8 4. ISOLASI BAKTERI PENDEGRADASI BENSIN DAN
advertisement
Isolasi Bakteri 4. ISOLASI BAKTERI PENDEGRADASI BENSIN DAN SOLAR Sumber isolat biakan bakteri pada pengayaan tahap ketiga 5.0 gram pepton 2.5 gram yeast extract 1.0 gram glukosa Pengayaan tahap ketiga, 24 x 7 E F 14.0 gram agar @ 100 µl dalam 25 ml medium PCA Pour plate Dilarutkan dalam air laut steril V=1000 ml, dididihkan (MEDIUM PCA) • dimasukan pada falcon tube @ 25 ml • disterilisasi menggunakan autokaf • 6 tube diinkubasi dalam thermostat water bath pada suhu 40oC • sisanya dituangkan dalam cawan Petri diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37oC selama 2 x 24 jam. 8 Pemurnia Isolat 5. PEMURNIAN ISOLAT Isolat tunggal yang tumbuh Dimurnikan dengan metode 16 gores diinkubasi pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam Pemurnian dilakukan minimal 3 x biakan murni Pengamatan mikroskopis .: Biakan murni = sel bakteri pada umur yang sama, berbentuk dan berukuran sama pula 9 Uji Biokim (Gram) 6. PENGAMATAN MIKROSKOPIS DAN UJI BIOKIMIA 1. PEWARNAAN GRAM 1 ose Isolat murni Kristal violet (1 menit) aquades Safranin (45 detik) aquades Gram’s iodin (1 menit) Dibuat kultur kerja 24 jam pada medium PCA miring Etil alkohol 95% Diamati menggunakan mikroskop, perbesaran 1000 x aquades 10 , tahan asam, & motilitas ENDOSPORA 2. PEWARNAAN Diamati menggunakan mikroskop, perbesaran 1000 x Malakit hijau, Difiksasi (5 menit) aquades Safranin (1 menit) Diamati menggunakan mikroskop, perbesaran 1000 x 3. PEWARNAAN TAHAN ASAM Karbol fuschin, Difiksasi (5 menit) aquades aquades Alkohol asam aquades Metilen blue aquades 4. UJI FERMENTASI GLUKOSA 1 ose isolat Ditumbuhkan dalam medium fermentasi glukosa 1% dalam 100 ml pepton water + 1 ml bromthimol blue Diinkubasi (24 jam) 37oC Kuning+gas (+) Hijau (-) 11 5. UJI KEBUTUHAN OKSIGEN 6. UJI KATALASE 7 ml 1 tetes 1 ose Kultur Kerja 24 jam 1 ose diinkubasi 48 jam 37oC H2O2 29,5 gr thioglycollate dalam 1 lt aquades Kultur Kerja 24 jam 12 1 tetes 10 ml 1 ose 1 ose Kultur Kerja 24 jam 7. UJI OKSIDASE Kertas saring p-amino Dimethylalanine trickle-oxalate 1% Kultur Kerja 24 jam diinkubasi 24 jam 37oC 70 gr NaCl+ 10 gr NB dalam 1 lt aquades 8. UJI KEBUTUHAN GARAM Pengukuran OD 7. PENGUKURAN PERTUMBUHAN SEL BAKTERI 1 ose isolat murni 1 ml starter 250 ml Isolat murni 25 ml medium selektif dalam falcon tube Starterdiinkubasi di rotary shaker selama 1 x 24 jam Medium selektif diinkubasi di rotary shaker 7 x 24 jam Dilakukan pengukuran OD / 24 jam • Diambil sebanyak 100 µl • Diencerkan hingga 2 ml • Dideteksi absorbansi warnanya pada panjang gelombang 600 nm • Dilakukan sebanyak 3 x pengulangan Dibandingkan dengan kontrol (+) dan (-) Dibuat kurva pertumbuhan bakteri selama 7 x 24 jam 13 HASIL DAN PEMBAHASAN 1. Pengayaan bakteri pendegradasi solar dan bensin Transfer ke1 2 3 Hari ke- Solar Bensin 0 7 0 7 0 7 0,16 2,76 0,60 2,62 0,86 1,00 0,22 4,24 0,46 4,78 0,74 1,22 14 2. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Pendegradasi Solar dan Bensin Karakter makroskopis koloni bakteri pendegradasi solar dan bensin. Morfologi koloni isolat B2 purifikasi ke-7 (A) dan bentuk basil isolat B2 pada perbesaran 1000X (B). 15