(PIN) dari Buah Kakao (Theobroma cacao L.).

ABSTRAK
YUSRON FARIEH. Isolasi dan Uji Ekspresi Gen Proteinase Inhibitor
(PIN) dari Buah Kakao (Theobroma cacao L.). Dibimbing oleh EMAN
KUSTAMAN dan TETTY CHAIDAMSARI.
Kakao (Theobroma cacao L.) merupakan salah satu tanaman perkebunan
yang mempunyai nilai ekonomi tinggi sebagai komoditi ekspor. Adanya serangan
hama utama kakao, yaitu Penggerek Buah Kakao (PBK), Conopomorpha
cramerella Snellen menyebabkan kehilangan produksi kakao hingga 80% dan biji
kakao yang terserang, mutunya menurun bahkan tidak laku dijual. Gen proteinase
inhibitor (PIN) merupakan gen yang dapat menghasilkan senyawa antinutrisi yang
dapat menghambat kerja enzim proteolitik di dalam perut serangga. PIN terdapat
pada biji kakao dan berukuran 21 kDa dengan homologi yang cocok dengan
inhibitor tripsin pada kedelai. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi gen PIN
dari biji kakao dan melakukan uji ekspresi untuk mengetahui tingkat ekspresi gen
PIN dari jaringan kulit buah kakao yang tahan (klon Ary 2) dan tidak tahan (klon
Bal 209) terhadap hama PBK.
Fragmen gen PIN dari biji kakao berhasil diisolasi dengan pasangan primer
spesifik gen PIN, yaitu F21 dan R11. Hasil sekuensing menunjukkan bahwa
fragmen tersebut berukuran 580 bp dan analisis BLASTN membuktikan bahwa
fragmen gen PIN yang berhasil diisolasi merupakan gen PIN yang mempunyai
homologi dengan gen PIN penyandi protein berukuran 21 kDa pada biji kakao.
Ekspresi gen PIN dari kedua klon pada buah yang memilki panjang 12 cm lebih
kuat dibanding buah yang memiliki panjang 9 cm. Secara umum ekspresi gen PIN
dari jaringan kulit kakao pada klon Ary lebih kuat dibanding klon Bal, dengan
kata lain klon kakao yang tahan terhadap hama PBK, mengekspresikan gen PIN
yang lebih kuat dibanding klon yang tidak tahan tehadap hama PBK. Berdasarkan
perbedaaan ekspresi dari kedua klon, diduga gen PIN berpengaruh terhadap
ketahanan buah kakao yang tahan terhadap PBK.
ABSTRACT
YUSRON FARIEH. Isolation and Expression Assay of Proteinase Inhibitor
Gene (PIN) from Cacao Fruit (Theobroma cacao L.). Under the direction of
EMAN KUSTAMAN and TETTY CHAIDAMSARI
Cacao is one of a high economical value estate crops as an export
commodity. Eighty percent of cacao production loss was caused by Cocoa Pod
Borer (CPB), Conopomorpha cramerella Snellen. Thus, cacao seed were not
soldable due to its low quality. Proteinase Inhibitor (PIN) is an antinutrition
substance which able to inhibit proteolytic enzyme from insect gut. A 21 kDa of
cacao seed PIN protein was known of having high homology to soybean trypsin
inhibitor. This research was aimed to isolate cacao seed PIN gene and observe its
expression level within two tissues of cacao clones (resistant Ary 2 and nonresistant Bal 209). A 580 Bp of gene fragment was successfully isolated.
BLASTN analysis showed that the fragment having a high homology with 21 kDa
of cacao seed protein from gene Bank. Finally, a higher gene expression of
resistant clone (Ary 2) was shown. Thus, lead us to a conclusion that resistancy of
cacao clone fruit was influenced by PIN gene.