Disusun oleh : Maria Fatmadewi Imawati 051624153006 Infeksi mikroba patogen yang terjadi pada manusia normal umumnya singkat dan jarang meninggalkan kerusakan permanen. Hal ini disebabkan tubuh manusia memiliki suatu sistem imun yang melindungi tubuh terhadap unsur-unsur patogen. Sistem imun terdiri atas sistem imun alamiah atau nonspesifik (natural, innative, native) dan sistem imun didapat atau spesifik (adaptif/acquired). Virus harus menempel dahulu pada sel penjamu sebelum dapat masuk tubuh, hidup, berkembang biak dan menimbulkan infeksi. Antibodi dalam sirkulasi (IgG) akan mencegah virus menempel dan hal ini merupakan pencegahan penting terhadap infeksi. IgA berperan di saluran napas dan cerna dapat mencegah virus (seperti polio) dan mikroba masuk tubuh melalui mukosa. Bila virus menginfeksi sel maka protein virus akan pecah di dalam sel menjadi peptida-peptida spesifik Peptida tersebut akan dikenal oleh sel T helper yang selanjutnya mengaktifkan sel efektor CTC atau T sitotoksik yang dapat menghancurkan sel terinfeksi virus dengan direct (lethal hit). 1. 2. 3. 4. Interferon dan IgA merupakan pertahanan pertama pada epitel permukaan Beberapa virus berkembang dalam epitel permukaan. Ada virus yang mempunyai lebih dari satu masa viraemi dan selama ada dalam darah virus tersebut rentan terhadap antibodi. Virus di dalam sel diserang berbagai komponen sistem imun humoral dan seluler dan atau antibodi. Pada umumnya pemusnahan virus di dalam sel menguntungkan tubuh akan tetapi reaksi imun yang terjadi dapat menimbulkan pula kerusakan jaringan tubuh yang disebut imunopatologik. HIV yang sudah masuk ke dalam sel limfosit CD4+ tersebut akan mengadakan multiplikasi dengan cara menumpang dalm proses pertumbuhan sel inangnya. Setelah virus HIV mengikatkan diri pada molekul CD4+, virus masuk ke dalam target dan melepaskan bungkusnya kemudian dengan enzim reverse transkriptase virus tersebut merubah bentuk RNA (Ribonucleic Acid) agar dapat bergabung dengan DNA (Deoxyribonucleic Acid) sel target. Selanjutnya sel yang berkembang biak akan mengandung bahan genetik virus. Infeksi HIV dengan demikian menjadi irreversibel dan berlangsung seumur hidup. Cannabinoids termasuk cannabidiol, cannabinol dan ∆9tetrahydrocannabinol (∆9-THC) memberikan efeknya dengan mengikat dua subtipe utama reseptor cannabinoid, CB1 dan CB2. Pada macaque rhesus yang terinfeksi SIV, paparan ∆9tetrahydrocannabinol mengurangi viral load dan jumlah penurunan CD4+ sel T yang secara signifikan meningkatkan kelangsungan hidup hewan selama periode 11 bulan. Pemilihan dan pemurnian kultur 3g plasmid provin HIV-1 endotoksin terdekomposisi menjadi 5 x 106 sel Jurkat dengan menggunakan Cell Line Nucleofector kit V, program S-18. Dua puluh empat jam setelah nukleofeksi sel Jurkat yang layak, dimurnikan dengan sentrifugasi pada gradien kerapatan Ficoll-Hypaque. Empat puluh delapan jam setelah nukleofeksi, sel-sel dicuci dengan buffer lengkap dan dicacah untuk pengujian. Sel mononuklear darah perifer manusia dari donor seronegatif HIV/hepatitis B yang sehat dimurnikan dari lapisan kerbau leukosit oleh gradien Ficoll. NL-GI (klon molekul CXCR4-tropik HIV-1 berbasis NL4-3) mengekspresikan protein neon hijau (GFP) sebagai pengganti gen awal virus, dan ekspresi nef dipertahankan dengan memasukkan situs masuk ribosom internal (IRES). Gag-iCherry membawa varian GFP Cherry dimasukkan secara internal ke Gag antara domain MA dan CA. Untuk virus CCR5-tropic, digunakan varian NL-GI yang mengekspresikan gen Env dari klon tiruan JRFL. Virus diproduksi pada sel HEK293T dan konsentrasi p24 dihitung oleh ELISA sebelum digunakan. Skema gambaran HIV-1 virion-based fusion assay Untuk mengikat GTPγS, sel T CD4+ yang ditreatment JWH133 dan dimodifikasi dengan CHAPS dan diinkubasi dengan meningkatan konsentrasi SDF-1α. Efek agonis tergantung dosis pada tingkat cAMP diukur dengan radioimmunoassay menggunakan radioiodinated cAMP atau dengan uji pengikatan dengan menggunakan protein kinase A. Untuk fosforilasi kinase dan Western blot, sel T CD4+ primer ditreatment dengan antagonis dan/atau agonis dalam RPMI serum-free selama total 4 jam sebelum pengobatan Pengaktifan jalur kinase MAP diukur dengan menentukan MAPK terfosforilasi dengan Western blot menggunakan antibodi monoklonal E10 yang mendeteksi bentuk ERG yang terfosforilasi (p42 dan p44). Sel diobati dengan 100 nM JWH-133 sebelum terpapar virus, peneliti mengamati sekitar 40% pengurangan sel yang terinfeksi HIV setelah empat hari (Gambar 5A-B). blokade infiltrasi HIV-1 yang diturunkan oleh JWH-133 dengan EC50 7.5960,1 nM dan efficacy pada penghambatan sekitar 50% (Gambar 5B). tindakan obat ini bersifat CXCR4-spesifik, karena pengobatan JWH-133 tidak cukup untuk menghambat infeksi virus isogenik yang membawa ENV CCR5-tropop dari klon tiruan JRFL (Gambar 5C), maka aktivasi CB2 mengurangi infeksi CXCR4-tropik HIV-1 pada sel CD4+ sel T dalam dosis tergantung dan mode reseptor spesifik. Kedua agonis CB2R yang sangat spesifik kemudian diuji terbukti antivirus pada konsentrasi 1 mM; ini adalah penghambat JWH-015 (35,9611,96%) dan inhibitor Ser016 (30.7613,72% (mean±SEM, n = 8 donor) (Gambar 5D) Pengobatan dengan 1 mM agonis pan-cannabinoid Hu210 juga secara signifikan mengurangi infeksi HIV-1, walaupun pada tingkat yang lebih rendah dibandingkan dengan agonis CB2R-selektif (23.967,45%, mean±SEM, n = 8 donor) (Gambar 5D). Penurunan efisiensi infeksi yang diamati dengan Hu210 adalah spesifik CB2R dan tidak diamati saat sel diobati dengan antagonis selektif AM630 (Gambar 1D) Aktivasi cannabinoid CB2R dapat menghambat infeksi HIV CXCR4-tropik dengan mengubah dinamika aktin CD4+ sel T. Kemudian blok aktivasi CB2-selektif menghambat infeksi virus sel bebas dan sel, mengurangi frekuensi sel yang terinfeksi sebesar 30-60% CB2R dapat dianggap sebagai target terapeutik tambahan untuk penghambatan penyebaran virus CXCR4-tropic ke populasi sel T yang terdapat pada pasien AIDS. Imunosupresif oleh CB2R dapat dikaitkan dengan toksisitas obat pada konsentrasi tinggi agonis cannabinoid karena memang penggunaan obat cannabinoid pada pasien dengan HIV dikaitkan dengan peningkatan, bukan penurunan jumlah CD4+ sel T dan telah terbukti mengurangi viral load pada macaque rhesus yang terinfeksi SIV.
