..............................................................................
14
2.7. Tinjauan tentang Uji Kemurnian Hasil Sintesis………….
3
14
METODOLOGI PENELITIAN..…………………………….....
16
3.1. Bahan dan Alat ……………..…………………………....
16
3.2. Hewan Coba………………………...................................
16
3.3. Tahapan Penelitian.............................................................
17
3.4. Variabel Penelitian…...…………………………………..
19
3.5. Analisis Data……………………………………………...
20
vi
4
5
3.6. Skema Kerja……………………………………………...
21
HASIL PERCOBAAN DAN BAHASAN………...…………....
26
4.1. Pemeriksaan Organoleptis……..…………........................
26
4.2. Uji Kemurnian………..…………......................................
26
4.3. Hasil Uji Pendahuluan....…....….......................................
30
4.4. Uji Sitotoksisitas………………………………………….
35
SIMPULAN DAN ALUR PENELITIAN…………………....
40
5.1. Simpulan.............................................................................
40
5.2. Alur Penelitian Selanjutnya................................................
40
DAFTAR PUSTAKA…………………………….....……………….....
41
LAMPIRAN.............................................................................................
44
vii
DAFTAR LAMPIRAN
A
Contoh Perhitungan Pembuatan Larutan Uji.....................
44
B
Analisis Probit..............……………………………….....
45
viii
DAFTAR TABEL
Tabel
4.1.
Halaman
Hasil KLT Senyawa Asam 3-klorobenzoil Salisilat dan
Asam O-(4-metoksibenzoil) Salisilat...................................
27
Hasil Pemeriksaan Titik Leleh Senyawa Asam 3klorobenzoil Salisilat ..........................................................
30
Hasil Pemeriksaan Titik Leleh Senyawa Asam O-(4metoksibenzoil) Salisilat .....................................................
30
4.4.
Hasil Pengamatan Kontrol Negatif ......................................
31
4.5.
Hasil Pengamatan Faktor - faktor Luar ................................
31
4.6.
Hasil Pengamatan Pengaruh dari Keasaman Media Air pada
Senyawa Asam 3-klorobenzoil Salisilat dan Asam O-(4metoksibenzoil) Salisilat .....................................................
32
Hasil Uji Pendahuluan LC50 Asam Asetilsalisilat terhadap
Larva Udang Artemia salina Leach (n=10)..........................
33
Hasil Uji Pendahuluan LC50 Asam 3-klorobenzoil Salisilat
terhadap Larva Udang Artemia salina Leach (n=10)............
34
Hasil Uji Pendahuluan LC50 Asam O-(4-metoksibenzoil)
Salisilat terhadap Larva Udang Artemia salina Leach
(n=10) ................................................................................
35
4.10. Hasil Uji Sitotoksisitas Senyawa Asam Asetilsalisilat
(n=10) ................................................................................
36
4.11. Hasil Uji Sitotoksisitas Senyawa Asam 3-klorobenzoil
Salisilat (n=10) ...................................................................
36
4.12. Hasil Uji Sitotoksisitas Senyawa Asam O-(4metoksibenzoil) Salisilat (n=10)..........................................
37
4.2.
4.3.
4.7.
4.8.
4.9.
ix
DAFTAR GAMBAR
Gambar
Halaman
1.1.
Struktur molekul asam salisilat dan asam asetilsalisilat ........
1
1.2.
Struktur molekul asam O-(4-Metoksibenzoil) salisilat .........
2
1.3.
Struktur molekul asam 3-Klorobenzoil salisilat ..................
2
2.1.
Artemia salina Leach……………………………….. ..........
8
2.2.
Morfologi Artemia salina Leach .........................................
9
2.3.
Kista Artemia salina Leach .................................................
10
2.4.
Siklus hidup Artemia salina Leach ......................................
11
4.1.
Hasil KLT senyawa asam 3-klorobenzoil salisilat dan asam
O-(4-metoksibenzoil) salisilat di bawah sinar UV 254 nm ...
28
Hasil KLT senyawa asam 3-klorobenzoil salisilat dan asam
O-(4-metoksibenzoil) salisilat di bawah sinar UV 254 nm
dengan perbandingan yang baru ..........................................
29
4.2.
x